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Production and characterization of Bt Cry1Ac resistance in bollworm, Helicoverpa zea (Boddie)

Anilkumar, Konasale Jayaramu. Moar, William John, January 2008 (has links)
Thesis (Ph. D.)--Auburn University. / Abstract. Includes bibliographical references.
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Molekulargenetische Untersuchungen zur Abgrenzung von Populationen des Maiszünslers Ostrinia nubilalis Hübner als eine Voraussetzung für das Insektenresistenzmanagement (IRM) von Bacillus thuringiensis-Mais (Bt-Mais)

Liebe, Danila. Unknown Date (has links)
Universiẗat, Diss., 2004--Giessen.
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Sublethal effects of Bacillus thuringiensis Berliner on the diamondback moth, Plutella xylostella (L.), and its natural enemy, Cotesia plutellae Kurdjumov : implications for resistance management /

Grbin, Lynne C. January 1997 (has links) (PDF)
Thesis (Ph. D.)--University of Adelaide, Dept. of Crop Protection, 1998. / Includes bibliographical references (leaves 165-188).
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Sublethal effects of Bacillus thuringiensis Berliner on the diamondback moth, Plutella xylostella (L.), and its natural enemy, Cotesia plutellae Kurdjumov : implications for resistance management

Grbin, Lynne C. January 1997 (has links) (PDF)
Bibliography: leaves 165-188. This research examines biological and behavioural interactions among the diamond-back moth, Plutella xylostella L. (Lepidoptera: Plutellidae), Cotesia plutellae Kurdjumov (Hymenoptera: Braconidae) and the microbial insecticide, Bacillus thuringiensis Berliner. A deterministic simulation model is developed describing the influence of C. plutellae on the evolution of resistance to Bt in a diamond-back moth poulation.
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Development of Methylobacterium extorquens as a recombinant protein production system and the expression of the heterologous cry1Aa gene from Bacillus thuringiensis

Bélanger, Louise January 2003 (has links)
Methylobacterium extorquens ATCC55366 is an interesting candidate for large-scale production of recombinant proteins. Development and optimization of this recombinant expression system were done using the green fluorescent protein (GFP) gene cloned into expression vectors (pRK310 and pCM110) as model systems. Selection of efficient GFP-expressing clones, long-term production stability without selection in flasks, effects of selection, oxygen and methanol supplies, were studied during fed-batch fermentations in a 20-l bioreactor. Sequential batch-culture cultivations in shake flasks showed that specific GFP production was constant in the presence of tetracycline. However, the GFP production decreased in the absence of this selective pressure. In fed-batch fermentations of recombinant M. extorquens ATCC 55366 (pMxaF-GFP), overall GFP yields (≈70 mg/g; GFP/cell dry weight) were not affected by the presence or absence of tetracycline, nor by oxygen and methanol concentration oscillations. The cry1Aa gene from Bacillus thuringiensis kurstaki NRD-12 was cloned in pCM110 and then transformed into M. extorquens. Heterologous expression of the cry1Aa gene in M. extorquens AM1 and ATCC 55366 was detected by immunoblot analyses. This study suggests that M. extorquens can be used as a valuable expression system for intracellular recombinant protein production.
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Efeitos de proteinas Cry e vip nos parâmetros biológicos de populações de Spodoptera frugiperda (Smith, 1797) e injúrias nas plantas de milho por Lepidópteros /

Crosariol Netto, Jacob. January 2017 (has links)
Orientador: Antonio Carlos Busoli / Coorientador: Marcos Doniseti Michelotto / Banca: Julio Cesar Guerreiro / Banca: José Roberto Scarpellini / Banca: Raphael de Campos Castilho / Banca: Arlindo Leal Boiça Junior / Resumo: A lagarta do cartucho Spodoptera frugiperda é a principal praga da cultura do milho nas regiões tropicais e subtropicais do continente americano. Dentre os métodos mais utilizados para o controle desta praga no Brasil, destaca-se o uso de plantas geneticamente modificadas a partir da inserção de um gene da bactéria Bacillus thuringiensis que confere a planta a expressão de proteínas com ações inseticidas. No entanto, durante dois ou três anos estas tecnologias reduziram o grau de supressão às lagartas, principalmente pelo uso continuo e inadequado da tecnologia. O objetivo deste trabalho foi estudar em condições de campo, o comportamento de híbridos de milho Bt frente ao ataque de lepidópteros, como a S. frugiperda e Helicoverpa zea, em quatro regiões produtoras de milho do estado de São Paulo, bem como estudar em condições de laboratório a biologia comparada de populações de S. frugiperda coletadas nestas regiões. Os experimentos de campo foram realizados no período da segunda safra de milho, no ano de 2014, nas regiões do Médio Paranapanema, Centro Norte, Noroeste e Norte do estado de São Paulo, onde foram utilizados 25 cultivares de milho com expressão de diferentes proteínas inseticidas. Para o estudo de biologia comparada foi realizada a coleta de lagartas nas quatro regiões do estado, as lagartas foram enviadas ao laboratório de Manejo Integrado de Pragas da FCAV-Unesp onde foram realizados os experimentos com folhas de híbridos de milho de diferentes tecnologias. Os re... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The fall armyworm Spodoptera frugiperda is the major pest of corn in tropical and subtropical regions in the American Continent. Among the most used methods to control this pest in Brazil, it highlights the use of genetically modified plants from the insertion of a Bacillus thuringiensis gene that confers to the plant the expression of proteins with insecticidal actions. However, after two or three years these technologies reduce the degree of suppression of larvae, mainly due to the continuous and inadequate use of the technology. The objective of this work was to study in field conditions, the behavior of Bt corn hybrids against lepidopteran attacks as S. frugiperda and Helicoverpa zea in four corn-producing regions of São Paulo State, as well as to study in laboratory conditions the comparative biology of populations of S. frugiperda collected in these regions. Field experiments were carried out during the second corn season in 2014 in the regions of Médio Paranapanema, Centro Norte, Noroeste and Norte of São Paulo State where were used 25 corn cultivars with the expression of different insecticidal proteins. To the comparative biology study, the larvae were collected in the four regions of the state, the larvae were sent to Integrated Pest Management Laboratory of FCAV-Unesp where the experiments were carried out with leaves of corn hybrids of different technologies. The results of field experiments demonstrate that the insecticidal protein VIP3Aa20 presents a high level of suppression on the populations of S. frugiperda and H. zea, in addition, the corn hybrids that express the insecticidal protein Cry1F were the most susceptible against the attack of these two pests. Through the results obtained from the experiments of comparative biology, it was verified that the insecticidal protein VIP3Aa20 provided 100% of mortality of la... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor
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Estudos da utilização de sangue de abatedouros como substrato fermentativo para produção de Bacillus thuringiensis por fermentação submersa /

Ernandes, Samara. January 1998 (has links)
Orientador: Iracema de Oliveira Moraes / Resumo: Não disponível / Abstract: Not available / Mestre
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Estudo da atividade tóxica para Aedes aegypti das proteínas Cry4Aa e Cry4Ba de Bacillus thuringiensis expressas em baculovírus recombinantes

Corrêa, Roberto Franco Teixeira 14 June 2007 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2007. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2010-01-25T14:46:22Z No. of bitstreams: 1 2007_RobertoFTCorrea.pdf: 4112592 bytes, checksum: 52046698f69dc6f05f1105cdddeed69d (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-01-25T21:04:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_RobertoFTCorrea.pdf: 4112592 bytes, checksum: 52046698f69dc6f05f1105cdddeed69d (MD5) / Made available in DSpace on 2010-01-25T21:04:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_RobertoFTCorrea.pdf: 4112592 bytes, checksum: 52046698f69dc6f05f1105cdddeed69d (MD5) Previous issue date: 2007-06-14 / Os genes cry4Aa e cry4Ba, pertencentes a diferentes estirpes brasileiras de Bacillus thuringiensis, S1806 e S1989, respectivamente, foram amplificados por PCR e clonados em um vetor de clonagem. A análise do seqüenciamento do gene cry4Aa mostrou alta identidade com outras seqüências do gene já descritas e este foi clonado tanto no vetor de transferência pSynXIVVI+X3, como no pFastBac®1 para expressão e análise da toxicidade da proteína heteróloga a partir dos baculovírus construídos por recombinação homóloga, vSyncry4Aa, e por transposição sítio-específica, vBacCry4Aa. O gene cry4Ba foi introduzido no vetor pSynXIVVI+X3 dando origem, por recombinação homóloga, ao baculovírus recombinante vSyncry4Ba. Os vírus recombinantes, derivados de recombinação homóloga, foram isolados em placas de 96 poços, enquanto o vírus recombiante obtido por transposição foi isolado de colônias de células de Escherichia coli DH10BacTM crescidas em placas de Petri contendo antibióticos, X-Gal e IPTG. Células de inseto BTI-TN5B1-4 foram infectadas com os vírus recombinantes isoladamente e mRNA derivados dos extratos celulares (72 h.p.i.) analisados por RT-PCR, para confirmação da expressão e presença de transcritos específicos para os genes. Extratos de larvas de Spodoptera frugiperda, infectadas com os vírus recombinantes (120 h.p.i.) foram analisados por eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), mostrando a presença de bandas de aproximadamente 128 e 130 kDa correspondentes aos tamanhos das proteínas Cry4Aa e Cry4Ba, respectivamente. Possíveis cristais das proteínas recombinantes foram observados por microscopia de luz. Bioensaios com os extratos de insetos infectados mostraram-se tóxicos para larvas de segundo instar de Aedes aegypti. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The cry4Aa and cry4Ba genes from Brazilian strains of Bacillus thuringiensis, S-1806 and S-1989, respectively, were amplified by PCR, cloned into a plasmid cloning vector and sequenced. Sequence analysis of the cry4Aa gene showed high identity to previous known cry genes and it was cloned into both pSynXIVVI+X3 and pFastBac®1 transfer vectors for expression and toxicity analysis of the heterologous proteins derived from the recombinant baculoviruses constructed by homologous recombination (vSynCry4Aa) and transposition (vBacCry4Aa). The cry4Ba gene was introduced into the transfer vector pSynXIVVI+X3/3 resulting in the construction of the recombinant virus vSynCry4Ba by homologous recombination. The recombinant viruses, derived from homologous recombination, were isolated by serial dilution in 96 well plates while the recombinant virus produced by transposition was isolated from Escherichi coli (DH10BacTM) colonies grown on Petri dishes containing antibiotics, X-Gal and IPTG. Insect cells BTI-TN5B1-4 were separetly infected with the recombinante viruses and mRNA from cell extracts (72 h.p.i.) analysed by RT-PCR, in order to confirm the presence of the genes specific transcripts. Recombinant viruses infected insect extracts (120 h p.i.) were analysed by polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) showing the presence of polypepitide bands of around 128 and 130 kDa, corresponding, respectively to the sizes of the proteins Cry4Aa and Cry4Ba. Putative crystals from the recombinant proteins were observed by light microscopy. Bioassays with virus-infected insect extracts were shown to be toxic to second instar Aedes aegypti larvae.
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Utilização sistêmica de Bacillus thuringiensis para controle de Plutella xylostella na cultura de couve

Balsamo, Rayane January 2009 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2009. / Texto parcialmente liberado pelo autor - sem capítulo 1, resultados e discussões. / Submitted by Allan Wanick Motta (allan_wanick@hotmail.com) on 2010-04-08T13:23:00Z No. of bitstreams: 1 2009_RayaneBalsamo.pdf: 2950463 bytes, checksum: c3c2f767f54d4e7b94255a48940eb6a1 (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-04-19T18:40:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_RayaneBalsamo.pdf: 2950463 bytes, checksum: c3c2f767f54d4e7b94255a48940eb6a1 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-04-19T18:40:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_RayaneBalsamo.pdf: 2950463 bytes, checksum: c3c2f767f54d4e7b94255a48940eb6a1 (MD5) Previous issue date: 2009 / A traça-das-crucíferas (TDC) Plutella xylostella (Lepidoptera: Plutellidae) é a principal praga da cultura das crucíferas e o controle químico é o método mais empregado para reduzir os danos desta praga. Uma alternativa para o controle da P.xylostella é a utilização de agentes de controle biológico, como Bacillus thuringiensis (Bt). Seu uso ainda é restrito, quando comparado aos inseticidas químicos, pois quando aplicado nas folhas, o complexo esporo-cristal fica exposto à radiação solar e é rapidamente desnaturado ou é lavado pela ação das chuvas. A alternativa é o uso endifítico do Bt, que tem a mesma função, sem os limites derivados da baixa ação residual. Este trabalho teve como objetivo determinar o efeito do Bt sobre P. xylostella a partir da aplicação sistêmica da bactéria na planta de couve. Foi utilizado o Bacillus thuringiensis kurstaki marcado com GFP (Btk- GFP), pertencente ao banco de Bacillus spp. da Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia. A estirpe foi crescida por 72 h em meio nutritivo e inoculada perto da raiz das plantas para avaliar a sua atividade tóxica para nas lagartas de P. xylostella. Após a inoculação foram realizados bioensaios para a determinação da mortalidade das lagartas no terceiro instar. Os resultados obtidos mostraram que, a planta absorveu o Btk-GFP do solo e que este se multiplicou em seu interior, protegendo-a contra os insetos. É possível que esses experimentos preliminares estejam abrindo a possibilidade de uma nova forma de utilização de B. thuringiensis no controle de insetos. _________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The diamondback moth (DM) Plutella xylostella (Lepidoptera: Plutellidae) is the major pest of crucifer culture and the chemical control is the method most used to reduce its damage. An alternative to control this pest is the use of biological control agents, such as Bacillus thuringiensis (Bt). Its use is still limited when compared to chemical insecticides, because when applied in complex leaves the spore-crystal is exposed to solar radiation and is rapidly denatured or are "washed" by the action of rain. The alternative is the use of endophitic Bt that has the same function, without the limitation derived from low residual action. This study aimed to determine the effect of Bt on Plutella xylostella from the systemic application of the bacteria in the plant of cabbage. We used the GFP Bacillus thuringiensis kurstaki (Btk-GFP), belonging to the bank of Bacillus spp. at Embrapa Genetic Resources and Biotechnology. The strain was grown for 72 h in nutrient medium and inoculated near the roots of plants to evaluate their toxic activity to the larvae of P. xylostella. After inoculation bioassays were conducted to determine the mortality of the larvae in the third instar. The results showed that the plant absorbs the Btk-GFP from the ground and proliferates in the interior, protecting it against insects. It is possible that these preliminary experiments are opening the possibility of a new way of using B. thuringiensis to control insects.
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Análise ecotoxicológica de diferentes formulações do bioinseticida Bacillus thuringiensis var. israelensis

Vollmann, Ketlyn 26 October 2012 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T06:55:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / O Bacillus thuringiensis var. israelensis (Bti) é uma bactéria entomopatogênica, Gram-positiva, aeróbica facultativa, formadora de esporos que, durante a esporulação, sintetiza um cristal protéico parasporal (?-endotoxina) em adição ao endósporo, tóxico a uma grande variedade de insetos que são economicamente importantes como pestes. Sua ação depende da ingestão dos cristais, que são solubilizados no intestino de larvas susceptíveis, onde as protoxinas são liberadas, formando poros na membrana, causando a morte da larva. Ele tem sido utilizado em Joinville e região para o controle dos mosquitos Aedes aegypti e Simulium pertinax, cujos ataques causam sérios impactos e inconveniência à população ribeirinha e ao turismo local. O objetivo do presente estudo é testar a metodologia de cultivo semi-contínuo para a produção de Bacillus thuringiensis var. israelensis proposta por Silva (2007); desenvolver uma formulação bioinseticida contendo o Bti obtido e verificar sua eficácia no controle populacional de larvas de A. albopictus em comparação com os bioinseticidas comerciais Vectobac AS e Teknar HP-D , bem como sua segurança em testes de toxicidade aguda utilizando, como bioindicadores, organismos não-alvo de diferentes níveis tróficos: o flagelado Euglena gracilis, representando os produtores primários, o microcrustáceo Daphnia similis, representanto os consumidores secundários e o peixe Danio rerio como representante dos consumidores terciários. Sob as condições experimentais utilizadas, a formulação bioinseticida produzida demonstrou ser eficiente para o controle de larvas de A. albopictus, com valores de DL50 de 3,97 mg/L, enquanto que os produtos comerciais formulados Vectobac AS e Teknar HP-D , tiveram valores de DL50 de 0,019 e 0,013 mg/L respectivamente. O bioinseticida Bti-Univille formulado demonstrou ser mais seguro ao organismo não-alvo Daphnia similis (DL50= 130 mg/L) que os produtos comerciais Vectobac AS® (DL50= 50 mg/L) e Teknar HP-D® (DL50= 32 mg/L), requerendo doses maiores para causar a mesma letalidade. Para todas as formulações bioinseticidas testadas, os valores de DL50 à D. similis foram superiores aos de DL50 estimados para o inseto-alvo; frente ao peixe Danio rerio, nenhuma das amostras bioinseticida testadas demonstrou toxicidade em doses até 100 mg/L. Os resultados obtidos nos ensaios de toxicidade aguda com Euglena gracilis foram inconclusivos, sendo necessária a realização de novos testes sob as mesmas condições experimentais para estimar a toxicidade do bioinseticida produzido a este organismo não-alvo.

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