Apesar de ser principalmente um colonizador da pele e mucosas, Staphylococcus epidermidis, juntamente com outros estafilococos coagulase negativos, tornou-se um importante patógeno oportunista, responsável por infecções nosocomiais associadas ao uso de dispositivos implantáveis. O fator mais importante na patogênese de infecções estafilocócicas associadas a estes dispositivos é a habilidade do patógeno de formar um biofilme bacteriano, sendo que a presença dos genes ica, aap e atlE é considerada importante para a sua formação. Este estudo compara diferentes métodos para a detecção de formação de biofilme em S. epidermidis isolado de cateter venoso central (CVC). Dois métodos fenotípicos foram realizados: o teste da microplaca, considerado o padrão ouro e o teste com ágar Congo Red (ACR). No método genotípico, através da técnica de PCR, foi verificada a presença dos genes icaA, icaD, aap e atlE. Das 166 amostras analisadas, 107(64%) produziram biofilme pelo teste da microplaca, sendo 17 fortes, 23 moderadas e 67 fracas produtoras, enquanto 90(54%) produziram biofilme pelo teste com ACR. Foi verificada a presença dos genes icaA e icaD em 97% (104/107) das amostras produtoras de biofilme pela microplaca; em 77% foi identificado o gene aap e em 92% o gene atlE. Os genes icaA e icaD foram considerados os marcadores mais confiáveis na identificação molecular de biofilme porque apresentaram maior sensibilidade (97%) quando comparados com os demais genes. A ausência de genes icaA e icaD em três isolados produtores de biofilme através do teste da microplaca, chamados de “ica-independente”, sugerem a presença de um mecanismo alternativo de formação de biofilme, como a proteína Aap, que pode substituir funcionalmente PIA como uma adesina intercelular. A alta prevalência do gene atlE entre os isolados deste estudo pode ser explicada pelo fato de a proteína AtlE ser um importante fator para a aderência em superfícies plásticas como CVC. Porém a sua presença nem sempre implica em formação de biofilme. Este estudo confirma a importância do operon ica na formação do biofilme e nas infecções relacionadas a cateter, uma vez que a maioria das amostras produtoras de biofilme isoladas de CVC carreavam tal gene. / Although Staphylococcus epidermidis is essentially a colonizer of skin and mucous membranes, it has become an important opportunistic pathogen among other coagulasenegative staphylococci, and it is responsible for nosocomial infections associated to indwelling medical devices. The most important factor in the pathogenesis of staphylococcal device-related infections is the pathogen ability to produce a biofilm, and it has been demonstrated that ica, aap and atle genes are important to its production. The present study compares different detection methods of biofilm formation in isolates of S. epidermidis from central venous catheter (CVC). Two phenotypic methods were performed: the microtiter plate test, considered a golden standard, and Congo red agar test. Through a genotypic method, using the PCR technique, it was verified the presence of icaA, icaD, aap and atlE genes. Using the microtiter plate assay, biofilm formation was observed in 107 of 166 analyzed samples (64%, including 17 strong, 23 moderate and 67 weak producers) while the Congo Red agar (CRA) plate assay reveled 90 (54%) biofilm producers. The presence of icaA and icaD genes was verified in 104 of the 107 biofilm producers samples identified through the microtiter assay (97%), while 77% presented aap gene and 92% presented atlE gene. Compared to other genes, icaA and icaD presented the higher sensibility (97%) and were considered the most reliable markers for molecular identification of biofilm producers. The absence of icaA and icaD genes in three biofilm-producing isolates identified through the microtiter assay (the “ica-independent”) suggests the existence of an alternative mechanism for biofilm formation, such as the Aap protein, that can be a functionally substitute for PIA as an intercellular adhesin. The high occurrence of atlE gene among the isolates in this study may be due to AtlE protein being an important factor for adherence to plastic surfaces, such as CVC, but the presence of this gene does not always results in biofilm formation. The present study corroborate the importance of ica operon in biofilm formation and in catheter-related infections, since most of the biofilm-producing sample isolates from CVC presented these genes.

Orientador: Eunice Teresinha Giampaolo / Banca: Ana Paula Dias Ribeiro / Banca: Dalva Cruz Laganá / Banca: Janaína Habib Jorge / Banca: João Neudenir Arioli Filho / Resumo: Este estudo avaliou dois vernizes experimentais (M e P) em três diferentes concentrações (25, 30 e 35%) na prevenção da adesão e formação de biofilme multiespécies (Candida albicans, Candida glabrata e Streptococcus mutans) e sua associação com a escovação na remoção do biofilme e sua recolonização. Corpos-de-prova lisos e rugosos de uma resina acrílica foram confeccionados e divididos em grupos experimentais, de acordo com o verniz e concentração, além de grupos controle (sem verniz). Metade das amostras foi exposta em saliva (30 minutos). Posteriormente, realizou-se a adesão (90 minutos) ou a formação do biofilme multiespécies (48 horas). Para a avaliação da capacidade de remoção do biofilme aderido, corpos-de-prova contaminados foram escovados (30 segundos) e para a recolonização, além da escovação, as amostras foram incubadas por período adicional de 48 horas. Os micro-organismos remanescentes foram mensurados pelos ensaios de XTT e UFC. Para os testes de adesão e formação do biofilme, os grupos experimentais apresentaram, em geral, menor absorbância comparados com o controle, porém esta diferença não foi significante para a contagem de colônias, exceto para o S. mutans na formação do biofilme. A rugosidade, em geral, não promoveu alteração em qualquer dos testes realizados. A saliva não promoveu alterações na adesão dos micro-organismos, mas alterou a quantidade de biofilme formado. Houve remoção efetiva do biofilme com a escovação e com a recolonização. Conclui-se que os vernizes fotopolimerizáveis experimentais reduziram discretamente a adesão e formação do biofilme. Além disso, a escovação foi efetiva na remoção e recolonização do biofilme multiespécies. / Abstract: This study evaluated the ability of two experimental coatings (M and P) at 25, 30 and 35% concentrations to modify the surface characteristics of a denture base resin and prevent the adhesion and biofilm formation of multi-species, as well as the effectiveness of brushing on biofilm removal and their recolonization. Specimens with smooth and rough surfaces were prepared and divided into experimental groups, according to the coating and concentration, and controls group (without coating). A half of specimens were exposed to saliva (30 minutes). The microorganisms adhesion (Candida albicans, Candida glabrata and Streptococcus mutans) was performed for 90 minutes and the biofilm formation was performed for 48 hours. For effectiveness of toothbrushing in biofilm elimination test, contaminated specimens with biofilm were exposed to toothbrushing in a brushing machine (30 seconds) and for recolonization, after brushing, the specimens were incubated again for 48 hours. Microorganisms quantification was measured by XTT and UFC tests. The adhesion and biofilm development showed that the experimental groups were, in general, lower absorbance compared with the control, but this difference was not significant for colony counting, except for S. mutans in biofilm formation. The roughness, in general, did not cause any change in all tests performed. Saliva did not change the adhesion of microorganisms, but reduce the biofilm formation. There was effective biofilm removal with brushing and recolonization tests. It was concluded that the experimental photopolymerised coatings slightly reduced adhesion and biofilm formation. Furthermore, toothbrushing was effective in multi-species biofilm removal and their recolonization. / Doutor

Orientador: Cristiane Yumi Koga Ito / Coorientador: Prof. Konstatin Georgiev Kostov / Banca: Ivanildes Vasconcelos Rodrigues / Banca: Fernanda Lourenção Brighenti / Banca: Janete Dias Almeida / Banca: Mônica Fernandes Gomes / Resumo: As doenças fúngicas representam grande desafio para a área médica e odontológica devido à crescente prevalência e aumento da resistência aos antifúngicos. O plasma frio sob pressão atmosférica (PFPA) é uma mistura gasosa contendo partículas carregadas, radicais livres e radiação. Sua potencial aplicação em doenças infecciosas foi relatada, contudo a literatura carece de estudo sistemático sobre o efeito antifúngico, mecanismos de ação e potencial citotóxico. Neste trabalho foi avaliado o efeito antifúngico do PFPA sobre Candida albicans através de ensaios em células planctônicas e biofilmes, efeitos sobre a integridade de parede celular e membrana plasmática, morfogênese, produção de exoenzimas, aderência às células epiteliais e efeito no tratamento in vivo de lesões de candidose oral induzida em modelo murino. Ainda, avaliou-se o efeito do PFPA sobre culturas de Trichophyton rubrum, além de efeitos sobre capacidade de adesão de conídios. Ainda, o potencial citotóxico foi investigado usando células epiteliais. PFPA em modo de tensão contínuo (MC) foi capaz de reduzir a aderência de C. albicans às células epiteliais, modular a transição levedura-hifa na cepa SC 5314 e comprometer a viabilidade de biofilmes. PFPA-MC se mostrou citotóxico em parâmetros efetivos frente a biofilmes de C. albicans. Porém, não foi observado efeito citotóxico quando o PFPA foi utilizado em modo de tensão pulsada (MP). A exposição ao PFPA-MP reduziu a invasão de C. albicans no epitélio in vivo. O PFPA... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / ABSTRACT Fungal diseases represent a great challenge to the medical and dental areas, due to the increasing prevalence and antifungal resistance. Atmospheric pressure plasma jet (APPJ) is a gaseous mixture containing charged particles, free radicals and radiation. Its potential application in infectious disease has been reported, however there is still a lack of a systematic study on the antifungal effect, mechanism of action and citotoxicc potential. The general aim of this project was to evaluate the antifungal effect of APPJ on Candida albicans in planktonic and biofilm cultures, effects on cell wall and cell membrane integrity, morphogenesis, exoenzymes production, adherence to epithelial cells and in vivo effect in the treatment of oral candidosis in murine model will be performed. The effect of APPJ on Trichophyton rubrum cultures and on adherence capability were also evaluated. The cytotoxic potential was evaluated in vitro. APPJ in continuous tension mode (CM) was able to reduce the adherence and yeast-hyphae transition in C. albicans SC 5314 and to decrease biofilm viability. APPJ-CM showed cytotoxic effect in the parameters effective to C. albicans biofilm. Conversely, no cytotoxic effect on epithelial cells were observed when pulsed (PM) plasma jet was used. In vivo tests showed that APPJ-PM was able to prevent C. albicans invasion to the epithelium. T. rubrum cultures were affectd by APPJ-PM after 15 minutes of exposure and conidia adherence was impaired by 10 minutes exposure. In conclusion, APPJ showed antifungal effect against C. albicans and T. rubrum and can also impair virulence factors in both microorganisms / Doutor

Orientador: Debora de Barros Barbosa / Coorientadora: Marcelle Danelon / Coorientadora: Jackeline Gallo do Amaral / Banca: Denise Pedrini Ostini / Banca: Alberto Carlos Botazzo Delbem / Banca: Emerson Rodrigues de Camargo / Banca: Renan Aparecido Fernandes / Resumo: O objetivo deste estudo foi sintetizar e caracterizar nanocompósitos formados por polifosfatos (trimetafosfato de sódio (TMP) ou hexametafosfato de sódio (HMP)) e flúor (F) associados à nanopartículas de prata. Esses nanocompósitos foram avaliados quanto à sua ação anti-biofilme de Candida albicans (ATCC 10231) e Streptococcus mutans (ATCC 25175) e seu potencial em inibir a desmineralização do esmalte dentário por meio de ensaio in vitro de ciclagem de pH. As nanopartículas de prata foram sintetizadas através da redução do nitrato de prata (1 ou 10%) pelo borihidreto de sódio (NaBH4) em meio isopropílico contendo trimetafosfato de sódio (TMP) ou hexametafosfato de sódio (HMP)) e flúor (F). Os nanocompósitos foram caracterizados por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e por difração de raios-X, e também determinada a concentração inibitória mínima (MIC) contra células planctônicas de C. albicans e S. mutans. A efetividade contra biofilmes pré-formados de 24h dos nanocompósitos, foi testada em concentrações de 1x e 10x os valores de MIC (de 40μg Ag ml−1), avaliada através da quantificação de células cultiváveis (CFUs), da atividade metabólica (XTT) e da biomassa total (Cristal Violeta). Os nanocompósitos contendo 10% de Ag apresentaram maior efetividade antimicrobiana contra ambos os microrganismos, comparados aos nanocompósitos contendo 1% de prata. O biofilme de S. mutans foi mais suscetível aos nanocompósitos TMP ou HMP/AgNP que o biofilme de C. albicans, com reduções ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to synthesize and characterize nanocomposites formed polyphosphates (sodium trimetaphosphate (TMP) or sodium hexametaphosphate (HMP)) and fluoride (F) associated with silv er nanoparticles. The anti - biofilm activity of the nanocomposites were evaluated against Candida albicans (ATCC ATCC 10231) and Streptococcus mutans (ATCC 25175) . as well as their potential in inhibiting demineralization and increasing the remineralizatio n of dental enamel by in vitro pH cycling assay. Silver nanoparticles were synthesized by reduction of silver nitrate (1 or 10%) by sodium bor ohydride (NaBH 4 ) in isopropylic medium containing sodium trimetaphosphate (TMP) or sodium hexametap hosphate (HMP)) and fluoride (F) . The nanocomposites were characterized by scanning electron microscopy (SEM) and X - ray diffraction. The minimum inhibitory concentration (MIC) of the nanocomposites was determined against planktonic cells of C. albicans and S. mutans . Eff ect iveness of preformed 24 - hour biofilms of nanocomposites at 1x and 10x MIC values was assessed by quantifying viable cells (CFUs), metabolic activity (XTT) and total biomass (Crystal Violet). The nanocomposites containing 10% Ag showed higher antimicrobia l effectiveness against both microorganisms compared to nanocomposites containing 1% silver. The S. mutans biofilm was more susceptible to the TMP or HMP - AgNP nanocomposites than the C. albicans biofilm, with respective reductions of 2.88 - 3.71 log 10 and 0.... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-21Bitstream added on 2014-06-13T19:14:33Z : No. of bitstreams: 1 melo_pc_me_jabo.pdf: 445369 bytes, checksum: 73e845ad471abdc7d2224e3473891474 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Estudou-se 94 estirpes de Staphylococcus aureus obtidas do leite de vacas com mastite subclínica em duas propriedades rurais no estado de São Paulo. Essas estirpes foram caracterizadas fenotipicamente quanto a produção de biofilmes pelos testes do agar vermelho congo e pelo teste de aderência em microplacas e também foram genotipicamente identificadas pela presença dos genes icaA e icaD responsáveis pela produção do polissacarídeo de adesão intercelular. Além disso, todas as estirpes foram também submetidas ao teste de sensibilidade aos antimicrobianos. Os resultados obtidos revelaram que 85% das estirpes produziram biofilmes “in vitro” para o teste do agar vermelho congo. No teste de aderência em placas foi verificado que 98,9% das estirpes produziram biofilme, devido a forte aderência nas placas de polietileno. A presença dos genes icaA e icaD foi encontrada em 95,7% das estirpes de S. aureus. No antibiograma foi observado que sete estirpes foram resistentes aos seguintes antimicrobianos: cloranfenicol, clindamicina, eritromicina, gentamicina, oxacilina e penicilinaG, sendo que as maiores resistências ocorreram frente a gentamicina (2,2%) e a penicilina G (6,6%). Na avaliação dos testes fenotípicos com os genotípicos o teste de aderência em microplacas foi o mais sensível (100%), sendo indicado para identificar estirpes produtoras de biofilmes. Todos os testes, com exceção do antibiograma, foram estatisticamente significativos (p<0,05). / 94 Staphylococcus aureus strains obtained from milk samples of cows suffering from subclinical mastitis in dairy herd, in two properties, in the state of São Paulo were evaluated. These strains were characterized by the in vitro slime production on the Congo red agar, biofilm formation and by the presence of icaA and icaD genes which are responsible for the intercellular adhesion. All strains were too subjected to in vitro susceptibility to 12 different antibiotics. The results revealed that 85% of isolates tested produced slime on the Congo red agar and 98,9% of the isolates produced biofilm in vitro by the adherence in sterile 96-well “U” bottom polystyrene tissue culture plates. 95,7% of isolates possessed the icaA and icaD genes. The results of in vitro antibiotic susceptibility assay to 12 different antibiotics revealed that seven isolates were resistance to follow antibiotics: clorphenicol, clindamicin, erythromycin, gentamicin, oxacillin and penicillin, the higher resistance occurred to penicillin (6,6%) and gentamicin (2,2%). In the study of phenotypic tests compared with genotypic test, the 96-well polystyrene tissue culture plates assay was the most sensitivity (100%) and is recommended with genotypic test for the investigation biofilm formation in S. aureus. All the tests, exception of antibiotic susceptibility assay were statistically significant (p<005).

Orientador: Marcia Carneiro Valera / Resumo: O presente trabalho teve como objetivos: analisar a ação antimicrobiana de scaffolds contendo ciprofloxacina (CIP) sobre biofilme de Enterococcus faecalis (E. faecalis) (Artigo 1); Sintetizar, caracterizar e analisar a ação antimicrobiana do TAP-scaffold (Polidioxanona [PDS] + CIP, metronidazol [MET] e minociclina [MINO] ) contra biofilme de Actinomyces naeslundii (A. naeslundii) (Artigo 2); Avaliar os efeitos do TAP-scaffold contra biofilme de Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) (Artigo 3). Material e Métodos: Utilizando a técnica de electrospinning scaffolds foram desenvolvidos a partir de soluções de PDS puro e associadas a antibióticos para produzir CIP-scaffold e TAP-scaffold. (Artigos 1, 2 e 3). Espécimes de dentina foram inoculados com E. faecalis para formação de biofilme e expostos ao PDS (controle); PDS + CIP 25wt.% e PDS + CIP 5wt.%. A ação antimicrobiana foi avaliada por contagem das unidades formadoras de colônia (UFC / mL) (n = 10) e microscopia eletrônica de varredura (MEV) (n = 2) (Artigo 1). TAP-scaffolds foram caracterizados quanto a morfologia das fibras, propriedades mecânicas, e mecanismo de liberação do fármaco. Espécimes de dentina foram inoculados com A. naeslundii para formação de biofilme e foram expostos à TAP-scaffold, solução de TAP, PDS puro e espécimes de dentina infectada com biofilme (7 dias) sem medicação. A viabilidade bacteriana foi determinada por microscópio de varredura a laser confocal (CLSM) (Artigo 2). Espécimes de dentina inocul... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The present study aimed to: Evaluate the antimicrobial effects of scaffolds containing ciprofloxacin (CIP) into the fibers against Enterococcus faecalis (E. faecalis) biofilm (Article 1); Synthesize, characterize, and analyse the antimicrobial action TAP-scaffold containing CIP, metronidazole (MET) and minocycline (MINO) against Actinomyces naeslundii (A. naeslundii) biofilm (Article 2); Evaluate the effects of TAP-scaffold to combat Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) biofilm (Article 3). Material e Methods: Scaffolds were developed from pure polidioxanone (PDS) solution alone or incorporated with antibiotics: MET, CIP and MINO (TAPscaffold and CIP-scaffold by electrospinning technique (Articles 1, 2, 3). E. faecalis solution was inoculated in dentin to induce biofilm formation that were exposed to PDS (control); PDS + CIP 25wt.% and PDS + CIP 5wt.%. The antimicrobial action were analysed by counting the colony units formation (CFU/mL) and through Scanning Electron Microscopy (SEM) (Article 1). Fiber morphology, mechanical properties, and drug release of TAP-scaffolds were investigated. Dentin specimens were inoculated with A. naeslundii for biofilm formation. The dentin specimens were exposed to TAP-mimic scaffolds, TAP solution (positive control), and pure PDS. Infected dentin (7-days biofilm) specimens were used for comparison. CLSM was performed to determine bacteria viability (Article 2). Dentin specimens were inoculated with P. gingivalis to allow biofilm formatio... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Antonio Carlos Guastaldi / Co-orientador: Marcio Luiz dos Santos / Banca: Ana Marisa Fusco Almeida / Banca: Jorge Enrique Rodriguez Chanfrau / Resumo: A produção de um scaffold de celulose bacteriana/fosfatos de cálcio (CB/PCa) obtidos a partir de SBF e SBFs modificadas foi produzida para otimizar o processo de regeneração óssea. As amostras de celulose bacteriana foram recobertas com fosfatos de cálcio por SBF estabelecido por Thomazini (2009) e seis outras condições de SBF modificadas. Foram comparadas a membrana de celulose bacteriana e o hidrogel transformado em pó, ambos produzidos nas mesmas condições de recobrimento. A formação da fase HA e outros fosfatos de cálcio, foram visualizadas em todas as amostras. Neste trabalho, foram analisadas as influências dos SBF padrão e dos SBFs modificadas (SBF 1, 2, 3, 4, 5 e 6) escolhidos na formação das fases de fosfatos de cálcio na superfície da membrana de celulose bacteriana. Também foi estudado a influência deste biofilme/CaP na viabilidade celular e na adesão e proliferação de células pré-osteoblásticas. A caracterização das amostras foi feita através de microscopia eletrônica de varredura (MEV) difração de raios X - DRX, espectroscopia na região do infravermelho por transformada de Fourier (FTIR) e análises térmicas (TGA, DSC, DTG). O teste biológico de foi feito em ambas as condições testadas e condicionadas. Não foi identificada citotoxicidade em nenhuma das amostras. / Abstract: The production of a bacterial cellulose scaffold / calcium phosphates (CB / PCa) obtained from standard simulated body fluid (SBF) and modified SBFs were stabilished by Aparecida (2009) were incorporated to optimize calcium phosphate phase formation in order to enhance bone regeneration. Samples from bacterial cellulose have been coated with calcium phosphate per SBF established by Ali et al. 2009 and six other SBF conditions changed. Two differente bacterial cellulose were compared, the membrane product of dried hydrogel and commonly used in reaserch was after dried incorporated with the SBFs and the hydrogel in natura incorporated with the PCa was then dried and processed into hydrogel powder, both produced under the same coating conditions. The phase formation of HA and other calcium phosphates were visualized in all samples. In this work, the influence of the standard SBF and modified SBFs (1, 2, 3, 4, 5 and 6) were analyzed chosen in the formation of calcium phosphate phases on the surface of the bacterial cellulose membrane. It was also studied the influence of this biofilm / CaP on cell pre-osteoblast cells viability. The characterization of the samples was done by scanning electron microscopy (SEM) X-ray diffraction - XRD, spectroscopy in the infrared Fourier transform (FTIR) and thermal analysis (TGA, DSC, DTG). The biological testing character was done on both conditions by the MTT reduction method. Cytotoxicity was not identified in any of the samples tested. / Mestre

Orientador: José Francisco Lopes Filho / Coorientador: Carmen C. Tadini / Banca: Crislene Barbosa de Almeida / Banca: José Antônio Gomes Vieira / Resumo: A zeína é uma proteína do glúten do milho muito utilizada na produção de filmes plásticos flexíveis e transparentes. O desenvolvimento de embalagens biodegradáveis à base de zeína tem um grande potencial para a melhoria da qualidade e aumento da vida de prateleira de alimentos, além de permitir a adição de compostos ativos, agregando assim, maior valor tecnológico aos biofilmes de zeína, tornando-os capazes de melhorar a qualidade dos alimentos e sua conservação. Este trabalho propôs o uso de nanocarbonato no desenvolvimento de filmes biodegradáveis à base de zeína para identificar a estrutura básica e as propriedades dos biomateriais. Os filmes foram elaborados pela técnica casting tendo como formulação base zeína, glicerol, ácido oléico, etanol e água, e incorporados com três concentrações de nanocarbonato (1, 2 e 3 g / 100 g de proteína) a fim de estudar sua estrutura. Os filmes foram avaliados quanto as suas propriedades mecânicas (resistência máxima à tração e porcentagem de elongação na ruptura), fisico-químicas (umidade, solubilidade, atividade de água e espessura), microestutrutra (Microscopia eletrônica de varredura (MEV) e Microscopia óptica (MO)), permeabilidade ao vapor de água, opacidade e cor. Os filmes apresentaram-se homogêneos, livre de partículas insolúveis, flexíveis e espessura uniforme. A adição do nanocarbonato resultou em materiais mais elásticos e flexíveis, com maior estabilidade e manutenção da cor e também mais claros, no entanto, apresentaram-se mais hidrofílicos quando comparados ao filme padrão. Na análise da estrutura verificou-se uma dispersão aleatória das nanopartículas na matriz polimérica indicando que não houve intercalação destas com a matriz. Verificou-se também um aumento no tamanho de agregados de lipídeos quando aumentou-se a concentração de nanocarbonato / Abstract: Zein is a corn gluten protein that is widely used in the production of flexible and transparent plastic films. The development of biodegradable packaging based on Zein has great potential to improve the quality and increase the shelf-life of a fruit product, as well as permit the addition of active compounds, this will add greater value to Zein-based biofilms, making them able to improve food quality and conservation. The purpose of this work is to produce Zein biofilms added with nanocarbonate (1%, 2% e 3%) to identify the basic structure and properties of the biomaterials. These films, made by employing a technique known as casting, consist of a basic formulation of Zein, glycerol, oleic acid, ethanol and water, combined with three concentrations of nanocarbonate (1, 2 e 3 g / 100 g of protein) to study their structure. These materials were assessed according to their mechanical properties (tensile strength at break and elongation at break percentage), physical and chemical properties (humidity, solubility, water activity and thickness), microstructure (Scanning Electron Microscopy (SEM) and Optical Microscopy (MO)), water vapor permeability, opacity and color change. The films were homogenous, free of insoluble particles, flexible and uniform thickness. The addition of nanocarbonate resulted in more elastic and flexible material, more stability and maintenance of color and also lighter, however, were more hydrophilic compared with the standard film. The analysis of the structure there is a random dispersion of nanoparticles in the polymer matrix indicating no collation with the matrix. There was also an increase in size of the lipid when the concentration of nanocarbonate increased / Mestre

Orientadora: Cristiane Duque / Banca: Rodrigo Alex Arthur / Banca: Rogério de Castilho Jacinto / Resumo: Os objetivos do estudo foram avaliar os efeitos citotóxico e antimicrobiano de análogos de peptídeos catiônicos e sua influência na expressão de marcadores fenotípicos e genotípicos de mineralização dentinária. Fibroblastos da linhagem L929 foram expostas a diluições seriadas dos peptídeos LL-37 e análogos hBD-3-1CV e KR-12-a5 e a viabilidade das células foi avaliada por ensaios de metil tiazol tetrazólio (MTT). Concentração inibitória mínima (CIM) e concentração letal mínima (CLM) para os peptídeos e controles (clorexidina - CHX) foram determinadas contra Streptococcus mutans, Actinomyces israelii, Enterococcus faecalis, Candida albicans, Fusobacterium nucleatum e Porphyromonas gingivalis, pelo método de microdiluição, após 4 e 24 horas. Biofilmes de E. faecalis e F. nucleatum foram formados sobre blocos de dentina radicular bovina e expostos a 5X e 10X MLC do peptídeo com melhor atividade antimicrobiana e CHX e analisadas por contagem de unidades formadoras de colônias/ml (UFC/ml) e por Microscopia de Varredura Confocal à Laser (CLSM). Células semelhantes à odontoblastos da linhagem MDPC-23 foram expostas a diluições seriadas de LL-37, hBD-3-1CV, KR-12- A5 por 24 horas, seguidas de trocas de meio osteogênico por 7 dias e avaliada a viabilidade celular, produção de proteína total (TP), atividade da fosfatase alcalina (ALP) e deposição de nódulos mineralizados. A expressão de genes de marcadores de mineralização (sialofosfoproteína dentinária - DSPP e fosfoproteína de matriz dentinária - DMP-1) foi realizada por PCR quantitativo, após 24 h de exposição aos peptídeos e de incubação durante 14 dias em meio osteogênico. LL-37/hBD-3-1CV e KR-12-a5 afetaram o metabolismo dos fibroblastos em concentrações acima de 500 e 250 μg/ml, respectivamente. KR-12-a5 teve os melhores valores... / Abstract: The objectives of the study were to evaluate the cytotoxic and antimicrobial effects of analogues of cationic peptides and their influence in the expression of phenotypic and genotypic markers of dentin mineralization. L929 fibroblast cells were exposed to serial dilutions of peptides LL-37, hBD-3-1CV and KR-12-a5 and cell metabolism was evaluated by methyl thiazol tetrazolium (MTT) assays. Minimal inhibitory concentration (MIC) and minimal lethal concentration (MLC) of peptides and controls (chlorhexidine - CHX) were determined for Streptococcus mutans, Actinomyces israelii, Enterococcus faecalis, Candida albicans, Fusobacterium nucleatum and Porphyromonas gingivalis, by microdilution method, after 4 and 24h. E. faecalis and F. nucleatum biofilms were formed in blocks of bovine root dentin and exposed to 5X and 10X MLC of the peptide with the best antimicrobial activity and CHX and analyzed by colonies forming units/ml (CFU/ml) counts and by Confocal Laser Scanning Microscopy (CLSM). MDPC-23 odontoblast-like cells were exposed to serial dilutions of peptides LL-37, hBD-3-1CV and KR-12-a5 for 24 hours, followed by changes of osteogenic medium for 7 days and evaluated cell viability, total protein (TP) production, alkaline phosphatase (ALP) activity and mineralized nodule deposition. The gene expression of mineralization markers (Dentin Sialophosphoprotein - DSPP and Dentin matrix phosphoprotein 1 - DMP-1) was performed by quantitative PCR, after 24h of peptide exposure and incubation for 14 days in osteogenic medium. LL-37 and hBD-3-1CV affected cell metabolism at concentrations above 500μg/ml and KR-12-a5 above 250μg/ml. KR-12-a5 had the best MIC/MLC values against all microorganisms and both times of exposure. E. faecalis and C. albicans growth was affected only for KR-12-a5 and CHX. hBD-3-1CV and... / Mestre

Orientador: Ana Marisa Fusco Almeida / Coorientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Banca: Alexandra Ivo de Medeiros / Banca: Maria Lúcia Taylor da Cunha e Mello / Resumo: Histoplasma capsulatum var. capsulatum é um fungo dimórfico que causa a histoplasmose, uma micose respiratória e sistêmica. H. capsulatum é primariamente adquirido após a exposição ao aerosol, pela inalação de microconídeos ou fragmentos de hifas. A evolução da doença respiratória depende da capacidade da levedura de Histoplasma em sobreviver e se replicar dentro dos macrófagos alveolares. Neste contexto, é conhecido que a adesão às células do hospedeiro constitui o primeiro passo para a colonização e é essencial para o estabelecimento da infecção. Em vista disso, alguns microrganismos aderem às superfícies biológicas e não biológicas formando biofilmes. Biofilmes são comunidades dinâmicas de microrganismos, que aderidos às superfícies, produzem uma matriz exopolimérica e essa formação representa um estado que permite que as células microbianas sobrevivam em ambientes hostis e dispersem para colonizar novos nichos. Com base na importância potencial de biofilmes para sua sobrevivência no hospedeiro humano e na natureza, este trabalho foi desenvolvido para investigar pela primeira vez a formação de biofilme por H. capsulatum correlacionando com sua capacidade em aderir às células epiteliais, bem como definir particularidades da interação entre macrófagos e H. capsulatum, incluindo análise de fragmentação nuclear pelo ensaio do cometa e TUNEL. Os ensaios foram realizados in vitro com duas cepas clínicas de H. capsulatum, uma isolada no México e a outra no Brasil. Além disso, foi realizada análise proteômica diferencial do fungo em biofilme e sob a condição planctônica. Os resultados mostraram que H. capsulatum é capaz de formar biofilmes e ambos os isolados selecionados tem uma alta capacidade em aderir aos pneumócitos (A549). Através de análise proteômica, o isolado EH-315 exibiu diferentes perfis protéicos, com aproximadamente... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Histoplasma capsulatum var. capsulatum is a dimorphic fungus that causes histoplasmosis, a respiratory and systemic mycosis. H. capsulatum is primarily acquired after exposure to the aerosol, by microconideas or hyphal fragments inhalation. The development of a respiratory disease depends on the ability of Histoplasma yeast to survive and replicate within alveolar macrophages. In this context, it is known that the adhesion to host cells is the first step in the colonization and is essential for the establishment of the infection. As a result, some microorganisms adhere to biological and non-biological surfaces producing biofilms. Biofilms are dynamic communities of microorganisms that adhere to surfaces producing an exopolimeric matrix, and this formation is a state that allows microbial cells to survive in hostile environments and to disperse to colonize new niches. Based on the potential importance of biofilms to survive in the human host and in nature, this study was performed to investigate, for the first time, the biofilm formation by H. capsulatum correlating with their ability to adhere to epithelial cells, as well as defining features of the interaction between macrophages and H. capsulatum, including analysis of nuclear fragmentation by comet assay. In addition, we performed differential proteomic analysis of the fungus in biofilm and under planktonic conditions. The results demonstrated that H. capsulatum is able to form biofilms and both selected isolates have a high ability to adhere to pneumocytes (A549). Through proteomic analysis, the EH-315 isolate exhibited different protein profiles, with approximately 250 proteins exclusively expressed in the biofilm format and others with different levels of expression when compared to the fungus in planktonic growth. The sequencing by MALDI-TOF/TOF revealed that most proteins are nuclear or are involved in the metabolism... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre