Esta dissertação de mestrado apresenta um estudo da aplicação da biotecnologia na fabricação de resinas alquídicas, através do uso de catálise enzimática na transesterificação de diversos óleos (principalmente óleo de soja) com glicerol. O objetivo principal foi estudar a viabilidade técnica da substituição do processo de alcóolise alcalina atualmente utilizado em uma das etapas do processo de síntese/fabricação de resinas alquídicas por um processo enzimático com hidrolases tipo EC 3.1.1.3, mais comumente chamadas de lipases, alcançando menor consumo de energia e sustentabilidade ambiental no processo. Os melhores resultados foram obtidos com as enzimas dos organismos Pseudomonas sp e Candida antarctica. A temperatura de processo utilizada foi de 40ºC, em comparação aos 220ºC utilizados no processo alcalino. Alta conversão do óleo e alto teor de monoacilgliceróis foram alcançados. Em razão disso, a resina obtida apresentou menor tempo de processamento na etapa da policondensação, devido à maior funcionalidade na polimerização, levando a uma diminuição do consumo global de energia. Algumas propriedades da resina foram melhoradas, como dureza e resistência química do filme. A reutilização das enzimas sem perda de atividade foi demonstrada, o que viabiliza seu uso comercialmente, além de gerar menos resíduo. Um processo produtivo contínuo foi proposto e avaliado. A condição mais amena de reação garantiu um maior controle do produto gerado, devido a uma diminuição de reações paralelas, além de maior versatilidade da formulação, abrindo novas possibilidades no design destas resinas. Portanto, através da catálise enzimática, melhor desempenho e adequação aos padrões internacionais podem ser alcançados para as resinas alquídicas, agregando valor para esta classe de polímeros, favorecendo o uso de óleos vegetais e maximizando a utilização de recursos renováveis (eco eficiência). / This work presents a biotechnology application in the manufacturing of alkyd resin, through the use of enzymatic catalysis in the transesterification reaction of some oils (mainly soybean oil) with glycerol. The main objective was to study the technical feasibility to substitute the current alkaline process that has been used in a step of the resin synthesis by a enzymatic process with hydrolases class EC 3.1.1.3, most called lipases, achieving lower energy consumption and environmental process sustainability. The best results were obtained with the enzymes Pseudomonas sp and Candida antarctica. The process temperature was 40ºC, lower than the current temperature (220ºC). It was found higher oil conversion and higher monoacylglycerol amounts. For that reason, the resin synthesis showed lower polymerization time in the polycondensation step, leading to lower overall energy consumption. Some resin properties were improved, as hardness and chemical resistance. The reuse of the enzymes without high activity loss was demonstrated, which enable its use commercially, and generate less waste. A continuous process has been proposed and evaluated. The mild reaction conditions ensured greater control of the generated product due to a decrease in parallel reactions, thus it resulted in greater formulation versatility, opening new possibilities in the design of these resins. Therefore, by enzymatic catalysis, better performance and suitability to international standards can be achieve for alkyd resins, adding value to this class of polymers, favoring the use of vegetable oils and maximizing use of renewable resources (eco-efficiency).

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Departamento de Nutrição, Programa de Pós-Graduação em Nutrição Humana, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-12-12T18:15:10Z No. of bitstreams: 1 2017_NevildeMariaRiseloSales.pdf: 912257 bytes, checksum: 1c2717817be921131678d366e9a63581 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-02-20T15:35:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_NevildeMariaRiseloSales.pdf: 912257 bytes, checksum: 1c2717817be921131678d366e9a63581 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-20T15:35:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_NevildeMariaRiseloSales.pdf: 912257 bytes, checksum: 1c2717817be921131678d366e9a63581 (MD5) Previous issue date: 2018-02-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES). / Uma crescente preocupação com os danos ao meio ambiente iniciou-se em 1960, que culminou em um grande impacto nas décadas seguintes e atualmente é um assunto de relevância e repercussão na sociedade mundial. A Organização das Nações Unidas incentiva projetos que visam a redução e reutilização de rejeitos orgânicos ou não e uma das propostas é a reutilização destes por meio do emprego de metodologias biotecnológicas economicamente viáveis para sua utilização. Dentre as categorias de resíduos sólidos orgânicos destacam-se os domiciliares e os agroindustriais, uma vez que geram um grande volume de resíduos. Durante o processo de produção de um fertilizante, ocorre a produção de um rejeito sólido que poderia conter o carboidrato β-glucana em sua composição. Este polissacarídeo está presente em fungos, bactérias e cereais e, devido às suas propriedades bioativas, é utilizado na prevenção e tratamento de doenças como dislipidemias, diabetes e câncer, assim como atua no sistema imune auxiliando no combate a patógenos como bactérias Gram-negativas e Gram-positivas. Neste contexto, o presente estudo propõe o desenvolvimento de uma metodologia simples e de baixo custo para obtenção de β-glucana ativa oriunda de um resíduo agroindustrial denominado Fração II. Para a extração, procedimentos físicos e químicos foram utilizados e após a purificação e a quantificação enzimática obteve-se 7,3 gramas de glucanas totais e destas, 6,9 gramas foram de β-glucanas e 0,4 gramas de α-glucanas. As análises de ressonância magnética nuclear corroboraram com os resultados obtidos indicando espectros característicos dos polissacarídeos previamente observados. Para avaliar a atividade biológica do carboidrato, um ensaio anti-proliferativo foi feito e resultados equivalentes aos relatados na literatura foram observados nos ensaios, evidenciando uma inibição de crescimento bacteriano com valores estatisticamente significativos (p < 0,0005) nas cepas Escherichia coli e Staphylococcus aureus. O presente trabalho demonstrou que a metodologia desenvolvida foi eficaz e de baixo custo no isolamento de β-glucanas biologicamente ativas e que a Fração II pode ser utilizada para obtenção destes polissacarídeos. / In 1960, a concern for environmental damage began, which culminated in a major impact in the 1970s and is currently a subject of relevance and repercussion in world society. The United Nations encourages projects and programs aimed at the reduction and reuse of organic waste. One of the widespread proposals on the reuse of these is the use of economically viable biotechnological methodologies and products for their use. Among the categories of organic solid waste are the domiciliary and agro-industrial ones, due to the large volume generated. In the process of producing a fertilizer, in a Brazilian agroindustry, the production of a residue that, hypothesis, would have the β-glucan carbohydrate. This polysaccharide is present in fungi, bacteria and cereals and due to its bioactive properties, it is used in the prevention and treatment of diseases such as dyslipidemias, diabetes and cancer, as well as it acts in the immune system helping to fight against pathogens such as Gram-negative bacteria and Gram -positive. In this context, the present study proposes the development of a simple and low-cost methodology to obtain active β-glucan from an agro-industrial residue called Fraction II. Physical and chemical procedures were used for the extraction and purification and the enzymatic quantification measured a yield of 7.3 grams of total glucans and of these, 6.9 grams were β-glucans and 0.4 grams α-glucans. The 13C and 1H NMR analyzes corroborated the results obtained in the enzymatic quantification showing spectra characteristic of these polysaccharides. To evaluate the biological activity, an antibacterial assay was performed and results equivalent to those reported in the literature were observed, evidencing an inhibition of bacterial growth with statistically significant values (p < 0.0005) in the strains Escherichia coli and Staphylococcus aureus. The present work demonstrated that the methodology developed was efficient in the extraction and purification of the macromolecules and that the Fraction II can be used as raw material to obtain biologically active β-glucans.

A procura por tecnologias que minimizem o consumo de água e o potencial poluidor da indústria do couro tem aumentado. O uso de enzimas em diversas etapas produtivas deste processo é uma alternativa cada vez mais comum, pois além de ser considerada tecnologia limpa, acelera o processo produtivo. O objetivo deste trabalho foi analisar o desempenho de oito enzimas comerciais (A1, B1, B2, B3, C1, C2, C3 e C4) fornecidas por três empresas do setor (A, B e C) em processos chamados coenzimáticos, com teores reduzidos de produtos químicos, nas etapas de remolho, depilação/caleiro e purga, por meio da comparação com processos tradicionais puramente químicos. Na etapa de remolho foi verificada a influência do tempo de processamento, tipo e concentração de enzima, sendo a pele analisada quanto ao teor de gorduras e matéria volátil e o banho analisado com relação à concentração de cloretos, sólidos totais, fixos e voláteis. Na etapa de depilação/caleiro foi estudada a influência do tempo, tipo e concentração de enzima, em comparação com dois processos químicos (tradicional e reduzido), sendo analisada a pele em diferentes tempos de processo (via análise de MEV). Na etapa de purga, o processo foi avaliado com relação ao tipo de enzima aplicada e ao tempo de processamento. Ao todo foram realizados 24 testes (12 de remolho, 6 de depilação/caleiro e 6 de purga) e em todos eles, além das análises citadas anteriormente, foram feitas análises de Carbono Orgânico Total (COT) e Proteína Solúvel (método de Lowry) nos banhos. Adicionalmente, foi determinada a atividade das enzimas A1, B3 e C3 frente ao colágeno e das enzimas A1, B3, C3 e B1 frente a lipídeos. Em geral, os resultados apontam que os processos coenzimáticos alcançam um maior potencial de remoção de matéria orgânica, quando comparado aos processos puramente químicos, destacando-se as enzimas C1 no remolho e B1 e B2 na depilação/caleiro. Na purga as enzimas apresentaram desempenho semelhante, destacando-se as enzimas B3 e C3. Os testes de determinação da atividade enzimática demonstraram que a enzima B3 não apresenta atividade frente ao colágeno, enquanto que as enzimas A1 e C3 possuem atividade frente a este substrato. Já para a atividade lipolítica, o maior desempenho foi verificado para a enzima A1. A utilização de enzimas em curtumes tem sua eficácia comprovada na etapa de purga, recentemente na depilação/caleiro e remolho também apresentou resultados positivos. / The search for technologies that minimize water consumption and pollution potential of the leather industry has increased. The use of enzymes in various productive stages of this process is a common alternative, since it is a clean technology and accelerates the process. The aim of this study was to analyze the performance of eight commercial enzyme (A1, B1, B2, B3, C1, C2, C3 and C4) provided by three companies in the sector (A, B and C) in processes appointed co-enzymatic, with reduced levels chemicals on the steps of soaking, dehairing/liming and bating, by comparison with the traditional purely chemical. In the stage of soaking was seen from the influence of processing time, type and enzyme’s concentration, being the skin analyzed for fat content and volatile matter and bath analyzed with respect to the concentration of chloride, total solids, fixed and volatile. In step dehairing/liming was studied the influence of time, type and enzyme’s concentration, compared with two chemical processes (traditional and reduced) and the skin was treated at different process times (by SEM analysis). In the bating step, the process was evaluated for the type of enzyme used and the processing time. Altogether 24 tests were performed (12 of soaking, 6 of dehairing/liming and 6 of bating) and all of them, besides the previously mentioned tests were analyzed for Total Organic Carbon (TOC) and Soluble Protein (Lowry method) in baths. Additionally, it was determined the activity of enzymes A1, B3 and C3 against the collagen and enzymes A1, B3, C3 and B1 front of lipids. In general, the results indicate that the co-enzymatic processes reach a greater potential for removal of organic matter when compared to purely chemical processes, especially the enzymes in the soaking C1, B1 and B2 in dehairing/liming. In bating, the enzymes showed similar performance, especially enzymes B3 and C3. Tests for determination of enzyme activity showed that the enzyme has no activity against B3 to collagen, while the A1 and C3 enzymes have activity against this substrate. As for the lipase activity, the greatest effects were observed for the enzyme A1. The use of enzymes in leather processing has proven effective in purging step recently in soaking and dehairing/liming also had positive results.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Tecnologia, Departamento de Engenharia Mecânica, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-12-12T18:05:06Z No. of bitstreams: 1 2016_RosineideMirandaLeão.pdf: 15233193 bytes, checksum: 920b649f90a15b2cf1f21ba693f6fa96 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-01-10T20:10:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_RosineideMirandaLeão.pdf: 15233193 bytes, checksum: 920b649f90a15b2cf1f21ba693f6fa96 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-10T20:10:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_RosineideMirandaLeão.pdf: 15233193 bytes, checksum: 920b649f90a15b2cf1f21ba693f6fa96 (MD5) / O setor de cana no Brasil vem crescendo desde o início da década de 2000, obtendo uma produção anual de cerca de 654 milhões de toneladas em 2015, tornando o bagaço um importante resíduo agroindustrial. Esse fato leva a utilização de bagaço como fonte para a obtenção de nanocristais de celulose. Portanto, o presente estudo tem como objetivo obter nanocristais de celulose de forma técnica e ambiental que possam ser utilizados em nanocompósitos. Nanocristais de celulose podem ser extraídos por vários métodos, assim, a Avaliação do Ciclo de Vida (ACV) apresenta-se como a metodologia mais indicada para investigar quais as formas mais viáveis de obtenção. Para isso, o inventário dos sistemas englobou a produção de cana-de-açúcar e dos nanocristais. Insumos, energia e processos auxiliares como transporte e uso de combustível também foram quantificados. A unidade funcional adotada foi de 1 kg de nanocristais de celulose. Inicialmente, foram utilizados doze cenários para extração dos nanocristais de celulose que envolveu condições experimentais da literatura abrangendo pré-tratamento e hidrólise. Essas condições permitiram isolar os nanocristais de celulose, como também a composição química do bagaço e de cada fase de tratamento. Assim, as fibras e os nanocristais de celulose foram caracterizados por um conjunto de técnicas (microscopia eletrônica de varredura MEV; microscopia eletrônica de transmissão MET; microscopia de força atômica MFA; espectroscopia de infravermelho com transformada de Fourier FTIR, difração de Raios-X e análises térmicas). Depois da obtenção dos nanocristais de celulose, nanocompósitos de acrilonitrilabutadieno estireno (ABS) reforçados com 0,5, 1,0 e 1,5% de nanocristais de celulose foram obtidos por extrusão. Além disso, a influência do teor de nanocristais de celulose nos nanocompósitos foi estudada por difração de Raios-X,TGA análise termogravimétrica, DSC calorimetria exploratória diferencial e DMA análise dinâmico-mecânica, ensaios mecânicos, análise estatística, MEV e reologia. Os resultados mostraram que em todos os cenários, na fase de pré-tratamento e na produção dos nanocristais, houve uma grande contribuição para os impactos ambientais devido à quantidade de produtos químicos utilizados e, especialmente, ao consumo elevado de água e energia. A composição química do bagaço em massa foi de 39% de celulose, 21% de lignina e 27% de hemicelulose. Entretanto, a caracterização por MEV mostrou que o tratamento mudou a morfologia das fibras, bem como o aumento da rugosidade da superfície. A caracterização por MET mostrou o cumprimento em torno de 44-300 nm e o diâmetro de 10-30 nm. A caracterização por MFA mostrou a morfológia dos cristalitos e aglomerados de nanocristais. A análise de FTIR identificou claramente nos espectros, picos em 890-1364 cm-1 típico de celulose I. E, finalmente a análise de difração raios-X mostrou aumento da cristalinidade com sucessivos tratamentos, resultando em uma cristalinidade de 67% para os nanocristais. Difração de raios-X mostram diminuição do ângulo para os nanocompósitos, comprovando a dispersão da carga na matriz. As curvas TGA mostraram que a inserção dos nanocristais provocou uma estabilidade térmica intermediária para os nanocompósitos, e as curvas DSC para os nanocompósitos mostraram eventos térmicos semelhantes ao ABS. As curvas DMA mostraram aumento do módulo de armazenamento dos nanocompósitos. A adição dos nanocristais de celulose ao ABS, alterou as propriedades do polímero, comprovado estatisticamente. Assim, dependendo da aplicação, dos nanocompósitos terá um desempenho de maior, tração; flexão; impacto, estabilidade; viscosidade ou em termosambientais. ________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The sugarcane sector in Brazil has been growing since the beginning of the 2000s, obtaining a annual production of about 654 million tonnes in 2015, making sugarcane an important agricultural residue, may generate many applications. This fact carries the use of exceeding bagasse as a source to obtain cellulose nanocrystals. Therefore, the present study aims to obtain cellulose nanocrystals technical and environmental that can be used in nanocomposites. Nanocrystals cellulose can be extracted by various methods, so the Life Cycle Assessment (LCA) is presented as the most appropriate methodology to investigate what the most viable forms of obtainment. For that, inventory of the systems involved the sugarcane and nanocrystals production. Inputs, energy and auxiliary processes such as transportation and fuel use also were quantified. The functional unit used was 1 kg of cellulose nanocrystals. Initially, were used twelve scenarios for extraction of cellulose nanocrystals that involved experimental conditions of the literature including pre-treatment and hydrolysis. These conditions allowed isolation of cellulose nanocrystals, as well as, the chemical composition of the bagasse and of each treatment phase. The fibers and cellulose nanocrystals were characterized by a range of technical (scanning electron microscopy SEM, transmission electron microscopy TEM, atomic force microscopy AFM; infrared spectroscopy Fourier transform FTIR, X-ray diffraction and thermal analysis). After obtaining of the cellulose nanocrystals, nanocomposites of acrylonitrile butadiene styrene (ABS) reinforced with 0.5, 1.0 and 1.5% cellulose nanocrystals were obtained by extrusion. Furthermore, the influence of cellulose nanocrystals content in the nanocomposites was studied by (X-ray diffraction, TGA-thermogravimetric analysis, DSC-differential scanning calorimetry and DMA-dynamic mechanical analysis), mechanical testing, SEM and rheology. The results showed that in all scenarios in the pre-treatment phase and nanocrystals production was there was a great contribution to that contributed to environmental impacts due amounts chemicals used, and especially the high consumption of water and energy. The chemical composition of the bagasse mass was 39% of cellulose, 21% of hemicellulose and 27% of lignin. However, the SEM characterization showed that the treatment changed the morphology of the fibers, as well as, increased surface roughness. The TEM characterization showed lenght around 44-300 nm and a diameter of 10-30 nm. The AFM characterization showed the morphology of the crystallites and agglomerates. The FTIR spectra analysis clearly identified, band in 890-1364 cm-1 characteristic of cellulose I. And, finally X-ray diffraction analysis showed that the crystallinity increased with successive treatments, resulting in nanocrystals with crystallinity, about 67%. X-rays show decreased angle for nanocomposites, showing the load dispersion in the matrix. The TGA curves showed that the insertion of the nanocrystal caused a intermediate in thermal stability for the nanocomposite, and the DSC curves for nanocomposites showed thermal events similar to the ABS. The DMA curves showed increased storage modulus of the nanocomposites. The addition of the cellulose nanocrystals to ABS occurs alteration in polymer properties, statistically confirmed. Thus, depending on the application, each material will have a performance tensile higher; flexural; impact, stability; viscosity or environmental.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Brasília, Instituto de Biologia, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-graduação em Biologia Molecular, 2014. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2016-03-21T13:05:26Z No. of bitstreams: 1 2014_PablineMarinhoVieira_Parcial.pdf: 10665470 bytes, checksum: f1332eb503825366aa2631b295e58808 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2016-03-21T13:45:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_PablineMarinhoVieira_Parcial.pdf: 10665470 bytes, checksum: f1332eb503825366aa2631b295e58808 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-21T13:45:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_PablineMarinhoVieira_Parcial.pdf: 10665470 bytes, checksum: f1332eb503825366aa2631b295e58808 (MD5) / Trichoderma harzianum é um microorganismo de controle biológico eficaz contra várias espécies de patógenos de plantas. Dentre estes, Fusarium solani é um importante causador de prejuízos econômicos na agricultura. Nesse trabalho, através de bibliotecas subtrativas (SSH) e RT-PCR tempo real, foram identificados genes de T. harzianum que estão envolvidos no controle biológico deste fitopatógeno. A análise comparativa de respostas transcricionais em Trichoderma harzianum permitiu uma interpretação abrangente do micoparasitismo, identificou genes marcadores para o biocontrole, e principalmente, de interesse biotecnológico na agricultura. Como os desafios em biotecnologia agrícola incluem identificar genes para estratégias de resistência a estresses bióticos e abióticos em plantas, uma aquaporina identificada nesta biblioteca foi utilizada para a transformação genética de Trichoderma harzianum e Nicotianatabacum (tabaco). Organismos geneticamente modificados com o gene codificador de uma aquaporina foram avaliados em diferentes condições de estresses abióticos (etanol, peróxido de hidrogênio, polietileno-glicol, sorbitol e cloreto de sódio) e biótico (Fusarium solani). Em condições ótimas de crescimento, não foram observadas alterações na germinação ou crescimento em T. harzianum e tabaco. Em ensaios de tolerância a Fusarium solani, linhagens de plantas geneticamente modificadas não apresentaram resistência ao fitopatógeno. Entretanto, nas condições de estresse abióticos avaliadas, aquaporina aumentou a tolerância a estresse salino em ambos os organismos transformados. Sendo assim, nossos resultados confirmam o elevado potencial de T. harzianum como fonte de genes com aplicações promissoras em plantas transgênicas resistentes a estresses abióticos sem alteração fenotípica. / Trichoderma harzianum, a filamentous soil fungus, is an effective biocontrol agent against many plant-pathogen species. Despite its relevance in plant protection, there is a lack of studies concerning its use as a biological control agent against Fusarium solani, which is involved in several crop diseases. In order to provide information about the genes from T. harzianum that are involved in the biocontrol of this pathogen, we have used subtractive library hybridization (SSH) and RT-PCR techniques. Transcriptional responses in Trichoderma harzianum allowed a comprehensive interpretation of my coparasitism, identified biocontrol-related genes, and also genes of biotechnological value. Following its identification in our library, a gene encodinganaquaporinhasbeenusedtoenhancetolerancetobioticandabioticstresses in both Trichoderma harzianum and Nicotiana tabacum plants. Transformants were selected and evaluated underdifferent abiotic (ethanol, hydrogen peroxide, polyethyleneglycol, sorbitol and sodium chloride) andbiotic (Fusarium solani) stresses. Analysis under stress-free condition showed that both Trichoderma harzianum and to bacco plants transformed with aquaporin did not present differences in growth and germination rates when compared with wild type. Furthermore, potential tolerance against Fusarium solani was assessed in plants by challeng in gleaves with the pathogen and no tolerance was observed in all lines tested. However, evaluations under abiotic stresses revealed that both organisms presented tolerance to salt stresses. Our results under scorethe high potential of T. harzianum as a sourceof genes with promising applications in transgenic plants resistant to abiotic stresses without phenotypic alteration.

Submitted by Rosana Amâncio (rosana.amancio@ufcg.edu.br) on 2018-07-11T13:31:15Z No. of bitstreams: 1 Biodiversidade Meiofaunística em Ecossistemas Aquáticos do Curimataú Ocidental Paraibano.pdf: 1360647 bytes, checksum: 0383621a2c0066cd490cb5844dad53ca (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-11T13:31:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Biodiversidade Meiofaunística em Ecossistemas Aquáticos do Curimataú Ocidental Paraibano.pdf: 1360647 bytes, checksum: 0383621a2c0066cd490cb5844dad53ca (MD5) Previous issue date: 2015-07-23 / CNPq / A meiofauna é constituída por táxons importantes no ecossistema aquático. Um dos principais componentes dessa comunidade é o filo Nematoda que é participante importante em teias tróficas e energéticas do ecossistema e pode ainda atuar como bioindicador de condições ambientais. Da meiofauna e, mais especificamente da nematofauna de ecossistemas aquáticos continentais, pouco é conhecido em comparação ao que é conhecido para ambientes marinhos. Esse trabalho objetivou caracterizar a estrutura da comunidade meiofaunística e nematofaunística presente em ambientes límnicos do Curimataú Ocidental Paraibano por meio da caracterização da comunidade e de fatores abióticos de 6 reservatórios hídricos (Cairana, Jacaré, Arara, Soledade, Olivedos e Poleiros). Os fatores abióticos variaram entre os ambientes prospectados, especialmente a salinidade que teve valores altos, caracterizando a água dos açudes analisados como salobras ou, no caso do açude Olivedos, comosalina. Houve diferenças significativas entre a comunidade meiofaunística e nematofaunística dos 6 ambientes prospectados. A meiofauna esteve composta por 9 táxons superiores, com dominância de Nematoda, além de Ostracoda e Turbellaria, para alguns pontos. A nematofauna esteve representada por 16 gêneros, sendo que Monhystrella foi o único gênero presente em todos os ambientes analisados. Em alguns reservatórios houve também dominância de Daptonema e de Trefusia. Monhystrella hoogewijsi foi identificado para o açude Olivedos, onde foi identificado o primeiro macho para a espécie. O açude Olivedos apresentou-se com uma comunidade meiofaunística diferenciada dos demais pela alta abundância de organismos e uma nematofauna pela presença de uma comunidade praticamente monoespecífica. A presente pesquisa trouxe dados novos e relevantes para meiofauna dulcícola brasileira, para o gênero Monhystrella e para a biodiversidade do bioma caatinga e com isso pretende despertar novas pesquisas que investiguem os ecossistemas aquáticos do semiárido brasileiro. / The meiofauna consists of important taxa in the aquatic ecosystem. A major component of this community is the phylum Nematoda which is important participant in trophic webs and energy ecosystem and can even act as a bio-indicator of environmental conditions. Meiofauna and more specifically the nematofauna of freshwater ecosystems, little is known compared to what is known to marine environments. This study aimed to characterize the meiofauna structure community and this nematofauna in limnic environments of the Curimataú Ocidental Paraibano through a characterization of the community and abiotic factors of 6 water reservoirs (Cairana, Jacaré, Arara, Soledade, Olivedos e Poleiros). Abiotic factors varied between prospected environments, especially salinity had high values, characterizing the water of reservoirs analyzed as brackish or in the case of the Olivedos dam, such as saline. There were significant differences between the community and meiofaunística nematofaunística 6 prospected environments. The meiofauna was composed of 9 higher taxa, with dominance of Nematoda, and Ostracoda and Turbellaria for some points. The nematofauna was represented by 16 genera and Monhystrella was the only genus present in all analyzed environments. In some reservoirs was also dominance Daptonema and Trefusia. Monhystrella hoogewijsi was identified for the Olivedos dam, where it was identified the first male of the species.. The Olivedos dam presented with a different meiofaunística community from others by high abundance of organisms and a nematofauna by the presence of an almost monospecific community. This research has brought new and relevant data to meiofauna Brazilian freshwater, for Monhystrella and biodiversity of the caatinga biome and thereby to awaken new research to investigate aquatic ecosystems of the Brazilian semiarid region.

Made available in DSpace on 2018-07-27T18:26:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-10-15. Added 1 bitstream(s) on 2018-07-27T18:30:20Z : No. of bitstreams: 1 000866903.pdf: 3382135 bytes, checksum: 11a5cbaf65eb2a51c8ece933b2603115 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Apesar da citometria ser um método eficiente para sexagem espermática, nos cães pode ser considerada de difícil aplicação, em vista do alto custo da aplicação da técnica e da baixa recuperação espermática após a separação. Por esta razão, o presente trabalho visou avaliar a viabilidade espermática, a taxa de recuperação e a porcentagem de espermatozoides de cães contendo o cromossomo X ou Y após a centrifugação em três gradientes descontínuos de densidade e estudou três técnicas de extração de DNA espermático para determinar a % de células X ou Y pela PCR quantitativa (qPCR). Foram avaliadas 30 amostras de sêmen canino (10 cães) utilizando os protocolos de centrifugação em gradiente descontínuo de densidade (Percoll® - 30 a 90% associado ao Nycodenz® e Ficoll). Os espermatozoides foram avaliados pré e pós-centrifugação quanto à motilidade (CASA - Computer-Aided Semen Analyzer), concentração inicial e concentração recuperada, morfologia espermática, integridade das membranas plasmática e acrossomal, e função mitocondrial. Após a separação, as células foram submetidas a três protocolos de extração de DNA, um não comercial (fenol:clorofórmio, M1) isolado ou associado a um kit preparatório (M2) e dois comerciais com mini-colunas de extração (M3 e M4) e, posteriormente, à qPCR com os primers contra os genes SRY (AF_107021.1) e Fator IX (NM_001003323.2). O protocolo M1 recuperou maior concentração de DNA e com maior qualidade permitindo a execução da qPCR. Dentre os gradientes de densidade, o Ficoll manteve maior qualidade espermática após a centrifugação, embora o enriquecimento de X ou Y não tenha sido observado em nenhum dos métodos estudados. A extração de DNA utilizando o fenol:clorofórmio foi o método que extraiu maior quantidade e de maior qualidade para a aplicação na qPCR / Despite cytometry to be an effective method for sperm sexing, in dogs can be considered of difficult application, given the high cost of the technical implementation and low sperm recovery after separation. Therefore, this study aimed to evaluate the sperm viability, recovery rate and the percentage of sperm dogs containing the X or Y after centrifugation three discontinuous density gradients. Furthermore, aimed to study three DNA extraction techniques for sperm cells to determine the percentage of bearing cells of the X or Y chromosome for quantitative real-time PCR (qPCR). Thirty samples (10 dogs) of canine semen were evaluated using centrifugation discontinuous density gradient protocols (Percoll® - 30 to 90% associated to Nycodenz® and Ficoll). The sperm were evaluated before and after centrifugation for motility (CASA - Computer Aided Semen Analyzer), initial concentration and recovered concentration, sperm morphology, integrity of plasma and acrosomal membranes, and mitochondrial function. After separation, the cells were subjected to three DNA extraction protocols, a non-commercial using phenol:chloroform (M1) alone or combined with a preparatory kit (M2) and two commercial with extraction mini-columns (M3 and M4). Next, the DNA samples were subjected to qPCR using two primers (SRY - AF_107021.1 and Factor IX - NM_001003323.2). M1 protocol recovered greater concentration of DNA with higher quality and allowing the execution of qPCR. Among the density gradients, Ficoll maintained higher sperm quality after centrifugation, although the X or Y enrichment was not observed in any of the studied methods

Orientador: José Maurício Barbanti Duarte / Coorientador: Eveline dos Santos Zanetti / Banca: Maria Emilia Franco Oliveira / Banca: Gisele Zoccal Mingoti / Banca: Maria Denise Lopes / Resumo: A região neotropical passa por um período crítico em termos de perda de biodiversidade. Dentro deste contexto, há um crescente aumento do número de espécies de cervídeos neotropicais sofrendo redução em seu tamanho populacional, podendo ocasionar ausência de fluxo gênico e consequente diminuição da variabilidade genética e à endogamia, afetando o desempenho reprodutivo e aumentando o risco de extinção. Neste contexto, o uso das biotécnicas da reprodução nos animais silvestres será útil para programas de conservação das mais diversas espécies. Assim, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a viabilidade da técnica de inseminação artificial intrauterina por videolaparoscopia (IAUL), com sêmen congelado, na espécie M. gouazoubira. Foram utilizadas cinco fêmeas adultas e dois machos adultos inteiros, da espécie M. gouazoubira, sendo que, quatro fêmeas foram submetidas a dois procedimentos de IAUL com intervalo aproximado de 5 meses e uma fêmea passou por um procedimento, totalizando nove inseminações. As fêmeas receberam um dispositivo intravaginal contendo 0,33g de progesterona, cuja permanência foi de oito dias. No momento da retirada do dispositivo, foi administrado 265μg (1mL) de cloprostenol sódico. Oito horas após a retirada do dispositivo as fêmeas passaram a ser monitoradas (com rufiões) quanto a manifestação do estro comportamental a cada seis horas. Os procedimentos de IAUL foram realizados 12-14 horas após início do estro e os animais receberam uma aplicação de 2,5mg (2mL) de hormônio luteinizante (LH). As inseminações foram realizadas com sêmen descongelado, na concentração de 50 x 106 espermatozoides/dose, envasados em palhetas de 0,25mL, com motilidade e vigor mínimos de 30% e 2, respectivamente, pós descongelação. A avaliação da presença do corpo lúteo (CL) funcional foi feita com a dosagem hormonal de metabólitos fecais ... / Abstract: The neotropical region undergoes a critical period in terms of biodiversity loss. Within this context there is a rising increasing of neotropical deer species suffering a shrinking in its population. The population decreasing as well the gene flow absence can lead to the genetic variability reduction and endogamy, affecting the reproductive performance and increasing the extinction risk. In this context, the wild animal reproduction biotechnique knowledge might be useful to further conservation programs to several species. Thus, this work aim was evaluate the videolaparoscopic intrauterine artificial insemination technique (LAI), using frozen semen of M. gouazoubira. To the procedure, five adult females and two stags of M. gouazoubira were used. Four females were submitted two LAI procedures in a five months interval and one female suffered one procedure, totalizing nine inseminations. The females received an intravaginal device containing 0.33g of progesterone foreight days. At the device removal time, 265μg (1mL) of sodium cloprostenol was i.m. administred. Eight hours later the females started being monitored (with teasers ) regarding to the behaviorial estrus every six hours. The LAI procedures were done 12-24 hours after the estrus beginning, when the animals received 2.5mg (2mL) of luteinizing hormone (LH). Inseminations were done using 0.25mL straws (50x106 espermatozoons/mL) of thawed semen, with minimal motility and vigor of 30% and 2, respectively, in the post thaw. The corpus luteum (CL) presence evaluation was done by progesterone fecal metabolites hormonal dosage. The gestation diagnostic was done from 45 to 55 days after LAI by transabdominal ultrasonography. Only eight LAI procedures were able to be evaluated regarding the gestation percentage due the death of one female just after the second insemination procedure, resulting in 50% (4/8) of gestation. The average time from ... / Mestre

Resumo: Este estudo teve como objetivos: (a)avaliar a confiabilidade interavaliadores do instrumento para a classificação de pacientes pediátricos proposto por Dini em uma população de pacientes infanto-juvenil portadores de câncer; (b) Verificar se o instrumento de classificação de pacientes pediátricos proposto por Dini é adequado para pacientes infanto juvenis portadores de câncer. (c) elaborar uma proposta de modificações no instrumento de classificação, permitindo a adaptação para pacientes pediátricos oncológicos. Foram avaliados 34 pacientes na unidade de internação pediátrica de um hospital de câncer, pelas equipes de médicos, enfermeiros e técnicos de enfermagem. Para a avaliação do grau de concordância entre os escores obtidos pelos avaliadores, foi utilizado o coeficiente Kappa. A análise de concordância revelou um Kappa intermediário á alto (K= 069 á 0,84) entre as classificações objetivas, e um Kappa baixo (0,12 á 0,31) nas subjetivas. Conclui-se que o instrumento é confiável e reprodutível, porém para classificação do paciente pediátrico oncológico sugere-se a incorporação de itens complementares para atingir um resultado mais compatível com a realidade desta população. / Abstract: This study aimed to a-) evaluate the reliability of Dini's instrument model for classification pediatric patients in children youth cancer patients; b-) verifying if the classification pediatric patients; c-) preparing a proposal to amend the instrument of classification to pediatric cancer patients. 34 pediatric inpatients from the Cancer Hospital were evaluated by the physicians, nurses and auxiliary nursing team. Kappa's quotient was used to observe the concordance degree of the total scores from the evaluating team. The reliability analysis showed a Kappa from intermediate to high (K= 0,69 to 0,84) for the objective classification and a low Kappa (0,12 to 0,31) which is worthful, however for the reality of this population, it suggests to add complementary itens to reach a better result. / Orientador: Sergio Vicente Serrano / Coorientador: Maria Salete de A. Nascimento / Banca: Sônia Marta Moriguchi / Banca: Juliana França da Mata / Mestre

Orientador: Alexandre Ninhaus Silveira / Banca: Cristiele da Silva Ribeiro / Banca: George Shigueki Yasui / Resumo: A décadas a criobiologia busca a conservação do genoma materno em peixes por meio da conservação de gametas, porém as técnicas disponíveis atualmente esbarram em problemas como a baixa permeabilidade das membranas, o grande volume de vitelo e a sensibilidade dos gametas ao frio. Trabalhos acerca do assunto vem sendo realizados, contudo de forma não sistemática e de forma majoritária com espécies de clima temperado a frio. Devido a carência de informações sobre o tema com peixes neotropicais, objetivou-se neste trabalho desenvolver um protocolo para o congelamento de oócitos de Prochilodus lineatus, para isso, foi avaliado o uso de diferentes soluções salinas (solução de Ringer e Ringer lactato, solução salina balanceada de Hank (HBSS) com e sem cálcio, e solução para ovos de salmonídeos) como meio de manutenção e extensão da viabilidade dos oócitos. Também foi avaliado a toxicidade de três agentes crioprotetores (ACPs) o Dimetilsulfóxido (DMSO), Propilenoglicol (PG), e Metanol (MET), visando (1) a elaboração de protocolos de vitrificação, com exposição de 2,5, 5 e 7,5 min. em molaridades de 6 M, 8 M e 10 M de ACP; e (2) para a construção de protocolos de congelamento lento com incorporação dos ACPs em banhos crescentes avaliado os efeitos tóxicos sobre a fertilização em 0,5 M, 1 M, 2 M e 4 M. Avaliou-se a sensibilidade dos oócitos a baixa temperatura (2,5°C) em quatro tempos de estocagem 30, 60, 90 e 120 minutos. Oócitos foram submetidos ao congelamento lento em vapor de nitrogênio avaliando as injúrias morfológicas geradas pela exposição aos ACPs e ao congelamento. Os resultados obtidos mostraram que somente a HBSS com e sem cálcio foram capazes de manter o estado não ativado dos gametas, porém, as mesmas não proporcionaram a extensão da viabilidade dos oócitos, permitindo a que estes continuassem a sofrer a degradação pelo tempo de estocagem, de forma similar aos oócitos mantidos... / Abstract: The decades cryobiology seeks to conserve the maternal genome in fish through gamete preservation, but the techniques currently available run into problems such as low permeability of the membranes, the large the amount of yolk and the sensitivity of gametes to cold. Work on the subject has been carried out, however unsystematically and majority form with cold temperate species. Due to lack of information on the subject with Neotropical fish, the aim of this work is to develop a protocol for the freezing of Prochilodus lineatus oocytes for this, was evaluated using different salt solutions (Ringer and Ringer's lactate solution, Hank's balanced salt solutions (HBSS) with and without calcium, and the solution for salmonid eggs) as a means of maintaining and extending the viability of oocytes. We also assessed the toxicity of three cryoprotectants agents (ACPs) the Dimethyl sulfoxide (DMSO), Propylene glycol (PG), and Methanol (MET), to (1) the development of vitrification protocols with exposure, 2.5, 5.0 and 7.5 min. in molarities the 6 M 8 M 10 M CPA; and (2) for the construction of slow cooling protocols with CPAs with increasing incorporation of the baths evaluated toxic effects on fertility in 0.5 M, 1 M, 2 M and 4 M. It was evaluated the lower the sensitivity of oocytes temperature (2.5 ° C) storage on four 30, 60, 90 and 120 minutes. Oocytes underwent slow cooling in nitrogen steam evaluating the morphological injuries due to exposure to the CPAs and freezing. The results showed that only with HBSS without calcium and were able to maintain the state of gametes not activated, however, they do not provide the extent of viability of oocytes, allowing that they continue to suffer from degradation by storage time, similarly to the oocytes retained only in ovarian fluid. The high sensitivity of oocytes to the CPAs and the cold was found. The toxicity of the higher molarities of CPAs (6 M, 8 M and 10 M) at all exposure times, precludes ... / Mestre