Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-09-01T14:41:43Z No. of bitstreams: 1 2016_DeborahdaCostaLamar.pdf: 2872393 bytes, checksum: 9d419a56e6761d5e59959dc81459806d (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-09-09T12:10:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_DeborahdaCostaLamar.pdf: 2872393 bytes, checksum: 9d419a56e6761d5e59959dc81459806d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-09T12:10:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_DeborahdaCostaLamar.pdf: 2872393 bytes, checksum: 9d419a56e6761d5e59959dc81459806d (MD5) / Bacillus thuringiensis é uma bactéria Gram positiva, produtora de cristais protéicos ou δ-endotoxinas (toxinas Cry e Cyt) durante a fase de esporulação. As toxinas. Cry apresentam atividade inseticida específica, e as toxinas Cyt apresentam atividade citolítica inespecífica. Algumas proteínas produzidas por B. thuringiensis durante a fase de esporulação que não apresentam caráter inseticida, mas apresentam-se tóxica para células tumorais foram descritas. Essas proteínas receberam o nome de Parasporinas (PS), devido à capacidade de produzir cristais paraesporais e até o momento são classificadas em seis tipos (PS1-PS6). Baculovírus são vírus de insetos usados no controle biológico de pragas da agricultura, porém também têm sido muito utilizados como vetores de expressão de proteínas heterólogas em células de inseto. No presente trabalho, o gene ps2 foi montado, por meio de PCR, através de fragmentos sintetizados a partir de uma sequência lotada no banco de dados, e o produto de PCR foi clonado em um vetor de transferência para construção de um baculovírus recombinante. Após obtenção do vírus recombinante, observou-se que células SF9 quando infectadas com vAcPS2, morriam em um tempo curto de infecção, quando comparado com células infectadas com o vírus selvagem. Após purificação, solubilização e ativação da toxina PS2 recombinante, ensaios de viabilidade celular foram feitos com linhagens de células tumorais, câncer mamário (MCF-7) e câncer mamário metastático (MDA-MB-231), células não tumorais humanas (fibroblastos) e células de inseto (Sf9), confirmando a atividade tóxica de PS2 apenas para as células tumorais. _________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Bacillus thunringiensis is a Gram positive bacterium that produces crystal forming proteins called δ-endotoxins (Cry and Cyt toxins), during sporulation phase. Cry toxins show specific insecticidal activity, and Cyt toxins shows non-specific cytolitic activity. Some proteins of B. thuringiensis produced during sporulation have not shown insecticidal activity, but a specific toxic activity to some cancer cells. These proteins were called Parasporins (PS) due to their ability to form paraporal crystals and they are divided in six groups (PS1-PS6). Baculoviruses are insect viruses that have been widely used as biological control of agricultural pests, but also as expression vectors of heterologous proteins in insect cells. In this work, the gene ps2, constructed by PCR, trough fragments synthetized using a gene sequence from a database and cloned in a transfer vector for recombinant virus construction After recombinant virus construction we observed that SF9 cells died faster than cells infected with the wild-type virus. After purification, solubilization and activation of the heterologous protein, cell viability assays was performed with cancer cell lines, breast cancer (MCF-7), metastatic brest cancer (MDA-MB-231), non-tumor human cells (fibroblasts) and insect cells (Sf9) confirming PS2 toxic activity only to cancer cells.

Orientador: Antonio Carlos Busoli / Coorientador: Marcos Doniseti Michelotto / Banca: Julio Cesar Guerreiro / Banca: José Roberto Scarpellini / Banca: Raphael de Campos Castilho / Banca: Arlindo Leal Boiça Junior / Resumo: A lagarta do cartucho Spodoptera frugiperda é a principal praga da cultura do milho nas regiões tropicais e subtropicais do continente americano. Dentre os métodos mais utilizados para o controle desta praga no Brasil, destaca-se o uso de plantas geneticamente modificadas a partir da inserção de um gene da bactéria Bacillus thuringiensis que confere a planta a expressão de proteínas com ações inseticidas. No entanto, durante dois ou três anos estas tecnologias reduziram o grau de supressão às lagartas, principalmente pelo uso continuo e inadequado da tecnologia. O objetivo deste trabalho foi estudar em condições de campo, o comportamento de híbridos de milho Bt frente ao ataque de lepidópteros, como a S. frugiperda e Helicoverpa zea, em quatro regiões produtoras de milho do estado de São Paulo, bem como estudar em condições de laboratório a biologia comparada de populações de S. frugiperda coletadas nestas regiões. Os experimentos de campo foram realizados no período da segunda safra de milho, no ano de 2014, nas regiões do Médio Paranapanema, Centro Norte, Noroeste e Norte do estado de São Paulo, onde foram utilizados 25 cultivares de milho com expressão de diferentes proteínas inseticidas. Para o estudo de biologia comparada foi realizada a coleta de lagartas nas quatro regiões do estado, as lagartas foram enviadas ao laboratório de Manejo Integrado de Pragas da FCAV-Unesp onde foram realizados os experimentos com folhas de híbridos de milho de diferentes tecnologias. Os re... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The fall armyworm Spodoptera frugiperda is the major pest of corn in tropical and subtropical regions in the American Continent. Among the most used methods to control this pest in Brazil, it highlights the use of genetically modified plants from the insertion of a Bacillus thuringiensis gene that confers to the plant the expression of proteins with insecticidal actions. However, after two or three years these technologies reduce the degree of suppression of larvae, mainly due to the continuous and inadequate use of the technology. The objective of this work was to study in field conditions, the behavior of Bt corn hybrids against lepidopteran attacks as S. frugiperda and Helicoverpa zea in four corn-producing regions of São Paulo State, as well as to study in laboratory conditions the comparative biology of populations of S. frugiperda collected in these regions. Field experiments were carried out during the second corn season in 2014 in the regions of Médio Paranapanema, Centro Norte, Noroeste and Norte of São Paulo State where were used 25 corn cultivars with the expression of different insecticidal proteins. To the comparative biology study, the larvae were collected in the four regions of the state, the larvae were sent to Integrated Pest Management Laboratory of FCAV-Unesp where the experiments were carried out with leaves of corn hybrids of different technologies. The results of field experiments demonstrate that the insecticidal protein VIP3Aa20 presents a high level of suppression on the populations of S. frugiperda and H. zea, in addition, the corn hybrids that express the insecticidal protein Cry1F were the most susceptible against the attack of these two pests. Through the results obtained from the experiments of comparative biology, it was verified that the insecticidal protein VIP3Aa20 provided 100% of mortality of la... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2009. / Texto parcialmente liberado pelo autor - sem capítulo 1, resultados e discussões. / Submitted by Allan Wanick Motta (allan_wanick@hotmail.com) on 2010-04-08T13:23:00Z No. of bitstreams: 1 2009_RayaneBalsamo.pdf: 2950463 bytes, checksum: c3c2f767f54d4e7b94255a48940eb6a1 (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-04-19T18:40:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_RayaneBalsamo.pdf: 2950463 bytes, checksum: c3c2f767f54d4e7b94255a48940eb6a1 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-04-19T18:40:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_RayaneBalsamo.pdf: 2950463 bytes, checksum: c3c2f767f54d4e7b94255a48940eb6a1 (MD5) Previous issue date: 2009 / A traça-das-crucíferas (TDC) Plutella xylostella (Lepidoptera: Plutellidae) é a principal praga da cultura das crucíferas e o controle químico é o método mais empregado para reduzir os danos desta praga. Uma alternativa para o controle da P.xylostella é a utilização de agentes de controle biológico, como Bacillus thuringiensis (Bt). Seu uso ainda é restrito, quando comparado aos inseticidas químicos, pois quando aplicado nas folhas, o complexo esporo-cristal fica exposto à radiação solar e é rapidamente desnaturado ou é lavado pela ação das chuvas. A alternativa é o uso endifítico do Bt, que tem a mesma função, sem os limites derivados da baixa ação residual. Este trabalho teve como objetivo determinar o efeito do Bt sobre P. xylostella a partir da aplicação sistêmica da bactéria na planta de couve. Foi utilizado o Bacillus thuringiensis kurstaki marcado com GFP (Btk- GFP), pertencente ao banco de Bacillus spp. da Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia. A estirpe foi crescida por 72 h em meio nutritivo e inoculada perto da raiz das plantas para avaliar a sua atividade tóxica para nas lagartas de P. xylostella. Após a inoculação foram realizados bioensaios para a determinação da mortalidade das lagartas no terceiro instar. Os resultados obtidos mostraram que, a planta absorveu o Btk-GFP do solo e que este se multiplicou em seu interior, protegendo-a contra os insetos. É possível que esses experimentos preliminares estejam abrindo a possibilidade de uma nova forma de utilização de B. thuringiensis no controle de insetos. _________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The diamondback moth (DM) Plutella xylostella (Lepidoptera: Plutellidae) is the major pest of crucifer culture and the chemical control is the method most used to reduce its damage. An alternative to control this pest is the use of biological control agents, such as Bacillus thuringiensis (Bt). Its use is still limited when compared to chemical insecticides, because when applied in complex leaves the spore-crystal is exposed to solar radiation and is rapidly denatured or are "washed" by the action of rain. The alternative is the use of endophitic Bt that has the same function, without the limitation derived from low residual action. This study aimed to determine the effect of Bt on Plutella xylostella from the systemic application of the bacteria in the plant of cabbage. We used the GFP Bacillus thuringiensis kurstaki (Btk-GFP), belonging to the bank of Bacillus spp. at Embrapa Genetic Resources and Biotechnology. The strain was grown for 72 h in nutrient medium and inoculated near the roots of plants to evaluate their toxic activity to the larvae of P. xylostella. After inoculation bioassays were conducted to determine the mortality of the larvae in the third instar. The results showed that the plant absorbs the Btk-GFP from the ground and proliferates in the interior, protecting it against insects. It is possible that these preliminary experiments are opening the possibility of a new way of using B. thuringiensis to control insects.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:05:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1783_1.pdf: 1620607 bytes, checksum: 740dfdb9a7891e7e5c56e5a81432c826 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Bacillus thuringiensis (Bt) é uma bactéria gram-positiva, que produz um cristal, durante a fase de esporulação, composto por proteínas (toxinas Cry) que possuem ação entomocida principalmente para as ordens Lepidoptera, Diptera e Coleoptera. Spodoptera frugiperda (J. E. Smith, 1797) é um lepidóptero neotropical polífago, praga, de milho, algodão e arroz, responsável por perdas de até 30% na produção destas culturas. Este trabalho teve por finalidade identificar e caracterizar genes em cepas de Bt da Paraíba e Pernambuco, que possuíssem ação contra S. frugiperda. Foram utilizados 81 oligonucleotídeos (primers) das famílias cry1 a cry28 e cyt1 e cyt2 para as reações em cadeia da DNA polimerase (PCR), bem como análise bioquímica através de SDS-PAGE. Os fragmentos que foram obtidos no tamanho esperado foram purificados e seqüenciados. Duzentas e uma cepas foram analisadas no presente trabalho, sendo 30 isoladas a partir de amostras de solos de Pernambuco e 171 isolados da Paraíba. Os bioensaios foram realizados avaliando-se quais cepas possuíam atividade tóxica para S. frugiperda e em seguida, foram determinadas as concentrações letais (CL50) das cepas consideradas tóxicas. Em bioensaios com os isolados de Pernambuco, a cepa I4A7 apresentou mortalidade superior a 50% (94,3%) na concentração de 1x109 esporos/ml e CL50 de 76,58 μg/cm2 contra S. frugiperda. Esta cepa apresentou amplicons para os genes cry4Aa, cry4Ba, cry10Aa, cry11Aa, cyt1Aa e cyt2Ba, e proteínas de 130, 70 e 29 kDa, perfis gênico e protéico idênticos aos do B. thuringiensis israelensis (Bti), o qual é relatado na literatura como tóxico para Diptera. Estes fragmentos foram seqüenciados e apresentaram homologia de 99% a 100% com as seqüências dos genes originais depositadas no banco de dados. Nas amostras da Paraíba, apenas dois isolados, BV-5 e AN2-3, apresentaram fragmentos de tamanho esperado, ambos para o par de iniciadores gerais da família cry1. Estas cepas não apresentaram toxicidade contra S. frugiperda. Através da seqüência parcial de nucleotídeos e da seqüência deduzida de aminoácidos dos genes das cepas BV-5 e AN2-3, verificou-se que estes genes possuem maior identidade com genes da família cry8. A seqüência parcial de aminoácidos deduzida do gene da cepa BV-5 apresentou variabilidade na região do domínio II, que é responsável pelo reconhecimento e ligação da toxina. A cepa I4A7 é promissora, e poderá ser usada no manejo integrado de S. frugiperda e/ou manejo de resistência a toxinas Cry. Já as cepas AN2-3 e BV-5 deverão ser testadas contra pragas da ordem Coleoptera para determinar a especificidade das mesmas

Orientador: Mohamed E. M. Habib / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-18T20:42:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mendeleck_Elaine_M.pdf: 7569768 bytes, checksum: 0e9dabbef3e4522a4d36863691c74e32 (MD5) Previous issue date: 1993 / Resumo: Isolada por Krieg e colaboradores em 1982 na Alemanha, a bactéria entomopatogênica Bacillus thuringiensis var Tenebrionis, tem sido considerada um agente para o controle de coleópteros prejudiciais. O presente trabalho teve como objetivo estudar as alterações histológicas, bem como a sintomatologia externa causada pela variedade Tenebrionis em cinco espécies de coleópteros pragas de cereais armazenados. As espécies estudadas foram: Carpophilus sp (Nitidulidae), Chriptollestes ferrugineus (Cucujidae), Lasioderma serriorne (Anobiidae), Tenebrio molitor e Iribolium sp (Tenebrionidae). Para as espécies L. serricorne e Carpophilus sp larvas de terceiro estágio foram utilizadas nas investigações. Para as espécies C. ferrugineus e Tribolium sp, os estudos foram realizados com o estágio adulto. Para I. molitor, as investigações incluíram tanto larvas como adultos. Esses coleópteros foram mantidos em criação de laboratórios sob condições de temperatura, umidade relativa e fotoperíodo em suas dietas específicas ... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Isolated by Krieg et al., in 1982 in Germany, the entomopathogenic bacterium Bacillus thuringiensis var Tenebrionis (H: 8a ¿ 8b), has been considered as promising agent for the control of harmful beetles. The present work was undertaken to study some histological damages as well as sintomatology caused by var Tebrionis in some coleopterou species considered harmful for store products. The following species were studied in the present work Carpophilus sp (Nitidulidae), Chryptolestes ferrugineus (Cucujidae), Lasioderma serriorne (Anobiidae), Tenebrio molitor e Iribolium sp (Tenebrionidae). These insect species were maintened under controlled laboratory conditions ... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Ciências Biológicas

The objectives of this project was to isolate and characterize a Bacillus thuringiensis strain from South African soils, determine its cry gene sequence, clone this gene sequence and determine its toxicity. Forty four putative Bacillus thuringiensis strains were extracted from soil samples taken from the Muldersdrift mountain range, the Roodekrans botanical gardens, Southbroom in Kwazulu Natal and Nelspruit in eastern Mpumalanga province. The bacterial populations of these soil samples were isolated and classified using different microbial, and biochemical techniques including sodium acetate tests to isolate putative B. thuringiensis spores. These spores were cultured and further characterized through colony shape and colour as well as the presence of δ-endotoxin crystals. Once characterized, DNA was extracted from the isolates using an array of techniques to obtain high quality template DNA. This DNA was then screened via PCR using truncated versions of the cry1A specific primers TYIAA (f) and TYIUN12 (r). The insecticidal protein CRY1A was selected for this study since it is specific and highly toxic to lepidopteron insects. Homology to the cry1a gene was detected in six of the Bacillus strains analyzed, namely S4, S9, S10 n1, n3 and n5. PCR products were cloned into the pTZ57R/T cloning vector and transformed into JM109 competent cells. DNA from the six isolates was also characterized at the 16S rDNA level with the use of PCR. Primers capable of amplifying nearly full-length 16S ribosomal DNA (approximately l,500-bp) fragments from many bacterial genera confirmed that the isolates were indeed Bacillus thuringiensis, showing evidence of lineage according to the signature sequences within the conserved regions. Spore/δ-endotoxin mixtures of the randomly selected isolate S10 were used in a bioassay to test their toxicity against the lepidopteron insect Galleria mellonella. No significant mortalities were reported, but sensitivity to the S10 δ- endotoxin was evident when compared to results using known B. thuringiensis δ- endotoxins at the same concentrations.

Field experiments were conducted in Stoneville, MS and Sidon, MS in 2016 and 2017 to evaluate a new transgenic cotton variety (MON 88702) (Cry51Aa2.834_16) and its effects on tarnished plant bug, Lygus lineolaris (Palisot de Beauvois), populations, frequency of insecticide applications, and yield. Experiments were designed to compare the interactions between the Bt traited plots and non-traited plots and the insecticide spray treatments, which consisted of different application thresholds as well as treatments sprayed only during the early season and only during the late season. MON 88702 provided a significant reduction in later instar tarnished plant bug nymphs, dirty squares, and insecticide applications, especially during the late season. MON 88702 also provided a significant increase in yield compared to non-traited plots. By implementing this transgenic approach, the number of insecticide applications necessary to effectively manage tarnished plant bug will be reduced compared to non-transgenic isolines, while also protecting yield.

No description available.

No description available.

Bacillus thuringiensis é uma bactéria do solo, gram-positiva, que se destaca pela capacidade de sintetizar um cristal protéico, adjacente ao esporo, responsável pela ação tóxica contra diversas espécies de dípteros, como a larva do mosquito Aedes aegypti, o qual é o principal vetor da dengue. A dengue hoje é uma das doenças de maior preocupação para as agências de saúde brasileiras, uma vez que o Brasil possui temperatura e condições socio-econômicas que favorecem proliferação do mosquito transmissor. O Brasil se destaca por desenvolver combustíveis alternativos aos combustíveis de origem petrolífera, como etanol e biodiesel. Porém, durante a reação de transesterificação de óleos/gorduras para a produção de biodiesel é gerado também glicerina e, por não haver uma demanda deste sub-produto no mercado mundial, seu destino se tornou um problema e um desafio para as indústrias de biodiesel. Logo, desenvolver um bioinseticida para o combate da dengue empregando a glicerina como fonte de carbono é uma forma de encontrar novas aplicações para a glicerina e contribuir para o controle de uma doença de impacto nacional. Estudos realizados comprovaram que o ácido acético é um composto produzido e consumido pelas células de Bacillus thuringiensis durante seu crescimento. Além disso, apresenta papel fundamental para a produção de um composto chamado poli-?-hidroxibutirato (PHB), que é fundamental no fornecimento de energia para a síntese da toxina. No presente trabalho estudou-se o efeito do ácido acético sobre o crescimento de Bacillus thuringiensis e sobre a atividade larvicida do meio fermentado contra larvas de Aedes aegypti. Foram avaliadas as concentrações de 1 g/L, 3 g/L e 5 g/L de ácido acético nas seguintes fases: (i) início da fermentação, (ii) ponto de valor mínimo de pH e (iii) ponto de desaceleração do aumento do pH. Os ensaios foram realizados em frascos Erlenmeyer de 1000 mL em incubadora de movimento recíproco. Os resultados obtidos demonstraram que a adição de ácido acético no início e no tempo igual a 10 horas de fermentação favorece o crescimento celular e a produção de toxinas. O resultado mais expressivo de produção de toxinas foi obtido com adição de 5 g/L de ácido no início da fermentação. Neste ensaio o resultado de porcentagem de morte de larvas foi 8 superior ao resultado encontrado no ensaio sem adição de ácido (ensaio controle). Já no ensaio com adição de ácido com 20 horas de fermentação foi observada a maior concentração celular máxima, porém, obteve-se uma menor atividade larvicida do meio fermentado, comparado com o ensaio controle. / Bacillus thuringiensis is a gram-positive soil bacterium that is distinguished by the ability of synthesizing a protein crystal adjacent to the spore. This protein is responsible for the toxic action against several species of Diptera, as the larvae of the Aedes aegypti mosquito, which is the main vector of dengue. As Brazil possesses temperature and socioeconomic conditions that favors proliferation of the dengue transmitting mosquito, it is one of the major concerns to health agencies in Brazil. Brazil stands out for developing alternative fuel sources to petroleum fuels such as ethanol and biodiesel. However, during the transesterification reaction of oils/fats for the production of biodiesel glycerin is also generated. As there is no demand for this sub-product in the global market, its fate has become a problem and a challenge for the biodiesel industry. Therefore the development of an insecticide for fighting dengue using glycerol as the carbon source is a way to find new applications for glycerin and to contribute to the control of a disease with nationwide impact, considered a public health problem. Studies have shown that acetic acid is a compound produced and consumed by Bacillus thuringiensis\' cells during their growth. Moreover, it presents a major role in the production of a compound called poly-?-hydroxybutyrate (PHB), which is critical for providing energy for the toxin synthesis. In the present study, it was studied the effect of acetic acid on the growth of Bacillus thuringiensis and on the larvicidal activity of the fermented broth on the larvae of Aedes aegypti. The concentrations tested were 1 g/L, 3 g/L and 5 g/L of acetic acid, added in the following stages: (i) beginning of the fermentation, (ii) time of minimum pH value and (iii) time of deceleration of the increasing pH value. The assays were performed in 1000 mL Erlenmeyer flasks in a reciprocating motion shaker. The results showed that the addition of acetic acid at the beginning and at 10 hours of fermentation improves cell growth and toxin production. The most significant result regarding toxin production was achieved with the addition of 5 g/L of acid at the beginning of the fermentation. In this assay the net percentage of killing of the larvae was eight times higher than the results found in the test without the addition of acid (control test). For the test in which acetic acid was added at 20 hours of fermentation it was observed a higher cellular concentration, however, there was a lower larvicidal activity of the fermented broth, compared to the control test.