Dentre os vários fatores que podem influenciar a polarização das respostas imunológicas nos animais destacam-se o tipo do agente agressor envolvido, as células apresentadoras de antígenos atuantes no processo e o microambiente formado pelas citocinas. Diferentes perfis de citocinas podem determinar o curso da doença, uma vez que distúrbios no equilíbrio da produção e liberação destes polipeptídeos têm papel significativo no desencadeamento e agravamento de diversas enfermidades. Vírus podem interferir com as funções das citocinas em vários níveis, influenciando na natureza da resposta imune do hospedeiro. Este desequilíbrio entre a produção de citocinas do tipo Th1 e Th2 é geralmente considerado como uma das causas da cronificação das infecções por retrovírus. O VLB, assim como outros retrovírus, também possui esta capacidade de manipular a resposta imune do hospedeiro a fim de direcionar os estágios alinfocitóticos (AL) e de linfocitose persistente (LP). No entanto, seu efeito diretamente sobre as citocinas no sangue e leite dos animais infectados ainda não foi completamente elucidado. Desta forma, o presente estudo objetivou a avaliação da resposta imune contra o VLB em vacas naturalmente infectadas por meio da quantificação de um perfil abrangente de citocinas presentes tanto no soro sanguíneo como no lácteo minimizados outros aspectos de estimulação que não fossem a presença do próprio vírus in vivo. Para tanto foram coletadas amostras de sangue e leite de 11 animais divididos em seus respectivos grupos experimentais (4, 3 e 4 animais para os grupos negativo, AL e LP, respectivamente) e determinadas as concentrações séricas e lácteas de IL-1β, IL-4, IL-10, TNF-α e IFN-γ. Para as comparações entre os grupos utilizou-se o teste não paramétrico de Kruskal-Wallis e quando estes apresentaramse significativos aplicou-se \"pós-teste\" para verificar onde tal diferença ocorreu. O nível de significância aplicado nos testes foi de 5 % (P≤0,05), sempre considerando hipóteses alternativas bicaudais. Verificou-se que não houve diferença nas concentrações das citocinas IL-1β, IL-4, IFN-γ e TNF-α no sangue dos animais pertencentes aos diferentes grupos experimentais. Quanto às concentrações das citocinas no soro lácteo dos bovinos testados nos diferentes grupos, os resultados demonstraram comportamentos semelhantes aos habitualmente descritos na literatura científica para o sangue periférico, sugerindo que a atuação do VLB sobre a glândula mamária promova interações análogas às observadas sistemicamente. Os resultados obtidos apontam para um envolvimento do VLB sobre o perfil de citocinas da glândula mamária nos animais sororreagentes. / Among the many factors that can influence the polarization of immune responses in animals include the type of the offending agent involved, the antigen-presenting cells active in the process and the microenvironment formed by the cytokine. Different profiles of cytokines may determine the course of the disease, since disturbances in the balance of production and release of these polypeptides play a significant role in triggering and worsening of many diseases. Viruses can interfere with the functions of cytokines at various levels, influencing the nature of the host immune response. This imbalance in cytokine production from Th1 and Th2 is generally regarded as a cause of chronic infections by retroviruses. The BLV, like other retroviruses, also possess this ability to manipulate the host immune response in order to drive the stages non-lymphocytotic and persistent lymphocytosis. However, its effect directly on cytokines in blood and milk of infected animals has not been fully elucidated. Thus, this study aimed at evaluating the immune response against the BLV in cows naturally infected by quantifying a comprehensive profile of cytokines present in both the serum and in whey minimized others aspects of stimulation that was not the presence of the virus itself in vivo. For this purpose, samples of blood and milk of 11 animals divided into their respective experimental groups (4, 3 and 4 animals for groups negative, PL- and PL+, respectively) and certain whey and serum concentrations of IL-1β, IL- 4, IL-10, TNF-α and IFN-γ. For comparisons between groups used the nonparametric Kruskal-Wallis test and when they showed up was applied to significant \"post test\" to see where this difference occurred. The level of significance in the tests was 5 % (P≤ 0.05), when considering two-tailed alternative hypotheses. There was no difference in the concentrations of IL-1β, IL-4, IFN-γ and TNF-α in the blood of animals belonging to the different experimental groups. The concentrations of cytokines in the whey of cattle in different groups, the results showed behaviors similar to those usually described in scientific literature to the peripheral blood, suggesting that the action of BLV on the mammary gland promotes interactions similar to those seen systemically. The results indicate an involvement of BLV on the cytokine profile of the mammary gland in animals seropositive.

Thesis (MSc (Production Animal Studies)--University of Pretoria, 2007. / Includes bibliographical references.

A leucose bovina enzoótica (LBE) é uma enfermidade causada por um retrovírus que possui duas manifestações distintas em animais adultos, o linfossarcoma multicêntrico dos adultos e a linfocitose persistente (LP). O linfossarcoma multicêntrico dos adultos é caracterizado pela apresentação de tumores em diversos órgãos em bovinos com idade superior a dois anos. O presente trabalhou analisou o histórico clínico e os achados patológicos de 30 casos de leucose bovina enzoótica, diagnosticados de um total de 845 bovinos necropsiados no Setor de Patologia Veterinária da Universidade Federal do Rio Grande do Sul, entre o período de janeiro de 1999 a janeiro de 2011. Todos os bovinos afetados eram fêmeas de aptidão leiteira, com idade entre três e nove anos, sendo 27 da raça Holândes (90,0%), dois de raça mista (6,3%) e um Jersey (3,7%). Os principais sinais clínicos apresentados pelos bovinos foram alterações locomotoras caracterizadas por paresia progressiva dos membros, perda de peso, aumento do volume de linfonodos superficiais e exoftalmia. As lesões macroscópicas observadas eram caracterizadas por massas neoplásicas, de coloração branco-amareladas, acinzentadas ou róseas, encontradas nos linfonodos, coração, sobre a meninge da medula espinhal, abomaso, intestinos e rins. A infiltração tumoral sobre a meninge da medula espinhal foi observada em 24 animais, sendo que a região lombar (20/24) e cauda equina (11/24) foram frequentemente afetadas. Ocasionalmente as massas também foram observadas na região cervical (6/24), próximo à intumescência, e na região torácica (2/24). No exame histológico essas massas tumorais eram formadas por infiltrado difuso de linfócitos neoplásicos, sendo apresentada na maioria dos casos como células pequenas não clivadas. A ocorrência de linfossarcoma com infiltração na medula espinhal deve ser considerada no diagnóstico de enfermidades que cursam com alterações locomotoras em bovinos adultos de aptidão leiteira. / The enzootic bovine leukosis (EBL) is a disease caused by a retrovirus that has two distinct manifestations in adult animals, the multicentric lymphosarcoma and persistent lymphocytosis in adults (LP). The multicentric lymphosarcoma in adults is characterized by the presentation of tumors in various organs in cattle older than two years. This study analyzed the clinical history and pathological findings in 30 cases of EBL, diagnosed a total of 845 cattle necropsied in the Setor de Patologia Veterinária of Universidade Federal do Rio Grande do Sul, between the period January 1999 to January 2011. All affected cattle were dairy females, between three and nine years old, and 27 Holstein (90,0%), two cross breed (6,3%) and Jersey (3,7%). The main clinical signs shown by the cattle were changes, locomotor characterized by progressive paralysis of the limbs, weight loss, most prominently superficial lymph nodes and exophthalmus. The gross lesions were characterized by neoplasms masses, pale yellowish-white, grayish or pinkish, found in lymph nodes, heart, on the meninges of the spinal cord, abomasum, intestines and kidneys. The tumor infiltration on the meninges of the spinal cord was observed in 24 animals, and the lumbar (20/24) and cauda equina (11/24) were commonly affected. Occasionally, the masses were also observed in the cervical region (6/24), near the swelling, and in the thoracic region (2/24). In histological examination, these tumor masses were composed of diffuse infiltration of neoplastic lymphocytes, and in most cases presented as small noncleaved cells. The occurrence of lymphosarcoma infiltrating the spinal cord should be considered in the diagnosis of diseases which lead to changes in locomotor adult dairy cattle.

A leucose bovina enzoótica (LBE) é uma enfermidade causada por um retrovírus que possui duas manifestações distintas em animais adultos, o linfossarcoma multicêntrico dos adultos e a linfocitose persistente (LP). O linfossarcoma multicêntrico dos adultos é caracterizado pela apresentação de tumores em diversos órgãos em bovinos com idade superior a dois anos. O presente trabalhou analisou o histórico clínico e os achados patológicos de 30 casos de leucose bovina enzoótica, diagnosticados de um total de 845 bovinos necropsiados no Setor de Patologia Veterinária da Universidade Federal do Rio Grande do Sul, entre o período de janeiro de 1999 a janeiro de 2011. Todos os bovinos afetados eram fêmeas de aptidão leiteira, com idade entre três e nove anos, sendo 27 da raça Holândes (90,0%), dois de raça mista (6,3%) e um Jersey (3,7%). Os principais sinais clínicos apresentados pelos bovinos foram alterações locomotoras caracterizadas por paresia progressiva dos membros, perda de peso, aumento do volume de linfonodos superficiais e exoftalmia. As lesões macroscópicas observadas eram caracterizadas por massas neoplásicas, de coloração branco-amareladas, acinzentadas ou róseas, encontradas nos linfonodos, coração, sobre a meninge da medula espinhal, abomaso, intestinos e rins. A infiltração tumoral sobre a meninge da medula espinhal foi observada em 24 animais, sendo que a região lombar (20/24) e cauda equina (11/24) foram frequentemente afetadas. Ocasionalmente as massas também foram observadas na região cervical (6/24), próximo à intumescência, e na região torácica (2/24). No exame histológico essas massas tumorais eram formadas por infiltrado difuso de linfócitos neoplásicos, sendo apresentada na maioria dos casos como células pequenas não clivadas. A ocorrência de linfossarcoma com infiltração na medula espinhal deve ser considerada no diagnóstico de enfermidades que cursam com alterações locomotoras em bovinos adultos de aptidão leiteira. / The enzootic bovine leukosis (EBL) is a disease caused by a retrovirus that has two distinct manifestations in adult animals, the multicentric lymphosarcoma and persistent lymphocytosis in adults (LP). The multicentric lymphosarcoma in adults is characterized by the presentation of tumors in various organs in cattle older than two years. This study analyzed the clinical history and pathological findings in 30 cases of EBL, diagnosed a total of 845 cattle necropsied in the Setor de Patologia Veterinária of Universidade Federal do Rio Grande do Sul, between the period January 1999 to January 2011. All affected cattle were dairy females, between three and nine years old, and 27 Holstein (90,0%), two cross breed (6,3%) and Jersey (3,7%). The main clinical signs shown by the cattle were changes, locomotor characterized by progressive paralysis of the limbs, weight loss, most prominently superficial lymph nodes and exophthalmus. The gross lesions were characterized by neoplasms masses, pale yellowish-white, grayish or pinkish, found in lymph nodes, heart, on the meninges of the spinal cord, abomasum, intestines and kidneys. The tumor infiltration on the meninges of the spinal cord was observed in 24 animals, and the lumbar (20/24) and cauda equina (11/24) were commonly affected. Occasionally, the masses were also observed in the cervical region (6/24), near the swelling, and in the thoracic region (2/24). In histological examination, these tumor masses were composed of diffuse infiltration of neoplastic lymphocytes, and in most cases presented as small noncleaved cells. The occurrence of lymphosarcoma infiltrating the spinal cord should be considered in the diagnosis of diseases which lead to changes in locomotor adult dairy cattle.

A leucose bovina enzoótica (LBE) é uma enfermidade causada por um retrovírus que possui duas manifestações distintas em animais adultos, o linfossarcoma multicêntrico dos adultos e a linfocitose persistente (LP). O linfossarcoma multicêntrico dos adultos é caracterizado pela apresentação de tumores em diversos órgãos em bovinos com idade superior a dois anos. O presente trabalhou analisou o histórico clínico e os achados patológicos de 30 casos de leucose bovina enzoótica, diagnosticados de um total de 845 bovinos necropsiados no Setor de Patologia Veterinária da Universidade Federal do Rio Grande do Sul, entre o período de janeiro de 1999 a janeiro de 2011. Todos os bovinos afetados eram fêmeas de aptidão leiteira, com idade entre três e nove anos, sendo 27 da raça Holândes (90,0%), dois de raça mista (6,3%) e um Jersey (3,7%). Os principais sinais clínicos apresentados pelos bovinos foram alterações locomotoras caracterizadas por paresia progressiva dos membros, perda de peso, aumento do volume de linfonodos superficiais e exoftalmia. As lesões macroscópicas observadas eram caracterizadas por massas neoplásicas, de coloração branco-amareladas, acinzentadas ou róseas, encontradas nos linfonodos, coração, sobre a meninge da medula espinhal, abomaso, intestinos e rins. A infiltração tumoral sobre a meninge da medula espinhal foi observada em 24 animais, sendo que a região lombar (20/24) e cauda equina (11/24) foram frequentemente afetadas. Ocasionalmente as massas também foram observadas na região cervical (6/24), próximo à intumescência, e na região torácica (2/24). No exame histológico essas massas tumorais eram formadas por infiltrado difuso de linfócitos neoplásicos, sendo apresentada na maioria dos casos como células pequenas não clivadas. A ocorrência de linfossarcoma com infiltração na medula espinhal deve ser considerada no diagnóstico de enfermidades que cursam com alterações locomotoras em bovinos adultos de aptidão leiteira. / The enzootic bovine leukosis (EBL) is a disease caused by a retrovirus that has two distinct manifestations in adult animals, the multicentric lymphosarcoma and persistent lymphocytosis in adults (LP). The multicentric lymphosarcoma in adults is characterized by the presentation of tumors in various organs in cattle older than two years. This study analyzed the clinical history and pathological findings in 30 cases of EBL, diagnosed a total of 845 cattle necropsied in the Setor de Patologia Veterinária of Universidade Federal do Rio Grande do Sul, between the period January 1999 to January 2011. All affected cattle were dairy females, between three and nine years old, and 27 Holstein (90,0%), two cross breed (6,3%) and Jersey (3,7%). The main clinical signs shown by the cattle were changes, locomotor characterized by progressive paralysis of the limbs, weight loss, most prominently superficial lymph nodes and exophthalmus. The gross lesions were characterized by neoplasms masses, pale yellowish-white, grayish or pinkish, found in lymph nodes, heart, on the meninges of the spinal cord, abomasum, intestines and kidneys. The tumor infiltration on the meninges of the spinal cord was observed in 24 animals, and the lumbar (20/24) and cauda equina (11/24) were commonly affected. Occasionally, the masses were also observed in the cervical region (6/24), near the swelling, and in the thoracic region (2/24). In histological examination, these tumor masses were composed of diffuse infiltration of neoplastic lymphocytes, and in most cases presented as small noncleaved cells. The occurrence of lymphosarcoma infiltrating the spinal cord should be considered in the diagnosis of diseases which lead to changes in locomotor adult dairy cattle.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-10T16:24:10Z No. of bitstreams: 1 Hamilton Pereira Santos.pdf: 661343 bytes, checksum: 002eebd8b1e7c7b5293fde2164fb6317 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-10T16:24:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Hamilton Pereira Santos.pdf: 661343 bytes, checksum: 002eebd8b1e7c7b5293fde2164fb6317 (MD5) Previous issue date: 2010-02-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The Bovine Enzootic Leukosis (BL) is a disease caused by bovine leukemia virus (BLV), a Deltaretrovirus of the Retroviridae family, characterized by lymphocyte proliferation and lymphosarcoma, mainly distributed in dairy cattle. Based on national and international literature was found that all continents are affected by BLV, including Brazil. The state of Maranhão is characterized by intense trading of cattle from various regions of the country, where the presence of the EBL was found. This work aimed to study the prevalence and risk factors associated with EBL in the dairy herd of the state of Maranhao and the evaluation of a microimmunediffusion technique (micro-AGID) in agar gel for the diagnosis of EBL. In order to know the seroprevalence and risk factors associated with EBL, a total of 920 blood samples were collected from 92 dairy HZ breed cattle distributed in 23 municipalities of the five that make up the regional dairy farming country. For the diagnosis of EBL, the AGID was used to test (kit produced by the Technological Institute of Parana - TECPAR). The estimated prevalence was of 53.80% of seropositive animals, distributed in98.91% (91/92) of herds, mainly affecting animals over the age of 48 months (P <0.05). The Bacabal, Sao Luis and Pedreiras regionals presented higher seropositive frequencies (63.50%, 61.87, and 60.62%%) respectively; Imperatriz, intermediate (41.18%), and Açailândia, the lowest (30.83%) (P<0.05). All municipalities had seropositive animals, with frequencies ranging from 22.50% (San Francisco Brejao) to 75.00% (Bernardo do Mearim). When analyzing the variables studied as potential risk factors for EBL a statistically significant association (P <0.05) was found between seropositive for EBL and repeated use of the same needle for blood sampling or vaccination (Odds Ratio - OR=2.76; IC – 1,73 - 4,93), repeated use of the same obstetric glove (OR=1.74; IC – 1.2 a 2.49), animal housing (OR=1.97; IC – 1.28 – 3.02 ), and lack of veterinary care (OR=1.42; IC – 1.06 – 1.88), was found. Knowledge of BEL by farmers and the purchase of animals from other farms for breeding did not interfere in seroreactivity to BEL (OR=1.09; IC – 0.82 – 1.44 and OR=0.88; IC – 0.57 – 1.36, respectively) (P> 0.05). In order to improve the development of a diagnostic test for EBL,micro-gel immuno-Agarose (micro-AGID) was used with simple protocol for obtaining the antigen compared to a macro-AGID. A total of 450 serum samples from 92 properties in 23 counties that make up the dairy state of Maranhao were used. The antigen used in micro-AGID was obtained by dialysis of supernatant of FLK cells infected by BLV against the polyethylenogricol. In micro-AGID 10 μl of antigen and positive serum control was used and 30 μl of test serum, in the macro-AGID 25 μl of all reagents wereused. This produced by the Technological Institute of Parana (TECPAR). Of the sera compared, 259 (57.56%) and 245 (54.44%) showed positive results in micro-AGID and macro-AGID, respectively. There was a very good agreement between both techniques (K = 0.91), with sensitivity and specificity of the macro-AGID for micro-AGID of 93.43% and 98.43% with an accuracy of 95.96%. Micro-AGID showed clearer lines than those observed in the macro-AGID and reading can be made 24 hours before the macro-AGID. It is concluded that micro-AGID can be used successfully in the serological diagnosis of EBL, with the advantage of greater speed in issuing the results and obtaining the antigen with a simple technique. / A Leucose Enzoótica Bovina (LEB) é uma doença causada por um Deltaretrovirus da família Retroviridae, caracterizada por proliferação linfocitária e/ou formação de linfosarcomas, principalmente distribuída em bovinos leiteiros. O vírus da LEB está presente em todos os continentes. No Brasil foram encontrados 27,6% do rebanho leiteiro, infectado. O Estado do Maranhão se caracteriza por intensa comercialização de bovinos de várias regiões do país, onde foi constatada a presença da LEB. Neste trabalho se teve como objetivos, estudar a soroprevalência e fatores de riscos associado à LEB na Bacia Leiteira do Estado do Maranhão e aperfeiçoar técnica de imunodifusão em gel de agar (IDGA) para diagnóstico da LEB. Assim foram coletadas 920 amostras sanguíneas de 92 rebanhos leiteiros da raça Girolanda distribuídos em 23 municípios das cinco Regionais que compõem a bacia leiteira do Estado. Para o diagnóstico da LEB foi utilizada a prova de Imunodifusão em Gel deÁgar (IDGA). A prevalência estimada foi de 53,80% de animais sororeagentes, distribuídos em98,91% (91/92) dos rebanhos estudados, afetando principalmente animais de idade superior aos 48 meses (P<0,05). As Regionais Bacabal, São Luís e Pedreira apresentaram as freqüências de sororeatividade mais elevadas (63,50%, 61,87,% e 60,62%, respectivamente); Imperatriz, intermediária (41,18%); e Açailândia, a mais baixa (30,83%) (P<0,05). Todos os municípios apresentaram animais sororeagentes, com freqüências variando de 22,50% (São Francisco do Brejão) a 75,00% (Bernardo do Mearim). Ao se analisar as variáveis estudadas como potenciais fatores de risco para LEB foi verificada associação estatisticamente significativa (P<0,05) entre sororeagentes para LEB e uso repetido da mesma agulha para colheita de sangue ou vacinação (Odds Ratio – OR = 2,76; IC – 1,73 - 4,93), uso repetido da mesma luva obstétrica (OR=1,74; IC - 1,2 a 2,49), estabulação dos animais (OR=1,97; IC – 1,28 – 3,02) e ausência de assistência Veterinária (OR=1,42; IC – 1,06 – 1,88). O conhecimento da LEB pelos criadores e a aquisição de animais de outras criações parareprodução não interferiu na sororeatividade para LEB (OR=1,09; IC – 0,82 – 1,44 e OR=0,88; IC – 0,57 – 1,36, respectivamente) (P>0,05). Para aperfeiçoamento de uma prova de diagnóstico para LEB, utilizou-se a micro-imunodifusão em gel de agarose (micro-IDGA) usou-se protocolo simples para obtenção do antígeno comparativamente a uma macro-IDGA. Foram utilizadas 450 amostras de soro bovino provenientes de 92 propriedades dos 23 municípios que compõem a bacia leiteira do estado do Maranhão. O antígeno usado na micro-IDGA foi obtido por diálise frente ao polietilenogricol de sobrenadante de células FLK infectadas pelo VLEB. Na micro-IDGA utilizou-se 10 μl de antígeno e soro controle positivoe 30 μl do soro teste; na macro-IDGA 25 μl de todos os reagentes, produzidos pelo Instituto Tecnológico do Paraná (TECPAR). Dos soros comparados, 259 (57,56%) e 245 (54,44%) apresentaram resultados positivos na micro-IDGA e macro-IDGA, respectivamente. Houve ótima concordância entre as duas técnicas (K=0,91), com sensibilidade e especificidade da macro-IDGA em relação a micro-IDGA de 93,43% e 98,43%. A micro-IDGA apresentou linhas mais claras do que as observadas na macro-IDGA e a leitura pode ser feita 24 horas antes da macro-IDGA. Conclui-se que a micro-IDGA pode substituir a macro-IDGA no diagnóstico sorológico da LEB, com a vantagem de maior rapidez na emissão dos resultados e da obtenção do antígeno com técnica simples.

Dentre os vários fatores que podem influenciar a polarização das respostas imunológicas nos animais destacam-se o tipo do agente agressor envolvido, as células apresentadoras de antígenos atuantes no processo e o microambiente formado pelas citocinas. Diferentes perfis de citocinas podem determinar o curso da doença, uma vez que distúrbios no equilíbrio da produção e liberação destes polipeptídeos têm papel significativo no desencadeamento e agravamento de diversas enfermidades. Vírus podem interferir com as funções das citocinas em vários níveis, influenciando na natureza da resposta imune do hospedeiro. Este desequilíbrio entre a produção de citocinas do tipo Th1 e Th2 é geralmente considerado como uma das causas da cronificação das infecções por retrovírus. O VLB, assim como outros retrovírus, também possui esta capacidade de manipular a resposta imune do hospedeiro a fim de direcionar os estágios alinfocitóticos (AL) e de linfocitose persistente (LP). No entanto, seu efeito diretamente sobre as citocinas no sangue e leite dos animais infectados ainda não foi completamente elucidado. Desta forma, o presente estudo objetivou a avaliação da resposta imune contra o VLB em vacas naturalmente infectadas por meio da quantificação de um perfil abrangente de citocinas presentes tanto no soro sanguíneo como no lácteo minimizados outros aspectos de estimulação que não fossem a presença do próprio vírus in vivo. Para tanto foram coletadas amostras de sangue e leite de 11 animais divididos em seus respectivos grupos experimentais (4, 3 e 4 animais para os grupos negativo, AL e LP, respectivamente) e determinadas as concentrações séricas e lácteas de IL-1&beta;, IL-4, IL-10, TNF-&alpha; e IFN-&gamma;. Para as comparações entre os grupos utilizou-se o teste não paramétrico de Kruskal-Wallis e quando estes apresentaramse significativos aplicou-se \"pós-teste\" para verificar onde tal diferença ocorreu. O nível de significância aplicado nos testes foi de 5 % (P&le;0,05), sempre considerando hipóteses alternativas bicaudais. Verificou-se que não houve diferença nas concentrações das citocinas IL-1&beta;, IL-4, IFN-&gamma; e TNF-&alpha; no sangue dos animais pertencentes aos diferentes grupos experimentais. Quanto às concentrações das citocinas no soro lácteo dos bovinos testados nos diferentes grupos, os resultados demonstraram comportamentos semelhantes aos habitualmente descritos na literatura científica para o sangue periférico, sugerindo que a atuação do VLB sobre a glândula mamária promova interações análogas às observadas sistemicamente. Os resultados obtidos apontam para um envolvimento do VLB sobre o perfil de citocinas da glândula mamária nos animais sororreagentes. / Among the many factors that can influence the polarization of immune responses in animals include the type of the offending agent involved, the antigen-presenting cells active in the process and the microenvironment formed by the cytokine. Different profiles of cytokines may determine the course of the disease, since disturbances in the balance of production and release of these polypeptides play a significant role in triggering and worsening of many diseases. Viruses can interfere with the functions of cytokines at various levels, influencing the nature of the host immune response. This imbalance in cytokine production from Th1 and Th2 is generally regarded as a cause of chronic infections by retroviruses. The BLV, like other retroviruses, also possess this ability to manipulate the host immune response in order to drive the stages non-lymphocytotic and persistent lymphocytosis. However, its effect directly on cytokines in blood and milk of infected animals has not been fully elucidated. Thus, this study aimed at evaluating the immune response against the BLV in cows naturally infected by quantifying a comprehensive profile of cytokines present in both the serum and in whey minimized others aspects of stimulation that was not the presence of the virus itself in vivo. For this purpose, samples of blood and milk of 11 animals divided into their respective experimental groups (4, 3 and 4 animals for groups negative, PL- and PL+, respectively) and certain whey and serum concentrations of IL-1&beta;, IL- 4, IL-10, TNF-&alpha; and IFN-&gamma;. For comparisons between groups used the nonparametric Kruskal-Wallis test and when they showed up was applied to significant \"post test\" to see where this difference occurred. The level of significance in the tests was 5 % (P&le; 0.05), when considering two-tailed alternative hypotheses. There was no difference in the concentrations of IL-1&beta;, IL-4, IFN-&gamma; and TNF-&alpha; in the blood of animals belonging to the different experimental groups. The concentrations of cytokines in the whey of cattle in different groups, the results showed behaviors similar to those usually described in scientific literature to the peripheral blood, suggesting that the action of BLV on the mammary gland promotes interactions similar to those seen systemically. The results indicate an involvement of BLV on the cytokine profile of the mammary gland in animals seropositive.

Diferentes populações de leucócitos desempenham papeis fundamentais na eliminação de agentes invasores através da sua fagocitose e destruição, utilizando-se de mecanismos dependentes (metabolismo oxidativo) e independentes de oxigênio. Baseando-se na hipótese de que o vírus da Leucose Enzoótica Bovina, uma enfermidade crônica, que afeta, particularmente, os órgãos ricos em tecido linfóide destes animais, altera quantitativa e qualitativamente as subpopulações de leucócitos circulantes dos bovinos, influenciando na qualidade da resposta imunológica inata destes animais, o presente estudo avaliou a produção intracelular de peróxido de hidrogênio (H2O2) por leucócitos circulantes, frente estímulo in vitro com forbol 12-miristato 13-acetato (PMA), lipopolissacarídeos de Escherichia coil (LPS) e após fagocitose de Staphylococcus aureus conjugados com iodeto de propídio (Sa-PI). Para tal, células foram obtidas de cinco vacas negativas no diagnóstico para LEB, de cinco vacas naturalmente infectadas pelo vírus da leucose bovina (VLB), alinfocitóticas, e de cinco vacas infectadas, manifestando linfocitose persistente (LP), e analisadas por citometria de fluxo. Foi averiguada a normalidade da distribuição dos resultados, utilizando-se do teste de Anderson-Darling, e sua homoscedasticidade, utilizando-se do teste F ou do teste de Lavene. Para a análise das freqüências observadas, foi utilizado o teste Qui-quadrado. Para a avaliação das diferenças entre as médias dos resultados obtidos, foram feitos os testes de análise de variância (One-way ANOVA), de Tukey-Kramer, teste t de Student, de Mann-Whitney ou de Kruskal-Wallis. A porcentagem média total de células produzindo H2O2, caracterizada pela intensidade de fluorescência da 2,7-diclorofluoresceína, no ensaio sem estímulo in vitro, de 30,60%, foi menor (p=0,005) que aquela observada no ensaio com adição in vitro de LPS, de 52,00%, e que aquela obtida no ensaio com adição in vitro de PMA, de 63,13%. A porcentagem média total de células produzindo H2O2 no ensaio com estímulo por fagocitose in vitro de SaPI, de 47,47%, não diferiu da observada no ensaio sem estímulo. As porcentagens médias totais de células produzindo H2O2 não diferiram entre os ensaios em que houve prévio estímulo in vitro. Não houve diferença na porcentagem de leucócitos que estavam produzindo H2O2, entre os grupos experimentais, todavia, a produção intracelular média de H2O2, sem estímulo in vitro (p=0,007), após adição in vitro de PMA (p<0,001), de LPS (p=0,001) ou após fagocitose (p=0,002), de leucócitos obtidos de animais apresentando LP, foi menor que aquela verificada em células provenientes de animais soronegativos e de animais soropositivos alinfocitóticos. A porcentagem de leucócitos realizando fagocitose, caracterizada pela intensidade de fluorescência do iodeto de propídio, entre as células obtidas de animais com LP, de 7,20%, foi menor que aquela verificada nas amostras coletadas de animais soronegativos, de 12,90%, e soropositivos alinfocitóticos, de 14,70% (p=0,047). Além disso, as células provenientes de animais com LP apresentaram uma menor intensidade de fagocitose que aquela observada em leucócitos de animais soronegativos e soropositivos alinfocitóticos (p<0,001). Assim, os resultados obtidos demonstram uma vulnerabilidade funcional em leucócitos sangüíneos obtidos de animais infectados pelo VLB, manifestando LP. / Different leukocyte populations play key roles on the elimination of foreign antigens through phagocytosis and killing by oxygen-independent and -dependent (respiratory burst) mechanisms. Assuming that Enzootic Bovine Leukosis virus (BLV), that causes a chronic disease, and affects, mainly, lymphoid tissues, alters bovine circulating leukocyte subpopulations quantitatively and qualitatively, and influences the innate immune response, this study evaluated the intracellular production of hydrogen peroxide (H2O2) of circulating leukocytes after in vitro stimuli with phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA), Escherichia coli lipopolysaccharides (LPS), or phagocytosis of propidium iodide-labeled Staphylococcus aureus (PI-Sa). Cells were obtained from five BLV-negative cows, five naturally BLV-infected, non-lymphocytotic cows, and five BLV-positive cows with persistent lymphocytosis (PL), and analyzed by flow cytometry. Normality was tested using the Anderson-Darling test, followed by an F test or a Lavene\'s test to analyze the equality of variances. Differences among frequencies were tested using the Qui-square test. Differences among means were verified by a one way analysis of variance (ANOVA), followed by a Turkey-Kramer test, or a Student t-test, a Mann-Whitney U-test, or a Kruskal-Wallis test. Mean total percentage of H2O2-producing cells, characterized by the intensity of 2,7-dichlorofluorescein fluorescence, in the assay without in vitro stimulus (30.60%) was smaller (p=0.005) than that verified in the assay after in vitro addition of LPS (52.00%), and after addition of PMA (63.13%). Mean total percentage of H2O2-producing cells in the assay with stimulus by in vitro phagocytosis of PI-Sa (47.47%) was not different from that verified in the assay without in vitro stimulus. Mean total percentages of H2O2-producing leukocytes did not differ among assays with previous in vitro stimuli. There was no difference in the percentages of H2O2-producing leukocytes, among cells obtained from cows that belonged to different groups. However, mean intracellular H2O2-production of leukocytes obtained from BLV-infected cows, presenting PL, without in vitro stimulus (p=0.007), after in vitro addition of PMA (p<0.001), or LPS (p=0.001), or after phagocytosis (p=0.002) was smaller than that verified in leukocytes obtained from non-infected and from BLV-infected, non-lymphocytotic, cows. The percentage of leukocytes that were carrying out phagocytosis, characterized by the intensity of propidium iodide fluorescence, among cells obtained from BLV-infected cows, presenting PL (7.20%), was smaller (p=0.047) than that verified among cells obtained from non-infected and from BLV-infected (12.90%), non-lymphocytotic (14.70%), cows. Furthermore, leukocytes obtained from BLV-infected cows, presenting PL, showed smaller phagocytosis intensity (p<0.001) than leukocytes obtained from non-infected and from BLV-infected, non-lymphocytotic, cows. Therefore, results show a functional vulnerability of circulating leukocytes obtained from BLV-infected, lymphocytotic cows.

O vírus da leucose enzoótica bovina (VLEB) pode interferir na proporção e na funcionalidade dos linfócitos B e das demais células sanguíneas. Acreditando-se que essas alterações pudessem interferir nos mecanismos de defesa da glândula mamária, o presente estudo avaliou funcionalmente os fagócitos sanguíneos e lácteos de vacas naturalmente infectadas pelo VLEB, por meio da expressão de diferentes receptores de superfície celular de fagócitos e linfócitos; da morte celular dos fagócitos e do linfócito B; pelo potencial de fagocitose e produção intracelular de peróxido de hidrogênio pelas células CD14+ e CH138+. Foram selecionadas nove vacas negativas para a LEB (grupo negativo), dez positivas sem linfocitose (grupo AL) e seis positivas com linfocitose persistente (grupo LP). Independente do perfil hematológico das vacas positivas para a LEB, nas amostras de sangue foram observadas menor expressão de células mononucleares CD14+, de linfócitos T (CD3+) e de linfócitos B CD21+ CD11b+ e maior expressão de linfócitos B (CD21+). As vacas do grupo LP apresentaram menores quantidades de linfócitos T auxiliares (CD3+ CD4+) e de linfócitos B CD21+ CD5- CD11b- e maiores quantidades de linfócitos B CD21+ CD5+ CD11b+. Menores quantidades de linfócitos B CD21+ CD5+ foram observados nas vacas do grupo AL do que nas vacas do grupo negativo. As vacas do grupo LP apresentaram menores índices de fagocitose por Escherichia coli pelas células mononucleares CD14+, menor produção de peróxido de hidrogênio e menores índices de fagocitose por Staphylococcus aureus pelas células polimorfonucleares CH138+. As vacas do grupo LP apresentaram menores índices de necrose, de apoptose e/ou necrose e maior viabilidade das células mononucleares CD14+, das células polimorfonucleares CH138+ e dos linfócitos B (CD21+). Apenas os linfócitos B (CD21+) das vacas do grupo LP apresentaram menores índices de morte por apoptose, e as células mononucleares CD14+ das vacas do grupo AL manifestaram maiores índices de apoptose e/ou necrose do que as vacas negativas. Independente do perfil hematológico das vacas, nas amostras de leite foram observadas maiores quantidades de macrófagos e maiores expressões de linfócitos T (CD3+) e de linfócitos B (CD21+). As vacas do grupo AL apresentaram maior quantidade de linfócitos B (CD21+) do que as vacas negativas. As vacas do grupo LP apresentaram menores quantidades de linfócitos T citotóxicos (CD3+ CD8+), de linfócitos B CD21+ CD11b+ e de linfócitos B CD21+ CD5+ CD11b+ e maior quantidade de linfócitos B CD21+ CD5- CD11b-. As vacas do grupo AL apresentaram menores índices de fagocitose por Escherichia coli pelos macrófagos CD14+ e pelos leucócitos CH138+ e as vacas do grupo LP apresentaram maior produção de peróxido de hidrogênio intracelular. As vacas positivas para LEB apresentaram maiores índices de morte por necrose dos macrófagos CD14+ e dos linfócitos B (CD21+) e menores índices de morte por apoptose dos macrófagos CD14+, dos leucócitos CH138+ e dos linfócitos B (CD21+). Estas vacas também apresentaram maior viabilidade dos macrófagos CD14+ e dos leucócitos CH138+. As vacas do grupo LP apresentaram maiores índices de apoptose e/ou necrose dos macrófagos CD14+, de necrose de leucócitos CH138+ e de viabilidade de linfócitos B (CD21+). Resultados permitem concluir que a o VLEB altera a resposta imune da glândula mamária. / The enzootic bovine leukemia virus (BLV) can influence the amount of lymphocytes B and other blood cells and their functions. Believing that these changes could interfere in the defense mechanisms of the mammary gland, this study evaluated blood and milk phagocytes functions from cows naturally infected VLEB through the expression of different cell surface receptors of phagocytes and lymphocytes; from death cell of phagocytes and B lymphocytes; the phagocytosis and intracellular production of hydrogen peroxide by CD14+ and CH138+ cells. We chose nine cows negative for the LEB (negative group), ten positive without lymphocytosis (LA group) and six positive with persistent lymphocytosis (LP group). In blood samples of positive cows for BLV, it was observed smaller expression of CD14+ mononuclear, T lymphocytes (CD3+) and CD21+ CD11b+ B lymphocytes, along with increased expression of B lymphocytes (CD21+). Cows of the LP group had lower amounts of T helper lymphocytes (CD3+ CD4+) and CD21+ CD5- CD11b- B lymphocytes and higher amounts of CD21+ CD5+ CD11b+ B lymphocytes. In cows of AL group it was observed lower amounts of CD21+ CD5+ B lymphocytes than in cows of negative group. Cows of LP group had lower rates of Escherichia coli phagocytosis by CD14+ mononuclear cells, lower intracellular production of hydrogen peroxide and lower rates of phagocytosis of Staphylococcus aureus by CH138+ polymorphonuclear cells. Cows of LP group showed less necrosis, apoptosis and/or necrosis and increased viability of CD14+ mononuclear cells, CH138+ polymorphonuclear cells and B lymphocytes (CD21+). Only the B-lymphocytes (CD21+) of the cows in the LP group showed less apoptosis, and CD14 + mononuclear cells from cows in the AL group showed higher rates of apoptosis and/or necrosis than the ones from negative cows. In the milk sample, the positive cows showed higher amounts of macrophages and increased expression of T lymphocytes (CD3+) and B lymphocytes (CD21+). Cows of AL group showed a higher amount of B lymphocytes (CD21+) than negative cows. Cows of LP group had lower amounts of T cytotoxic lymphocytes (CD3+, CD8+), CD21+ CD11b+ B lymphocytes and CD21+, CD5+, CD11b+, B lymphocytes and increased amount of CD21 + CD5- CD11b- B lymphocytes. Cows of the AL group had lower rates of Escherichia coli phagocytosis by CD14+ macrophages and CH138+ leukocytes and cows of group LP had higher production of intracellular hydrogen peroxide. The positive cows for LEB had higher rates of death by necrosis of CD14+ macrophages and B lymphocytes (CD21+) and lower rates of apoptosis of CD14+ macrophages, CH138+ leukocytes and B lymphocytes (CD21+). These cows also had higher viability of CD14+ macrophages and CH138+ leukocytes. Cows on the LP group had higher rates of apoptosis and/or necrosis of CD14+ macrophages, necrosis of CH138+ leukocytes and viability of B lymphocytes (CD21+). Results suggested that the VLEB influence the immune response of the mammary gland.

A Leucose Enzoótica dos Bovinos (LEB) é uma enfermidade neoplásica, infectocontagiosa, pluri-sintomática, de evolução crônica, que compromete os órgãos linfopoiéticos e está associada ao desenvolvimento de linfocitose persistente (LP) e linfossarcoma. Acarreta diminuição na produção, quer por seus efeitos danosos diretos, quer pelos indiretos. No entanto, seu efeito na função e na quantidade das diferentes subpopulações de linfócitos, assim como seu papel no estabelecimento de outras doenças oportunistas, ainda não está claro. O presente estudo avaliou a resposta imunitária de bovinos da raça Holandês Preto e Branco naturalmente infectados pelo vírus da LEB (VLB), após desafio antigênico fornecido por vacinação contra o vírus da febre aftosa. Para tal, foram coletadas amostras sanguíneas antes do desafio e, após o desafio, semanalmente, por sete semanas, de dez vacas soropositivas, sem LP; de dez vacas soropositivas, manifestando LP; e de dez vacas soronegativas. Foram avaliadas as alterações quantitativas das diferentes subpopulações de leucócitos circulantes; a função dos linfócitos B, por meio da quantificação de diferentes isotipos de imunoglobulinas (Ig) séricas; os índices de proliferação linfocitária; os índices de morte celular por apoptose ou por necrose; e as concentrações séricas de interleucina-10 (IL-10), IL-12, inteferon- (IFN-&gamma;) e fator de necrose tumoral-&alpha; (TNF-&alpha;). Foi verificada a normalidade da distribuição dos resultados obtidos, utilizando-se do teste de Anderson-Darling, e sua homoscedasticidade, utilizando-se do teste F (para dados que apresentaram distribuição normal) ou do teste de Lavene (para dados que não apresentaram distribuição normal). Para a avaliação das diferenças entre as médias dos resultados obtidos, de acordo, respectivamente, com a ocorrência ou não de homoscedasticidade, foram feitos, para dados com distribuição normal, os testes de análise de variância (One-way ANOVA), seguida do teste de Tukey-Kramer ou o teste t; e, para dados que não apresentaram distribuição normal, o teste de Mann-Whitney ou o teste de Kruskal-Wallis. Para todos os resultados, foram consideradas significantes as análises que apresentaram p&le;0,05. Verificou-se que não houve diferença nas concentrações séricas de IgG1, de IgM e de IgA, tanto entre os tempos de coleta, quanto, a cada tempo, entre animais pertencentes aos diferentes grupos. As concentrações séricas de IgG2 aumentaram, após a vacinação, em todos os animais (p<0,05). Todavia, 17 dias após o desafio antigênico, as concentrações séricas de IgG2, em animais manifestando LP foram, a cada tempo de coleta, menores (p<0,01) que aquelas verificadas nos animais pertencentes aos demais grupos, indicando que animais com LP apresentam resposta humoral menos intensa e menos duradoura. Observou-se que ocorreu um aumento no índice de proliferação de linfócitos sanguíneos (p<0,01), 24 dias após a vacinação contra o vírus da febre aftosa, independente da presença de infecção pelo VLB. A partir deste momento, ocorre um aumento na porcentagem de linfócitos &gamma;&sigma; circulantes (p<0,05) e posterior diminuição nas concentrações séricas de IgG2 (p<0,05), indicando regulação desta resposta humoral por linfócitos &gamma;&sigma;. Em bovinos com LP, o aumento na porcentagem de linfócitos circulantes foi maior (p<0,05), ocasionando diminuição mais intensa e mais precoce nas concentrações séricas de IgG2. Constatou-se que a LP ocorre em decorrência de menor índice de apoptose, posto que as porcentagens de leucócitos sofrendo processo de apoptose foram menores (p&le;0,001) entre as células obtidas de animais manifestando LP, do naquelas coletadas dos animais pertencentes aos demais grupos. Verificou-se que as concentrações séricas das citocinas de perfil Th1, IL-12 e IFN-&gamma;, são maiores em amostras sangüíneas de animais infectados pelo VLB, alinfocitóticos (p<0,01), ao passo que as concentrações séricas das citocinas de perfil Th2, IL-10 e TNF-&alpha;, são maiores em amostras sangüíneas de animais infectados manifestando LP (p<0,01), indicando que alterações no perfil sérico de citocinas podem ser causa ou consequência da LP. Em resposta ao desafio vacinal, ocorre uma elevação nas concentrações séricas de IL-10 (p<0,01), de TNF-&alpha; (p=0,005) e de IFN-&gamma; (p<0,01), três dias após o desafio, e de IL-12 (p<0,001), dez dias após o desafio. A elevação na concentração sérica de IL-10 perdura até 31 dias após o desafio e pode ser responsável pelo maior índice de proliferação de linfócitos &gamma;&sigma; verificado a partir de 31 dias após a vacinação. Foi observado que a maioria dos linfócitos B circulantes, em bovinos, consiste de linfócitos B1 e, em animais infectados pelo VLB, a LP ocorre em decorrência de um aumento na porcentagem de linfócitos B1a (p<0,05). Além disso, em animais infectados pelo VLB, apresentando LP, as relações entre linfócitos T auxiliares e citotóxicos são menores (p<0,01) e a porcentagem de linfócitos &gamma;&sigma; é maior (p<0,01), indicando atividade viral nas células infectadas. Assim, os resultados permitem-nos concluir que animais infectados pelo VLB, manifestando LP, apresentam alterações na resposta imunitária frente vacinação contra o vírus da febre aftosa. / Enzootic Bovine Leukosis (EBL) is an infectious, multi-symptomatic, chronic, neoplastic disease, which undermines the lymphopoietic organs and is associated with the development of persistent lymphocytosis (PL) and lymphosarcoma. Infected animals present a decrease of production, either by its direct or its indirect harmful effects. However, its effect on the function and quantity of different lymphocyte subpopulations, as well as its role in the establishment of other opportunistic diseases, are unclear. This study evaluated the immune response of Holstein dairy cattle naturally infected with Bovine Leukosis Virus BLV, after antigen challenge provided by vaccination against foot and mouth disease (FMD) virus. To this end, blood samples were collected before challenge and after challenge, weekly, for seven weeks, from ten seropositive cows without PL, from ten seropositive cows expressing PL, and from ten seronegative cows. We evaluated the quantitative changes of different subpopulations of leukocytes; the function of B lymphocytes, through the quantification of different isotypes of immunoglobulins (Ig) serum concentration; the rate of lymphocyte proliferation; the rate of cell death by apoptosis or necrosis; and the serum concentrations of interleukin-10 (IL-10), IL-12, inteferon-&gamma; (IFN-&gamma;), and tumor necrosis factor-&alpha; (TNF-&alpha;). It was verified the normality of distribution of the results using the Anderson-Darling test, and their homoscedasticity, using the F test (for data with normal distribution) or the Levene test (for data without normal distribution). For the evaluation of differences between the average results, according respectively to the presence or absence of homoscedasticity, we used, for data with normal distribution, One-way ANOVA test, followed by the Tukey-Kramer test or the t test, and, for data without normal distribution, the Mann-Whitney test or the Kruskal-Wallis test. Results with p&le;0.05 were considered statistically significant. There were no differences related to serum IgG1, IgM, and IgA concentrations, both among sampling time and, every time, among animals belonging to different groups. IgG2 serum concentrations increased after vaccination in all animals (p<0.05). However, in animals expressing PL, each collection time, 17 days after antigen challenge, IgG2 serum concentration was lower (p<0.01) than those observed in animals belonging to other groups, indicating that animals with PL present less intense and less enduring humoral response. It was observed that there was an increase in the rate of lymphocyte proliferation (p<0.01) 24 days after vaccination against FMD virus, irrespective of the presence of infection by BLV. From this moment, there was an increase in the percentage of &gamma;&sigma;-lymphocytes (p<0.05) and a subsequent decrease in serum IgG2 (p<0.05), indicating regulation of this humoral response by &gamma;&sigma;-lymphocytes. In cattle with PL, the increase in the percentage of &gamma;&sigma;-lymphocytes was higher (p<0.05), leading to more intense and earlier decrease in IgG2 serum concentration. It was found that PL is due to a lower rate of apoptosis, since the percentage of leukocytes undergoing apoptosis was lower (p&le;0.001) among cells obtained from animals expressing PL, when compared to those collected from animals from the other groups. It was found that serum concentrations of Th1 cytokines, specifically IL-12 and IFN-&gamma;, were higher in blood samples from nonlymphocytotic infected animals (p<0.01), whereas serum concentrations of Th2 cytokines, particularly IL-10 and TNF-&alpha;, were higher in blood samples from infected animals expressing LP (p<0.01), indicating that changes in serum cytokines profile may be a cause or a consequence of PL. IL-10 (p<0.01), TNF-&alpha; (p=0.005), and IFN-&gamma; (p<0.01) serum concentrations increased three days after the challenge, and IL-12 serum concentration increased (p<0.001), ten days after the challenge. The increase in IL-10 serum concentration lasts until 31 days after the challenge and may account for the higher rate of &gamma;&sigma;-lymphocyte proliferation found from 31 days after vaccination. It was observed that the majority of circulating B lymphocytes in cattle consists of B1 lymphocytes and that, in BLV-infected animals, PL occurs due to an increase in the percentage of B1a lymphocytes (p<0.05). Moreover, in lymphocytotic BLV-infected animals, the rate between helper and cytotoxic Tlymphocytes are smaller (p<0.01) and the percentage of &gamma;&sigma;-lymphocytes is greater (p<0.01), indicating viral activity in infected cells. Thus, results allow us to conclude that lymphocytotic BLV-infected animals show changes in the immune response after vaccination against FMD virus.