Made available in DSpace on 2015-04-14T14:50:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 418143.pdf: 285814 bytes, checksum: 88313ad8173e10bd8abedb6c2a800e24 (MD5) Previous issue date: 2009-03-31 / Manchas de sangue s?o vest?gios de grande import?ncia para a elucida??o de um crime. Sangue dilu?do, invis?vel a olho nu, ou em superf?cies escuras, pode ser detectado utilizando reagentes especiais, atrav?s dos chamados "testes presuntivos". Os efeitos dos testes preliminares para sangue utilizando luminol, Luminol 16?, Bluestar? Forensic e benzidina sobre os m?todos de inibi??o da antiglobulina humana, imunocromatogr?fico para hemoglobina humana e sobre o exame de DNA foram avaliados nesse trabalho. As manchas de sangue foram produzidas atrav?s da aplica??o de 2 μL de sangue venoso em fragmentos de tecido branco (100% algod?o). As amostras foram submetidas aos exames presuntivos e deixadas para secar por 48 horas antes da realiza??o dos testes de inibi??o da antiglobulina humana e imunocromatogr?fico para hemoglobina humana. O DNA foi extra?do pelo m?todo org?nico e quantificado com Quantifiler? Human DNA Quantification (Applied Biosystems) em 48 horas, 7 dias, 30 dias ou 120 dias ap?s a aplica??o dos reagentes. As amostras tratadas com ambas as prepara??es de luminol ou com Bluestar? Forensic obtiveram resultado positivo nos exames imunol?gicos, mostrando que n?o influenciam nos testes confirmat?rios para sangue humano. As 20 amostras tratadas com benzidina tiveram resultado negativo no teste de inibi??o da antiglobulina humana. Das 20 amostras submetidas ao teste imunocromatogr?fico, 18 obtiveram resultado negativo, evidenciando o efeito delet?rio da benzidina sobre os testes confirmat?rios para sangue humano. Atrav?s de PCR em tempo real foi poss?vel observar que, 48 horas ap?s contato com a solu??o de benzidina, as amostras tiveram o DNA degradado. Todos os reagentes testados causaram degrada??o do DNA, em diferentes extens?es, ap?s 120 dias de sua aplica??o.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 422149.pdf: 415747 bytes, checksum: c509f9409deb999a7bde0e7f31c283e9 (MD5) Previous issue date: 2010-01-22 / A Salmonella Enteritidis ? uma das principais bact?rias causadoras de gastrenterite, tamb?m podendo ser respons?vel por doen?as sist?micas. A adequada caracteriza??o deste microrganismo ? essencial nos estudos epidemiol?gicos. Neste contexto, este estudo avaliou a utiliza??o de dois m?todos moleculares, Tipifica??o por Sequenciamento de M?ltiplos loci (MLST) e An?lise de Fragmentos Polim?rficos Amplificados e Fluorescentes (FAFLP), para a diferencia??o de 32 isolados de S. Enteritidis oriundos de diferentes fontes do sul do Brasil, bem como de cinco isolados de S. Enteritidis provenientes de outras ?reas geogr?ficas. Tamb?m foram inclu?dos neste estudo quatro isolados pertencentes a outros sorovares (S. Panama, S. Senftenberg, S. Typhimurium e Salmonella [4,5:-:1,2]. As duas t?cnicas escolhidas para este trabalho j? foram empregadas concomitantemente para analisar diferentes sorotipos de Salmonella, mas este estudo ? o primeiro a utiliz?-las para a diferencia??o de um mesmo grupo de isolados de S. Enteritidis. O esquema desenvolvido para o MLST incluiu a amplifica??o de fragmentos de dois genes constitutivos (hemD e mdh) combinado com dois genes de virul?ncia (ssaQ e slyA), aumentando, assim, a capacidade discriminat?ria do m?todo. Ambas as t?cnicas apresentaram altos ?ndices de poder discriminat?rio, calculados pelo ?ndice de diversidade de Simpson, 0,99 e 0,88 para FAFLP e MLST, respectivamente. Al?m disso, os m?todos avaliados tamb?m mostraram-se eficientes na discrimina??o de isolados de diferentes sorovares de Salmonella. Entretanto, a FAFLP e a MLST n?o foram capazes de diferenciar isolados provavelmente n?o relacionados epidemiologicamente, bem como n?o agruparam isolados pertencentes a um mesmo fagotipo. Desta forma, os resultados obtidos sugerem que ambas as t?cnicas podem ser ferramentas ?teis para a an?lise epidemiol?gica molecular de isolados de Salmonella, inclusive para um sorovar com grande homogeneidade gen?tica como a S. Enteritidis.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 442543.pdf: 1310049 bytes, checksum: b871097892a0a347db7e651a3cb4154d (MD5) Previous issue date: 2012-08-17 / Liver fibrosis is the wound healing response to repeated injury of the liver. It is characterized by disruption of the liver architecture associated with increased expression of extracellular matrix components. Hepatic stellate cells (HSCs) play a key role in the process of fibrogenesis. In normal liver, HSCs are quiescent and its main function is to store vitamin A. During liver injury, these cells undergo activation, become myofibroblasts and acquire fibrogenic properties. Capsaicin, the active ingredient of red pepper has been extensively studied in recent years for possessing a wide range of pharmacological properties, including analgesic, anti-inflammatory, antiproliferative and anticarcinogenic in a variety of cell types. Therefore, the aim of this study was to investigate the in vitro effects of capsaicin on deactivation, differentiation and proliferation of HSCs, besides studying the possible mechanisms involved. The results showed that capsaicin is capable of inducing the quiescent phenotype in HSCs via PPARγ activation and blockage of TGF-β signaling. Increased levels of antifibrotic cytokines (IFN-γ and IL-10) and the reduction of pro-inflammatory and pro-fibrotic mediators (COX-2, MCP-1, type I collagen) showed that capsaicin inhibits the activation and migration of these cells. Furthermore, the mechanism used by capsaicin to inhibit cell proliferation is via cell cycle arrest. These findings demonstrate that capsaicin has the potential to be a novel therapeutic agent in the treatment of liver fibrosis due to its antifibrogenic and antiproliferative actions. / A fibrose hep?tica ? a resposta cicatricial do f?gado a les?es repetidas, caracterizada pelo rompimento da arquitetura hep?tica associada ao aumento da express?o dos componentes da matriz extracelular. As c?lulas estreladas hep?ticas (HSCs) desempenham um papel-chave no processo de fibrog?nese. No f?gado normal, as HSCs encontram-se em sua forma quiescente de dep?sito de vitamina A. Durante a les?o hep?tica, essas c?lulas passam por uma ativa??o fenot?pica, tornam-se miofibroblastos e adquirem propriedades fibrog?nicas. A capsaicina, princ?pio ativo da pimenta vermelha, tem sido muito estudada nos ?ltimos anos por possuir uma extensa gama de propriedades farmacol?gicas, que incluem efeitos analg?sicos, anti-inflamat?rios, antiproliferativos e anticarcinog?nicos em uma variedade de tipos celulares. Por essa raz?o, o objetivo deste estudo foi investigar os efeitos in vitro da capsaicina na inativa??o, diferencia??o e prolifera??o das HSCs, al?m de estudar os poss?veis mecanismos envolvidos. Os resultados obtidos mostraram que a capsaicina ? capaz de induzir o fen?tipo quiescente nas HSCs via ativa??o de PPARγ e bloqueio da sinaliza??o de TGF-β. O aumento nos n?veis de citocinas antifibr?ticas (IFN-γ e IL-10) e a diminui??o de mediadores pr?inflamat?rios e pr?-fibr?ticos (COX-2, MCP-1, col?geno tipo I) comprovaram que a capsaicina inibe a ativa??o e migra??o dessas c?lulas. Al?m disso, o mecanismo utilizado pela capsaicina para inibir a prolifera??o celular ? via parada do ciclo celular. Essas descobertas mostram que a capsaicina tem potencial para ser um novo agente terap?utico no tratamento da fibrose hep?tica devido a suas a??es antifibrog?nicas e antiproliferativas.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 448460.pdf: 1711084 bytes, checksum: 65dd3daa12164398aab7aa839028c683 (MD5) Previous issue date: 2013-04-19 / Tuberculosis remains as one of the main cause of mortality worldwide due to a single infectious agent, Mycobacterium tuberculosis. The aroK-encoded Mycobacterium tuberculosis Shikimate Kinase (MtSK), shown to be essential for survival of bacilli, catalyzes the phosphoryl transfer from ATP to the carbon-3 hydroxyl group of shikimate (SKH), yielding shikimate-3-phosphate and ADP. Here we present purification to homogeneity, and oligomeric state determination of recombinant MtSK. Biochemical and biophysical data suggest that the chemical reaction catalyzed by monomeric MtSK follows a rapid-equilibrium random order of substrate binding, and ordered product release. Isothermal titration calorimetry (ITC) for binding of ligands to MtSK provided thermodynamic signatures of non-covalent interactions to each process. A comparison of steady-state kinetics parameters and equilibrium dissociation constant value determined by ITC showed that ATP binding does not increase the affinity of MtSK for SKH. In addition, there appears to be a positive free energy coupling of 3.2 kJ mol-1 for SKH binding to MtSK:Mg2+ATP binary complex, which suggest that ATP displays negative cooperativity for SKH binding. We suggest that MtSK would more appropriately be described as an aroL-encoded type II shikimate kinase. Our manuscript also gives thermodynamic description of SKH binding to MtSK and data for the number of protons exchanged during this bimolecular interaction. The negative value for the change in constant pressure heat capacity (ΔCp) and molecular homology model building suggest a pronounced contribution of desolvation of non-polar groups upon binary complex formation. Thermodynamic parameters were deconvoluted into hydrophobic and vibrational contributions upon MtSK:SKH binary complex formation. Data for the number of protons exchanged during this bimolecular interaction are interpreted in light of astructural model to try to propose the likely amino acid side chains that are the proton donors to bulk solvent following MtSK:SKH complex formation. / A tuberculose se mant?m como uma das principais causas de mortalidade ao redor do mundo devido a um ?nico agente infeccioso, o Mycobacterium tuberculosis. O gene aroK que codifica a enzima Chiquimato quinase de Mycobacterium tuberculosis (MtSK), que se mostrou essencial para a sobreviv?ncia do bacilo, catalisa a transfer?ncia de um grupo fosforil do ATP para o chiquimato (SKH), resultando em chiquimato-3-fosfato e ADP. O presente trabalho apresenta a purifica??o da prote?na MtSK at? a homogeneidade e a determina??o de seu estado oligom?rico em solu??o. Estudos bioqu?micos e biof?sicos apresentados nesta tese sugerem que a rea??o catalisada pela MtSK monom?rica segue um mecanismo de equil?brio r?pido ordenado aleat?rio na adi??o dos substratos e uma libera??o ordenada sequencial dos produtos. A an?lise por calorimetria de titula??o isot?rmica (ITC) das intera??es n?o covalentes da enzima MtSK com diferentes ligantes resultou na determina??o de assinaturas termodin?micas para cada um desses eventos de liga??o. A compara??o entre as constantes de afinidade obtidas por espectrofotometria e ITC demostraram que o ATP n?o aumenta a afinidade da prote?na MtSK pelo SKH. Al?m disso, foi determinada em + 3,2 kJ mol-1 a energia livre de acoplamento do SKH ao complexo bin?rio MTSK:Mg2+ATP, sugerindo que o ATP possui uma cooperatividade negativa em rela??o ao SKH. Esse trabalho sugere que a MtSK deveria ser mais apropriadamente descrita como uma chiquimato quinase do tipo II codificada pelo gene aroL. Adicionalmente, estre trabalho demonstra a descri??o termodin?mica do SKH se ligando a MtSK aonde os resultados sugerem o n?mero de pr?tons que est?o sendo trocados durante a intera??o bimolecular. O valor negativo encontrado para a capacidade calor?fica em press?o constante (ΔCp) e o modelo molecular por homologia criado sugerem uma pronunciada contribui??o na dessolvata??o de grupos apolares relacionados ? forma??o do complexo. As constantes termodin?micas foram separadas na contribui??o hidrof?bica e vibracional relacionadas ? forma??o do complexo bin?rio MtSK:SKH. Os resultados obtidos relacionados ? transfer?ncia de pr?tons durante a forma??o do complexo bin?rio foram analisados tendo como refer?ncia o modelo estrutural da enzima MtSK constru?do neste trabalho. De acordo com as cadeias laterais que fazem contato com o SKH no modelo proposto, se pode indicar que os amino?cidos Arg58 e Arg136 atuam como fonte de pr?tons durante a forma??o do complexo bin?rio.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 449079.pdf: 13871444 bytes, checksum: e0066e8269af7789f4e8bf48e9d2231c (MD5) Previous issue date: 2013-03-19 / Melanism is a very common coat color polymorphism in felids, and has been defined as an increased production of dark melanin which generates a general darkening of the organism s tegument. Such coloration variation in mammals is often be regulated by the action of two genes and their products: MC1R and ASIP. Eumelanin (dark pigment) is produced when the Melanocortin-1 receptor (MC1R) is activated by the binding of the Alpha Melanocyte Stimulating Hormone (α-MSH). In contrast, MC1R activation is inhibited by the binding of the antagonist peptide ASIP (Agouti Signaling Protein), whose action leads to a switch to pheomelanin (light pigment) synthesis. Melanism has been documented in 13 out of 37 extant felid species, in some cases reaching high frequencies at the population level. A previous studies has indicated that this phenotype arose multiples times in the Felidae, with three different species exhibiting unique mutations associated with this trait (EIZIRIK et al., 2003). In this context, the present study aimed to identify the mutations implicated in this phenotype in five other felid species, and to investigate in more detail the evolutionary dynamics of melanism in the Felidae. In the first article, we revealed two additional cases of species-specific mutations involved in melanism in Asian wild cats, Panthera pardus and Pardofelis temminckii, and discuss the role of the ASIP gene in the evolution of this mutant phenotype. In the second manuscript, we analyzed the evolution of melanism in an endemic lineage of Neotropical felids belonging to the genus Leopardus. This lineage includes three species of small wild cats that were the focus of this study: L. colocolo, L. guigna e L. geoffroyi. The presence of melanism in these closely-related species, along with relatively high frequencies (ranging from 20% to 30%) of this phenotype observed in some areas of their geographic distribution, suggests that natural selection may be involved in the origin and evolution of this trait. In this context, we identified three novel mutations in the ASIP and MC1R genes, each of them strongly associated with melanism in one of the analyzed species, and revealed that natural selection may have played a role in the evolutionary history of melanism in this lineage of felids. / O melanismo ? um polimorfismo de colora??o bastante comum em felinos, definido como a ocorr?ncia de uma acentuada produ??o de melanina escura que gera o escurecimento geral do tegumento do organismo. Sabe-se que esta varia??o da colora??o em mam?feros ? frequentemente regulada pela a??o de dois genes e seus produtos: MC1R e ASIP. A eumelanina (pigmento escuro) ? produzida quando o receptor de melanocortina-1 (MC1R) ? ativado pelo horm?nio estimulante de melan?cito (α-MSH). Ao contr?rio, a ativa??o do MC1R ? inibida pela liga??o de um antagonista chamado prote?na sinalizadora de agouti (ASIP), cuja a??o leva ? troca da produ??o de eumelanina para feomelanina (pigmento claro). O melanismo foi documentado em 13 das 37 esp?cies atuais de fel?deos e, em alguns casos, alcan?a altas frequ?ncias em n?vel populacional. Um estudo anterior indicou que o fen?tipo surgiu m?ltiplas vezes em Felidae, com tr?s esp?cies diferentes apresentando muta??es independentes associadas ao mesmo (EIZIRIK et al., 2003). Assim, este estudo teve por objetivo identificar as muta??es respons?veis por esta caracter?stica em outras cinco esp?cies de fel?deos e analisar a din?mica evolutiva do melanismo na fam?lia Felidae. No primeiro artigo, revelamos dois casos adicionais de muta??es esp?cie-espec?ficas envolvidas no melanismo de fel?deos asi?ticos, Panthera pardus e Pardofelis temminckii e discutimos o papel do gene ASIP na evolu??o deste fen?tipo mutante. No segundo manuscrito, uma abordagem em n?vel gen?mico foi utilizada para analisar a evolu??o do melanismo em uma linhagem end?mica de fel?deos neotropicais pertencentes ao g?nero Leopardus. Nesta linhagem est?o inclusas tr?s esp?cies de pequenos fel?deos que foram o principal foco desta an?lise: L. colocolo, L. guigna e L. geoffroyi. A presen?a do melanismo nestas esp?cies evolutivamente pr?ximas, associada a frequ?ncias relativamente altas (20-30%) deste fen?tipo em determinadas ?reas de suas distribui??es geogr?ficas, sugere que a sele??o natural pode estar envolvida na origem e evolu??o dessa caracter?stica. Neste contexto, identificamos tr?s novas muta??es nos genes ASIP e MC1R, cada uma delas fortemente associada ao melanismo em uma das esp?cies investigadas, e revelamos que a sele??o natural parece ter influenciado a hist?ria evolutiva deste fen?tipo nesta linhagem de fel?deos.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-05-14T20:39:01Z No. of bitstreams: 1 468555 - Texto Completo.pdf: 8199104 bytes, checksum: 8319f77be38697b0864185d6a700fdf3 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-14T20:39:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 468555 - Texto Completo.pdf: 8199104 bytes, checksum: 8319f77be38697b0864185d6a700fdf3 (MD5) Previous issue date: 2015-03-10 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico - CNPq / Financiadora de Estudos e Projetos - Finep / Glioblastoma (grade IV) is among the most prevalent primary intracranial tumors and is considered a challenge in oncology and neurosurgery due to the highly aggressive nature, and the elevated mortality rates. The location of the tumor and its invasive nature avoid the standard-of-care therapy, which includes surgical resection followed by radiotherapy and chemotherapy. Nevertheless, the current gold standard treatment has not been effective to prevent tumor evolution, as indicated by the poor survival rates. In this context, we analyzed the GPCRs for kinin and the high-voltagegated calcium channels (VGCC) as feasible new therapeutic approaches in malignant gliomas. Thereby, the signaling triggered by bradykinin or the disruption of calcium signaling might contribute with pivotal mechanisms underlying glioma progression, such as cell proliferation. Therefore, the aim of this study was to further evaluate the relevance of B1 (B1R) and B2 (B2R) kinin receptors as well as the P/Q- and N-type VGCC in glioma development, by using in vitro and in vivo glioma model. Cell culture assay showed that the treatment with the selective B1R des-Arg9-BK (1-100 nM) and B2R BK (1-100 nM) agonists induced a marked enhancement of cell proliferation and viability through ERK1/2 and PI3K/Akt signaling, according to evaluation of U-138MG and U-251MG cell lines. Meanwhile, the incubation of either B1R SSR240612 (1-30 ?M) or B2R HOE-140 (1-100 ?M) antagonists induced a marked cell death with mixed apoptosis/necrosis characteristics. The in vivo mouse model of GL261-induced glioma of C57/BL6 or B1R and B2R knockout mice showed an uncontrolled tumor growing in KOB1R mice. Conversely, there was no significant change of the tumor development in KOB2R mice. Notably, the genetic ablation or the pharmacological combined antagonism of B1R and B2R (SSR240612; 25 nmol/site + HOE-140; 50 pmol/site) diminished the tumor progression as well as the mitotic index of the GL261-induced glioma. To understand the potential anti-tumor effects of the blockade of P/Q- and Ntype VGCC, we used animal-derived inhibitors namely PhTx3-3 (P/Q-type blocker) and Ph?1? (N-type blocker) from P. nigriventer, or MVIIC (P/Q-type blocker) and MVIIA (N-type blocker) from C. magus. The PhTx3-3 (0.3 - 100 pM), Ph?1? (0.3 - 100 pM) and MVIIA (0.3 - 100 pM) displayed a significant inhibitory effect on proliferation and viability of M059J, U-138MG and U-251MG glioma tested cell lines, and evoked cell death mainly with apoptosis characteristics. In the glioblastoma in vivo model, the Ntype VGCC blockade by either Ph?1? (50 pmol/site; i.c.v. and i.t.) or MVIIA (10pmol/site; i.c.v.) caused significant reductions of glioma growth and progression. Of note, the N-type inhibition by Ph?1? and MVIIA led to a marked increase of GFAPactivated astrocytes and Iba-1-positive microglia in the peritumoral area, which might be related to the inhibitory effects of immune system in tumor development. Using molecular and pharmacological approaches, our data provide clear evidence on the beneficial effects of the simultaneous inhibition of both B1R and B2R as well as the P/Q- and N-type blockade on glioma development. Thus, we propose that the combined selective antagonism of B1R and B2R, such as the P/Q-, and especially NP type high-VGCC inhibition could markedly modify the tumor progression, which might represent an attractive alternative for the treatment of malignant gliomas in the future. / O glioblastoma apresenta a maior incid?ncia entre todos os gliomas e se caracteriza como o mais agressivo e fatal (grau IV) dos tumores prim?rios do SNC. Atualmente o glioblastoma ? considerado uns dos grandes desafios da oncologia e da neurocirurgia, devido ao seu car?ter altamente agressivo. A sobrevida m?dia dos pacientes ? bastante baixa e o progn?stico ? desfavor?vel, j? que a grande maioria destes tumores apresenta um padr?o difuso e infiltrativo de crescimento, o que dificulta as abordagens atuais para a terapia tumoral. Neste estudo foram analisados os efeitos dos receptores da fam?lia dos GPCRs de cininas e dos canais de c?lcio voltagem dependentes (CCVD) como base para poss?veis alvos no tratamento dos gliomas malignos, a fim de caracterizar novas abordagens terap?uticas. O efeito da sinaliza??o desencadeada pela BK e da sinaliza??o Ca2+-dependente pode estar envolvida na regula??o do crescimento e progress?o dos gliomas e na migra??o das c?lulas tumorais. Neste sentido, este trabalho visou explorar o papel dos receptores B1 (B1R) e B2 (B2R) de cininas e da sinaliza??o de Ca2+ via CCVD tipo-P/Q e -N em modelo de glioma in vitro e in vivo. Ensaios em cultura celular utilizando as linhagens de glioma humano U-138MG e U-251MG demonstraram que a ativa??o dos B1R e B2R pelo uso dos agonistas desarg9-BK (1-100 nM) e BK (1-100 nM) aumentou a prolifera??o das linhagens celulares testadas, atrav?s da ativa??o das vias ERK1/2 e PI3K/Akt. Enquanto que a exposi??o aos antagonistas seletivos para estes receptores, SSR240612 (1-30 ?M) e HOE-140 (1-100 ?M), provocou intensa morte celular com caracter?sticas de necrose/apoptose. A parte in vivo compreendeu a t?cnica de implante das c?lulas GL261 de glioma (grau IV) em animais C57/BL6 e knockout para os B1R e B2R. A dele??o apenas do B1R provocou um importante crescimento tumoral nos animais knockout para este receptor, enquanto que os animais com dele??o de B2R n?o tiveram o desenvolvimento tumoral alterado. Notavelmente, tanto a dele??o g?nica como o antagonismo farmacol?gico combinado dos receptores B1 e B2 (SSR240612; 25 nmol/s?tio + HOE-140; 50 pmol/s?tio) diminuiu o crescimento tumoral e o ?ndice mit?tico dos gliomas implantados. Para compreender o envolvimento dos CCVD tipo-P/Q e -N na fisiopatologia dos gliomas foram utilizadas fra??es da toxina da aranha Phoneutria nigriventer (PhTx3-3 bloqueadora de canais do tipo-P/Q; Ph?1? bloqueadora de canais do tipo-N) e ?-conotoxinas provenientes do Conus magus (MVIIC bloqueadora de canais do tipo-P/Q; MVIIA bloqueadora de canais do tipo-N). Os experimentos in vitro evidenciaram que o bloqueio dos canais de Ca2+ tipo-P/Q e -N pelas toxinas PhTx3-3 (0.3 - 100 pM), Ph?1? (0.3 - 100 pM) e MVIIA (0.3 - 100 pM) inibiram a prolifera??o e a viabilidade das linhagens celulares M059J, U-138MG e U-251MG de glioma humano, com intensa caracter?stica de morte celular por apoptose. Os resultados utilizando o modelo de glioblastoma in vivo, demonstraram que ambas as toxinas bloqueadoras dos canais do tipo-N, Ph?1? (50 pmol/s?tio) e MVIIA (10 pmol/s?tio), foram efetivas em diminuir o crescimento e a progress?o tumoral nos animais tratados, com intensa ativa??o de astr?citos e micr?glia, destacando o poss?vel envolvimento do sistema imune na inibi??o do crescimento tumoral. Atrav?s do uso de ferramentas moleculares e farmacol?gicas, nossos resultados demonstraram o envolvimento importante tanto dos B1R e B2R de cininas, como dos CCVD tipo-P/Q e -N no desenvolvimento dos gliomas malignos. Desta maneira, podemos propor que o bloqueio farmacol?gico combinado de antagonistas seletivos para os receptores B1 e B2, assim como a inibi??o dos CCVD tipo-P/Q e -N surgem como potenciais alvos terap?uticos no manejo dos tumores cerebrais e podem representar alternativas promissoras no tratamento dos gliomas.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-09-01T14:18:40Z No. of bitstreams: 1 DIS_ANGELICA_DA_PAZ_RAMIREZ_COMPLETO.pdf: 2409049 bytes, checksum: 1aa9c09c978ce2b26c7b1afbd06c2eec (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-01T14:18:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DIS_ANGELICA_DA_PAZ_RAMIREZ_COMPLETO.pdf: 2409049 bytes, checksum: 1aa9c09c978ce2b26c7b1afbd06c2eec (MD5) Previous issue date: 2016-03-09 / Schistosomiasis is a trematode infection caused by Schistosoma mansoni. The parasitosis occurs mainly in northern Minas Gerais and northeastern States in Brazil. There has been a significative reduction in morbidity and prevalence of schistosomiasis in some areas. However, the parasitosis is still considered an infection that is expanding geographically. The first autochthonous case in Esteio, Rio Grande do Sul (RS) was diagnosed in 1997. Since that date, 28 individuals were found infected with S.mansoni and have been followed up by the Grupo de Parasitologia Biom?dica at PUCRS. The objective of the present study was to investigate and update data indicating a possible interruption of transmission. Serum samples were collected from the individuals previously identified with the infection and from school-aged children at Vila Pedreira, Esteio. From children, urine samples were also collected and tested with the rapid test ?point of care? for detection of cathodic circulating antigen (POC-CCA). Serum samples were examined by Western-blot (WB), with S.mansoni microsomal antigen (MAMA). 18 children were positive at POC-CCA test. None of the positive results with molecular methods were positive by Helmintex. Transmission interruption in Esteio may probably have occurred, but its certification needs a long-term monitoring as well as adjustment of best suited methods for this challenging task. / A esquistossomose mans?nica ? uma infec??o causada por um tremat?deo, Schistosoma mansoni. No Brasil, as ?reas de maior ocorr?ncia s?o o norte de Minas Gerais e nordeste do pa?s. Nos ?ltimos anos, houve uma redu??o significativa na morbidade e preval?ncia desta infec??o em algumas regi?es. No entanto, a esquistossomose ainda ? considerada uma doen?a parasit?ria em expans?o geogr?fica. Em 1997, foi diagnosticado o primeiro caso aut?ctone em Esteio, no Rio Grande do Sul (RS). Desde ent?o, 28 pessoas foram confirmadas com esquistossomose e monitoradas pelo Grupo de Parasitologia Biom?dica da PUCRS. O objetivo deste estudo foi investigar e atualizar indicadores de interrup??o da esquistossomose em Esteio, RS. Neste trabalho foram coletadas amostras de sangue de indiv?duos ex-infectados por S. mansoni e de crian?as em idade escolar de Vila Pedreira, Esteio. As crian?as tiveram tamb?m coletadas amostras de urina. As amostras de sangue de foram analisadas pelo m?todo de Western-blot (WB), utilizando o ant?geno microssomal de S. mansoni (MAMA) e as urinas pelo teste r?pido utilizando ant?geno circulante cat?dico (POC-CCA). Resultados positivos foram confirmados pelo m?todo Helmintex. 18 crian?as tiveram resultado positivo para POC-CCA. Nestes casos os resultados da sorologia e do m?todo Helmintex foram negativos. Existe a possibilidade de interrup??o da transmiss?o da esquistossomose em Esteio, por?m a certifica??o desta interrup??o depende da continuidade por muito tempo, do monitoramento e ajuste dos m?todos mais adequados para esta finalidade.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-04-23T18:10:30Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1221071 bytes, checksum: af5fcfbdfcb431958807ea0716e72ff2 (MD5) / Approved for entry into archive by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-04-23T18:11:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1221071 bytes, checksum: af5fcfbdfcb431958807ea0716e72ff2 (MD5) / Approved for entry into archive by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-04-23T18:11:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1221071 bytes, checksum: af5fcfbdfcb431958807ea0716e72ff2 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-23T18:11:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1221071 bytes, checksum: af5fcfbdfcb431958807ea0716e72ff2 (MD5) Previous issue date: 2017 / O tecido ósseo está em constante remodelação, corrigindo alterações em sua matriz extracelular e mantendo a homeostase local. Quando lesado é capaz de reativar vias ontogenéticas relacionadas ao desenvolvimento ósseo, levando à regeneração tecidual. O desenvolvimento de biomateriais para acelerar o reparo ósseo é essencial para o tratamento de pacientes vítimas de traumas ortopédicos, oncológicos e com doenças congênitas do tecido ósseo. O uso de substâncias que mimetizem sua matriz extracelular, orgânica ou mineral, é uma das modalidades com melhores resultados. O presente estudo teve o objetivo de avaliar a utilização de uma nanopartícula baseada em fosfato contendo estrôncio (NPC-Sr) como estratégia para potencializar a regeneração óssea, isoladamente ou associada ao ácido hialurônico (HY). Para avaliar os efeitos do HY, NPC-Sr e da associação HY+NPC-Sr, foi utilizado modelo de falha óssea não-crítica em tíbia de ratos. Os animais foram separados em quatro grupos: (i) ratos controle/carbopol; (ii) ratos tratados com HY (1%); (iii) ratos tratados com NPC-Sr (0,5 mg/mL) e (iv) ratos tratados com HY+NPC-Sr. Após criar a falha óssea com uso de broca helicoidal, o tratamento foi administrado no local da lesão. No sétimo dia do experimento, os animais foram sacrificados e as tíbias processadas para avaliação histológica e morfométrica com quantificação da porcentagem de trabéculas ósseas. A avaliação morfométrica demonstrou que o tratamento com HY (21,8 ± 2,7%), NPC-Sr (20,4 ± 5,5%) ou HY+NPC-Sr (19,7 ± 3,7) foram capazes de acelerar o processo de reparo ósseo quando comparados ao grupo controle (13,5 ± 2,2%). A análise histológica demonstrou um aumento na formação trabecular nos animais tratados com os materiais, assim como uma maior maturidade do tecido ósseo neoformado. Em ambas as análises, não houve diferença significativa entre os três tratamentos. Com os resultados encontrados podemos concluir que o HY e as NPC-Sr possuem capacidade de acelerar o reparo ósseo em defeitos não-críticos em tíbias de ratos e que a associação dos dois compostos não possui efeito somatório ou deletério. / Bones are constantly been remodeling to repair damages in their extracellular matrix and to maintain local homeostasis. This tissue is able to reactivate ontogenetic pathways related to bone development when it is injured, leading to tissue regeneration. The development of biomaterials able to enhance bone repair is essential for the treatment of patients suffering from orthopedic, oncological and congenital bone diseases. The use of compounds that mimic their organic and mineral extracellular matrix is one of the actual strategies with better results. The aim of this study was to evaluate the use of a phosphate-based nanoparticle (NPC) alone or associated with hyaluronic acid (HY) as a strategy to potentiate bone regeneration. Thus, to evaluate the effects of HY, NPC-Sr and HY+NPC-Sr, a non- critical bone defect model in tibia of rats was used. The animals were separated into four groups: (ii) control/carbopol rats; (ii) HY (1%) treated rats; (iii) NPC-Sr (0.5 mg/mL) treated rats; and (iv) HY+NPC-Sr treated rats. After creating the bone defect using a helical drill, the treatment were given at the injury site. On the seventh day of the experiment, the animals were sacrificed and the tibiae were processed for histological and morphometric evaluation with quantification of the percentage of bone trabeculae. The morphometric analysis showed that treatment with HY (21.8 ± 2.7%), NPC-Sr (20.4 ± 5.5%) or HY+NPC-Sr (19.7 ± 3.7) accelerated the bone repair process when compared to the control group (13.5 ± 2.2%). The histological analysis confirmed this increase in the trabecular formation, as well as the greater maturity of the formed bone tissue in all tested groups. In both analyzes, no significant differences were observed among the three treatments. Thus, we conclude that HY and NPC-Sr have the ability to accelerate the bone repair in non-critical defects in rat tibia and that the association of these two compounds has no additional or deleterious effects / Cpf não encontrado, sem título em inglês

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-10-04T10:48:59Z No. of bitstreams: 1 DIS_BRUNO_COUTO_GIACOBBO_COMPLETO.pdf: 3325467 bytes, checksum: 539cc1eb4d805644ba436db429ede065 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-04T10:48:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DIS_BRUNO_COUTO_GIACOBBO_COMPLETO.pdf: 3325467 bytes, checksum: 539cc1eb4d805644ba436db429ede065 (MD5) Previous issue date: 2016-03-31 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Tuberculosis (TB) is an infectious disease caused mainly by Mycobacterium tuberculosis and is one of the most devastating public health problems worldwide. Furthermore, MDR-TB and XDR-TB treatments are limited and recommended medicines are often not available revealing an urgent need for new anti-TB alternatives. In the present study, a series of 2-(quinolin-4-yloxy)acetamides were synthesized for further evaluation of minimum inhibitory concentration (MIC) against Mycobacterium tuberculosis (Mtb) strains. Moreover, a preliminary structure-activity relationship (SAR) study was also performed. The synthesized compounds were evaluated in a whole-cell assay against M. tuberculosis H37Rv and drug-resistant clinical isolate. The most active molecules against M. tuberculosis H37Rv (MIC <1?M) were selected for cytotoxicity study in Vero cells. The results showed that the molecular volume and hydrophobicity at the N-arylamide portion, the effect hydrogen bond donor on the acetamide moiety and an H-bond acceptor at 4-position of the quinoline ring represent three pharmacophoric groups important for antimycobacterial action. Further, the synthesized compounds 6a, 6h, 12d-f, and 12i-n were active against drug-resistant strains (MICs ? 0,001?M) with devoid of apparent cytotoxicity to Vero (IC50s ? 20 ?M). Therefore, these data indicate that this class of compounds may furnish candidates for future development, and to provide drug alternatives for tuberculosis treatment / A tuberculose (TB) ? uma doen?a infecciosa causada principalmente por Mycobacterium tuberculosis e ? um dos problemas de sa?de p?blica mais devastadores no mundo. Al?m disso, tratamentos de XDR-TB e MDR-TB s?o limitados e os medicamentos recomendados frequentemente n?o est?o dispon?veis, ressaltando uma necessidade urgente de novas alternativas anti-TB. No presente estudo, uma s?rie de 2-(quinolin-4-iloxi)acetamidas foi sintetizada para posterior avalia??o da concentra??o inibit?ria m?nima (MIC) frente a cepas de Mycobacterium tuberculosis (Mtb). Al?m disso, um estudo preliminar da rela??o estrutura-atividade (SAR) tamb?m foi realizado. Os compostos sintetizados foram avaliados no ensaio in vitro frente ao M. tuberculosis cepas H37Rv e isolado cl?nico resistente a f?rmacos. Os compostos mais ativos frente ao M. tuberculosis H37Rv (MIC < 1?M) foram selecionados para estudos de viabilidade em c?lulas Vero. Os resultados mostraram que o volume molecular e a hidrofobicidade na por??o N-arilamida, o efeito doador liga??o de hidrog?nio na por??o acetamida e o receptor na posi??o 4 do anel quinol?nico representam tr?s grupos farmacof?ricos importantes para a a??o antimicobacteriana. Al?m disso, os compostos sintetizados 6a, 6h, 12d-f, e 12i-n foram ativos frente a cepa resistente aos medicamentos (MIC ? 0,001?M) com desprovida citotoxicidade aparente para Vero (IC50 ? 20 ?M). Portanto, estes dados indicam que esta classe de compostos pode apresentar candidatos para o desenvolvimento futuro, e oferecer alternativas de medicamentos para o tratamento da tuberculose.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-12-23T13:17:24Z No. of bitstreams: 1 DIS_BRUNO_DALLAGNOL_PARCIAL.pdf: 1004622 bytes, checksum: f24e6bdb92018aba52853bc890c3dc2c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-23T13:17:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DIS_BRUNO_DALLAGNOL_PARCIAL.pdf: 1004622 bytes, checksum: f24e6bdb92018aba52853bc890c3dc2c (MD5) Previous issue date: 2015-03-18 / Anaplasma marginale is a vector-borne pathogen that causes a disease known as anaplasmosis. To date, there are no sequenced genomes of Brazilian strains available. The aim of this work was to compare whole genomes of Brazilian strains of A. marginale (Palmeira and Jaboticabal) with genomes of strains from other regions (North-American and Australian strains). Genome sequencing was performed by next-generation sequencing. Reads were mapped using the genome of the Florida strain of A. marginale as a reference sequence. Identification of single nucleotide polymorphisms (SNPs) and insertions/deletions (INDELs) was performed. Data showed significant differences between the two Brazilian strains, and their comparison with North-American strains (Florida and St. Maries) revealed more nucleotide differences than with Australian strains (Gypsy Plains and Dawn). These results shed light into the evolutionary history of A. marginale and provide the first genome information of South American isolates. Assessing sequences of the genomes of strains from different regions is essential to increase knowledge of the pan-genome of this rickettsia. / Anaplasma marginale ? um pat?geno transmitido por vetores que causa uma doen?a conhecida como anaplasmose. At? o momento, n?o h? genomas sequenciados de cepas brasileiras dispon?veis. O objetivo deste trabalho foi comparar genomas completos de cepas brasileiras de A. marginale (Palmeira e Jaboticabal) com genomas de cepas de outras regi?es (cepas norte-americanas e australianas). O sequenciamento do genoma foi realizado por sequenciamento de alto rendimento. As reads foram mapeadas utilizando o genoma da cepa Florida de A. marginale como uma sequ?ncia de refer?ncia. A identifica??o de polimorfismos de nucleot?deo ?nico (SNPs) e inser??es/dele??es (INDELs) foi realizada. Os dados mostraram diferen?as significativas entre as duas cepas brasileiras, e sua compara??o com as cepas norte-americanas (Fl?rida e St. Maries) revelou mais diferen?as de nucleot?deos do que com as cepas australianas (Gypsy Plains e Dawn). Esses resultados lan?am luz sobre a hist?ria evolutiva de A. marginale e fornecem a primeira informa??o gen?mica de isolados da Am?rica do Sul. Avaliar sequ?ncias dos genomas de cepas de diferentes regi?es ? essencial para aumentar o conhecimento do pangenoma desta rickettsia.