Thesis (Ph. D.)--Ohio State University, 2005. / Title from first page of PDF file. Document formatted into pages; contains x, 104 p.; also includes graphics. Includes bibliographical references (p. 91-104). Available online via OhioLINK's ETD Center

Universiẗat, Diss., 2004--Giessen.

Orientador: Iracema de Oliveira Moraes / Resumo: Não disponível / Abstract: Not available / Mestre

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-graduação em Agronomia, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-05-13T16:26:10Z No. of bitstreams: 1 2016_MarceloTavaresCastro_Parcial.pdf: 3623077 bytes, checksum: a0fd0f3b712241876bdf3cc0c4ab1cac (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2017-01-06T10:49:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_MarceloTavaresCastro_Parcial.pdf: 3623077 bytes, checksum: a0fd0f3b712241876bdf3cc0c4ab1cac (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-06T10:49:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_MarceloTavaresCastro_Parcial.pdf: 3623077 bytes, checksum: a0fd0f3b712241876bdf3cc0c4ab1cac (MD5) / O mogno (Swietenia macrophylla King) é uma espécie florestal extremamente apreciada pela qualidade de sua madeira, plasticidade silvicultural e beleza ornamental. O seu corte em áreas naturais foi tão abusivo que atualmente é uma espécie protegida e ameaçada de extinção. Apesar disso, o cultivo do mogno tem se estabelecido em diversas partes do mundo, inclusive no Brasil, tanto em plantios comerciais, quanto na arborização de diversas cidades. Porém, um dos principais entraves para o estabelecimento pleno de plantios maciços de mogno consiste no aparecimento de pragas, sobretudo da Hypsipyla grandella Zeller (Lepidoptera: Pyralidae), considerada a principal praga da espécie. Por conta disso, estudos a respeito da sanidade do mogno estão concentrados nesse inseto e outros organismos danosos praticamente não têm sido relatados e são, muitas vezes, subestimados. Com base nisso, esse trabalho teve como objetivo principal buscar agentes de biocontrole da H. grandella, e avaliar quais espécies de ácaros e fungos ocorrem em mogno nas condições do Distrito Federal. O trabalho está dividido em oito capítulos. No primeiro capítulo, frutos de mogno foram analisados quanto à predação por H. grandella, revelando que muitos dos frutos caídos coletados foram atacados e consumidos pelo inseto. No segundo capítulo, um método de criação da H. grandella com o uso de sementes de mogno foi estabelecido, de forma a fornecer insetos para bioensaios seletivos. No terceiro capítulo, um isolado do fungo entomopatogênico Beauveria bassiana (Bals.) Vuill foi caracterizado e testado quanto a sua patogenicidade em lagartas de H. grandella, com 70% de mortalidade. Já no quarto capítulo, estirpes de Bacillus thuringiensis Berliner foram testadas para averiguar a sua toxicidade em lagartas de H. grandella e determinar a CL50 das melhores estirpes e de toxinas Cry individuais. Os resultados indicaram haver sinergismo entre essas toxinas. No quinto capítulo, as melhores estirpes dos bioensaios foram utilizadas de forma sistêmica em mudas de mogno para averiguar o potencial endofítico da bactéria e o quanto ela pode causar mortalidade em lagartas através da aplicação no solo. Nesse capítulo, uma estirpe em especial (S1905) teve uma eficiência de 88% para o controle da H. grandella de forma sistêmica. No sexto capítulo são apresentadas duas novas ocorrências de ácaros plantícolas associados ao mogno no mundo (Aceria sp. e Eutetranychus banksi McGregor), com a apresentação de uma nova espécie de Eriophyidae. No sétimo capítulo foi verificada a ocorrência de fungos em sementes de mogno coletadas em Brasília e um fungo patogênico foi encontrado, Fusarium oxysporum Schlecht. Por fim, no oitavo capítulo, dois novos fungos foliares são descritos para o mogno, Phomopsis sp. e Phyllosticta swieteniae Garcia. Esse trabalho mostrou que o mogno, apesar de tão conhecido, é pouco estudado quanto a sua sanidade e que muitos organismos estão associados a essa espécie, podendo, muitos deles, serem específicos. Além disso, novas formas de controle são apresentadas para a H. grandella, sua principal praga, de forma a reduzir a pressão do uso de produtos químicos e incorporar o seu uso em programas de manejo integrado. / Mahogany (Swietenia macrophylla King) is a forest species appreciated by the quality of its woods, silvicultural plasticity and ornamental beauty. Your cut in natural areas was so abusive that currently is a protected and endangered species. Nevertheless, mahogany cultivation has been established in various parts of the world, including Brazil, both in commercial plantations, and the plantation of trees in several cities. However, a major obstacle to the full establishment of mahogany massive plantations is the appearance of pests, particularly the Hypsipyla grandella Zeller (Lepidoptera: Pyralidae), a major pest of the species. Because of this, studies about the sanity of mahogany are concentrated in this insect and other harmful organisms have hardly been reported and are often underestimated. Based on this, this work aimed to conduct studies regarding H. grandella, especially as its control using biocontrol agents and describe the main harmful organisms associated with the species in Distrito Federal, Brazil. This work is divided into eight chapters. In the first chapter, mahogany fruits were analyzed about the predation by H. grandella, revealing that many of the collected fallen fruits were attacked and eaten by the insect. In the second chapter, a method of creating H. grandella using mahogany seeds was established in order to provide insects for selective vioassays. In the third chapter, an isolate of the entomopathogenic fungus Beauveria bassiana (Bals.) Vuill was characterized and tested about your pathogenicity in H. grandella caterpillars, with 70% of mortality. In the fourth chapter, strains of Bacillus thuringiensis Berliner were tested to determine their toxicity in H. grandella caterpillars and determine the LC50 of the best strains and the individual toxins Cry. The results showed synergism between these toxins. In the fifth chapter, the best strains of bioassays were used systemically in mahogany seedlings to determine the potential of endophytic bacteria and how it can cause mortality in caterpillars when applied in the soil. In this chapter, a strain in particular (S1905) had 88% of efficiency to control H. grandella systemically. The sixth chapter presents two new occurrences of plant inhabiting mites associated with mahogany worldwide (Aceria sp. and Eutetranychus banksi McGregor), with the presentation of a new Eriophyidae. In the seventh chapter, the occurrence of fungi in mahogany seeds collected in Brasilia was verified and a pathogenic fungus was found, Fusarium oxysporum Schlecht. Finally, in the eight chapter two new foliar fungi are described for mahogany, Phomopsis sp. and Phyllosticta swieteniae Garcia. This work has shown that mahogany, although as known, is little studied about your sanity and many organisms are associated with this species, and may many of them to be specific. Moreover, new forms of control are presented to H. grandella, a major pest of mahogany, in order to reduce the pressure of use of chemicals and incorporate their use in integrated pest management programs.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química / Made available in DSpace on 2012-10-23T10:56:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 245690.pdf: 1175975 bytes, checksum: 32ce84c86d34ac092c8fb19fec8c3cfd (MD5) / A bactéria Bacillus thuringiensis var. israelensis (Bti), utilizada no controle biológico de várias espécies de mosquitos, vêm sendo empregada na região de Joinville para controlar os mosquitos do gênero Simulium pertinax (borrachudos). Estes mosquitos possuem grande incidência na região e causam inúmeros transtornos à população ribeirinha e a economia local, que possui grande potencial turístico. Para potencializar a produção de Bti, faz-se necessário o desenvolvimento de novos processos de produção e tratamentos finais do produto a um custo mais baixo e com impacto ambiental reduzido. Atualmente, os métodos utilizados no processo de produção do bioinseticida envolvem o uso de processo fermentativo submerso em regime descontínuo e, recentemente, foi proposto o uso de fermentação em estado sólido. Neste contexto, este trabalho vem propor um processo alternativo para a produção de esporos e, conseqüentemente do bioinseticida, com fermentação submersa em regime semicontínuo e integração dos processos submerso e sólido. Testaram-se quatro tipos de processo em regime semicontínuo denominados de FSC80, FSC60, FSC40 e FSC20, onde os números representam a porcentagem de corte em cada experimento. Os experimentos foram conduzidos a 30ºC em reator Biostat B. Posteriormente ao corte, foram acondicionados em um segundo reator para maturação dos esporos e testou-se a influência de oxigênio. Nos experimentos em estado sólido foram utilizados como substratos cascas de banana e bagaço de cana-de-açúcar e como reatores sacos de polipropileno. O inóculo puro e, concentrado duas e quatro vezes, foi proveniente de fermentação submersa descontínua. Observou-se que a maior produção de esporos foi encontrada no experimento FSC60 (2,17x109 UFC/mL). A partir deste experimento foi avaliada a influência da aeração na produção de esporos e observou-se que o oxigênio é fundamental para a produção de esporos, porém não se pode ter certeza da influência deste nutriente na produção de biotoxina. Os experimentos com aeração produziram 5,16x109 UFC/mL de esporos e, no bioensaio, uma CL50 de 0,74mg/L. Nos experimentos em estado sólido, o inóculo proveniente do processo fermentativo descontínuo e concentrado duas vezes apresentou melhores resultados de produção de esporos (7,8x1012 UFC/kg) que o concentrado quatro vezes e puro. Ensaios futuros serão realizados para verificar a toxicidade do produto obtido.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T06:55:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / O Bacillus thuringiensis var. israelensis (Bti) é uma bactéria entomopatogênica, Gram-positiva, aeróbica facultativa, formadora de esporos que, durante a esporulação, sintetiza um cristal protéico parasporal (?-endotoxina) em adição ao endósporo, tóxico a uma grande variedade de insetos que são economicamente importantes como pestes. Sua ação depende da ingestão dos cristais, que são solubilizados no intestino de larvas susceptíveis, onde as protoxinas são liberadas, formando poros na membrana, causando a morte da larva. Ele tem sido utilizado em Joinville e região para o controle dos mosquitos Aedes aegypti e Simulium pertinax, cujos ataques causam sérios impactos e inconveniência à população ribeirinha e ao turismo local. O objetivo do presente estudo é testar a metodologia de cultivo semi-contínuo para a produção de Bacillus thuringiensis var. israelensis proposta por Silva (2007); desenvolver uma formulação bioinseticida contendo o Bti obtido e verificar sua eficácia no controle populacional de larvas de A. albopictus em comparação com os bioinseticidas comerciais Vectobac AS e Teknar HP-D , bem como sua segurança em testes de toxicidade aguda utilizando, como bioindicadores, organismos não-alvo de diferentes níveis tróficos: o flagelado Euglena gracilis, representando os produtores primários, o microcrustáceo Daphnia similis, representanto os consumidores secundários e o peixe Danio rerio como representante dos consumidores terciários. Sob as condições experimentais utilizadas, a formulação bioinseticida produzida demonstrou ser eficiente para o controle de larvas de A. albopictus, com valores de DL50 de 3,97 mg/L, enquanto que os produtos comerciais formulados Vectobac AS e Teknar HP-D , tiveram valores de DL50 de 0,019 e 0,013 mg/L respectivamente. O bioinseticida Bti-Univille formulado demonstrou ser mais seguro ao organismo não-alvo Daphnia similis (DL50= 130 mg/L) que os produtos comerciais Vectobac AS® (DL50= 50 mg/L) e Teknar HP-D® (DL50= 32 mg/L), requerendo doses maiores para causar a mesma letalidade. Para todas as formulações bioinseticidas testadas, os valores de DL50 à D. similis foram superiores aos de DL50 estimados para o inseto-alvo; frente ao peixe Danio rerio, nenhuma das amostras bioinseticida testadas demonstrou toxicidade em doses até 100 mg/L. Os resultados obtidos nos ensaios de toxicidade aguda com Euglena gracilis foram inconclusivos, sendo necessária a realização de novos testes sob as mesmas condições experimentais para estimar a toxicidade do bioinseticida produzido a este organismo não-alvo.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2015. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-06-23T19:58:37Z No. of bitstreams: 1 2015_EliasFerreiraSabiáJunior.pdf: 2573495 bytes, checksum: a427160f631b1cd7d6dc2a361354a78f (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-06-24T14:53:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_EliasFerreiraSabiáJunior.pdf: 2573495 bytes, checksum: a427160f631b1cd7d6dc2a361354a78f (MD5) / Made available in DSpace on 2015-06-24T14:53:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_EliasFerreiraSabiáJunior.pdf: 2573495 bytes, checksum: a427160f631b1cd7d6dc2a361354a78f (MD5) / A bactéria Gram-positiva Bacillus thuringiensis (Bt) é amplamente conhecida devido à sua grande importância no controle biológico, graças à sua capacidade de produzir inclusões cristalinas formadas por proteínas inseticidas (Cry e Cyt), ativas contra um amplo espectro de insetos. Uma nova atividade foi relatada para cristais sem atividade inseticida, a citotoxicidade contra células cancerosas humanas. Essas proteínas citotóxicas, chamadas de Parasporinas (PS), não são hemolíticas e são estruturalmente diferentes das proteínas Cry e Cyt. Até o momento, seis grupos de PS foram identificadas, com base na homologia das suas sequências de aminoácidos. As Parasporinas apresentam modo de ação diferente entre as famílias, assim como diferente espectro citotóxico e nível de atividade. A Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia possui uma Coleção de Bacillus spp. que conta com aproximadamente 2500 isolados. Esse trabalho teve como objetivo identificar, entre as estirpes dessa coleção, genes da família de Parasporinas através de diferentes marcadores moleculares, analisar o perfil proteico dessas estirpes, a possível produção de β-exotoxinas, avaliar sua toxicidade para linhagens de células tumorais, analisar a influência dessas proteínas no padrão de migração celular de linhagens de câncer e as possíveis alterações morfológicas causadas pelas toxinas Parasporinas nas células tumorais suscetíveis. Duzentos e sessenta e nove estirpes foram selecionadas aleatoriamente do banco de bactérias e triadas com os iniciadores específicos desenhados para identificação dos diferentes genes de Parasporina. Trinta e cinco estirpes apresentaram padrões de amplificação para esses genes, dentre estes, 30 isolados obtiveram amplificações para o gene parasporina 1, enquanto 5 isolados para o gene parasporina 3. O perfil proteico sugere que as proteínas secretadas por algumas estirpes possuem o tamanho esperado para o grupo de Parasporina (aproximadamente 81 e 88 kDa para as famílias 1 e 3, respectivamente). Nenhuma das estirpes positivas por PCR apresentou produção de β-exotoxinas. As proteínas das estirpes testadas não mostraram toxicidade contra as linhagens tumorais DU-145 e HeLa. A proteína PS1 da estirpe S1338 mostrou toxicidade específica a células tumorais de mama MCF-7, alterando sua morfologia após 24 horas do tratamento com a toxina ativa, sugerindo que o tipo de morte celular envolvendo a Parasporina 1 seja por apoptose. Nenhuma alteração significativa no padrão de migração das células MCF-7 pode ser observada após o tratamento com a toxina. Desta forma, nossos dados sugerem que a Parasporina 1 produzida pela estirpe S1338 possui características únicas e especificidade contra a linhagem MCF-7 de adenocarcinoma de mama. Estudos mais aprofundados sobre o mecanismo de ação desta toxina, bem como sobre o possível receptor nas células suscetíveis, poderão tornar viável a utilização das Parasporinas como terapia alternativa para o tratamento de câncer, ou até mesmo como ferramenta molecular para o diagnóstico dessa doença. / The Gram-positive bacteria Bacillus thuringiensis (Bt) is widely known for its importance on biological control, due to their hability to produce crystalline inclusions formed by insecticide proteins (Cry e Cyt), active against a broad range of insects. A new activity was reported for crystals without insecticide activity, the cytotoxic against human cancer cells. These cytotoxic proteins are known as Parasporins (PS), are not hemolytic and have different structure from the Cry and Cyt proteins. So far, six classes of PS were identified, based on the homology of their aminoacids sequences. The Parasporins have different mode of action among theirs families, as well as different cytotoxic range and level of activity. The Embrapa Genetic Resources and Biotechnology has a collection of Bacillus spp. with approximately 2500 isolates. This work aims to identify, among the strains of this collection, genes of Parasporin families through different molecular markers, analyse the protein profile of strains, the possible production of β-exotoxins, evaluate its toxicity to tumor cells line and the possible morphological changes caused by the toxins Parasporins in susceptible tumor cells. Two hundred and sixty-nine strains were selected randomly on the bacteria bank, and were screened with specific primers to identify the different Parasporin genes. Thirty-five strains showed amplification patterns, of which, 30 isolates showed amplification to the parasporin 1 gene, and other 5 isolates to parasporin 3 gene. The protein profile suggested that the secreted proteins by some strains has the expected size to the group of Parasporin (approximately 81 and 88 kDa for the family 1 and 3, respectively). None of the positive strains identified by PCR showed β-exotoxins production. The protein of the tested strains didn’t show toxicity against tumor lines DU-145 and HeLa. The protein PS1 from the strain S1338 showed specific toxicity against breast cancer cells MCF-7, changing their morphology after 24 hours of treatment with active toxin, suggesting that the type of cell death involving Parasporina 1 is through apoptosis. No significant alteration in the patterns of MCF-7 cell migration could be observed after treatment with the toxin. Therefore, our data suggest that Parasporin 1 from S1338 strain has unique characteristics and specificity against MCF-7 cell line of breast adenocarcinoma. Further studies on the mode of action involving this toxin, and the possible receptor of susceptible cells, can make the use of Parasporin feasible as an alternative therapy in cancer treatment, or even as a molecular tool for the diagnosis of the disease.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2007. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2010-01-25T14:46:22Z No. of bitstreams: 1 2007_RobertoFTCorrea.pdf: 4112592 bytes, checksum: 52046698f69dc6f05f1105cdddeed69d (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-01-25T21:04:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_RobertoFTCorrea.pdf: 4112592 bytes, checksum: 52046698f69dc6f05f1105cdddeed69d (MD5) / Made available in DSpace on 2010-01-25T21:04:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_RobertoFTCorrea.pdf: 4112592 bytes, checksum: 52046698f69dc6f05f1105cdddeed69d (MD5) Previous issue date: 2007-06-14 / Os genes cry4Aa e cry4Ba, pertencentes a diferentes estirpes brasileiras de Bacillus thuringiensis, S1806 e S1989, respectivamente, foram amplificados por PCR e clonados em um vetor de clonagem. A análise do seqüenciamento do gene cry4Aa mostrou alta identidade com outras seqüências do gene já descritas e este foi clonado tanto no vetor de transferência pSynXIVVI+X3, como no pFastBac®1 para expressão e análise da toxicidade da proteína heteróloga a partir dos baculovírus construídos por recombinação homóloga, vSyncry4Aa, e por transposição sítio-específica, vBacCry4Aa. O gene cry4Ba foi introduzido no vetor pSynXIVVI+X3 dando origem, por recombinação homóloga, ao baculovírus recombinante vSyncry4Ba. Os vírus recombinantes, derivados de recombinação homóloga, foram isolados em placas de 96 poços, enquanto o vírus recombiante obtido por transposição foi isolado de colônias de células de Escherichia coli DH10BacTM crescidas em placas de Petri contendo antibióticos, X-Gal e IPTG. Células de inseto BTI-TN5B1-4 foram infectadas com os vírus recombinantes isoladamente e mRNA derivados dos extratos celulares (72 h.p.i.) analisados por RT-PCR, para confirmação da expressão e presença de transcritos específicos para os genes. Extratos de larvas de Spodoptera frugiperda, infectadas com os vírus recombinantes (120 h.p.i.) foram analisados por eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), mostrando a presença de bandas de aproximadamente 128 e 130 kDa correspondentes aos tamanhos das proteínas Cry4Aa e Cry4Ba, respectivamente. Possíveis cristais das proteínas recombinantes foram observados por microscopia de luz. Bioensaios com os extratos de insetos infectados mostraram-se tóxicos para larvas de segundo instar de Aedes aegypti. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The cry4Aa and cry4Ba genes from Brazilian strains of Bacillus thuringiensis, S-1806 and S-1989, respectively, were amplified by PCR, cloned into a plasmid cloning vector and sequenced. Sequence analysis of the cry4Aa gene showed high identity to previous known cry genes and it was cloned into both pSynXIVVI+X3 and pFastBac®1 transfer vectors for expression and toxicity analysis of the heterologous proteins derived from the recombinant baculoviruses constructed by homologous recombination (vSynCry4Aa) and transposition (vBacCry4Aa). The cry4Ba gene was introduced into the transfer vector pSynXIVVI+X3/3 resulting in the construction of the recombinant virus vSynCry4Ba by homologous recombination. The recombinant viruses, derived from homologous recombination, were isolated by serial dilution in 96 well plates while the recombinant virus produced by transposition was isolated from Escherichi coli (DH10BacTM) colonies grown on Petri dishes containing antibiotics, X-Gal and IPTG. Insect cells BTI-TN5B1-4 were separetly infected with the recombinante viruses and mRNA from cell extracts (72 h.p.i.) analysed by RT-PCR, in order to confirm the presence of the genes specific transcripts. Recombinant viruses infected insect extracts (120 h p.i.) were analysed by polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) showing the presence of polypepitide bands of around 128 and 130 kDa, corresponding, respectively to the sizes of the proteins Cry4Aa and Cry4Ba. Putative crystals from the recombinant proteins were observed by light microscopy. Bioassays with virus-infected insect extracts were shown to be toxic to second instar Aedes aegypti larvae.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-09-01T14:41:43Z No. of bitstreams: 1 2016_DeborahdaCostaLamar.pdf: 2872393 bytes, checksum: 9d419a56e6761d5e59959dc81459806d (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-09-09T12:10:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_DeborahdaCostaLamar.pdf: 2872393 bytes, checksum: 9d419a56e6761d5e59959dc81459806d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-09T12:10:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_DeborahdaCostaLamar.pdf: 2872393 bytes, checksum: 9d419a56e6761d5e59959dc81459806d (MD5) / Bacillus thuringiensis é uma bactéria Gram positiva, produtora de cristais protéicos ou δ-endotoxinas (toxinas Cry e Cyt) durante a fase de esporulação. As toxinas. Cry apresentam atividade inseticida específica, e as toxinas Cyt apresentam atividade citolítica inespecífica. Algumas proteínas produzidas por B. thuringiensis durante a fase de esporulação que não apresentam caráter inseticida, mas apresentam-se tóxica para células tumorais foram descritas. Essas proteínas receberam o nome de Parasporinas (PS), devido à capacidade de produzir cristais paraesporais e até o momento são classificadas em seis tipos (PS1-PS6). Baculovírus são vírus de insetos usados no controle biológico de pragas da agricultura, porém também têm sido muito utilizados como vetores de expressão de proteínas heterólogas em células de inseto. No presente trabalho, o gene ps2 foi montado, por meio de PCR, através de fragmentos sintetizados a partir de uma sequência lotada no banco de dados, e o produto de PCR foi clonado em um vetor de transferência para construção de um baculovírus recombinante. Após obtenção do vírus recombinante, observou-se que células SF9 quando infectadas com vAcPS2, morriam em um tempo curto de infecção, quando comparado com células infectadas com o vírus selvagem. Após purificação, solubilização e ativação da toxina PS2 recombinante, ensaios de viabilidade celular foram feitos com linhagens de células tumorais, câncer mamário (MCF-7) e câncer mamário metastático (MDA-MB-231), células não tumorais humanas (fibroblastos) e células de inseto (Sf9), confirmando a atividade tóxica de PS2 apenas para as células tumorais. _________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Bacillus thunringiensis is a Gram positive bacterium that produces crystal forming proteins called δ-endotoxins (Cry and Cyt toxins), during sporulation phase. Cry toxins show specific insecticidal activity, and Cyt toxins shows non-specific cytolitic activity. Some proteins of B. thuringiensis produced during sporulation have not shown insecticidal activity, but a specific toxic activity to some cancer cells. These proteins were called Parasporins (PS) due to their ability to form paraporal crystals and they are divided in six groups (PS1-PS6). Baculoviruses are insect viruses that have been widely used as biological control of agricultural pests, but also as expression vectors of heterologous proteins in insect cells. In this work, the gene ps2, constructed by PCR, trough fragments synthetized using a gene sequence from a database and cloned in a transfer vector for recombinant virus construction After recombinant virus construction we observed that SF9 cells died faster than cells infected with the wild-type virus. After purification, solubilization and activation of the heterologous protein, cell viability assays was performed with cancer cell lines, breast cancer (MCF-7), metastatic brest cancer (MDA-MB-231), non-tumor human cells (fibroblasts) and insect cells (Sf9) confirming PS2 toxic activity only to cancer cells.

Orientador: Antonio Carlos Busoli / Coorientador: Marcos Doniseti Michelotto / Banca: Julio Cesar Guerreiro / Banca: José Roberto Scarpellini / Banca: Raphael de Campos Castilho / Banca: Arlindo Leal Boiça Junior / Resumo: A lagarta do cartucho Spodoptera frugiperda é a principal praga da cultura do milho nas regiões tropicais e subtropicais do continente americano. Dentre os métodos mais utilizados para o controle desta praga no Brasil, destaca-se o uso de plantas geneticamente modificadas a partir da inserção de um gene da bactéria Bacillus thuringiensis que confere a planta a expressão de proteínas com ações inseticidas. No entanto, durante dois ou três anos estas tecnologias reduziram o grau de supressão às lagartas, principalmente pelo uso continuo e inadequado da tecnologia. O objetivo deste trabalho foi estudar em condições de campo, o comportamento de híbridos de milho Bt frente ao ataque de lepidópteros, como a S. frugiperda e Helicoverpa zea, em quatro regiões produtoras de milho do estado de São Paulo, bem como estudar em condições de laboratório a biologia comparada de populações de S. frugiperda coletadas nestas regiões. Os experimentos de campo foram realizados no período da segunda safra de milho, no ano de 2014, nas regiões do Médio Paranapanema, Centro Norte, Noroeste e Norte do estado de São Paulo, onde foram utilizados 25 cultivares de milho com expressão de diferentes proteínas inseticidas. Para o estudo de biologia comparada foi realizada a coleta de lagartas nas quatro regiões do estado, as lagartas foram enviadas ao laboratório de Manejo Integrado de Pragas da FCAV-Unesp onde foram realizados os experimentos com folhas de híbridos de milho de diferentes tecnologias. Os re... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The fall armyworm Spodoptera frugiperda is the major pest of corn in tropical and subtropical regions in the American Continent. Among the most used methods to control this pest in Brazil, it highlights the use of genetically modified plants from the insertion of a Bacillus thuringiensis gene that confers to the plant the expression of proteins with insecticidal actions. However, after two or three years these technologies reduce the degree of suppression of larvae, mainly due to the continuous and inadequate use of the technology. The objective of this work was to study in field conditions, the behavior of Bt corn hybrids against lepidopteran attacks as S. frugiperda and Helicoverpa zea in four corn-producing regions of São Paulo State, as well as to study in laboratory conditions the comparative biology of populations of S. frugiperda collected in these regions. Field experiments were carried out during the second corn season in 2014 in the regions of Médio Paranapanema, Centro Norte, Noroeste and Norte of São Paulo State where were used 25 corn cultivars with the expression of different insecticidal proteins. To the comparative biology study, the larvae were collected in the four regions of the state, the larvae were sent to Integrated Pest Management Laboratory of FCAV-Unesp where the experiments were carried out with leaves of corn hybrids of different technologies. The results of field experiments demonstrate that the insecticidal protein VIP3Aa20 presents a high level of suppression on the populations of S. frugiperda and H. zea, in addition, the corn hybrids that express the insecticidal protein Cry1F were the most susceptible against the attack of these two pests. Through the results obtained from the experiments of comparative biology, it was verified that the insecticidal protein VIP3Aa20 provided 100% of mortality of la... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor