Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-01-31Bitstream added on 2014-11-10T11:57:41Z : No. of bitstreams: 1 000792136_20141231.pdf: 436044 bytes, checksum: df19c9ddacbd0b80cd1d62771aece5e9 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-01-05T11:00:56Z: 000792136_20141231.pdf,Bitstream added on 2015-01-05T11:01:51Z : No. of bitstreams: 1 000792136.pdf: 1761626 bytes, checksum: 714d3718119b395634a93761902c8401 (MD5) / O vírus da doença de Newcastle (VDN) é o agente causador de uma das mais importantes enfermidades em aves e representa uma ameaça para a indústria avícola. O VDN é membro da família Paramyxoviridae, subfamília Paramyxovirinae, gênero Avulavirus. São vírus envelopados, não-segmentados dotados de genoma RNA de fita simples sentido negativo, associado à doença do trato respiratório, digestivo e nervoso das aves. O controle da DN se baseia em biossegurança, uso de vacinas e detecção precoce de lotes infectados. No presente estudo foi feito o sequenciamento do genoma completo da estirpe vacinal lentogênica (LaSota) e de um isolado de campo brasileiro patogênico (APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75) do VDN, seguido de análise filogenética. Os resultados revelaram que o genoma das estirpes LaSota e APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75 estão constituídos respectivamente por um total de 15.186 e 15.192 nucleotídeos, seis genes na ordem 3'-NP-P-M-F-HN-L-5'. Para a estirpe LaSota o local de clivagem da proteína de fusão (F) apresenta a sequência de aminoácidos correspondentes às encontradas em estirpes não virulentas do VDN, oposto ao que acontece com a estirpe APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75, no qual o sítio de clivagem da proteína F apresenta a sequência de aminoácidos correspondente às encontradas nas estirpes virulentas do VDN. O genoma completo da estirpe LaSota não apresentou grandes diferenças genômicas, de forma que na análise filogenética ficou evidenciado que esta estirpe está classificada no genótipo II, já a estirpe APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75 apresentou grandes diferenças genômicas nas sequências deduzidas de aminoácidos de suas principais proteínas estruturais, de forma que na análise filogenética do genoma completo foi demonstrado que esse vírus está classificado no genótipo V. Os dados obtidos a partir do presente estudo podem contribuir consideravelmente para ... / Newcastle disease virus (NDV) is the agent that causes one of the most important diseases in birds and represents a threat to industrial aviculture. NDV is a member of the Paramyxoviridae family, Paramyxovirinae subfamily, Avulavirus genus. Viruses consist of single-stranded, non-segmented, negative-sense, RNA, associated with diseases in respiratory tract, digestive and nervous in birds. The ND control is based on biosafety, use of vaccines and early detection of infected batches. Here we present the complete genome sequence and phylogenetic analysis of a lentogenic strain (LaSota) and a velogenic strain (APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75) of NDV. The results revealed that the genome of LaSota and APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75 are constituted respectively by a total of 15,186 and 15,192 nucleotides and six genes in the order 3'-NP-P-M-F-HN-L-5’. The cleavage site of fusion protein (F) in LaSota strain shows the amino acid sequence found in non-virulent NDV strains, as opposed to happen with APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75 strain, the cleavage site of the F protein has the amino acid sequence corresponding to that found in virulent strains of NDV. The complete genome of LaSota strain showed no genomic differences and the phylogenetic analysis evidenced that this strain is classified in genotype II. The APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75 strain there are large differences in the genomic sequences and in the deduced amino acid sequences of its major structural proteins, so the phylogenetic analysis of the complete genome was demonstrated that this virus is classified in genotype V. This study can contribute significantly to understand better the genomic evolution of NDV in Brazil and in Americas, such as these strains with genotypic and phenotypic characteristics were no longer isolated in Brazil after 1975, while continued to be isolated in North America

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-30Bitstream added on 2014-06-13T18:56:52Z : No. of bitstreams: 1 martins_grv_me_jabo.pdf: 434340 bytes, checksum: 1f4cb80c686c33def0fc530fbe6542ad (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As avaliações dos parâmetros clínicos, imunitários e epidemiológicos da vacinação contra a doença de Newcastle (DN) em agapornis (Agapornis roseicollis) foram investigadas em dois experimentos. Amostras vacinais Ulster 2C, B1 e LaSota do vírus da doença de Newcastle (VDN) foram utilizadas para imunização das aves. No experimento 1, utilizaram-se 48 agapornis, distribuídos em quatro tratamentos de 12 animais cada, num total de três repetições, submetidos a diferentes esquemas imunoprofiláticos. A resposta imune foi avaliada pelo teste de HI. Não foram observados sinais clínicos de reação pós-vacinal em qualquer grupo experimental. Os resultados dos títulos de anticorpos (HI) mostraram que a estirpe vacinal LaSota conferiu maior grau de imunidade aos agapornis, quando comparada às estirpes Ulster 2C e B1. Estas aves foram posteriormente desafiadas frente a uma estirpe patogênica do VDN (EID50=108,15/0,1mL), aos 12 meses de idade. Em todos os grupos, procedeu-se a pesquisa do RNA viral a partir de suabes cloacais, através da técnica de RT-PCR. Os agapornis de todos os grupos não demonstraram qualquer sinal clínico sugestivo da DN, mostrando-se refratários à doença clínica frente a este vírus. Entretanto, ficou caracterizado o estado de portador de VDN nesta espécie decorridos até 21 dias da infecção experimental com este patógeno. No experimento 2, foram utilizadas aves SPF (“Specific-Pathogen-Free”) conviventes com agapornis inoculados com uma estirpe patogênica do VDN. Observou-se a transmissão do VDN dos agapornis para as aves SPF conviventes decorridos até 21 da infecção experimental com este patógeno, o que realça a importância do agapornis como fonte potencial de infecção do VDN para aves domésticas / The evaluations of clinical, immunological and epidemiological parameters of vaccination against Newcastle disease (ND) in lovebirds (Agapornis roseicollis) were investigated in 2 experiments. Ulster 2C, B1 and LaSota vaccines strains of the Newcastle disease virus (NDV) were used to immunization of birds. In experiment 1, 48 lovebirds were distributed into 4 different treatments, with 12 birds in each, with a total of 3 repetitions, submitted to different vaccination programs. The immunological responses were measured by HI test. Lovebirds from all groups did not show any clinical signs of post vaccinal reaction. The antibody titers (HI) results showed that the immune vaccine programs adopted were different in stimulating protective levels of humoral immune response. These birds were also challenge with a pathogenic NDV strain (EID50=108.15/0.1mL) at 12 months of age. After the challenge in all groups, cloacal swabs were collected for RT-PCT to find the pathogenic viruses. Lovebirds from all groups did not demonstrate clinical signs of ND, being refractory to the clinical disease with the NDV. However, a NDV carrier state was demonstrated in this specie until 21 days after experimental infection. In experiment 2, SPF chicks were housed with lovebirds previously inoculated with a pathogenic NDV strain. The pathogenic virus (NDV) was transmitted from lovebirds to SPF chicks until 21 days after challenge, showing the importance of the lovebirds as source of dissemination of NDV to domestic birds

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-06-28Bitstream added on 2014-06-13T19:57:09Z : No. of bitstreams: 1 fernando_fs_me_jabo.pdf: 950487 bytes, checksum: d2d43750639241a82b3ddb07a03ff528 (MD5) / Nesse estudo, um isolado de campo do vírus da bronquite infecciosa (VBI) no Brasil (IBVPR-12), previamente classificado como um genótipo variante, foi caracterizado de forma comparativa com a estirpe M41 do VBI, sendo levantadas as características de patogenicidade em diferentes órgãos como a traqueia, o pulmão, os rins, as gônadas e as tonsilas cecais (patotipo) e a imunidade cruzada com relação à estirpe vacinal H120 do VBI (protectotipo), incluindo as respostas imunes humorais sistêmicas e locais induzidas. Para tanto, foram utilizados grupos experimentais de galinhas “specific pathogen free” (SPF) previamente vacinadas ou não com a estirpe H120 do VBI e depois desafiados com essa variante viral, ou com a estirpe M41. Para essas duas estirpes virais foram avaliadas a capacidade de replicação e as lesões produzidas em diferentes órgãos, a atividade inibidora do movimento ciliar no epitélio traqueal e as respostas imunes humorais desenvolvidas no soro sanguíneo e na secreção lacrimal dessas aves. Foram observadas diferenças marcantes na patogenicidade e no tropismo tecidual desses vírus, sendo que a estirpe M41 apresentou replicação mais intensa e lesões mais pronunciadas no trato respiratório, especialmente na traqueia, enquanto que a estirpe variante foi encontrada de forma mais distribuída em vários dos órgãos analisados, tendo-se replicado e provocado menos lesões na traqueia, mas alcançando maior replicação e tendo causado lesões mais severas nos rins e nos testículos. Nas regiões teciduais mais afetadas por lesões, a presença do VBI foi detectada por marcação específica com anticorpos policlonais contra a nucleoproteína do VBI pela técnica de imuno-histoquímica. As aves vacinadas com a estirpe H120 do VBI, revelaram proteção parcial contra a estirpe variante em órgãos como traqueia e... / In this study a Brazilian field isolate of infectious bronchitis virus (IBV), previously classified as variant genotype, was characterized comparatively with the M41 strain of IBV, by evaluating the pathogenicity in different organs (trachea, lung, kidney, gonads and caecal tonsil) and the cross-immunity with H120 vaccine strain, including the systemic and local humoral immune responses. Experimental groups of specific pathogen free (SPF) chickens were vaccinated or not with H120 strain of IBV and challenged with this variant isolate. The viral replication and histopathology in different tissues and organs, the ability to inhibit ciliar movement of tracheal epithelial cells, and local and systemic humoral immune responses were evaluated in these chickens. The pathogenicity and tissue tropism of these IBV strains showed marked differences, and while the M41 strain damaged more the respiratory tract, specially the trachea, the variant isolated has a wide tissue distribution, showing less replication and lesions in the trachea, but affecting more severely the kidney and the testicles. In the most affected tissue regions, the presence of IBV was detected by immunohistochemistry technique, using an anti-nucleoprotein polyclonal antibodies. The H120 vaccine induced against this variant isolate a partial protection with regard to the infection of trachea and kidney and no cross-protection to the infection of testicles. In conclusion, a new pathotype and a new protectotype of a variant genotype of a Brazilian IBV isolate were characterized in this study with regard to Massachusetts genotype and serotype strains of IBV, indicating the importance for... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Oliveiro Caetano Freitas Neto / Coorientador: Angelo Berchieri Junior / Banca: Nilce Maria Soares / Banca: Rafael Antonio Casarin Penha Filho / Resumo: Salmonella Gallinarum (SG) é o agente etiológico do tifo aviário (TA), uma doença sistêmica grave responsável por perdas econômicas para a indústria avícola em todo o mundo. TA foi considerado sob controle no Brasil e em países desenvolvidos. No entanto, nos últimos anos, inúmeros surtos dessa enfermidade têm sido identificados em lotes de aves de vários estados do Brasil. Com intuito de investigar fatores que pudessem ajudar a compreender a epidemiologia destes surtos, o presente estudo foi realizado. Foram avaliadas: (i) as possíveis alterações na patogenicidade de uma estirpe de SG isolada de um dos surtos recentes de TA, para as aves de linhagens comerciais utilizadas atualmente no Brasil; (ii) as possibilidades de transmissão de SG por via vertical e durante a incubação de ovos; (iii) a influência do uso antimicrobianos na persistência de SG na ave e consequente transmissão vertical; (iv) os perfis genéticos das estirpes isoladas anteriormente e, recentemente, por PFGE. No presente estudo, aves de linhagens mais suscetíveis infectadas por SG apresentaram alterações patológicas de maior intensidade e altas taxas de mortalidade, enquanto que as aves de linhagens mais resistentes apresentaram a mortalidade e sinais clínicos de forma mais branda. No entanto, foram capazes de manter SG por períodos mais longos que as aves de linhagens susceptíveis. SG não foi recuperada dos ovos produzidos por aves suscetíveis ou resistentes. A transmissão vertical não foi observada, embora a... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Salmonella Gallinarum (SG) causes fowl typhoid (FT) a severe systemic disease responsible for economic losses to the poultry industry worldwide. FT was considered under control in Brazil and in developed countries. Nonetheless, in recent years has been identified on farms in several states of Brazil. In order to investigate the epidemiological reasons behind this large FT outbreak, the present study was carried out to assess: (i) possible changes in the patogenicity of a strain of SG isolated from a recent outbreak to chickens of white and brown lines of layers; (ii) transmission through eggs and hatching; (iii) the interference of antibiotic to the persistence of SG in the bird and to vertical transmission; (iv) the genetic profiles of strains isolated previously and recently by PFGE. Susceptible lines showed extensive pathological changes and high mortality rates, whereas in resistant lines mortality and clinical signs were almost absent. Although, they could maintain SG for longer periods than the susceptible lines did. SG was not recovered from any egg laid by birds from susceptible or resistant either. Vertical transmission was not observed although newborn chicks were infected due the contact during incubation. Antibiotic therapy was effective at reducing mortality but was not able to clear the infection and neither to favour vertical transmission. Strains did exhibit very similar genetic profiles, suggesting they have been circulating in Brazilian flocks for more than 20 years. Failures in components of biosecurity programs, probably, would be the responsible for the FT spread in Brazil / Mestre

Orientador: Helio José Montassier / Banca: Samir Issa Samara / Banca: Alessandro de Mello Varani / Banca: João Pessoa de Araujo Junior / Banca: Ricardo Luiz Moro de Sousa / Resumo: O vírus da doença de Newcastle (VDN) é o agente causador de uma das mais importantes enfermidades em aves e representa uma ameaça para a indústria avícola. O VDN é membro da família Paramyxoviridae, subfamília Paramyxovirinae, gênero Avulavirus. São vírus envelopados, não-segmentados dotados de genoma RNA de fita simples sentido negativo, associado à doença do trato respiratório, digestivo e nervoso das aves. O controle da DN se baseia em biossegurança, uso de vacinas e detecção precoce de lotes infectados. No presente estudo foi feito o sequenciamento do genoma completo da estirpe vacinal lentogênica (LaSota) e de um isolado de campo brasileiro patogênico (APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75) do VDN, seguido de análise filogenética. Os resultados revelaram que o genoma das estirpes LaSota e APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75 estão constituídos respectivamente por um total de 15.186 e 15.192 nucleotídeos, seis genes na ordem 3'-NP-P-M-F-HN-L-5'. Para a estirpe LaSota o local de clivagem da proteína de fusão (F) apresenta a sequência de aminoácidos correspondentes às encontradas em estirpes não virulentas do VDN, oposto ao que acontece com a estirpe APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75, no qual o sítio de clivagem da proteína F apresenta a sequência de aminoácidos correspondente às encontradas nas estirpes virulentas do VDN. O genoma completo da estirpe LaSota não apresentou grandes diferenças genômicas, de forma que na análise filogenética ficou evidenciado que esta estirpe está classificada no genótipo II, já a estirpe APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75 apresentou grandes diferenças genômicas nas sequências deduzidas de aminoácidos de suas principais proteínas estruturais, de forma que na análise filogenética do genoma completo foi demonstrado que esse vírus está classificado no genótipo V. Os dados obtidos a partir do presente estudo podem contribuir consideravelmente para ... / Abstract: Newcastle disease virus (NDV) is the agent that causes one of the most important diseases in birds and represents a threat to industrial aviculture. NDV is a member of the Paramyxoviridae family, Paramyxovirinae subfamily, Avulavirus genus. Viruses consist of single-stranded, non-segmented, negative-sense, RNA, associated with diseases in respiratory tract, digestive and nervous in birds. The ND control is based on biosafety, use of vaccines and early detection of infected batches. Here we present the complete genome sequence and phylogenetic analysis of a lentogenic strain (LaSota) and a velogenic strain (APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75) of NDV. The results revealed that the genome of LaSota and APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75 are constituted respectively by a total of 15,186 and 15,192 nucleotides and six genes in the order 3'-NP-P-M-F-HN-L-5'. The cleavage site of fusion protein (F) in LaSota strain shows the amino acid sequence found in non-virulent NDV strains, as opposed to happen with APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75 strain, the cleavage site of the F protein has the amino acid sequence corresponding to that found in virulent strains of NDV. The complete genome of LaSota strain showed no genomic differences and the phylogenetic analysis evidenced that this strain is classified in genotype II. The APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75 strain there are large differences in the genomic sequences and in the deduced amino acid sequences of its major structural proteins, so the phylogenetic analysis of the complete genome was demonstrated that this virus is classified in genotype V. This study can contribute significantly to understand better the genomic evolution of NDV in Brazil and in Americas, such as these strains with genotypic and phenotypic characteristics were no longer isolated in Brazil after 1975, while continued to be isolated in North America / Mestre

Orientador: Antonio Carlos Paulillo / Banca: Elizabeth Moreira dos Santos Schmidt / Banca: Antonio Carlos Alessi / Resumo: As avaliações dos parâmetros clínicos, imunitários e epidemiológicos da vacinação contra a doença de Newcastle (DN) em agapornis (Agapornis roseicollis) foram investigadas em dois experimentos. Amostras vacinais Ulster 2C, B1 e LaSota do vírus da doença de Newcastle (VDN) foram utilizadas para imunização das aves. No experimento 1, utilizaram-se 48 agapornis, distribuídos em quatro tratamentos de 12 animais cada, num total de três repetições, submetidos a diferentes esquemas imunoprofiláticos. A resposta imune foi avaliada pelo teste de HI. Não foram observados sinais clínicos de reação pós-vacinal em qualquer grupo experimental. Os resultados dos títulos de anticorpos (HI) mostraram que a estirpe vacinal LaSota conferiu maior grau de imunidade aos agapornis, quando comparada às estirpes Ulster 2C e B1. Estas aves foram posteriormente desafiadas frente a uma estirpe patogênica do VDN (EID50=108,15/0,1mL), aos 12 meses de idade. Em todos os grupos, procedeu-se a pesquisa do RNA viral a partir de suabes cloacais, através da técnica de RT-PCR. Os agapornis de todos os grupos não demonstraram qualquer sinal clínico sugestivo da DN, mostrando-se refratários à doença clínica frente a este vírus. Entretanto, ficou caracterizado o estado de portador de VDN nesta espécie decorridos até 21 dias da infecção experimental com este patógeno. No experimento 2, foram utilizadas aves SPF ("Specific-Pathogen-Free") conviventes com agapornis inoculados com uma estirpe patogênica do VDN. Observou-se a transmissão do VDN dos agapornis para as aves SPF conviventes decorridos até 21 da infecção experimental com este patógeno, o que realça a importância do agapornis como fonte potencial de infecção do VDN para aves domésticas / Abstract: The evaluations of clinical, immunological and epidemiological parameters of vaccination against Newcastle disease (ND) in lovebirds (Agapornis roseicollis) were investigated in 2 experiments. Ulster 2C, B1 and LaSota vaccines strains of the Newcastle disease virus (NDV) were used to immunization of birds. In experiment 1, 48 lovebirds were distributed into 4 different treatments, with 12 birds in each, with a total of 3 repetitions, submitted to different vaccination programs. The immunological responses were measured by HI test. Lovebirds from all groups did not show any clinical signs of post vaccinal reaction. The antibody titers (HI) results showed that the immune vaccine programs adopted were different in stimulating protective levels of humoral immune response. These birds were also challenge with a pathogenic NDV strain (EID50=108.15/0.1mL) at 12 months of age. After the challenge in all groups, cloacal swabs were collected for RT-PCT to find the pathogenic viruses. Lovebirds from all groups did not demonstrate clinical signs of ND, being refractory to the clinical disease with the NDV. However, a NDV carrier state was demonstrated in this specie until 21 days after experimental infection. In experiment 2, SPF chicks were housed with lovebirds previously inoculated with a pathogenic NDV strain. The pathogenic virus (NDV) was transmitted from lovebirds to SPF chicks until 21 days after challenge, showing the importance of the lovebirds as source of dissemination of NDV to domestic birds / Mestre

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / This study described the first outbreak of avian fowlpox in Brazil in previously vaccinated turkeys and also established, in an attempt to help the Federal Inspection Service, a standard of condemnation for carcasses with lesions characteristic of fowlpox. The turkeys had crusted macroscopic lesions on their skin, suggestive of avian fowlpox in the head and neck and no additional clinical signs were observed. The mortality rates in the flock did not change. In the slaughterhouse, 30 carcasses were removed from the slaughter line to collect damaged skin fragments for its characterization and research of the virus. The samples were fixed in formalin, embedded in paraffin, cut into sections of 6 microns and stained with hematoxylin-eosin for viewing in microscope. The agent identification was performed by conventional PCR with subsequent sequencing of the gene fpv167. On histopathology were observed: hyperkeratosis, acanthosis and hydropic degeneration; the presence of eosinophilic intracytoplasmic inclusion corpuscles (Bollinger) was observed in keratinocytes in 46.6% of samples. The PCR reaction was positive in 83.3% of samples. Using both diagnostic techniques was determined that 93.3% of the samples were positive for fowlpox. In the phylogenetic study, the samples show 100% of identity to each other suggesting that the outbreak occurred by a single virus strain. The sequenced gene fragment did not allow differentiation between strains of virus that infect turkeys, chickens or vaccinal strain. The fowlpox virus is avian species specific, and there are no reports of its occurrence in mammals. According to the macroscopic and microscopic characteristics of the skin lesions is not justified total condemnation of turkey\'s carcasses affected by avian fowlpox, except in cases of cachexia, disgusting aspect and other specifications at Federal Inspection Service regulations. Studies including the sequencing of other genes are needed to better viral characterization and can assist in identifying origin of the etiologic agent responsible for the outbreak and its possible sources. / Esse estudo descreveu o primeiro surto de bouba aviária no Brasil em perus de corte previamente vacinados e também estabeleceu, na tentativa de auxiliar o Serviço de Inspeção Federal, um padrão de condenação para carcaças apresentando lesões características de bouba aviária. As aves apresentaram lesões cutâneas crostosas macroscópicas sugestivas de bouba aviária na região da cabeça e do pescoço e nenhum sinal clínico adicional foram observados. Os índices de mortalidade no lote não foram alterados. No frigorífico, 30 carcaças foram retiradas da linha de abate para coleta de fragmentos de pele lesionada para sua caracterização e pesquisa do vírus. As amostras foram fixadas em formol, embebidas em parafina, cortadas em secções de 6 μm e coradas pela técnica de hematoxilina-eosina para visualização em microscópio de luz clara. A identificação do agente foi realizada por meio da técnica de PCR convencional com posterior sequenciamento do gene fpv167. No exame histopatológico foram observados: hiperqueratose, acantose e degeneração hidrópica; a presença de corpúsculos de inclusão intracitoplasmáticos eosinofílicos (Bollinger) nos queratinócitos foi observada em 46,6% das amostras. A reação de PCR foi positiva para 83,3% das amostras. Com o uso das duas técnicas de diagnóstico foi possível determinar que 93,3% das amostras foram positivas para bouba aviária. No estudo filogenético realizado, as amostras apresentam 100% de identidade entre si sugerindo que o surto ocorreu por uma única estirpe de vírus. O fragmento do gene sequenciado não permitiu a diferenciação entre estirpes de vírus que infectam perus, vacinal ou de galinhas. O vírus da bouba aviária é espécie específica, e não existem relatos sobre sua ocorrência em mamíferos. De acordo com as características macroscópicas e microscópicas das lesões cutâneas, não se justifica a condenação total das carcaças das aves acometidas pelo vírus da bouba aviária, exceto nos casos de caquexia, aspecto repugnante e outros especificados nos regulamentos do SIF. Estudos incluindo o sequenciamento de outros genes são necessários para melhor caracterização viral e podem auxiliar na identificação da origem do agente etiológico responsável pelo surto e suas possíveis fontes. / Mestre em Ciências Veterinárias

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Parasitic infections are among the commonest health problems that affect birds. The identification of Cryptosporidium spp. and Giardia spp. in wild birds is relevant, since these animals can act as disseminators of these parasites to humans through environmental contamination. The aim of this research was to determine the occurrence and to perform the molecular characterization of Cryptosporidium and Giardia species/genotypes in feces from free-living and captive wild birds treated in the Laboratory of Wild Animals Research from the Federal University of Uberlândia (LAPAS) and kept in the Zoo of the Municipal Park of Sabiá, in Uberlândia, Minas Gerais, Brazil. The DNA extracted directly from feces was submitted to nested-PCR and semi-nested PCR analysis for amplification of fragments of the SSU rRNA and gdh genes of Cryptosporidium spp. and Giardia spp., respectively. Results showed that out of 256 samples collected, 10 (3.9%) were positive for Cryptosporidium spp., and 8 (3.1%) for Giardia spp.. Out of 172 samples of captive birds, six (3.49%) were positive for Cryptosporidium spp., and four (2.32%) for Giardia spp.. Out of 84 samples of free-living birds, four (4.76%) for Cryptosporidium spp. and four (4.76%) for Giardia spp. were positive. The occurrence of parasites in waterfowl (n=39) was two (5.13%) for Cryptosporidium spp., and four (10.26%) for Giardia spp.; in non-aquatic birds (n=217), it was eight (3.7%) and four (1.84%), respectively. There was no significant difference in the occurrence of Cryptosporidium spp. and Giardia spp. among captive and free-living birds (p = 0.62 and 0.29, respectively). Although no statistical analysis was performed for the positivity of Cryptosporidium spp. and Giardia spp. between waterfowl and non aquatic birds, the meeting of these parasites in waterfowl may have implications for the transmission of these protozoa to humans and other animals. RFLP and sequencing analysis have identified C. meleagridis in two birds of the Anatidae family, in two Aratinga leucophthalma (White-eyed parakeet), and in two Athene cunicularia (Burrowing Owl). They have also found C. baileyi in three Amazona aestiva (Blue-fronted Parrot) and in one Amazona amazonica (Orange-winged Parrot). Only three positive samples for Giardia spp. - classified as Giardia duodenalis assemblage B - were sequenced, two of them found in Rupornis magnirostris (Roadside Hawk), and one in Theristicus caudatus (Buff-necked Ibis). The essay concluded that Cryptosporidium spp. and Giardia spp. are present in wild birds in the microregion of Uberlândia, MG. The existence of zoonotic C. meleagridis and G. duodenalis assemblage B in the animals of this study may have a negative impact on public health. / Infecções parasitárias estão entre os problemas sanitários comuns que acometem aves em todo mundo. A identificação de Cryptosporidium spp. e Giardia spp. em aves silvestres é relevante, visto que esses animais podem agir como veiculadoras dos parasitos para o ser humano, por meio da contaminação ambiental. O objetivo deste estudo foi determinar a ocorrência e caracterizar geneticamente as espécies/genótipos de Cryptosporidium e Giardia em aves silvestres de cativeiro e vida livre atendidas no Laboratório de Pesquisa em Animais Silvestres da Universidade Federal de Uberlândia (LAPAS-UFU) e procedentes do zoológico do Parque Municipal do Sabiá, Uberlândia, Minas Gerais, Brasil. O DNA, extraído diretamente das fezes coletadas, foi submetido a reações de nested-PCR e semi-nested PCR para amplificação de fragmentos dos genes SSU rRNA e gdh de Cryptosporidium spp. e Giardia spp., respectivamente.Das 256 amostras coletadas, 10 (3,9%) foram positivas para Cryptosporidium spp. e 8 (3,1%) para Giardia spp. Das 172 amostras de aves de cativeiro, seis (3,49%) foram positivas para Cryptosporidium spp.. e quatro (2,32%) para Giardia spp.; das 84 amostras de aves de vida livre, quatro (4,76%) para Cryptosporidium spp. e quatro (4,76%) para Giardia spp. foram positivas. A ocorrência dos parasitos em aves aquáticas (n=39) foi dois (5,13%) para Cryptosporidium spp. e quatro (10,26%) para Giardia spp.; em aves não aquáticas (n=217), oito (3,7%) e quatro (1,84%), respectivamente. Não foi encontrada diferença significante na ocorrência de Cryptosporidium spp. e Giardia spp. entre os grupos de aves de cativeiro e vida livre (p=0,62 e 0,29, respectivamente). Apesar de não ter sido realizada análise estatística para a positividade de Cryptosporidium spp. e Giardia spp. entre aves aquáticas e não aquáticas, ressalta-se que o encontro desses parasitos nas aves aquáticas pode ter implicações na transmissão desses protozoários para o homem e outros animais. Análises de RFLP e sequenciamento identificaram C. meleagridis em duas aves da família Anatidae, duas Aratinga leucophthalma (Maritaca) e duas Athene cunicularia (Corujas-buraqueira) e C. baileyi em três Amazona aestiva (papagaio-verdadeiro) e uma Amazona amazonica (papagaio-do-mangue). As amostras sequenciadas para Giardia spp., provenientes de dois Rupornis magnirostris (Gavião-carijó) e uma Theristicus caudatus (Curicaca), foram classificadas como Giardia duodenalis assemblage B. Cryptosporidium spp. e Giardia spp. estão presentes em aves silvestres de cativeiro e vida livre na microrregião de Uberlândia, MG. A presença de C. meleagridis e G. duodenalis assemblage B, considerados zoonóticos, em animais desse estudo, pode gerar impacto negativo na saúde pública. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de São Paulo / The reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) of turkey astrovirus (TAstV) capsid and polymerase gene was applied in the bursa of Fabricius (BF), thymus (TH), spleen (SP) and cloacal swabs (CS) from young poults with PEMS (Poult Enteritis Mortality Syndrome). The histological lesions were atrophy, lymphoid depletion, cellular infiltration and necrosis of BF, TH and SP, respectively. The RT-PCR reactions were positive in all of 100 CS, 7 out of 10 of BF, 10 out of 20 TH and SP, respectively, for the polymerase gene of TAstV-2. Five out of 10 TH and SP samples, considered as negative by RT-PCR, were positive when specific primers designed to the TAstV-2 capsid gene were applied. Finally, this is the first description of turkey astrovirus infection presenting PEMS in Latin America. / O Astrovírus dos Perus Tipo 2 (TAstV-2) é agente etiológico de uma doença emergente em perus, a Poult Enteritis Mortality Syndrome (PEMS), caracterizada por enterite severa, elevados índices de mortalidade, atrofia linfóide e imunossupressão em aves jovens, sendo responsável por sérios prejuízos financeiros à indústria avícola dos Estados Unidos. No Brasil, há necessidade de conhecimento sobre a ocorrência desses vírus nas diarréias das aves, sendo esse, um passo fundamental para o estabelecimento de medidas profiláticas específicas e para a exportação de produtos avícolas dentro das condições de sanidade. Este estudo teve por objetivos detectar TAstV, pela técnica de RT-PCR dirigida aos genes codificadores da polimerase e capsídeo viral, em perus jovens de 30 a 45 dias de idade com quadro clínico de diarréia severa, imunossupressão, baixo desempenho zootécnico e mortalidade, caracterizar alterações histopatológicas em bursa de Fabrícius (BF), timo (T) e baço (B) e, por fim, comparar os resultados obtidos com os dados de literatura. O TAstV-2 foi detectado em todas amostras de swabs cloacais (SC, n=100), 7 amostras de bursa de Fabrícius (BF, n=10) e em 10 amostras de timo (T, n=20) e baço (B, n=20). De 10 amostras de timo e baço negativas na primeira análise de RT-PCR, 5 foram positivas com o uso de primers específicos para o gene do capsídeo do TAstV-2. Os exames histológicos revelaram ocorrência de atrofia, depleção linfóide, infiltração celular e necrose da BF, T e B, respectivamente. Esses resultados representam a primeira descrição do TAstV-2 circulante em lotes comerciais de perus na América Latina. / Mestre em Genética e Bioquímica