Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. / Made available in DSpace on 2012-10-17T20:42:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-25T18:01:23Z : No. of bitstreams: 1 170912.pdf: 7730023 bytes, checksum: b0578005b79e5303e70103f6b8b95dd7 (MD5) / Com o objetivo de verificar a presença de triterpenóides bioativos em G. australe foram coletados e identificados 15 basidiomas, dos quais também foram isoladas culturas dicarióticas. A partir de alguns desses basidiomas foi obtido um extrato metanólico, que foi particionado em hexano, clorofórmio e acetato de etila. Esses extratos foram fracionados através de cromatografia em coluna de gel de sílica. O fracionamento foi biomonitorado através do método de difusão em gel, com o qual se verificou a presença de atividade antibacteriana nas frações testadas. As frações foram ativas principalmente contra as cepas Gram-positivas. Nas frações obtidas foram identificados os esteróis: 5a-ergost-7-en-3b-ol, 5a-ergost-7,22-dien-3b-ol, 5,8-epidioxi-5a,8a-ergost-6,22-dien-3b-ol e os triterpenos designados como: ácidos aplanoxídicos A, C, G e F. Este estudo abre diversas perspectivas de investigações, tais como a pesquisa de novas substâncias com propriedades antibacterianas produzidas por esta espécie de fungo, a possibilidade de determinação de outras atividades biológicas para as substâncias isoladas e estudos com as culturas dicarióticas depositadas na coleção do Laboratório de Antibióticos da UFSC.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2012-10-18T10:08:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 202338.pdf: 1449489 bytes, checksum: aa60a525417d9e4b5edc9086ccb451a7 (MD5)

Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. / Made available in DSpace on 2012-10-17T03:51:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0

A produção de uva possui um papel importante na história e na economia mundial. Atualmente os vinhedos podem ser encontrados em dois sistemas distintos de cultivos, o orgânico, onde utilização de pesticidas, fertilizantes e recursos de engenharia genética são proibidos, e o convencional que podem receber tratamento com diferentes produtos químicos. A cada safra de uva é produzida uma grande quantidade de folhas de videira, as quais são principalmente descartadas no meio ambiente ou em alguns países utilizadas na preparação de bebidas, alimentos e na medicina popular. Assim sendo, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a atividade antioxidante, antigenotóxica e antimutagênica de extratos aquosos de folhas de Vitis labrusca variedade Isabel. Os polifenóis, o conteúdo de ácido ascórbico e os compostos majoritários foram determinados. Nos ensaios com linhagem celular, as células V79 foram tratadas durante 3 horas com os extratos das folhas e, em seguida, expostos durante uma hora com o agente oxidante peróxido de hidrogênio ou o agente mutagênio Metil metano sulfonado (MMS). Após, a viabilidade celular foi determinada pelo ensaio de redução MTT e sobrevivência clonogênica. O nível de peroxidação lipídica e presença de grupos carbonil das proteinas foram também verificados. O efeito antigenotóxico dos extratos foi analisado pelo ensaio cometa alcalino e com a utilização das enzimas endonuclease III (ENDO III) e fosfatidil-pirimidina de DNA glicosilase (FPG), enzimas que reconhecem os danos oxidativos à purinas e pirimidinas. A atividade antimutagênica dos extratos foi avaliada pelo ensaio de micronúcleos, através de MMS, um composto reconhecidamente mutagênico. Para a determinação da atividade antioxidante in vitro, a capacidade de varredura do radical livre DPPH· e a capacidade dos extractos para mimetizar a atividade das enzimas Superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT) foram avaliados. O extrato orgânico apresentou quantidade superior de polifenóis, ácido ascórbico e também de quercetina-3-glucósido e rutina que o extrato convencional. No entanto, nos ensaios de viabilidade celular, ambos os extratos, orgânico convencional e preveniram a morte celular de maneira semelhante. Em se tratando de atividade antigenotóxica e antimutagênica e atividade antioxidante in vitro, o extrato orgânico apresentou efeitos mais pronunciados. É possível que os polifenóis e também o ácido ascórbico presente nos extratos sejam responsáveis pelos resultados encontrados nesse trabalho. Embora outros estudos sejam necessários, os dados obtidos nesse trabalho mostram que os extratos aquosos de videiras da variedade Isabel, orgânico e convencional, tem importante atividade antigenotóxica antimutagênica e antioxidante e podem estar relacionados com a diminuição na incidência de diferentes patologias. / Submitted by Marcelo Teixeira (mvteixeira@ucs.br) on 2014-06-12T12:54:15Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Giovana Vera Bortolini.pdf: 2254846 bytes, checksum: a57ea9d9c74a54282a3c60874efea349 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-06-12T12:54:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Giovana Vera Bortolini.pdf: 2254846 bytes, checksum: a57ea9d9c74a54282a3c60874efea349 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The grape production plays an important role in world’s economy and history. Currently, vineyards can be found in organic management, which use of pesticides, fertilizers and genetic engineering resources are prohibited, and conventional vineyards, which can be treated with different chemicals. On each harvest is produced a large amount of vine leaves, which are mainly disposed in the environment or in some countries, used in folk medicine and as food and beverage. Therefore, the objective of this study was to evaluate the antioxidant antigenotoxic and antimutagenic activities of aqueous extracts of Vitis labrusca leaves cv. Isabella variety. The polyphenols and ascorbic acid content and the major compounds were determined. The cell line V79 was treated for 3 hours with the leaves extracts and then exposed for one hour to the oxidiative agent hydrogen peroxide or MMS mutagen. After that, the cell viability was analysed by MTT reduction and clonogenic survival assays, the lipid peroxidation level and protein carbonyl formation were also observed. The antigenotoxic effect of the extracts was analyzed by the alkaline comet assay and using enzyme endonuclease III (ENDO III) and phosphatidyl pyrimidine DNA glycosylase (FPG), enzymes that recognize damage to purines and pyrimidines. The antimutagenic activity of the extracts was evaluated by micronucleus assay, using MMS, a known mutagenic compound. For the determination of in vitro antioxidant activity the scavenging activity of the DPPH● was verified, and the ability of extracts to mimic the enzymes SOD and CAT. The organic extract present highest polyphenol, ascorbic acid content and also quercetin-3-glucoside and rutin. However, treatment with organic and conventional extract prevented cell death, lipid peroxidation and protein carbonyl the same manner. Moreover, the organic extract showed a better antimutagenic and antigenotoxic activity than conventional extract. Although it was observed that both extracts have in vitro antioxidant activity, and the organic extract showed better ability to scavenging DPPH●, and greater SOD and CAT-like activity than the conventional. It is possible that the polyphenols and ascorbic acid present in extracts are responsible for the results found in this work. Although other studies are necessary, the data obtained in this work shows that the aqueous extracts of grapevines leaves, cv. Isabella, both organic and conventional management, have important antigenotoxic, antimutagenic and antioxidant activity and can minimize the damage associated with different pathologies.

A produção de uva possui um papel importante na história e na economia mundial. Atualmente os vinhedos podem ser encontrados em dois sistemas distintos de cultivos, o orgânico, onde utilização de pesticidas, fertilizantes e recursos de engenharia genética são proibidos, e o convencional que podem receber tratamento com diferentes produtos químicos. A cada safra de uva é produzida uma grande quantidade de folhas de videira, as quais são principalmente descartadas no meio ambiente ou em alguns países utilizadas na preparação de bebidas, alimentos e na medicina popular. Assim sendo, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a atividade antioxidante, antigenotóxica e antimutagênica de extratos aquosos de folhas de Vitis labrusca variedade Isabel. Os polifenóis, o conteúdo de ácido ascórbico e os compostos majoritários foram determinados. Nos ensaios com linhagem celular, as células V79 foram tratadas durante 3 horas com os extratos das folhas e, em seguida, expostos durante uma hora com o agente oxidante peróxido de hidrogênio ou o agente mutagênio Metil metano sulfonado (MMS). Após, a viabilidade celular foi determinada pelo ensaio de redução MTT e sobrevivência clonogênica. O nível de peroxidação lipídica e presença de grupos carbonil das proteinas foram também verificados. O efeito antigenotóxico dos extratos foi analisado pelo ensaio cometa alcalino e com a utilização das enzimas endonuclease III (ENDO III) e fosfatidil-pirimidina de DNA glicosilase (FPG), enzimas que reconhecem os danos oxidativos à purinas e pirimidinas. A atividade antimutagênica dos extratos foi avaliada pelo ensaio de micronúcleos, através de MMS, um composto reconhecidamente mutagênico. Para a determinação da atividade antioxidante in vitro, a capacidade de varredura do radical livre DPPH· e a capacidade dos extractos para mimetizar a atividade das enzimas Superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT) foram avaliados. O extrato orgânico apresentou quantidade superior de polifenóis, ácido ascórbico e também de quercetina-3-glucósido e rutina que o extrato convencional. No entanto, nos ensaios de viabilidade celular, ambos os extratos, orgânico convencional e preveniram a morte celular de maneira semelhante. Em se tratando de atividade antigenotóxica e antimutagênica e atividade antioxidante in vitro, o extrato orgânico apresentou efeitos mais pronunciados. É possível que os polifenóis e também o ácido ascórbico presente nos extratos sejam responsáveis pelos resultados encontrados nesse trabalho. Embora outros estudos sejam necessários, os dados obtidos nesse trabalho mostram que os extratos aquosos de videiras da variedade Isabel, orgânico e convencional, tem importante atividade antigenotóxica antimutagênica e antioxidante e podem estar relacionados com a diminuição na incidência de diferentes patologias. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The grape production plays an important role in world’s economy and history. Currently, vineyards can be found in organic management, which use of pesticides, fertilizers and genetic engineering resources are prohibited, and conventional vineyards, which can be treated with different chemicals. On each harvest is produced a large amount of vine leaves, which are mainly disposed in the environment or in some countries, used in folk medicine and as food and beverage. Therefore, the objective of this study was to evaluate the antioxidant antigenotoxic and antimutagenic activities of aqueous extracts of Vitis labrusca leaves cv. Isabella variety. The polyphenols and ascorbic acid content and the major compounds were determined. The cell line V79 was treated for 3 hours with the leaves extracts and then exposed for one hour to the oxidiative agent hydrogen peroxide or MMS mutagen. After that, the cell viability was analysed by MTT reduction and clonogenic survival assays, the lipid peroxidation level and protein carbonyl formation were also observed. The antigenotoxic effect of the extracts was analyzed by the alkaline comet assay and using enzyme endonuclease III (ENDO III) and phosphatidyl pyrimidine DNA glycosylase (FPG), enzymes that recognize damage to purines and pyrimidines. The antimutagenic activity of the extracts was evaluated by micronucleus assay, using MMS, a known mutagenic compound. For the determination of in vitro antioxidant activity the scavenging activity of the DPPH● was verified, and the ability of extracts to mimic the enzymes SOD and CAT. The organic extract present highest polyphenol, ascorbic acid content and also quercetin-3-glucoside and rutin. However, treatment with organic and conventional extract prevented cell death, lipid peroxidation and protein carbonyl the same manner. Moreover, the organic extract showed a better antimutagenic and antigenotoxic activity than conventional extract. Although it was observed that both extracts have in vitro antioxidant activity, and the organic extract showed better ability to scavenging DPPH●, and greater SOD and CAT-like activity than the conventional. It is possible that the polyphenols and ascorbic acid present in extracts are responsible for the results found in this work. Although other studies are necessary, the data obtained in this work shows that the aqueous extracts of grapevines leaves, cv. Isabella, both organic and conventional management, have important antigenotoxic, antimutagenic and antioxidant activity and can minimize the damage associated with different pathologies.

Orientador: Edésio Luiz Simionatto. / Dissertação (mestrado) - Universidade Regional Blumenau, Centro de Ciências Exatas e Naturais, Programa de Pós-Graduação em Química.

O gene PROPEP1 codifica o peptídeo sinal AtPep1 em Arabidopsis thaliana e está relacionado à amplificação de sinais de defesa. Este peptídeo aumentou a resistência de A. thaliana contra o patógeno necrotrófico Pythium irregulare, tendo sido caracterizados ortólogos deste peptídeo em milho, soja e tomate. Devido a sua importância na resistência de plantas a patógenos necrotróficos, o objetivo deste estudo foi caracterizar o gene PROPEP em Nicotiana benthamiana e sua importância na resistência a Botrytis cinerea. A partir das buscas in silico, foi encontrado um EST e a partir deste, dois genes, identificados como NbPROPEP1 e NbPROPEP2. Estes genes possuem os 23 aminoácidos da região C-terminal de suas proteínas preditas idênticas entre si. Comparados a outras espécies, assemelhando-se em 39% com a sequência de A. thaliana, 60% com Solanum tuberosum e 65% com Solanum lycopersicum, indicando ser um possível peptídeo sinalizador. Estes genes foram avaliados quanto a sua expressão em diferentes órgãos e durante o desenvolvimento, apresentando mais alta expressão de NbPROPEP1 na raiz e caule e NbPROPEP2 no caule. Além disso, as plantas com 6 e 8 semanas foram aquelas com maior expressão de ambos os genes e redução em tempos mais avançados. Para investigar o possível envolvimento deste peptídeo na resistência a B. cinerea, foi empregado o método VIGS, a fim de silenciar a região correspondente ao peptídeo, bem como a síntese e infiltração do peptídeo em folha. O silenciamento resultou no aumento da lesão em folha, além da morte celular sistêmica. O peptídeo infiltrado resultou em níveis de expressão dos genes NbPROPEP1 e NbPROPEP2 e média de lesão, semelhantes as encontradas nas plantas silenciadas. Plantas com os dois tratamentos juntos apresentaram o dobro de lesão. Os resultados obtidos indicam que os mecanismos induzidos em plantas silenciadas e infiltradas com o peptídeo sintético foram semelhantes, permitindo o avanço do patógeno e induzindo a expressão de genes envolvidos na defesa. Conclui-se que NbPep pode estar envolvido na resistência de N. benthamiana a B. cinerea, permitindo maior severidade da doença quando reduzido ou em excesso na planta. / PROPEP1 gene encodes the peptide signal AtPep1 in Arabidopsis thaliana and is related to the amplification defense signal. This peptide increase the resistance of A. thaliana against necrotrophic pathogen Pythium irregular. Orthologs of this peptide have been characterized in maize, soybean and tomato. Due to this importance in plant resistance to necrotrophic pathogens, the aim of this study was to characterize PROPEP in Nicotiana benthamiana and its importance in resistance to Botrytis cinerea. In silico search was found one EST and from this, two genes, identified as NbPROPEP1 and NbPROPEP2. These genes have the 23 amino acid C-terminal region of their predicted proteins identical to each other. Compared to other species, resembling in 39 % with the sequence of A. thaliana, Solanum tuberosum with 60 % and 65 % with Solanum lycopersicum and could be a possible peptide signal. These genes were measured their expression in different organs and during development, with the highest expression of NbPROPEP1 in the root and stem and NbPROPEP2 in stem. In addition, the 6th and 8th week were those with higher expression of both genes and reduction in more advanced times. To investigate the possible involvement of this peptide in resistance to B. cinerea, VIGS was used in order to silencing the region corresponding to the peptide, the peptide synthesis and infiltration of the sheet. The silencing resulted in increase of leaf lesion and systemic cell death. The infiltrate peptide resulted in expression levels of NbPROPEP2 and NbPROPEP1 genes and average lesion, similar to that found in the silenced plants. Plants with two treatments together demonstrated double of lesion. The results indicate that the mechanisms induced in silencing and infiltrating with synthetic peptide were similar, allowing the advance of the pathogen and inducing the expression of defense genes. We conclude that NbPep may be involved in resistance of N. benthamiana to B. cinerea, allowing greater disease severity when reduce or excess in the plant.

Mycoplasma hyopneumoniae é uma bactéria pertencente à classe Mollicutes, sendo o agente etiológico da pneumonia enzoótica suína e o agente primário do complexo de doenças respiratórias de suínos (CDRS). A sinal-peptidase I (SPase I) é uma endopeptidase de membrana que cliva os peptídeos-sinal (PS) de proteínas transportadas pelo sistema geral de secreção. A SPase I do M. hyopneumoniae (MhSPase I) é codificada pela sequência de DNA codificadora (CDS) sipS, presente nas 3 linhagens da espécie com genomas já sequenciados. Este trabalho tem como objetivo caracterizar funcional e imunologicamente a MhSPase I, assim como investigar a sua relação com a virulência da bactéria. Foi demonstrado que sipS é parte de um operon, sendo cotranscrita com outras 4 CDSs. A CDS sipS foi clonada e a MhSPase I recombinante (rMhSPase I) foi expressa em Escherichia coli. A rMhSPase I mostrou-se altamente imunogênica para camundongos e seu caráter antigênico foi confirmado para suínos. A MhSPase I apresentou expressão diferencial em linhagens patogênicas e não patogênicas de M. hyopneumoniae corroborando a ideia de que essa enzima é um fator de virulência da bactéria. Análises de sequências de aminoácidos evidenciaram que a MhSPase I tem baixa identidade com enzimas ortólogas de outras espécies de micoplasmas e de bactérias relacionadas ao CDRS. O potencial sorodiagnóstico da rMhSPase I foi demonstrado em um ELISA. Predições in silico de possíveis PSs clivados pela MhSPase I indicaram que proteínas hipotéticas e proteínas de membrana, incluindo adesinas, seriam substratos da enzima. Ensaios de atividade in vitro com PSs sintéticos derivados de predições in silico, contudo, não foram conclusivos. Estudos futuros deverão elucidar o papel da SPase I na exportação de proteínas em M. hyopneumoniae e explorar o potencial da enzima como antígeno vacinal ou diagnóstico. / Mycoplasma hyopneumoniae is a bacterium that belongs to the Mollicutes class, being the etiological agent of porcine enzootic pneumoniae and one of the primary agents of the porcine respiratory disease complex (PRDC). Signal peptidase I (SPase I) is a membrane-bound endopeptidase that cleaves the signal peptide (SP) of proteins exported by the general secretory pathway. The M. hyopneumoniae SPase I (MhSPase I) is coded by the sipS gene in all of the three M. hyopneumoniae genomes sequenced. The aims of this work are to functional and immunologically characterize the MhSPase I and to investigate its relation with the virulence of the bacterium. The sipS coding DNA sequence (CDS) was demonstrated to be part of an operon, being co-transcribed along with 4 other CDSs. The sipS CDS was cloned and the recombinant MhSPase I (rMhSPase I) was expressed in Escherichia coli. The rMhSPase I was highly immunogenic for mice and the antigenicity for pigs was demonstrated. The observed differential expression of MhSPase I between pathogenic strains and one non pathogenic strain of M. hyopneumoniae corroborates the notion of MhSPase I as a virulence factor. Amino acid sequence analyses of MhSPase I and SPases I from other Mycoplasma and PRDC bacteria evidenced low conservation between these enzymes. The potential serodiagnosis application of rMhSPase I was demonstrated by an ELISA. In silico predictions of putative SPs cleaved by MhSPase I were performed, indicating that hypothetical and membrane proteins, including adhesins, have cleavable SPs. In vitro cleavage assays of rMhSPase I were developed with synthetic SPs, but the results were not conclusive. Further studies should elucidate the role of SPase I in the exportation of proteins in M. hyopneumoniae and the putative application of MhSPase I as an antigen for vaccination and diagnosis.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-12-09Bitstream added on 2014-06-13T18:41:23Z : No. of bitstreams: 1 cupertino_fb_dr_araiq.pdf: 10818363 bytes, checksum: 34f272c80573854af968c2e298ba0e61 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Este trabalho descreve a caracterização funcional de alguns fatores de transcrição possivelmente envolvidos na regulação do metabolismo do glicogênio no fungo filamentoso Neurospora crassa. Em uma análise sistemática realizada com 69 linhagens mutantes em genes codificadores para fatores de transcrição, foram identificadas e selecionadas sete linhagens que apresentaram perfis diferentes de acúmulo de glicogênio, em relação à linhagem selvagem, tanto durante o crescimento vegetativo (30°C) como no estresse térmico (45°C). Com o objetivo de verificar o envolvimento dos fatores de transcrição selecionados na expressão dos genes gsn (glicogênio sintase) e gpn (glicogênio fosforilase), experimentos de Northern blot foram realizados e revelaram variações ao nível transcricional em algumas linhagens. A análise por Blast revelou que alguns fatores de transcrição haviam sido previamente estudados em N. crassa (CSP-1, RCO-1, NIT2) ou em outros organismos (PacC, FlbC, Fkh1) e participam na regulação de diferentes processos biológicos. O fator de transcrição PACC e a influência do pH externo sobre a regulação do metabolismo do glicogênio foram investigados mais detalhadamente neste trabalho. Os resultados mostraram que na linhagem selvagem o acúmulo de glicogênio e a expressão do gene gsn foram reprimidos em condições de pH alcalino, enquanto que o gene pacC foi superexpresso nesta condição. A linhagem mutante pacCKO mostrou perder a regulação sobre o acúmulo de glicogênio e expressão do gene gsn, tanto durante o crescimento em pH fisiológico (5,8) como alcalino (7,8). A análise de ligação DNA-proteína mostrou que a proteína PACC de N. crassa recombinante produzida em E. coli foi capaz de se ligar ao motif de DNA para a proteína PACC, presente na região promotora do gene gsn... / This work describes the functional characterization of transcription factors likely involved in glycogen metabolism regulation in the filamentous fungus Neurospora crassa. In a systematic analysis performed with 69 strains knocked-out in genes encoding transcription factors, seven strains were identified and selected by presenting profiles of glycogen accumulation different from that existent in the wild-type strain during vegetative growth (30°C) and under heat stress (45°C). In order to verify the involvement of the selected transcription factors in regulation of gsn (codes for glycogen synthase) and gpn (codes for glycogen phosphorylase) genes, Northern blot assays were performed. Differences in gene expression were observed in some strains compared to the wild-type strain. Blast analysis showed that transcription factors have been previously studied either in N. crassa (CSP-1, RCO-1, NIT2) or in other organisms (PacC, FlbC, Fkh1) participating in the regulation of different biological processes. The transcription factor PACC and the influence of the external pH under the regulation of the glycogen metabolism were further investigated. The results showed that in the wild-type strain the glycogen content and the gsn gene expression were repressed under alkaline conditions, while the pacC gene was overexpressed in this condition. The pacCKO strain showed impairments in the glycogen accumulation and gsn gene expression under normal pH (5.8) and alkaline (7.8) conditions. Protein-DNA binding analysis showed that N. crassa PACC recombinant protein produced in E. coli cells was able to bind to the pacC motif present in the gsn promoter. Binding specificity was confirmed by competition assays using an oligonucleotide containing the DNA motif and by binding to a DNA fragment containing the motif mutated by site-directed mutagenesis... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-24Bitstream added on 2014-06-13T19:40:41Z : No. of bitstreams: 1 goncalves_ac_dr_araiq.pdf: 1427909 bytes, checksum: 13ce547164df900d11546eb7b87b39b8 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Devido a grande importância econômica da citricultura no Brasil e mundo e aos problemas sanitários enfrentados sendo alguns limitantes para o cultivo, como é o caso das doenças causadas por vírus como: a tristeza cítrica, causada pelo vírus da tristeza dos citros (CTV), pertencente ao gênero Closterovirus, família Closteroviridae, uma das maiores ameaças da citricultura mundial, mesmo com a pré imunização através de estirpes fracas do vírus e substituição de porta enxertos, estirpes fortes de CTV ainda causam prejuízos consideráveis. E com o aparecimento da doença morte súbita dos citros (MSC) de etiologia não determinada. Pelo fato de não haver ainda métodos eficientes de separação de ambos os vírus presentes em uma única amostra, levantando se as hipóteses que a causa da MSC esteja relacionada a uma estirpe do vírus CTV, a um vírus do gênero Marafivirus denominado Citrus Sudden Death-associated Virus (CSDaV), pertencente ao gênero Marafivirus, família Tymoviridae, ou a uma associação entre eles. Este trabalho vem propor um método eficaz de separação por citometria de fluxo (FC) de CTV e CSDaV em amostras semi purificadas, diluídas em tampão TE, pH7,5, utilizando marcação de ácidos nucléicos com Iodeto de Propídeo (PI) e conjugação de anticorpos policlonais anti CTV com Isotiocianato de Fluoresceína (FITC), cuja eficácia do método foi comprovada pela reação da polimerase em cadeia (PCR) / Because of high economic importance of citrus in Brazil and the world and health problems being faced some limiting factors for growing as is the case of diseases caused by viruses such as sadness citrus caused by citrus tristeza virus (CTV) belonging to Closterovirus gender, family Closteroviridae, one of the biggest threats to the citrus industry worldwide, even with the pre immunization using mild virus strains and replacement of the rootstocks, strong strains of CTV still cause considerable damage. And with the onset of the disease citrus sudden death (MSC) of undetermined etiology. Because there is not yet efficient methods of separation of the two viruses present in a single sample, raising the hypotheses that the cause of SCD is related to a strain of CTV, a virus Marafivirus group called Citrus Sudden Death-associated Virus (CSDaV) belonging to the genus Marafivirus, Tymoviridae family, or an association between them, this paper proposes an effective method of separation by flow cytometry (FC) and CTV in samples CSDaV semi purified, diluted in TE buffer, pH7, 5, using marking of nucleic acids with propidium iodide (PI) and a combination of polyclonal anti CTV with Fluorescein isothiocyanate (FITC), the effectiveness of the method was confirmed by polymerase reaction chain reaction (PCR)