A sinalização pelo ácido retinóico (AR) é fundamental para o correto desenvolvimento embrionário. A principal enzima responsável pela síntese do AR durante o desenvolvimento é a Raldh2 (Aldh1a2), cujo padrão de expressão é bastante dinâmico. Apesar dos padrões de expressão da raldh2 e seus papéis durante o desenvolvimento já estarem bem estabelecidos, pouco se conhece sobre sua regulação. Estudos de bioinformática identificaram no gene raldh2 um elemento não-codante conservado (CNE), presente de anfíbios até humanos, denominado Raldh2.2. Utilizando ensaios de eletroporação e análise de camundongos transgênicos, nós mostramos que o CNE Raldh2.2 é um enhancer responsável por ativar a expressão da raldh2 na medula espinhal dorsal de tetrápodes e que seu padrão de atividade coincide em aves e camundongos. Através de ensaios de deleções e mutações sítio-direcionadas desse enhancer, identificamos quatro elementos cis regulatórios responsáveis por ativá-lo na placa do teto e em interneurônios dorsais da medula espinhal. A regulação positiva da atividade desse enhancer ocorre de maneira redundante por três sítios Tcf-homeobox, enquanto sua inibição nos interneurônios ventrais da medula espinhal se dá por dois sítos repressores, um Lim-homeodomínio e um Tgif. Neste trabalho, utilizando hibridação in situ dupla para raldh2 e math1/cath1, descrevemos um novo território transiente de expressão da raldh2, os interneurônios dorsais 1. Esses interneurônios dão origem a circuitos ascendentes e a interneurônios comissurais intraespinhais, sugerindo papéis para a sinalização pelo ácido retinóico na ontogenia dos circuitos proprioceptivos espinocerebelar e intraespinhal. / Retinoic acid (RA) signaling is crucial for correct embryonic development. Raldh2 is the major enzyme involved in retinoic acid synthesis during early development and its expression pattern is dynamic. Raldh2 expression patterns and its roles during development are well known, but little is known about its regulation. Bioinformatic analysis identified a conserved non-coding element (CNE) in the raldh2 gene conserved from amphibians to humans, called Raldh2. Using electroporation assays and transgenic mice analysis we showed that CNE Raldh2.2 is an enhancer that activates raldh2 in the dorsal spinal cord in tetrapods and that its activity pattern is the same in chicken and mice. Using deletions assays and site-directed mutagenesis, we identified four cis regulatory elements that activate this enhancer in the roof plate and dorsal interneurons of the spinal cord. This enhancer is activated by a redundant mechanism through three predicted Tcf-homeobox biding sites and it is repressed in ventral interneurons via two repressors sites, a Lim-homeodomain and a Tgif. In this thesis, using in situ hybridization, we described a new transient territory of raldh2 expression, the dorsal interneurons 1. These interneurons give rise to ascending circuits and intraspinal commissural interneurons, suggesting roles for retinoic acid signaling in the ontogeny of spinocerebellar and intraspinal proprioceptive circuits.

Ferramentas bioinformática têm se tornado a escolha para auxiliar pesquisadores tanto para a anotação de novos genes, como para estudar genes em condições fisiológicas de interesse. Entre essas ferramentas destacam-se os algoritmos de agrupamento filogenético e os algoritmos de predição de padrões curtos de DNA, como, por exemplo, predições de sítios para ligação de fatores de transcrição. Desenvolver uma abordagem mista com o objetivo de agrupar genes baseando-se unicamente nos sinais transcricionais preditos em suas seqüências é um desafio de difícil transposição. No presente trabalho, apresentamos nossos resultados para tentar superar tal limitação que podem ser subdividos em duas seções: a primeira aonde desenvolvemos uma abordagem para a melhoria das predições computacionais de sítios de ligação e a segunda, onde passamos a agrupar genes com base nos seus sinais transcricionais preditos em seqüências conservadas flanqueadoras. A primeira seção de nosso trabalho foi focada no estudo de uma seqüência de indução de transcrição próxima ao gene Aldh1a2 de camundongo aonde foram preditos sítios para fatores de transcrição que foram posteriormente testados biologicamente e se mostraram associados ao controle da expressão desse gene. A partir de uma profunda pesquisa bibliográfica, nós determinamos um grupo de 57 fatores de transcrição já associados com a especialização de subpopulações de neurônios durante o desenvolvimento neuroembrionário de vertebrados. Nossa abordagem de seleção de sítios de alto valor biológico foi agora testada em seqüências conservadas próximas a cada um desses genes que codificam esses fatores de transcrição associados e os sítios de ligação para fatores de transcrição foram preditos. Tais sítios foram contabilizados e utilizados com entrada para nossa abordagem de agrupamento. A análise dos resultados do agrupamento determinou que, nossa abordagem se mostrou suficientemente sensível para construir uma árvore solução com boas relações com os padrões, já conhecidos, de expressão para esses genes agrupados. Essa abordagem poderá ser utilizada tanto para anotar funcionalmente genes de interesse quanto para minerar informações dentro de um grupo de genes previamente selecionado. / Bioinformatics tools are becoming the choice for aiding scientists for gene annotation and for studying gene in physiological conditions of interest. Among those efforts, phylogenetics clustering algorithms and tools for predicting short DNA patterns, such as binding sites for transcription factor, are outlined as essential. To develop a mixture procedure merging this two distant fields of bioinformatics research is a challenge hard to overcome. In the present study, we present our results of trying to overcome such limitation and it be easily subdivided in two distinct sections: initially we develop a procedure to improve the computational prediction of binding site for transcription factors and the second one where genes were grouped based solely in their transcriptional patterns predicted in conserved flanking sequences. The first section of the present study was focused in the study of an enhancer near Aldh1a2 gene in mouse where binding sites were predicted and latter biologically tested and showed strong influence in expression control of this gene. By a comprehensive bibliographic research we determined a group of 57 transcription factors which were already associated with neuron subpopulations specialization during the neuroembryonary development in vertebrates. Our computational procedure for selection of high biological value binding sites was applied in conserved flanking sequence in each of these genes encoding these associated transcription factors and a large group of binding sites were predicted. This sites were counted and use as an input for our clustering procedure. Clustering results analyses determined that our procedure showed to be sufficiently sensible to construct a solution tree showing good relations with, already determined, expression patterns of grouped genes. This procedure could be for functionally annotation of genes and for data mining in a group of already determined genes of interest.

O ácido retinóico (AR) é essencial para a embriogênese. A principal enzima sintetizadora de AR durante o desenvolvimento é a ALDH1A2 (RALDH2), uma retinaldeído desidrogenase que converte retinaldeído a AR. Para entendermos como o gene da aldh1a2 é regulado identificamos regiões evolutivamente conservadas (ECRs) em vertebrados e testamos seu potencial regulatório. Identificamos uma ECR localizada no intron1 da aldh1a2, conservada em anfíbios, aves e mamíferos que atua como um enhancer em estruturas derivadas de ectoderme, endoderme e mesoderme. Animais transgênicos transientes e permanentes mostram a ativação desse enhancer na região da placa do teto do tubo neural e epicárdio, local onde esse enhancer é ativado em células derivadas do órgão pro-epicárdico após o contato e/ou proximidade com células do miocárdio. A identificação de um enhancer conservado no gene da aldh1a2 suporta a idéia de que esse gene possui uma regulação modular e mostra que a abordagem evolutiva é uma eficiente ferramenta para a identificação de mecanismos de controle desse gene. / Retinoic acid (RA) is essential for embryogenesis. The key RA synthetic enzyme during early development is ALDH1A2 (RALDH2), a retinaldehyde dehydrogenase that converts retinaldehyde into RA. To understand how aldh1a2 is regulated we screened the gene for evolutionary conserved regions (ECRs) among vertebrates and assayed their regulatory potential. We describe an aldh1a2 intron 1 ECR (identified as RALDH2.2) that is conserved in amphibians, avians and humans and acts as an enhancer in derivatives of ectoderm, endoderm and mesoderm. Transient and stable transgenesis in mice reveal strong activity of the raldh2 intron 1 enhancer at the roof plate of the neural tube and at the growing epicardium. Transgenic mice indicate that the enhancer is activated in proepicardium-derived cells by contact and/or close proximity to the myocardium. The identification of an aldh1a2 conserved enhancer supports the idea of a modular regulation and shows that the evolutionary approach is an efficient tool to identify control mechanisms of the aldh1a2 gene.

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No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_MetabolismoUreideosAsparagena.pdf: 4314376 bytes, checksum: 11906533786a7290c88602b866bcdfa1 (MD5) Previous issue date: 1982 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A síntese e acúmulo de proteínas na semente necessita de um grande suprimento de nitrogênio reduzido. Normalmente o transporte deste nitrogênio de outras partes da planta envolve alguns compostos específicos, dependendo da espécie e condições de crescimento. A fixação de N2 pela associação simbólica soja Rhizobium cultivada em meio sem fonte de nitrogênio mineral leva à incorporação de N atmosférico em ureídeos (alantoína e ácido alantóico), que formam os principais compostos nitrogenados encontrados nas vias de transporte de plantas de soja noduladas. Por outro lado em soja cultivada na ausência de Rhizobium e com NO 3 como fonte de nitrogênio, a asparagina é a forma de nitrogênio predominante nas vias de transporte destas plantas. O acúmulo de proteínas nos frutos destas plantas dependerá, portanto, do aproveitamento destas formas de nitrogênio para a síntese de aminoácidos. Os objetivos deste trabalho foram: Primeiramente, verificar a presença das enzimas provavelmente envolvidas na utilização destes compostos (isto é, alantoinase e asparaginase). Segundo, investigar o efeito dessa mudança no transporte de nitrogênio principalmente de ureídeos (plantas noduladas) para asparagina (não-noduladas)sobre a atividade dest as enzimas durante a ontogenia do fruto, especificamente nos tecidos da vagem, dos cotilédones e do tegumento. A asparaginase foi dosada pelo método radiométrico, após a separação do produto por cromatografia, enquanto que a alantoinase foi dosada medindo-se a formação do produto após a transformação em glioxilato Encontrou-se atividade de ambas as enzimas em todos os tecidos do fruto a não ser da vagem onde não detectou-se atividade da asparaginase. Tanto a enzima alantoinase como asparaginase mostraram baixa atividade no tegumenento, ocorrendo apenas um pequeno pico mais no fim do desenvolvimento da semente, tanto para plantas moduladas como não noduladas. Na vagem e cotilédones a atividade da alantoinase foi mais alta durante a fase de acúmulo de proteína. A atividade nos cotilédones, por exemplo, foi em acima da taxa de acúmulo de nitrogênio. Para a asparaginase a atividade também foi mais alta nesta fase de desenvolvimento dos cotilédones embora o nível de atividade fosse menor, sendo semelhante a taxa de acúmulo de nitrogênio neste tecido. Comparando as curvas de atividade obtidas para plantas noduladas e não-noduladas, houve pouca diferença, havendo apenas uma tendência da alantoinase permanecer alta (vagem e cotilédone) durante mais tempo na planta nodulada (apesar da maturação ter ocorrido mais cedo). Por outro lado, a asparaginase manteve a atividade alta durante mais tempo nas não-noduladas. Foi discutido o possível significado deste resultado em termos do fluxo de ureídeos e asparagina para os frutos. Quanto aos níveis de ureídeos e aminoácidos nos tecidos do fruto, os dados mostraram que os ureídeos, apesar de estarem associados com a atividade do nódulos, foram presentes em nível não tão baixos como esperados nas plantas não-noduladas. E, destes tecidos apenas os da vagem mostraram níveis de ureídeos bem mais altos (200 X) nas plantas noduladas comparado com as não-noduladas, que tanto nos cotilédones como no tegumento o nível de ureídeos foi baixo e semelhante para os dois casos. Fato interessante ocorreu com o níval de aminoácidos que foi geralmente o inverso dos ureídeos, encontrando-se níveis mais altos destes nos tecidos de plantas não-noduladas. / The synthesis and accumulation of reserve proteins in seeds require a large supply of reduced nitrogen. Generally, the transport of nitrogen from other parts of the plant involves a few specific compounds, the nature of which depends on the species and growth conditions. The fixation of N 2 by Rhizobium in symbiotic association with soybeans, cultivated in the absence of mineral nitrogen, leads to the incorporation of atmospheric nitrogen in ureides (allantoin and allantoic acid). These compounds form the main nitrogenous components found in the transport stream of nodulated soybeans. On the other hand, soybeans grown in the absence of Rhizobium and with NO3 nitrogen source, contain asparagine as the predominant as transport form of nitrogen. The accumulation of protein in the fruits of such plants will depend, therefore, on their ability to utilize these compounds for the synthesis of amino acids. The objectives of the present study were: first, demonstrate the presence of the enzymes presumed to be involved in the utilization of these compounds (i.e. allantoinase and asparaginase). Second, determine the effect of this drastic change in the transport of nitrogen from mainly ureides (nodulated plants) to asparagine (non-nodulated plants) on the appearance of these enzymes during fruit ontogeny specifically in the pods, cotyledons and teguments Asparaginase was assayed by a radiometric method, involving the separation of the product by chromatograpy. Allantoin was assayed by measuring the formation of the product by a differential method. Activity of both enzymes was found in all tissues of the fruit, except in the pod where no asparaginase activity was detected. Both allantoinase and asparaginase presented low activities in the tegument, producing only a small peak near the and of seed development, both for modulated and non-nodulated plants, In pods and cotyledons higher levels of allantoinase were found, especially during the phase of most active protein accumulation. It is noteworthy that the activity in the cotyledon was well above the rate of nitrogen accumulation. Asparaginase activity was also higher over this period of cotyledon development, although the level of activity was lower, being similar to the rate of nitrogen accumulation. A comparison of the activity patterns nodulated and non-nodulated plants reveals little difference except for a tendency for allantoinase to remain high (pod and cotyledons) over a longer period in nodulated plants. This occurred in spite of a shorter maturation period for fruits of nodulated plants. On the other, asparaginase (cotyledon) maintained high activity over a longer period in the non-nodulated plants. The possible significance of this effect was discussed in terms of the supply of ureides and asparagine to the fruits. As to the levels of ureides and amino acids in the various fruits tissues, the data show that the ureides, despite their association with nodule activity, were present in levels above that expected for non-nodulated plants. Of the fruit only the pods presented a high level of ureides (200 x) in nodulated plants compared to non-nodulated since low but similar levels were found ín the cotyledons and teguments of both plant types. It is notworthy that the level of free amino acids was generally the inverse of that for ureides, since higher levels were found in fruits of non-nodulated plants.

Made available in DSpace on 2015-05-14T16:53:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-14Bitstream added on 2015-05-14T16:58:53Z : No. of bitstreams: 1 000829179.pdf: 3130784 bytes, checksum: 1aceab1f866909bd2e72384a0686f2cc (MD5) / O Jundiá Leiarius marmoratus é um peixe siluriforme da família Pimelodidae, com migração reprodutiva durante a época de chuvas e que ocorre nas bacias dos rios Amazonas e Orinoco. É uma espécie de grande valor econômico por suas características zootécnicas favoráveis, como pouco canibalismo na fase de larvicultura e boa aceitação de alimentos secos na fase adulta. Pode ser uma espécie vulnerável às alterações de hábitat em função do comportamento essencialmente reofílico em pelo menos uma fase do seu ciclo de vida. Neste contexto, estudos que possibilitem a reprodução adequada em cativeiro e o conhecimento da biologia do desenvolvimento inicial da espécie são extremamente necessários, visando produzir juvenis para a aquicultura ou para subsidiar os programas de conservação das suas populações. O presente estudo tem como objetivo estabelecer um protocolo de reprodução em cativeiro com duas substâncias hormonais, extrato bruto de hipófise de carpa (EHC) e Ovopel® (OVO: mGnRHa + metoclopramida), e descrever o desenvolvimento de embriões e o crescimento das larvas do L. marmoratus. Para o estabelecimento dos protocolos de indução à reprodução, machos e fêmeas adultos foram selecionados com base na observação de características externas indicadoras de maturidade reprodutiva, como ventre abaulado nas fêmeas e liberação de sêmen nos machos. Os machos foram injetados com OVO na dosagem total de 2,5 mg.kg-1. Nas fêmeas foram testadas duas substâncias indutoras: um grupo foi injetado com EHC na dosagem total de 5,5 mg.kg-1 e um segundo grupo foi injetado com OVO na dosagem total de 5,5 mg.kg-1. As fêmeas responderam eliminando ovócitos com 175,9 e 177,2 horas-grau para EHC e OVO, respectivamente, a uma temperatura média da água de 25,5 ± 8,8 °C (p>0.05). O diâmetro dos ovócitos ovulados foi de 665 ± 3,11 μm. Parâmetros reprodutivos tais como fecundidade total e relativa e fertilidade foram ... / The Jundiá (Leiarius marmoratus) is a siluriform fish of the family Pimelodidae with reproductive migration during the rainy season, which occur in the basins of the Amazon and Orinoco rivers. It is a species of great economic value for its favorable husbandry characteristics, as little cannibalism in hatchery phase and good acceptance of dry foods in adulthood. It may be a vulnerable species due to changes in habitat because its reofilic behavior in at least one stage of its life cycle. In this context, studies that provide an appropriate captive breeding and knowledge of the biology of early development of the species, are sorely needed, aiming to produce juveniles for aquaculture or to support conservation programs their populations. The present study aims to establish a protocol for captive breeding with two hormonal substances, crude carp pituitary extract (EHC) and Ovopel ® (OVO: mGnRHa + metoclopramide), and describe the development of embryos and growth of larvae L. marmoratus. To establish the induction and reproduction protocols, males and females were selected based on observing external characteristics indicative of reproductive maturity, as bulging belly in females and emission of semen in males. Males were injected with OVO in total dosage of 2.5 mg.kg-1. In females, two inducing substances were tested: one group was injected in total dosage of 5.5 mg.kg-1 EHC and a second group was injected in total dosage of 5.5 mg.kg-1 of OVO. Females responded with oocytes elimination with 175.9 and 177.2 hours-degree for EHC and OVO at an average water temperature of 25.5 ± 8.8 ° C (p> 0,05). The diameter of ovulated oocytes was 665 ± 3.11 μm. Reproductive parameters such as the total and relative fecundity, and fertility were the same for both inducing substances (p> 0.05), with values of 612,000 and 605,400 oocytes.female-1 (fecundity), 125,800 and 132,000 oocytes.kg-1 body weight of the female (fecundity on weight) and 74.7 ...

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-01-31Bitstream added on 2015-03-03T12:06:38Z : No. of bitstreams: 1 000807004.pdf: 5707580 bytes, checksum: ad1beb676cce00cdd6c61e9e464f5975 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Avaliações sobre os possíveis impactos das crescentes emissões de CO2, por ação antrópica, nos oceanos e as consequentes alterações sobre a biota marinha, são indispensáveis para elaboração de medidas mitigatórias. Deste modo, torna-se imprescindível o desenvolvimento de sistemas aquáticos, cujas variáveis abióticas se assemelhem ao máximo às condições marinhas previstas para o futuro. Apresenta-se aqui a descrição de um novo modelo de sistema recirculante, capaz de proporcionar controle e estabilidade de condições préestabelecidas para o pH, temperatura e salinidade, em conjunto com a manutenção individual de organismos para investigações experimentais de curta ou longa duração. Este sistema apresenta 2 aquários interligados ao sistema de filtragem, perfazendo um total de 70 litros de água marinha. Para avaliação da estabilidade e eficiência do sistema, foram utilizados os resultados obtidos nas criações larvais do caranguejo Eriphia gonagra, durante toda fase zoeal (~30 dias), em diferentes cenários realísticos previstos pelo Painel Intergovernamental sobre Mudanças Climáticas – IPCC. Verificou-se que o sistema manteve a temperatura, pH, salinidade, oxigênio dissolvido, amônia, nitrito e variáveis do sistema carbonato estáveis e nos níveis desejados. Verificou-se que a independência dos componentes deste sistema permite sua fácil adaptação para outros tipos de estudo ou organismos. O sistema demonstrou ser útil em experimentos laboratoriais de pequena escala e possibilita estudos adicionais com grande replicação, principalmente nesta área de pesquisa ainda com alta carência de dados fundamentais / FAPESP: 1998/3134-6

Orientador: Rogério Caetano da Costa / Banca: Antonio Leão Castilho / Banca: Mariana Terossi Rodrigues Mariano / Resumo: O presente trabalho averiguou os efeitos da ressurgência de Cabo Frio sobre a dinâmica e a estrutura genética populacional do camarão Artemesia longinaris Spence Bate, 1888. As coletas foram realizadas em duas regiões do sudeste brasileiro, sendo uma localizada ao norte da ressurgência de Cabo Frio (Macaé - RJ) e outra ao sul (Ubatuba - SP). Os objetivos foram comparar a abundância, o tamanho médio dos indivíduos, a proporção sexual, o tamanho da maturidade sexual (CL50), o período reprodutivo, o recrutamento juvenil, o crescimento e a longevidade em ambas as áreas. Foram capturados 51221 indivíduos em Macaé e 757 em Ubatuba. Apenas para as fêmeas foi constada diferença significativa no tamanho médio dos indivíduos entre as duas regiões, com o maior tamanho sendo verificado em Macaé (15,9 ± 3,10 mm) e contrapondo Ubatuba, com 14,2 ± 2,55 mm. Em ambas as regiões, a proporção sexual foi desviada em favor das fêmeas. Os valores de CC50 foram de 12,2 mm para os machos e 15,7 mm para as fêmeas em Macaé, e 12,0 mm para os machos e 13,8 mm para as fêmeas em Ubatuba. Em ambas as áreas a reprodução contínua foi constatada, porém dois picos foram verificados, sendo em Macaé um no inverno e no verão e, em Ubatuba,um na primavera e outro no verão . O recrutamento juvenil também foi contínuo com dois picos para as duas regiões, sendo um na primavera e outro no final do verão em Macaé, e um na primavera e outro no início do outono em Ubatuba. As estimativas dos parâmetros de crescimento em Macaé foram de CC∞ = 20,07 mm; k = 0,01/dia; t0 = 0,403 para os machos e de CC∞ = 26,93 mm; k = 0,007/dia; t0 = 0,338 para as fêmeas. Já para Ubatuba, as estimativas foram de CC∞ = 16,57 mm; k = 0,016/dia; t0 = 0,44 para os machos e CC∞ = 20,59 mm; k = 0,012/dia; t0 = 0,116 para... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The present work investigated the effects of upwelling from Cabo Frio on the dynamics and on the population genetic structure of the shrimp Artemesia longinaris Spence Bate, 1888. Samples were performed in two Brazilian Southeast regions, one of them located at north of Cabo Frio upwelling (Macaé - RJ) and the other at south (Ubatuba - SP). The aims of this work were to compare abundance, size, average size of individuals, sex ratio, size at sexual maturity (CL50), reproductive period, juvenile recruitment and longevity in both areas. A total of 51,221 individuals were captured at Macaé and, at Ubatuba, 757 individuals were caught. A significant difference on the average size between the two regions was observed only in females, with the greatest size found at Macaé (15,9 ± 3,10 mm), whereas average size at Ubatuba was 14,2 ± 2,55 mm. At both regions, sex ratio was in favor of females. The values for CL50 were estimated as 12.2 mm in males and 15.7 mm in females at Macaé and, at Ubatuba, as 12.0 mm and 13.8 mm, in males and females, respectively. A continuous reproduction was verified at both regions, but two peaks were observed: spring and autumn, for Macaé, and spring and summer, for Ubatuba. Juvenile recruitment also was continuous, with two peaks for both regions: spring and late summer, for Macaé, and spring and early autumn, for Ubatuba. Growth parameters in Macaé were estimated as CL∞ = 20,07mm; k = 0,01/day; t0 = 0,403 in males and estimated as CL∞ = 26,93 mm; k = 0,007/day; t0 = 0,338 in females. In Ubatuba, values were estimated as CL∞ = 16,57 mm; k = 0,016/day; t0 = 0,44 in males and CL∞ = 20,59 mm; k = 0,012/day; t0 = 0,116 in females. Longevity was estimated as 457 days (1.25 years) in males and 643 days (1.76 years) in females of Macaé, and 294 days (0.81 years) in males and 400 days... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Célio Fernando Baptista Haddad / Banca: Rafael O. de Sá / Banca: Antonio Sebben / Resumo: O estudo comparativo da ontogenia fornece dados que podem servir tanto para elucidar alguns dos mecanismos de evolução, como para realizar reconstruções filogenética, principalmente porque permite a observação da diferenciação morfológica e temporal durante o desenvolvimento. O estudo das modificações do processo de ontogenia também fornece dados relativos aos processos de especiação. Neste sentido, os anfíbios podem ser considerados os melhores modelos para o estudo de ontogenia. Como eles têm embriões geralmente de vida livre, a aquisição da série de desenvolvimento necessário é relativamente fácil, quando comparado com qualquer outro animal vertebrado. Entre os anuros, por causa da diversidade de modos reprodutivos (que inclui desenvolvimento direto), os pipídeos oferecem uma rara oportunidade de investigar como o cuidado parental pode ter influenciado o desenvolvimento geral e, em particular, as rotas de desenvolvimento do esqueleto. Além disso, a família Pipidae também é um ramo que se diferenciou relativamente cedo na árvore de vida dos anfíbios anuros. Esta família apresenta uma combinação única de características plesiomórficas e exclusivamente derivadas, algumas das quais parecem representar adaptações a um estilo de vida aquático. O presente estudo descreve o desenvolvimento do crânio de Pipa arrabali e compara os dados disponíveis para outras espécies do grupo, incluindo outros Pipidae e Xenoanura. Para as análises morfológicas, foram utilizados 51 embriões em diferentes estágios de desenvolvimento. Para observar as estruturas esqueléticas os espécimes foram diafanizados e corados com uma técnica de dupla coloração para diferenciação de cartilagem e osso. O condrocrânio desta espécie é caracterizado pela redução ou ausência de várias estruturas, com uma concentração destas modificações nas regiões etmoidal e anterior. Quando comparado com outras espécies, parece óbvio / Abstract: The study of comparative ontogeny provides data that can serve both, to elucidate some of the mechanisms of evolution and phylogenetic reconstruction, mainly because it allows for the observation of morphological and temporal differentiation during development. The study of modifications of ontogenic process also permits that data relating to the process of speciation be observed. In this regard, frogs may be considered the best models for the study of ontogeny. As they generally have free living embryos, the acquisition of the necessary developmental series is relatively easy, when compared with many other vertebrates. Amongst frogs, because of the diversity of reproductive modes (which includes direct developers), pipids offer a rare opportunity to investigate how parental care may have influenced development in general and skeletal developmental pathways in particular. Besides, the family Pipidae is also a relatively early offshoot of the anuran tree of life, presenting a unique combination of plesiomorfic characteristics and exclusive derived characteristics, some of which seems to represent adaptations to an aquatic lifestyle. Here in, I describe the development of the cranium of Pipa arrabali and compare the data available to other species in the group, including other Pipidae and Xenoanura. For the morphological analyses, I used 51 embryos in different developmental stages. To observe the skeletal structures the specimens were cleared and double stained for cartilage and bone differentiation. The chondrocranium of this species is characterized by several reductions or absence of structures, with a concentration of these modifications in the ethmoidal and anterior regions. When compared to other species, it seems obvious that heterocrony is a pervasive mechanism for the ontogenetic modifications observed / Mestre

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000432086-Texto+Completo-0.pdf: 1674235 bytes, checksum: 2ed5ea531f6750c937a1c83b125d4be9 (MD5) Previous issue date: 2011 / Lithium has been the mainstream treatment for bipolar disorder since 1950s, offering unequivocal prophylactic and acute efficacy against maniac and depressive episodes despite challenges in managing bipolar disorder during pregnancy and the perinatal period. The mechanisms underlying lithium effects are still elusive but exacerbation of wnt-β-catenin signaling system due to GSK-3 inhibition is believed to be its main target. In this study we evaluated effects of lithium exposure during zebrafish early development including behavioral and molecular characterization of the wnt-β-catenin system. Embryos were individually treated for 72hpf with LiCl at 0. 05, 0. 5 and 5mM. No significant malformation and embryotoxic effects were observed. At 10dpf 0. 5 and 5mM lithium-treated larvae showed decreased locomotory behavior resembling lithium-induced Floppy baby syndrome neurobehavioral symptoms. Western blot analysis of selected wnt-β-catenin system components showed an increased β-catenin and decreased N-cadherin protein levels at the end of treatment unaccompanied by wnt3a changes, reinforcing current view of GSK-3 inhibition as the main mechanism of lithium effects. At 10 dpf protein levels were reestablished on control levels for all previously treated groups. qPCR analysis of β-catenin and N-cadherin showed no effects of lithium on these genes expression suggesting protein changes were due to post-transcriptional events. While c-myc gene expression remained unaltered during evaluated periods, cyclin d1 was decreased at 3dpf, and CamkIV oscillated. / Lítio tem sido o principal tratamento para desordens bipolares desde 1950, oferecendo um efeito profilático e agudo contra os episódios maníacos e depressivos, apesar dos desafios encontrados na sua administração durante a gravidez e o período perinatal. Os mecanismo por trás dos efeitos do lítio ainda não foram descritos completamente mas existem evidencias de um efeito sobre a via Wnt-ß-catenina devido a sua capacidade de inibição sobre a GSK-3ß. Neste estudo nós avaliamos os efeitos da exposição ao lítio durante o desenvolvimento inicial de Zebrafish incluindo caracterizações comportamentais e moleculares do sistema Wnt-ß-catenina-Caderina. Embriões foram tratados individualmente por 72hpf com LiCl 0. 05, 0. 5 e 5 mM. Não foram observadas malformações significativas nem efeitos embriotóxicos. Em 10 dpf animais tratados com 0. 5 e 5 mM de lítio demonstraram habilidades locomotoras similares a síndrome induzida por lítio em humanos Floppy baby syndrom. Análises através da técnica de Western blot demonstraram uma expressão aumentada nos níveis de ß-catenina e diminuída para N-caderina. Animais com 10dpf reestabeleceram seus níveis de expressão proteica de acordo com o controle. Análises através da técnica de qPCR não demonstraram nenhum efeito sobre os níveis de ß-catenina ou N-caderina, sugerindo a ocorrência de mudanças pós-transcricionais. Enquanto os níveis de c-myc não foram alterados, houve uma diminuição nos níveis de Cyclin D1 em larvas de 3dpf, enquanto os níveis de CamkIV ocilaram.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-28Bitstream added on 2014-06-13T21:00:34Z : No. of bitstreams: 1 carvalhobatista_a_me_botib_parcial.pdf: 551790 bytes, checksum: 39071529c2f3d0dd3d7dd8196bf2322c (MD5) Bitstreams deleted on 2014-06-27T19:00:48Z: carvalhobatista_a_me_botib_parcial.pdf,Bitstream added on 2014-06-27T19:02:03Z : No. of bitstreams: 1 carvalhobatista_a_me_botib.pdf: 1703783 bytes, checksum: e2cb73c96ed8c819313a3d0a2cc22287 (MD5) / O presente trabalho averiguou os efeitos da ressurgência de Cabo Frio sobre a dinâmica e a estrutura genética populacional do camarão Artemesia longinaris Spence Bate, 1888. As coletas foram realizadas em duas regiões do sudeste brasileiro, sendo uma localizada ao norte da ressurgência de Cabo Frio (Macaé – RJ) e outra ao sul (Ubatuba – SP). Os objetivos foram comparar a abundância, o tamanho médio dos indivíduos, a proporção sexual, o tamanho da maturidade sexual (CL50), o período reprodutivo, o recrutamento juvenil, o crescimento e a longevidade em ambas as áreas. Foram capturados 51221 indivíduos em Macaé e 757 em Ubatuba. Apenas para as fêmeas foi constada diferença significativa no tamanho médio dos indivíduos entre as duas regiões, com o maior tamanho sendo verificado em Macaé (15,9 ± 3,10 mm) e contrapondo Ubatuba, com 14,2 ± 2,55 mm. Em ambas as regiões, a proporção sexual foi desviada em favor das fêmeas. Os valores de CC50 foram de 12,2 mm para os machos e 15,7 mm para as fêmeas em Macaé, e 12,0 mm para os machos e 13,8 mm para as fêmeas em Ubatuba. Em ambas as áreas a reprodução contínua foi constatada, porém dois picos foram verificados, sendo em Macaé um no inverno e no verão e, em Ubatuba,um na primavera e outro no verão . O recrutamento juvenil também foi contínuo com dois picos para as duas regiões, sendo um na primavera e outro no final do verão em Macaé, e um na primavera e outro no início do outono em Ubatuba. As estimativas dos parâmetros de crescimento em Macaé foram de CC∞ = 20,07 mm; k = 0,01/dia; t0 = 0,403 para os machos e de CC∞ = 26,93 mm; k = 0,007/dia; t0 = 0,338 para as fêmeas. Já para Ubatuba, as estimativas foram de CC∞ = 16,57 mm; k = 0,016/dia; t0 = 0,44 para os machos e CC∞ = 20,59 mm; k = 0,012/dia; t0 = 0,116 para... / The present work investigated the effects of upwelling from Cabo Frio on the dynamics and on the population genetic structure of the shrimp Artemesia longinaris Spence Bate, 1888. Samples were performed in two Brazilian Southeast regions, one of them located at north of Cabo Frio upwelling (Macaé – RJ) and the other at south (Ubatuba – SP). The aims of this work were to compare abundance, size, average size of individuals, sex ratio, size at sexual maturity (CL50), reproductive period, juvenile recruitment and longevity in both areas. A total of 51,221 individuals were captured at Macaé and, at Ubatuba, 757 individuals were caught. A significant difference on the average size between the two regions was observed only in females, with the greatest size found at Macaé (15,9 ± 3,10 mm), whereas average size at Ubatuba was 14,2 ± 2,55 mm. At both regions, sex ratio was in favor of females. The values for CL50 were estimated as 12.2 mm in males and 15.7 mm in females at Macaé and, at Ubatuba, as 12.0 mm and 13.8 mm, in males and females, respectively. A continuous reproduction was verified at both regions, but two peaks were observed: spring and autumn, for Macaé, and spring and summer, for Ubatuba. Juvenile recruitment also was continuous, with two peaks for both regions: spring and late summer, for Macaé, and spring and early autumn, for Ubatuba. Growth parameters in Macaé were estimated as CL∞ = 20,07mm; k = 0,01/day; t0 = 0,403 in males and estimated as CL∞ = 26,93 mm; k = 0,007/day; t0 = 0,338 in females. In Ubatuba, values were estimated as CL∞ = 16,57 mm; k = 0,016/day; t0 = 0,44 in males and CL∞ = 20,59 mm; k = 0,012/day; t0 = 0,116 in females. Longevity was estimated as 457 days (1.25 years) in males and 643 days (1.76 years) in females of Macaé, and 294 days (0.81 years) in males and 400 days... (Complete abstract click electronic access below)