Os óleos essenciais são metabólitos secundários extraídos de plantas e apresentam diversas propriedades para fins medicinais. O objetivo deste trabalho foi caracterizar o óleo essencial de folhas secas de E. staigeriana, verificar sua atividade antimicrobiana e antibiofilme frente a bactérias gram-positivas e gram-negativas e avaliar a expressão dos genes de virulência e resistência em Listeria monocytogenes e Enterococcus faecalis resistente a vancomicina (VRE) na ausência e presença de concentração sub-inibitória do óleo essencial, por PCR quantitativo em tempo real (qPCR). A caracterização do óleo foi realizada por cromatografia gasosa acoplada a massa (GC-MS) verificou-se a presença de 21 compostos, sendo os constituintes majoritários o geranial (28,67 %), neral (19,68 %) e limoneno (17,29 %). A ação antimicrobiana foi avaliada e observou-se que o óleo apresentou atividade frente a bactérias gram-positivas, com diâmetros de halos de inibição de 0 a >45 mm. A concentração inibitória mínima (CIM) foi determinada para bactérias gram-positivas, sensíveis e resistentes a agentes antimicrobianos como VRE, e variou de 0,19 a 6,25 %. Ação antibiofilme do óleo foi avaliada tanto na formação, quanto sob um biofilme pré-estabelecido. O óleo essencial apresentou capacidade de inibir a formação do biofilme de todas as cepas testadas, mas pouca ou nenhuma capacidade de remoção do biofilme pré-formado. Na análise de expressão gênica por qPCR para L. monocytogenes, verificou-se que três dos genes de estresse celular (sufS, sod e degU) apresentaram uma diferença significativa na presença do óleo. Para a cepa de E. faecalis VRE, nenhum gene selecionado apresentou alteração na expressão gênica. Como conclusão, este estudo demonstrou que o óleo essencial de folhas secas de E. staigeriana possui atividade antimicrobiana do frente a bactérias gram-positivas e sem atividade em gram-negativas. / Essential oils are secondary metabolites extracted from plants and they have been showing several medicinal properties. The aim of this study was to characterize the essential oil extracted from dry leaf of E. staigeriana, as well as to verify the antimicrobial and anti-biofilm activities against gram-positive and gram-negative bacteria, and to evaluate the expression of virulence and resistance genes in Listeria monocytogenes and Enterococcus faecalis vancomycin resistant (VRE) in the absence and presence of sub-inhibitory concentration of the essential oil by quantitative real time PCR (qPCR). The oil characterization was performed by CG-MS and it was verified the presence of 21 compounds, being the geranial (28.67 %), neral (19.68 %) and limonene (17.29 %) the major compounds. The antimicrobial activity was evaluated and it was observed that the essential oil has effect against gram-positive, with inhibition zone diameter ranges from 0 to 45 mm. The minimum inhibitory concentration (MIC) was determined, to sensible and resistant gram-positive bacteria to antimicrobial agents, such as VRE, and varied between 0.19 to 6.25 %. The anti-biofilm action of the oil was verified on formation, and under a pre-established biofilm. The essential oil showed capacity to inhibit the biofilm formation for all tested strains, but few or no ability to remove the pre-established biofilm. In the analysis of gene expression by qPCR for L. monocytogenes, three cell stress genes (sufS, sod and degU) with significant difference in the presence of the oil. For E. faecalis VRE strain no one of the selected genes showed alteration in the gene expression. In conclusion, this study demonstrates the potential of essential oil from dry leaf of E. staigeriana for future use in the control of gram-positive bacteria.

A preocupação em conservar monumentos históricos tem aumentado a cada dia na comunidade científica, o que tem desencadeado na formação de grupos de pesquisa, os quais se dedicam a estudos de fatores que possam estar levando os monumentos à ruína, e formas de solucioná-los ou minimizá-los. A presença de bactérias em rochas ou em pedras de monumentos históricos tem sido confirmados por vários pesquisadores. Foram estudadas em Porto Alegre quatro igrejas e o gabinete do Vice Governador, todos de importância histórica, utilizando-se de técnicas microbiológicas tradicionais, objetivando avaliar a diversidade bacteriana em prédios de patrimônio em termos de morfologia celular e de desenvolvimento em diferentes meios de cultivo em laboratório. Foi encontrado um grande número de microrganismos em cada biofilme. Muitas bactérias Gram positivas eram do gênero Bacillus. Os isolados identificados com sendo Bacillus spp. se mostraram resistentes a concentrações de sal (NaCl) a 5% e algumas a 10%, indicando sua adaptação a superfícies secas. Este estudo, associado à literatura, indica que há muitos problemas em classificar a diversidade microbiana e que esta deve ser levada em consideração em processos de controle de biodeterioração em prédios.

Biofilmes bacterianos na indústria de alimentos freqüentemente são prejudiciais, uma vez que podem abrigar patógenos e deteriorantes que contaminam os produtos. Este trabalho se propôs a avaliar e correlacionar o papel dos fatores de adesão e da hidrofobicidade na formação de biofilmes em diversos materiais. Leite in natura foi aliquotado em tubos contendo corpos de prova constituídos de vidro, polipropileno, aço inoxidável e pano de algodão e incubados em 10 °C e 25 °C. Após 2 h, 5 h e 8 h de contato, as células não aderidas foram removidas da superfície dos materiais, e as aderidas contadas em PCA. Foram isolados e identificados microrganismos dos biofilmes, sendo verificada a produção de cápsula (coloração com vermelho congo), fímbria (hemaglutinação em placa), hemolisinas (ágar sangue) e proteases (ágar leite). As hidrofobicidades celular e dos materiais foram determinadas pelos testes de agregação com sulfato de amônio e do ângulo do raio da gota séssil, respectivamente. Verificou-se a adesão de consórcios formados por E. coli, S. aureus e B. cereus. Os 103 isolados obtidos pertencem, principalmente, a espécies da família Enterobacteriaceae (46) e do gênero Staphylococcus (45). Na produção de fatores de virulência, 50,4% dos isolados produziram cápsula, 48,5% produziram fímbria, 55,3% hemolisina e 20,3% proteases. Dos microrganismos Gram-positivos e Gram-negativos, 86,6% e 84,4% foram positivos para o teste de hidrofobicidade, respectivamente. O aço inoxidável foi o material mais hidrofóbico testado, seguido por polipropileno e vidro. A temperatura de 25 °C e o polipropileno foram os maiores favorecedores de adesão dos consórcios bacterianos.

Orientador: Eduardo Bagagli / Banca: Juliana Campos Junqueira / Banca: Leonardo Nimrichter / Banca: Carlos Henrique Camargo / Banca: Radames J. B. Cordeiro / Resumo: Nas últimas décadas, a epidemiologia das infecções por Candida spp. e o perfil de susceptibilidade a drogas vêm sofrendo importantes alterações. A emergência dessas espécies, como agente de infecções invasivas, tem se destacado principalmente entre pacientes imunocomprometidos. O principal objetivo desse estudo foi avaliar a epidemiologia das infecções por Candida spp. no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu, UNESP, e auxiliar no suprimento de dados para o melhor controle da infecção hospitalar. Os objetivos específicos incluíram a comparação entre as metodologias tradicional, automatizada e molecular de identificação em nível de espécie atualmente disponíveis nesta instituição, avaliar o perfil de susceptibilidade aos antifúngicos, bem como a produção de biofilme por estes isolados e caracterizar, utilizando ferramentas de biologia molecular, genes envolvidos na produção de biofilme de C. albicans e C. parapsilosis e o emprego dos introns do grupo I para genotipagem de C. albicans. Um total de 196 isolados de Candida spp. provenientes de hemocultura de pacientes foram avaliados. As espécies mais frequentes foram C. albicans (39,3 44,4%) e C. parapsilosis (33,2-42,3%). Foi observada boa correlação (>80%) entre os métodos de identificação avaliados - fenotípico tradicional, automatizado e molecular; e a caracterização dos introns do grupo I detectou predominância de C. albicans genótipo A (74%). O método tradicional é o mais simples e de baixo- custo, e o método automatizado mais rápido na liberação do resultado, quando comparados às técnicas moleculares, as quais apresentam maior poder discriminatório. Sugere-se a utilização do meio cromogênico, em paralelo ao método de identificação selecionado, para auxiliar na interpretação dos resultados, principalmente nas espécies mais frequentes. O método empregado em laboratórios de rotina deve ser considerado quando ... / Abstract: Over the last decade, there have been important changes in the epidemiology of Candida infections and antifungal agents used to treat these infections. In recent years, Candida species have emerged as important causes of invasive infections mainly among immunocompromised patients. The principal aim of this study was to evaluate the epidemiology of infectious Candida species isolated in our hospital and accordingly supply data for hospital infection control The other aims were to compare the traditional, automated and molecular methods used to identify Candida isolates to the species level current available in the Clinical Hospital of the Boucatu Medical School, UNESP, to evaluate the drug susceptibility as well as to biofilm production by this yeasts and to characterize, by molecular tools, several genes involved in biofilm production of C. albicans and C. parapsilosis and the use of group I introns to genotype the species C. albicans. A total of 196 Candida strains that were isolated from blood specimens of hospitalized patients were included in the study. The most common Candida species identified were C. albicans (39,3-44,4%) and C. parapsilosis (33,2-42,3%). According to the insertion of group I introns, the genotype A of C. albicans were the most frequent (74%). The evaluation of traditional phenotypic methods, the automated and some molecular revealed good agreement (>80%) and since both phenotypic methods were simple and cost effective and automated were few time-consuming when compared to molecular techniques, they should be considered in the routine lab identification of Candida species. The chromogenic media must be employed to avoid misinterpretations, independently of the method used. Antifungal susceptibility testing was performed by the reference microdilution method (CLSI) and all strains showed good susceptible against the drugs evaluated (fluconazole, voriconazole, anidulafungin and ... / Doutor

Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Co-orientador: Cristiane Aparecida Pereira Correia / Banca: Silvia Maria Rodrigues Querido / Banca: Luciane Dias de Oliveira / Resumo: Streptococcus sanguinis e Streptococcus mitis são colonizadores pioneiros do biofilme bucal e podem causar endocardite bacteriana. Candida albicans está presente na cavidade bucal de forma comensal, possui capacidade de formar biofilme e causar candidose bucal. O objetivo desse trabalho foi avaliar as interações entre C. albicans com S. sanguinis e S. mitis em biofilmes e suas influências in vivo em modelo experimental de invertebrado Galleria mellonella. Para o estudo da interação de C. albicans (ATCC 18804) com S. sanguinis (ATCC 7073) e S. mitis (ATCC 4945) foram formados biofilmes monoespécie e multiespécies de C. albicans com os micro-organismos (na concentração de 107 células/mL) em fundo de placa de 96 poços por 48 h, incubados em estufa a 37 °C com 5% CO2. Após crescimento, os biofilmes foram desprendidos e obtidas diluições decimais as quais foram semeadas em meios seletivos. Após incubação por 48 h/37 °C foi obtida a contagem de unidades formadoras de colônias por mililitro (UFC/mL). Em paralelo, foram realizados ensaios colorimétricos com o sal XTT, a fim de mensurar a atividade metabólica de C. albicans nos biofilmes isolados e associados, seguindo de leitura a 492 nm, e o resultado expresso em absorbância (Abs). No estudo in vivo, primeiro foram determinadas as concentrações subletais dos micro-organismos, e inoculadas em G. mellonella, e observado o efeito de C. albicans, S. mitis e S. sanguinis nas lagartas, avaliando se curva de sobrevivência. Avaliação morfológica dos biofilmes foi realizada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os dados de contagem de UFC/mL e da atividade metabólica foram submetidos à análise de normalidade, e como foi observada distribuição normal, os resultados foram analisados estatisticamente pelos testes t de Student (para duas variáveis) e Tukey (para três ou mais variáveis), considerando-se diferença estatística quando p <0,05. Os dados obtidos na curva de.. / Abstract: Streptococcus sanguinis and Streptococcus mitis are pioneering colonizers of oral biofilm and can cause bacterial endocarditis. Candida albicans is present in the oral cavity in a commensal manner and also has the ability to form biofilm and cause oral candidiasis. The aim of this study was to evaluate the interactions between C. albicans with S. sanguinis and S. mitis biofilms and their influences in vivo on an experimental invertebrate model of Galleria mellonella. To study the interaction of C. albicans (ATCC 18804) with S. sanguinis (ATCC 7073) and S. mitis (ATCC 4945) monospecies and multispecies biofilms were formed of C. albicans and with micro-organisms (a concentration of 107 cells/ml) in the bottom of a 96-well plate for 48 h, incubated at 37 °C with 5% CO₂. After growth, biofilms were detached, and decimal dilutions were plated on selective media. After incubation for 48 h/37 °C the count of colony forming units per milliliter (CFU/mL) was obtained. Alongside, XTT salt colorimetric assays were carried in order to measure the metabolic activity of isolated and associated C. albicans biofilms, following reading at 492 nm, and the result expressed in absorbance (Abs). In the in vivo study, first the sublethal concentrations of microorganisms were determined, and inoculated into G. mellonella, and the effect of C. albicans, S. mitis and S. sanguinis in caterpillars was observed, evaluating the survival curve. Morphological evaluation of the biofilms was performed by scanning electron microscopy (SEM). The count of CFU/mL and metabolic activity were submitted to normality analisis, and as a normal distribution was observed, the results were statistically analyzed by Student's t test (for two variables) and Tukey (for three or more variables) considering statistical difference at p < 0.05. The G. mellonella survival curves data were analyzed by log-rank method. Streptococci influenced the reduction of biofilms of C. albicans and .... / Mestre

Orientador: Eloi Dezan Júnior / Coorientador: Carolina Simonetti Lodi / Banca: João Eduardo Gomes Filho / Banca: Marco Antonio Húngaro Duarte / Resumo: Enterococcus faecalis é uma bactéria Gram-positiva que pode resistir ao tratamento endodôntico e manter a infecção presente no sistema de canais radiculares. Assim, o uso de cimentos endodônticos com atividade antimicrobiana pode ajudar a eliminar microrganismo residuais que sobreviveram após o tratamento endodôntico. Diante dessa realidade, o presente estudo teve por objetivo avaliar comparativamente a ação antimicrobiana dos cimentos endodônticos Acroseal, Sealapex e AH Plus em um modelo de biofilme in vitro. Para a realização do estudo foram confeccionados 144 espécimes de dentina bovina, sendo doze blocos para cada cimento em cada tempo experimental que permaneceram em placas contendo meio de cultura inoculado com E. faecalis (ATCC 51299) para permitir a formação de biofilme. Decorrido 14 dias, os espécimes foram transferidos para outra placa onde discos dos cimentos testados foram colocados sobre o biofilme formado. As placas de cultura foram deixadas em estufa a 37°C e 5% de CO2 por 2, 7 e 14 dias. Espécimes sem aplicação dos cimentos foram utilizados como controle para cada período. Após cada tempo experimental, as amostras foram agitados em sonicador. As suspensões foram agitadas em vortex e foi realizada uma diluição seriada decimal em solução salina, sendo estas diluições plaqueadas em triplicata em meio de cultura m-Enterococcus ágar. As unidades formadoras de colônia foram contadas e os dados analisados estatisticamente usando os teste ANOVA, Shapiro-Wilk e Kruskal-Wallis one-way (p<0,05) para determinação do potencial antimicrobiano. Resultados: O Sealapex apresentou diferença estatística em todos os tempos experimentais quando comparado com os demais grupos. O AH Plus e o Acroseal mostraram atividade antimicroabina apenas no 14o dia de experimento. Conclusão: Nenhum... / Abstract: Enterococcus faecalis is a gram positive bacteria that can resist to the endodontic therapy and maintain the infection present in the root canal system. Therefore, the use of endodontic sealers with antimicrobial activity could help to eliminate residual microorganism that have survived after endodontic treatment. The present study aimed to compare the antimicrobial activity of the endodontic sealers Acroseal, Sealapex and AH Plus in vitro biofilm model. It were prepared 144 bovine dentin specimens, twelve blocks for each cement in each experimental time that remained in plates containing culture medium inoculated with E. faecalis (ATCC 51299) for biofilm formation. After 14 days, the samples were transferred to another plate with test sealers and were kept at 37oC and 5% CO2 for 2, 7 and 14 days. Specimens without sealers were used as a control for each period. After each experimental, the samples were agitated in sonicator. The suspensions were agitated in vortex and serially diluted in saline and triple plaqued in m-Enterococcus agar. Colony forming unit were counted and the data were statistically analyzed using ANOVA, Shapiro-Wilk and Kruskal-Wallis one-way test (p<0.05) for the antimicrobial potential determination. Results: Sealapex showed significant difference in all experimental times in comparison to all other groups. AH Plus and Acroseal showed antimicrobial activity just at 14th experimental day. Conclusion: Neither of sealers setting tested was able to remove biofilm . The Sealapex showed higher antimicrobial activity in all experimental periods. All sealers examined the antimicrobial effectiveness was higher with over time / Mestre

Orientador: Ana Marisa Fusco Almeida / Banca: Maria Aparecida de Resende Stoianoff / Banca: Juliana Campos Junqueira / Resumo: Histoplasma capsulatum variedade capsulatum é um fungo dimórfico causador da Histoplasmose, uma doença fúngica sistêmica que constitui um importante problema de saúde mundial. A infecção ocorre através da inalação de propágulos infectantes provenientes do meio ambiente. A capacidade de formação de biofilme por esse fungo foi caracterizada recentemente, porém ainda pouco se sabe sobre os mecanismos envolvidos na sua formação. Neste caso, estudos com abordagens proteômicas seriam de fundamental importância para o entendimento da diferença entre a forma planctônica e o biofilme. Os antifúngicos usados na terapia convencional contra biofilmes não são eficientes, além disso, doses elevadas para perfusão destes fármacos nesta forma seriam tóxicas para os pacientes. O presente trabalho teve como objetivo verificar a atividade anti-Histoplasma de 92 compostos derivados de chalcona e do ácido protocatecuico; caracterizar o biofilme do isolado clínico H. capsulatum 317 e pesquisar compostos anti-biofilme buscando um provável mecanismo de ação através da análise proteômica diferencial entre o biofilme tratado e não tratado. Os testes de susceptibilidade foram realizados conforme o documento M27-A3, proposto pelo CLSI (2008). Os biofilmes foram formados em caldo BHI suplementado e a atividade metabólica foi determinada através do ensaio de redução do XTT. Para a caracterização da formação do biofilme e da ação do composto, utilizou-se a microscopia eletrônica de varredura (MEV) e microscopia confocal, enquanto que a massa do biofilme e a matriz extracelular foram quantificadas pelo cristal violeta e safranina. E como etapa final foi realizada a análise do perfil proteico dos biofilmes com e sem tratamento. Os melhores valores de concentração inibitória mínima (CIM) foram obtidos por seis derivados de chalconas (T50, C3, E2A, F2A, T18A e T46A) e... / Abstract: Histoplasma capsulatum var. capsulatum is a dimorphic fungi that causes Histoplasmosis, a systemical fungal disease that is a major health problem worldwide. Infection occurs by inhalation of infective propagules from the environment. The biofilm formation by this fungi was characterized recently, however little is known about the mechanisms involved in their formation. In this case, studies with proteomic approaches would be of fundamental importance for understanding the difference between the planktonic and biofilm forms. The antifungal agents used in conventional therapy are not effective against biofilms, in addition, high doses of these drugs can be toxic to patients. This study aimed to verify the anti-Histoplasma activity of 93 compounds derived from chalcones and protocatechuic acid; characterize the biofilm formation by the clinical isolate H. capsulatum 317 and discover new anti-biofilm compounds searching for a mechanism of action by differential proteomics analysis, comparing the treated and untreated biofilms. Susceptibility tests were performed according to the document M27- A3, proposed by the CLSI (2008). The biofilms were formed in BHI broth supplemented and metabolic activity was determined by the XTT reduction assay. For the characterization of biofilm formation and action of the compound, was used the scanning electron microscopy (SEM) and confocal microscopy, while the mass of the biofilm and the extracellular matrix were quantified by crystal violet and safranin. Lastly was performed the analysis of the protein profile of biofilms with and without treatment. The best minimum inhibitory concentration values (MIC) were obtained for six derivatives of chalcones (T50, C3, E2A, F2A, T18A and T46A) and nonyl protocatechuate (MIC = 3.9 mg/L). The clinical isolate H. capsulatum EH317 was able to form biofilms in vitro after 96 hours. After 96 hours, the biofilm ... / Mestre

Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Juliana Campos Junqueira / Banca: Graziella Nuernberg Back Brito / Banca: Liliana Scorzoni / Banca: Fernanda Malagutti Tomé / Resumo: Devido ao aumento das infecções causadas por Candida albicans e espécies não-albicans, surge a necessidade de novas estratégias terapêuticas, como a identificação de cepas bacterianas com características probióticas. Assim, o objetivo foi avaliar a ação antimicrobiana de cepas clínicas de Lactobacillus paracasei, Lactobacillus fermentum e Lactobacillus rhamnosus sobre diferentes espécies de Candida (C. albicans, C. glabrata, C. krusei e C. tropicalis). Foram utilizadas cepas de Lactobacillus isoladas da cavidade bucal de indivíduos livres de cárie e cepas de Candida isoladas de lesões de candidose orofaríngea obtidas em estudos anteriores. Para estudo in vitro, foram formados biofilmes monoespécies de Candida (Grupo controle) e biofilmes mistos de Candida e Lactobacillus, nos quais os lactobacilos foram acrescentados antes da cepa de Candida (Grupo Profilático), após a cepa de Candida (Grupo Terapêutico) ou ao mesmo tempo da cepa de Candida (Grupo Simultâneo). Após 48 h de incubação, foi realizada a contagem do número de células viáveis de Candida (UFC/mL). Para estudo in vivo, os micro-organismos foram inoculados em larvas de G. mellonella e o desenvolvimento da candidose foi monitorado pela curva de sobrevivência, estudando-se os grupos experimentais descritos acima. Nos resultados in vitro, foi verificado que os efeitos inibitórios mais significativos de Lactobacillus sobre Candida ocorreram nos grupos profiláticos. As cepas de C. tropicalis e C. krusei foram mais sensívei... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract : Due to the increase of infections caused by Candida albicans and non-albicans species, there is a need for new therapeutic strategies, such as the identification of bacterial strains with probiotic characteristics. The objective of this study was to evaluate the antimicrobial action of Lactobacillus paracasei, Lactobacillus fermentum and Lactobacillus rhamnosus strains on different Candida species (C. albicans, C. glabrata, C. krusei and C. tropicalis). We used Lactobacillus strains isolated from the oral cavity of caries-free and Candida strains isolated from lesions of oropharyngeal candidiasis. For in vitro study, monospecies of Candida (Control Group) and mixed biofilms of Candida and Lactobacillus were prepared, in which the lactobacillus were attached before the Candida strain (Profile Group), after a Candida (Therapeutic Group) strain or same time as the Candida strain (Simultaneous Group). After 48 h of incubation, we counting the number of viable Candida cells (CFU/mL). For in vivo study, we inoculate the microorganisms in larvae of G. mellonella and the development of the application for monitoring by survival curve, studying the experimental groups described above. In the in vitro results, we find that the most significant inhibitory effects of Lactobacillus on Candida occurred in the prophylactic groups. The strains of C. tropicalis and C. krusei were more sensitive to the action of Lactobacillus than C. albicans and C. glabrata. In addition, it we verified that the three species of Lactobacillus studied (L. paracasei, L. rhamnosus and L. fermentum) had an inhibitory action on Candida. In relation to the in vivo study, we verified that the prophylactic groups had more inhibitory effects on an experimental candidose in relation to the therapeutic groups, leading to a significant increase in the survival rates of the larvae. In relation to the .....(Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Angela Cristina Cilense Zuanon / Banca: Cyneu Aguiar Pansani / Banca: Karina Antunes Neves / Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar a porosidade, rugosidade superficial e atividade antibiofilme de um cimento de ionômero de vidro (CIV) após a incorporação de gluconato ou diacetato de clorexidina (CLX) em diferentes concentrações. Para os testes de porosidade e rugosidade superficial foram confeccionados 10 corpos de prova com o CIV Ketac Molar EasyMix (KM) divididos nos grupos: controle (C), CIV e diacetato de CHX 0,5% (D1), CIV e diacetato de CHX 1,0% (D2) e CIV e diacetato de CHX 2,0% (D3), CIV e gluconato de CHX 0.5% (G1), CIV e gluconato de CHX 1.0% (G2), CIV e gluconato de CHX 2.0% (G3). Para a avaliação da porosidade, os corpos de prova foram fraturados, os fragmentos foram fotografados em microscópio eletrônico de varredura (MEV) e as imagens, analisadas com auxílio do programa Image J. A rugosidade superficial (Ra) foi obtida por meio da média de três leituras realizadas na superfície de cada espécime, passando sempre pelo centro da mesma. Para a análise do teste de atividade antibiofilme foram utilizadas cepas de S. mutans ATCC 25175 e os grupos foram divididos em: C1 - CIV (1 dia); C2 - CIV (7 dias), C3- CIV (14 dias), C4 - CIV (21 dias); grupo D1: CIV+CLX (1 dia), D2 - CIV+CLX (7 dias), D3: CIV+CLX (14 dias), D4: CIV+CLX (21 dias); G1- CIV+ CLX (1 dia), G2- CIV+ CLX (7 dias), G3- CIV+ CLX (14 dias) e G4- CIV+ CLX (21 dias) sendo 10 corpos de prova por grupo. Para crescimento dos biofilmes, os espécimes foram posicionados verticalmente em placas de 24 poços, contendo 1,5 mL de inóculo fresco preparado em caldo BHI diluindo-se 10 vezes uma suspensão incubada overnight e 0,2% de sacarose. O meio de cultura foi renovado a cada 24 h. Após crescimento por 1, 7, 14 e 21 dias, os biofilmes foram re-suspensos em solução salina. A suspensão foi diluída e semeada em ágar BHI, para a quantificação de bactérias presentes. Para avaliação de todos os testes utilizou-se... / Abstract: The aim of this study was to evaluate the porosity, surface roughness and antibiofilm activity of a glass ionomer cement (GIC) after incorporating gluconate or chlorhexidine diacetate (CHX) at different concentrations. For tests of porosity and surface roughness were prepared 10 specimens with GIC Ketac Molar EasyMix (KM) divided into groups: control (C), and GIC CHX gluconate 0.5% (G1), GIC and 1.0% CHX gluconate (G2), and GIC 2.0% CHX gluconate (G3), GIC and 0.5% CHX diacetate (D1), GIC and 1.0% CHX diacetate (D2) and GIC and 2.0% CHX diacetate (D3). For the evaluation of porosity, the samples were fractured, the fragments were photographed under a microscopy scanning electron (SEM) and the images analyzed with the software Image J. The surface roughness (Ra) was measured by the mean of three readings taken at the surface of each specimen, always passing through the center thereof. For the analysis of the test anti-biofilm activity were used strains of S. mutans ATCC 25175 and were divided into groups: C1 - GIC (1 day); C2 - GIC (7 days), C3- GIC (14 days), C4 - GIC (21 days); group D1: GIC +CHX (1 day), D2 - GIC +CHX (7 days), D3: GIC +CHX (14 days), D4: GIC +CHX (21 days); G1- GIC + CHX (1 days), G2- GIC + CHX (7 days), G3- GIC + CHX (14 days) e G4- GIC + CHX (21 dias), with 10 specimens per group. For growth of biofilms, the specimens were positioned vertically in 24-well plates containing 1.5 mL of inoculum in fresh BHI broth prepared by diluting 10-fold a suspension incubated overnight and 0.2% sucrose. The culture medium was renewed every 24 h. After growth for 1, 7, 14 and 21 days, biofilms were re-suspended in saline. The suspension was diluted and plated on BHI agar for quantitation of bacteria. For evaluation of all tests we used analysis of variance of two factors, and if necessary, we applied the Tukey test, with significance level of 5%.As for the porosity of the GIC, analysis of... / Mestre

Orientador: Elisa Maria Aparecida Giro / Banca: Angela Cristina Cilense Zuanon / Banca: Renata Cristiane da Silva Molina / Resumo: Este estudo teve como objetivo avaliar a resistência de união à dentina e a composição microbiana do biofilme formado sobre um CIV de alta viscosidade ao qual foi adicionado diacetato de CLX em diferentes concentrações. A CLX foi misturada ao pó do CIV nas concentrações de 0,5%, 1% e 2%. O CIV sem CLX foi usado como controle. No primeiro estudo, foram utilizados 80 terceiros molares, que tiveram uma superfície de dentina exposta na face oclusal. Metade dos dentes foi mantida hígida e a outra metade foi submetida à indução artificial de cárie. Em cada superfície dentinária, foi confeccionado um espécime cilíndrico com 1mm de diâmetro x 1 mm de altura (n=10 por grupo). Estes foram mantidos a 37ºC com 100% de umidade por 24 horas, e submetidos ao teste de microcisalhamento. Os resultados foram analisados pelos testes de Kruskall-Wallis e Mann Whitney (α=0,05). No segundo estudo, voluntários (n=8) usaram dispositivos palatinos contendo espécimes (4 mm de diâmetro x 1 mm de altura). Os materiais foram testados por todos os voluntários na ordem crescente de concentração de CLX por um período de 7 dias e com intervalo de descanso de 15 dias entre elas. O biofilme formado sobre os espécimes foi coletado e analisado. Os dados referentes às contagens de microrganismos anaeróbios totais, estreptococos totais, estreptococos do grupo mutans e lactobacilos foram submetidos à análise de variância de medidas repetidas complementada pelo teste de Tukey. O nível de significância adotado foi de 5% . Não houve diferença estatística na resistência de união entre a dentina hígida e afetada (p>0,05). Os grupos CIV, CIV+CLX 0,5% e CIV+CLX 1% apresentaram resistência de união estatisticamente semelhante (p>0,05), e superior ao CIV+CLX 2% (p≤0,025). Houve diferença entre as médias de contagem de microrganismos apenas para o lactobacilos (p<0,05), sendo estas significativamente maiores... / Abstract: The aim of this study was to evaluate the bond strength to dentin and the microbial composition of the biofilm formed over a high-viscosity GIC to which chlorhexidine diacetate (CHX) was added at different concentrations. CHX was mixed with GIC powder at 0.5%, 1% and 2% (w/w). GIC without CHX was used as control. In the first study, eighty human third molars were used. They had an area of dentin exposed on the occlusal surface. Half of the specimens were kept sound and the other half was subjected to artificial caries induction. In each dentin surface a cylindrical specimen with 1 mm in diameter and 1 mm in weight (n=10 per group) was made. They were kept at 37°C and 100% humidity for 24 hours and tested for microshear. The results were analyzed using Kruskal-Wallis and Mann Whitney tests (α = 0.05). In the second study, volunteers (n=8) wore palatal appliances containing specimens with 4mm in diameter and 1mm in weight. The material with increasing concentrations of chlorhexidine were tested by all volunteers for a period of 7 days each, with a wasout period of 15 days. After each step, the biofilm formed on the specimens were collected and analyzed. Data from total anaerobic microorganisms, total streptococci, mutans streptococci and lactobacilli were analyzed by repeated measures ANOVA followed by Tukey test. The significance level was set at 5%. There were no statistical significant differences between bond strength of sound and caries-affected dentin (p> 0.05). Groups GIC, GIC+CHX 0.5% and GIC+CHX 1% showed bond strength statistically similar (p> 0.05) and higher than GIC+CHX 2% group (p ≤ 0.025). Microbial counts showed statistical significant differences among groups only for lactobacilli (p<0.05). GIC+CHX 2% presented higher mean counts than GIC and GIC + CHX 0.5% (p<0.05). In conclusion, the addition of CHX diacetate 0.5% and 1% did not change bond strength of a high-viscosity GIC in... / Mestre