Introdução: A atresia biliar (AB) é uma doença que se inicia na infância e caracteriza-se por obstrução das vias biliares extra-hepáticas, e por colangiopatia progressiva, de etiologia desconhecida. Seu tratamento consiste numa portoenterostomia, cujo sucesso é variável. Fatores como a idade na portoenterostomia e normalização de bilirrubinas séricas influenciam a sobrevida do paciente com seu próprio fígado. Nosso grupo estuda o envolvimento de uma arteriopatia na etiologia da AB. O fator de crescimento vascular endotelial (VEGF) e seus receptores VEGFR1 e VEGFR2 participam da angiogênese em situações de distúrbio vascular. Objetivo: Quantificar a expressão gênica de VEGFA e seus receptores, relacionando com variáveis moleculares, morfométricas e clínico-laboratoriais associadas com a gravidade da AB e o prognóstico pós-portoenterostomia. Métodos: Estudo de amostras de biópsias em cunha coletadas na laparotomia exploradora de pacientes com AB, na sua forma isolada IgM- para citomegalovírus (n= 32), comparando com lactentes com colestase intra-hepática (CIH, n= 09), pareados por idade. Uma amostra foi ultracongelada (análise molecular) e outra, parafinizada (análises histológica e imunoistoquímica). A expressão dos genes angiogênicos (VEGFA, VEGFR1 e VEGFR2), fibrogênico (MCP1, proteína quimiotática de monócitos) e de reação ductular (CK19, citoqueratina 19), além do gene normalizador, ribossomal 18S, foi medida por PCRq com sondas TaqMan®. As análises morfométricas, a partir de material parafinado, incluindo extensão de fibrose e reação ductular foram mensuradas através do programa Image Pro Plus 6.0. Variáveis clínico-laboratoriais foram prospectivamente coletadas no banco de dados da Unidade de Hepatologia Pediátrica do HCPA. Resultados: VEGFR2 foi menos expresso na AB em comparação com CIH (P <0,001), enquanto não houve diferença significante na expressão de VEGFR1 (P= 0,086) e apenas uma tendência de menor expressão do VEGFA (P= 0,060) no grupo AB. Quanto à expressão de VEGFA e VEGFR2, dois subgrupos de AB foram observados: um com expressão levemente superior ou igual à CIH e outro com expressão 3 vezes menor que a mediana do grupo CIH. Os subgrupos com menor expressão foram denominados loVEGFA e loVEGFR2. Na AB, a expressão do VEGFA teve correlação positiva com a de seus receptores VEGFR1 e VEGFR2 (rs=0,8; P<0,001 e rs=0,5; P=0,001). A expressão de VEGFR2 teve uma forte correlação negativa com a idade na portoenterostomia (rs=-0,6;P=0,001). As bilirrubinas séricas total e direta foram negativamente correlacionadas com VEGFA (rs=-0,5;P=0,007 e rs=-0,4;P=0,033) e VEGFR2 (rs=-0,5;P=0;004 e rs=-0,6;P=0,001). No subgrupo loVEGFR2 a expressão de CK19 estava diminuída, e a de MCP1 não se associou à expressão gênica das moléculas angiogênicas. Conclusões: Na AB há um subgrupo com diminuição na expressão de VEGFA e VEGFR2. A expressão de ambas as moléculas correlacionou-se ao comportamento das variáveis associadas a gravidade da doença e obstrução do fluxo biliar na portoenterostomia, incluindo bilirrubinas séricas e idade. O subgrupo de baixa expressão do VEGFR2 apresentou diminuição da massa de colangiócitos, segundo a expressão do CK 19, mas foi independente da expressão do marcador de fibrose, MCP1. / Background: Biliary atresia (BA) is a disease that begins in infancy and is characterized by complete obstruction of extrahepatic biliary ducts and a progressive cholangiopathy of undefined etiology. Treatment of BA consists of a portoenterostomy, whose success is variable. Factors such as age at portoenterostomy and post-operative normalization of serum bilirubin influence the native liver survival. Our group studies the role of an arteriopathy, and thus of hypoxia, in the etiology of BA. Expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) A and its receptors, VEGFR1 and VEGFR2, induce angiogenesis in response to hypoxia. Aim: To assess gene expression of VEGFA and its receptors in BA, correlating with molecular, morphometric and clinical-laboratory variables associated with the disease severity and the post-portoenterostomy prognosis of BA. Methods: Liver biopsy specimens collected at exploratory laparotomy of age-matched patients with isolated, cytomegalovirus IgM-negative BA (n=32) and intrahepatic cholestasis (IHC, n=9) were evaluated. A sample was ultrafrozen (for molecular analysis) and the other was paraffin-embedded (for histological and morphometric analyzes). The expression of genes involved in angiogenic (VEGFA, VEGFR1 and VEGFR2), biliary fibrosis (MCP1 - monocyte chemotaxis protein 1) and cholangiocyte phenotype (CK19 – cytokeratin 19), was measured by TaqMan® probes with qPCR, using ribosomal 18S as the normalizing gene. Extents of fibrosis and ductular reaction were morphometrically assessed using the Image Pro Plus 6.0. Clinical-laboratory variables were collected from the database of the Pediatric Hepatology Unit of Hospital de Clínicas de Porto Alegre. Results: VEGFR2 was less expressed in BA compared with IHC (P <0.001), whereas there was no significant difference in the expression of VEGFR1 (P=0.086) and only a trend of a lower expression of VEGFA (P=0.060) in the BA group. Regarding VEGFA and VEGFR2, two subgroups of BA were defined: low expression, with values 3 times lower than the median of the IHC group, and high expression. In BA, VEGFA expression was positively correlated with that of VEGFR1 and VEGFR2 (rs=0.8, P<0.001; rs=0.58, P=0.001). The expression of VEGFR2 had a strong negative correlation with age at portoenterostomy (rs=-0.6, P=0.001). Total and direct reacting bilirubins were both negatively correlated with VEGFA expression (rs=-0.5, P=0.007; rs=-0.4,P=0.033) and VEGFR2 (rs=-0.5,P=0.004; rs=-0.6,P=0.001). In the low VEGFR2 expression (loVEGFR2) subset, gene expression of CK19, marker of cholangiocyte phenotype, was decreased. MCP1, marker of fibrosis, was not associated with he expression of the angiogenic factors. Conclusion: In BA there is a subset of patients with decreased expression of VEGFA and VEGFR2. The expression of these molecules is correlated with variables associated to disease severity and bile flow obstruction at portoenterostomy, including age and serum bilirubin levels. The loVEGFR2 expression is associated with a decreased cholangiocyte mass as evaluated by CK19 expression, and is independent of the expression of the fibrosis marker MCP1.

Techn. Universiẗat, Diss., 2004--München.

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INTRODUCCIÓN: Los procedimientos con cirugía mínimamente invasiva en el mundo se han incrementado actualmente en el Perú son muy pocos los centros pediátricos donde esta se realiza debido al poco entrenamiento que se realiza en los médicos residentes de Cirugía Pediátrica por lo que se realizó un programa experimental para entrenamiento en toracoscopia en atresia de esófago. OBJETIVOS: Comparar el nivel de habilidades adquiridas en un programa experimental en simulador para capacitación en videotoracoscopía para atresia de esófago en los residentes de cirugía pediátrica. POBLACIÓN: Residentes de Cirugía Pediátrica. MÉTODOS: Se realizó un estudio cuasi experimental pre y post test, aplicando un programa experimental para entrenamiento en toracoscopia, utilizando el OSATS (Evaluación Objetiva de Competencias Técnicas en Cirugía) como herramienta de medición. RESULTADOS: Se evaluaron 12 residentes, 5 residentes de 2o año y 7 residentes de 3o año, el OSATS pre test y post test en los residentes de 2o año fue de 9.8(8-12) y 16.6(15-20) respectivamente y en los residentes de 3o año fue de 13.4(11-16) y 17.4(15-20), con un p de 0,002. El coeficiente α de Crohnbach fue de 0.81 CONCLUSIONES: El estudio demuestra que el OSATS puede ser usado para medir el progreso de las habilidades en toracoscopia en los residentes de cirugía pediátrica y el nivel de habilidades alcanzadas por los residentes de segundo y tercer año posterior al programa de entrenamiento fue Logro de Competencia.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / A Atresia de esÃfago (AE) à uma anomalia estrutural que acontece em fetos quando nÃo ocorre a septaÃÃo completa do septo esofagotraqueal. Estudou-se a repercussÃo da AE induzida por Doxorrubicina (Doxo) na contratilidade in vitro do esÃfago distal e fundo de estÃmago. 26 Ratas wistar (267 g), com acasalamento controlado, nos dias 8 e 9 de gestaÃÃo receberam 2,2 mg/Kg de Doxo intraperitonealmente, enquanto 13 ratas controle receberam o mesmo volume de NaCl 0,9%. No dia 21,5 as ratas foram submetidas a cesariana, anÃlise dos fetos para confirmaÃÃo da AE e divisÃo em 3 grupos: controle, cujas mÃes receberam apenas NaCl 0,9%; Doxo sem AE, cujas mÃes receberam Doxo, mas nÃo desenvolveram AE; e Doxo com AE, os que desenvolveram AE. Foram montados em sistema para banho de ÃrgÃo isolado os anÃis de fundo de estÃmago dos fetos e em sistema miÃgrafo de agulha os segmentos de esÃfago distal, ambos contendo soluÃÃo fisiolÃgica Tyrode a 37 ÂC, pH 7,4 e oxigenaÃÃo constante, tensÃo basal de 1 g para estÃmago e 8 mN para esÃfago. Realizou-se curva concentraÃÃo-efeito ao agonista colinÃrgico Carbacol (CCh) (0,01 â 300 &#956;M) em ambos os tecidos nos 3 grupos. Em seguida, agora apenas nos segmentos de esÃfago isolado, foi construÃda uma curva concentraÃÃo-efeito ao KCl (10 â 100 mM), em que a contraÃÃo se deve prioritariamente à entrada de cÃlcio do meio extracelular por meio de canais operados por voltagem (VOC). A anÃlise estatÃstica foi determinada utilizando two-way anÃlise de variÃncia (ANOVA) e a significÃncia foi testada pelo Student-Newman-Keuls test. No fundo de estÃmago nÃo houve diferenÃa estatÃstica entre os grupos na resposta contrÃtil ao CCh (p>0,05, ANOVA), os valores da CE50 dos animais controle foram 2,17 [1,03 â 4,58] &#956;M e Emax 0,084  0,016 g/mg de tecido (n=7); Doxo sem AE 1,47 [0,83 â 2,61] &#956;M e 0,068  0,006 g/mg de tecido (n=12); Doxo com AE 3,26 [1,90 â 5,60] &#956;M e 0,070  0,022 g/mg de tecido (n=6). No esÃfago, animais controle com Emax 5,97  0,58 mN (n=11) foram estatisticamente diferentes (p<0,05, ANOVA) dos grupos Doxo sem AE 4,48  0,34 mN (n=11) e Doxo com AE 4,42  0,68 mN (n=8), enquanto a CE50 nÃo apresentou diferenÃa estatÃstica significativa entre os grupos (p>0,05, ANOVA) controle 190 [96 â 379] nM, Doxo sem AE 228 [125 â 418] nM e Doxo com AE 439 [206 â 936] nM, quanto a resposta contrÃtil ao CCh. Na resposta ao KCl houve incremento de tensÃo inferior ao observado com CCh sem diferenÃa entre os trÃs grupos (p>0,05, ANOVA), 8 valores de Emax foram no controle 1,31  0,14 mN (n=5), Doxo sem AE 1,27  0,42 mN (n=7) e Doxo com AE 1,21  0,20 mN (n=7). Concluiu-se que o tratamento de ratas com Doxo durante o perÃodo gestacional leva a uma diminuiÃÃo da contratilidade de esÃfago isolado de seus fetos, independente do desenvolvimento de AE. Aparentemente, essa diminuiÃÃo nÃo se deve a uma menor funcionalidade dos canais VOC. O fundo de estÃmago isolado nÃo apresentou alteraÃÃes da resposta contrÃtil. / Esophageal atresia (EA) is a structural anomaly that results from an incomplete esophago-traqueal septation in the fetus during intrauterine development. The in vitro contractility of the distal esophagus and gastric fundus of fetuses with esophageal atresia induced by Doxorubicin (Doxo) was studied. 26 Female Wistar rats (267 g), were subjected to date-controlled mating, subsequently receiving 2.2 mg/kg Doxo intraperitoneally on days 8 and 9 of pregnancy, while a controlled group of 13 rats received the same volume of 0.9% NaCl. On day 21.5 the pregnant rats were submitted to a cesarean surgery, with the fetuses analysed to confirm EA and thereafter divided into 3 groups: control, whose mothers received only 0.9% NaCl; Doxo without EA, whose mothers received Doxo but not developed EA; Doxo with EA, who developed EA. After being sacrificed, ring-strips of the gastric fundus were obtained from the fetuses and mounted in isolated organ bath, while the distal esophageal strips were mounted in wire myograph system; both strips contained a standard Tyrode solution maintained at 37 ÂC, pH 7.4, in addition to constant oxygenation and a basal tension of 1 g for the fundic strips and 8 mN for the esophagus. For each set up, we carried out a cholinergic-agonist concentration- effect curve with Carbachol (CCh) (0.01 â 300 &#956;M) in both tissue in the three groups. The participation of voltage-operated channels (VOCs) was studied; a KCl- concentration-effect curve (10 â 100 mM) was conducted on isolated esophageal strips. Collected data was subjected to two-way analysis of variance (ANOVA) and the significance was tested using Student-Newman-Keuls test. There was not significant statistical difference in fundic stripsâ contractility in response to CCh (p>0.05, ANOVA), the EC50 values of the control animals were 2.17 [1.03 â 4.58] &#956;M and Emax 0.084  0.016 g/mg tissue (n=7); Doxo without EA 1.47 [0.83 â 2.61] &#956;M and 0.068  0.006 g/mg tissue (n=12); Doxo with EA 3.26 [1.90 â 5.60] &#956;M and 0.070  0.022 g/mg tissue (n=6). However, significant statistical difference was noted (p<0.05, ANOVA), in esophageal stripsâ contractility in response to CCh in the Emax value of control 5.97  0.58 mN (n=11), vs Doxo without EA 4.48  0.34 mN (n=11) and Doxo with EA 4.42  0.68 mN (n=8), while there was not significant statistical difference (p>0.05, ANOVA) in the EC50 value of control 190 [96 â 379] nM, Doxo without EA 228 [125 â 418] nM and Doxo with EA 439 [206 â 936] nM. Tensional response to KCl were present in all groups, though lower than that seen in response &#65532;to CCh, however not statistically different when comparing all the three groups (p>0.05, ANOVA), Emax of control was 1.31  0.14 mN (n=5), Doxo without EA 1.27  0.42 mN (n=7) and Doxo with EA 1.21  0.20 mN (n=7). It is possible to conclude that the treatment of rats with Doxo during pregnancy leads to decrease contractility of isolated esophagus of their fetuses, independent of the development of EA. Apparently, such a decrease is not due to a lower functionality of VOC channels. The isolated gastric fundus strips showed no change in contractile response.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-24 / Desde o primeiro relato de tratamento cirúrgico da atresia coanal congênita em meados do século XIX, diferentes acessos e técnicas foram descritos. Entretanto, ainda não há consenso na literatura a respeito da técnica ideal para o tratamento desta mal formação. A principal complicação do tratamento desta mal formação é a reestenose. As estatísticas dos índices de reestenose variam na literatura de 9% a 36%, com uma média de 4 a 6 reoperações por paciente. Os principais procedimentos cirúrgicos usam os acessos transnasais (endoscópico ou microscópico) e transpalatinos. Apesar disto, a escolha entre os dois acessos e também o uso de procedimentos auxiliares como, moldes, dilatações e mitomicina C permanecem controversos. Previamente, descrevemos uma técnica transnasal endoscópica para a correção da atresia coanal congênita que utiliza retalhos de mucosa de septo nasal e da parede faríngea da atresia que dispensa uso de moldes ou tampões no pós operatório. Nesta técnica, utilizamos cola de fibrina para a fixação dos retalhos que protegem as áreas ósseas cruentas. Assim, a reparação tecidual local é mais rápida e a possibilidade de reestenose é menor. Outros autores também publicaram resultados satisfatórios do tratamento da atresia coanal com diferentes técnicas de confecção de retalhos por via transnasal endoscópica. Entretanto, ainda não há consenso na literatura sobre as vantagens do uso de retalhos na cirurgia da atresia coanal para a prevenção de recorrências. Devido à controvérsias na literatura, quanto à melhor opção de tratamento destes casos, é preciso buscar evidência que oriente a tomada de decisão pela cirurgia que ofereça o menor índice de recorrência no tratamento da atresia coanal congênita. Com este objetivo, estudamos os resultados de uma série de 21 pacientes operados pela nossa técnica, para o tratamento cirúrgico da atresia coanal congênita, acompanhados por 6 mêses à 10 anos. Estes resultados foram analizados com os de outros autores selecionados por revisão sistemática da literatura. Foi realizado estudo destes dados com o objetivo de determinar a significância dos retalhos na diminuição do índice de recorrências. A análise estatística dos dados mostrou que a possibilidade de reestenose das técnicas com retalhos foi de 9,25% portanto, bem inferior aos 30,02% daquelas que não os utilizam. A taxa de sucesso de 90,75%, com uso de retalhos, também supera os 69,98% calculados para as técnicas quedispensam sua utilização. A chance de reestenose com a proteção dos retalhos é 23,7% do risco das técnicas sem retalhos, considerando o intervalo de confiança de 95%(IC95% [0,1370;04120]) e p<0,001. Estes resultados devem ser interpretados ressalvando-se as limitações de qualidade metodológica dos estudos disponíveis na literatura atual para a inclusão de seus dados nesta análise. Entretanto, apesar destes serem os únicos com que no momento podemos contar, eles corroboram os resultados isolados dos diferentes autores que utilizam retalhos para a correção cirúrgica da atresia coanal congênita os quais mostram que suas cirurgias proporcionam menores índices de reestenose. / Since the first report of surgical treatment, in the middle of the XIX century, different techniques and approaches have been described. However, there is still no consensus in the literature as to the ideal technique for managing this malformation. The main complication of surgeries for treatment of this malformation is choanal restenosis. The statistics of the indexes of restenosis vary in the literature from 9% to 36%, with an average of 4-6 re-operations per patient. The main surgical techniques use transnasal (endoscopic and microscopic) and transpalatal approaches. The choice between transnasal and transpalatine approaches and also whether to use stents or not in the postoperative period still remains controversial in the surgical management of choanal atresia. We previously described a new endoscopic technique for surgical correction of choanal atresia that eliminates the use of nasal stents or packing. The transeptal endoscopic approach we proposed and used in our series of 21 patients makes it possible to fashion flaps from the septal, nasal and pharyngeal mucosa of the atretic plates in order to cover the raw areas. These flaps were fixed with fibrin glue, dispensing with the need to use stents or nasal packing in all cases in this series. Excessive scar tissue, which is a frequent cause of synechia, was not observed, perhaps because there were practically no areas without mucosal flap protection. Due to conflicting data in the current literature, regarding the best surgical options, evidence is sought to orient decision making in choosing the best surgical technique for the treatment of congenital choanal atresia that will result in lower rates of restenosis. For this objective, we analised a serie of 21 pacients operated on using our technique with a follow up from 6 months to 10 years. These results were analyzed in comparison with those of other authors, selected by a systematic review of the literature. A statistical analysis was done with the objective of determining if the use of flaps fashioned from mucosa, as part of the surgical correction, diminished the number of recurrences. The statistical analysis showed that the possibility of failure of the flap techniques was 9.25% compared to 30.02% of those that did not use them. The success rate with the use of flaps was 90.75% compared to 69.98% without the use of flaps. The odds ratio of 0.2376 (IC95%[0.1370;0.4120]) confirmed that the chance of surgical failure of techniques with the use of flaps was 23.76% of that of the risk to those without the use of flaps. There is a statistical significance between low rates of failures and use of the flaps.These results should be interpreted considering the limitations in the quality of the studies due to the lack of availability of controlled, randomized and blind trials, as would be normally required for more valid statistical evidence. However, we can consider that they corroborate a general impression from different authors, which show that the use of mucosal flaps provides more successful surgery in the treatment of congenital choanal atresia. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

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Introdução: A atresia biliar (AB) inclui obstrução completas das vias biliares extra-hepáticas e uma colangiopatia intra-hepática progressiva, cirrogênica. A natureza da colangiopatia destes processos permanece obscura. Uma arteriopatia levando a colangiopatia isquêmica explicaria a natureza progressiva da lesão biliar. A imunolocalização do fator de crescimento endotelial vascular A (VEGFA) em ramos arteriais e ductos biliares intra-hepáticos e do porta hepatis dos pacientes com AB sugere isquemia nestas estruturas. A ocorrência de hipóxia hepatobiliar na AB necessita ser esclarecida. Objetivo: Determinar a presença de hipóxia nos fígados de pacientes com AB, analisando a expressão gênica dos fatores induzidos por hipóxia (HIF) -1α e -2α. Métodos: Estudo de amostras de biópsias em cunha coletadas na laparotomia exploradora de pacientes com AB isolada sem IgM+ para citomegalovírus (n= 32) comparando com lactentes com colestase intra-hepática (CIH, n= 09), pareados por idade. Uma amostra foi ultracongelada (análise molecular) e outra, parafinizada (análises histológica e imunoistoquímica). Por PCRq, usando sondas TaqMan®, avaliaram-se as expressões gênicas de: HIF1-α, HIF2-α, proteína quimiotática de monócitos 1 (MCP1) (marcador de fibrose biliar), citoqueratina 19 (CK19) (marcador de colangiócitos). O gene normalizador foi 18S ribossômico. Por morfometria, foram quantificadas as extensões de fibrose e reação ductular. Dados clínico-laboratoriais foram prospectivamente coletados. Resultados: O grupo AB, comparado à CIH, apresentou maior expressão de HIF1-α e HIF2-α. No grupo AB, a expressão do HIF1-α correlacionou-se positivamente com a bilirrubina total (BT) sérica. Dois subgrupos de AB foram detectados quanto à expressão dos HIFs: alta (hiHIF, expressão 3x maior que a mediana da CIH) e baixa (loHIF). Pacientes hiHIF-1α eram mais velhos e com maiores níveis de BT e bilirrubina direta (BD) que loHIF-1α. O subgrupo hiHIF-2α apresentou expressão de CK19 inferior a do loHIF-2α. As demais variáveis foram semelhantes nos subgrupos HIFs. Conclusão: Na AB ocorre hipóxia tecidual hepática. Os dados sugerem a existência de hipóxia tecidual progressiva nos fígados afetados pela AB, associada ao desaparecimento de ductos biliares e à piora do quadro obstrutivo biliar. / Background: Biliary atresia (BA) includes a complete obstruction of the extrahepatic biliary tract and progressive intrahepatic cholangiopathy, and the nature of these processes remains unclear. An arteriopthy, leading to an ischemic cholangiopathy, can be involved. The immunolocalization of vascular endothelial growth factor A (VEGFA) in arterial branches and bile ducts both within the liver and at porta hepatis from patients with BA suggests ischemia in these structures. The occurrence of hypoxia in the hepatobiliary system in BA needs to be elucidated. Aim: To determinate the presence of hypoxia in the livers from patients with BA, by analyzing the gene expression of hypoxia-inducible factor (HIF) -1α and -2α. Methods: Liver biopsy specimens collected at exploratory laparotomy of age-matched patients with isolated, cytomegalovirus IgM-negative BA (n=32) and intrahepatic cholestasis (IHC, n=9) were evaluated. A sample was ultrafrozen (molecular analysis) and the other was paraffin-embedded (for histological and morphometric analyzes). Gene expression of: HIF-1α, HIF-2α, monocyte chemoattractant protein 1 (MCP1) (biliary fibrosis marker) and cytokeratin 19 (CK19) (cholangiocyte marker) were evaluated by PCRq using TaqMan® probes. The normalizing gene was 18S ribosomal. The extents of fibrosis and ductular reaction were assessed by morphometry. Clinical and laboratory data were prospectively collected. Results: There was higher HIF-1α and HIF-2α expression in BA in comparison with IHC. In BA, the HIF-1α expression was positively correlated with total serum bilirubin (TB). Two groups were observable in BA regarding HIFs: higher (hiHIF, considering as cutoff point a value higher than 3x the median of expression in IHC) and lower (loHIF). Patients with hiHIF-1α were older and presented increased levels of TB and direct-reacting serum bilirubin (DB) than loHIF-1α. Patients with hiHIF-2α presented CK19 expression lower than in loHIF-2α. The other variables were similar in subgroups HIFs. Conclusion: In BA there is hypoxia in the liver tissue, which seems to be progressive and associated with the disappearance of bile ducts and worsening biliary obstruction.

Introdução: A atresia biliar (AB) inclui obstrução completas das vias biliares extra-hepáticas e uma colangiopatia intra-hepática progressiva, cirrogênica. A natureza da colangiopatia destes processos permanece obscura. Uma arteriopatia levando a colangiopatia isquêmica explicaria a natureza progressiva da lesão biliar. A imunolocalização do fator de crescimento endotelial vascular A (VEGFA) em ramos arteriais e ductos biliares intra-hepáticos e do porta hepatis dos pacientes com AB sugere isquemia nestas estruturas. A ocorrência de hipóxia hepatobiliar na AB necessita ser esclarecida. Objetivo: Determinar a presença de hipóxia nos fígados de pacientes com AB, analisando a expressão gênica dos fatores induzidos por hipóxia (HIF) -1α e -2α. Métodos: Estudo de amostras de biópsias em cunha coletadas na laparotomia exploradora de pacientes com AB isolada sem IgM+ para citomegalovírus (n= 32) comparando com lactentes com colestase intra-hepática (CIH, n= 09), pareados por idade. Uma amostra foi ultracongelada (análise molecular) e outra, parafinizada (análises histológica e imunoistoquímica). Por PCRq, usando sondas TaqMan®, avaliaram-se as expressões gênicas de: HIF1-α, HIF2-α, proteína quimiotática de monócitos 1 (MCP1) (marcador de fibrose biliar), citoqueratina 19 (CK19) (marcador de colangiócitos). O gene normalizador foi 18S ribossômico. Por morfometria, foram quantificadas as extensões de fibrose e reação ductular. Dados clínico-laboratoriais foram prospectivamente coletados. Resultados: O grupo AB, comparado à CIH, apresentou maior expressão de HIF1-α e HIF2-α. No grupo AB, a expressão do HIF1-α correlacionou-se positivamente com a bilirrubina total (BT) sérica. Dois subgrupos de AB foram detectados quanto à expressão dos HIFs: alta (hiHIF, expressão 3x maior que a mediana da CIH) e baixa (loHIF). Pacientes hiHIF-1α eram mais velhos e com maiores níveis de BT e bilirrubina direta (BD) que loHIF-1α. O subgrupo hiHIF-2α apresentou expressão de CK19 inferior a do loHIF-2α. As demais variáveis foram semelhantes nos subgrupos HIFs. Conclusão: Na AB ocorre hipóxia tecidual hepática. Os dados sugerem a existência de hipóxia tecidual progressiva nos fígados afetados pela AB, associada ao desaparecimento de ductos biliares e à piora do quadro obstrutivo biliar. / Background: Biliary atresia (BA) includes a complete obstruction of the extrahepatic biliary tract and progressive intrahepatic cholangiopathy, and the nature of these processes remains unclear. An arteriopthy, leading to an ischemic cholangiopathy, can be involved. The immunolocalization of vascular endothelial growth factor A (VEGFA) in arterial branches and bile ducts both within the liver and at porta hepatis from patients with BA suggests ischemia in these structures. The occurrence of hypoxia in the hepatobiliary system in BA needs to be elucidated. Aim: To determinate the presence of hypoxia in the livers from patients with BA, by analyzing the gene expression of hypoxia-inducible factor (HIF) -1α and -2α. Methods: Liver biopsy specimens collected at exploratory laparotomy of age-matched patients with isolated, cytomegalovirus IgM-negative BA (n=32) and intrahepatic cholestasis (IHC, n=9) were evaluated. A sample was ultrafrozen (molecular analysis) and the other was paraffin-embedded (for histological and morphometric analyzes). Gene expression of: HIF-1α, HIF-2α, monocyte chemoattractant protein 1 (MCP1) (biliary fibrosis marker) and cytokeratin 19 (CK19) (cholangiocyte marker) were evaluated by PCRq using TaqMan® probes. The normalizing gene was 18S ribosomal. The extents of fibrosis and ductular reaction were assessed by morphometry. Clinical and laboratory data were prospectively collected. Results: There was higher HIF-1α and HIF-2α expression in BA in comparison with IHC. In BA, the HIF-1α expression was positively correlated with total serum bilirubin (TB). Two groups were observable in BA regarding HIFs: higher (hiHIF, considering as cutoff point a value higher than 3x the median of expression in IHC) and lower (loHIF). Patients with hiHIF-1α were older and presented increased levels of TB and direct-reacting serum bilirubin (DB) than loHIF-1α. Patients with hiHIF-2α presented CK19 expression lower than in loHIF-2α. The other variables were similar in subgroups HIFs. Conclusion: In BA there is hypoxia in the liver tissue, which seems to be progressive and associated with the disappearance of bile ducts and worsening biliary obstruction.

Introdução: A atresia biliar (AB) inclui obstrução completas das vias biliares extra-hepáticas e uma colangiopatia intra-hepática progressiva, cirrogênica. A natureza da colangiopatia destes processos permanece obscura. Uma arteriopatia levando a colangiopatia isquêmica explicaria a natureza progressiva da lesão biliar. A imunolocalização do fator de crescimento endotelial vascular A (VEGFA) em ramos arteriais e ductos biliares intra-hepáticos e do porta hepatis dos pacientes com AB sugere isquemia nestas estruturas. A ocorrência de hipóxia hepatobiliar na AB necessita ser esclarecida. Objetivo: Determinar a presença de hipóxia nos fígados de pacientes com AB, analisando a expressão gênica dos fatores induzidos por hipóxia (HIF) -1α e -2α. Métodos: Estudo de amostras de biópsias em cunha coletadas na laparotomia exploradora de pacientes com AB isolada sem IgM+ para citomegalovírus (n= 32) comparando com lactentes com colestase intra-hepática (CIH, n= 09), pareados por idade. Uma amostra foi ultracongelada (análise molecular) e outra, parafinizada (análises histológica e imunoistoquímica). Por PCRq, usando sondas TaqMan®, avaliaram-se as expressões gênicas de: HIF1-α, HIF2-α, proteína quimiotática de monócitos 1 (MCP1) (marcador de fibrose biliar), citoqueratina 19 (CK19) (marcador de colangiócitos). O gene normalizador foi 18S ribossômico. Por morfometria, foram quantificadas as extensões de fibrose e reação ductular. Dados clínico-laboratoriais foram prospectivamente coletados. Resultados: O grupo AB, comparado à CIH, apresentou maior expressão de HIF1-α e HIF2-α. No grupo AB, a expressão do HIF1-α correlacionou-se positivamente com a bilirrubina total (BT) sérica. Dois subgrupos de AB foram detectados quanto à expressão dos HIFs: alta (hiHIF, expressão 3x maior que a mediana da CIH) e baixa (loHIF). Pacientes hiHIF-1α eram mais velhos e com maiores níveis de BT e bilirrubina direta (BD) que loHIF-1α. O subgrupo hiHIF-2α apresentou expressão de CK19 inferior a do loHIF-2α. As demais variáveis foram semelhantes nos subgrupos HIFs. Conclusão: Na AB ocorre hipóxia tecidual hepática. Os dados sugerem a existência de hipóxia tecidual progressiva nos fígados afetados pela AB, associada ao desaparecimento de ductos biliares e à piora do quadro obstrutivo biliar. / Background: Biliary atresia (BA) includes a complete obstruction of the extrahepatic biliary tract and progressive intrahepatic cholangiopathy, and the nature of these processes remains unclear. An arteriopthy, leading to an ischemic cholangiopathy, can be involved. The immunolocalization of vascular endothelial growth factor A (VEGFA) in arterial branches and bile ducts both within the liver and at porta hepatis from patients with BA suggests ischemia in these structures. The occurrence of hypoxia in the hepatobiliary system in BA needs to be elucidated. Aim: To determinate the presence of hypoxia in the livers from patients with BA, by analyzing the gene expression of hypoxia-inducible factor (HIF) -1α and -2α. Methods: Liver biopsy specimens collected at exploratory laparotomy of age-matched patients with isolated, cytomegalovirus IgM-negative BA (n=32) and intrahepatic cholestasis (IHC, n=9) were evaluated. A sample was ultrafrozen (molecular analysis) and the other was paraffin-embedded (for histological and morphometric analyzes). Gene expression of: HIF-1α, HIF-2α, monocyte chemoattractant protein 1 (MCP1) (biliary fibrosis marker) and cytokeratin 19 (CK19) (cholangiocyte marker) were evaluated by PCRq using TaqMan® probes. The normalizing gene was 18S ribosomal. The extents of fibrosis and ductular reaction were assessed by morphometry. Clinical and laboratory data were prospectively collected. Results: There was higher HIF-1α and HIF-2α expression in BA in comparison with IHC. In BA, the HIF-1α expression was positively correlated with total serum bilirubin (TB). Two groups were observable in BA regarding HIFs: higher (hiHIF, considering as cutoff point a value higher than 3x the median of expression in IHC) and lower (loHIF). Patients with hiHIF-1α were older and presented increased levels of TB and direct-reacting serum bilirubin (DB) than loHIF-1α. Patients with hiHIF-2α presented CK19 expression lower than in loHIF-2α. The other variables were similar in subgroups HIFs. Conclusion: In BA there is hypoxia in the liver tissue, which seems to be progressive and associated with the disappearance of bile ducts and worsening biliary obstruction.