Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The world population has been showing more concern for the food and its constituents, encouraging the food industry to invest in healthy products and in functional foods. Among those considered functional foods is the flaxseed (Linum usitatissimum L.), a small grain of ovate shape with high nutritional value by being a good source of fiber, essential fatty acids and protein. The aim of this study was observe the flaxseed functional properties in different processing conditions and use in food, through the determination of the grain chemical composition, biological response in rats and the fatty acids profile. The chemical determination was found that flaxseed used in this study is rich in lipid (37,04 g%), in protein (16,69% g) and in fiber (32,9 g%). In the biological trial, 32 male Wistar rats received four diet types (P: diet standard as AIN; LC: diet with 16% of raw flaxseed; LA: diet with 16% of roast flaxseed; and OL: diet with flaxseed oil), it was found that the use of raw flaxseed, roast flaxseed and flaxseed oil resulted positively in vivo. There was a decrease in biochemical blood glucose, triglyceride and total cholesterol levels, and increase the fecal excretion and lipid excretion, no change in the growth of rats in treatments with flaxseed. The more positive data were detected in animals feed with the raw grain. By gas chromatography analysis was carried out of the grain and flaxseed oil lipid profile subjected to different processes involving high temperatures: raw grain (LC); grain baked in electric oven to 150ºC for 40 minutes (L150); grain baked in electric oven to 180ºC for 40 minutes (L180); grain heated in microwave oven (LM); flaxseed oil (OL) and flaxseed oil heated to 180ºC for 30 minutes (OF).Changes in the saturated and unsaturated fatty acids were detected, but the flaxseed and the flaxseed oil remained significant amounts of polyunsaturated fatty acids, mainly of Y- linolenic acid, in all treatments. Despite the minor benefits caused by flaxseed processing (baked grains or as oil), it was noted that part of Y-linolenic acid remains in the food and is absorbed by the organism. In conclusion, it is possible to state that flaxseed is still quite stable when subjected to various processes involving high temperatures and it is an alternative source of Y-linolenic acid. However more studies are needed to provide the appropriate doses for humans, according to the particular individual. / A população mundial vem demonstrando crescente preocupação com a alimentação e seus constituintes, o que incentiva a indústria de alimentos a investir em produtos saudáveis e nos ditos alimentos funcionais. Entre os alimentos considerados funcionais encontra-se a linhaça (Linum usitatissimum L), um pequeno grão de formato oval com grande valor nutritivo por ser fonte de fibras, ácidos graxos essenciais e proteína. O presente trabalho teve como objetivo observar as propriedades funcionais da linhaça em diferentes condições de preparo e de uso em alimentos, o que foi realizado por meio da determinação da composição química do grão, de ensaio biológico em ratos e da análise do perfil de ácidos graxos. Quanto aos resultados, com a determinação da composição química verificou-se que a linhaça utilizada neste estudo é rica em lipídio (37,04g%), em proteína (16,69g%) e em fibras alimentares (32,9g%). No ensaio biológico, momento em que 32 ratos wistar machos recém desmamados receberam quatro tipos de ração (P: ração padrão conforme AIN; LC: ração com 16% de linhaça crua; LA: ração com 16% de linhaça assada a 180ºC por 40 minutos; e OL: ração com óleo de linhaça), constatou-se que a utilização do grão de linhaça cru, do grão assado e do óleo de linhaça resultou positivamente in vivo. Foi observada uma diminuição nos parâmetros bioquímicos glicemia, triglicerídio e colesterol total, aumento da excreção lipídica e da excreção fecal, sem alteração no desenvolvimento ponderal dos ratos nos tratamentos adicionados de linhaça, sendo que os dados mais positivos foram detectados nos animais que receberam o grão in natura. Por meio da cromatografia gasosa, realizou-se a análise do perfil lipídico do grão e do óleo de linhaça submetidos a diferentes processos envolvendo altas temperaturas: grão in natura (LC); grão assado em forno elétrico a 150ºC por 40 minutos (L150); grão assado em forno elétrico a 180ºC por 40 minutos (L180); grão aquecido em forno de microondas (LM); óleo de linhaça in natura (OL); e óleo de linhaça aquecido a 180ºC por 30 minutos (OF). Modificações no perfil de ácidos graxos saturados e insaturados foram detectadas, entretanto o grão e o óleo de linhaça mantiveram quantidades significativas de ácidos graxos poliinsaturados, principalmente de ácido Y-linolênico, em todos os tratamentos. Apesar dos menores benefícios causados pela linhaça processada (grão assado ou como óleo), observou-se que parte do ácido Y-linolênico permanece no alimento e é absorvido pelo organismo. Com tudo isso, é possível afirmar que a linhaça se mantém bastante estável quando submetida a diferentes processamentos envolvendo altas temperaturas, sendo uma fonte alternativa de ácido Y-linolênico. Entretanto mais estudos são necessários para estipular as doses adequadas para humanos, de acordo com as particularidades individuais.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-06-08Bitstream added on 2014-06-13T20:29:34Z : No. of bitstreams: 1 silva_avr_me_rcla.pdf: 1706887 bytes, checksum: eda68ea29b93397b581e427121535611 (MD5) / Neste trabalho estudou-se a estrutura, função e mecanismo de ação do peptídeo antibacteriano Protonectarina-MP (isolado de veneno da vespa social Protonectarina sylveirae) tendo seu resíduo C-terminal nas formas ácida (-OH) e amidada (-NH2). Os peptídeos foram sintetizados, utilizando-se a estratégia Fmoc, purificados por cromatografia líquida de alta performance. O monitoramento do material sintético foi feito por espectrometria de massas ESI-MS e por seqüenciamento através de Química Degradativa de Edman. A estrutura secundária foi investigada pelo uso de espectroscopia de dicroísmo circular e modelagem molecular. Atividade lítica (extravasamento) e interação do resíduo de triptofano em vesículas foram investigadas pelo uso de espectrômetro de fluorescência. Foram realizados ensaios sobre as interações desses peptídeos em meio de vesículas zwitteriônicas e aniônica, formando complexos proteolipossomos que foram submetidos à troca isotópica H/D monitorada por espectrometria de massas ESI-MS e MS/MS. Além disso, foram realizados ensaios biológicos de atividade hemolítica, de desgranulação de mastócito, de liberação da enzima citoplasmática Lactato Desidrogenase e de atividade antimicrobianas. Os dados de CD revelam uma tendência dos peptídeos se estruturarem em hélice-α em ambiente hidrofóbico e em ambiente de membranas. Porém, o mesmo não pode ser observado em meio aquoso. Os modelos obtidos para ambos os peptídeos por modelagem molecular mostram uma estruturação em hélice-α anfipática. Nos ensaios de atividade lítica em vesículas, os peptídeos apresentaram um processo com cooperatividade positiva, com curvas de dose-resposta que mostram uma dependência sigmoidal com a concentração do peptídeo. Os resultados da fluorescência do triptofanos mostram um deslocamento da emissão para a região de onda do azul para o peptídeo... / In the present work was studied the structure, function and mechanism of action of the antibacterial peptide Protonectarina-MP (isolated from venom of social wasp Protonectarina sylveirae) with its carboxyamidation (-NH2) and carboxyl-free (-OH) Cterminal forms. The peptides were manually synthesized on-solid phase by using Fmoc strategy and purified under HPLC. The homogeneity of the synthetic material was analyzed by ESI mass spectrometry and Edman Degradation Chemistry. The secondary structure was investigated through circular dichroism (CD) spectroscopy and molecular modeling. Lytic activity and peptides interaction with the membranes was also investigated through tryptophan emission, by fluorescence spectrometry. The interaction of peptides with zwitterionic and anionic vesicles was investigated through the combination of H/D exchange and ESI-mass spectrometry. Some biological activities, like: mast cell degranulation, release of cytoplasmic enzyme lactate dehydrogenase, hemolysis and antibiosis were investigated for both peptides. The CD spectra revealed that the peptides in hydrophobic environments or in presence of biological membranes have the tendency to form helix conformations; however, organized structures were not observed in aqueous or buffer solutions. The models obtained by molecular modeling show that both peptides form an amphipathic α-helix. The peptides presented a positive cooperative process in the lytic activity of vesicles, with dose-response curves presenting a sigmoidal dependence with the peptide concentration. The results of the fluorescence of tryptophans showed a shift of the emission wavelength to the blue region of the peptide Protonectarina-MP (-NH2), which was not observed for its analogue presenting the C-terminal residue in free acid form. This is indicating a greater interaction of the amidated peptide in membranes, when compared to the peptide... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-07-22Bitstream added on 2014-06-13T19:29:17Z : No. of bitstreams: 1 peixoto_fgt_me_jabo.pdf: 730452 bytes, checksum: 4beaffe1c13b67a34f074498f7173677 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A derrubada da vegetação nativa e o uso do solo para atividades agropecuárias podem causar alterações nos atributos do solo que variam de intensidade, em função do tipo de manejo adotado. É importante o acompanhamento na variação dos atributos do solo no sentido de detectar alterações que venham em detrimento do potencial produtivo, as propriedades biológicas são as que primeiro se alteram, sendo de grande validade na detecção de impactos negativos no solo pelo uso. O objetivo deste estudo foi verificar alterações em atributos biológicos, comparando áreas sob vegetação nativa com áreas cultivadas com cana-de-açúcar, milho, pastagem e citros. A partir de um ponto georreferenciado, cada área amostrada foi dividida em três sub áreas com 100 m2 (10 x 10 m), sendo coletadas 20 amostras simples em cada uma delas na profundidade 0-0,20 m, que foram misturadas para formar uma amostra composta. As áreas em estudo incluíram onze Latossolos, seis Argissolos, três Neossolos, dois Nitossolos, um Gleissolo, um Organossolo, um Cambissolo e um Chernossolo, solos estes situados em diferentes municípios do Estado de São Paulo. Nas amostras de solo foram avaliados: carbono e nitrogênio da biomassa microbiana, respiração basal, quociente metabólico (qCO2) e atividade das enzimas amilase, arilsulfatase, celulase, desidrogenase, fosfatase ácida, protease e o potencial de hidrólise do diacetato de fluoresceína (FDA). As atividades de arilsulfatases e desidrogenases foram as que melhor refletiram alterações antrópicas sofridas pelos solos em estudo. A matéria orgânica e a capacidade de troca catiônica foram às propriedades químicas do solo que melhor se correlacionaram com os atributos biológicos e bioquímicos avaliados. / The removal of the natural vegetation and the use of the soil for agricultural purposes may cause deep alterations in the soil properties depending on the management applied. It is important periodic evaluations of soil properties in order to detect alterations that can degrade the soil. Among soil properties, soil biological activities are those that first indicate soil modifications. The objective of this study was to evaluate changes in soil biological attributes, comparing areas under native forests with areas with the same soils and cultivated with sugarcane or maize. From a georeferenced point, each selected area was divided into three plots with 100 m2 (10 x 10 m), and 20 simple samples were collected in the 0-0.20 m depth, which were mixed to form a composed sample. The studied areas included the eleven different Oxisols, Ultisols six, three Neossolos two Alfisols, an Ultisol, a Organosol a Cambisol and a Chernosol, these soils located in different districts all in São Paulo State. The following soil attributes were evaluated in the soil samples: carbon and nitrogen in the soil microbial biomass, basal respiration, metabolic quotient (qCO2), the activity of the enzymes amylases, arylsulphatase, cellulose, dehydrogenases, phosphatase acid, proteases and the hydrolysis of fluorescein diacetate (FDA). The activities of arylsulfatase and dehydrogenase were the ones that best reflected changes undergone by anthropogenic soils in the study. Organic matter associated and cation exchange capacity were the soil properties that best correlated with the biological and biochemical attributes evaluated.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:30:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6774.pdf: 4696015 bytes, checksum: 084c02944eff3cb2f25b1db2ce63280b (MD5) Previous issue date: 2015-03-31 / Financiadora de Estudos e Projetos / Plants species from Brazilian savanna often have defense mechanisms in response to the low nutrient content of the soil, the light intensity, the competition for resources and drought, pronounced by deep water deficit, to which they are subjected. This area is a potential source of bioactive compounds that still little explored and potential phytochemical studies of these species are important to this preservation. Biological invasions are one of the main factors threatening the Brazilian savanna biodiversity. Many plants are initially introduced as ornamental species and subsequently become invasive. Invasive plants are generally more competitive than the other species and tolerate unfavorable conditions. This advantage can be explained according to the "Novel weapons hypothesis". It proposes that invasive plants have secondary metabolites that act as allelochemicals and present new challenges to native species. Thus, secondary metabolites of invasive species in the Brazilian savanna are also an important area of phytochemistry being investigated. Therefore, we hypothesized that native species from Brazilian savanna, Myrsine umbellata and Myrsine coriacea, and the alien specie, Tithonia diversifolia, produces secondary metabolites that have different biological activities, including insecticidal, antifungal and phytotoxic acitivities, favoring their establishment in this environment and have economic importance for agriculture and pharmaceutic industry. In the Chapter 1, the biological activity of leaf extracts of M. umbellata and M. coriacea, was evaluated. The in vitro antifungal effect of leaf extracts of these two species was evaluated against Pythium aphanidermatum, Fusarium oxysporum and Colletotrichum acutatum, three important crop pathogens. We also evaluated the insecticide potential of these extracts against Spodoptera frugiperda, known as fall armyworn, an important pest that causes damages to many crops. Finally, the total polyphenols and antioxidant activity of the leaf extracts of these two species was quantified by the DPPH method. In the Charpter 2 we evaluated the phytotoxic potential of leaf, stem and root extracts from T. diversifolia. Bioassays of wheat elongation coleoptile seed germination and seedling growth are performed. The Ethyl Acetate leaf extract was the most active extract and was selected to continue the isolation studies and the identification of compounds. The chromatographic separation of this extract allowed us the isolation of 12 sesquiterpene lactones (STSs), 1 secosesquiterpeno, and 1 diterpene. Two STSs are reported for the first time in this study, 8β-O-(2-methylbutyroyl) and tirotundin 8β-O-(isovaleroyl)tirotundin. The high phytotoxic activity of the extracts and compounds, especially the majority, 1β-methoxydiversifolin, tagitinin A and tagitinin C, indicates that allelopathy may be responsible for their establishment in this habitat. In the Chapter 3, the T. diversifolia Ethyl Acetate fractions were tested for insecticidal activity against S. frugiperda and it was observed a significant reduction in the pupal weight of the caterpillar. This may be an indicative of the presence of toxic substances to this insect in these fractions, however, this reduction in the pupal weight is not associated with the majority compounds tested. Thus, we conclude that the studied plant species have secondary metabolites with promising biological activities and economic importance for agriculture and pharmaceutical industry. / Espécies vegetais provenientes do Cerrado costumam apresentar mecanismos de defesa em resposta ao baixo teor de nutrientes do solo à que estão submetidas, a intensa luminosidade, a maior competição por recursos e ao longo período de estiagem, marcada por profundo déficit hídrico. Este domínio é uma fonte potencial de compostos bioativos ainda pouco explorada e estudos do potencial fitoquímico destas espécies são importantes para a preservação da sua biodiversidade. Entre os principais fatores que ameaçam a biodiversidade do Cerrado, está a invasão biológica. As plantas invasoras são geralmente mais competitivas que as demais espécies e suportam condições adversas. Essa vantagem pode ser explicada segundo a hipótese das novas armas , que afirma que as plantas invasoras possuem metabólitos secundários que agem como aleloquímicos e apresentam novos desafios para as espécies nativas. Dessa forma, metabólitos secundários de espécies invasoras do Cerrado também são uma importante área da fitoquímica a ser investigada. Sendo assim, foi proposta a hipótese de que espécies nativas, Myrsine umbellata e Myrsine coriacea e uma invasora do cerrado, Tithonia diversifolia, produzem metabólitos secundários em resposta ao estresse à que estão submetidas e que estes apresentam diferentes funções biológicas, incluindo, atividade antifúngica, antioxidante, inseticida e fitotóxica, que favoreçam seu estabelecimento nesse ambiente e apresentam importância econômica para uso na agricultura e na indústria farmacêutica. Para isso, no primeiro capítulo, foi avaliada a atividade biológica de extratos foliares de M. umbellata e M. coriacea. Foi avaliado o efeito antifúngico in vitro de extratos foliares destas espécies sobre Pythium aphanidermatum, Fusarium oxysporum e Colletotrichum acutatum, importantes patógenos de culturas agrícolas. Também foi avaliado o potencial inseticida destes extratos sobre Spodoptera frugiperda, conhecida como lagarta-do-cartucho do milho, importante praga causadora de danos a esta cultura. E por último, foi determinado a concentração de fenóis totais e atividade antioxidante dos extratos foliares destas duas espécies pelo método de redução do radical DPPH (2,2-difenil-1-picrilidrazil). No segundo capítulo foi avaliado o potencial fitotóxico de extratos de folha, caule e raiz de T. diversifolia. Foram realizados bioensaios com coleóptilos de trigo, germinação de sementes e crescimento de plântulas. O extrato foliar preparado com Acetato de Etila foi selecionado para continuar os estudos de isolamento e identificação de compostos por apresentar melhor atividade. A separação cromatográfica deste extrato nos permitiu isolar 12 lactonas sesquiterpênicas (STS), 1 secosesquiterpeno, e um diterpeno. Duas STSs estão sendo relatadas pela primeira vez neste trabalho, 8β-O-(2-metilbutiroil)tirotundina e 8β-O- (isovaleroil)tirotundina. A alta atividade fitotóxica desta espécie, bem como dos compostos avaliados e, principalmente, os compostos majoritários 1β-metoxidiversifolina, tagitinina A e tagitinina C, indica que a alelopatia pode ser uma das formas de seu estabelecimento nesse ambiente. No capítulo 3 foram testados a atividade inseticida de frações do extrato Acetato de Etila de T. diversifolia e seus compostos majoritários contra S. frugiperda e foi observado uma redução significativa no peso pupal da lagarta. A redução da massa pupal pode ser o indicativo da presença de substâncias tóxicas ao inseto nessas frações, no entanto, essa redução não está associada à presença dos compostos majoritários testados. Dessa forma, concluímos que as espécies vegetais estudadas, possuem metabólitos secundários com atividades biológicas promissoras e importância econômica para serem utilizados na agricultura e na indústria farmacêutica.

Submitted by Cristhiane Guerra (cristhiane.guerra@gmail.com) on 2017-02-03T13:22:09Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2268140 bytes, checksum: ee98e552e89363d0895134b76cac25e6 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-03T13:22:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2268140 bytes, checksum: ee98e552e89363d0895134b76cac25e6 (MD5) Previous issue date: 2016-02-24 / Natural products are considered an extremely valuable source for the discovery of bioactive molecules. Thus, the objective was to make the phytochemical study of Sida rhombifolia L., characterize its fatty acids, determine the chemical composition and ethe antimicrobial activity of its essential oil. To the phytochemical study from the aerial parts of S. rhombifolia, the ethanol extract gross was obtained and, after the completion of phytochemical prospecting, underwent part of the extract of alkaloid march, acid chloroform phase was applied to a silica gel column. A partition was performed with the other portion of the extract and after obtaining the hydroalcoholic phase, this was applied to Amberlite XAD-2 column and then on Sephadex LH-20.Characterization of isolated compounds was given by Nuclear Magnetic Resonance (¹H and ¹³C). After extraction of fatty acids from S. rhombifolia, they were separated and quantified using a gas chromatograph with flame ionization detector. The compounds were identified by comparison with standards methyl ester (Sigma). To obtain the essential oil of S. rhombifolia, the plant leaves and flowers was submitted to hydrodistillation using a Clevenger apparatus (100 °C). The chemical analysis of the oil composition is made by a gas chromatograph coupled with mass spectrometry. The compounds were identified by comparing the mass spectrum obtained from the system database (NIST. 62 lib) and retention index (RI). Evaluation of the antimicrobial activity was due to the microdilution technique, using the essential oil of S. rhombifolia against Staphylococcus aureus (ATCC 15656), Escherichia coli (ATCC 25922), Streptococcus mutans (ATCC 25175), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853) and Candida albicans (ATCC 1106). The phytochemical study allowed the isolation of ethoxy-ferulate (Sr- 1) and kaempferol (Sr-2). The analysis of fatty acids identified a percentage of 87.36%, of which palmitic acid (27.97%), linolenic acid (26.81%), and oleic acid (25.09%) were the most abundant in different percentages. The essential oil of S. rhombifolia presented as major constituents the octadecyl aldehyde (44.1%), p-vinyl guaiacol (19.4%) and linalool (15.1%). The evaluation of the antimicrobial activity of essential oil of S. rhombifolia showed activity moderate against Staphylococcus aureus (MIC - Minimum inhibitory Concentration 400 μg / ml) and Escherichia coli (MIC 350 μg / ml). / Os produtos naturais são considerados uma fonte extremamente valiosa para a descoberta de moléculas bioativas. Dessa forma, objetivou-se realizar o estudo fitoquímico de Sida rhombifolia L., caracterizar seus ácidos graxos e determinar a composição química e avaliação da atividade antimicrobiana do seu óleo essencial. Para o estudo fitoquímico das partes aéreas de S. rhombifolia, o extrato etanólico bruto foi obtido e, após a realização da prospecção fitoquímica, submeteu-se parte do extrato à marcha de alcaloides, onde a fase clorofórmica ácida foi aplicada em uma coluna de sílica gel. Uma partição foi realizada com a outra porção do extrato e após a obtenção da fase hidroalcoólica, esta foi aplicada em uma coluna Amberlite XAD-2 e, posteriormente, em Sephadex-LH 20. A caracterização dos compostos isolados se deu por Ressonância Magnética Nuclear (¹H e ¹³C) uni e bidimensional. Após extração dos ácidos graxos de S. rhombifolia, estes foram separados e quantificados utilizando um cromatógrafo gasoso com detector de ionização de chamas. As substâncias foram identificadas pela comparação com padrões de ésteres metílicos (Sigma). Para a obtenção do óleo essencial de S. rhombifolia, as folhas e inflorescências foram submetido à hidrodestilação, utilizando um aparelho de Clevenger (100ºC). A análise da composição química do óleo se deu por um cromatógrafo gasoso acoplado ao espectrômetro de massas. As substâncias foram identificadas pela comparação do espectro de massa obtido com o banco de dados do sistema (Nist. 62 lib) e índices de retenção (IR). A avaliação da atividade antimicrobiana se deu pela técnica de microdiluição, utilizando o óleo essencial de S. rhombifolia frente a Staphylococcus aureus (ATCC 15656), Escherichia coli (ATCC 25922), Streptococcus mutans (ATCC 25175), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853) e Candida albicans (ATCC 1106). O estudo fitoquímico permitiu o isolamento do etoxi-ferulato (Sr-1) e do canferol (Sr-2). A análise dos ácidos graxos identificou um percentual de 87,36%, sendo os ácidos palmítico (27,97%), linolênico (26,81%) e oleico (25,09%) os mais abundantes, em diferentes percentuais. O óleo essencial de S. rhombifolia apresentou como constituintes majoritários o octadecanal (44,1%), o p-vinil-guaiacol (19,4%) e o linalol (15,1%). A avaliação da atividade antimicrobiana do óleo essencial de S. rhombifolia apresentou uma moderada atividade frente a Staphylococcus aureus (CIM 400 μg/mL) e Escherichia coli (CIM 350 μg/mL).

Submitted by ANA KARLA PEREIRA RODRIGUES (anakarla_@hotmail.com) on 2017-08-04T17:21:10Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 15443881 bytes, checksum: a81c2afaef7e1fccdeb2543bc340d5a1 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-04T17:21:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 15443881 bytes, checksum: a81c2afaef7e1fccdeb2543bc340d5a1 (MD5) Previous issue date: 2015-08-10 / Nitroaromatic compounds derived from Morita-Baylis-Hillman reaction (RMBH) have been tested in the treatment of most neglected diseases such as malaria, Chagas disease and leishmaniasis. An important experimental observation is the relation between biological activity (measured by IC50) and reduction potential of these compounds (estimated by the cathodic and anodic peak potentials determined by electroanalytical techniques), the latter directly connected to the reduction of the nitro group (-NO2 ). For this reason, electrochemical methods have been used in order to mimic the enzymatic bioreduction of these compounds, as reported by Vasconcellos et al. (J. Braz. Chem. Soc. 23:894, 2012). The objective of this work was to develop a computational protocol to predict the reduction potential in aprotic media to support the molecular modeling of new compounds with desired pharmacological activity. The developed direct protocol (for aprotic solvents) consists of performing DFT calculations with B98, PBE1PBE or M06-2X functionals with 6-31+G(d,p) basis set and C-PCM solvation method (with standard cavitation method UFF/VdW). The results show that it is possible to predict the experimental variation of the reduction potential of at least 70 % of confidence (in a range of experimental data of only 140 mV) with absolute average errors less than 45 mV (much less than the experimental uncertainty of the absolute reaction potential of hydrogen electrode, approximately 400 mV) and standard deviation of about 35 mV (inferior to 1,0 kcal/mol). The application of direct protocol for a series of 65 uncorrelated molecules, whose reduction potentials vary in a range of more than 6 V, provided a model with more than 99% of predictive power. From the application of the protocol to a series of 40 molecules, for which experimental results are not available, it was possible to predict that some of these structures may have more favorable potentials to bioreduction process than the systems used in the calibration step, which makes them candidates for new drugs. / Compostos nitroaromáticos derivados da reação de Morita-Baylis-Hillman (RMBH) vêm sendo testados no tratamento de doenças extremamente negligenciadas, tais como malária, doença de Chagas e leishmanioses. Uma importante observação experimental consiste na relação entre a atividade biológica (medida pelo IC50) e o potencial de redução (estimado pelos potencias de pico anódico e catódico determinados por técnicas eletroanalíticas) destes compostos, este último diretamente ligado à redução do grupo nitro (-NO2). Por esta razão, métodos eletroquímicos têm sido utilizados com o intuito de simular a biorredução enzimática destes compostos, como reportado por Vasconcellos e colaboradores (J. Braz. Chem. Soc. 23:894, 2012). O objetivo deste trabalho foi o de desenvolver um protocolo computacional para a predição de potenciais de redução em meio aprótico para auxiliar a modelagem molecular de novos compostos com a atividade farmacológica desejada. O protocolo direto desenvolvido (para solventes apróticos) consiste na realização de cálculos DFT com os funcionais B98, PBE1PBE ou M06-2X, com o conjunto de funções de base 6-31+G(d,p) e método de solvatação C-PCM (com o método de cavitação padrão UFF/VdW). Os resultados mostram que é possível prever a variação experimental do potencial de redução com pelo menos 70 % de confiança (em uma faixa de valores experimentais de apenas 140 mV) e erros médios absolutos inferiores a 45 mV (muito inferior à incerteza experimental do potencial de redução absoluto do eletrodo de hidrogênio, que é de cerca de 400 mV) e desvio-padrão de cerca de 35 mV (inferior a 1,0 kcal/mol). A aplicação do protocolo direto a uma série de 65 moléculas não-correlacionadas, cujos potenciais de redução variam em uma faixa de mais de 6 V, forneceu um modelo com mais de 99 % de poder preditivo. A partir da aplicação do protocolo a uma série de 40 moléculas, para as quais ainda não estão disponíveis resultados experimentais, foi possível prever que algumas destas estruturas podem possuir potenciais mais favoráveis ao processo de biorredução que os estudados na etapa de calibração, o que as tornam candidatos à novos fármacos.

Submitted by Maike Costa (maiksebas@gmail.com) on 2017-09-11T14:23:26Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 4539317 bytes, checksum: 8b0c70f7cf6924075fe039736b510527 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-11T14:23:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 4539317 bytes, checksum: 8b0c70f7cf6924075fe039736b510527 (MD5) Previous issue date: 2017-02-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Natural products have been used by humankind since immemorial times to relieve and cure severals diseases, and the ethnic-pharmacology knowledge of plant species has aroused interest in research aimed at the discovery of bioactive molecules. The emergence of new diseases transmitted by Aedes aegypti L., linked to resistance to larvicides and insecticides in the market, makes it necessary to search for alternatives to vector combat. In this context the Brazil stands out because it has a great potential of natural resources that lead to the development of native flora bioproducts.Within this diversity was sought through a pioneering study from view point chemical and biological of the ethanolic extract gross obtained from the aerial parts of the species Helicteres velutina K. Schum (Sterculiaceae), commonly know in Brazil as “pitó” is popularly used by the tribe indigenous Pankararé in Bahia, as insect repellent, isolate and identify their chemical constituents, as well evaluate their larvicidal potential.For the phytochemical study, the ethanolic extract gross was solubilized in EtOH:H2O (7:3) and partitioned with Hex.; CH2Cl2; AcOEt; n-BuOH, obtaining their respective phases, in addition to the hydroalcoholic phase. 8g of the dichloromethane phase was subjected to column chromatography using silica flash and/or Sephadex-LH 20 as stationary phases.This chromatographic process led to the apartness of five chemical constituents, whose chemical structures were defined by the interpretation of infrared, RMN 1H e 13C spectra and 2D, as well as comparisons with literature models. The isolated substances were three flavonoids: Hv-1 - 3,5,7,4'-tetrahydroxyflavone (Kaempferol); Hv-2 - Kaempferol-3-O-β-D-(6´´-E-p-coumaroyl) glucopyranoside (Tiliroside); Hv-3 - 7,4’-di-O-methyl-8-O-sulphateflavone (Isoscutellarein sulphate); one triterpene from the series oleanane - Hv-4 – Acid 3β-hydroxy-olean-12-en-28-oic (Oleanolic acid); and a steroid - Hv-5 - Sitosterol-3-O-D- glucopyranoside (β-sitosterol glycosylated). A preliminary study to evaluate the larvicidal activity of the ethanolic extract gross of the aerial parts of Helicteres velutina demonstrated excellent activity against larvae in the L4 stage of Aedes aegypti, with the 10.000 ppm dose dose of killing 100% of the larvae after 24 h of exposure and the CL50 was estimated to be 2.983 ppm according to Tukey's test, thus characterizing itself as a promising alternative to be used in an integrated control system of this vector, which demands the continuity of its studies. / Os produtos naturais são utilizados pela humanidade desde tempos imemoriais com intuito de alivio e cura de diversos males, tendo o conhecimento etnofarmacológico das espécies vegetais despertado interesse em pesquisas voltadas para descoberta de moléculas bioativas. O surgimento de novas doenças transmitidas pelo Aedes aegypti L., atrelado a resistência a larvicidas e inseticidas existentes no mercado, tornam necessário a busca por alternativas de combate ao vetor. Neste contexto o Brasil se destaca por possuir um grande potencial de recursos naturais que levam ao desenvolvimento de bioprodutos a partir da flora nativa. Dentro desta diversidade buscou-se através de um estudo pioneiro do ponto de vista químico e biológico do extrato etanólico bruto obtido das partes aéreas da espécie Helicteres velutina K. Schum (Sterculiaceae), conhecida popularmente no Brasil como “pitó” e usada tradicionalmente pela tribo indígena Pankararé na Bahia, como repelente de insetos, isolar e identificar seus constituintes químicos, bem como avaliar o seu potencial larvicida. Para o estudo fitoquímico, o extrato etanólico bruto foi solubilizado em EtOH:H2O (7:3) e particionado com Hex.; CH2Cl2; AcOEt; n-BuOH, obtendo-se suas respectivas fases, além da fase hidroalcoólica. 8,0 g da fase diclorometano foi submetida a cromatografia em coluna utilizando como fases estacionárias sílica flash e/ou Sephadex-LH 20. Este processo cromatográfico levou ao isolamento de cinco constituintes químicos, cujas estruturas químicas foram definidas por interpretação dos espectros de Infravermelho, RMN 1H e 13C e bidimensionais, além de comparações com modelos da literatura. As substâncias isoladas foram três flavonoides: Hv-1 - 3,5,7,4'-tetrahidroxiflavona (Canferol); Hv-2 - Canferol-3-O-β-D-(6”-E-p-cumaroil) glicopiranosídeo (Tilirosídeo); Hv-3 - 7,4’-di-O-metil-8-O-sulfatoflavona (Isoscutelareina sulfatada); um triterpeno da série oleanano - Hv-4 - Ácido 3β-hidroxi-olean-12-en-28-óico (Ácido oleanólico); e um esteroide - Hv-5 - Sitosterol-3-O-D-glicopiranosídeo (β-Sitosterol glicosilado). Um ensaio preliminar para avaliar a atividade larvicida do extrato etanólico bruto das partes aéreas de Helicteres velutina demonstrou excelente atividade frente a larvas no estágio L4 de Aedes aegypti, sendo a dose de 10.000 ppm capaz de matar 100% das larvas após 24 h de exposição e a CL50 estimada em 2.983 ppm segundo teste de Tukey, caracterizando-se, portanto, em uma alternativa promissora para ser utilizada em um sistema de controle integrado desse vetor, o que demanda a continuidade dos seus estudos.

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Agradecemos a compreensão. on 2017-04-17T19:13:40Z (GMT) / Submitted by CARITA LIBERATO DO AMARAL null (caritaliberato@gmail.com) on 2017-04-17T19:31:41Z No. of bitstreams: 1 Tese_Carita_Liberato_do_Amaral.pdf: 5356975 bytes, checksum: ea2885d6ecdf894dd43cb282fa498e09 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-04-17T19:42:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 amaral_cl_dr_jabo.pdf: 5356975 bytes, checksum: ea2885d6ecdf894dd43cb282fa498e09 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-17T19:42:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 amaral_cl_dr_jabo.pdf: 5356975 bytes, checksum: ea2885d6ecdf894dd43cb282fa498e09 (MD5) Previous issue date: 2017-02-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As condições ambientais, assim como o contraste sazonal nas fitofisionomias do Cerrado entre a época seca e úmida colaboram para a diversificada sintetize e seleção de metabólitos secundários em plantas. Os metabólitos secundários atuam como uma interface química entre plantas e o meio, desta forma a sua síntese pode ser comumente alterada pelas condições ambientais. Fatores como temperatura, disponibilidade hídrica, luminosidade, características do solo, nutrientes e poluição atuam diretamente sobre a produção e liberação desses compostos. Os microrganismos do solo podem transformar os compostos tóxicos liberados, desativando-os ou dando origem a compostos ainda mais tóxicos, assim como esses compostos podem alterar as características e atributos do solo quando presentes em quantidades adequadas. Dentre as plantas nativas do Cerrado destaca-se a espécie Vernonia ferruginea, uma agressiva infestante de pastagem, que possui indícios de produção de compostos com potencial tóxico. Desta forma, esta pesquisa foi desenvolvida para verificar a atividade tóxica de V. ferruginea e se a mudança de algumas características como disponibilidade hídrica, tipo de solo, condições de luminosidade e concentração de alumínio no solo influenciam a produção desses compostos. Para tal, plantas de V. ferruginea foram desenvolvidas sobre diferentes condições para posterior extração e/ou fracionamento do material vegetal para verificação de atividade biológica por meio de bioensaios e identificação de grupos químicos. Considerando os resultados dos parâmetros de germinabilidade e de desenvolvimento das espécies testadas é possível indagar sobre a possibilidade de V. ferruginea ter a capacidade de liberar substâncias tóxicas, uma vez que, consequências diretas da presença desses compostos nos extratos foram verificadas no bioensaio, como: a inibição/redução da germinação de sementes, injúria ou necrose no sistema radicular e redução do desenvolvimento e do acúmulo de massa seca das plântulas. Os resultados também dão base para constatar que algumas interações da espécie com as alterações nas suas condições de desenvolvimento causam desvios de rotas biossintética de metabólitos modificando e/ou potencializando sua capacidade fitotóxico. / The environmental conditions, as well as the seasonal contrast in the Cerrado phytophysiognomies between the dry and wet seasons, contribute to the diversified synthesis and selection of secondary metabolites in plants. Secondary metabolites act as a chemical interface between plants and the environment, so their synthesis can be commonly altered by environmental conditions. Factors such as temperature, water availability, luminosity, soil characteristics, nutrients and pollution act directly on the production and release of these compounds. Soil microorganisms can transform the released toxic compounds, deactivating them or giving rise to even more toxic compounds, as these compounds can alter the characteristics and attributes of the soil when present in adequate amounts. Among the native plants of the Cerrado, the species Vernonia ferruginea, an aggressive pasture weed, stands out, with indications of production of compounds with toxic potential. Thus, this research was developed to verify the toxic activity of V. ferruginea and if the change of some characteristics such as water availability, soil type, light conditions and aluminum concentration in the soil influence the production of these compounds. For this, plants of V. ferruginea were developed on different conditions for later extraction and / or fractionation of the vegetal material for verification of biological activity by means of bioassays and identification of chemical groups. Considering the results of the parameters of germinability and development of the tested species it is possible to inquire about the possibility of V. ferruginea being able to release toxic substances, since direct consequences of the presence of these compounds in the extracts were verified in the bioassay, such as: The inhibition / reduction of seed germination, injury or necrosis in the root system and reduction of the development and accumulation of dry mass of the seedlings. The results also provide evidence that some interactions of the species with changes in their developmental conditions cause biosynthetic pathway deviations of metabolites modifying and / or potentiating their phytotoxic capacity. / FAPESP: 12/25298-0

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This work deals with the phytochemical study of mangaba, Hancornia speciosa Gomes (Apocynaceae). The first chapter deals with the role of volatile compounds from leaves and fruits. The effect of drying time on the chemical compositions of volatile oils from leaves was investigated. Thus, it was possible to verify that there is a decrease in the abundance of alcohols such as (E)-3-hexenol (68.6% fresh leaves; 13.3% after 10 days of drying), while the percentage of oxygen-containing monoterpenes such as geraniol (2.4% fresh leaves; 54.7% after 10 days of drying) is increased. On the other hand, the effect of the stage of maturity on the volatile components of mangaba fruit was investigated at three different stages. The volatile analyses showed an obvious difference, both in qualitative and relative abundance, of major components, according to stage of maturity. Thus, it became apparent that fruits at the initial stage (immature) present oxygen-containing monoterpenes, such as (Z)-linalool oxide, (E)-linalool oxide and linalool in a higher relative percentage, while esters, alcohols, aldehydes and ketones were detected at low percentages. Nonetheless, esters, alcohols, aldehydes and ketones predominated in the fruits at the final stage (mature) while the percentage of oxygen-containing monoterpenes was very much reduced. Finally, the volatile profile of the fruits at the intermediate stage showed esters, alcohols, aldehydes and ketones like those found in mature fruits, but at an intermediate percentage. In the same way, there was an intermediate percentage of oxygen-containing monoterpenes as was also observed in higher amounts in immature fruits. The second chapter deals with isolation and structure elucidation of twelve compounds from the latex of fruits of H. speciosa: 3-β-O-hexadecanoyl lupeol, 3-β-O-(3 -hydroxyhexadecanoyl) lupeol, 3-β-O-(9-octadecenoyl) lupeol, 3-β-O-octadecanoyl lupeol, 3-β-O-(3 -hydroxyoctadecanoyl) lupeol, 3-β-O-(3 -hydroxyeicosanoyl) lupeol, 3-β-O-(3 -hydroxydocosanoyl) lupeol, 3-β-O-(3 ,5 -dihydroxyeicosanoyl) lupeol, α-amyin, β-amyrin, lupeol and sucrose octaacetate. For structure elucidation of these natural compounds IR, EM and NMR techniques (1H, 13C, DEPT) were used. Finally, in the last chapter the extracts and some fractions of H. speciosa were screened for their biological activities in vitro. / Neste trabalho apresentamos os resultados sobre o estudo fitoquímico da mangabeira, Hancornia speciosa Gomes (Apocynaceae). Na primeira parte do trabalho foi investigada a composição química dos voláteis das folhas e dos frutos variando-se o tempo de secagem e o estádio de maturação, respectivamente. As análises através de CG-EM dos óleos essenciais das folhas nos permitiu observar que há mudanças significativas na percentagem relativa dos constituintes majoritários quando se varia o tempo de secagem. Desta forma, foi possível verificar um decréscimo nas percentagens dos álcoois como (E)-3-hexenol (68,6% nas folhas frescas; 13,3% após 10 dias de secagem); enquanto houve um aumento significativo no percentual dos monoterpenos oxigenados como geraniol (2,4% nas folhas frescas; 54,7% após 10 dias de secagem). Já nas análises da composição química dos voláteis dos frutos nos três estádios de maturação (verde, de vez e maduro), foi possível verificar uma clara diferenciação na proporção dos componentes principais, de acordo com o estádio de maturação. Assim, o aroma dos frutos verdes possui um teor maior de monoterpenos oxigenados como o óxido de cis-linalool, óxido de trans-linalool e linalool, enquanto a proporção de ésteres, álcoois, aldeídos e cetonas são menores. Por outro lado, na composição química dos voláteis dos frutos maduros, observamos um predomínio de ésteres, álcoois, aldeídos e cetonas, enquanto a proporção de monoterpenos oxigenados foi bastante reduzida. Já na composição dos voláteis dos frutos de vez , verificamos proporções intermediárias tanto dos ésteres, álcoois, aldeídos e cetonas quanto dos monoterpenos oxigenados como o óxido de cis-linalool, óxido de trans-linalool e linalool. Na segunda parte do trabalho, o estudo fitoquímico do látex dos frutos de H. speciosa nos permitiu o isolamento e identificação de 12 substâncias: 3-β-O-hexadecanoato de lupeoíla, 3-β-O-3 -hidroxihexadecanoato de lupeoíla, 3-β-O-9-octadecenoato de lupeoíla, 3-β-O-octadecanoato de lupeoíla, 3-β-O-3 -hidroxioctadecanoato de lupeoíla, 3-β-O-3 -hidroxiicosanoato de lupeoíla, 3-β-O-3 -hidroxidocosanoato de lupeoíla, 3-β-O-3 ,5 -diidroxiicosanoato de lupeoíla, α-amina, β-amirina, lupeol e a sacarose na sua forma peracetilada. A determinação estrutural das substâncias foi baseada na análise dos dados espectrais de EM, IV e RMN (1H, 13C e DEPT). Por fim, na terceira parte do trabalho, foram realizados ensaios para verificação de atividade biológica com os extratos e frações isoladas das várias partes da planta estudada.

Made available in DSpace on 2015-05-14T13:21:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ArquivoTotal.pdf: 3274931 bytes, checksum: fad3ac5b146d775c69dcf930c8894e4e (MD5) Previous issue date: 2013-08-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / This work aimed to perform the kinetic bioresolution of Morita Baylis Hillman adducts (MBHA) using CALB lipase derived from Candida Antarctica fungus. Initially three MBHA we synthesized using acrylonitrile and m e p nitro benzaldehyde. Subsequently the respective acetates from MBHA were prepared in high yields using acetyl chloride and TEA. Methodologies for bioresolution of AMBH (obtained from nitro aldehydes m e p) were successfully developed producing the R enantiomers with 99.9% of enantiomeric excess determined by gas chromatography (using the beta cyclodextrin chiral column). However, using the same methodology it was not possible performed the bioresolution of AMBH derived from the o-benzaldehyde. To obtain the S enantiomers, the hydrolysis reactions of esters obtained from biocatalysis were made and separated by liquid chromatography. These hydrolysis reactions were carried out using K2CO3 and methanol, yielding the S enantiomers with 100% and 10% of chemical yields and 86.8% and 97.48% of enantiomeric excesses respectively. Using the method of Mosher through double derivatization chemical shift values obtained from 1H NMR spectra generated a NORS> and NORS 0 <0, which indicates that the absolute configuration of the asymmetric carbon of AMBH hydrolyzed by enzyme is R. The values of [S] D derived from m and p nitro aldehydes (S configuration) are +37 and +30 degrees. The values of [S] D of S corresponding acetates are -7 and -9 degrees respectively. The AMBH obtained from the m nitro aldehyde were bioavaliados in vitro in a R/S, R and S forms. The racemate was the most effective on L. braziliensis promastigotes and the S enantiomer was the lowest active. In the cell cytotoxicity analysis which were evaluated in the safe murine macrophages, the racemate was the most cytotoxic and the S enantiomer the less cytotoxic (some cytotoxicity were only observed at concentrations over 40 mg/mL) concluding that all evaluated compounds were more cytotoxic for L. braziliensis parasite that the safe macrophage. / Nesse trabalho visou-se a bio-resolução cinética dos Adutos de Morita Baylis Hillman (AMBH) utilizando a Lipase CALB derivada do fungo Candida Antarctica. Inicialmente foram sintetizados três AMBH usando acrilonitrila e os respectivos o, m e p nitrobenzaldeídos. Subsequentemente os seus respectivos acetatos foram preparados em altos rendimentos, usando cloreto de acetila e TEA. Foram desenvolvidas com êxito, metodologias para a bio-resolução dos AMBH oriundos dos nitroaldeídos m e p, obtendo os enantiômeros R com excessos enantioméricos de 99,9%, determinados pela técnica de cromatografia gasosa, usando à coluna quiral beta ciclodextrina e fase móvel (N2). Porém usando as metodologias acima não foi possível a bio-resolução do AMBH derivado do o-benzaldeído. Para obter os enantiômeros S, foram feitas as reações de hidrólise dos respectivos ésteres devidamente separados por cromatografia líquida das reações de biocatálise. As reações de hidrólise foram feitas usando K2CO3 e metanol, obtendo-se os enantiômeros S com rendimentos químicos de 100% e 10% e excessos enantioméricos de 86,8% e 97,48% respectivamente. Usando o método de Mosher através da dupla derivatização os valores de deslocamentos químicos obtidos dos espectros de RMN1H geraram um NORS>0 e NORS<0, o que demonstra que a configuração absoluta do carbono assimétrico dos AMBH os quais a enzima hidrolisou é R. Os valores de [S]D oriundos dos AMBH nitroaldeídos m e p (configuração R) são +37 e +30. Os valores de [S]D dos correspondentes acetatos S são -7 e -9 respectivamente. O AMBH oriundo do m-nitroaldeído nas formas R/S, R e S foram bioavaliados in vitro. A mistura racêmica foi a que se apresentou mais efetiva sobre promastigotas de L. braziliensis, e a substância S foi a que apresentou a menor atividade. Na análise de citotoxicidade celular no macrófago sadio de murinos observou-se que a mistura racêmica foi a mais citotóxica e o S o menos citotóxico (citotoxidade apenas a partir da concentração de 40 Xg/mL) constatando que todas as substâncias avaliadas foram mais citotóxicas para o parasita do que para macrófagos.