Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2012-10-23T04:59:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 238676.pdf: 621518 bytes, checksum: bba210dd2f0d798a715e1a7d94c12ef0 (MD5) / As atividades antifúngica, citotóxica e hemolítica de 40 cumarinas foram avaliadas frente às espécies fúngicas: Candida albicans, Aspergillus fumigatus e Fusarium solani, três linhagens de células tumorais humanas: Caco-2 (adenocarcinoma colo retal), HCT-8 (adenocarcinoma ileocecal) e HEp-2 (carcinoma epidermóide de laringe) e eritrócitos humanos do grupo sangüíneo "O" Rh positivo. Entre os compostos cumarínicos estudados, encontram-se as cumarinas simples (monossubstituídas, dissubstituídas e trissubstituídas), as cumarinas preniladas, as furano e piranocumarinas. Para cada uma destas cumarinas foram determinadas as concentrações inibitórias mínimas (CIM) pelo método de microdiluição em caldo, a CC50, ou seja, a concentração de cada amostra que reduziu em 50% a viabilidade celular, pelo ensaio colorimétrico com sal de tetrazolium (MTT) e a porcentagem de hemólise. Os resultados foram expressos em mM. As atividades antifúngica, citotóxica e hemolítica das cumarinas monossubstituídas estudadas não dependeram dos padrões de substituição no núcleo cumarínico, nem mesmo das características dos grupos substituintes. Entre as cumarinas monossubstituídas, a 6-nitrocumarina evidenciou a melhor atividade antifúngica, com CIM de 0,65 mM para Fusarium solani; em relação à atividade citotóxica destacou-se, dentre as cumarinas monossubstituídas, a 6-hidroxicumarina inibindo o crescimento da linhagem celular HCT-8 (CC50: 0,58 mM). As cumarinas di e trissubstituídas não apresentaram atividades antifúngica, citotóxica e hemolítica relevantes. O ostenol foi a cumarina que apresentou a melhor atividade antifúngica dentre todos os compostos testados, com CIM de 0,54 mM para Fusarium solani e 1,08 mM para Candida albicans e Aspergillus fumigatus. A piranocumarina 3a,a di-metil-xantiletina demonstrou a atividade citotóxica mais expressiva dentre todos os compostos estudados, com CC50 de 0,34 mM, 0,93 mM e 0,58 mM para as células HEp-2, Caco-2 e HCT-8 respectivamente. A única cumarina que desenvolveu atividade hemolítica foi a balsamiferona, com porcentagem de hemólise de 8,87%.

SOARES, V. V. M. Identificação, validação e anotação funcional de marcadores microssatélites em genótipos de cajueiro anão-precoce (Anacardium occidentale var. nanum) utilizando dados de rna-seq. 2015. 95 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2015. / Submitted by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2016-09-30T14:34:22Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_vvmsoares.pdf: 1959028 bytes, checksum: 71e697529ecc61bc7b79b34b119f8fb9 (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2016-09-30T14:35:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_vvmsoares.pdf: 1959028 bytes, checksum: 71e697529ecc61bc7b79b34b119f8fb9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-30T14:35:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_vvmsoares.pdf: 1959028 bytes, checksum: 71e697529ecc61bc7b79b34b119f8fb9 (MD5) Previous issue date: 2015 / The cashew tree is a native plant from Brazil with high market value. This contributes to the generation of thousands direct and indirect jobs, especially in the Northeast region, during dry season. Breeding programs have been selecting cashew cultivars that best adapt to semi-arid environment in order to fit it in the increasingly competitive market. The search for microsatellite markers can assist breeding programs regarding to access to genetic diversity of the species. This study aims to identify SSR markers in the cashew tree based on seeds and leaves transcriptome, as well as assess its validation by PCR technique in different commercial genotypes. Using bioinformatics tools, SSRs motifs from types di- tri- tetra- penta- and hexanucleotides were found. Trinucleotide-type motif was the most representative in transcripts both from dwarf cashew CCP 76 and common cashew, ranging from 60 to 65%, respectively. Transcripts from common cashew and dwarf cashew CCP 76 share a total of 298 SSR markers. 29 of these were selected for amplification by PCR, in which 9 showed polymorphism in genotypes tested. The sequences located near to the SSR markers encode proteins, which mostly belong to gene families. It can be concluded that regions containing SSRs markers were found in the transcribed region of nine cashew genotypes, and can be a useful tool in genetic analysis and open up prospects for endogenous role of SSRs in protein function / O cajueiro (Anacardium occidentale L.) é uma planta nativa do Brasil com grande valor comercial. Isso contribui com a geração de milhares de empregos diretos e indiretos, especialmente na Região Nordeste, em época de estiagem. Programas de melhoramento genético vem selecionando cultivares de cajueiro melhores adaptados ao ambiente semiárido a fim de colocá-lo em um mercado cada vez mais competitivo. A busca por marcadores microssatélites pode auxiliar os programas de melhoramento no que diz respeito ao acesso à diversidade genética da espécie. O presente trabalho tem como objetivo a identificação de marcadores SSR em cajueiro com base no transcriptoma de sementes e folhas, bem como sua validação por PCR em diferentes genótipos comerciais. Utilizando ferramentas de bioinformática foram encontrados motivos SSRs do tipo di- tri- tetra- penta- e hexanucleotídeos, onde o motivo do tipo trinucleotídeo foi o mais representativo nos transcritos do cajueiro anão CCP 76 e comum variando de 60 a 65%, respectivamente. Os transcritos de cajueiro comum e anão CCP 76 compartilham um total de 298 marcadores SSR, destes, 29 foram escolhidos para amplificação por PCR, os quais 9 mostraram polimorfismo nos genótipos testados. As sequências situadas próximas aos marcadores SSR codificam proteínas, que em sua maioria pertencem a famílias gênicas. Pode-se concluir que foram encontrados regiões contendo marcadores SSRs na região transcrita de nove genótipos de cajueiro, podendo ser uma ferramenta útil nas análises genéticas e abrindo perspectivas para o papel endógeno dos SSRs na função proteica

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia e Biociências, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-06-02T04:08:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 333971.pdf: 16202428 bytes, checksum: 63c3adc8979b2e4563ab700878882d82 (MD5) Previous issue date: 2015 / O FPR2/ALX é um receptor acoplado à proteína G pertencente à família dos receptores de peptídeos formilados, conhecidos pela importância na defesa do hospedeiro e na inflamação. Essa família de receptores é um tanto quanto promíscua e já foram descritos aproximadamente 30 agonistas, tanto peptídicos quanto lipídicos. A ativação do FPR2/ALX pode resultar em potentes respostas pró ou anti-inflamatórias. Ele está presente principalmente em células mielóides mas também foi descrito em células não mielóides. O FPR2/ALX tem a sua expressão aumentada nos tecidos pulmonares de animais sépticos e a sua ativação promove um efeito terapêutico por controlar a inflamação exacerbada. Embora a expressão do FPR2/ALX tenha sido observada em células do músculo liso vascular, o seu papel na reatividade vascular em condições inflamatórias não foi avaliado. O objetivo do presente estudo foi investigar uma possível participação do FPR2/ALX nas alterações vasculares induzidas pela sepse. Os resultados demonstram que o tratamento com o agonista seletivo WKYMVm restaura a hiporreatividade ao vasoconstritor induzida pela pneumosepse e aumenta a sobrevida dos animais em 40%. Os resultados in vitro mostram que a ativação do FPR2/ALX pelo WKYMVm diminui a produção de NO em células de músculo liso vascular e em aortas estimuladas com LPS, mas esse efeito não parece envolver a regulação da expressão da enzima óxido nítrico sintase-2 (NOS-2). Estes dados sugerem um importante papel do NO nos efeitos benéficos do WKYMVm observados nas alterações induzidas por LPS e sepse, entretanto, os mecanismos celulares e moleculares ainda precisam ser elucidados. Em conclusão, nossos dados sugerem que um receptor, primariamente descrito como mediador de respostas imunológicas, pode ter um papel relevante na disfunção vascular observada na sepse, sendo um possível alvo para novas intervenções terapêuticas.<br>

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-02-25Bitstream added on 2014-06-13T18:56:07Z : No. of bitstreams: 1 carvalho_cc_me_rcla.pdf: 943839 bytes, checksum: b3f2d7ccaee9f0c2374d9679adeb7d9b (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / As ligninases atualmente têm sido consideradas de grande importância para indústria papeleira no branqueamento da polpa e em processos de tratamento de resíduos contendo compostos recalcitrantes como aromáticos derivados de corantes e organoclorados. Neste trabalho foi estudada a produção de três ligninases (manganês peroxidase, lignina peroxidase e lacase) por três linhagens de basiodiomicetos: Coriolopsis byrsina 16, Gloephylum cf. striatum 40 e Lentinus sp 48. por um período de cultivo de seis semanas. Foram avaliados cinco diferentes resíduos agrícolas (casca de amendoim, palha de arroz, farelo de trigo, palha de milho e bagaço de cana) e produção de enzimas para os três fungos, além da influência de três fontes de nitrogênio ((NH4)2SO4, (NH4)2HPO4 e (NH4)2SO4 + (NH4)2HPO4) no crescimento e produção de ligninases. Entre as condições de fermentação testadas, a melhor produção de lacase (49011 U/g) foi obtida a partir do Coriolopsis byrsina 16, cultivado em farelo de trigo por três semanas, suplementado com solução de (NH4)2HPO4 + (NH4)2SO4. O Lentinus sp. 48 apresentou uma produção de 15080 U/g, quando cultivado em meio de farelo de trigo suplementado com solução de (NH4)2SO4, por três semanas de cultivo. A lacase de Coriolopsis byrsina 16 apresentou temperatura ótima de 60°C, e a lacase de Lentinus sp. 48 a 65°C. Os pHs ótimos das lacases foram de 3,5 para o Coriolopsis byrsina 16 e 3,0 para o Lentinus sp. 48. Foi avaliado o potencial de descoloração dos extratos enzimáticos brutos sobre oito corantes sintético. O corante Cibacron Blue foi descolorado em 69, 3% e o cristal violeta em 63% com o extrato enzimático de Coriolopsis byrsina. O corante Orange II perdeu 63,5% da cor após o tratamento com solução enzimática de Lentinus sp. 48. / Nowadays, the ligninases are considered very important to the paper industry in the pulp whitening and in the residual treatment processes, containing recalcitrant compounds acting as aromatics derived from colorings and organochlorine. In this study, it was analyzed, in a culture period of six weeks, the production of three ligninases (manganese peroxidase, lignin peroxidase and laccase) per three lineages of basiodiomycetes: Coriolopsis byrsina 16, Gloephylum cf. striatum 40 e Lentinus sp 48. It was evaluated five different agricultural residues (peanut shell, rice straw, wheat bran, corn straw and sugar-cane bagasse) and the production of enzymes for three fungi, besides the influence of three nitrogen sources ((NH4)2SO4, (NH4)2HPO4 and (NH4)2SO4+(NH4)2HPO4) in the ligninases growth and production. In the fermentation conditions tested, the best production of laccase (49011 U/g) was obtained from Coriolopsis byrsina 16, cultivated in wheat bran for three weeks, and supplemented with a solution of (NH4)2HPO4 + (NH4)2SO4. The Lentinus sp. 48 had a production of 15808 U/g when cultivated in wheat bran for three weeks, and supplemented with a solution of (NH4)2SO4. The Coriolopsis byrsina 16 laccase demonstrated an excellent temperature of 60°C, and the Lentinus sp. 48 laccase of 65°C. The considerable pHs of the laccases were 3,5 for the Coloriopsis byrsina 16 and 3,0 for the Lentinus sp. 48. It was evaluated the discoloration potential of the raw enzymatic extracts in eight synthetic colorings. The coloring Cibacron Blue was discolored in 69, 3% and the crystal violet in 63% with the enzymatic extract of Coriolopsis byrsina. The coloring Orange II lost 63,5% of its color after the treatment with the enzymatic solution of Lentinus sp. 48.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003Bitstream added on 2014-06-13T18:09:18Z : No. of bitstreams: 1 sandrim_vc_me_araraiq.pdf: 900969 bytes, checksum: 17a2cd6c4884e106be83349767b7cc9a (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A parede celular de planta é constituída por três componentes principais: celulose, hemicelulose e lignina. Entre as hemicelulose, xilana é o heteropolissacarídeo mais comum, e a principal enzima responsável por sua degradação é por Aspergillus caespitosus cultivado em fermentações submersa (FSM) ou semi-sólida (FSS). As xilanases foram purificadas, caracterizadas e testadas no branqueamento da polpa de celulose. Em relação a FSM, o melhor meio de produção xilanásica foi o SR suplementado com 1% de farelo de trigo (FT) ou bagaço de cana-de-açúcar (BCA), mais peptona 0,25% ou 0,1%, respectivamente. As fermentações foram realizadas a 40ºC durante 48 horas em meios com pH iniciais de 8,0 (BCA) ou 6,0 (FT). Não houve ativação enzimática com a adição de íons metálicos, principalmente com as amostras obtidas dos meios com BCA. As xilanases obtidas do meio com BCA foram inativadas termicamente a 55ºC e 65ºC, mais rápido do que as xilanases presentes nos filtrados das culturas com FT. Adição de diferentes concentrações de glicose no meio suplementado com BCA ou FT reduziu a produção de xilanases, mas de diferente modo, considerando que a repressão foi retardada na primeira condição. FSS foram realizadas também com FT ou BCA, mais 4 ou 8 mL de água por grama de substrato, respectivamente, a 30ºC durante 3 ou 6 dias. Os meios contendo FT e BCA foram suplementados com nitrato de amônio ou peptona, respectivamente. Não foi observada repressão catabólica por glicose nessas fermentações. Duas xilanases, xyl 1 e xyl 2, foram purificadas usando Sephadex G-100. Xyl 2 exibiu maior conteúdo de carboidrato (41%) do que xyl 1 (29%), o que pode explicar sua maior estabilidade a temperatura e pH... / The plant cell wall is constituted by three main compounds: cellulose, hemicellulose and lignin. Among the hemicelluloses, xylan is the heteropolysaccharide most common, and the principal enzyme responsible for its degradation is xylanase. This study investigated some optimal culture conditions for xylanase production by the filamentous fungus Aspergillus caespitosus cultivated in submerged fermentation (SMF), or solid-state-fermentation (SSF). The xylanases were purified, biochemical characterized and assayed in pulp bleaching. With regard to SMF, several media were tested, but the best results for xylanase production were obtained with SR medium supplemented with 1% (w/v) wheat bran (WB) or sugar cane bagasse (SCB), and with 0.25% (w/v) or 0.1% (w/v) peptone, respectively. Fermentation was carried out at 40oC, for 48 hours, in media with initial pH of 8.0 (SCB) or 6.0 (WB). There was no enzymatic activation by the addition of metallic ions, mainly for the samples obtained from SCB medium. The xylanase obtained from SCB crude extracts was thermally inactivated at 55oC and 65oC, faster than that of the xylanase obtained from WB culture filtrates. Addition of different glucose concentrations to media supplemented with SCB or WB reduced xylanase production, but in a different way, considering that the repression was retarded in the first condition. SSF were carried out also with 2 g WB or SCB, plus 4 mL or 8 mL water, respectively, at 30oC for 3 or 6 days. The WB and SCB media were supplemented with ammonium nitrate or peptone, respectively. It was not observed repression by glucose for these fermentations. Two xylanases, xyl 1 and xyl 2, were purified using Sephadex G-100. Xyl 2 exhibited higher carbohydrate content (41%) than xyl 1 (29%), which might explain its higher stability for temperature and pH. Furthermore, this property probably caused a carbohydrate-carbohydrate... (Compete abstract, click electronic address below)

Orientador: Maria de Lourdes Teixeira de Moraes Polizeli / Banca: Eleni Gomes / Banca: Rosa dos Prazeres Melo Furriel Inocentes / Resumo: A parede celular de planta é constituída por três componentes principais: celulose, hemicelulose e lignina. Entre as hemicelulose, xilana é o heteropolissacarídeo mais comum, e a principal enzima responsável por sua degradação é por Aspergillus caespitosus cultivado em fermentações submersa (FSM) ou semi-sólida (FSS). As xilanases foram purificadas, caracterizadas e testadas no branqueamento da polpa de celulose. Em relação a FSM, o melhor meio de produção xilanásica foi o SR suplementado com 1% de farelo de trigo (FT) ou bagaço de cana-de-açúcar (BCA), mais peptona 0,25% ou 0,1%, respectivamente. As fermentações foram realizadas a 40ºC durante 48 horas em meios com pH iniciais de 8,0 (BCA) ou 6,0 (FT). Não houve ativação enzimática com a adição de íons metálicos, principalmente com as amostras obtidas dos meios com BCA. As xilanases obtidas do meio com BCA foram inativadas termicamente a 55ºC e 65ºC, mais rápido do que as xilanases presentes nos filtrados das culturas com FT. Adição de diferentes concentrações de glicose no meio suplementado com BCA ou FT reduziu a produção de xilanases, mas de diferente modo, considerando que a repressão foi retardada na primeira condição. FSS foram realizadas também com FT ou BCA, mais 4 ou 8 mL de água por grama de substrato, respectivamente, a 30ºC durante 3 ou 6 dias. Os meios contendo FT e BCA foram suplementados com nitrato de amônio ou peptona, respectivamente. Não foi observada repressão catabólica por glicose nessas fermentações. Duas xilanases, xyl 1 e xyl 2, foram purificadas usando Sephadex G-100. Xyl 2 exibiu maior conteúdo de carboidrato (41%) do que xyl 1 (29%), o que pode explicar sua maior estabilidade a temperatura e pH... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The plant cell wall is constituted by three main compounds: cellulose, hemicellulose and lignin. Among the hemicelluloses, xylan is the heteropolysaccharide most common, and the principal enzyme responsible for its degradation is xylanase. This study investigated some optimal culture conditions for xylanase production by the filamentous fungus Aspergillus caespitosus cultivated in submerged fermentation (SMF), or solid-state-fermentation (SSF). The xylanases were purified, biochemical characterized and assayed in pulp bleaching. With regard to SMF, several media were tested, but the best results for xylanase production were obtained with SR medium supplemented with 1% (w/v) wheat bran (WB) or sugar cane bagasse (SCB), and with 0.25% (w/v) or 0.1% (w/v) peptone, respectively. Fermentation was carried out at 40oC, for 48 hours, in media with initial pH of 8.0 (SCB) or 6.0 (WB). There was no enzymatic activation by the addition of metallic ions, mainly for the samples obtained from SCB medium. The xylanase obtained from SCB crude extracts was thermally inactivated at 55oC and 65oC, faster than that of the xylanase obtained from WB culture filtrates. Addition of different glucose concentrations to media supplemented with SCB or WB reduced xylanase production, but in a different way, considering that the repression was retarded in the first condition. SSF were carried out also with 2 g WB or SCB, plus 4 mL or 8 mL water, respectively, at 30oC for 3 or 6 days. The WB and SCB media were supplemented with ammonium nitrate or peptone, respectively. It was not observed repression by glucose for these fermentations. Two xylanases, xyl 1 and xyl 2, were purified using Sephadex G-100. Xyl 2 exhibited higher carbohydrate content (41%) than xyl 1 (29%), which might explain its higher stability for temperature and pH. Furthermore, this property probably caused a carbohydrate-carbohydrate... (Compete abstract, click electronic address below) / Mestre

Orientador: Eleni Gomes / Banca: Maria de Lourdes Teixeira de Moraes Polizeli / Resumo: As ligninases atualmente têm sido consideradas de grande importância para indústria papeleira no branqueamento da polpa e em processos de tratamento de resíduos contendo compostos recalcitrantes como aromáticos derivados de corantes e organoclorados. Neste trabalho foi estudada a produção de três ligninases (manganês peroxidase, lignina peroxidase e lacase) por três linhagens de basiodiomicetos: Coriolopsis byrsina 16, Gloephylum cf. striatum 40 e Lentinus sp 48. por um período de cultivo de seis semanas. Foram avaliados cinco diferentes resíduos agrícolas (casca de amendoim, palha de arroz, farelo de trigo, palha de milho e bagaço de cana) e produção de enzimas para os três fungos, além da influência de três fontes de nitrogênio ((NH4)2SO4, (NH4)2HPO4 e (NH4)2SO4 + (NH4)2HPO4) no crescimento e produção de ligninases. Entre as condições de fermentação testadas, a melhor produção de lacase (49011 U/g) foi obtida a partir do Coriolopsis byrsina 16, cultivado em farelo de trigo por três semanas, suplementado com solução de (NH4)2HPO4 + (NH4)2SO4. O Lentinus sp. 48 apresentou uma produção de 15080 U/g, quando cultivado em meio de farelo de trigo suplementado com solução de (NH4)2SO4, por três semanas de cultivo. A lacase de Coriolopsis byrsina 16 apresentou temperatura ótima de 60°C, e a lacase de Lentinus sp. 48 a 65°C. Os pHs ótimos das lacases foram de 3,5 para o Coriolopsis byrsina 16 e 3,0 para o Lentinus sp. 48. Foi avaliado o potencial de descoloração dos extratos enzimáticos brutos sobre oito corantes sintético. O corante Cibacron Blue foi descolorado em 69, 3% e o cristal violeta em 63% com o extrato enzimático de Coriolopsis byrsina. O corante Orange II perdeu 63,5% da cor após o tratamento com solução enzimática de Lentinus sp. 48 / Abstract: Nowadays, the ligninases are considered very important to the paper industry in the pulp whitening and in the residual treatment processes, containing recalcitrant compounds acting as aromatics derived from colorings and organochlorine. In this study, it was analyzed, in a culture period of six weeks, the production of three ligninases (manganese peroxidase, lignin peroxidase and laccase) per three lineages of basiodiomycetes: Coriolopsis byrsina 16, Gloephylum cf. striatum 40 e Lentinus sp 48. It was evaluated five different agricultural residues (peanut shell, rice straw, wheat bran, corn straw and sugar-cane bagasse) and the production of enzymes for three fungi, besides the influence of three nitrogen sources ((NH4)2SO4, (NH4)2HPO4 and (NH4)2SO4+(NH4)2HPO4) in the ligninases growth and production. In the fermentation conditions tested, the best production of laccase (49011 U/g) was obtained from Coriolopsis byrsina 16, cultivated in wheat bran for three weeks, and supplemented with a solution of (NH4)2HPO4 + (NH4)2SO4. The Lentinus sp. 48 had a production of 15808 U/g when cultivated in wheat bran for three weeks, and supplemented with a solution of (NH4)2SO4. The Coriolopsis byrsina 16 laccase demonstrated an excellent temperature of 60°C, and the Lentinus sp. 48 laccase of 65°C. The considerable pHs of the laccases were 3,5 for the Coloriopsis byrsina 16 and 3,0 for the Lentinus sp. 48. It was evaluated the discoloration potential of the raw enzymatic extracts in eight synthetic colorings. The coloring Cibacron Blue was discolored in 69, 3% and the crystal violet in 63% with the enzymatic extract of Coriolopsis byrsina. The coloring Orange II lost 63,5% of its color after the treatment with the enzymatic solution of Lentinus sp. 48 / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:52:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5052_1.pdf: 2036213 bytes, checksum: 2c0f7ed2b7243e81e2ec1a3c2684f2df (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2003 / A produção e a purificação de DNA plasmidial com elevado grau de pureza tem tido um elevado interesse nos últimos anos, devido fundamentalmente aos desenvolvimentos de técnicas de medicina molecular, como a terapia gênica e a vacinação com DNA. O plasmídeo pD2 foi produzido em diferentes condições de cultivo, sendo analisado várias parâmetros durante o crescimento, tais como, influência da velocidade de agitação (120, 160 e 200 rpm), concentrações de canamicina (10, 20, 30, 40 e 50mg ml-1) e meio de cultura (Terrific Broth - TB ou Luria Bertani com glicose - LBG). Foram também investigados o efeito da partição de DNA plasmidial, RNA e proteínas totais nos sistemas de duas fases aquosas (SDFA) do tipo polietileno glicol (PEG)/sal de fosfato de sódio dibásico (K2HPO4) do plasmídeo (pD2) durante o processo de purificação. Analisou-se a influência da massa molar do PEG, massa que carrega o sistema da solução de lise (20, 40 ou 60% m/m) na partição do plasmídeo. A técnica de precipitação com sulfato de amônio (2,0, 2,5 e 3,0M), seguido da técnica cromatográfica de interação hidrofóbica (CIH) utilizando como matriz estacionária o suporte Phenyl Sepharose 6 Fast Flow foram utilizadas para purificar o plasmídeo pVax-LacZ. A velocidade de agitação que apresentou os melhores resultados para a produção de biomassa e DNA plasmidial foi a 200 rpm, enquanto as concentrações 30- 50mg mL-1 de canamicina apresentaram resultados semelhantes para todas as condições estudadas. O meio de cultura TB apresentou ser o melhor em termos de produção de DNA plasmidial e biomassa, neste meio de cultura o plasmídeo foi mais estável, apresentando 82% de células contendo o plasmídeo. O DNA plasmidial foi particionado entre a fase superior e inferior na dependência da massa molar do polímero constituinte do sistema, tendo uma grande quantidade de proteína do lisado celular acumulada na interfase dos sistemas. O melhor rendimento plasmidial (37%) foi obtido com sistema PEG 400/K2HPO4 (20/20% m/m) carregado com 60% (m/m) de lisado celular. O procedimento de precipitação com sulfato de amônio (2,5M) seguido da cromatografia de interação hidrofóbica foram capazes de separar proteínas e DNA genômico do plasmídeo, obtendo 51% de rendimento e um fator de purificação de 3,3

Orientador: Nelson E. Duran Caballero / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-25T04:52:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Angelo_RaquelSimoes_D.pdf: 3449425 bytes, checksum: 3927f7b17b43cba90c01ede23560b8ef (MD5) Previous issue date: 1999 / Doutorado

Orientador: Lucia Regina Durrant / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-14T02:32:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Reginatto_Valeria_M.pdf: 4638289 bytes, checksum: 39edccad7fc29323c7bb2ee9ca833c5f (MD5) Previous issue date: 1992 / Resumo: Um total de 626 microrganismos foram isolados de amostras de solos e de material celulósico em decomposição, coletadas em várias regiões brasileiras. Destes, um fungo mesofílico, o qual foi identificado como Trichoderma longibrachiatum, foi selecionado e utilizado em estudos de produção e caracterização de enzimas que promovem a degradação de materiais celulósicos. Celuloses comerciais e resíduas agroindustriais compuseram as fontes de carbono. As maiores atividades de hidrólise de papel de filtro, celulose microcristalina e carboximetilcelulose, foram obtidas, após crescimento do microrganismo em Solka-Floc, enquanto que ß-glicosidase e xilanase apresentaram um máximo de atividade após crescimento em meio líquido contendo bagaço de cana. A atividade do sistema celulolítico determinada por hidrólise de papel de filtro apresentou pH ótimo na faixa de 4.6 e 5.0 e conservou 87%. de sua atividade depois de 24 horas de incubação na faixa de pH 4.4 e 5.0. A temperatura ótima de ação o foi 65 C e após 1 hora e 24 horas de incubação a esta temperatura a enzima conservou em torno de 70% e 16% de sua atividade, respectivamente. O sistema enzimático produzido pelo fungo foi parcialmente purificado, após cromatografia em coluna DEAE Sephadex A-50 e filtração em gel Sephadex G-l00. O peso molecular de alguns de seus componentes foi estimado aproximadamente , obtendo-se uma ß-glicosidase de 44 kDa, duas xilanases de 14 e 16 kDa e uma exoglicanase de 60 kDa. Um mutante foi obtido por exposição da cepa isolada à luz ultravioleta. O mesmo apresentou características morfológicas diferentes da linhagem original e produção enzimática menor indicando possíveis alterações no sistema secretório / Abstract: A total of 626 microorganisms were isolated from samples of soil and biodegraded cellulosic material collected from various areas in Brazil. One mesophilic fungus which was identified as Trichoderma longibrachiatum was selected. The production and characterization of the enzymes, which promote the degradation of cellulosic materials, were studied. Relatively pure celluloses and agrindustrial residues were used as carbon sources. The highest filter paper rnicrocrystalline cellulose and carboxymetilcellulose hydrolysis activities were obtained following growth of the microorganism in Solka-Floc, whereas ß-g1ucosidase and xylanase exhibited the greatest activities after growth in sugar cane bagasse. The activity of the cellulolytic system determined as filter paper hydrolysis showed pH optimum at the 4.6-5.0 intervals and mantained 87% of its original activity after 24 hours incubation at the pH range 4.4-5.0. The optimum temperature for activity was 55 º C and after 1 hour and 24 hours incubation at this temperature de enzyme kept 70% and 15% respectively of its activity. The enzymatic system produced by the fungus was partially purified after DEAE-Sephadex A-50 column chromatography and Sephadex G-100 gel filtration. the molecular weight of some of the components was aproximately estimated getting a 44 kDa ß-glicosidase 14 and 16 kDa xylanases and a 60 kDa exoglucanase A mutant was obtained after exposition of the isolated strain to U. V. light. Its morphological characteristics were different from the original strain and its enzymatic production was lower indicating a possible alteration in the secretory system / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos