Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-27Bitstream added on 2014-06-13T21:00:44Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_es_me_jabo.pdf: 649478 bytes, checksum: d2bee0b53ef4e30c3486df035f84bee1 (MD5) / Existem diversos trabalhos publicados sobre métodos de diagnóstico da Doença de Newcastle (DN) em aves comerciais da espécie Gallus gallus. Entretanto, é escassa a literatura sobre o desenvolvimento de técnicas para o diagnóstico laboratorial da infecção pelo vírus da Doença de Newcastle (VDN) em espécies de aves não-galiformes. O presente trabalho foi delineado com o objetivo de desenvolver e aplicar a técnica de bloqueio de fase líquida de ELISA com a concanavalina A (BFL-Con A-ELISA) para a detecção e quantificação de anticorpos contra o VDN em soros de pombos de vida livre e da técnica de Semi-nested-RTPCR para detecção do vírus da DN (VDN) em suabes cloacais das mesmas aves. Na comparação entre o BFL-Con A-ELISA e o HI para a detecção de anticorpos em 107 amostras de soros de pombos, foram obtidos uma correlação significativa com o teste de HI (r = 0,875), bem como valores elevados de sensibilidade (100%), especificidade (95,8%), acurácia (96,3%) e concordância (κ = 0,83). Os resultados obtidos na técnica de semi-nested-RT-PCR mostraram que nove das 101 amostras analisadas foram positivas para o VDN. Na análise comparativa dos resultados da técnica do semi-nested-RT-PCR com os obtidos nas técnicas sorológicas, foram observados índices de especificidade relativa de 93,9% e 96,8% em relação aos métodos de HI e BFL-Con A-ELISA, respectivamente; além de uma máxima sensibilidade relativa (100%), comparativamente a esses testes. Esses dados demonstram que tanto o BFL-Con A-ELISA como o semi-nested-RT-PCR desenvolvidos no presente estudo foram eficientes no diagnóstico da DN, ou detectando anticorpos anti-VDN, ou esse agente viral, respectivamente, e ambas as técnicas apresentaram um grande potencial para serem usadas com vantagens no diagnóstico da infecção pelo VDN em pombos e em outras espécies de aves não-galiformes. / A number of studies were done on diagnostic methods of Newcastle disease in commercial poultry (Gallus gallus, species). However the literature is scarce on the development of techniques for the diagnosis of Newcastle disease (ND) infection in non-galiforme and free-living birds. The present study aims to develop and apply a liquid-phase blocking ELISA with Concanavalin A (BFL-Con AELISA) for the detection and quantification of antibodies against ND virus (NDV) in sera of free-living pigeons and a semi-nested-RT-PCR technique for detection of NDV in cloacal swabs collected from these birds. The results of BFL-Con A-ELISA and HI were compared for the detection of antibodies in serum samples from 107 pigeons, and a significant correlation with the HI test was obtained (r = 0.875) as well as high values of relative sensitivity (100 %), specificity (95.8%), accuracy (96.3%) and agreement (k = 0.83). The results of semi-nested-RT-PCR showed that nine of the 101 samples were positive for the presence of NDV. By comparing the seminested- RT-PCR with serological tests, high relative specificity values of 93.9% and 96.8% were obtained with regard to HI and BLF-Con A-ELISA tests, respectively, as well as a maximum relative sensitivity (100%) was observed regarding these serological tests. These data demonstrate that the BFL-Con A-ELISA and seminested- RT-PCR developed in this study were effective in the diagnosis of NDV infection, detecting either specific antibodies, or this virus, respectively, and have a great potential to be used advantageously in the diagnostic of NDV infection in pigeons and other species of non-galliforme birds.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-19Bitstream added on 2014-06-13T20:04:03Z : No. of bitstreams: 1 goncalves_mcm_dr_jabo.pdf: 761601 bytes, checksum: 6236742e70d7cbec76cc87afe87574a1 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Foi realizada a clonagem e expressão do gene da glicoproteína HN da estirpe La Sota do vírus da doença de Newcastle (VDN), como proteína recombinante de fusão, contendo uma cauda de poli-histidina no sistema hospedeiro constituído por leveduras da espécie Saccharomyces cerevisiae, que apesar de tentativas de otimização, não evidenciou a expressão da proteína recombinante. Após isso, foram produzidas as porções N-terminal e C-terminal da glicoproteína HN como proteínas recombinantes de fusão contendo uma cauda de poli-histidina e o peptídeo SUMO no sistema hospedeiro constituído pela bactéria Escherichia coli. Contatou-se que o sistema procarioto de expressão foi mais eficiente e permitiu a geração de dois peptídeos, que depois de devidamente caracterizados e purificados foram utilizados como antígenos para a realização de testes de imunodiagnóstico em sustituição aos kits comerciais utilizados atualmente. Foram desenvolvidos dois ensaios de ELISA baseados na adsorção de um antígeno formado pela expressão da porção N-terminal da glicoproteína HN (ELISA HN N-terminal) e na porção C-terminal da mesma glicoproteína (ELISA HN C-terminal), recuperados a partir da purificação da fração solúvel de culturas de E. coli. O ELISA C-terminal mostrou os melhores coeficientes de correlação com o teste padrão HI e com o teste S-ELISA-ConA, além de melhores índices de sensibilidade, especificidade e acurácia. Com isso, o ELISA baseado em um antígeno da porção C-terminal da glicoproteína HN e uma única diluição do soro desenvolvido neste estudo pode ser aplicado no diagnóstico e monitoramento pós-vacinal do VDN / Was carried out the cloning and expression of the glycoprotein gene of the strain La Sota HN of the Newcastle disease virus (NDV), as a recombinant fusion protein containing a poly-histidine tail at the host system consisting of the yeast species Saccharomyces cerevisiae, which despite attempts at optimizing, showed no expression of recombinant protein. After that, the portions N-terminal and C-terminal from glycoprotein HN were produced as recombinant proteins containing a fusion tail and the poly-histidine peptide SUMO at the host system consisting of Escherichia coli. It was noted that the prokaryotic expression system was more efficient and allowed the generation of two peptides, which once characterized and purified were used as antigens for immunodiagnostic tests replacement in the commercial kits currently used. Were developed two ELISA assays based on the adsorption of the antigen formed by expression of the N-terminal portion of the HN glycoprotein (HN ELISA N-terminal) and the C-terminal portion of the same glycoprotein (HN ELISA C-terminus), recovered from purification of the soluble fraction of cultures of E. coli. The C-terminal ELISA showed the best correlation coefficients with the standard HI test and ELISA test S-ConA-, and higher sensitivity, specificity and accuracy. Therefore, the ELISA of the antigen based on a C-terminal portion of the glycoprotein HN and a single serum dilution developed in this study can be applied in the diagnosis and monitoring of post-vaccination VDN

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-01-31Bitstream added on 2014-11-10T11:57:41Z : No. of bitstreams: 1 000792136_20141231.pdf: 436044 bytes, checksum: df19c9ddacbd0b80cd1d62771aece5e9 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-01-05T11:00:56Z: 000792136_20141231.pdf,Bitstream added on 2015-01-05T11:01:51Z : No. of bitstreams: 1 000792136.pdf: 1761626 bytes, checksum: 714d3718119b395634a93761902c8401 (MD5) / O vírus da doença de Newcastle (VDN) é o agente causador de uma das mais importantes enfermidades em aves e representa uma ameaça para a indústria avícola. O VDN é membro da família Paramyxoviridae, subfamília Paramyxovirinae, gênero Avulavirus. São vírus envelopados, não-segmentados dotados de genoma RNA de fita simples sentido negativo, associado à doença do trato respiratório, digestivo e nervoso das aves. O controle da DN se baseia em biossegurança, uso de vacinas e detecção precoce de lotes infectados. No presente estudo foi feito o sequenciamento do genoma completo da estirpe vacinal lentogênica (LaSota) e de um isolado de campo brasileiro patogênico (APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75) do VDN, seguido de análise filogenética. Os resultados revelaram que o genoma das estirpes LaSota e APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75 estão constituídos respectivamente por um total de 15.186 e 15.192 nucleotídeos, seis genes na ordem 3'-NP-P-M-F-HN-L-5'. Para a estirpe LaSota o local de clivagem da proteína de fusão (F) apresenta a sequência de aminoácidos correspondentes às encontradas em estirpes não virulentas do VDN, oposto ao que acontece com a estirpe APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75, no qual o sítio de clivagem da proteína F apresenta a sequência de aminoácidos correspondente às encontradas nas estirpes virulentas do VDN. O genoma completo da estirpe LaSota não apresentou grandes diferenças genômicas, de forma que na análise filogenética ficou evidenciado que esta estirpe está classificada no genótipo II, já a estirpe APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75 apresentou grandes diferenças genômicas nas sequências deduzidas de aminoácidos de suas principais proteínas estruturais, de forma que na análise filogenética do genoma completo foi demonstrado que esse vírus está classificado no genótipo V. Os dados obtidos a partir do presente estudo podem contribuir consideravelmente para ... / Newcastle disease virus (NDV) is the agent that causes one of the most important diseases in birds and represents a threat to industrial aviculture. NDV is a member of the Paramyxoviridae family, Paramyxovirinae subfamily, Avulavirus genus. Viruses consist of single-stranded, non-segmented, negative-sense, RNA, associated with diseases in respiratory tract, digestive and nervous in birds. The ND control is based on biosafety, use of vaccines and early detection of infected batches. Here we present the complete genome sequence and phylogenetic analysis of a lentogenic strain (LaSota) and a velogenic strain (APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75) of NDV. The results revealed that the genome of LaSota and APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75 are constituted respectively by a total of 15,186 and 15,192 nucleotides and six genes in the order 3'-NP-P-M-F-HN-L-5’. The cleavage site of fusion protein (F) in LaSota strain shows the amino acid sequence found in non-virulent NDV strains, as opposed to happen with APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75 strain, the cleavage site of the F protein has the amino acid sequence corresponding to that found in virulent strains of NDV. The complete genome of LaSota strain showed no genomic differences and the phylogenetic analysis evidenced that this strain is classified in genotype II. The APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75 strain there are large differences in the genomic sequences and in the deduced amino acid sequences of its major structural proteins, so the phylogenetic analysis of the complete genome was demonstrated that this virus is classified in genotype V. This study can contribute significantly to understand better the genomic evolution of NDV in Brazil and in Americas, such as these strains with genotypic and phenotypic characteristics were no longer isolated in Brazil after 1975, while continued to be isolated in North America

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-22Bitstream added on 2014-06-13T18:07:34Z : No. of bitstreams: 1 nishizawa_m_dr_jabo.pdf: 817217 bytes, checksum: c7d2f29bf8d4ac1ee5c3fbc71c4756c1 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Parâmetros imunológicos, clínicos, epidemiológicos e patológicos da vacinação em marrecos de Pequim foram avaliados por 3 experimentos. Para tanto, foram utilizadas amostras vacinais Ulster 2C, B1 e LaSota do vírus da doença de Newcastle (VDN). No experimento 1, foram utilizados 120 marrecos de Pequim de 1 dia de idade, distribuídos em 4 tratamentos de 30 animais cada, submetidos a diferentes programas imunoprofiláticos. A resposta imune foi avaliada pelo teste de HI, com posterior desafio frente a estirpe patogênica do VDN, aos 60 dias de vida das aves. Após o desafio, em todos os grupos, procedeu-se o reisolamento de vírus patogênico em embriões SPF. Independente do grupo experimental, sinais clínicos da reação vacinal não foram observados. Os resultados dos títulos de anticorpos (HI) mostraram que os programas imunoprofiláticos ensaiados foram igualmente eficientes no estímulo da resposta imune humoral. Os marrecos de Pequim desafiados mostraram-se refratários à enfermidade clínica com o VDN. Entretanto, ficou caracterizado o estado de portador de VDN nesta espécie decorridos até 30 dias da infecção experimental com este patógeno. Nos grupos vacinados, o reisolamento de vírus patogênico foi nulo, evidenciando -se assim a importância da imunoprofilaxia na supressão do estado de portador de VDN dos marrecos de Pequim. No experimento 2, aves SPF foram colocadas em contato íntimo com marrecos de Pequim inoculados com uma estirpe patogênica do VDN, decorridos cinco e 14 dias... / The clinical, epidemiological, immunological and pathological parameters of vaccination in white Pekin ducks were investigated using 3 experiments. Ulster 2C, B1 and LaSota vaccines strains of the Newcastle disease virus (NDV) were used. In experiment 1, 120 one-day-old white Pekin ducks were used, and divided into 4 different groups with 30 birds per group. They were submitted to different vaccination programs. The immunological responses in these birds were measured by HI test. These birds were also challenged with a pathogenic VDN strain at 60 days of age. After challenge, in all the groups, tracheal and cloacal swabs were collected for re-isolation of the virus in SPF embrionated eggs. Independent of the group, clinical signs of reaction to the vaccine were not observed. The antibody titers (HI) results showed that the immune vaccine programs adopted were equally efficient in stimulating protective levels of humoral immune responses. Challenged white Pekin ducks were refractory to the NDV clinical disease. However, a NDV carrier state was shown in this species until 30 days after experimental infection. The vaccinated groups of white Pekin ducks did not present any virus in the re-isolation of the pathogenic virus. Therefore, these results show the relevance of vaccination in suppressing a NDV carrier state in the white Pekin ducks. In experiment 2, SPF chickens housed with white Pekin ducks which were previously inoculated with a pathogenic NDV strain, developed severe and characteristic NDV lesions and died, after five and 14 days...(Complete abstract, acess undermentioned eletronic address)

Orientadores: Clarice Weis Arns, Fernando Rosado Spilki / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-16T11:29:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Orsi_MariaAngela_D.pdf: 5800043 bytes, checksum: 7c499fd86a0e94ef1057fc62e1ba024f (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O vírus da doença de Newcastle (VDN) é o agente causador de uma das mais importantes doenças em aves e representa uma ameaça para a indústria avícola. O VDN é um membro da família Paramyxoviridae, subfamília Paramyxovirinae, gênero Avulavirus. São vírus envelopados, não segmentados dotados de genoma RNA de fita simples sentido negativo, associado à doença do trato respiratório, digestivo e nervoso das aves. O Controle da DN se baseia em biossegurança, uso de vacinas e detecção precoce de lotes infectados. No presente estudo, examinamos dez vacinas vivas comercializadas no Brasil quanto à sua estabilidade térmica (ET), virulência e imunogenicidade. Em outra etapa do trabalho, investigou-se a soroprevalência perante o VDN em regiões de produção avícola voltada à exportação ou não de produtos aviários, seguido da detecção do VDN em aves migratórias. Os estudos são complementados pela análise filogenética de VDN isolado de aves comerciais, dos resultados alcançados, cumpre ressaltar: i) os testes de ET revelam elevada estabilidade para as vacinas utilizadas no país, mesmo após dois anos de sua fabricação; ii) o grau de proteção conferido por vacinas vivas contra a DN não depende da virulência residual conforme testes de inoculação intracerebral; iii) a soroprevalência contra VDN em aves nas regiões produtoras e exportadoras, foi de 39,1% e foram isoladas 77 amostras virais, sempre com perfil não-patogênico; iv) sorologia realizada em uma segunda oportunidade detectou-se uma soroprevalência de 28,8% e isolamento de 15 amostras virais que também foram caracterizadas como não-patogênicas; v) observou-se numa soropositividade de 41,7 a 84,3% dependendo da região e isolamento de 12 VDN na região Nordeste, caracterizados como não-patogênicas, indicando que nas áreas não exportadoras circulam vírus de baixa patogenicidade; vi) o genoma dos vírus isolados e das vacinas vivas, atesta que os vírus circulantes em aves comerciais são de provável origem vacinal e pertencem à classe II sendo 71,8% do genótipo II ou La Sota-like e 28,2% do genótipo I ou Ulster-like; vii) por último, a caracterização biológica dos isolados de aves migratórias mostram que há circulação de vírus de baixa e alta patogenicidade em nosso território. Portanto, este conjunto de trabalhos evidencia o status do Brasil como país livre da Doença de Newcastle em aves comerciais / Abstract: Newcastle disease virus (NDV) is the agent that causes one of the most important diseases in birds and represents a threat to industrial aviculture. NDV is a member of the Paramyxoviridae family, Paramyxovirinae subfamily, Avulavirus genus. In the present study, live vaccines commercialized in Brazil were examined in regard to their thermostability (TS), virulence and immunogenicity. In another stage of this work, soroprevalence was investigated, with viral isolation and characterization carried out in poultry production regions focused on production for exportation or domestic commercialization, followed by the detection of the virus in migratory birds. The studies were complemented by phylogenic analysis carried out on the isolates from the commercial birds. From the results obtained, it is important to underscore that i) the tests of TS revealed a high stability of the vaccines used in Brazil, even two years after their manufacture; ii) the level of protection given by live vaccines against NDV does not depend on residual virulence, as confirmed by tests of intracerebral inoculation iii) soroprevalence against NDV in regions with production for exportation was 39.1% and it was possible to isolate 77 samples, always with a non-pathogenic profile; iv) on a second opportunity, a soroprevalence of 28.8% was detected, with isolation of 15 samples, also classified as non-pathogenic; v) in the Brazilian Northeast, a seropositivity of 41.7 to 84.3% was observed depend of region, with isolation of 12 NDVs, characterized as non-pathogenic, indicating that virus of low pathogenicity circulates in those areas that do not export; vi) the genome of the isolated virus and vaccine implies that the circulating virus in commercial birds probably originates from the vaccine and belongs to class II, being 71.8% from genotype II or La Sota-like and 28.2% from genotype I or Ulster-like; vii) finally, the biological characterization of isolates from migratory birds showed that there is circulation of virus of low and high pathogenicity in Brazil. However, this set of studies agrees with the status of Brazil as being a country free of Newcastle disease in commercial birds / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Orientadores: Clarice Weis Arns, Luciana Konecny Kohn / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-22T17:08:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sakata_SoniaTatsumi_M.pdf: 14113239 bytes, checksum: 26dfdfbc0c87c2a3a37c6143072df6c6 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Produtos naturais isolados a partir de invertebrados e organismos marinhos tem sido objeto de pesquisas contínuas ao longo dos últimos cinquenta anos, principalmente devido à sua complexidade estrutural e potentes atividades biológicas. O presente trabalho teve como proposta ampliar e aprofundar a investigação de substâncias bioativas em extratos de organismos marinhos, junto ao IQSC-USP/Projeto temático, realizando bioensaios de atividade antiviral no laboratório de virologia da Unicamp. Com o objetivo de realizar uma triagem para pesquisar substâncias com ação antiviral, foram eleitas duas espécies de vírus de destaque na avicultura, o Metapneumovirus aviário (aMPV) e o vírus da Doença de Newcastle (NDV), representantes da família Paramyxoviridae. As propriedades em comum dos vírus dentro das respectivas subfamílias, como a organização genômica, sequências das proteínas e suas atividades biológicas, permitem a utilização do aMPV como modelo de estudo para importantes agentes infecciosos da subfamília Pneumovirinae, e o NDV da subfamília Paramyxovirinae. Para a triagem de compostos antivirais foi realizada a avaliação in vitro na linhagem celular Chicken Embryo Related (CER) para a propagação dos vírus e analisar os resultados de inibição viral frente a diferentes extratos e substâncias. Dos cento e vinte e cinco extratos testados frente ao aMPV, sete demonstraram ser ativos, e seis com alto potencial antiviral. Inicialmente, cento e quarenta e sete extratos foram testados frente ao NDV, porém, o resultado foi inconclusivo devido a problema com o título da amostra viral. Assim, os sete extratos ativos e os seis com alto potencial antiviral contra o aMPV foram testados quanto à capacidade de inibição do NDV. Apesar das similaridades dos vírus da família Paramyxoviridae, os extratos não tiveram atividade contra o NDV, como ocorreu frente ao aMPV. As amostras ativas foram estudadas em três tipos de tratamento a fim de determinar os possíveis mecanismos de ação dos extratos: Pré-tratamento, fases de adsorção e/ou penetração do vírus na célula; Pós-tratamento, etapas intracelulares de replicação do vírus; e Inativação Viral. Pela análise visual do efeito citopático, os sete extratos ativos contra aMPV, quatro interrompem as etapas intracelulares de replicação do vírus, dois agem nas fases de adsorção e/ou penetração do vírus à célula, e um não tinha quantidade suficiente para realizar o teste. Com a finalidade de avaliar os possíveis mecanismos de ação com maior objetividade, menor risco de contaminação e alta especificidade, testou-se a metodologia de reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real. Utilizando um composto puro (pirocina A) frente ao aMPV em CER, a metodologia se demonstrou eficiente. Esse dado foi confirmando pela diminuição de RNA viral quando ocorre a atividade antiviral, dando indícios de atuação do composto em etapas intracelulares de replicação do aMPV. A detecção de extratos com atividade antiviral nas situações testadas neste trabalho corrobora o valor da biodiversidade marinha como fonte de produtos promissores na terapêutica de enfermidades virais. Portanto, a necessidade de estudos sobre esses vírus e do desenvolvimento de novos insumos a serem utilizados nos seus controles é de grande importância ponderado a crescente projeção da indústria avícola brasileira no comércio mundial / Abstract: Natural products isolated from invertebrates and marine organisms have been studied over the past fifty years, mainly due to their structural complexity and potent biological activities. This project was proposed to broaden and deepen the research of bioactive substances in extracts of marine organisms, with the IQSC-USP group, performing bioassays antiviral activity in the laboratory of virology at Unicamp. In order to perform a screening to search antiviral substances were elected two species prominent in poultry, the avian Metapneumovirus (aMPV) and Newcastle disease virus (NDV), representatives of the family Paramyxoviridae. The common properties of the virus within their respective subfamilies, such as genomic organization, sequences of proteins and their biological activities, allow the use of aMPV as a study model for important infectious agents of Pneumovirinae subfamily, and NDV Paramyxovirinae subfamily. For antiviral screening, compounds were tested in vitro using Chicken Embryo Related (CER) cell lineage for the propagation of the virus and analyze the results of viral inhibition against various substances. Among one hundred twenty five extracts tested against aMPV, seven were actives and six have been shown high antiviral potential against the virus. Initially, one hundred fourty seven extracts were tested against NDV. However, the result was inconclusive due to problems with the titer of the viral sample. Thus, the seven active extracts and six extracts with high antiviral potential against the aMPV were tested for the ability to inhibit NDV. Despite the similarities of viruses of the family Paramyxoviridae, the extracts had no activity against NDV, as occurred against aMPV. The active samples were studied in three types of treatment in order to determine the possible mechanisms of action of the extracts: Pre-treatment, stages of adsorption and / or penetration of the virus into the cell; Post-treatment, intracellular steps of virus replication; and Viral Inactivation. At visual analysis of cytopathic effect, from all 7 extracts active against aMPV, 4 disrupt intracellular steps of virus replication, 2 acts on adsorption and / or penetration stages of the virus into the cell, and 1 was not enough to perform the test. In order to assess the possible mechanisms of action more objectively, lower contamination risk and high specificity, the polymerase chain reaction (PCR) in real time methodology was tested. Using a pure compound (pirocina A) against aMPV in CER cell lineage, the methodology is demonstrated efficient. This was confirmed by the decrease of viral RNA when occurs antiviral activity, an evidence of compound's action on intracellular steps of aMPV replication. The detection of extracts with antiviral activity in this study confirms the value of marine biodiversity as a source of promising products in the viral diseases therapeutic. Therefore, the primordiality for more studies and the development of new inputs to control these viruses is extremely important to increasing of Brazilian poultry industry in world trade / Mestrado / Microbiologia / Mestra em Genética e Biologia Molecular

Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária - EMBRAPA / Reusing litter is a common practice in broiler farming. However, it requires the adoption of efficient procedures for inactivating and controlling residual microorganisms during downtime between flocks to ensure sanitary control over the next flock and the quality of the broiler meat. The broiler production adopts a series of stringent precautionary measures to avoid sanitary emergencies and should be able to employ appropriate control measures. In addition, international consumer markets require proof of the efficiency of treatment methods for broiler litter reuse. The efficiency of broiler litter treatments on pathogens is variable and multifactorial and can be influenced by the treatment method and/or microorganisms evaluated. This study aimed to evaluate the efficiency of different strategies of treatment of broiler litter on Newcastle disease virus (NDV), Infectious bursal disease virus (IBDV) and Salmonella Heidelberg. Total enterobacteria counts were carried out as an indicator of microbiological quality of litter. First, the experimental contamination of the broiler litter by viruses was standardized, comparing the seeder birds inoculated versus the direct spray of the virus in the broiler litter. To evaluate the treatments, reused broiler litter was contaminated with the three microorganisms and submitted to the treatments (T): T1- shallow fermentation; T2- quicklime; T3- shallow fermentation followed by quicklime; and, T4- untreated. The broiler litter was submitted to bacteriological and physico-chemical analyzes during treatment. Sentinel chicks were housed on the broiler litter treated and further monitored by clinical evaluation, as well as microbiological, serological and molecular tests. The results demonstrated that seeder birds were efficient to stablish viral contamination in broiler litter. T1 was superior in reducing total enterobacteria in the broiler litter. The evaluation of sentinel chicks also indicated that T1 and T3 inactivated IBDV in the broiler litter. T2 was not able to reduce the microorganisms evaluated, and its association with T1 (T3) did not enhance the treatment action. NDV did not survive in broiler litter, regardless of the treatment applied. S. Heidelberg survived in broiler litter after all treatments evaluated and was also detected in the sentinel chicks. The antimicrobial activity of T1 and T3 was associated to ammonia levels present in the broiler litter. The results reveal that shallow fermentation is efficient to control residual IBDV and total enterobacteria in recycled broiler litter. However, other strategies should be considered in the presence of S. Heidelberg. / A reutilização da cama aviária é uma prática comum na avicultura de corte. Porém, o reuso da cama requer a adoção de procedimentos eficientes na inativação e controle de micro-organismos indesejáveis no intervalo entre os lotes, para preservar a saúde avícola e a qualidade do alimento produzido. A preocupação com as questões sanitárias na avicultura engloba a saúde dos frangos e do consumidor. A produção está sujeita às emergências sanitárias e deve estar preparada para empregar medidas adequadas de contenção e controle. Além disso, os mercados consumidores internacionais demandam comprovação da eficiência dos métodos de tratamento para o reuso da cama entre lotes de frangos. A eficiência dos tratamentos de cama sobre os patógenos é variável e multifatorial e pode ser influenciada pelo método de tratamento e/ou pelos micro-organismos avaliados. Deste modo, o objetivo desta pesquisa foi avaliar a eficiência de diferentes estratégias de tratamento da cama aviária sobre vírus da Doença de Newcastle (VDNC), vírus da Doença Infecciosa da Bursa (VDIB) e Salmonella Heidelberg. Enterobactérias totais foram analisadas como indicador da qualidade microbiológica da cama aviária. Inicialmente, a contaminação experimental pelos vírus aviários foi padronizada, comparando-se a excreção por aves inoculadas (seeder birds) versus a aspersão direta dos vírus na cama. Para avaliação dos tratamentos, cama aviária reutilizada foi contaminada com os três micro-organismos e submetida aos tratamentos (T): T1- fermentação plana; T2- cal virgem; T3- fermentação plana seguida de adição de cal virgem; T4- não tratado. A cama aviária foi submetida às análises bacteriológicas e físico-químicas durante o tratamento. Aves sentinelas foram alojadas sobre a cama tratada, sendo monitoradas por meio de avaliação clínica e análises microbiológicas, sorológicas e moleculares. Os resultados demonstraram que as seeder birds foram eficientes em estabelecer a contaminação viral da cama. O T1 foi superior na redução de enterobactérias totais na cama aviária. A avaliação das aves sentinelas indicou que ambos T1 e T3 inativaram VDIB na cama aviária. O T2 não foi eficiente sobre os micro-organismos avaliados e sua associação ao T1 (T3) não potencializou a ação do tratamento. O VDNC não sobreviveu na cama, independente do tratamento aplicado. S. Heidelberg permaneceu viável na cama de todos os tratamentos, sendo também detectada nas aves sentinelas. A atividade antimicrobiana dos T1 e T3 foi relacionada aos maiores teores de amônia presentes na cama aviária. Os resultados indicam que a fermentação plana é eficiente para o controle do VDIB e enterobactérias totais residuais na cama aviária reutilizada. Todavia, na presença de S. Heidelberg outras alternativas devem ser consideradas no controle deste agente de importância na saúde animal e pública.