Thesis supervisor: Michael A. Apicella. Includes bibliographic references (p. 175-192).

Thesis (Dr. rer. nat.)--Technische Universität Hamburg-Harburg, 2003. / Includes bibliographical references (p. 117-138).

Thesis (Ph.D.)--Washington State University, December 2005. / Includes bibliographical references.

Thèse (M.Sc.) -- Université Laval, 1999. / Bibliogr.: f. 141-153. Publ. aussi en version électronique.

Thesis (Ph.D.)--University of Hong Kong, 2005. / Title proper from title frame. Also available in printed format.

Thesis (Ph. D.)--Montana State University--Bozeman, 2007. / Typescript. Chairperson, Graduate Committee: Anne Camper. Includes bibliographical references (leaves 104-113).

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-03-15Bitstream added on 2014-06-13T19:58:17Z : No. of bitstreams: 1 pinto_gcs_me_arafo.pdf: 899028 bytes, checksum: 57f6b9a787b99be24637541e57cbfc9c (MD5) / A necessidade de superar o desafio criado pelos biofilmes resistentes aos tratamentos antimicrobianos convencionais tem levado à busca por tratamentos alternativos, como terapia fotodinâmica antimicrobiana (aPDT). Este estudo avaliou in vitro a eficácia da aPDT na inativação de biofilmes de Staphylococcus aureus suscetíveis e resistentes à meticilina (MRSA e MSSA), mediado pelos fotossensibilizadores (PSs) Curcumina (Cur) e Photodithazine® (PDZ). Biofilmes foram formados e tratados com diferentes concentrações de Cur (0, 20, 40 e 80 μM) e PDZ (0, 50 e 75 mg/L), e iluminados ou não por fonte de luz LED (Cur 455 ± 3 nm/ 5,28 J/cm2; PDZ 660 ± 3 nm/ 5,28 J/cm2 ou 50 J/cm²). Os grupos Controle Positivo (CP) não receberam nenhum PS e também não foram iluminados. A viabilidade dos micro-organismos após a aPDT foi avaliado pelo número de colônias viáveis, pelo ensaio de XTT e pela utilização do kit LIVE/DEAD® na Microscopia Confocal de Varredura à Laser (MCVL). Os resultados foram avaliados por análises de variância de dois fatores de efeitos fixos (ANOVA) e complementados por comparações múltiplas de médias pelo teste de Tukey. Para ambas as cepas, todas as concentrações de Cur e PDZ testadas reduziram significativamente a atividade metabólica e o UFC/mL para ambos micro-organismos quando comparado com os grupos CN (p0,05). Os resultados foram otimizados para a Cur quando utilizou-se a maior concentração (80 μM), para a PDZ, a maior redução nos micro-organismos foi observada quando associou-se a maior concentração de PDZ (75 mg/L) com a maior dose de luz (50 J/cm²). Os biofilmes submetidos a aPDT demostraram pela MCVL um maior número de células coradas em vermelho, indicando que a aPDT foi eficaz para promover danos ou morte às células bacterianas. Assim, a aPDT pode ser considerada promissora para atuar de forma sinérgica no tratamento de infecções bacterianas / The need to overcome the challenge created by biofilms regarding conventional antimicrobial approaches has lead to search of alternative treatments such as Antimicrobial Photodynamic Therapy (aPDT). This in vitro study evaluated the efficacy of aPDT using the photosensitizer (PS) Curcumin (Cur) and Photodithazine® (PDZ) in the inactivation of biofilms of methicillin susceptible and resistant S. aureus (MSSA and MRSA). Biofilms were treated with different Cur (0, 20, 40 or 80 μM of Cur) and PDZ concentrations (0, 50 or 75 mg/L) and illuminated or not with LED source (Cur 455 ± 3 nm/ 5.28 J/cm2; PDZ 660 ± 3 nm/ 5.28 J/cm2 or 50 J/cm²). Positive control samples were not exposed to PS or light. The microorganisms viability after aPDT were evaluated by counting the number of colonies, the XTT assay and LIVE/DEAD® staining using confocal laser scanning microscopy (CLSM). The results were evaluated by analysis of variance, two-factor fixed effects (ANOVA) and complemented by multiple comparisons by Tukey test. For both strains, all the tested Cur and PDZ concentrations reduced significantly both biofilm metabolic activity and CFU/mL compared to the negative control (p0.05). Moreover, the results were optimized for Cur when the higher concentration was used (80 μM); For PDZ, the best results were obtained when it was associated a higher concentration of PDZ (75 mg/L) with the higher dose of light (50 J/cm²). Biofilms submitted to aPDT showed a large number of red-stained colonies, indicating that this therapy was efficient in disrupting the bacterial membrane. It can be concluded that PS was efficient in reducing viable colonies of both S. aureus strains by damaging cell membrane and causing cell death. Thus, the aPDT is can be considered promising to act synergistically in the treatment of bacterial infections

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-03-12Bitstream added on 2015-03-03T12:06:56Z : No. of bitstreams: 1 000806425_20170312.pdf: 263323 bytes, checksum: 4daef685ed333b05ec684914cb0765b5 (MD5) Bitstreams deleted on 2017-03-17T12:38:11Z: 000806425_20170312.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-03-17T12:39:10Z : No. of bitstreams: 1 000806425.pdf: 2132825 bytes, checksum: 171c310b3265e76efa3377d61b47cbf7 (MD5) / O óleo essencial de Melaleuca alternifolia (TTO) é um extrato de ação antifúngica e preventiva em escala farmacêutica ou cosmética. O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia do TTO e Terpinen-4-ol sobre isolados clínicos de Candida albicans. Este estudo foi realizado em três fases: 1- Identificação da CIM (Concentração Inibitória Mínima) e CFM (Concentração Fungicida Mínima) do TTO (0,25 a 2%) e Terpinen-4- ol (0,11 a 0,95%) sobre C. albicans na forma planctônica. 2- Análise das diferentes concentrações do óleo sobre biofilme monoespécie de C. albicans por meio da contagem das UFC/mL e avaliação da atividade metabólica das células pelo método colorimétrico de XTT. 3- Análise da ação inibitória das soluções de TTO e Terpinen-4- ol sobre biofilmes de C.albicans (cepa padrão e isolados clínicos) formados em corpos de prova de resina acrílica termopolimerizável previamente cobertos com saliva humana, por meio do teste de XTT e por microscopia confocal de varredura à laser (MCVL). A nistatina (Sigma) foi utilizada como controle positivo. Os resultados mostraram que isolados de C. albicans planctônicos foram sensíveis ao TTO 1%, Terpinen-4-ol 0,47% e Nistatina 8 ?g/mL. As menores concentrações fungicidas para os isolados foram TTO 2 %, Terpinen-4-ol 0,95 % e Nistatina 16 ?g/mL. Quando analisado em biofilme através da quantificação (UFC/mL) e teste de XTT as concentrações de TTO 2 % e Terpinen-4-ol 0,95 % foram eficazes quando comparado ao controle, sendo que as amostras da genotipagem A2 e B1 foram as mais resistentes. Os resultados de MCVL mostraram que todos os biofilmes desenvolvidos em corpos de resina acrílica apresentaram-se semelhantes à ação da Nistatina. Os extratos avaliados apresentaram ação antifúngica para os isolados clínicos e podem ser considerados tratamento alternativo para paciente com candidíase. / The essential oil of Melaleuca alternifolia (TTO) is an extract of antifungal action and preventive in pharmaceutical or cosmetic scale. The aim of this study was to evaluate the efficacy of TTO and Terpinen-4-ol against clinical isolates of Candida albicans. This study was conducted in three phases: 1- Identification of MIC (Minimum Inhibitory Concentration) and CFM (Minimum Fungicidal Concentration) of TTO (0.25 to 2%) and Terpinen-4-ol (0.11 to 0.95 %) on C. albicans in planktonic form . 2- Analysis of different concentrations of oil on C. albicans biofilm single species by counting CFU/mL and evaluation of the metabolic activity of cells by XTT colorimetric method. 3- Analysis of the inhibitory action of TTO and Terpinen-4-ol solutions on C. albicans biofilms (standard strain and clinical isolates) formed in specimens of polymerizable resin acrylic microwave previously coated with human saliva , by means of the XTT test and confocal laser scanning microscopy (CLSM) . The nystatin (Sigma) was used as a positive control. The results showed that isolates of C. albicans planktonic were sensitive to TTO 1%, Terpinen-4-ol 0.47% and Nystatin 8 mg/mL. The smaller fungicidal concentrations for the isolates were TTO 2%, Terpinen-4-ol 0.95% and Nystatin 16 mg / mL. When analyzed by quantifying biofilm (CFU / ml) and XTT test, the concentrations TTO 2% and Terpinen-4-ol 0.95% were effective when compared to the control, and genotyping of samples A2 and B1 were more resistant. The CLSM results showed that all biofilms developed in bodies of acrylic resin were similar to the action of Nystatin. The extracts showed antifungal action for the clinical isolates and can be considered an alternative treatment for patients with candidiasis.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-25Bitstream added on 2014-06-13T20:06:11Z : No. of bitstreams: 1 000740082.pdf: 4167341 bytes, checksum: 8fe87af8a33480548b14b44df006b99a (MD5) / A capacidade de aderência dos micro-organismos a diferentes superfícies, a resistência a medicamentos, bem como a interação entre as espécies visam garantir a sobrevivência e a proliferação dos mesmos, resultando em menor susceptibilidade dos patógenos aos tratamentos e aos procedimentos de desinfecção. Este estudo teve como objetivo avaliar in vitro a eficácia da Terapia Fotodinâmica (PDT) mediada pelos fotossensibilizadores (FSs) Photodithazine® (PDZ) e Curcumina (Cur) sobre biofilmes multi-espécies compostos por Streptococcus mutans, Candida albicans e Candida glabrata. Para isso, o estudo foi divido em três partes: 1- avaliação do efeito fotodinâmico das diferentes concentrações de PDZ (100, 150, 175, 200 e 250mg/L) associada à luz LED (660nm/ 37,5J/cm2) na inativação de biofilme multi-espécies formado em fundo de placa de 96 orifícios; 2- avaliação do efeito fotodinâmico quando realizadas uma e três aplicações sucessivas de PDT, mediada por PDZ (175 e 200mg/L) e luz LED (660nm/ 37,5J/cm2) na inativação de biofilmes multi-espécies, formado sobre corpos-de-prova de resina acrílica. 3- avaliação do efeito fotodinâmico de diferentes concentrações do FS Cur (80, 100 e 120μM) associada à luz LED (455nm/ 37,5J/cm2) sobre biofilmes multi-espécies cultivados por diferentes períodos (24 e 48h) sobre corpos-de-prova de resina acrílica. Adicionalmente para cada condição avaliada foi verificado o efeito da aplicação isolada de cada concentração dos FSs PDZ e Cur em contato com o biofilme na ausência de luz (P+L-) e o efeito isolado da luz (P-L+). Além disso, foi realizado o grupo controle positivo, no qual o biofilme não esteve em contato com o FS e não foram iluminados com luz LED (P-L-). Após a aplicação dos tratamentos propostos, a viabilidade dos micro-organismos foi avaliada por meio da contagem de colônias (UFC/mL), teste do XTT, determinação da... / The ability of adhesion of microrganisms to different surfaces, the drug resistance, as well as the interaction among the species help to ensure the survival and proliferation of these microrganisms and result in lower susceptibility of these pathogens to treatment and disinfection procedures. This study aimed to evaluate the in vitro efficacy of PDT mediated by photosensitizers (FSs) Photodithazine ® (PDZ) and Curcumin (Cur) against multispecies biofilms formed by Candida albicans, Candida glabrata and Streptococcus mutans. This study was divided into three parts: 1. evaluation of the effect of photodynamic therapy of different concentrations of PDZ (100, 150, 175, 200 and 250mg / L) associated with the LED light (660 nm / 37.5 J/cm2) in the inactivation of multspecies biofilms formed in 96-well microtiter plates; 2. evaluation of the photodynamic effect of one PDT applications only and three successive PDT applications mediated by PDZ (175 and 200 mg / L) and LED light (660 nm / 37.5 J/cm2) in the inactivation of multispecies biofilms, formed on acrylic resin samples; 3. evaluation of the photodynamic effect of different concentrations of Cur FS (80, 100, and 120μM) associated with LED light (455nm / 37.5 J/cm2) against multispecies biofilms grown during different periods (24 and 48h) on acrylic resin samples. Additional samples were treated either with FSs (PDZ or Cur) (P+L-) or LED light (P-L+) only. Positive control samples had neither light nor FSs (PDZ or Cur) (P-L-). After applying the proposed treatments, the viability of microrganisms was assessed by Colony Count (CFU / mL), the XTT assay, determination of the total biomass (CV) and confocal laser scanning microscopy (CLSM).The results were analyzed using ANOVA or Kruskal-Wallis test followed by Tukey or Dunn, respectively. For the biofilm formed in 96-well plate, the concentrations of 175 and 200mg/L showed greater reduction in cell...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-10-24Bitstream added on 2014-06-13T18:46:01Z : No. of bitstreams: 1 monteiro_dr_dr_araca.pdf: 4433371 bytes, checksum: 7ace13af6a3345bfc97059baad093841 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antifúngica de nanopartículas de prata (NP) contra os biofilmes de Candida albicans e Candida glabrata. NP foram sintetizadas por meio da redução do nitrato de prata com citrato de sódio e estabilizadas com amônia ou polivinilpirrolidona. Os testes de concentração inibitória mínima (CIM) das NP contra células de Candida foram baseados no método da microdiluição. NP foram aplicadas sobre os biofilmes de Candida (48 horas) e após 24 horas de contato sua atividade antifúngica foi determinada por meio da quantificação da biomassa total (coloração com violeta cristal (VC)) e por meio da enumeração das unidades formadoras de colônias (UFCs). Após o tratamento com NP, as matrizes dos biofilmes foram extraídas e analisadas em termos de proteínas, carboidratos e DNA, e a estrutura dos biofilmes foi analisada por meio da microscopia eletrônica de varredura e de epifluorescência. A atividade antibiofilme da combinação de NP com nistatina e clorexidina foi avaliada por meio dos ensaios de VC e UFCs. Leveduras viáveis foram recuperadas a partir dos biofilmes previamente tratados com NP e adicionadas às células epiteliais HeLa e aos poços de placas de poliestireno e, após 2 horas de contato, a adesão foi determinada usando VC. A eficácia de NP submetidas às variações de temperatura (50, 70 e 100ºC) e pH (5 e 9) também foi avaliada, assim como a susceptibilidade às NP dos biofilmes de Candida em diferentes fases de crescimento. Os resultados de CIM mostraram que NP foram fungicidas contra os isolados testados em concentrações baixas (0,4-3,3 μg/mL). NP foram mais efetivas na redução da biomassa para os biofilmes de C. glabrata (reduções de 90% na concentração de 108 μg/mL) do que para C. albicans, e promoveram reduções significativas no log10 do número de UFCs... / The aim of this study was to evaluate the antifungal activity of silver nanoparticles (SN) against Candida albicans and Candida glabrata biofilms. Colloidal suspensions of SN were synthesized by reducing silver nitrate with sodium citrate and stabilized with ammonia or polyvinylpyrrolidone. Minimal inhibitory concentrations (MIC) were performed for Candida cells grown in suspension following the microbroth dilution method. Candida biofilms (48 h) were treated with SN for 24 h and then the total biomass quantification (by crystal violet (CV) staining) and the colony forming units (CFUs) were determined. Also, after treating with SN, extracellular matrices were extracted from Candida biofilms and analyzed chemically in terms of proteins, carbohydrates and DNA. To investigate the biofilm structure, scanning electron microscopy and epifluorescence microscopy were carried out. The antibiofilm activity of SN in combination with nystatin and chlorhexidine was also assessed by CV and CFU. Moreover, viable yeasts were recovered from the biofilms pretreated with SN and added to HeLa epithelial cells or to empty wells of polystyrene plates and, after 2 h of contact, the adhesion capacity of the yeasts was determined by using CV staining. The antibiofilm efficacy of SN subjected to variations of temperature (50, 70 and 100ºC) and pH (5 and 9) was also evaluated. Finally, the susceptibility to SN of biofilms in different stages of growth was analyzed. MIC results showed that SN were fungicidal against the tested strains at very low concentrations (0.4- 3.3 μg/mL). SN were more effective in reducing the total biomass of C. glabrata (reductions around 90% at 108 μg/mL SN) than C. albicans biofilms, and provided significant log10 reduction of... (Complete abstract click electronic access below)