Orientador: Helion Vargas / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Fisica Gleb Wataghin / Made available in DSpace on 2018-09-26T16:21:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_AntonioCarlos_D.pdf: 5572408 bytes, checksum: faaf28fa6e7bb596c40bdf5fedbb89f8 (MD5) Previous issue date: 1993 / Resumo: A técnica fotoacústica é aplicada numa variedade de experimentos para diferentes materiais biológicos. Desenvolvemos uma série de medidas em pericarpos de variedades de milho comum e de pipoca onde encontramos as principais diferenças entre suas propriedades térmica, mecânica e estrutural. Os dados, combinados com o modelo do vaso de pressão para explicar o mecanismo do "estouro" , não só explicou a razão do milho da pipoca "estourar" , como apontou as condições necessárias, e portanto, explicar as mudanças que podem Ter ocorrido durante a evolução para que o fruto do milho de pipoca tenha a habilidade de "estourar". Um novo e sensível método para estudo de atividade fotossintética em folha vegetal "in vivo" e "in situ", com a folha ainda presa ao caule é descrito. A utilidade geral deste método é ilustrada através da espectroscopia e atividade fotossintética em folhas de milho e de soja. A evolução de oxigênio, detectada na folha, com este novo detetor foi comparada com medidas usando um eletrodo de Clark. Finalmente, um estudo com a fotoacústica em folhas adaptadas ao escuro é apresentado / Abstract: The photoacoustic technique is applied in a variety of experimental arrangements for different biological materials. We have performed a series of measurements of the pericarp of popcorn and corn varieties to find out what are the main differences among their mechanical, thermal and structural properties. The data, combined with the pressure vessel model for the popping mechanism, not only explains why popcorn pops, but point out what are the necessary conditions, and therefore, the necessary changes that migh have occured during evolution, for a fruit to be able to pop in this species. A new and highly sensitive method is described for "in vivo" and "in situ" studies of photosynthetic activity of undetached leaves. The general utility of this method is illustrated by examining the spectroscopic and photosynthetic activity of undetached leaves of maize and soybean. The leaf photosynthetic oxygen evolution in this new detector was estimated by comparing with measurement using a Clark-type O2 electrode detector. Finally, a study of photoacoustic from dark-adapted leaves is presented / Doutorado / Física / Doutor em Ciências

Tese de mestrado integrado. Engenharia Química. Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto. 2010

ASSIS, Lívia Coelho de. Avaliação da atividade cicatrizante do extrato etanólico e do Triterpeno 3, 6 , 16 Trihydroxylup-20 (29) - Eno provenientes de folhas de Combretum leprosum mart. no tratamento de lesões cutâneas induzidas em camundongos. 2015. 65 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-11-19T13:30:46Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_lcassis.pdf: 1077040 bytes, checksum: 0250c79249643f6ebf1a715508586500 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-11-19T13:33:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_lcassis.pdf: 1077040 bytes, checksum: 0250c79249643f6ebf1a715508586500 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-19T13:33:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_lcassis.pdf: 1077040 bytes, checksum: 0250c79249643f6ebf1a715508586500 (MD5) Previous issue date: 2015 / Wound healing is a complex and dynamic process involving an integrated action of several cell types, extracellular matrix and soluble mediators such as cytokines, which serve to recover the integrity of damaged anatomical structure. Natural products are the basis for many biotechnological inputs, as they are biologically active compounds with great potential for therapeutics and can provide molecular basis for many drugs in the clinics. Combretum leprosum Mart. is a native species of Caatinga, important biome in the Brazilian semiarid region, being popularly used in Brazil for the treatment of many diseases such as skin diseases. This study aimed to investigate the pro-healing potential of the ethanol extract (EECL) and the bioactive triterpene 3β, 6 β, 16 β-trihydroxylup-20 (29) ene (CLF-1) isolated from leaves of C. leprosum. Cell migration assay was performed using fibroblasts, which were treated with CLF-1 (1.75 µg / ml and 2.5 µg / ml) and analyzed after 0, 6 and 24 hours. Skin wounds (1 cm2) were induced in the dorsal region of mice (n = 30) and were treated with daily topical application (100µl) according to the group: saline, EECL (100μg / ml) and CLF-1 (100μg / ml) for 12 days. The results showed that CLF-1 did not show toxicity to fibroblasts and further increased cell proliferation and migration so that a significant increase on injury closing percentage was observed using both concentrations (1.75 mg / ml vs 2.5 mg / mL,) compared to control (p <0.05). Within 24 hours, there was also a significant increase in the rate of migration comparing CLF-1 at 2.5 ug / ml and control group (p<0.05). For the in vivo analysis, on the 2nd post surgical day (PS), the lesions treated with EECL and CLF-1 showed moderate presence of vessels in granulation tissue progressing to the dermis, as well as a slight inflammatory infiltrate. It was also observed that, on the 7th PS day, the animals treated with CLF-1 showed moderate angiogenesis, whereas animals treated with saline showed cell proliferation and migration into the wound. Furthermore, on the 12th day PS, the animals treated with EECL and CLF-1 showed complete closing of the injury, while those receiving saline exhibited open wounds. Thus, it was concluded that EECL and CLF-1 showed pro-healing effects, as well as a possible anti-inflammatory action and additional research is needed to elucidate its mechanisms in the wound healing process. / A cicatrização cutânea é um processo complexo e dinâmico que envolve uma ação integrada de vários tipos celulares, matriz extracelular e mediadores solúveis como citocinas, que tem por finalidade a recuperação da integridade da estrutura anatômica danificada. Produtos naturais são a base para diversos insumos biotecnológicos, pois são compostos biologicamente ativos com grande potencial terapêutico, e que podem formar bases moleculares para muitas drogas em uso clínico. Combretum leprosum Mart. é uma espécie nativa da Caatinga, bioma importante na região do semiárido brasileiro, sendo esta espécie popularmente utilizada no Brasil para o tratamento de diversas doenças, tais como doenças de pele. O presente estudo investigou o potencial pró-cicatrizante do extrato etanólico (EECL) e do triterpeno bioativo 3β, 6 β, 16 β-trihydroxylup-20 (29)-eno (CLF-1) isolado das folhas de C. leprosum. Para isto, o ensaio de migração de células foi realizado com fibroblastos, que foram pós tratados com CLF-1 (1,75 μg/mL e 2,5 μg/mL) e analisados em 0, 6 e 24 horas. Feridas cutâneas (1 cm2) foram realizadas na zona dorsal de camundongos (n=30) e em seguida foram tratadas com uma aplicação tópica diária (100 μl) de acordo com o grupo: salina, EECL (100μg/mL) e CLF-1 (100μg/mL) durante 12 dias. Os resultados demonstraram que CLF-1 não apresentou toxicidade aos fibroblastos e, ainda, em 6 horas estimulou a proliferação e migração celular, de modo que observou-se um aumento significativo na porcentagem de fechamento em ambas concentrações (1,75 μg/mL e 2,5 μg/mL) em relação ao controle (p<0,05). Em 24 horas, verificou-se também aumento significativo na taxa fechamento quando comparado CLF-1 2,5 μg/mL em relação ao controle (p<0,05). Na avaliação in vivo, observou-se no 2° dia pós cirúrgico (P.C.), que as lesões tratadas com EECL e CLF-1 mostraram presença moderada de vasos no tecido de granulação, progredindo na derme, bem como apresentaram um leve infiltrado inflamatório. Observou-se, ainda, que no 7° dia P.C. os animais tratados com CLF-1 demonstraram moderada angiogênese, enquanto que os animais tratados com salina apresentaram proliferação e migração celular em direção ao leito da ferida. Ademais, no 12° dia P.C., os animais tratados com EECL e CLF-1 apresentaram o fechamento completo da lesão, enquanto os que receberam salina, apresentaram, ainda, feridas abertas. Desta forma, foi possível concluir que o EECL e o CLF-1 apresentaram efeitos pró-cicatrizante, bem como uma possível ação anti-inflamatória e investigações adicionais são necessárias para elucidar o mecanismo de ação no processo de cicatrização cutânea.

Orientadores: Marilia Afonso Rabelo Buzalaf, Hiroshi Aoyama / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-05T12:55:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cardoso_VanessaEiddaSilva_M.pdf: 3082800 bytes, checksum: 2912244b8c189e99e50ed912ed722f6e (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Neste estudo com 5 voluntários (27-33 anos), a existência de uma ritmicidade biológica para as concentrações de flúor (F-) no plasma foi avaliada. Os voluntários se abstiveram do uso de produtos dentais fluoretados por 30 dias antes do estudo e receberam uma dieta com baixa concentração de F- ([F-]) (< 0,3 mg/dia) para minimizar as alterações na [F-] no plasma relacionadas à dieta durante os 5 dias deste estudo. As amostras de plasma foram coletadas a cada 3 h das 8 às 20 h. A urina foi coletada a cada 3 h das 8 às 20 h, e adicionalmente das 20 às 8 h. Um eletrodo específico foi usado para medir o F- no plasma após difusão facilitada por hexametil-disiloxano. O F- na urina foi analisado pelo método direto após adição de tampão de ajuste de força iônica total. Paratormônio (PTH) e calcitonina séricos foram analisados por quimioluminescência e imunorradioimetria, respectivamente. Ca2+ e P no plasma foram analisados por espectrometria de absorção atômica e colorimetricamente, respectivamente. Um ritmo biológico para a [F-] no plasma foi encontrado (p=0,0029). O pico da [F-], 0,55 ± 0,11 µmol/L, ocorreu às 11 h, e a menor [F-], 0,50 ± 0,06 µmol/L ocorreu entre as 17 e as 20 h. A [F-] no plasma se correlacionou positivamente às taxas de excreção urinária de F- (p=0,0008) e aos níveis de PTH no soro (p=0,0252), que também mostrou um ritmo biológico (p=0,0004). Os níveis de PTH no soro se correlacionaram positivamente às taxas de excreção urinária de F- (p=0,0087). Os resultados mostram a existência de uma ritmicidade biológica na [F-] do plasma em humanos, e sugere que o PTH e o sistema renal estão envolvidos em sua regulação / Abstract: In this study with 5 subjects (27-33 years old) the existence of a biological rhythmicity for the plasma fluoride concentration ([F-]) was evaluated. The subjects refrained from using Fdental products for 30 days prior to the study and received a low-F diet (<0.3 mg/day) to minimize diet-related changes in plasma [F-] during the 5 days of the study. Plasma samples were collected every 3 h from 8 am to 8 pm. Urine was collected every 3 h and additionally from 8 pm to 8 am. An specific electrode was used to measure plasma F- after HMDSfacilitated diffusion. Urine F- was analyzed by the 'direct¿ method after adding total ionic strength adjustment buffer-(TISAB). Serum PTH and calcitonin were analyzed by chemiluminescense and immunorradiometry, respectively. Plasma Ca2+ and P were analyzed by AAS and colorimetry, respectively. A biological rhythmicity for plasma [F-] was found (p=0.0029). The peak [F-], 0.55 ± 0.11 µmol/L, occurred at 11 am and the lowest [F-], 0.50 ± 0.06 µmol/L occurred between 5 pm and 8 pm. Plasma [F-] was positively correlated with urinary F- excretion rates (p=0.0008) and with serum PTH levels (p=0.0252) which also showed a biological rhythm (p=0.0004). Serum PTH levels were positively correlated with urinary F- excretion rates (p=0.0087). The results show the existence of a biological rhythmicity for plasma [F-] in humans and suggest that PTH and renal system are involved in its regulation / Mestrado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientadores : Sophie Françoise Mauricette Derchain, Liliana Ap. Lucci de Angelo Andrade / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-28T20:25:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kusamura_Shigeki_M.pdf: 1370354 bytes, checksum: 947a904cf0349b72bf5c76419ada061d (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Objetivo: investigar em tumores de células da granulosa do ovário (TCGO) a credibilidade de seu diagnóstico com coloração H&E e a expressão do p53 mutante, do c-erbB-2, Ki-67, PCNA e a atividade angiogênica (CD34), bem como as correlações destes marcadores com características clínicas e histológicas. Sujeitos e método: Três patologistas (A,B e C) reavaliaram os 22 casos de TCGO tratados no CAISM/UNICAMP nos últimos 12 anos, sendo os marcadores detectados através de imuno-histoquímicas em cortes histológicos preparados a partir de blocos de parafina. Foram calculados os coeficientes kappa para avaliação da concordância interobservador entre os patologistas. A análise de associação entre as variáveis categóricas foi realizada com o teste exato de Fisher e entre variáveis categóricas e contínuas, com teste de Mann- Whitney. Resultados: Vinte e um casos foram confirmados como TCGO. Quatro casos foram diagnosticados como TCGO, mesmo sem unanimidade entre os patologistas devido à imunorreatividade para a inibina. Os coeficientes kappa foram de 0,42 (IC95%: -0,05; 0,88); 0,50 (IC95%: 0,13; 0,86); 0,24 (IC95%: -0,14 a 0,61), respectivamente para as duplas de patologistas A/B, A/C e B/C. A IHQ para os marcadores foi realizada em 18 pacientes. Nove (50%) pacientes apresentaram tumores <10cm. Treze (72%) pacientes apresentaram algum componente sólido difuso/sarcomatóide. Em 12 (66%) casos a atipia celular era ausente/leve e em 6 (33%) casos, moderada/intensa. A contagem mitótica foi < 2/10 CMA em 14 (78%) casos. Seis (33%) pacientes apresentaram extensão extra-ovariana da doença (estádios III/IV). O seguimento médio foi de 45,3 meses (0,7 a 128,8). Uma, zero e 11 pacientes apresentaram expressão para o p53 mutante, c-erbB-2 e Ki-67 (focal), respectivamente. Quatorze (78%) casos foram classificados como de alto índice de proliferação, quando avaliados pelo PCNA. A densidade microvascular média foi de 29,0/mm2 (CI95%: 21,8 a 36,1). Apenas o Ki-67, PCNA e o CD34 foram expressos em níveis adequados para uma adequada correlação com outras variáveis. Não houve associação estatisticamente significante entre o índice de proliferação dos tumores (avaliada pelo PCNA), ou Ki-67 ou densidade microvascular com o tamanho do tumor, extensão extra-ovariana da doença, atividade mitótica, atipia celular e padrão histológico. Conclusão: Em nossa casuística, o estudo dos TCGO através da IHQ revelou neoplasias cujo mecanismo de desenvolvimento aparentemente não envolve mutações do p53 e nem expressão aumentada do c-erbB-2; apresentaram resultados conflitantes no que diz respeito ao índice de proliferação celular conforme foram avaliados pelo Ki-67 ou PCNA e, finalmente, são pouco angiogênicos quando avaliados pelo CD34 / Abstract: The purpose of this study was to investigate the credibility of diagnosis of granulosa cell tumor of ovary (GCTO) through the morphological evaluation employing only H&E staining. We also evaluated the expression of mutant p53, c-erbB-2, Ki-67, PCNA as well as angiogenic activity (CD34) and the correlation of these variables with clinical and histological characteristics. Three well trained pathologists (A, B, and C) reevaluated the slides of 22 GCTO patients that had been treated and followed at the CAISM/UNICAMP in the last 12 years. The interobserver agreement was studied calculating kappa coefficient. We employed the Fisher Exact test to assess the correlation between categorical variables and the Mann-Whitney test for the correlation between categorical and continuous variables. Twenty one cases were deemed GCTO after evaluation. Four cases received the diagnosis of GCTO due to positive reaction to inhibin, despite the divergent opinion of one the pathologist. The kappa coefficients were 0.42 (IC95%: -0.05; 0.88); 0.50 (IC95%: 0.13; 0.86); and 0.24 (IC95%: -0.14 a 0.61), for pairs A/B, A/C and B/C observers, respectively. We performed immunohistochemistry for the biological markers in 18 cases. Concerning the clinical and histological variables: 9 (50%) patients presented tumor size <10cm; 13 (72%) patients presented some solid diffuse/sarcomatoid pattern; 12 (66%) cases presented no/slight atypia and 6 (33%) cases presented moderate/strong atypia; 14 cases presented < 2 mitoses/10 HPF; 6 (33%) patients presented extraovarian extension of the disease (stage III/IV). The mean follow-up was 45.3 months (range: 0.7 to 128.8). One, 0 and 11 cases presented positive expression for mutant p53, c-erbB-2 e Ki-67 (focal), respectively. Fourteen (78%) cases were classified as high proliferating index when evaluated by PCNA. The mean microvascular density was 29,0/mm2(IC95%: 21,8 to 36,1). Only Ki-67, PCNA and CD34 were expressed at adequate levels for further correlation with other variables. There was no statistically significant link between either the PCNA proliferating index or the Ki-67 expression or microvascular density with tumor size, extraovarian extension of disease, mitotic activity, cellular atypia and histological pattern. We concluded that the diagnosis of GCTO is difficult in some cases, suggesting the evaluation be complemented with a panel of markers such as inhibin. We also verified that GCTO is a neoplasm that apparently did not involve mutations of p53 nor overexpression/amplification of c-erbB-2; presented conflictings results concerning the proliferating activity when evaluated by PCNA and Ki-67; and finally presented a low angiogenic activity when evaluated by CD34 / Mestrado / Tocoginecologia / Mestre em Tocoginecologia

Orientadores: Jose Camillo Novello, Nilce Correa Meirelles / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T01:31:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Picoli_MariaEleonoraFeracindaSilva_D.pdf: 2863691 bytes, checksum: 074616b1b6cea1416a4f26d7825c6220 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Citocromos P450 (CYP) constituem uma superfamília de heme proteínas envolvidas na fase I da biotransformação que participa da detoxificação de compostos endógenos e exógenos. Para que esta atividade seja exercida existe a necessidade da associação do CYP com o citocromo b5 e com a enzima NADPH citocromo P450. Esta associação só ocorre graças ao ambiente de membrana. Qualquer alteração na uniformidade do ambiente lipídico leva à alterações na funcionalidade do sistema CYP. Baseado nesta informação e no fato de que vários poluentes têm sua solubilidade aumentada pela adição destes compostos, realizamos testes in vitro utilizando microssomas hepáticos de Curimbatá (Prochilodus scrofa) - um peixe tropical brasileiro pertencente a família Prochilodontidae - e observamos que dois surfactantes normalmente utilizados na solubilização de pesticidas, o Triton X- 100 e o Tween 80. O conteúdo total de CYP e a atividade da EROD foram fortemente inibidos pelo Triton X-100 e pelo Tween 80 de uma maneira dose dependente; o conteúdo de CYP foi reduzido à zero. A atividade da EROD foi completamente inibida pelo Triton X-100 e inibida em mais de 40% na presença do Tween 80. A estrutura molecular do surfactante influencia na alteração que o sistema irá sofrer visto que ambos são hábeis em interagir com as proteínas do sistema microssomal, em especial as monooxigenases, alterando sua conformação e, consequentemente, destruindo sua função. Os resultados desta primeira parte mostraram que os surfactantes interagem com os componentes do sistema microssomal hepático levando a inibição do sistema. A atividade do CYP, que foi usada como biomarcadora de exposição ao xenobiótico pode ser utilizada como marcadora em associação com outras enzimas. Estes resultados levantaram a hipótese de que os surfactantes também poderiam alterar a atividade do CYP quando utilizados em processos de purificação. Por ser uma proteína de membrana, o CYP precisa ser solubilizado antes de ser purificado. No entanto os surfactantes utilizados durante o processo poderiam levar a destruição do CYP, mascarando a real concentração do CYP obtido durante o processo. Sendo assim, na segunda parte deste trabalho desenvolvemos um novo método de purificação que exclui a necessidade de surfactantes durante o processo de purificação. A purificação do CYP1A foi feita utilizando-se uma coluna C18 associada à HPLC de fase reversa. O CYP purificado foi caracterizado em relação as suas propriedades eletroforéticas, imunoquímica e atividade biocatalítica. A fração isolada como CYP produz uma única banda uniforme com massa molecular ao redor de 58.000 Da em SDS - PAGE e mostra uma forte reatividade cruzada com anticorpos produzidos contra o CYP1A de trutas. A fração isolada também foi encapsulada em dois tipos de sistemas reconstituídos, um composto por lipídeos neutros e outro por lipídios negativamente carregados. Em ambos os sistemas foi possível detectar a atividade da EROD, mas não a atividade da PROD, confirmando que a fração purificada corresponde a CYP1A e teve todas as suas características enzimáticas conservadas. Houve um aumento da atividade quando a o CYP1A foi encapsulado nas vesículas contendo lipídeos negativamente carregados, confirmando que a carga do lipídeo é essencial para a manutenção das características enzimáticas do CYP. O processo se mostrou eficaz para a purificação do CYP1A mantendo todas a suas características conservadas. No entanto não permitiu a separação das isoformas CYP1A. A terceira parte do projeto teve como objetivo a identificação das isoformas CYP1A1 e CYP1A3 através de eletroforese bidimensional associada à espectrometria de massas do tipo MALDI-TOF. Foram identificados 3 spots com a mesma massa molecular, mas com pIs variando entre 5,5 e 6,5, sugerindo a presença de três isoformas do CYP1. Os spots foram selecionados e tratados com tripsina. O mapa de peptídeos obtidos através da digestão dos spots selecionados teve suas massas identificadas por espectrometria de massas do tipo MALDI-TOF e através da digestão teórica de seqüências de CYP já existentes no banco de dados. Houve a identificação de 10 picos que correspondem a 31% do total de aminoácidos traduzidos para a família CYP1A de peixes e mamíferos. Todos os três spots tiveram o mesmo padrão de fragmentação confirmando que eles são isoformas CYP1A1 e CYP1A3. Dentre estes peptídeos, dois demonstraram maior importância, o pico T3, que representaria um domínio conservado do CYP1A e o pico T2, que representaria uma região conservada apenas em peixes. Os resultados sugerem fortemente que este novo procedimento seria eficiente para identificar, simultaneamente, diferentes isoformas do CYP1A hepático e suas regiões conservadas. Dada a sensibilidade das técnicas de proteômica, nesta ultima fase do projeto propomos o uso da eletroforese bidimenisonal associada à espectrometria de massas na identificação de isoenzimas de P450 diferencialmente expressas em microssomas hepáticos de Curimbatás tratados com 3 ¿ metilcloranteno (3-MC). A avaliação das proteínas expressas em cada tratamento foi feita através de eletroforese uni e bidimensional e a identificação feita através da análise de massa de peptídeos. Ambas as eletroforeses permitiram a identificação de proteínas induzidas de maneira diferencial pelo 3-MC, embora a eletroforese tenha sido mais efetiva na identificação de proteínas altamente homólogas, como a CYP1A1 e CYP1A3. Também foi possível a identificação de outras proteínas atuantes na detoxificação de xenobióticos, dentre elas o citocromo b5 (~15kDa) e a glutationa ¿ S ¿ Transferase microssomal (~20kDa). Os dados demonstrados no projeto mostram claramente que o sistema associado a abordagem proteômica têm um grande potencial para serem utilizados na identificação de proteínas expressas diferencialmente conforme a situação ambiental / Abstract: Cytochromes P450 constitute a superfamily of the phase I enzymes whose primary task is the detoxification of both endogenous and xenobiotic compounds. This activity is only possible through the association of CYP with cytochrome b5 and the enzyme NADPH cytochrome P450 reductase. This association is possible because of membrane environment. Any alteration in this environmet leads to altereation on the functionality of CYP system. Based on this information and in the fact that various pollutants have its solubility increased by the surfactant addition, we had done in vitro tests using hepatic microsomes of Curimbatá - a Brazilian fish belong the family Prochilodontidae ¿ and observed the effects of Triton X-100 and Tween 80 in CYP system. Both surfactants are commonly used in pesticides solubilization. Total CYP and EROD were strongly inhibited by Triton X-100 and Tween 80 in a concentration-dependent way; the content of CYP was reduced until zero while EROD activity was completely inhibited in the presence of Triton X-100 and more than 40% inhibited in the presence of Tween 80. Each surfactant causes a different effect on each antioxidant enzyme. No effect was detected in SOD activity in the presence of even Triton X-100 or Tween 80. Triton X-100 increase catalase activity, while Tween 80 decreases this enzyme activity. The molecular structure of the surfactants causes the alteration of this system, since they are able to interact with the microsomal protein, especially with monooxigenase¿s components, altering their conformation and, consequently destroying their function. Our results in this first part suggest that surfactants can interact with components of the microsomal system leading to inhibition of CYP. Therefore, CYP activity, which has been used as a biomarker of xenobiotic exposure, should be used as a marker in association with other enzymes. With those results we suggest the hypothesis that surfactants that are commonly used in the purification process could alter the CYP activity. Since that CYP is a membrane protein, the solubilization process is necessary before the purification process to separated membrane lipids of proteins. The use of surfactants in the process could mask the real concentration of CYP obtained. Then, in the second part of this project we develop a new method to of purification that excludes the necessity of surfactants. The purification of CYP1A was done by Reverse Phase HPLC on a C18 column. Purified CYP1A was characterized with respect to electrophoretic, immunochemical and biocatalyst properties. CYP1A fractions produced a single uniform band on SDS-PAGE with an apparent molecular mass of 58 kDa. Purified CYP1A of P. scrofa showed strong cross-reactivity with antibodies directed against CYP1A from trout. The fraction was also encapsulated in two different reconstituted systems; one composed of neutral lipids and another of negatively charged lipids. In both of them, we could detect EROD activity but not PROD activity, which confirms that the CYP1A was purified with all its enzyme activity. There was an increase of activity when CYP1A and NADPH cytochrome P450 (CYP) reductase were encapsulated in negatively charged lipids, which confirms that the charge of lipid is essential to CYP1A activity. All these characteristics strongly suggest that this new procedure is efficient for purifying hepatic CYP1A from P. scrofa, showing that the CYP1A isoform of this fish has a highly conserved protein region. However the process was not efficient to separate the isoforms of CYP1A. In the third part of project we aimed the identification of CYP1A1 and CYP1A3 isoforms through bidimensional electrophoresis and MALDI ¿ TOF mass spectrometry. Three major spots were detected. These spots had the same molecular weight, but presented pI in a range of 5.5 to 6.0, suggesting the presence of 3 isoforms of CYP1. Spots were collected, and treated with Trypsin and the resultant peptides were measured by MALDI-TOF Mass Spectrometry. Tryptic peptide mass fingerprint of CYP1A showed the presence of 10 masses that matched the expected tryptic peptides obtained through theory digestion of the database sequence. These values corresponded to 31% of the translated amino acids of CYP1A family of other fishes and mammals. All spots had the same profile of fragmentation, which confirms that they are isoforms. Among these peptides, two demonstrated major importance T3, which is a conservative domain of CYP1A and T2, which could represent a more conservative region that occurs only in fishes. All these characteristics strongly suggest that this new procedure efficiently identifies, simultaneously, different isoforms of hepatic CYP1A from P. scrofa and its conservative region of protein. Due to the sensibility of the technique, in this last part of the project we try to identify the CYP isoenzymes that are expressed in hepatic microsomes of Curimbatá using one ¿ dimensional (1 ¿ DE) and two dimensional (2 ¿ DE) gel electrophoresis followed by tryptic peptide mapping (PMF). Both 1 ¿DE and 2 ¿ DE showed that 3 ¿ MC induces not only CYP1A1 and CYP1A3, but other biotransformation enzymes presents in endoplasmic reticulum like cytochrome b5 (~15kDa), NADPH cytochrome P450 reductase (~75kDa) and microsomal Glutathione ¿ S ¿ Tranferase (~20kDa). There were 25 proteins that appeared only in 3 ¿ MC treated group and a matching of 38% between control and 3 ¿ MC gel. The results demonstrated here show that CYP system associated to the proteomic approach have great potential to be utilized in the identification of proteins differentially expressed according to environmental situation / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Submitted by Mendes Eduardo (dasilva@ufba.br) on 2013-08-21T15:10:18Z No. of bitstreams: 1 Dissertação final Igor Leonardo.pdf: 1062966 bytes, checksum: a0b1f2e686019a267d4eefce030fe7c0 (MD5) / Approved for entry into archive by Vilma Conceição(vilmagc@ufba.br) on 2013-08-21T18:08:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação final Igor Leonardo.pdf: 1062966 bytes, checksum: a0b1f2e686019a267d4eefce030fe7c0 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-21T18:08:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação final Igor Leonardo.pdf: 1062966 bytes, checksum: a0b1f2e686019a267d4eefce030fe7c0 (MD5) / Fapesb / A atividade industrial tem potencial para gerar resíduos tóxicos que podem atingir o ambiente. Nos complexos industriais, as correntes “não orgânicas” que compõem o sistema supostamente “não contaminado” são direcionadas a bacias de contenção, cujo reuso das águas pode ser feito, fundamentando-se na comprovação de sua qualidade. O uso de biomarcadores de exposição no embasamento de ações de controle e risco permite a detecção de impactos deletérios antes que sejam manifestados em níveis de populações ou comunidades. As metalotionéinas são proteínas que indicam a presença de metais traços no ambiente. Este trabalho visou avaliar a biodisponibilidade de metais traços na água e no sedimento de diferentes pontos de Bacias de Contenção de efluentes petroquímicos, utilizando como organismos-testes juvenis de Tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus), através da indução de metalotioneínas. As tilápias foram expostas à água, proveniente de diversos pontos amostrais da bacia de contenção, bem como ao sedimento, por um período de 24 horas. Foram utilizadas 5 réplicas para cada ponto de amostragem, além de um ponto controle. Os resultados indicaram a presença de metais traços em concentrações acima das encontradas na amostra-controle, salientando a eficiência destes biomarcadores na avaliação da qualidade hídrica para o reuso industrial. / Salvador, Bahia.

Made available in DSpace on 2012-09-05T18:23:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 335.pdf: 1561167 bytes, checksum: 3c3770abb71de1bc033d59ef621aa71b (MD5) Previous issue date: 2008 / Este estudo apresenta uma análise sobre a necessidade de instalação de umlaboratório de contenção máxima (NB-4) no Brasil, a fim de atender as necessidades de pesquisa e diagnóstico de agentes patogênicos, de relevância epidemiológica e risco de disseminação ou causador de doença emergente que se torne epidemiologicamente importante ou cujo mecanismo de transmissão seja desconhecido.Discute, através de uma revisão bibliográfica, a emergência e reemergência de doenças infecciosas mostrando situações críticas enfrentadas no âmbito mundial.Destaca a susceptibilidade do Brasil, considerando a sua complexidade, representada especialmente, pela sua biodiversidade e pelos problemas sócio-econômicos, que afetam diretamente a saúde pública. Sublinha a questão dos investimentos no setor da saúde, voltados à vigilância, ao fortalecimento de bases epidemiológicas, laboratorial e clínica, centradas em medidas de prevenção e de controle nas áreas de vigilância, onde se inclui a perspectiva da Biossegurança. Aborda aspectos do monitoramento de risco, enfatizando as intercessões entre a Biossegurança e a Biosseguridade, como campos integrados e voltados para controlar aspossibilidades de risco relacionado com as questões de saúde pública , tais como o bioterrorismo, considerando a importância da construção de políticas institucionais voltadas para atender as demandas dos laboratórios e das situações de risco de saúde pública, em especial, através de eventos de grande impacto provocados pela circulaçãode agentes biológicos de alta letalidade.Em termos metodológicos, utiliza os dados do Centro de InformaçõesEstratégicas em Vigilância em Saúde, da Secretaria de Vigilância em Saúde, doMinistério da Saúde para construção do estudo de caso. / Conclui, a partir da análise da relevância epidemiológica dos eventos notificados e sua relação com o potencial de risco manifesto ou latente, a pertinência de investimentos em Biossegurança em termos da construção de uma infra-estrutura laboratorial e a conseqüente capacitação de profissionais, indicando a importância do debate sobre a localização desta unidade, a partir do contexto epidemiológico traduzido pelo sistema de notificação.

Made available in DSpace on 2016-02-16T12:33:19Z (GMT). No. of bitstreams: 2 marcelo_muller_ipec_mest_2013.pdf: 1600422 bytes, checksum: 5c6c24a7618deff4338e560e1e33d3a4 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-10-29 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os laboratórios da Vice-Diretoria de Desenvolvimento Tecnológico de Bio-Manguinhos realizam testes clínicos de fase 1, 2 e 3 de biofármacos e vacinas em desenvolvimento, e ainda, análises de pós-marketing. Bio-Manguinhos, atualmente, não dispõe de um laboratório para recebimento e processamento das amostras biológicas de estudos clínicos, terceirizando este serviço e/ou utilizando outras Unidades da FIOCRUZ . O modelo de laboratório proposto neste trabalho foi a partir dos elementos contidos na legislação vigente, incluindo documentos normativos, que estabelecem critérios para a implantação do mesmo. As atividades relacionadas ao processamento das amostras foi classificado como risco biológico do tipo 2, utilizando instalações físicas de nível de biossegurança 2, o qual é recomendado para o trabalho com sangue segundo os padrões da OSHA (US Occupational Safety and Health Administration \2013 Administração de Segurança e Saúde Ocupacional dos Estados Unidos), o que requer a utilização de precauções específicas com todas as amostras biológicas de sangue, hemoderivados ou materiais potencialmente infecciosos Foram discutidos, através deste trabalho, requisitos e especificações, segundo a legislação vigente, de um laboratório que vise suprir as necessidades de Bio-Manguinhos: incluído um layout modelo contemplando as instalações para o nível de biossegurança 2; estabelecidos procedimentos que venham a garantir que os serviços e produtos estejam em conformidade com o atendimento às questões associadas à Biossegurança e ao ambiente; criado um programa de registro de amostras biológicas que permite a rastreabilidade do processo; desenvolvido um sistema de inspeção em biossegurança voltado aos serviços oferecidos através de check-list; discutidas medidas voltadas para a prevenção, controle, minimização ou eliminação dos riscos inerentes às atividades, atendendo a legislação vigente, auxiliando, assim, a prevenção, minimização e, se possível, eliminação a exposição aos riscos ocupacionais presentes no laboratório, evitando os acidentes de trabalho e preservando a saúde dos funcionários, da comunidade e do meio ambiente / The laboratories of the Vice Director of Technologi cal Development of Bio-Manguinhos performa clinical trial phase 1, 2 and 3 of biophar maceuticals and vaccines in development and further analysis of post marketing. Bio - Manguinho s currently does not have a laboratory for receipt and processing of biological samples from c linical studies, outsourcing this service and / or using other units of FIOCRUZ . The laboratory mo del proposed here was developed with the elements contained in the current legislation, incl uding regulatory documents, which establish criteria for the implementation of the laboratory. The activities related to the processing of the samples was classified as biological risk of type 2 using physical facilities biosafety level 2, which is recommended for working with blood by the standards of OSHA (U.S. Occupational Safety and Health Administration of United States), which requires specific precautions to use with all biological samples of blood, blood product s or potentially infectious materials. I was discussed through this work requirements and specif ications, under the current legislation, a laboratory which aims to meet the needs of Bio-Mang uinhos: including a lay-out model contemplating facilities for biosafety level 2; est ablishment of procedures that will ensure that products and services comply with the attendance to the issues of biosafety and the environment; creating a program of registration of biological sa mples that allows traceability of the process, developing a system of inspection focused on biosec urity services offered through checklist; discussing measures aiming at the prevention, contr ol, elimination or minimization of risks inherent to the activities, given current legislati on , thereby aiding the prevention, minimization and, when possible, eliminating exposure to occupat ional hazards present in the laboratory, avoiding accidents and preserving the health of emp loyees, the community and the environment

O uso de pigmentos bacterianos com potencial biotecnológico avança cada vez mais e a partir dessa fonte natural são desenvolvidos diversos produtos com diferentes aplicações em indústrias farmacêuticas, de alimentos, cosmética entre outras, apresentando vantagens em questões econômicas e ambientais, cumprindo com a demanda e trazendo benefícios para a saúde dos consumidores e reduzindo o uso de produtos de síntese química. O objetivo desse trabalho foi a produção, ao nível de laboratório, e caracterização de pigmentos sintetizados pelas bactérias Chryseobacterium KR6 e Lysobacter A03 isoladas de penas de frango e penas de pinguim, respectivamente. Os pigmentos estudados neste trabalho, extraídos das duas linhagens, resultaram ser pigmentos do tipo Flexirubina (DAR) o que foi revelado pelo teste positivo de KOH 20% e os espectros de UV-vis, e provavelmente Xanthomonadina (APE-DAR hibrido), respetivamente. Os dois pigmentos apresentaram atividade antioxidante avaliado pela captura do radical ABTS. Não foi possível propor uma estrutura química para os dois pigmentos, processos de purificação são requeridos para a identificação molecular desses pigmentos biotecnologicamente viáveis. / The use of bacterial pigments with biotechnological potential advances are growing and more and from this natural source are developed several products with different applications in the pharmaceutical, food, cosmetics and other industries, presenting advantages in economic and environmental issues, fulfilling a demand and bringing benefits For consumer health and reducing the use of chemical synthetized products. The aim of this study was the production, working volume and characterization of pigments synthesized by Chryseobacterium KR6 and Lysobacter A03 bacteria isolated from chicken and penguin feathers, respectively. The pigments were characterized by KOH 20% test, UV-visible, colors system CIELAB, HPLC-DAD-MS, FTIR and was evaluated the antioxidant capacity. The pigments from KR6 and A03 presents some characteristics from flexirubin and xanthomonadin non- brominated type pigments respectively. Pigment from KR6 shows a positive bathochromic shift when colonies or the extracted pigment are in presence of alkaline solution (KOH20%) and also have a λmax at 450nm in acetone when analyzed by UV-Vis. The FTIR analysis shows some principal functional groups that might be from a flexirubin molecule. Pigment from A03 didn’t present any shift when flooded with KOH and the λmax was 419 nm and 427 nm in acetone and chloroform respectively. The two pigments presented antioxidant activity evaluated by the capture of the free radical ABTS. It was not possible to propose a chemical structure for the two pigments; purification processes are necessary for a molecular identification of the biotechnologically viable pigments.