• Refine Query
  • Source
  • Publication year
  • to
  • Language
  • 2053
  • 34
  • 25
  • 24
  • 24
  • 22
  • 22
  • 16
  • 11
  • 6
  • 6
  • 2
  • 2
  • 2
  • 2
  • Tagged with
  • 2142
  • 711
  • 220
  • 177
  • 156
  • 119
  • 116
  • 112
  • 100
  • 97
  • 95
  • 91
  • 87
  • 86
  • 85
  • About
  • The Global ETD Search service is a free service for researchers to find electronic theses and dissertations. This service is provided by the Networked Digital Library of Theses and Dissertations.
    Our metadata is collected from universities around the world. If you manage a university/consortium/country archive and want to be added, details can be found on the NDLTD website.
131

Identificação do gene PROPEP1 em Nicotiana benthamiana e seu envolvimento na resistência a Botrytis cinerea / Identification of PROPEP1 gene in Nicotiana benthamiana and his involvement in resistance to Botrytis cinerea

Zanin, Julie Graziela January 2014 (has links)
O gene PROPEP1 codifica o peptídeo sinal AtPep1 em Arabidopsis thaliana e está relacionado à amplificação de sinais de defesa. Este peptídeo aumentou a resistência de A. thaliana contra o patógeno necrotrófico Pythium irregulare, tendo sido caracterizados ortólogos deste peptídeo em milho, soja e tomate. Devido a sua importância na resistência de plantas a patógenos necrotróficos, o objetivo deste estudo foi caracterizar o gene PROPEP em Nicotiana benthamiana e sua importância na resistência a Botrytis cinerea. A partir das buscas in silico, foi encontrado um EST e a partir deste, dois genes, identificados como NbPROPEP1 e NbPROPEP2. Estes genes possuem os 23 aminoácidos da região C-terminal de suas proteínas preditas idênticas entre si. Comparados a outras espécies, assemelhando-se em 39% com a sequência de A. thaliana, 60% com Solanum tuberosum e 65% com Solanum lycopersicum, indicando ser um possível peptídeo sinalizador. Estes genes foram avaliados quanto a sua expressão em diferentes órgãos e durante o desenvolvimento, apresentando mais alta expressão de NbPROPEP1 na raiz e caule e NbPROPEP2 no caule. Além disso, as plantas com 6 e 8 semanas foram aquelas com maior expressão de ambos os genes e redução em tempos mais avançados. Para investigar o possível envolvimento deste peptídeo na resistência a B. cinerea, foi empregado o método VIGS, a fim de silenciar a região correspondente ao peptídeo, bem como a síntese e infiltração do peptídeo em folha. O silenciamento resultou no aumento da lesão em folha, além da morte celular sistêmica. O peptídeo infiltrado resultou em níveis de expressão dos genes NbPROPEP1 e NbPROPEP2 e média de lesão, semelhantes as encontradas nas plantas silenciadas. Plantas com os dois tratamentos juntos apresentaram o dobro de lesão. Os resultados obtidos indicam que os mecanismos induzidos em plantas silenciadas e infiltradas com o peptídeo sintético foram semelhantes, permitindo o avanço do patógeno e induzindo a expressão de genes envolvidos na defesa. Conclui-se que NbPep pode estar envolvido na resistência de N. benthamiana a B. cinerea, permitindo maior severidade da doença quando reduzido ou em excesso na planta. / PROPEP1 gene encodes the peptide signal AtPep1 in Arabidopsis thaliana and is related to the amplification defense signal. This peptide increase the resistance of A. thaliana against necrotrophic pathogen Pythium irregular. Orthologs of this peptide have been characterized in maize, soybean and tomato. Due to this importance in plant resistance to necrotrophic pathogens, the aim of this study was to characterize PROPEP in Nicotiana benthamiana and its importance in resistance to Botrytis cinerea. In silico search was found one EST and from this, two genes, identified as NbPROPEP1 and NbPROPEP2. These genes have the 23 amino acid C-terminal region of their predicted proteins identical to each other. Compared to other species, resembling in 39 % with the sequence of A. thaliana, Solanum tuberosum with 60 % and 65 % with Solanum lycopersicum and could be a possible peptide signal. These genes were measured their expression in different organs and during development, with the highest expression of NbPROPEP1 in the root and stem and NbPROPEP2 in stem. In addition, the 6th and 8th week were those with higher expression of both genes and reduction in more advanced times. To investigate the possible involvement of this peptide in resistance to B. cinerea, VIGS was used in order to silencing the region corresponding to the peptide, the peptide synthesis and infiltration of the sheet. The silencing resulted in increase of leaf lesion and systemic cell death. The infiltrate peptide resulted in expression levels of NbPROPEP2 and NbPROPEP1 genes and average lesion, similar to that found in the silenced plants. Plants with two treatments together demonstrated double of lesion. The results indicate that the mechanisms induced in silencing and infiltrating with synthetic peptide were similar, allowing the advance of the pathogen and inducing the expression of defense genes. We conclude that NbPep may be involved in resistance of N. benthamiana to B. cinerea, allowing greater disease severity when reduce or excess in the plant.
132

Avaliação da capacidade de bioconversão de hexoses e pentoses em bioetanol por Spathaspora arborariae / Study of the bioconversion of pentoses and hexoses into bioethanol by Spathaspora arborariae

Pereira, Fernanda da Cunha January 2010 (has links)
Cada vez mais a busca por fontes de energia renováveis tem se intensificado. Isto não somente pela preocupação ambiental, mas também devido aos combustíveis fósseis serem limitados. Desta forma, o etanol de segunda geração (bioetanol) tem chamado a atenção por ser uma fonte de energia pouco poluente e que pode ser obtida a partir de resíduos agroindustriais. Resíduos lignocelulósicos agroindustriais, como a casca de arroz, são fontes abundantes e de baixo custo para produção biotecnológica de compostos de alto valor agregado. Esse processo biotecnológico tem o objetivo de promover o aproveitamento completo das frações celulósica (contém hexoses) e hemicelulósica (rica em pentoses) dos resíduos lignocelulósicos, para a obtenção de commodities. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a capacidade de conversão de hexoses e pentoses pela levedura Spathaspora arborariae, descrita recentemente como boa conversora de pentoses a etanol. Cultivos sobre meio semissintético e hidrolisado de casca de arroz, a 180 rpm e 28oC, foram realizados em agitador orbital utilizando frascos Erlemmeyers, utilizando leveduras fermentadoras de hexoses e pentoses, como Saccharomyces cerevisiae, Candida shehatae, Pichia stipitis e Spathaspora arborariae, respectivamente, em cultivos isolados e em co-cultivo. As cepas testadas isoladamente apresentaram valores de produtividade de etanol (YP/S) entre 0,35 e 0,46 g g-1, enquanto que o rendimento dos co-cultivos variou de 0,30 e 0,77 g g-1 de etanol, sobre ambos os susbstratos. Também foram realizados ensaios em frascos agitados em aerobiose (180 rpm) e anaerobiose (100 rpm) a 28oC utilizando como meio de cultura com diferentes açúcares individualmente (glicose, xilose ou arabinose). O cultivo realizado em anaerobiose, utilizando glicose como substrato foi o que apresentou maior índices de conversão de etanol (Y P/S) 0,26 g g-1. Cultivos foram conduzidos em biorreatores submersos utilizando S. arborariae sobre meio semissintético, contendo glicose e xilose, em condições anaeróbicas (150 rpm), aeróbicas (400 rpm e 2 vvm; 150 rpm e 0,5 vvm) e microaerofilia (180 rpm e 0,33 vvm). O maior rendimento de etanol foi obtido no cultivo anaeróbico com Y P/S=0,52 g g-1. / It is increasing the search for renewable energy sources due to environmental concerns and the possibility of fossil fuels shortage in the near future. Thus, the second generation ethanol (bioethanol) has drawn attention for being a renewable energy source and can be obtained from organic residues. Lignocellulosic agroindustrial residues such as rice hulls are abundant resources and have a low cost for the biotechnological production of compounds of high added value. This biotechnological process aims to promote the full exploitation of the cellulose fractions (containing hexoses) and hemicellulose (rich in pentoses) of lignocellulosic wastes to obtain commodities such as ethanol. This study aimed at studying the capability of the yeast Spathaspora arborariae, recently discovered, of converting hexoses and pentoses into ethanol. Cultures on semi synthetic medium and hydrolyzed rice hull at 180 rpm and 28oC, were performed in shaker, using fermenting yeast hesoxes and pentoses such as Saccharomyces cerevisiae, Candida shehatae, Pichia stipitis and Spathaspora arborariae, either isolated or in co-cultivations. The strains tested alone showed values of ethanol yields (YP/S) between 0.35 and 0.46 g g-1, while the yield of co-cultures varied from 0.30 to 0.77 g g-1 ethanol on both substrates. Experiments were also carried out in shake flasks under aerobic conditions (180 rpm) and anaerobic (100 rpm) at 280C using culture medium with different sugars individually (glucose, xylose, or arabinose). The yeasts cultivated in anaerobic conditions using glucose as substrate showed the highest ethanol yields (YP/S) 0.26 g g-1. Cultures were conducted in submerged bioreactors using S. arborariae on semi-synthetic medium containing glucose and xylose under anaerobic conditions (150 rpm), aerobic (400 rpm and 2 vvm, 150 rpm and 0.5 vvm) and micro-aerobiosis (180 rpm and 0.33 vvm). The highest ethanol yield was obtained in anaerobic cultivation with YP/S = 0.52 g g-1.
133

Quando vai ser? o bebê ou a coleta das células-tronco? as pedagogias do risco e a colonização molecular do futuro

Somavilla, Vera da Costa January 2014 (has links)
Esta tese abrange questões relacionadas aos discursos de risco presentes nas publicações dos depoimentos de pais e mães em sites de biobancos autólogos que coletam e armazenam células-tronco do cordão umbilical para criopreservação. Para essa tarefa, tenho as seguintes questões: como a racionalidade de risco e sua promessa de garantia biológica no futuro se constituem nos depoimentos dos pais publicados nos sites que comercializam/vendem a coleta e o armazenamento de células-tronco do cordão umbilical? Como tal racionalidade e suas práticas se constituem como uma dimensão educativa, relativa à saúde, nesses sites? Nesse empreendimento, analisei as publicações da Internet de cinco sites de biobancos, que se constituíram como material principal da análise; vou toma-los enquanto um artefato cultural. A partir das discussões de risco e hiperprevenção, noções desenvolvidas nos trabalhos de Luis David Castiel, e de biotecnologias, nos trabalhos de Nikolas Rose, estabeleci as estratégias e categorias de análise da tese, que estão apresentadas em três eixos analíticos. O primeiro aborda a exortação do discurso de risco, em que apresento de que modo a prevenção dos riscos se constitui como elemento mobilizador para aquisição desta biotecnologia, educando pais e mães para a adoção de determinadas práticas de saúde vinculadas à segurança biológica para o futuro. O segundo discute o consumo de biotecnologias, que se apresentam discursivamente nos sites como um futuro de oportunidades para prevenção de riscos e influenciam a constituição de sujeitos de consumo. No terceiro eixo, problematizo as promessas de segurança biológica para o futuro, divulgadas de forma reiterada pelos biobancos, refletindo sobre os discursos que tratam do desejo de, a partir desta biotecnologia, adquirir um tipo de seguro biológico para a saúde no futuro. Será possível observar que os depoimentos extraídos dos sites constituem discursivamente a criopreservação das células-tronco do cordão umbilical como um tipo de “segurança biológica para o futuro”. A discussão dos dados possibilita perceber que os discursos presentes nos depoimentos dos pais e mães são singulares, amplamente marcados pelas pedagogias do risco, e ajudam a compreender como os processos de medicalização e molecularização da vida vão conformando as práticas e reposicionando as famílias em relação aos cuidados de saúde dos filhos, com vistas a evitar riscos de adoecimento no futuro. / This thesis addresses issues related to risk discourses found in testimonies given by parents on websites of autologous biobanks that collect and store stem cells from umbilical cord blood for cryopreservation. Two questions have been posed: How have the risk rationality and its promise of biological guarantee constituted and functioned on websites that trade/sell the collection and storage of umbilical cord blood stem cells? How have such rationality and its practices been constituted as an educative health-related dimension on those websites? The contents of five websites of biobanks have been selected as the main research material; hence, they have been here regarded as cultural artifacts. From the discussions about the notions of risk and hyper-prevention, which have been developed by Luis David Castiel, and also about biotechnologies, as seen by Nikolas Rose, I have established the strategies and categories of analysis, which have been divided into three analytical axes. The first one approaches the exhortation of the risk discourse, in which I have evidenced how risk prevention is a mobilizing element for the acquisition of that biotechnology and teaches parents to adopt certain health care practices linked to future biological security. The second one discusses the consumption of biotechnologies which are both discursively presented in the websites as a future of opportunities for risk prevention and influence the constitution of consumption subjects. In the third axis, I have problematized the promises of future biological security that have been recurrently publicized by the biobanks. I have reflected on discourses that, by considering this biotechnology, address the desire to obtain a certain kind of biological health insurance. It is possible to notice that the testimonies extracted from the websites discursively produce the cryopreservation of umbilical cord blood stem cells as a type of “biological insurance”. Data discussion has enabled me to understand that the discourses found in parents’ testimonies are unique and highly marked by the risk pedagogy, and also help us understand how the processes of medicalization and molecularization of life have shaped some practices and repositioned the families in relation to their children health care aiming at preventing diseases from appearing in the future. / Esta tesis abarca cuestiones relacionadas a los discursos de riesgo presentes en testimonios de padres y madres publicados en sitios web pertenecientes a biobancos autólogos que colectan y almacenan células madre del cordón umbilical para criopreservación. Para esta tarea, tengo las siguientes cuestiones: ¿Cómo la racionalidad de riesgo y su promesa de garantía biológica en el futuro se constituyen y operan en los sitios web que comercializan la colecta y el almacenamiento de éstas células? ¿Cómo tal racionalidad y sus prácticas se constituyen como una dimensión educativa relativa a la salud en estos sitios? En ese emprendimiento, analicé las publicaciones web de cinco páginas de biobancos, que se constituirían en el material principal de análisis; por eso los considero como un artefacto cultural. A partir de las discusiones de riesgo e hiperprevención (nociones desarrolladas en los trabajos de Luis David Castiel), y de biotecnologías (presente en los trabajos de Nikolas Rose), establecí las estrategias y categorías de análisis de la tesis, presentadas en tres ejes analíticos. El primero aborda la exhortación del discurso de riesgo, en el que presento de qué modo la prevención de riesgos se constituye como elemento movilizador para la adquisición de esta biotecnología, educando a padres y madres para la adopción de determinadas prácticas de salud vinculadas a la seguridad biológica para el futuro. El segundo discute el consumo de biotecnologías, que se presentan discursivamente en los sitios web como un futuro de oportunidades para la prevención de riesgos e influencian a la constitución de sujetos de consumo. En el tercer eje, problematizo las promesas de seguridad biológica para el futuro divulgadas de forma reiterada por los biobancos, reflexionando sobre los discursos que tratan el deseo de, a partir de esta biotecnología, adquirir un tipo de seguro biológico para la salud en el futuro. Será posible observar que los testimonios extraídos de los sitios web constituyen discursivamente la criopreservación de células madre como un tipo de “seguridad biológica para el futuro”. La discusión de los datos posibilita percibir que los discursos presentes en las declaraciones de padres y madres son singulares, ampliamente marcados por la pedagogía de riesgo, y ayudan a comprender como los procesos de medicalización y moleculización de la vida van conformando las prácticas y reposicionando a las familias en relación a los cuidados en la salud de los hijos, con vista a evitar riesgos de enfermedades en el futuro.
134

Marcos regulatórios, inovações biotecnológicas e a concentração da indústria de sementes de soja, milho e algodão no Brasil

Santos, Paulo Eduardo de Campante 31 July 2013 (has links)
Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Agronomia, 2013. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-10-09T19:10:18Z No. of bitstreams: 1 2013_PauloEduardodeCampanteSantos.pdf: 4533367 bytes, checksum: 3373462021423acbda9680e26cf38b83 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-10-14T12:56:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_PauloEduardodeCampanteSantos.pdf: 4533367 bytes, checksum: 3373462021423acbda9680e26cf38b83 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-14T12:56:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_PauloEduardodeCampanteSantos.pdf: 4533367 bytes, checksum: 3373462021423acbda9680e26cf38b83 (MD5) / O trabalho analisou os dados de aquisições, fusões e estratégias colaborativas ocorridas a partir do estabelecimento dos marcos regulatórios nas áreas de propriedade intelectual, sementes e biotecnologia e determinou o grau de concentração da indústria de sementes e de biotecnologia de soja, de milho e de algodão através dos índices de concentração das Firmas CR4 e CR8 e Herfindahl-Hirschman Index (HHI). Dados de pesquisa, desenvolvimento e inovação em sementes e em biotecnologia tais como: registros de novos cultivares, proteções de cultivares, indicações de cultivares junto ao zoneamento agrícola agropecuário, liberações planejadas no meio ambiente e liberações comerciais de materiais geneticamente modificados foram agregados e analisados para avaliar a concentração e a dinâmica do mercado de sementes e biotecnologia de soja, milho e algodão no Brasil. Os valores de CR4 para a concentração de mercado para cultivares de soja variou de aproximadamente 85% a 57% no período de 1998 à 2013 enquanto o valor de CR8 variou de 97% a 78% no mesmo período. O valor de HHI permaneceu acima de 1.800 até 2009 quando o valor do índice atingiu 1.768, o que caracterizou o mercado como moderadamente concentrado. Para o mercado de sementes de soja convencional os índices encontrados indicou o mercado como de alta concentração, enquanto o mercado de sementes geneticamente modificadas mostrou com uma moderada concentração. Em relação à biotecnologia o cenário para o mercado de sementes de soja mostrou-se bastante concentrado, com o valor de CR4 próximo a 82% e o HHI com valores acima de 1.900 para o período de 2005 a 2013. Para o mercado de sementes de milho os dados encontrados mostraram uma tendência de aproximação de um mercado do tipo II, considerado como de alta concentração. No caso do mercado de sementes de milho convencional as curvas de CR4, CR8 e HHI mostraram uma tendência à moderada concentração. Para sementes geneticamente modificadas, os resultados revelaram um nível elevado de concentração, com valores de CR4 chegando a 97,2% e HHI acima de 3.000 em 2013. Em relação às pesquisas com organismos geneticamente modificados, os resultados mostraram que o índice CR4 ficou próximo a 100% enquanto que o HHI permaneceu acima de 1.900, característica de mercados altamente concentrados. Em relação a sementes de algodão os valores de CR4 e HHI tanto para sementes convencionais como para sementes geneticamente modificadas mantiveram-se em patamares elevados durante praticamente todo período analisado, o que tipifica o mercado como mercado altamente concentrado. Em relação a biotecnologia os valores de CR4 ficaram acima 80% e o HHI acima de 2.000, o que caracterizou uma clara concentração no tocante à pesquisa e inovação para o mercado de biotecnologia na cultura. Entretanto, com exceção do mercado de sementes de algodão, os atuais níveis de concentração encontrados não tiveram impactos negativos sobre a inovação ao longo dos últimos anos, uma vez que os mercados de milho e soja apresentaram uma disponibilidade bastante razoável de empresas obtentoras e novas cultivares sendo lançadas anualmente. Os resultados encontrados apontam para um franco processo de verticalização da indústria de sementes no Brasil, com grandes empresas atuando, simultaneamente, na obtenção de eventos de biotecnologia e no desenvolvimento, multiplicação, e oferta de cultivares. A complexidade e o alto custo da pesquisa em biotecnologia podem ser considerados como barreiras significativas à entrada de novos competidores no mercado. Os índices de concentração encontrados para o setor de sementes e de biotecnologia geram preocupações na medida em que uma integração vertical do domínio das técnicas de biotecnologia com ativos de sementes pode gerar um desequilíbrio no mercado, através do controle de estruturas em pesquisa, desenvolvimento e inovação por parte de poucas empresas. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The study analyzed data acquisitions, mergers and collaborative strategies that occurred since the establishment of regulatory frameworks in the intellectual property, seeds and biotechnology areas and determined the degree of concentration of the seed's industry and the soybean, maize and cotton's biotech, through the Firms CR4 and CR8 and Herfindahl-Hirschman Index (HHI) indices of concentration. Data of research, development and innovation in biotechnology and in seeds such as: records of new cultivars, cultivars' protections, cultivars' indications with the agricultural zoning, planned releases into the environment and commercial releases of genetically modified material were added and analyzed to evaluate the concentration and dynamics of seed's market and biotechnology of soybean, maize and cotton in Brazil. The values of CR4 concentration for soybean's market ranged from approximately 85% to 57% from 1998 to 2013 while the value of CR8 ranged from 97% to 78% in the same period. The HHI values remained above 1,800 until 2009, when the index value reached 1.768, which typified the market as moderately concentrated. For the conventional soybeans market the indexes found allowed to characterize the market as highly concentrated while the market of genetically modified seeds showed a moderate concentration. About biotechnology, the setting for the soybean seed market was fairly concentrated, with CR4's value close to 82% and HHI values above 1,900 for the period of 2005-2013. The data for the corn seed market showed a tendency of approaching the type II market, considered as high concentration. In the case of the market of conventional corn seed, the CR4, CR8 and HHI curves showed a tendency to moderate concentration. For genetically modified seeds, the results revealed a high level of concentration, with values reaching 97.2% for CR4 and HHI above 3,000 in 2013. Regarding to genetically modified organisms studies, the results showed that CR4 remained close to 100% while HHI remained above 1,900, characteristic of highly concentrated markets. Regarding to the cotton seeds the values of CR4 and HHI, for either conventional seeds as for genetically modified seeds, remained at high levels throughout practically the whole analyzed period, which typifies the market as highly concentrated. Regarding to the biotechnology, the CR4 values were above 80% and the HHI above 2,000, which showed a clear concentration in relation to the research and innovation for the biotechnology market in culture. However, with the exception of the cotton seed market, the current concentration levels found did not have negative impacts on innovation over the past few years, once the corn and soybean markets have a fairly reasonable availability of breeders companies and new cultivars being released annually. The results found point to a vi seed industry integration process in Brazil, with major companies operating, simultaneously, in getting biotechnology events and development, multiplication and cultivars supply. The complexity and high cost of biotechnology research can be considered as significant barriers to entry for new competitors in the market. The concentration indices found for the seed sector and biotechnology raise concerns to the extent that a vertical integration between the area of biotechnology techniques with assets of seeds can generate an imbalance on the market, through the research structures control, development and innovation by few companies.
135

Uso de biotecnologia na melhoria de solos para fins de pavimentação rodoviária / Use of biotechonology in the soil for improvemente of road pavimentation / Uso de biotecnologia em la mejoria de suelos com fienes de pavimentación vial

Gómez Muñetón, Claudia Maricela January 2009 (has links)
xx, 102 f. : il. / Submitted by Allan Wanick Motta (allan_wanick@hotmail.com) on 2010-03-09T19:41:30Z No. of bitstreams: 2 2009_ClaudiaMaricelaGomezMuneton_2.pdf: 4421439 bytes, checksum: 1ddd29178a7c3daac7c896933f6d0b98 (MD5) 2009_ClaudiaMaricelaGomezMuneton_1.pdf: 4426841 bytes, checksum: 885fd2af2a7319c84cddcde5197a6f10 (MD5) / Approved for entry into archive by Carolina Campos(carolinacamposmaia@gmail.com) on 2010-03-16T17:24:52Z (GMT) No. of bitstreams: 2 2009_ClaudiaMaricelaGomezMuneton_2.pdf: 4421439 bytes, checksum: 1ddd29178a7c3daac7c896933f6d0b98 (MD5) 2009_ClaudiaMaricelaGomezMuneton_1.pdf: 4426841 bytes, checksum: 885fd2af2a7319c84cddcde5197a6f10 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-03-16T17:24:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 2009_ClaudiaMaricelaGomezMuneton_2.pdf: 4421439 bytes, checksum: 1ddd29178a7c3daac7c896933f6d0b98 (MD5) 2009_ClaudiaMaricelaGomezMuneton_1.pdf: 4426841 bytes, checksum: 885fd2af2a7319c84cddcde5197a6f10 (MD5) Previous issue date: 2009 / Esta dissertação apresenta o estudo da variação de algumas propriedades físicas e mecânicas de um solo laterítico proveniente da cidade satélite de Santa Maria na região do Planalto Central, Distrito Federal, por meio do uso de processos biotecnológicos, que consistiram na indução da precipitação de carbonato de cálcio (CaCO3) mediante adição de um meio nutriente ao solo e do processo de hidrólise de uréia usando a enzima uréase proveniente do feijão de porco (Canavalia Ensiformis). Para o desenvolvimento da pesquisa utilizou-se o solo natural e tratado compactado nas condições ótimas das energias Proctor normal e Proctor intermediário. Em seguida, para avaliação da influência das condições de cura quanto à umidade, uma parte dos corpos de prova foi mantida na condição de compactação, outra parte foi conduzida ao ramo seco (wótimo -3%) e uma ultima parte foi conduzida ao ramo úmido (wótimo +3%). Os ensaios foram realizados sob condições de trabalho similares, para assim determinar as variações das propriedades do solo devidas ao tratamento. Apenas quanto à resistência à tração foram marcantes as melhorias no comportamento mecânico do solo com a adição do meio nutritivo. No caso dos ensaios de compressão simples e CBR não houve qualquer ganho. A viabilidade de uso do meio nutritivo como indutor de precipitação de carbonato de cálcio, e, portanto, como agente estabilizador do solo, deve ser analisado para outros solos regionais antes de se formar uma opinião mais concreta sobre o assunto. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / This thesis presents the study of variation of some physical and mechanical properties of soil laterítica from the satellite city of Santa Maria in the Central Plateau, Distrito Federal, by the use of biotechnological processes, which consisted in the induction of precipitation of calcium carbonate (CaCO3) by adding a nutrient medium to soil and the process of hydrolysis of urea by the enzyme uréase from jack bean (Canavalia Ensiformis). For the development of the research it was used the natural and treated soil compacted under optimal conditions of normal proctor energy and intermediary Proctor energy. Then, to evaluate the influence of cure conditions on the humidity, some of the test bodies were kept in the condition of compactation, another part was carried to the humidity less than the optimal (woptimal -3%) and a last part was conducted to wet humidity (woptimal +3%). The tests were performed under similar working conditions in order to determine changes in soil properties due to treatment. Mechanical performance had significant improvements only on the tensile strength with the addition of nutrient medium. In the case of simple compression tests and CBR there was no gain. The feasibility of using the nutrient medium as inducer of calcium carbonate precipitation and, therefore, as a soil stabilizer, should be analised for other regional soil before forming an opinion on the matter more concrete. _______________________________________________________________________________ RESUMEN / Esta disertación presenta El estúdio de la variación de algunas propiedades físicas y mecánicas de un suelo laterítico proveniente de la ciudad satélite de Santa María en la región del Planalto Central, Distrito Federal, por medio del uso de procesos biotecnológicos, que consistieron en la inducción de la precipitación de carbonato de calcio (CaCO3) mediante la adición de un medio nutriente en el suelo y del proceso de hidrólisis de urea usando la enzima urease proveniente del FEIJÃO DE PORCO (Canavalia Ensiformis). Para el desarrollo de la investigación se utilizó el suelo natural y tratado compactado en las condiciones óptimas de las energias Próctor normal y Próctor intermediario. Para la evaluación de la influencia de las condiciones de cura refiriéndose a la humedad, una parte de los cuerpos de prueba fue mantenida en la condición de compactación, otra parte fue conducida al ramo seco (wótimo -3%) e una última parte fue conducida al ramo húmedo (wótimo +3%). Los ensayos fueron realizados sobre condiciones de trabajo similares para así determinar las variaciones de las propiedades del suelo debidas al tratamiento. Las mejorías más marcadas en el comportamiento mecánico con adición de medio nutritivo fueron presentadas por los ensayos de tracción indirecta. En el caso de los ensayos de compresión simple y CBR no hubo ninguna ganancia mecánica. La viabilidad del uso del medio nutritivo como inductor de precipitación de carbonato de calcio, por tanto, como agente estabilizador del suelo, debe ser analizado su uso para otros suelos regionales antes de formar una opinión más concreta sobre el asunto.
136

Expressão de genes candidatos para a aquisição da competência ovocitária em bovinos / Expression of candidate genes for bovine developmental oocyte competence

Caixeta, Ester Siqueira 01 1900 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2009. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2010-03-22T18:17:53Z No. of bitstreams: 1 2009_EsterSiqueiraCaixeta.pdf: 758651 bytes, checksum: 45bc51487131a4d93e30e7209f9c9405 (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-05-11T01:39:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_EsterSiqueiraCaixeta.pdf: 758651 bytes, checksum: 45bc51487131a4d93e30e7209f9c9405 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-11T01:39:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_EsterSiqueiraCaixeta.pdf: 758651 bytes, checksum: 45bc51487131a4d93e30e7209f9c9405 (MD5) Previous issue date: 2009-01 / O sucesso das várias técnicas de reprodução assistida depende da competência do ovócito. Entretanto, os fatores envolvidos na sua aquisição e as características moleculares de um ovócito competente não são completamente conhecidos. Com o objetivo de avaliar genes relacionados com a competência do ovócito foi quantificado o nível de transcritos de genes candidatos em ovócitos (H1Foo, H2A, H3A, GHR, GDF9, BMP15, OOSP1) e nas células do cumulus (FSHR, EGFR, GHR, PTX3, IGF-II) com diferentes níveis de competência. Folículos ovarianos foram dissecados e distribuídos de acordo com seu diâmetro em quatro grupos: (1) 1,0 a 3,0 mm; (2) 3,1 a 6,0 mm; (3) 6,1 a 8,0 mm; (4) ≥ 8,1 mm. Os complexos cumulus-ovócitos (COCs) foram liberados, classificados morfologicamente, maturados, fecundados e cultivados in vitro, ou desnudados para a mensuração do diâmetro do ovócito. Os ovócitos em estágio de vesícula germinativa desnudados e suas células do cumulus correspondentes foram utilizados para análise de expressão gênica por RT-qPCR. A taxa de blastocistos foi maior nos ovócitos recuperados de folículos >6 mm, que nos outros dois grupos, confirmando que o tamanho folicular é um bom modelo para o estudo da competência. Nos ovócitos, somente os transcritos da H2A aumentaram gradualmente de acordo com o tamanho do folículo, sendo maior (P<0,05) nos ovócitos originados de folículos ≥8,1 mm do que naqueles menores que 6,0 mm. Dos cinco genes avaliados nas células do cumulus, três (FSHR, EGFR, GHR) mostraram diferença no nível de RNAm, aumentando deacordo com o tamanho folicular. Com base nos resultados, foi confirmada a implicação crítica da H2A no desenvolvimento da competência. Além disso, foram identificados genes importantes nas células do cumulus, os quais estão associados com a competência do ovócito e podem refletir a sua qualidade. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The success of the various assisted reproductive techniques depends on oocyte competence. However, the factors involved on its acquisition and the molecular attributes of competent oocyte are generally unknown. In an attempt to assess genes related with oocyte competence we quantify transcripts for candidate genes in oocytes (H1Foo, H2A, H3A, GHR, GDF9, BMP15, OOSP1) and cumulus cells (FSHR, EGFR, GHR, PTX3, IGF-II) of different levels of competence. Follicles were dissected and distributed according to their diameter into 4 groups: (1) 1.0 to 3.0 mm; (2) 3.1 to 6.0 mm; (3) 6.1 to 8.0 mm; (4) ≥ 8.1 mm. The COCs were released, morphologically classified, matured, fertilized and cultured in vitro or denuded for diameter measurements. The denuded germinal vesicle oocytes and their correspondent cumulus cells were used for gene expression analysis by RT-qPCR. Blastocyst rate was higher for the oocytes recovered from follicles >6 mm than the other two groups, confirming that follicles size is a good model to study competence. In the oocyte, only H2A transcript increased gradually according to follicle size, being greater (P<0.05) in oocyte originated from follicles ≥8.1 mm than those lower than 6.0 mm. Of the 5 genes evaluated in the cumulus cells, 3 (FSHR, EGFR and GHR) showed differences in mRNA level, increasing according to follicular size. In conclusion, we confirmed the critical implication of H2A on developmental competence, and identify important genes in cumulus cells which are associated with oocyte competence and can reflect its quality.
137

Expressão e caracterização de fragmentos de anticorpos recominanes Anti-CD3 humano em Pichia pastoris

Sousa, Victor Edgard Tavares 15 April 2010 (has links)
Dissertação (mestrado)-Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2010. / Submitted by Shayane Marques Zica (marquacizh@uol.com.br) on 2011-02-21T19:05:15Z No. of bitstreams: 1 2010_VictorEdgardTavaresSousa.pdf: 6750254 bytes, checksum: 6a576895b0bd5e79d81112167f62aa00 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2011-03-18T23:59:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_VictorEdgardTavaresSousa.pdf: 6750254 bytes, checksum: 6a576895b0bd5e79d81112167f62aa00 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-03-18T23:59:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_VictorEdgardTavaresSousa.pdf: 6750254 bytes, checksum: 6a576895b0bd5e79d81112167f62aa00 (MD5) / As imunoglobulinas são moléculas complexas de interesse biofarmacêutico que têm sido geralmente produzidas em células animais. Biorreatores alternativos, tais como leveduras também foram considerados, mas sua utilização é dificultada pelo dobramento ineficiente dos anticorpos e adição de cadeias de carboidratos. O objetivo deste trabalho foi produzir um vetor de expressão otimizado para produção de anticorpos completos e seus fragmentos bivalentes F(ab’)2 na levedura Pichia pastoris. Desenvolvemos um vetor de expressão de anticorpos em cadeia única que utiliza uma seqüência reconhecida pela protease KEX para o processamento das cadeias do anticorpo. Usamos este vetor de expressão para inserir um fragmento gênico de uma cadeia variável humanizada anti-CD3, desenhada de forma a otimizar o uso de códons e seu conteúdo GC. Os plasmídeos resultantes foram introduzidos na levedura metilotrófica Pichia pastoris, linhagem GS115, e cultivado em meio BMMY. A melhor indução foi obtida com metanol 2%. O fragmento de anticorpo mantém sua capacidade de reconhecimento ao antígeno recombinante CD3 produzido em E. coli. Análises por SDS-PAGE e Western Blot indicam degradação das construções recombinantes de anticorpos completos. Para verificar atividade biológica das imunoglobulinas recombinantes, também desenvolvemos um peptídeo recombinante CD3 de cadeia única, contendo cadeias gama e epsilon do antígeno CD3. O antígeno foi expresso na forma de corpúsculo de inclusão em Escherichia coli BL21 pLysE. A associação do antígeno-anticorpo foi verificada por meio de ELISA. Portanto, foi descrito um vetor de expressão em P. pastoris eficiente para a expressão de fragmentos F(ab’)2 com capacidade de ligação ao antígeno CD3. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Antibody is a complex biopharmaceutical that has been usually produced in animal cell. Alternative bioreactors such as yeasts have also been considered, but its use is hampered by the inefficient antibody folding and carbohydrate addition. The aim of this work is to produce an optimized expression vector for complete antibodies and its divalent Fab antibody fragment production. We developed a single-chain F(ab’)2 expression vector that codes for a KEX cleavage site, used to process antibody's chains. We used this expression vector to insert a humanized anti-CD3 variable region gene fragment, optimally designed for codon usage and GC content. The resulting plasmid was introduced in the methylotrophic yeast Pichia pastoris strain GS115 and it was grown in BMMY media. Improved induction was achieved using 2% methanol. The antibody fragment appears to maintain its affinity to the antigen site CD3. This suggests that it harbors correctly processed heavy and light chains. SDS-PAGE and Western Blot analyses showed a degradation of the antibody complete form when compared to its fragment F(ab’)2. To check F(ab’)2 biological activity, we also developed a recombinant CD3 peptide, containing gamma and epsilon chain of CD3 antigen produced as a single chain molecule. The antigen was expressed as inclusion bodies in E. coli BL21 pLysE. The antibody-antigen association was observed by ELISA. Therefore, we had described an efficient F(ab`)2 expression vector for P. pastoris, successfully used for the production of a biologically active anti-CD3 antibody F(ab`)2.
138

Efeitos da clonagem de elementos de DNA anti-repressores em vetor de expressão na produção de anti-CD3 em CHO-K1

Alcântara, Paulo Henrique de Franco 14 September 2010 (has links)
Dissertação (mestrado)-Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2010. / Submitted by Débora Amorim Romcy Pereira (deboraromcy@bce.unb.br) on 2011-06-21T14:46:30Z No. of bitstreams: 1 2010_PauloHenriqueDeFrancoAlcantara.pdf: 1343956 bytes, checksum: b896748355ffd9fb18333e0a2c3b538f (MD5) / Approved for entry into archive by Eveline Gonçalves(eveline@bce.unb.br) on 2011-06-21T15:07:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_PauloHenriqueDeFrancoAlcantara.pdf: 1343956 bytes, checksum: b896748355ffd9fb18333e0a2c3b538f (MD5) / Made available in DSpace on 2011-06-21T15:07:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_PauloHenriqueDeFrancoAlcantara.pdf: 1343956 bytes, checksum: b896748355ffd9fb18333e0a2c3b538f (MD5) / Nos últimos anos o grupo de Imunologia Molecular da Universidade de Brasília tem humanizado anticorpos de interesse clínico visando a sua aplicação terapêutica. A produção de proteínas terapêuticas como essas é de grande interesse para a indústria biofarmacêutica. Com intuito de produzir glicoproteínas estáveis, têm-se utilizado células de mamíferos como sistema de expressão heteróloga, pois estas possuem uma maquinaria pós-transcricional necessária para estabilizar biomoléculas complexas. No entanto, a produção de tais moléculas é geralmente dificultada pela imprevisibilidade e instabilidade da expressão ao longo do tempo. Isso se deve à alta probabilidade de silenciamento dos transgenes ao serem integrados na cromatina das células de mamíferos. Uma das alternativas para contornar esse problema é o melhoramento de vetores de expressão com o emprego de pequenos elementos de DNA (menores que 2100 pares de bases) que atuam como anti-repressores. No presente trabalho foram isolados quatro elementos de DNA humanos semelhantes às sequências dos elementos anti-repressores 35 e 40 identificados por Kwaks e colaboradores em 2003. Um elemento semelhante ao anti-repressor 35 e outro semelhante ao anti-repressor 40 foram clonados no vetor de expressão em células de mamíferos pMIRES anti-CD3 FvFc humanizado (Silva et al., 2009). O elemento anti-repressor 35 apresentou vários alinhamentos no cromossomo 7 humano. Já o elemento 40 pôde ser alinhado com diversas regiões de vários cromossomos, destacando-se os alinhamentos nos cromossomos 14 e 22. Esses elementos de DNA são sequências repetitivas presentes ao longo do genoma humano. Além disso, substituiu-se o promotor de citomegalovírus (CMV) deste mesmo vetor por um promotor CMV otimizado contendo a sequência do intron A (IA). As novas construções de vetores foram transfectadas em células de ovário de hamster chinês (CHO) e clones estáveis foram isolados para posterior caracterização da produção de anticorpos. Devido a sua similaridade com sequências anti-repressoras e o seu predomínio em regiões subcentroméricas, sugere-se que os elementos de DNA isolados sejam importantes na modulação da cromatina exercendo atividade anti-repressora. Outra hipótese é que, devido ao fato de serem elementos repetitivos no genoma humano, tais elementos podem ter sua origem em regiões altamente transcritas de retrotransposons. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Recently, the Molecular Immunology group of Universidade de Brasília has humanized clinical antibodies aiming their therapeutic applications. These therapeutic proteins production is of great interest to the biopharmaceutical industry. In order to produce stable glycoproteins, mammalian cells have been used as heterologous expression system since they possess post-translational machinery to stabilize those complex biomolecules. However, the production of such molecules is often hampered down by the unpredictability and instability of expression over time. This is due to the high probability of silencing of transgenes integrated into the chromatin of mammalian cells. One way to overcome this problem is the use of small elements of DNA (less than 2100 base pairs) that act as anti-repressors. In this work we have isolated four DNA human elements similar to the anti-repressors 35 and 40 sequences identified by Kwaks and collaborators in 2003. An element similar to the anti-repressor 35 and other similar to the anti-repressor 40 were cloned into the expression vector for mammalian cells pMIRES humanized anti-CD3 FvFc (Silva et al., 2009). The anti-repressor element 35 presented several alignments on human chromosome 7. Moreover, the element 40 was aligned with different regions on several chromosomes, particularly on chromosomes 14 and 22. These DNA elements are repetitive sequences present throughout the human genome. Additionally, we substituted the vector cytomagalovirus (CMV) promoter by the optimized CMV promoter containing the intron A (IA) sequence. These new vectors constructions were transfected into Chinese hamster ovary cells (CHO) and stable clones were isolated to acccess the antibody production. Due to its similarity to anti-repressor sequences and its prevalence in sub centromeric regions, it is suggested that the isolated DNA elements are important in the chromatin modulation by exerting anti-repressor activity. Another hypothesis is that, due to the fact that they are repetitive elements in the human genome, these elements may have their origin in retrotransposon’s highly transcribed regions.
139

Estudo bioético exploratório das aprovações comerciais dos organismos geneticamente modificados pelo organismo regulador brasileiro

Braña, Glenda Morais Rocha 02 May 2011 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2011. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-08-04T11:06:53Z No. of bitstreams: 1 2011_GlendaMoraisRochaBrana.pdf: 1031699 bytes, checksum: b286d3dd77daf3a32101a01af7660a3c (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-08-04T11:07:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_GlendaMoraisRochaBrana.pdf: 1031699 bytes, checksum: b286d3dd77daf3a32101a01af7660a3c (MD5) / Made available in DSpace on 2011-08-04T11:07:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_GlendaMoraisRochaBrana.pdf: 1031699 bytes, checksum: b286d3dd77daf3a32101a01af7660a3c (MD5) / No contexto moderno de constantes inovações tecnológicas, surge a preocupação de como o homem se relaciona com o ambiente no qual se insere. Na seara do meio ambiente genético, as descobertas trouxeram à tona a modificação genética de plantas sob os mais variados argumentos. Diversas são as posições, ora a favor, ora contra a liberação de organismos geneticamente modificados (GM) no ambiente. Contudo, o problema vai bem além de se posicionar a favor ou contra tais organismos. Há de se considerar a legislação, a ética, a biossegurança, enfim, o meio ambiente nas considerações relativas aos GM. Assim, o objetivo deste estudo foi investigar se as aprovações comerciais de GM estariam associadas ao perfil acadêmico/científico e à afiliação dos membros que compõem o Organismo Regulador. A metodologia utilizada baseou-se na pesquisa bibliográfica, por meio do levantamento de dados de fontes documentais, como livros, textos filosóficos, artigos científicos e análise e avaliação dos documentos oficiais do Organismo Regulador Brasileiro. Este último incluiu atas e extratos prévios das aprovações comerciais de 2006 a 2009 disponíveis no site da Comissão Técnica Nacional de Biossegurança (CTNBio), na tentativa de verificar quais aportes éticos estavam presentes nas votações dos membros do Organismo Regulador Brasileiro. Além disso, pesquisou-se em bases de dados, como o do Conselho Nacional de Desenvolvimento científico e Tecnológico (CNPq). Usou-se para tal a Lei nº 11.105 de 24 de março de 2005 e a Constituição Federal de 1988 como marcos normativos, que estabeleceram juridicamente a gestão da biossegurança e o papel da CTNBio no cenário pátrio. Foram analisadas as aprovações comerciais do milho-Bt, do algodão-Bt e da soja geneticamente tolerante ao herbicida glifosato. Os resultados mostraram que a afiliação não influenciou a decisão sobre a aprovação de plantas geneticamente modificadas; porém observou-se uma tendência maior de votações pela aprovação pelos membros com maior especialidade técnica sobre o tema, ou seja, as decisões foram baseadas em critérios técnicos, prevalecendo sobre outros tipos de questionamentos. A contribuição da bioética no tratamento das provações comerciais referendou o discurso ético de Hans Jonas. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The introduction of genetically modified plants into the environment has been marked by different positions, either in favor or against their release. However, the problem goes well beyond such contradictory positions; it is necessary to take into account the legislation, ethics, biosafety and the environment in the considerations related to the release of genetically modified organisms (GMOs). In this context, the objective of this study was to investigate whether commercial approvals of GMOs are associated with the academic/scientific profile and affiliation of the members of the regulatory agency (CTNBio). The methodology was based on a search through the data collected from documentary sources such as books, philosophical texts, scientific articles, as well as analysis and evaluation of official documents from the Brazilian regulatory agency. The latter included meeting minutes and previous extracts from the commercial approvals from 2006 to 2009 available on the CTNBio website, in an attempt to determine which ethical concerns affected voting by members of this Brazilian regulatory agency. We also found the curriculum vitae of CTNBio members on the website of the Plataforma Lattes database of the National Council for Scientific and Technological Development (CNPq, http://lattes.cnpq.br), which states their area of expertise. Law No. 11.105/2005 and the Constitution of 1988 were used as a legal framework, which established the legal management of biosecurity and the role of CTNBio in the national arena. We analyzed the commercial approval of Bt-maize, Bt-cotton and soybeans that are genetically tolerant to the herbicide glyphosate. Results showed that the affiliation of expert members did not appear to influence their decision to release GM plants, but that experts voted heavily in favor of release; that is, decisions were based on technical criteria, prevailing over any other type of questioning.
140

Metabólitos de origem fúngica : aplicações potenciais em processos biotecnológicos

Arboleda Valencia, Jorge William 01 July 2011 (has links)
Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2011. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2012-03-26T13:07:53Z No. of bitstreams: 1 2010_ClaudioJoseOliveiraSouza_Parcial.pdf: 391277 bytes, checksum: cd10f63fe321539df90cc7a62492c131 (MD5) / Rejected by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br), reason: on 2012-03-26T15:29:10Z (GMT) / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2012-03-26T16:34:28Z No. of bitstreams: 1 2011_JorgeWilliamArboledaValencia_Parcial.pdf: 305137 bytes, checksum: d980502aca4c6f93fd3f9a478bcda6aa (MD5) / Approved for entry into archive by Elzi Bittencourt(elzi@bce.unb.br) on 2012-03-29T14:50:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_JorgeWilliamArboledaValencia_Parcial.pdf: 305137 bytes, checksum: d980502aca4c6f93fd3f9a478bcda6aa (MD5) / Made available in DSpace on 2012-03-29T14:50:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_JorgeWilliamArboledaValencia_Parcial.pdf: 305137 bytes, checksum: d980502aca4c6f93fd3f9a478bcda6aa (MD5) / A biotecnologia visa atender inúmeros problemas que afetam a humanidade e para isto muitas moléculas devem ser exploradas como ferramentas para construir soluções alternativas. Metabólitos como os produzidos por fungos apresentam geralmente duplicidade de ação, o que permite explorar seu potencial uso em aplicações industriais em diferentes áreas, como farmacologia, agroindústria, bioprocessos, tecnologia ambiental e bioconversão. Com o objetivo de estabelecer o potencial dos metabólitos produzidos pelo fungo Beauveria bassiana, toxinas puras (beauvericina, basianina, tenellina, oosporeina) e extratos brutos foram testados em diferentes ensaios de atividade citotóxica e antimicrobiana. Os resultados mostram que a produção de beauvericina (BEA) foi significativamente diferente entre todos os isolados e sugerem uma ativa participação desses metabólitos na morte do inseto, mostrando diferenças estatisticamente significativas entre a CC50 de BEA sobre a linhagem celular Spodoptera frugiperda SF-9 (2,81 e 6,94 μM) e os valores das outras micotoxinas (4,23 - 11,95 μM). Adicionalmente, demonstrou-se o efeito no desenvolvimento da ferrugem e redução na germinação. Todos os tratamentos dos metabólitos puros e dos extratos brutos provenientes do crescimento do fungo B. bassiana apresentaram efeitos inibitórios sobre as diferentes espécies de bactérias utilizadas nos ensaios mostrando atividade bactericida contra o gênero Proteus sp. e bacteriostática sobre os gêneros Staphylococcus sp., Klebsiella sp., Salmonella sp .e E. coli. Da mesma forma, as enzimas digestivas β-glicosidases e Leucina-aminopeptidase (LAP) da broca gigante da cana-de-açúcar Telchin licus licus foram estudadas visando o controle da praga. Os resultados mostraram que as β–glicosidases da broca possuem uma Km e Vmax para p-nitrofenil-β-D-glicopiranosídeo (pNβG) de 1,74 mM e 0,005 mmol/min/mg de proteína respectivamente, a melhor atividade da enzima foi encontrada com pH 6,0 e 7,0 e temperatura entre 50 e 55° C. Do mesmo modo, demonstrou-se o efeito de diferentes inibidores e ativadores da enzima, registrando para Mg2+ o maior incremento em atividade. Na comparação da atividade especifica de LAPs com outros insetos, Hypothenemus hampei mostrou a maior atividade. T. licus licus possui 3 isoformas da enzima que são inibidas completamente com bestatin 0,1 mM a pH 7,0. Adicionalmente, um completo estudo da atividade holocelulase do fungo Schizophyllum commune demonstrou o efeito indutor do carboximetilcelulose (CMC) 1% e das diferentes fontes de carbono na produção das enzimas, aparentes Km e Vmax para pNβG das β–glicosidases de 0,303 mM e 0,504 mmol/min/mg de proteína, a melhor atividade da enzima foi a temperatura entre 50 - 60˚ C e pH 7,0. Finalmente, usando microscopia eletrônica de varredura (MEV) o mecanismo físico usado pelo fungo para degradar bambu (Guadua angustifolia) foi observado e o potencial dos metabólitos produzidos avaliado. Os dados aqui apresentados constituem uma valiosa ajuda no desenho de estratégias voltadas a geração de plantas resistentes aos insetos-praga estudados, na busca de novos compostos antibacterianos e no aproveitamento de resíduos lignocelulósicos para produção de álcool de segunda geração. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Biotechnology aims to address several problems affecting mankind. For this reason, many molecules should be explored as tool to develop new alternatives solutions. Metabolites produced by fungi have usually double action, which allow approach theirs potentials use in different industrial applications in areas such as pharmacology, agroindustry, bioprocess, environmental technology and bioconversion. In order to establish the potential of metabolites from Beauveria bassiana fungus, the cytotoxicity and antimicrobial activity of pures toxins (beauvericin, bassianin, tenellin, oosporein) and crude extracts were tested. The results show that beauvericin (BEA) production was significantly different among all isolates and suggest an active participation of these metabolites in the insect’s death. Statistical difference was found when BEA CC50 values on cell line Spodoptera frugiperda SF-9 (2.81 and 6.94 μM) were compared with those values from others mycotoxins (4.23 - 11.95 μM). Additionally, it was shown an effect on the development of rust, and reduced germination. All treatments of pure metabolites and crude extracts from B. bassiana growth showed inhibitory effects on different species of bacteria used in bioassays, showing bactericidal activity on the genus Proteus sp. and bacteriostatic effect on the genus Staphylococcus sp., Klebsiella sp., Salmonella sp. and E. coli. Likewise, digestive enzymes β-glucosidases and Leucine aminopeptidase (LAP) from sugarcane giant borer Telchin licus licus were studied in order to control the insect pest. The results showed apparent Km and Vmax towards p-nitrophenyl-β-D-glucopyranoside of 1.74 mM and 0.005 mmol/min/mg of protein respectively for β-glucosidases, the highest enzyme activity resulted with pH between 6.0 and 7.0 and temperature between 50 e 55 °C. Besides, it was shown an effect of activators and inhibitors on the enzyme with major increments with Mg2+. The LAP specific activity was compared among different insects and Hypothenemus hampei exhibited the highest activity. T. licus licus has three isoforms that are inhibited completely with 0.1 mM bestatin at pH 7.0. Finally, a complete study of holocellulase activity from Schizophyllum commune fungus showed inducing effect of 1% carboxymethyl-cellulose CMC and different carbon sources on enzyme production. Km and Vmax towards p-nitrophenyl-β-D- glucopyranoside (pNβG) of β-glucosidases were 0.303 mM and 0.504 mmol / min / mg protein respectively, the highest enzyme activity resulted with temperature between 50 - 60˚ C and pH 7.0. Finally, by using scanning electron microscopy (SEM), the physical mechanism used by the fungus to degrade bamboo (Guadua angustifolia) was observed and the potential of metabolites produced was evaluated. The data presented here constitute a valuable contribution in the design of strategies to generate plants resistant to insect pests, in search of new antibacterial compounds and the use of lignocellulosic residues for production of second generation biofuels.

Page generated in 0.0926 seconds