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Morfologia descritiva e hemodinâmica dos aneurismas do sifão carotídeoAMBROSI, Patrícia Bozzetto 25 February 2016 (has links)
Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-07-13T16:37:18Z
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Previous issue date: 2016-02-25 / CAPES / Os novos stents modificadores de fluxo apresentam elevadas taxas de sucesso obtidas no tratamento
dos aneurismas que se desenvolvem na circunferência do sifão carotídeo. Esses aneurismas são
bastante diversificados e apesar de dinâmicos muitas vezes são silenciosos. Além disso, sua história
natural e seu comportamento biológico ainda são bastante desafiadores e incertos. Estudos
experimentais tem recentemente demonstrado que a morfologia (remodelamento vascular) e as
variações na hemodinâmica cerebral estariam envolvidos tanto na gênese bem como no
desenvolvimento e na eventual ruptura dos aneurismas intracranianos. Outrossim, estudos
populacionais tem evidenciado uma correlação entre a assimetria das artérias do polígono de Willis e o
aparecimento de aneurismas em várias localizações dentro do polígono de Willis. Contudo, estudos
específicos voltados para aos aneurismas localizados na circunferência do sifão carotídeo ainda não
foram abordados. A presente tese teve como principal objetivo caracterizar o papel das variantes
arteriais do círculo de Willis particularmente implicadas na gênese dos aneurismas da circunferência
do sifão da carótida. Ao mesmo tempo, foi realizada uma análise de regressão para superar o
desequilíbrio significativo entre homens e mulheres em relação a ambos: local do aneurisma e a
presença de variantes arteriais do polígono. As duas variantes anatômicas do polígono de Willis
consideradas no presente estudo foram a presença do segmento A1 dominante (Hipoplasia A1
contralateral) e a presença de artéria cerebral posterior (PCA) fetal. Realizamos um estudo casocontrole
em um dos centros franceses de referência, e que também é um centro de classe mundial
contendo cinco principais amostras: (1) Grupo 1, agrupando os aneurismas que se originam em algum
ponto da circunferência do sifão carotídeo unilateralmente (n = 178); (2) Grupo 2, contendo
aneurismas em algum ponto bilateralmente nos dois sifões carotídeos (n = 99); (3) Grupo 3, composto
de sifões sem aneurismas contralaterais do grupo A1 (n = 178); (4) Grupo 4, contendo sifões de
pacientes sem aneurismas (n = 210) e Grupo 5, controles combinados contendo os Grupos 3 e 4
(n=388). Em grupos equilibrados, a configuração tipo A1 do polígono de Willis parece ter um efeito
protetor na gênese dos aneurismas. A configuração do tipo A1 foi significativamente mais encontrada
no Grupo 3 (55/178) versus Grupo 1 (12/178) denotando provalvemente um efeito protetor no
aparecimento dos aneurismas na região do sifão carotídeo (p<0.0001, OR 0.1617). A presença da A1
dominante foi significantemente maior no grupo 3 do que no grupo 1, tanto no grupo de homens (1/24
versus 11/24, p=0.0070, OR 0.0514) quanto de mulheres (44/154 versus 1/154, p<0.001, OR 0.1923).
A associação incluindo ambas A1 dominante/ Fetal PCA foi encontrada apenas em 3/178 (1.6%)
pacientes do grupo 1 (3/178) e um total de 13/178 dos sifões do grupo 3 (p = 0.0189, OR 0.2176). O
novo conceito poderá ajudar na melhoria do screening e abrindo as portas para novas estratégias no
tratamento dos aneurismas do sifão carotídeo. Nesta análise, também evidenciou-se que um grupo
controle equilibrado pode reduzir o viés multivariado e, assim, melhorar as estimativas. Por
conseguinte, são necessárias mais investigações com dados multicêntricos com abordagens analíticas
melhoradas. Além disso, nessa tese discutimos sobre as biotecnologias aplicadas aos aneurismas
intracranianos, apresentamos uma abordagem clínica e uma revisão histórica sobre as técnicas de
tratamento dos aneurismas do sifão carotídeo, apresentamos as novas perspectivas sobre as variantes
anatômicas aplicadas aos aneurismas intracranianos e propusemos uma nova classificação morfológica
baseada nas áreas de susceptibilidade dos aneurismas do sifão carotídeo. Concluindo, o efeito protetor
da presença das variantes anatômicas arteriais com hiperfluxo suporta a hipótese do uso da
hemodinâmica cerebral como fator preditivo no desenvolvimento dos aneurismas intracranianos.
Estudos adicionais são necessários com a inclusão dessas novas ferramentas tecnológicas que
proporcionem acurácia nas medições de fluxo da circulação cerebral e dos aneurismas intracranianos
permitindo a utilização na prática clínica. / Despite the high success rates obtained with the new modifier flow stents in the treatment of
intracranial aneurysms that develop on the circumference of the carotid siphon. These aneurysms are
very diversified and despite being dynamic, often silent. Therefore, their natural history and biological
behavior remain controversial and little understood. Recent experimental studies have widely shown
the morphology (vascular remodeling) and variation in the cerebral hemodynamics would be involved
both in the genesis as well as in the development and eventual rupture of intracranial aneurysms. In
addition, population studies have shown a correlation between the asymmetry of arteries of the circle
of Willis and the genesis of aneurysms in several locations within the circle of Willis. However,
specific studies applied to the carotid siphon location has not yet been addressed. This thesis aimed to
examine the association of arterial variants of Circle of Willis particularly implicated in the genesis of
aneurysms within the circumference of the carotid siphon. At the same time, a regression analysis was
performed to overcome the significant imbalance between men and women as compared to both the
aneurysm site and the presence of arterial polygon variants. The two anatomical variants of the circle
of Willis studied were the presence of dominant A1 segment (contralateral hypoplasia A1) and the
presence of fetal-PCA. A case-control study was conducted derived from World-Class and French
University referral Center with five different samples: (1) Group 1, composed by aneurysms that
originate somewhere along the circumference of the carotid siphon unilaterally (n = 178); (2) Group 2,
containing aneurysms at some point bilaterally in the two carotid siphons (n= 99); (3) Group 3,
composed by contralateral healthy siphons of the group 1 (n = 178); (4) Group 4, containing siphons
from healthy patients (n = 210) and Group 5, containing the combined control groups 3 and 4 (n =
388). In balanced groups, Circle of Willis with A1 dominance appears to have a protective effect in the
genesis of carotid siphon aneurysms. The Willis polygon configuration with A1 dominance had a
significantly higher frequency in Group 3 (55/178) vs. Group 1 (12/178) denoting a protective effect
on the genesis of aneurysms in the carotid siphon region (p <0.0001, OR 0.1617). The presence of the
dominant A1 had a significantly increased protection of an aneurysm development compared with the
group of men (1/24 versus 11/24, p=0.0070, OR 0.0514) versus women (44/154 versus 1/154,
p<0.001, OR 0.1923). Both A1/Fetal PCA dominance were founded in 3/178 (1.6%) patients of the
group with a unilateral aneurysm (3/178) and 13/178 of the contralateral healthy siphons (p = 0.0189,
OR 0.2176). The Willis polygon configuration with A1 dominance and PCA fetal variant may prevent
the carotid siphon aneurysm development. The new concept might help in improvement f the
screening and open the door for new strategies in the treatment of carotid siphon aneurysms. This
analysis also showed that a balanced control group multivariate can reduce the bias, and thus
improving the estimates. Therefore, more investigations are needed multicenter data with improved
analytical approaches. In addition, this thesis contains chapters about the biotechnology applied to the
intracranial aneurysms, the current approach and a historical review of endovascular techniques for the
carotid siphon aneurysms, the new perspectives of use of cerebral hemodynamic applied to intracranial
aneurysms and the proposal of a new morphological classification based on the areas susceptibility to
carotid siphon aneurysms. Briefly, the protective effect of the presence of arterial anatomical variants
supports the hypothesis of the use of cerebral hemodynamics as a predicting factor in the development
of intracranial aneurysms. Additional experimental studies with the further accurate flow
measurements of cerebral circulation with and without intracranial aneurysms then allowing the
application of this new concept used in the clinical practice.
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Bioprospecção de actinobactérias endofíticas de folhas de Moiringa oleifera Lam. em três localidades do Estado de Pernambuco e avaliação dos metabólitos secundários produzidos por esses micro-organismosSOUZA, Igor Felipe Andrade Costa de 26 February 2016 (has links)
Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-07-13T16:44:02Z
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Previous issue date: 2016-02-26 / CNPQ / Moringa oleifera Lamarck é uma planta pertencente à Família das Moringaceae, caracterizada como uma planta arbórea. Os vegetais possuem uma microbiota característica que tem importância para a sua sanidade e manutenção. Sendo esses micro-organismos denominados de endofíticos. Destaca-se a presença das actinobactérias, como produtores de metabólitos bioativos. O presente trabalho teve por objetivo a bioprospecção, através do isolamento, da identificação e da avaliação de actinobactérias endofíticas isoladas de folhas da M. oleifera. As folhas foram coletadas no campus Recife da Universidade Federal de Pernambuco, no Jardim Botânico do Recife do Recife e na cidade de Caruaru no Estado de Pernambuco, Brasil. Sendo processadas no prazo de 24 horas, através da metodologia de desinfecção. O isolamento foi realizado por maceração. A observação macroscópica foi realizada através da observação de características das colônias. A caracterização micromorfológica foi realizada através da técnica de microcultivo em placa. Testes fenotípicos para classificação taxonômica foram realizados. A análise do potencial de produção de metabólitos com atividade antimicrobiana foi realizada através de uma seleção primária em meio sólido, pela técnica do ―Teste em Bloco de Gelose‖. A actinobactéria endofítica selecionada no ensaio primário como melhor produtora do composto bioativo, foi cultivada em meios líquidos e testada contra micro-organismos testes. A Atividade antimicrobiana durante a fermentação foi avaliada através do teste de Difusão em Ágar. Foram isolados 33 actinobactérias endofíticas, sendo 21 (63,6%) linhagens provenientes das folhas coletadas da M. oleifera no Jardim Botânico do Recife; 8 (24,2%), no campus Recife da UFPE; e 4 (12,2%), na Cidade de Caruaru. A análise macroscópica verificou-se que não houve diversidade em relação aos aspectos observados. A análise microscópica permitiu inferir que em apenas 13 (39,4%) isolados foi possível determinar o gênero, sendo eles: Streptomyces e Actinomadura. Os ensaios fenotípicos foram inconclusivo diante da diversidade de gêneros pertencentes ao Filo Actinobacteria. Das 33 actinobactérias, 21(62,6%) apresentaram atividade inibitória sobre o fungo filamentoso. Apenas 5(15,2%) isolados apresentaram atividade sobre os micro-organismos testes Gram-negativos. Os micro-organismos testes Gram-positivos foram bastante sensíveis quando do teste de inibição, apresentando halos médio de até 35mm. A ação sobre o Mycobaterium smegmatis foi observada em representantes de todos os grupos isolados. Sobre as leveduras, observa-se que 5(12,2%) actinobactérias endofíticas apresentaram atividade insignificante frente a esses micro-organismos testes. No ensaio primário, não houve produção de compostos bioativos nos meios de cultivo: ISP-1, ISP-4, Meio Khanna, ALA, AVP, BDA, CAA, GAA, YCED, pelo Strptomyces sp. CC4. Através da análise estatística, observou-se que os meios K e MPE são os melhores estatisticamente. Durante o processo de extração do principio ativo, observou-se que este encontra-se na biomassa, sendo o metanol o melhor solvente extrator. A análise qualitativa da atividade antimicrobiana demonstrou que as actinobactérias isoladas das folhas de M. oleifera possuem potencial biotecnológico na produção de compostos bioativos com ação farmacológica. / Moringa oleifera Lamarck is a plant belonging to the family of Moringaceae characterized as a woody plant. Plants have a characteristic microbiota that is important for your health and maintenance. And these micro-organisms called endophytes. There is the presence of actinomycetes as producers of bioactive metabolites. This study aimed to bioprospecting, through the isolation, identification and evaluation of endophytic actinomycetes isolated from leaves of M. oleifera. The leaves were collected in Recife campus of the Federal University of Pernambuco, in the Botanical Garden of Recife Recife and the city of Caruaru in Pernambuco State, Brazil. Being processed within 24 hours methodology by disinfection. The isolation was carried out by maceration. Macroscopic observation was performed by observing the characteristics of the colonies. The micromorphological characterization was performed by microculture plate technique. phenotypic tests for taxonomic classification were performed. The analysis of metabolites with antimicrobial activity production potential was performed by a primary selection in solid medium, the technique of "Test agar block." The endophytic actinobacteria selected in the primary test as the best producer of the bioactive compound, was cultured in liquid media and tested against microorganisms tests. The antimicrobial activity during fermentation was evaluated using the diffusion test in agar. 33 endophytic actinomycetes were isolated, 21 (63.6%) strains collected from the leaves of M. oleifera in the Botanical Garden of Recife; 8 (24.2%) in Recife UFPE campus; and 4 (12.2%) in the city of Caruaru. Macroscopic analysis showed that there was no diversity with respect to observed aspects. Microscopic analysis allowed to infer that in only 13(39.4%) isolates were unable to determine the genre, namely: Streptomyces and Actinomadura. Phenotypic tests were inconclusive given the diversity of genres belonging to the phylum Actinobacteria. Of the 33 actinomycetes, 21(62.6%) had inhibitory activity against the filamentous fungus. Only 5(15.2%) isolates showed activity against microorganisms Gram-negative tests. Microorganisms Gram-positive tests were sensitive enough when the inhibition test, showing halos average of up to 35mm. Action on Mycobacterium smegmatis was observed in representatives of all isolated groups. On the yeast, it is observed that 5(12.2%) endophytic actinomycetes showed negligible activity against these microorganisms tests. In the primary test, there was no production of bioactive compounds in culture media: ISP-1, ISP-4, Khanna, ALA, AVP, BDA, CAA, GAA, YCED by Streptomyces sp. CC4. The statistical analysis showed that media K and MPE are the best statistically. During the extraction process the active ingredient, it was observed that this is the biomass, methanol being the best extraction solvent. Qualitative analysis of antimicrobial activity showed that the isolated actinomycetes of M. oleifera leaves have biotechnological potential in the production of bioactive compounds with pharmacological action.
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Avaliação de atividades biológicas de membrana e gel da galactomanana extraída das sementes de Cassia grandis com biomoléculas imobilizadasALBUQUERQUE, Priscilla Barbosa Sales de 20 February 2017 (has links)
Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-07-25T20:22:50Z
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Previous issue date: 2017-02-20 / FACEPE / A galactomanana extraída das sementes de C. grandis representa uma fonte alternativa para galactomananas principalmente devido à sua capacidade de atuar como líquido ou como gel. O presente trabalho teve por objetivo a caracterização de géis e membranas obtidas a partir da galactomanana extraída das sementes de C. grandis, com ou sem biomoléculas imobilizadas (lectina extraída das sementes de Cratylia mollis – Cramoll, lactoferrina, peptídeos bioativos, fitoesteróis e nanopartículas de lecitina com quercetina incorporada), através de análises reológicas, físico-químicas e mecânicas, além da avaliação das ações citotóxica e cicatrizante destes produtos. A galactomanana foi extraída por precipitação com etanol, enquanto a Cramoll foi obtida por precipitação salina seguida por cromatografia de afinidade em Sephadex G-75. As nanopartículas de lecitina contendo quercetina foram caracterizadas através da medição de diâmetro das partículas, grau de polidispersão, estabilidade e potencial zeta. Os géis de galactomanana (1,7 % p/v), sem e com Cramoll imobilizada por enclausuramento, tiveram sua estabilidade avaliada ao longo do tempo por reometria, pH, cor, avaliação microbiana e atividade hemaglutinante. O efeito da concentração de diferentes biomoléculas imobilizadas nas propriedades físico-químicas das membranas de galactomanana (0,8 % p/v) foi avaliado através de MEV, FTIR, propriedades mecânicas e térmicas, cor, conteúdo de água, solubilidade, permeabilidade ao vapor de água e ângulo de contato. As atividades citotóxica e cicatrizante das membranas com Cramoll imobilizada foram avaliadas em cultura de fibroblastos e em ratos machos, respectivamente. Os resultados revelaram que ambos os géis, sem e com Cramoll imobilizada, demonstraram transparência, estabilidade até 30 dias, não apresentaram contaminação microbiana e mantiveram o pH próximo da neutralidade, no entanto, as análises reológicas mostraram que o gel com Cramoll imobilizada perdeu substancialmente o seu módulo elástico após 60 dias. Todas as nanopartículas de lecitina contendo quercetina (25-150 μg/mL) apresentaram potencial zeta semelhante (-47,14). Nanopartículas de lecitina contendo até 50 μg/mL de quercetina apresentaram estabilidade e tamanho de partícula menores quando comparadas àquelas com 75 a 150 μg/mL de quercetina incorporada; estas apresentaram sinais de precipitação após 48 horas. Lactoferrina, peptídeos bioativos, fitoesteróis e nanopartículas de lecitina contendo quercetina, quando imobilizadas em membranas de galactomanana, levaram à produção de membranas com alta luminosidade e tendência ao amarelo, além de apresentarem maior rigidez, rugosidade e características físicas mais hidrofílicas que as membranas sem biomoléculas. A avaliação in vivo da atividade cicatrizante das membranas de galactomanana sem e com Cramoll imobilizada revelou uma efetiva regeneração tecidual em feridas tópicas produzidas em ratos machos, no entanto, as membranas com Cramoll imobilizada foram significativamente mais eficientes, promovendo a completa contração das feridas em apenas 11 dias. Em conclusão, os resultados obtidos sugerem que a galactomanana extraída das sementes de C. grandis é uma promissora matriz para a imobilização de biomoléculas, principalmente no que se refere à utilização de suas suspensões em membranas e géis úteis para as indústrias farmacêutica, cosmética e alimentícia. / The galactomannan extracted from the seeds of C. grandis represents an alternative source for galactomannans mainly due to its ability to act as a liquid or as a gel, suggesting that, due to its rheological properties, it can be used in different biotechnological applications, such as an effective support for immobilization of biomolecules. The present study aimed the characterization of gels and membranes prepared from the galactomannan extracted from C. grandis seeds with and without immobilized biomolecules (lectin extracted from the seeds of Cratylia mollis - Cramoll, lactoferrin, bioactive peptides, phytosterols and nanoparticles of lecithin with incorporated quercetin) through rheological, physicochemical and mechanical analysis, as well as the evaluation of cytotoxic and healing activities of the above mentioned matrices. The galactomannan was extracted by ethanol precipitation, while Cramoll was obtained by salt precipitation followed by affinity chromatography on Sephadex G-75. Lecithin nanoparticles containing quercetin were characterized by measurement the diameter of the particles, degree of polydispersity, stability and zeta potential. Galactomannan gels (1.7 %, w/v), with and without immobilized Cramoll, were evaluated along time by rheometry, pH, colour, microbial contamination and lectin hemagglutinating activity. MEV, FTIR, mechanical and thermal properties, colour, water content, solubility, water vapour permeability and contact angle were performed to evaluate the effect of the concentration of different on the physicochemical properties of galactomannan membranes (0.8 %, w/v). In addition, the cytotoxic and healing activities of membranes with immobilized Cramoll were evaluated in culture of fibroblasts and in male rats, respectively. The results showed that both gels, with and without immobilized lectin, demonstrated transparency, were stable up to 30 days, presented no microbial contamination as well as a pH close to neutral, however, rheological data showed that the gel with immobilized lectin loses its elastic modulus substantially after 60 days. All of the lecithin nanoparticles containing quercetin (25-150 μg/mL) showed similar zeta potential (-47.14). Lecithin nanoparticles containing up to 50 μg/mL of quercetin showed stability and particles size smaller when compared to those with 75 to 150 μg/mL of incorporated quercetin; the last one concentrations showed signs of precipitation after 48 hours of analysis. Lactoferrin, bioactive peptides, phytosterols and lecithin nanoparticles with incorporated quercetin, when immobilized on galactomannan membranes, lead to membranes with a strong whiteness tendency as well as a yellowish appearance, roughness on their surface and physical characteristics more hydrophilic than membranes without biomolecules (control). In vivo healing activity evaluation of the galactomannan membranes with and without immobilized Cramoll improved tissue regeneration on topical wounds of male rats; however, membranes with immobilized lectin were significantly better, promoting complete wounds´ contraction only in 11 days. In conclusion, the obtained results suggest the galactomannan extracted from C. grandis as a promising matrix for immobilization of biomolecules, mainly due to the use of their suspensions in membranes and gels useful for pharmaceutical, cosmetic and food industries.
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Desenvolvimento de imunossensor impedimétrico para fosfatase alcalina visando a avaliação de doenças coronarianasSIMÃO, Estefani Pontes 23 February 2017 (has links)
Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-08-06T19:36:02Z
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Previous issue date: 2017-02-23 / CAPES / A fosfatase alcalina (ALP) é uma enzima utilizada clinicamente como indicador de algumas patologias como a osteomalácia, doença de Paget, tumores, doenças coronarianas. ALP tem um importante papel nos processos de calcificação no organismo humano, tendo em vista que ela auxilia a mineralização óssea com a deposição de cálcio e na formação dos cristais de hidroxiapatita. No presente estudo foi possível desenvolver um imunossensor impedimétrico na detecção da fosfatase alcalina sorológica em pacientes portadores de doenças coronarianas. O imunossensor foi obtido pela adsorção de cisteína (Cys) sobre a superfície do eletrodo de trabalho seguida da imobilização de nanotubos de carbono decorados com nanopartículas de ouro modificadas com cisteamina (AuCNT-cisteamina) via 1-[3-(dimetilamino) propil]-3-etilcarbodiimida (EDC) e N-hidroxissuccinimida (NHS) utilizado como elementos ativadores. Em seguida, o anticorpo anti-fosfatase alcalina (AntiALP) foi imobilizado, obtendo-se o sensor Cys- AuCNT-cisteamina-AntiALP. Para caracterização de cada etapa de desenvolvimento do imunossensor e avaliação de seu reconhecimento específico foram utilizadas as técnicas de voltametria cíclica (VC) e espectroscopia de impedância eletroquímica (EIE). Em adição, a microscopia de força atômica (AFM) possibilitou a análise topográfica do sistema. Devido às propriedades físico-químicas e biocompatibilidade dos nanomateriais avaliados foi possível obter uma plataforma nanoestruturada biocompatível com amplificação da área superficial e eficiente atividade eletroquímica. A interação do imunossensor com diferentes concentrações de ALP resultou em alterações nos valores das correntes de pico (anódicas e catódicas) e de resistência à transferência de carga (RCT), indicando o processo de bioreconhecimento com o antígeno. O imunossensor apresentou elevada sensibilidade, seletividade e uma faixa de detecção de 0.5 a 600 UI/L de ALP, além de demonstrar sensibilidade para a biodetecção em amostras sorológicas de pacientes ateromatosos. O biossensor desenvolvido foi capaz de detectar diferentes concentrações de ALP, superando os métodos analíticos convencionais para dosagem dessa enzima. O imunossensor desenvolvido apresentou uma boa sensibilidade e especificidade para a dosagem da ALP, podendo ser aplicado no monitoramento de pacientes portadores de doenças coronarianas. / Alkaline phosphatase (ALP) is an enzyme used clinically as an indicator of some pathologies such as osteomalacia, Paget's disease, tumors, coronary diseases. ALP has an important role in the processes of calcification in the human organism, since it aids bone mineralization with the deposition of calcium and in the formation of the crystals of hydroxyapatite. In the present study, it was possible to develop an impedimetric immunosensor in the detection of serum alkaline phosphatase in patients with coronary diseases. The immunosensor was obtained by the adsorption of cysteine (Cys) on the surface of the working electrode followed by the immobilization of carbon nanotubes decorated with cysteamine-modified gold nanoparticles (AuCNT-cysteamine) via 1- [3- (dimethylamino) propyl] - 3-ethylcarbodiimide (EDC) and N-hydroxysuccinimide (NHS) used as activator elements. Then, the anti-alkaline phosphatase antibody (AntiALP) was immobilized, obtaining the Cys-AuCNT-cysteamine-AntiALP sensor. For characterization of each step of development of the immunosensor and evaluation of its specific recognition, the techniques of cyclic voltammetry (VC) and electrochemical impedance spectroscopy (EIS) were used. In addition, the atomic force microscopy (AFM) made possible the topographic analysis of the system. Due to the physico-chemical properties and biocompatibility of the evaluated nanomaterials, it was possible to obtain a biocompatible nanostructured platform with surface area amplification and efficient electrochemical activity. The interaction of the immunosensor with different concentrations of ALP resulted in alterations in the values of the peak currents (anodic and cathodic) and resistance to the transfer of charge (RCT), indicating the bioreacquisition process with the antigen. The immunosensor showed high sensitivity, selectivity and a detection range of 0.5 to 600 IU / L of ALP, besides demonstrating sensitivity for the biosensing in serological samples of atheromatous patients. The developed biosensor was able to detect different concentrations of ALP, surpassing the conventional analytical methods for the determination of this enzyme. The developed immunosensor presented a good sensitivity and specificity for the dosage of ALP, and it can be applied in the monitoring of patients with coronary diseases.
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Comparação da hidrólise enzimática de papel de escritório com pré-tratamento químico e pré-tratamento físicoMOTA, Helloise Gabrielle da 27 March 2015 (has links)
Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-08-28T21:17:34Z
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Previous issue date: 2015-03-27 / CAPES / No Brasil, o descarte de papel representa cerca de 40% do total de dejetos sólidos municipais. Visto que boa parte desses resíduos não é reciclada, e que a composição do papel contém mais de 60% de carboidratos, o papel apresenta um forte potencial para a produção de açúcares. O objetivo deste trabalho foi comparar a hidrólise enzimática de papel de escritório descartado, após pré-tratamento químico (com ácido sulfúrico 1% V/V; 50 rpm) com a hidrólise realizada
após pré-tratamento físico, no qual o papel foi processado em moinho de facas a 10 mesh. Para tal estudo, foi aplicado um planejamento fatorial 2⁴, cujos fatores e níveis inferior e superior foram, respectivamente: tempo da hidrólise (24 e 72 h); carga enzimática (15 e 30 FPU/g celulose); carga de papel (4,5 e 7,5% m/V); e pré-tratamento (químico ou físico). Todas as hidrólises foram realizadas a 50ºC e 150rpm, utilizando as enzimas comerciais Celluclast 1.5L e β-glucosidase Novozymes. As concentrações de celobiose e glicose foram determinadas por meio de cromatografia líquida de alta eficiência e a análise do planejamento pelo software Statistica 7.0. O material foi caracterizado por meio das técnicas de espectroscopia de infravermelho com transformada de Fourier (Fourier Transmission Infrared – FTIR) e Difração de raios X (DRX). Análises estatísticas mostraram melhores resultados para o planejamento cujo material foi quimicamente pré-tratado, atingindo concentração de glicose de cerca de 25 g/L para o processo com 53,5 horas de duração, com carga enzimática igual a 20,8 FPU/g de substrato e 9% de carga de papel. / In Brazil, paper disposal represents about 40% of all municipal solid waste. Since much of this waste is not recycled, and that more than 60% of waste paper is composed by carbohydrates, the paper has great potential for the production of sugars. The objective of this study was to compare the enzymatic hydrolysis of office paper discarded after chemical pretreatment (with sulfuric acid 1% V/V, 50 rpm) with the hydrolysis performed after physical pretreatment, in which the paper was processed in mill to 10 mesh. For this study, an experimental design was applied, whose factors and lower and upper levels were: time of hydrolysis (24 and 72 h); enzyme loading (15 and 30 FPU/g cellulose); paper loading (4.5 and 7.5% w/v); and pre-treatment (chemical or physical). All hydrolyses processes were carried out at 50 °C and 150 rpm using commercial enzymes Celluclast 1.5L and β-glucosidase Novozymes. Concentrations of cellobiose and glucose were determined by high performance liquid chromatography analysis and the experimental design was analysed using the Statistica 7.0. The material was characterized by Fourier transform techniques (Fourier Infrared Transmission - FTIR) and X-ray diffraction (XRD). Statistical analysis showed better results for the material of which has been chemically pretreated, reaching glucose concentration of about 25 g/L to process during 53.5 hours, with enzyme loading of 20.8 FPU/g of substrate and paper loading of 9%.
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Produção de lipases por culturas de Trichosporon da Micoteca URM: seleção, produção, purificação e aplicação enzimáticaSOUZA, Odacy Camilo de 30 June 2015 (has links)
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Previous issue date: 2015-06-30 / CAPES / Trichosporon são leveduras pertencentes ao filo Basidiomycota, que se destacam na produção de lipases, dentre outras enzimas. Os objetivos deste estudo foram Selecionar, culturas de Trichosporon mantidas na Micoteca URM, quanto à produção de lipases, através de avaliação qualitativa e quantitativa, otimizar a produção da enzima, caracterizar, pré-purificar e aplicar avaliando a capacidade de degradar efluentes de abatedouros de bovinos. Foram realizadas a reativação e autenticação das culturas através das características morfofisiológicas. Para degradação do meio rico em lipídeos, foram retirados fragmentos das culturas mantidas em SYE contidos em tubo de ensaio e transferidos para o centro da placa de Petri contendo o mesmo meio. Após sete dias de crescimento, fragmentos da cultura foram transferidos para o centro da placa de Petri com meio de cultura. As culturas foram incubadas a 28ºC e 37ºC, observadas durante 24, 48, 72 e 96 horas, para evidenciar a presença de halo opaco ao redor da colônia. Para determinação da capacidade lipolítica em fermentação submersa O experimento foi realizado utilizando Erlenmeyers de 250 mL contendo 50mL dos seguintes meios; I composto por 1% (v/v) de óleo de oliva, meio II contendo 1% (v/v) de óleo de mamona, e meio III composto por 1% (v/v) de óleo de licuri, adicionados de 0,5% (p/v) extrato de levedura e pH ajustado para 6,5. Esterilizados e inoculados e incubados a 160 rpm a 37ºC por 96 horas. Foi utilizado o método espectrofotométrico para determinar a atividade da lipase. Otimização do meio de produção de lipases por estatística de aproximação, o meio foi preparado utilizando diferentes concentrações de nutrientes testados de acordo com os experimentos do planejamento estatístico. Os inóculos foram adicionados a cada 50 mL de meio em Erlenmeyer de 250 mL de acordo com a concepção da matriz. Os frascos foram incubados por até cinco dias em diferentes temperaturas, sob agitação em diferentes rotações. Identificação e seleção das variáveis significativas para a produção de lipases foi realizada com base no design PB. Foram testados 11 variáveis. Para a Metodologia de superfície de resposta foram usadas as variáveis selecionadas para maior produção de lipase. Para caracterização enzimática foi avaliado o efeito e a estabilidade do pH, temperatura, íons, solventes e detergentes sobre a atividade enzimática. Na purificação foi utilizado o sistema de duas fases aquosas, com planejamento estatístico 2³, assim como a aplicação do estrato bruto. Em meio sólido, todas as culturas apresentaram crescimento, sem presença de halo de degradação, em cultivo submerso, todas as culturas apresentaram atividade. Trichosporon sporotrichoides URM 6630, produziu 104,07 UmL. O melhor pH e temperatura para produção da enzima foram pH 10.0 e 40 ˚C. A purificação teve coeficiente de partição 76 e recuperação da atividade 164,71%, e o fator de purificação de 0,96. Para a aplicação a melhor de taxa de degradação foi obtida com a menor concentração do extrato bruto. Primeiro relato de produção de lipases por essa espécie, e da utilização de óleo de licuri como substrato. Este micro-organismo torna-se bastante promissor para a produção de lipases produz altos níveis destas enzimas, em condições que minimizando os custos da produção. / Trichosporon yeasts are belonging to the phylum Basidiomycota, they are highlighted in lipase activity among other enzymes. The objectives of this study were to select, Trichosporon cultures kept in the URM Culture Collection, as lipase production, optimize production of the enzyme, characterize, purify and apply evaluating the ability to degrade cattle slaughterhouses wastewater. They were held reactivation and authentication of cultures through the morphological and physiological characteristics. Degradation of the lipase fragments were removed from cultures maintained in SYE contained in a test tube and transferred to the center of the petri dish containing said medium. After seven days of growth, the culture pieces were transferred to the center of the petri dish with culture medium. Cultures were incubated at 28 ° C and 37 ° C, observed for 24, 48, 72 and 96 hours, demonstrating an opaque halo around the colony. To determine the lipolytic capacity in submerged fermentation The experiment was conducted using 250 mL Erlenmeyer flasks containing 50ml of the following means; I consists of 1% (v / v) olive oil, medium II containing 1% (v / v) castor oil, and medium III consists of 1% (v / v) licuri oil added 0 5% (w / v) yeast extract and pH adjusted to 6.5. Sterilized and inoculated and incubated at 160 rpm at 37 ° C for 96 hours. The spectrophotometric method was used to determine the lipase activity. Optimization of lipase production medium by statistical approach, the medium was prepared using different concentrations of nutrients tested according to the statistical design of experiments. The inocula were added to each 50 ml of medium in 250 ml Erlenmeyer according to the design of the array. The flasks were incubated for five days at different temperatures under stirring at different speeds. Identification and selection of the variables significant for lipase production was based on the design PB. 11 variables were tested. For response surface methodology were used the variables selected for increased production of lipase. For enzyme characterization, the effects and stability on pH, temperature, ions, solvents and detergents on the enzymatic activity. Purification was used in the aqueous two-phase system with statistical design 2³, as well as the application of the crude stratum. In a solid medium, all cultures grew without the presence of degradation halo, in submerged cultures, all cultures showed activity. Trichosporon sporotrichoides URM 6630, produced 104.07 UML. The best pH and temperature for enzyme production were pH 10.0 and 40 ° C. Purification was 76 and partition coefficient 164.71% activity recovery, and purification factor of 0.96. To implement the best degradation rate was obtained with the lowest concentration of the crude extract. First report of lipase production by this species, and use of licuri oil as substrate. This micro-organism becomes quite promising for lipase production produces high levels of these enzymes under conditions which minimize production.
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Avaliação da incorporação de água exógena em suco de uva elaborado por diferentes processosMarcon, Ângela Rossi 12 August 2013 (has links)
Os sucos de uva podem ser elaborados por diferentes processos, entre eles destacam-se as panelas extratoras por arraste de vapor que são utilizadas principalmente por agroindústrias e pequenos produtores. Estes sucos são de excelente qualidade, porém têm gerado discussões em relação a não concessão ou renovação do registro desses produtos pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), que alega a possibilidade de incorporação de água proveniente do vapor que é utilizado para extração do suco. Por esta razão e para que estes sucos continuem sendo uma fonte de renda para as agroindústrias e pequenos produtores e sejam bem aceitos no mercado, torna-se necessário o conhecimento aprofundado das características e da composição dos mesmos. Neste trabalho foram estudados uvas e sucos das variedades Isabel, Bordô e Concord, durante as safras de 2011 e 2012, elaborados através de trocador de calor, panelas extratoras e panelas extratoras com adaptação, com o objetivo de determinar a quantidade de água incorporada e os teores de resveratrol e compostos fenólicos totais dos sucos de uva produzidos por estes processos. Realizou-se análise da razão isotópica do oxigênio (18O/16O) e razão isotópica de carbono (13C/12C) através de espectrometria de massa, resveratrol por cromatografia líquida e análises físico-químicas clássicas conforme metodologias oficiais do MAPA. Os resultados deste estudo mostraram que nos sucos elaborados por trocador de calor não ocorreu incorporação de água. Os sucos de panela extratora apresentaram uma incorporação de água média de 16% enquanto que os sucos elaborados por panela extratora adaptada a um sistema de extração de vapor foi de 6%, quando comparados ao °Brix. Levando-se em consideração a razão isotópica do oxigênio não foi possível determinar a porcentagem de água incorporada, devido ao fracionamento isotópico que ocorre no aquecimento das uvas durante o processo. Os sucos elaborados com a cultivar Bordô apresentaram maior concentração de resveratrol e compostos fenólicos totais quando comparados ao suco da cultivar Isabel. Os teores de resveratrol dos sucos elaborados com panela extratora são significativamente mais elevados que os sucos elaborados com trocador de calor para as duas variedades estudadas. O suco elaborado através das panelas extratoras, mesmo com uma pequena incorporação de água, é um suco de qualidade e a extração de compostos fenólicos e resveratrol é significativa. / The grape juice can be produced by process diferents, between them stands the cookers extractors by drag that are used principaly for agroindustry and small producers. This juices are of excellent quality, however it has generated discussion about not granting or renewal of registration of these products by the Ministerio of Agriculture, Livestock and Agribusiness (MAPA), it claims the possibility of incorporating water from the steam that is used for juice extraction. For this reason and for these juices remain a source of income for small farmers and agroindustry and are well accepted in the market it becomes necessary in-depth knowledge of the characteristics and composition. In this work were studied grapes and juices of varieties Isabel, Bordô and Concord, from the harvest of 2011 and 2012, obtained by heat exchanger, cookers extractor and cookers extractor with adaptation in order to determine the amount of water incorporated and the levels of resveratrol and phenolic compounds of grape juice produced by these processes. Analysis was performed using the oxygen isotope ratio (18O/16O) and carbon isotope ratio (13C/12C) by mass spectrometry, resveratrol by liquid chromatography and physicochemical analyzes classical by methodology as official MAPA. The results of this study showed that the juices produced by the heat exchanger was not water incorporation. Juices in cooker extractor had a water incorporation by 16% while the juices made with cooker extractor adapted to a vapor extraction system was 6%, compared to the ° Brix. Taking into account the isotopic ratio of oxygen was not possible to determine the percentage of water incorporated due to isotopic fractionation that occurs in grapes during the heating process. Juices prepared with cultivar Bordô showed higher resveratrol and total phenolic compounds compared to the juice of cultivar Isabel. The levels of resveratrol of juices made with cookers extractor are significantly higher than juices made with heat exchanger for the two varieties. The juice produced by cookers extractor even with a small addition of water, is a juice quality and the extraction of phenolic compounds and resveratrol is quite significant.
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Detecção e caracterização bioquímica e molecular de Bacillus Cereus em grãosReis, Valquíria Boff Martelo 14 December 2012 (has links)
O Bacillus cereus é um microrganismo com ampla distribuição na natureza estando
presente no solo, poeira e água, sendo caracterizado pela formação de esporos, possui
potencial patogênico e deteriorante. Em condições favoráveis, esse microrganismo produz
enzimas que confere características sensoriais indesejáveis e produz toxinas numa grande
variedade de alimentos, principalmente em cereais e derivados. Estas toxinas produzidas
são responsáveis pela ocorrência de intoxicação alimentar. Desta forma, o presente
trabalho tem como objetivo avaliar a presença de B. cereus de cereais destinados a
produção de alimentos farináceos, realizar o isolamento destas bactérias quando presentes
nas amostras testadas e avaliar a presença de genes relacionados aos fatores de virulência
nestes isolados. Para tanto foram avaliadas 130 amostras de cereais obtidos de uma
empresa processadora de grãos, sendo que deste total, 54 isolados apresentaram
positividade para B. cereus. Foram realizados os testes bioquímicos de motilidade,
hemolisina, decomposição da tirosina, redução do nitrato a nitrito, crescimento rizóide e
corpúsculos de inclusão cristalina, para confirmação dos isolados. Dos 54 isolados, 5
foram reclassificados como Bacillus thuringiensis e 2 como Bacillus megaterium. Quanto
a caracterização molecular, todos os isolados foram submetidos a análise de PCR por
BOX, REP e ERIC – PCR, visto que nenhuma das técnicas apresentou diferença
significativa quanto a separação do B. cereus. Os isolados foram avaliados quanto aos
fatores patogênicos para os genes Bcet, Piplc, NheB, EntB, HbA e Sph, onde o grupo do
arroz foi o que apresentou maior número de genes positivos. Do total dos isolados
avaliados, os genes HblA e NheB foram os que apresentaram maiores números de isolados
positivos. Os dados obtidos nesse trabalho evidenciaram que os genes de patogenicidade
de B. cereus estão amplamente distribuídos entre os grupos que contaminam os cereais e
derivados. / The Bacillus cereus is an organism widely distributed in nature and is present in soil, dust
and water. This bacterium is characterized by spores formation and food deteriorating and
pathogenic potential. Under favorable conditions, this microorganism produces enzymes
that confer undesirable sensory characteristics and toxins in a wide variety of foods,
mainly in cereals and derivatives. These toxins produced are responsible for the
occurrence of food poisoning. This study aims to evaluate the presence and isolate of B.
cereus on grains for the production of food starches, as well the evaluate the presence of
genes related to virulence factors on these isolates. Therefore, it was evaluated 130
samples obtained from a cereal grain processing company, 54 isolates were positive for B.
cereus. Biochemical tests were realized for motility, haemolysin, tyrosine decomposition,
reduction of nitrate to nitrite, type of growth and corpuscles crystalline inclusion. Seven
samples of 54 isolates were reclassified as 5 B. thuringiensis and 2 B. megaterium. As the
molecular characterization, all isolates were analyzed by PCR BOX, REP and ERIC -
PCR, whereas none of the techniques presented significant difference separating B. cereus.
The isolates were also evaluated for presence of pathogenic factors genes Bcet, PIPLC,
NheB, EntB, HbA and Sph, where the group from rice isolates showed the highest number
of positive genes. The HblA and NheB genes were the most prevalence on the isolates. The
data obtained in this study showed that genes for pathogenicity of B. cereus are widely
distributed among the groups that contaminate cereals and derivatives.
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Produção de celulases e xilanases por Penicillium echinulatum para hidrólise enzimática de capim-elefante (Pennisetum purpureum, Schum.)Menegol, Daiane 28 September 2012 (has links)
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico
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Desenvolvimento de workflows científicos para a geração e análise de diferentes redes de interatomasNotari, Daniel Luís 12 December 2012 (has links)
Workflows científicos são projetados para realizar experimentos in silico com o
intuito de processar e analisar uma grande quantidade de dados usando simulação
computacional. Os experimentos são organizados como uma sequência de etapas que
caracterizam um fluxo de execução, onde em cada etapa utilizam-se diferentes
softwares. Estes softwares não possuem um modelo de representação de dados comum.
Por isto, quando um workflow científico é construído com o objetivo de integrar e
processar dados, cada etapa precisa analisar a estrutura dos dados, processá-los e
preparar os mesmos de acordo com a estrutura necessária para a execução da próxima
etapa do workflow. Desta maneira, os workflows científicos usam diferentes algoritmos
provenientes das áreas da matemática e da ciência da computação, os quais são capazes
de processar, armazenar e transformar os dados utilizados em informação útil para
diferentes análises de pesquisadores de biologia. Adicionalmente, a biologia de sistemas
é uma subárea da bioinformática que ajuda a compreender as interações observadas
entre populações de moléculas, células e organismos resultantes do aumento da
complexidade biológica. Assim, nesta tese de doutorado, buscou-se desenvolver
workflows científicos utilizando-se ferramentas de bioinformática e biologia de sistemas
para comparar processos biológicos através da geração de redes de interação proteínaproteína.
Para tanto, o programa Dis2PPI foi gerado por meio de um workflow científico
que possibilitou integrar os bancos de dados de doenças monogênicas OMIM (Online
Mendelian Inheritance in Man) com o programa de metabuscas STRING (Search Tool
for the Retrieval of Interacting Genes/Proteins). O objetivo desta integração foi gerar
uma rede de interação proteína-proteína associada com doenças de natureza
monogênica. Como prova de conceito, o programa Dis2PPI foi utilizado para a
obtenção de redes de interação para as síndromes xeroderma pigmentosa e de Cockayne, duas doenças monogênicas raras e cujos fenótipos estão associados com
acúmulos de danos de DNA, câncer, progeria e neurodegeneração. Uma vez geradas,
estas redes foram avaliadas com o uso ferramentas de biologia de sistemas para análise
de ontologia gênica e de centralidade no programa Cytoscape. Da mesma forma, o
programa Net2Homology foi gerado através de um desenho de um workflow científico
que possibilitasse integrar o resultado de um alinhamento de sequências de proteínas,
usando o programa NCBI PSI-BLAST, com o programa de metabuscas STRING. Neste
sentido, o programa Net2Homology possibilitou recuperar duas redes de interação
proteína-proteína associada a dois organismos diferentes. Este mesmo programa foi
utilizado para a obtenção de redes de interação para a doença xeroderma pigmentosa e
para a enzima ciclo-oxigenase-1 cruzando as informações dos organismos Homo
sapiens e Mus musculus. As redes de interação obtidas foram comparadas visando obter
os processos biológicos evolutivamente conservados. / Scientific workflows can be used to design in silico experiments to process and
analyse a great amount of data using computational simulation. In this sense, all in
silico experiments are organized as a sequence of steps that characterize an execution
flow, where each steps employ different softwares. It is important to note that these
softwares do not employ a common structure or model to represent data. Thus, taking
into account the diversity of softwares and data representation, a scientific workflow
should be built to integrate and process data, where each step must be able to analyse
the data structure, to process these data and finally generate a new data structure that
provide the requirements needed to execute the next step of the workflow. It is
important to note that scientific workflows use mathematics and computer sciences
methods capable to process, storage, and transform these data into useful information.
In addition, a subarea of Bioinformatics termed Systems biology helps to understand the
interactions observed between populations of molecules, cells and organisms as the
result of the increase of biological complexity. Thus, the purpose of this work was to
develop scientific workflows using bioinformatics and system biology softwares with
the purpose to compare different biological processes from the generation of proteinprotein
interaction (PPI) networks. In this sense, the Dis2PPI software was design as a
scientific workflow to integrate OMIM (Online Mendelian Inheritance in Man)
database with metasearch program STRING (Search Tool for the Retrieval of
Interacting Genes/Proteins) in order to retrieve protein-protein interaction networks
associated to monogenic diseases. The Dis2PPI was used to generate PPI networks for
xeroderma pigmentosum and cockayne syndromes, two rare monogenic diseases
associated with DNA damage, cancer, progeria, and neurodegeneration. The PPI
networks generated were analyzed with Cytoscape program and specific plugins that evaluate gene ontologies and centrality analysis. By its turn, Net2Homology program
was designed as a scientific workflow to integrate NCBI PSI-BLAST sequence
alignments with STRING metasearch program to recovery PPI networks associate with
two different species. In this sense, Net2Homology was used to obtain PPI network for
xeroderma pigmentosum disease and cyclooxigenase-1 enzyme by crossing Homo
sapiens and Mus musculus information. A comparison between these networks was
realized to verify the major evolutively conserved biological process.
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