Made available in DSpace on 2017-07-24T19:38:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Elementos pre-textuais.pdf: 567197 bytes, checksum: b26ed97be7d0d26d6ba01f298cc6bef8 (MD5) Previous issue date: 2009-06-29 / This study aimed to chemically analyze extracts of propolis samples and leaves of plant species of the Baccharis genus in the region of Ponta Grossa - PR, to classify the regional propolis compared to the green propolis (PG12). Baccharis dracunculifolia, the source of green propolis, may present metabolic changes related to environmental factors. To compare with published data, the essential oils obtained by hydrodistillation from the leaves of female (0.81%) and male (0.85%) specimens of B. dracunculifolia harvested in the dry season were analyzed by GC-MS. The two samples showed a low monoterpenes/sesquiterpenes ratio (0.85/96.88% ♀; 2.35/ 95.25% ♂). The monoterpenes b-pinene, limonene and terpinen-4-ol were identified. The main sesquiterpenes hydrocarbons are b-caryophyllene (♀ 7.88%; ♂ 8.88%), b-humulene (♀ 4.61%; ♂ 2.18%), germacrene D (♀ 5.53%; ♂ 4.04%) trans-b- guaiene (♀ 7.98%; ♂ 6.06%) and cadinene (♀ 7.34%; ♂ 5.48%). The oxygenated sesquiterpenes (E)-nerolidol (♀ 24.69%; ♂ 17.16%) and spathulenol (♀ 14.62%; ♂ 21.39%) were found as the major constituents. The high yield, the low monoterpenes / sesquiterpenes ratio and the high proportions of oxygenated sesquiterpenes are the main characteristics of the essential oil of B. dracunculifolia from this region. The leaves of three species of Baccharis (B. dracunculifolia, B. semiserrata and B. uncinella) were extracted using a Soxhlet apparatus with the sequence of solvents chloroform, ethyl acetate and methanol, and the extracts were analyzed by TLC, UV and HPLC. Free phenolic acids were identified: caffeic acid (Bd ♀ and Bd ♂), p-coumaric acid (Bd ♀), ferulic acid (Bd ♀, ♂ Bd, Bu and Bs) and the flavonoid rutin (Bd ♀, Bd ♂, Bu). Thus, it is demonstrated for the first time, the co-occurrence of polar phenolic substances in these three plant species. The ethanol extracts obtained from 13 samples of propolis were analyzed by TLC-HR and UV-VIS, allowing the classification of the regional propolis in three groups. The most characteristic sample of each type (ADI, WS- 3, RS-2) was chosen for analysis by HPLC in comparison with green propolis PG12. Fresh sprouts of male and female specimens of B. dracunculifolia were extracted by rinsing with methanol and the extracts were analyzed by HPLC. All extracts of propolis and B. dracunculifolia showed artepillin C ensuring that this plant is the source of regional propolis. The caffeic acid, ferulic acid and p-coumaric acid were identified in the four samples of propolis. Apigenin is present only in the regional propolis samples, between 2.4% and 3.9%, while crisin was identified only in the PG12, but as a main component (18.1%). An unidentified flavonoid (lma x 365 nm, 42,96 min) is the main substance present in the three samples of regional propolis and also the extract obtained by the rinsing of the plant sprouts. All the ethanol extracts of regional propolis showed excellent levels of antioxidant activity when tested against the radical DPPH, several of them getting to be more effective than the PG12. A comparative analysis of antioxidant power and chemical composition of the samples indicates that the unidentified flavonoid is responsible for the strong antioxidant activity of ADI and WS-2 compared to RS-2 and PG12. / Neste trabalho, foram analisados extratos de amostras de própolis e de folhas de espécies vegetais do gênero Baccharis da região de Ponta Grossa – PR, visando classificar a própolis regional em comparação com a própolis verde (PG12). Baccharis dracunculifolia, a fonte da própolis verde, pode apresentar variações metabólicas relacionadas a fatores ambientais. Para comparar dados publicados sobre esta planta com dados obtidos do vegetal coletado nesta região, foram analisados por CG-EM os óleos essenciais obtidos por hidrodestilação das folhas de espécimes feminino (0,81%) e masculino (0,85%) de B. dracunculifolia colhidos na estação seca. As duas amostras apresentaram baixa razão monoterpenos/sesquiterpenos (0,85/96,88% ♀; 2,35/95,25% ♂). Foram identificados os monoterpenos b-pineno, limoneno e terpinen-4-ol. Os sesquiterpenos hidrocarbonetos principais foram: b-cariofileno (♀ 7,88%;♂ 8,88%), a-humuleno (♀ 4,61%; ♂ 2,18%), germacreno D (♀ 5,53%; ♂ 4,04%), trans-b- guaieno (♀ 7,98%; ♂ 6,06%) e d-cadineno (♀ 7,34%; ♂5,48%). Os sesquiterpenos oxigenados (E)-nerolidol (♀ 24,69%; ♂ 17,16%) e espatulenol (♀ 14,62%; ♂ 21,39%) se encontraram como constituintes majoritários. O alto rendimento, a baixa relação monoterpenos/sesquiterpenos e as altas proporções de sesquiterpenos oxigenados são as principais características do óleo essencial de B. racunculifolia desta região. As folhas de três espécies de Baccharis (B. dracunculifolia, B. semiserrata e B. uncinella) foram extraídas em aparelho Soxhlet com a sequência de solventes clorofórmio, acetato de etila e metanol, analisando-se os extratos por CCD, UV e CLAE. Foram dentificados os ácidos fenólicos livres: ácido caféico (Bd ♀ e Bd ♂), ácido p-cumárico (Bd ♀), ácido ferúlico (Bd ♀, Bd ♂, Bu e Bs) e o flavonóide rutina (Bd ♀, Bd ♂, Bu). Assim, demostrou-se, pela primeira vez, a co-ocorrência de substâncias fenólicas polares nestas três espécies vegetais. Os extratos etanólicos obtidos de 13 amostras de própolis foram analisados por CCD-AR e UV-VIS, permitindo classificar as própolis regionais em três grupos. Foi escolhida a amostra mais característica de cada grupo (ADI, WS-3, RS-2) para análise por CLAE em comparação com a própolis verde PG12. Brotos frescos dos espécimes masculino e feminino de B. dracunculifolia foram extraídos por enxágüe com metanol e também submetidos à análise por CLAE. Todos os extratos, de própolis e de B. dracunculifolia, apresentaram artepilina C garantindo que esta é a fonte vegetal da própolis regional. Os ácidos caféico, ferúlico e pcumárico foram identificados nas quatro amostras de própolis. Apigenina estaria presente somente nas própolis regionais, entre 2,4% e 3,9%, enquanto a crisina foi identificada somente na PG12, mas como componente principal (18,1%). Um flavonoide (lmáx 365 nm, 42,96 min) é a substância principal das três amostras de própolis regionais e também do extrato obtido por enxágue dos brotos da planta, mas não foi identificado. Todos os extratos etanólicos de própolis regionais apresentaram excelentes níveis de atividade antioxidante quando testados frente ao radical DPPH, vários deles chegando a ser mais efetivos que o da PG12. Uma análise comparativa do poder antioxidante e da composição química das amostras permitem concluir que o flavonóide não identificado é o responsável pela fortíssima atividade antioxidante de ADI e WS-2 em comparação com RS-2 e PG12.

Made available in DSpace on 2017-07-24T19:38:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vanessa Cristina Godoy Jasinski.pdf: 3849900 bytes, checksum: f8ecb7e08b0fac6fae8e4aec5fe4c1e3 (MD5) Previous issue date: 2010-03-12 / This study aimed to: develop methodological sequences for the collection and analysis of essential oils and phenolic compounds of B. uncinella, applicable to the study of other species of the genus Baccharis; determined by techniques of gas chromatography-mass spectrometry, the chemical composition of essential oils from the leaves of male and female specimens of B. uncinella from different populations of the plant growing in nature; isolate and determine the chemical structure of phenolic compounds present in leaves using mainly chromatographic and spectroscopic methods. In the Campos Gerais of Paraná, it was observed the occurrence of two supposed varieties of B. uncinella, Bu1 and Bu2, with markedly different sizes and quite different flowering times. For the first time the leaves were collected from male and female specimens of two populations of B. uncinella, proceed to the extraction and analysis of essential oils by GC-MS techniques. The essential oils of four samples had very similar compositions, as opposed to frequently published data indicating no difference between the compositions of oils of male and female specimens of the same species of Baccharis. The results obtained in this study are due to the care in collections of male and female specimens (in the same place and time), in the preparation of material (careful separation of the leaves), using the same conditions in the hydrodestillation and analysis by CG-EM . All four samples had low levels of monoterpenes and the following sesquiterpenes as the main components: caryophyllene (Bu1 10.03% and Bu1 7.64%; Bu2 6.06% and Bu2 7.96%); spathulenol (Bu1 28.99% and Bu1 29.68%; Bu2 24.30% and Bu2 16.94%), caryophyllene oxide (Bu1 12.98% and Bu2 14.24%; Bu2 9.75% and Bu2 23.52%). These results also confirmed the botanical identifications that were made based on the morphology of flowers, indicating the inexistence of the supposed sub-species. The water remaining after the hydrodestillation was extracted with CHCl3 and then with AcOEt, yielding four extracts containing mainly 3.5-dicaffeoylquinic and 3.4-dicaffeoylquinic acids, as demonstrated by analysis of their 1H and 13C NMR spectra. The leaves were also extracted in Sohxlet using three solvents in sequence: CHCl3, AcOEt and MeOH. Part of the methanol extract was purified by dissolving it in water, removing the precipitates formed by a cold rest and extracting it with AcOEt. The extract thus obtained with ethyl acetate was subjected to several vacuum chromatography steps leading to the isolation and identification of 3,5- dicaffeoylquinic acid by the analysis of its 1H and 13C NMR spectra. This route to the phenolic compounds was improved by obtaining extracts with ethyl acetate from aqueous solution at pH 8 and pH 3. The extract made in slightly alkaline conditions contained mainly flavonoids, while the one obtained at pH 3 contained derivatives of quinic acid. The AcOEt extract at pH 8 was fractionated on silica gel column under pressure leading to the isolation of three flavonoids identified by their UV, 1H and 13C NMR spectra (quercetin, luteolin and apigenin). The AcOEt extract at pH 4 was fractionated on a silica gel column leading to the isolation and identification of 3,4-dicaffeoylquinic acid by the 1H and 13C NMR spectra. / Este estudo teve como objetivos: desenvolver seqüências metodológicas para a obtenção e análise de óleos essenciais e compostos fenólicos de B. uncinella, aplicáveis ao estudo de outras espécies do gênero Baccharis; determinar por técnicas de cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas, a composição química dos óleos essenciais das folhas de espécimes masculinos e femininos de B. uncinella procedentes de diferentes populações da planta crescendo in natura; isolar e determinar a estrutura química de compostos fenólicos presentes nas folhas utilizando, principalmente, métodos cromatográficos e espectrométricos. Nos Campos Gerais do Paraná, foi observada a ocorrência de duas supostas variedades de B. uncinella, Bu1 e Bu2, com portes acentuadamente diferentes e épocas de floração bem distintas. Pela primeira vez foram coletadas as folhas de espécimes masculinos e femininos de duas populações de B. uncinella, procedendo-se à extração e análise de seus óleos essenciais por técnicas de CG-EM. Os óleos essenciais das quatro amostras apresentaram composições muito semelhantes, em contraposição a dados frequentemente publicados, que indicam haver diferenças entre as composições de óleos de espécimes masculinos e femininos da mesma espécie de Baccharis. O resultado obtido na presente pesquisa se deve aos cuidados tomados nas coletas dos espécimes masculinos e femininos (mesmo local e horário), na preparação do material (separação minuciosa das folhas), no uso das mesmas condições nas hidrodestilações e nas análises por CG-EM. Todas as quatro amostras apresentaram baixos teores de monoterpenos e os seguintes sesquiterpenos como principais componentes: cariofileno (Bu1 10,03% e Bu1 7,64%; Bu2 6,06% e Bu2 7,96%); espatulenol (Bu1 28,99% e Bu1 29,68%; Bu2 24,30 %e Bu2 16,94%); cariofileno óxido (Bu1 12,98% e Bu2 14,24%; Bu2 9,75% e Bu2 23,52%). Estes resultados também confirmaram as identificações botânicas feitas com base na morfologia das flores, indicando a inexistência da suposta variedade. As águas restantes após as hidrodestilações foram extraídas com CHCl3 e em seguida com AcOEt, obtendo-se quatro extratos contendo principalmente os ácidos 3,5- dicafeoilquínico e 3,4-dicafeoilquínico, como demonstrado por análises dos seus espectros de RMN de 1H e 13C. As folhas foram também extraídas em Sohxlet por solventes em sequência:CHCl3, AcOEt e MeOH. Parte do extrato metanólico foi purificado dissolvendo-se em água, eliminando os precipitados formados por repouso a frio e extraindo-se com AcOEt. O extrato obtido desta forma com acetato de etila foi submetido a diversas cromatografias a vácuo, sendo isolado e identificado o ácido 3,5-dicafeoilquínico pela análise dos espectros de RMN de 1H e 13C. Esta rota para os compostos fenólicos foi melhorada através da obtenção de extratos com acetato de etila a partir da solução aquosa em pH 8 e em pH 3. O extrato feito em meio levemente alcalino continha principalmente flavonóides, enquanto que o que foi obtido em pH 3 continha os derivados do ácido quínico. O extrato AcOEt em pH 8 foi fracionado em coluna de silica gel sob pressão, levando ao isolamento e identificação de três flavonóides, identificados pelos seus espectros de UV, RMN 1H e 13C (quercetina, luteolina e apigenina). O extrato AcOEt em pH 4 foi fracionado em coluna de sílica gel, isolando-se e identificando-se o ácido 3,4-dicafeoilquínico pelo seus espectros de RMN de 1H e de 13C.

Made available in DSpace on 2017-07-24T19:38:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sayonara.pdf: 7472968 bytes, checksum: e694886193ab3b8672c6e7966326b8b0 (MD5) Previous issue date: 2007-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The secondary metabolites found in leaves, stem bark and log extracts of Baccharis semiserrata DC. (Asteraceae) obtained in a Soxhlet apparatus with the sequence of solvents chloroform, ethyl acetate and methanol, were investigated using TLC and UV techniques. The analyses indicated that the phenolic compounds present in the organic extracts are mainly arylpropenoic acids or derivatives, that concentrate on the leaves ethyl acetate extract. The essential oil from the leaves obtained by steam distillation was GC-MS analyzed, and has spathulenol 25.8%, cadinene 16.7%, valencene 14.9% and aromadendrene 13.8% as the main components. The essential oils obtained by hydrodistillation from leaves of the feminine (0.13%) and masculine (0.45%) specimens of Baccharis semiserrata, collected in the Paraná State - Brazil, were analyzed in detail by GC and GC-MS. Both samples have low monoterpene content and they present the sesquiterpene spathulenol as the main component, reaching 50.75% in the oil of the masculine specimen and 42.65% in the feminine one. The antimicrobial activities of the organic extracts were measured against strains of the bacteria Bacillus cereus, Enterococcus faecalis, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus and Staphylococcus saprophyticus, and of the microfungus Candida albicans, using diffusion techniques in solid mean, that resulted in moderate activity. The stem bark extracts usually were more active, especially the methanol extract against S. aureus. The minimum inhibitory concentrations of the essential oil were determined using the technique of dilution in broth, against S. aureus, P. aeruginosa and C. albicans (50/mL). The aqueous extract from leaves of feminine B. semiserrata showed the presence of saponins and proteins (4.963 mg/mL). The biochemical analysis of the interaction of human erythrocytes ABO+ with 1110/mL of the aqueous extract demonstrated an effect lithic pattern of + 80%, while 550/mL generated varied degrees of hemolysis. For the Oblood type the break only reached 35% in presence of the largest tested concentration. Such results suggest strongly the involvement of the antigenic portions of the system ABO (monosaccharides) and of the Rhesus protein (Rh+ and Rh-) in the observed effects. The aqueous extract when tested in presence of H2O2 and the serotype A+, showed a small reducer effect upon the liberated hemoglobin; for O- none effect could be observed. However, the scavenging capacity of the the aqueous extracts against DPPH radicals at 100M was enough significant: 1.5 x 10-1 and 7.8 x 10-2/mL of the extract reduced 15% and 20% of the sample, respectively. / Os metabólitos secundários presentes em extratos de folhas, cascas do caule e lenho de Baccharis semiserrata DC. (Asteraceae) obtidos em aparelho Soxhlet com a seqüência de solventes clorofórmio, acetato de etila e metanol, foram investigados usando técnicas de CCD e UV. As análises indicaram que os compostos fenólicos presentes nos extratos orgânicos são principalmente ácidos arilpropenóicos ou derivados, que se concentram no extrato acetato de etila das folhas. O óleo essencial das folhas obtido por arraste de vapor foi analisado por CGEM e apresentou espatulenol 25,8%, d-cadineno 16,7%, valenceno 14,9% e aromadendreno 13,8% como principais componentes. Os óleos essenciais obtidos por hidrodestilação das folhas de espécimes feminino (0,13%) e masculino (0,45%) de Baccharis semiserrata, coletadas no Estado do Paraná - Brasil, foram analisados em detalhe por CG e CG-EM. Ambas as amostras têm baixo teor de monoterpenos e apresentam o sesquiterpeno espatulenol como principal componente, atingindo 50,75% no óleo do espécime masculino e 42,65% no do feminino. As atividades antimicrobianas dos extratos orgânicos foram avaliadas contra cepas das bactérias Bacillus cereus, Enterococcus faecalis, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus e Staphylococcus saprophyticus, e da levedura Candida albicans, utilizando técnicas de difusão em meio sólido, com resultados apenas moderados. Os extratos de cascas mostraram, de maneira geral, maior atividade, especialmente o extrato metanólico contra S. aureus. Foram determinadas as concentrações inibitórias mínimas do óleo essencial por diluição em caldo contra S. aureus e P. aeruginosa e C. albicans (50/mL). O extrato aquoso das folhas de B. semiserrata feminina apresentou saponinas e proteínas (4,963 mg/mL). A análise bioquímica da interação de eritrócitos humanos ABO+ com 1110/mL do extrato aquoso demonstrou um efeito lítico padrão de + 80%, enquanto 550/mL gerou graus variados de hemólise. Para a tipagem O- a lise atingiu apenas 35% em presença da maior concentração testada. Tais resultados sugerem fortemente o envolvimento das porções antigênicas do sistema ABO (monossacarídeos) e da proteína Rhesus (Rh+ e Rh-) nos efeitos observados. O extrato aquoso quando testado em presença de H2O2 e sorotipo A+, apresentou um pequeno efeito redutor sobre a hemoglobina liberada; para O- nenhum efeito pode ser observado. Porém, o extrato aquoso mostrou uma capacidade seqüestradora de radicais DPPH a 100 bastante significativa: 1,5 x 10-1 e 7,8 x 10-2/mL do extrato reduziram 15% e 20% da amostra, respectivamente.

Mecanismos de dispersão de diásporos e de recrutamento de plântulas evitam a competição intra-específica e possibilitam a colonização de novos ambientes, sendo etapas muito importantes para o estabelecimento de populações em novos sítios. Em áreas de transição entre florestas e vegetação campestre esses processos não são aleatórios, e sim associados muitas vezes a indivíduos lenhosos isolados em tais áreas de campo ou a formações arbustivas. No sul do Brasil, as Florestas com Araucária formam mosaicos com áreas campestres e observa-se o avanço da floresta sobre os campos. A dissertação tem como objetivo avaliar a cuva de sementes e o padrão de estabelecimento de plântulas de espécies lenhosas florestais associadas a áreas de ecótonos de Floresta com Araucária e campos e a indivíduos lenhosos isolados na matriz campestre. Os estudos foram realizados no Centro de Pesquisas e Conservação da Natureza Pró-Mata PUCRS, em São Francisco de Paula, em vegetação campestre excluída de fogo e de pastejo há 14 anos, circundada por florestas. A dispersão de diásporos foi avaliada mensalmente por um período de oito meses com o uso de coletores de sementes que foram posicionados em ecótonos de floresta e campos com diferentes fisionomias e sob indivíduos lenhosos isolados na matriz campestre. Paralelamente, foi realizada em parcelas permanentes a amostragem de plântulas, no início e no final desse período, sendo assim verificada sua sobrevivência e recrutamento. Os diferentes ambientes foram comparados através de análise de variância univariada e multivariada para verificar padrões de chuva de sementes e de estabelecimento de plântulas. Os resultados indicaram que tanto a dispersão de sementes quanto o estabelecimento de plântulas em áreas campestres ocorrem preferencialmente associados a indivíduos isolados de Araucaria angustifolia e a formações arbustivas de Baccharis uncinella e que tais ambientes funcionariam como extensões de condições mais semelhantes à floresta na matriz campestre. / Mechanisms of seed dispersal and recruitment avoid intraspecific competition and are crucial steps for the establishment of populations in new sites. In transition areas between forest and grassland, these processes are not spatially random, but often associated to isolated woody individuals in the grassland or to areas with continuous shrub cover. In southern Brazil, Araucaria forest form mosaics with grassland (Campos) and advance of forest over grassland is observed. This dissertation aims at evaluating diaspore dispersal and the pattern of woody plants seedling establishment associated to ecotones between Araucaria forest and grassland and to isolated woody individuals in the grassland matrix. The study was performed in the Centro de Pesquisas e Conservação da Natureza Pró-Mata PUCRS, in São Francisco de Paula, in grassland vegetation excluded from fire and grazing from 14 years, and which is surrounded by forest. Diaspore dispersal was evaluated for eight months by using seed colectors positioned in forest-grassland ecotones with different physiognomies and under isolated woody individuals in the grassland matrix. In a parallel study, permanent plots were evaluated for seedling establishment at the begining and at the end of the period, which allowed the evaluation of seedling survival and new recruitment. The different types of environment were compared by univariate and multivariate analysis of variance to reveal patterns of seed rain and seedling establishment. The results indicated that both seed dispersal and seedling establishment occur preferentially associated to isolated woody individuals of Araucaria angustifolia and to continuous patches of Baccharis uncinella. We sugest such environments would function as extensions of more similar forest conditions within the grassland matrix.

Mecanismos de dispersão de diásporos e de recrutamento de plântulas evitam a competição intra-específica e possibilitam a colonização de novos ambientes, sendo etapas muito importantes para o estabelecimento de populações em novos sítios. Em áreas de transição entre florestas e vegetação campestre esses processos não são aleatórios, e sim associados muitas vezes a indivíduos lenhosos isolados em tais áreas de campo ou a formações arbustivas. No sul do Brasil, as Florestas com Araucária formam mosaicos com áreas campestres e observa-se o avanço da floresta sobre os campos. A dissertação tem como objetivo avaliar a cuva de sementes e o padrão de estabelecimento de plântulas de espécies lenhosas florestais associadas a áreas de ecótonos de Floresta com Araucária e campos e a indivíduos lenhosos isolados na matriz campestre. Os estudos foram realizados no Centro de Pesquisas e Conservação da Natureza Pró-Mata PUCRS, em São Francisco de Paula, em vegetação campestre excluída de fogo e de pastejo há 14 anos, circundada por florestas. A dispersão de diásporos foi avaliada mensalmente por um período de oito meses com o uso de coletores de sementes que foram posicionados em ecótonos de floresta e campos com diferentes fisionomias e sob indivíduos lenhosos isolados na matriz campestre. Paralelamente, foi realizada em parcelas permanentes a amostragem de plântulas, no início e no final desse período, sendo assim verificada sua sobrevivência e recrutamento. Os diferentes ambientes foram comparados através de análise de variância univariada e multivariada para verificar padrões de chuva de sementes e de estabelecimento de plântulas. Os resultados indicaram que tanto a dispersão de sementes quanto o estabelecimento de plântulas em áreas campestres ocorrem preferencialmente associados a indivíduos isolados de Araucaria angustifolia e a formações arbustivas de Baccharis uncinella e que tais ambientes funcionariam como extensões de condições mais semelhantes à floresta na matriz campestre. / Mechanisms of seed dispersal and recruitment avoid intraspecific competition and are crucial steps for the establishment of populations in new sites. In transition areas between forest and grassland, these processes are not spatially random, but often associated to isolated woody individuals in the grassland or to areas with continuous shrub cover. In southern Brazil, Araucaria forest form mosaics with grassland (Campos) and advance of forest over grassland is observed. This dissertation aims at evaluating diaspore dispersal and the pattern of woody plants seedling establishment associated to ecotones between Araucaria forest and grassland and to isolated woody individuals in the grassland matrix. The study was performed in the Centro de Pesquisas e Conservação da Natureza Pró-Mata PUCRS, in São Francisco de Paula, in grassland vegetation excluded from fire and grazing from 14 years, and which is surrounded by forest. Diaspore dispersal was evaluated for eight months by using seed colectors positioned in forest-grassland ecotones with different physiognomies and under isolated woody individuals in the grassland matrix. In a parallel study, permanent plots were evaluated for seedling establishment at the begining and at the end of the period, which allowed the evaluation of seedling survival and new recruitment. The different types of environment were compared by univariate and multivariate analysis of variance to reveal patterns of seed rain and seedling establishment. The results indicated that both seed dispersal and seedling establishment occur preferentially associated to isolated woody individuals of Araucaria angustifolia and to continuous patches of Baccharis uncinella. We sugest such environments would function as extensions of more similar forest conditions within the grassland matrix.

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA14MA147.pdf: 1952248 bytes, checksum: 65c75c63c1e7587bc9ef0f1e1a53f8c6 (MD5) Previous issue date: 2014-07-10 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus is an ectoparasite, hematophagous and monoxenous, whose preferential host are the bovines, is one of the major obstacles for cattle raising production due to economic damages from its parasitism. Throughout Brazil, and in the wide area where pampa biome is, cattle raising plays a key role in economy development. The present project aimed to explore the potential of the pampa biome native flora by investigating the in vitro acaricide effect of Baccharis trimera, Vernonia nudiflora and Eupatorium buniifolium extracts for the control of R. (B.) microplus. Previous tests were needed to evaluate the sensitivity of the strain of R. (B.) microplus used in the study, in commercial basis, also the polysorbate 80 to use it as a solvent of the extracts and three techniques of immersion of larvae using syringes were simultaneously evaluated . It was found that polysorbate 80 at 5% and 10% did not cause mortality rates higher than 3.5% in larvae and engorged females so that it can be used in tests with different instar R. (B.) microplus. Experiment 1 was conducted to compare two new modifications of the Immersion Test Larvae in Syringes original technique (T1), the first modification using 100 larvae and a five-minute immersion (T2), the second consisted in the addition of 2 mL of acaricide solution, 30 seconds immersion in syringes without side hole (T3). There was no statistical difference between techniques, however, due to a better practicality of the technique described by (T3) and reviewers, we chose to use this methodology in essays with plant extracts. Experiment 2 was accomplished to evaluate the acaricidal activity of aqueous extracts, methanol and hexane of V. nudiflora, B. trimera and E. buniifolium in engorged females and larvae of R. (B.) microplus. The use of hexane and methanol extracts of B. trimera induced 38.96% and 52.02% mortality of larvae at the highest concentration tested 25600 μg.mL-1. In engorged females, we observed efficacy V. nudiflora field and B. trimera methanol extracts around 30% at concentrations of 12800 and 1600 μg.mL-1, respectively. The extracts of E. buniifolium and aqueous extracts did not show acaricidal activity. The results indicate acaricide potential of methanol and hexane extracts of gorse in R. (B.) microplus / O carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus é um ectoparasito, hematófago e monóxeno, cujo hospedeiro preferencial é o bovino, sendo um dos grandes entraves para a produção pecuária devido aos prejuízos econômicos decorrentes de seu parasitismo. Em todo o Brasil, e na vasta área onde se estabelece o Bioma Pampa, a pecuária desempenha um papel primordial no desenvolvimento da economia. A realização desse projeto teve como proposta explorar o potencial da flora nativa do Bioma Pampa, investigando o efeito acaricida in vitro de extratos de Baccharis trimera, Vernonia nudiflora e Eupatorium buniifolium em R. (B.) microplus. Ensaios preliminares foram necessários para avaliar a sensibilidade da cepa de R. (B.) microplus, usada no estudo, a bases comerciais, também ao polissorbato 80 para uso deste como solvente dos extratos e foi avaliado simultaneamente três técnicas de imersão de larvas utilizando seringas. Verificou-se que, o polissorbato 80 a 5% e a 10% não provocou mortalidade superior a 3,5% em larvas e teleóginas podendo ser utilizado em testes com diferentes ínstares de R. (B.) microplus. O experimento 1 foi realizado com objetivo de comparar duas novas modificações da técnica original (T1) do Teste de Imersão de Larvas em Seringas, sendo a primeira modificação a utilização de 100 larvas e o tempo de imersão para cinco minutos (T2), a segunda consistiu na adição de 2 mL de solução acaricida, tempo de imersão de 30 segundos em seringas sem orifício lateral (T3). Não houve diferença estatística entre as técnicas, porém, devido à maior praticidade de execução da técnica descrita por (T3), optou-se por usar esta metodologia nos ensaios com extratos de plantas. O experimento 2 foi realizado para avaliar a atividade acaricida dos extratos aquosos, metanólicos e hexânicos de B. trimera, V. nudiflora, e E. buniifolium em larvas e adultos de R. (B.) microplus. A utilização dos extratos metanólicos e hexânicos de B. trimera induziram 38,96% e 52,02% de mortalidade de larvas na maior concentração testada 25600 μg.mL-1. Em teleóginas, observou-se eficácia do extrato metanólico de V. nudiflora e de B. trimera próximo de 30%, nas concentrações de 12800 e 1600 μg.mL-1, respectivamente. Os extratos de E. buniifolium e os extratos aquosos não apresentaram atividade acaricida. Os resultados indicam potencial acaricida dos extratos metanólico e hexânico de B. trimera em R. (B.) microplus

Mecanismos de dispersão de diásporos e de recrutamento de plântulas evitam a competição intra-específica e possibilitam a colonização de novos ambientes, sendo etapas muito importantes para o estabelecimento de populações em novos sítios. Em áreas de transição entre florestas e vegetação campestre esses processos não são aleatórios, e sim associados muitas vezes a indivíduos lenhosos isolados em tais áreas de campo ou a formações arbustivas. No sul do Brasil, as Florestas com Araucária formam mosaicos com áreas campestres e observa-se o avanço da floresta sobre os campos. A dissertação tem como objetivo avaliar a cuva de sementes e o padrão de estabelecimento de plântulas de espécies lenhosas florestais associadas a áreas de ecótonos de Floresta com Araucária e campos e a indivíduos lenhosos isolados na matriz campestre. Os estudos foram realizados no Centro de Pesquisas e Conservação da Natureza Pró-Mata PUCRS, em São Francisco de Paula, em vegetação campestre excluída de fogo e de pastejo há 14 anos, circundada por florestas. A dispersão de diásporos foi avaliada mensalmente por um período de oito meses com o uso de coletores de sementes que foram posicionados em ecótonos de floresta e campos com diferentes fisionomias e sob indivíduos lenhosos isolados na matriz campestre. Paralelamente, foi realizada em parcelas permanentes a amostragem de plântulas, no início e no final desse período, sendo assim verificada sua sobrevivência e recrutamento. Os diferentes ambientes foram comparados através de análise de variância univariada e multivariada para verificar padrões de chuva de sementes e de estabelecimento de plântulas. Os resultados indicaram que tanto a dispersão de sementes quanto o estabelecimento de plântulas em áreas campestres ocorrem preferencialmente associados a indivíduos isolados de Araucaria angustifolia e a formações arbustivas de Baccharis uncinella e que tais ambientes funcionariam como extensões de condições mais semelhantes à floresta na matriz campestre. / Mechanisms of seed dispersal and recruitment avoid intraspecific competition and are crucial steps for the establishment of populations in new sites. In transition areas between forest and grassland, these processes are not spatially random, but often associated to isolated woody individuals in the grassland or to areas with continuous shrub cover. In southern Brazil, Araucaria forest form mosaics with grassland (Campos) and advance of forest over grassland is observed. This dissertation aims at evaluating diaspore dispersal and the pattern of woody plants seedling establishment associated to ecotones between Araucaria forest and grassland and to isolated woody individuals in the grassland matrix. The study was performed in the Centro de Pesquisas e Conservação da Natureza Pró-Mata PUCRS, in São Francisco de Paula, in grassland vegetation excluded from fire and grazing from 14 years, and which is surrounded by forest. Diaspore dispersal was evaluated for eight months by using seed colectors positioned in forest-grassland ecotones with different physiognomies and under isolated woody individuals in the grassland matrix. In a parallel study, permanent plots were evaluated for seedling establishment at the begining and at the end of the period, which allowed the evaluation of seedling survival and new recruitment. The different types of environment were compared by univariate and multivariate analysis of variance to reveal patterns of seed rain and seedling establishment. The results indicated that both seed dispersal and seedling establishment occur preferentially associated to isolated woody individuals of Araucaria angustifolia and to continuous patches of Baccharis uncinella. We sugest such environments would function as extensions of more similar forest conditions within the grassland matrix.

A carqueja, Baccharis trimera (Less) DC (Asteraceae), é uma espécie vegetal de pequeno porte, característica de regiões tropicais muito utilizada na medicina popular como antiinflamatória, hipoglicemiante e em tratamento de problemas digestivos. Este trabalho tem por finalidade o estudo farmacognóstico, farmacológico e toxicológico de B. trimera. O extrato hidroetanólico a 70%, obtido por percolação, a partir da droga pulverizada, foi concentrado e liofilizado. O extrato foi fracionado com solventes de diferentes polaridades (clorofórmio, acetato de etila, etanol e etanol 50%). O perfil cromatográfico foi determinado para os extratos e as frações. A triagem fitoquímica da droga indicou a presença flavonóides, taninos, saponinas e óleos essenciais. O teor de flavonóides verificado na droga foi de 0,05%, no extrato bruto liofilizado, de 0,21%, no extrato liofilizado da \"resina\" (uma mistura viscosa, semi-sólida que ficava depositada no fundo do recipiente) 1,52%, na fração clorofórmica 1,17%, acetato de etila 0,40%, etanólica, 0,17% e etanólica 50%, de 0,10%. A avaliação da atividade antiúlcera do extrato bruto liofilizado e do extrato liofilizado da \"resina\" foi realizada através de indução aguda por etanol acidificado. O extrato bruto liofilizado, na dose de 400mg/kg, reduziu a área de lesão em 90%, 200mg/kg, em 87%, 100mg/kg, em 66% e o fármaco controle (lansoprazol), em 66%. O extrato liofilizado da \"resina\", administrado na dose de 400mg/kg, reduziu a área de lesão em 82%, 200mg/kg, em 82%, 100mg/kg, em 53% e o fármaco controle (lansoprazol), em 70% . A atividade antioxidante foi ensaiada com o extrato bruto liofilizado, com o extrato liofilizado da \"resina\", com o pó da droga e com as frações clorofórmica, acetato de etila, etanol e etanol 50% através do método que reduz o radical 2,2\'-difenil-1-picril-hidrazil (DPPH), permitindo após o equilíbrio da reação, calcular a concentração de antioxidante gasta para reduzir 50% do DPPH, apresentando resultado evidente, comparado à vitamina E. A toxicidade aguda foi avaliada através da administração oral do extrato em dose única de 5g/kg, a camundongos. Após a observação de 14 dias não foi verificada alteração aparente. / This search aims the pharmacognostic, pharmacologic and toxicity study of Baccharis trimera (Less) DC (Asteraceae), a medicinal Brazilian plant well-known by carqueja. Natural from tropical regions, it is a small plant widely used as home-made medicine as anti-inflammatory, hypoglycemiant and for the treatment of digestive problems. The 70% hydroethanolic extract, obtained from the pulverized drug through percolation, was concentrated and lyophilized. The extract was fractioned by using solvents from different polarities (chloroform, ethyl acetate, ethanol and ethanol 50%). The chromatographic fingerprint was determined for the extracts and the fractions. The phytochemical investigation indicated the presence of flavanoids, saponins and essential oils. The content of flavanoids in the drug reached 0,05%, in the lyophilized extract: 0,21%, in the lyophilized resin (portion which during the extracts concentration was settled at the bottom of the recipient, showing a viscous and clammy aspects), reached 1,52%, in the chloroform fraction reached 1,17%, ethyl acetate: 0,40%, ethanolic fraction: 0,17% and ethanolic 50%: 0,10%. The evaluation of the antiulcer activity of the extract and the resin was accomplished through the acute induction by acidified ethanol. The lyophilized extract, at a dose of 400mg/kg, reduced the lesion area at 90%; 200mg/kg, at 87%; 100mg/kg, at 66%; and the control (lansoprazol) at 66%. The resin administered at the 400mg/kg dose reduced the lesion area at 82%; 200mg/kg, at 82%, 100mg/kg, at 53% and the control (lansoprazol), at 70%. The antioxidant activity of the lyophilized extract, of the resin, of the powdered drug, of the chloroform, ethyl acetate, ethanol and 50% ethanol fractions was tested following the method which reduces the 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl(DPPH) radical, permitting after the reaction balance, to calculate the amount of antioxidant spent to reduce 50% of the DPPH. The result was meaningful, when compared with the vitamin E result. The acute toxicity was evaluated after administration of the extract to mice at a 5g/kg single oral dose. No apparent alteration was confirmed after 14 days.

Os neutrófilos são células fagocíticas do sistema imunológico mobilizadas principalmente no combate a infecções. Estas células são capazes de matar os micro-organismos através da desgranulação, que leva à liberação de moléculas antimicrobianas, e da produção de espécies reativas de oxigênio. Embora o recrutamento de neutrófilos seja essencial para a proteção do organismo, sua ativação excessiva resulta na intensa liberação de moléculas citotóxicas no meio extracelular, o que pode desencadear o desenvolvimento e/ou agravar o quadro clínico de doenças autoimunes e inflamatórias, como a artrite reumatoide. Uma possível abordagem terapêutica para o tratamento destas doenças é a modulação das funções efetoras dos neutrófilos. Estudos prévios mostraram que o extrato etanólico das folhas de Baccharis dracunculifolia (EEBd) possui grande potencial terapêutico, uma vez que apresenta expressiva atividade antioxidante frente ao metabolismo oxidativo dos neutrófilos. Para dar continuidade à investigação da atividade anti-inflamatória e/ou imunomoduladora deste extrato, o presente trabalho avaliou, na primeira etapa, o seu efeito modulatório sobre importantes funções efetoras de neutrófilos que medeiam o reconhecimento a e eliminação de patógenos - fagocitose, desgranulação e atividade microbicida - e sobre a atividade de enzimas lisossomais. Verificou-se que o EEBd, dependendo da concentração, inibe o metabolismo oxidativo dos neutrófilos sem alterar a capacidade de defesa das células. Na segunda etapa, foi avaliada a atividade antioxidante de sete compostos isolados do EEBd - ácido cafeico, ácido cumárico, ácido ferúlico, ácido cinâmico, aromadendrina-4?-metil éter, isosacuranetina e hispidulina - frente ao metabolismo oxidativo dos neutrófilos, a fim de propor possíveis marcadores químicos para as atividades biológicas do extrato. Os resultados apontaram o ácido cafeico como um potencial marcador químico da atividade biológica em questão. Na terceira etapa, com o intuito de aumentar a biodisponibilidade e favorecer o uso terapêutico dos produtos naturais estudados, o EEBd e o ácido cafeico foram incorporados em lipossomas, e constatou-se que a incorporação não alterou suas atividades antioxidantes frente aos neutrófilos, quando comparado às respectivas amostras na forma livre. Por fim, foi avaliado o efeito terapêutico do EEBd e do ácido cafeico, ambos na forma livre e incorporada em lipossomas, em um modelo animal de artrite. Verificou-se que as amostras na forma livre melhoraram expressivamente os parâmetros inflamatórios nas articulações, promovendo redução do edema e da migração de células totais e de neutrófilos, e discreta diminuição da concentração das citocinas inflamatórias TNF-?, IL-6 e IL-1?. Além disso, a incorporação do EEBd e do ácido cafeico em lipossomas pode auxiliar na redução das suas concentrações necessárias para a obtenção dos efeitos terapêuticos desejados. Assim, pode-se concluir que o EEBd tem grande potencial para se tornar um agente terapêutico adjuvante no tratamento de doenças inflamatórias mediadas por neutrófilos, sendo o ácido cafeico um possível marcador químico para a atividade anti-inflamatória do extrato. / Neutrophils are phagocytic immune cells mobilized primarily to fight against infections. These cells are capable to kill microorganisms through degranulation, which leads to the release of antimicrobial molecules, and production of reactive oxygen species. Although neutrophil recruitment is essential for host protection, excessive activation of these cells culminates in intense discharge of cytotoxic molecules to the extracellular milieu, which can elicit the development of and/or aggravate the clinical condition in autoimmune and inflammatory diseases such as rheumatoid arthritis. Modulation of the effector functions of neutrophils is a possible therapeutic approach to treat these diseases. Previous studies have shown that the ethanolic extract of Baccharis dracunculifolia leaves (EEBd) has a great therapeutic potential due to its significant antioxidant effect towards the oxidative metabolism of neutrophils. To continue investigating the anti-inflammatory and/or immunomodulatory action of such extract, the first part of the present work examined its modulator effect on three important effector functions of human neutrophils that mediate recognition and clearance of pathogens - phagocytosis, degranulation, and microbial killing - and on the activity of lysosomal enzymes. EEBd inhibited the oxidative metabolism of neutrophils without affecting their defense ability, depending on the extract concentration used. To propose possible chemical markers for the biological effects of the extract, the second part of this study evaluated the antioxidant activity of seven compounds isolated from EEBd - caffeic acid, coumaric acid, ferulic acid, cinnamic acid, aromadendrin-4\'-methyl ether, isosakuranetin, and hispidulin - towards the oxidative metabolism of neutrophils. The results pointed to caffeic acid as a potential chemical marker for this biological activity. The third part of this investigation aimed to improve the bioavailability and favor the therapeutic use of the natural products studied. EEBd and caffeic acid were incorporated into liposomal carrier systems. The incorporation of both samples into liposomes did not alter their antioxidant activity towards neutrophils, as compared with their respective free forms. Finally, this study examined the therapeutic effect of EEBd and caffeic acid, both in the free form and incorporated into liposomes, in an animal model of arthritis. The free samples markedly improved the joint inflammatory parameters: they reduced edema and migration of total cells and neutrophils, and slightly lowered the levels of the inflammatory cytokines tumor necrosis factor ? and interleukin 6 and 1? (TNF-?, IL-6, and IL-1?, respectively). In addition, incorporation of EEBd and caffeic acid into liposomes can help to reduce their concentrations required to achieve the desired therapeutic effect. Based on the set of results obtained in this study, we conclude that EEBd has a great potential to become a therapeutic adjuvant in the treatment of neutrophil-mediated inflammatory diseases, and that caffeic acid is a possible chemical marker of the anti-inflammatory activity of the extract.

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