Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-17Bitstream added on 2014-06-13T20:23:03Z : No. of bitstreams: 1 satrapa_ra_dr_botib.pdf: 444664 bytes, checksum: ea4f185d0abddba64ab9a9ce073f5407 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A fim de melhor compreender as diferenças entre zebuínos e taurinos em relação à resistência ao estresse térmico (ET), objetivou-se com o presente trabalho: (1) verificar se a adição de IGF-I ao meio de cultivo, na ausência de Soro Fetal Bovino (SFB), seria capaz de manter as taxas de produção embrionária semelhantes àquelas obtidas em meio de cultivo com SFB; (2) verificar se a adição de IGF-I ao meio de cultivo é mais eficiente em diminuir os efeitos deletérios do ET em embriões da raça Holandesa preto e branco (HPB) quando comparados aos da raça Nelore; (3) verificar se o efeito deletério do ET no desenvolvimento embrionário e na taxa de apoptose é mais acentuado em embriões da raça HPB, quando comparado aos da raça Nelore. No experimento 1, oócitos de vacas aneloradas oriundas de matadouro foram maturados, fertilizados com sêmen de touros da raça Nelore e, 10 horas pós inseminação (hpi), os embriões foram distribuídos ao acaso em quatro grupos, de acordo com a composição do meio de cultivo: SFB (5% de SFB + 0 ng/mL de IGF-I; n=165); IGF (0% de SFB + 51 100 ng/mL de IGF-I; n=163); SFB+IGF (5% de SFB + 100 ng/mL de IGF; n=169) e controle (0% de SFB + 0 ng/mL de IGF-I; n=168). Foram avaliadas as taxas de clivagem, mórula, blastocisto e blastocisto eclodido. Nos experimentos 2 e 3, oócitos de vacas Nelore e HPB oriundas de matadouro foram maturados em meio TCM 199, fertilizados com sêmen de touros das raças Nelore (n=6) e HPB (n=6), respectivamente, e cultivados em meio SOF (synthetic oviduct fluid, na ausência de SFB) até o estágio de blastocisto. Dadas 10 hpi, os embriões foram distribuídos ao acaso em quatro grupos: controle (cultivados na ausência de IGF a 39 oC); ET (cultivados na ausência de IGF e expostos a 41 oC, 96 hpi, por 9 horas, retornando a seguir para 39 oC); IGF (cultivados na presença de IGF a 39 oC) e ET/IGF (IGF e ET). No... / Not available

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2001-12-11Bitstream added on 2014-06-13T18:45:26Z : No. of bitstreams: 1 jacomini_jo_dr_jabo.pdf: 3623737 bytes, checksum: 3b6e9aca9b253bde7a9aa506de4fa862 (MD5) / Este estudo teve como objetivo acompanhar o processo de desenvolvimento testicular desde a fase indiferenciada até sua completa formação. Embriões e fetos de vacas da raça Nelore (Bos taurus indicus) foram obtidos em frigoríficos. Imediatamente após o abate das fêmeas, o útero era aberto e os embriões e fetos coletados. As gônadas e os embriões menores foram fixados em Bouin e processados para microscópica óptica convencional. Foi realizada a PCR (Reação em Cadeia da Polimerase) dos embriões cujo sexo não pode ser identificado macroscopicamente. A crista gonádica foi observada, primeiramente, em um embrião de 1,0 cm de comprimento. Em embriões com 2,5 cm de comprimento, a presença da albugínea permitiu a identificação do sexo. A espessura média da albugínea variou de 29,1 a 558,5 mm. O mediastino encontra-se localizado centralmente. Houve uma diminuição no espaço ocupado pelos cordões testiculares de 63,7 para 42,0% do volume total dos testículos. O seu diâmetro variou de 31,7 a 48,8 mm. O diâmetro das células germinativas (e dos seus núcleos) foi de 12,3 (6,6) a 16,9 (14,2) mm. A quantidade de células germinativas, por corte transversal de cordão, diminuiu de um máximo de 2,8 para 0,8. O número total de células germinativas aumentou de 16, no princípio da colonização da gônada, para 18,3 x 106 no final do estudo. O número de células de Sertoli, por corte transversal de cordão, variou de 10,0 a 16,2. Os resultados obtidos mostram que a origem e a formação dos testículos nos embriões e fetos de vacas da raça Nelore (Bos taurus indicus), ocorrem de forma muito semelhante à descrita para Bos taurus taurus. / The aim of this study was to accompany the process of testicular development from the indifferentiable phase to its complete formation. Embryos and fetuses of Nelore breed cows (Bos taurus indicus) were obtained in slaughterhouses near the Uberlandia city, Minas Gerais. As soon as the females were slaughtered, the uterus was opened and the embryos and fetuses gathered. The gonads and the smaller embryos were fixed in Bouin's fixative and afterwards processed for conventional optical microscopy. It was carried out the PCR (Polymerase Chain Reaction) from parts of embryos whose sex could not be identified macroscopically. The gonadal ridge was observed firstly in a 1.0 cm long embryo. In 2.5 cm long embryos the presence of the albuginea allowed the sex identification. The mean thickness of the albuginea ranged from 29.1 to 558.5 mm. Gradually increase of vascularization of the albuginea and parenchyma was observed. The mediastinum was located centrally. There was a decrease in the space occupied by the testicular cords, from 63.7 to 42.0 % of the total testes volume. Its diameter ranged from 31.7 to 48.8 mm. The diameter of germinal cells (and their nuclei) ranged from 12.3 (6.6) to 16.9 914.2) mm. The quantity of germinal cells by cross section of cord decreased from a maximum of 2.8 to 0.86. The total number of germinal cells was from 16 at the beginning of colonization of the gonad to 18.3 x 106 at the end of the study. The number of Sertoli's cells by cross section of cord ranged from 10.0 to 16.2. The results showed that the origin and formation of testes in embryos and fetuses from Nelore breed cows (Bos taurus indicus) does occur in a very similar way to what is described for Bos taurus taurus.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2001-11-28Bitstream added on 2014-06-13T19:23:41Z : No. of bitstreams: 1 diniz_eg_dr_jabo.pdf: 1766438 bytes, checksum: b28fd4b1e87d5ab565efa2f5084bd69a (MD5) / Pouco se sabe sobre os eventos morfológicos que ocorrem durante o desenvolvimento pré-natal das gônadas nas raças zebuinas. O objetivo deste estudo foi descrever os eventos morfológicos relacionados ao desenvolvimento pré-natal da gônada, incluindo a sua formação, identificação de células germinativas primordiais, surgimento de oogônios, oócitos e folículos em embriões e fetos da raça Nelore. Oitenta e um embriões e fetos bovinos, com idade variando de 26 a 240 dias após fecundação, foram coletados em frigoríficos. A idade dos fetos foi estimada a partir de medidas tomadas no sentido crânio-caudal e aplicadas à fórmula proposta por Rexroad et. al. (1974). O sexo foi identificado a partir de observações macroscópicas e usando a técnica do PCR (Polymerase Chain Reaction) somente quando as diferenças sexuais morfológicas não foram evidentes. Para histologia, as gônadas foram fixadas em líquido de Bouin por 24 horas. Após processamento histológico, cortes de tecido de 5mm, foram corados com hematoxilina-eosina. Os resultados mostraram que a crista gonádica se formou a partir de 29 dias após fecundação. No 34º dia, células germinativas primordiais foram identificadas. As oogônias surgiram em grande quantidade entre 50 e 100 dias e seu número reduziu drasticamente, atingindo números finais aos 140 dias. Os folículos primordiais, folículos em crescimento e antrais apareceram em média aos 95, 140 e 180 dias, respectivamente. Oogônias e folículos primordiais, de forma diferente dos folículos em crescimento, apresentaram diferenças significativas no seu diâmetro nos vários períodos estudados. Folículos antrais mostraram diâmetro médio de 96,92 l 31,07mm aos 180 dias , chegando atingir médias de1331,43 l 567,43mm aos 240 dias... / Little is known about morphological events occurring during the prenatal development of gonads in the Zebu breeds. The objective of this study was to describe the morphologic events related to the prenatal development of the gonad, including its formation, identification of primordial germinative cells, appearance of oogonia, oocytes and follicles in Nelore breed embryos and fetuses. Eighty-one bovine embryos and fetuses, with age range from 26 to 240 days following fecundation, were gathered in a local slaughter-house. The age of fetuses was estimated from measures taken in the cranium-caudal direction and applied to the formula proposed by Rexroad et. al. (1974). The sex was identified from macroscopic observations and using PCR (Polymerase Chain Reaction) technique only when the morphologic sexual differences were not evident. For histology, gonads were fixed into Bouin fluid for 24 hours. Then, 5mm-tissue cuts were stained with hematoxylin-eosin. The results showed that the gonadal ridge was developed from 29 days following fecundation. At the 34th day, primordial germ cells were identified. Oogonia arose in great quantity between 50 and 100 days and its number reduced dramatically, attaining final numbers at 140 days. The primordial follicles, growing follicles and antral follicles appeared on the average at 95, 140 and 180 days, respectively. Oogonia and primordial follicles, in a different way from growing follicles, presented significant differences in its diameter in the several periods studied. Antral follicles showed 96.92 l 31.07mm in diameter at 180 days, achieving means of 1331.43 l 567.43 mm at 240 days. The statistical analysis showed a positive and highly significant correlation (P< 0.01), between the oogonia diameter and its nucleus, as well as between the primordial and growing follicles with its oocytes and respective nuclei... (Complete abstract, access undermentioned eletronic address)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-06Bitstream added on 2014-06-13T18:46:30Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_cs_dr_jabo.pdf: 1211579 bytes, checksum: 2f19bde4e0f7fbfd3f2aae7f084ceea1 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Modificações pós-translacionais de histonas são importantes componentes do código epigenético, e contribuem para o controle da transcrição gênica de cada célula. O presente trabalho descreve a participação de duas modificações de histonas no desenvolvimento embrionário pré-implantacional: a acetilação de lisinas e a citrulinização de argininas. No capítulo 1, avaliamos a presença de duas modificações de histona H3, K9ac (permissiva) e K27me3 (repressiva) em embriões bovinos no ciclo de ativação do genoma embrionário (AGE), por imunofluorescência. Ambas as marcas estão presentes e apresentam alto coeficiente de correlação, e dois perfis de embriões (com alta e baixa variação dos níveis das modificações entre blastômeros) foram descritos. A acetilação de histonas está relacionada à ativação da expressão gênica, portanto no capítulo 2 hipotetizamos que a manipulação de seus níveis em embriões bovinos poderia influenciar a ativação do genoma embrionário, o desenvolvimento de blastocistos e a inativação do cromossomo X em fêmeas. Foram testadas concentrações do inibidor das histona desacetilases tricostatina A variando de 5 a 50nM, aplicadas por 12 a 144h, iniciando 70h após a FIV. Três protocolos foram selecionados: 5nM 48h, 5nM 144h e 15nM 48h. Após, foi utilizado sêmen sexado para estudar os efeitos da TSA sobre embriões fêmeas e machos separadamente. Por imunofluorescência para H3K9ac, foi observado aumento na acetilação de histonas em ambas as concentrações (5 e 15nM), sendo 5nM mais eficaz em fêmeas do que machos. O tratamento com 15nM 48h reduziu a produção de blastocistos em machos e fêmeas, e 5nM 144h em machos. A taxa de apoptose, avaliada pelo ensaio TUNEL, foi elevada em embriões fêmeas (grupos 5nM144h e 15nM48h), e em machos (grupo 15nM48h), mas tal aumento... / Histone post translational modifications are important components of the epigenetic code, and contribute to the control of gene transcription in each cell. This work describes the participation of two histone modifications in embryonic preimplantation development: acetylation of lysines and citrullination of arginines. In chapter 1, we evaluated the presence of two modifications of histone H3, K9ac (permissive) and K27me3 (repressive) in bovine embryos in the cycle of embryonic genome activation (EGA), by immunofluorescence. Both marks are present and show a high correlation coefficient, and two profiles of embryos were described, displaying high and low variation of modifications level between blastomeres. The acetylation of histones is related to gene expression activation, so in Chapter 2 we hypothesized that the manipulation of acetylation levels in bovine embryos could influence embryonic genome activation, blastocyst development and X chromosome inactivation in females. Five concentrations of the histone deacetylase inhibitor trichostatin A (TSA), ranging from 5 to 50nM beginning 70 hours after FIV were applied per 12 to 144h. Three protocols were selected: 5nM 48h, 5nM 144h and 15nm 48h. After, sexed semen was used to study the effects of TSA on male and female embryos separately. Immunofluorescence of H3K9ac showed increased histone acetylation at both concentrations (5 and 15nM). 5nM TSA was more effective in females than in males. Treatment with 15nM 48h reduced male and female blastocyst yield, and 5nM 144h reduced male blastocyst yield. Apoptosis rate was measured by the TUNEL assay. Female 5nM144h and 15nM48h groups, and male 15nM48h group displayed higher apoptosis levels, but this increase was not observed in low quality embryos. In female embryos, TSA did not affect... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-19Bitstream added on 2014-06-13T20:26:10Z : No. of bitstreams: 1 rascado_ts_dr_botfmvz.pdf: 519776 bytes, checksum: 01ba22778e4b1e2e1003285f9b0b7014 (MD5) / Este experimento objetivou analisar o padrão de expressão do mRNA de SOX2, STAT3 e GBX2 em embriões bovinos produzidos in vitro nos estádios de blastocisto (E7) e blastocisto eclodido (E10). O RNA foi extraído de embriões em cada fase do desenvolvimento embrionário (n=7) e da massa celular interna (MCI) e epiblasto isolados por imunocirurgia de 20 embriões (n=20). A expressão do mRNA foi obtida por transcriptase reversa seguida da reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-qPCR), quantificada pelo método da curva padrão e normalizada pela média geométrica de GAPDH, YWHAZ e SDHA. Os dados de cinco replicatas foram analisados por ANOVA seguido de comparações, aos pares, pelo teste de Tukey. A expressão relativa do mRNA de SOX2 foi significativamente maior em blastocistos (E7) do que em blastocistos eclodidos (E10) (P<0,05), sendo que a expressão na MCI foi 40X maior do que a obtida no blastocisto inteiro (P<0,05). A expressão relativa do mRNA de STAT3 3 não diferiu entre blastocistos (E7) e blastocistos eclodidos (E 10) (P>0,05). Não houve diferença entre blastocisto eclodido (E10) e epiblasto para SOX2 e STAT3 (P>0,05). Comparando-se o nível relativo de mRNA de GBX2 entre blastocistos (E7) e MCI e blastocisto eclodido (E10) e epiblasto não foi detectada diferença (P>0,05), sendo que MCI e epiblasto corresponderam a aproximadamente 90% da expressão observada nos embriões em suas respectivas fases de desenvolvimento. Portanto, com o desenvolvimento do blastocisto, há a tendência do aumento dos níveis de mRNA de STAT3 e SOX2 nas células pluripotentes do epiblasto; o nível de mRNA de GBX2 se mantém constante em blastocistos, com alta expressão em células pluripotentes / This experiment aimed to analyze the pattern of expression of the mRNA of SOX2, STAT3 and GBX2 in in vitro produced bovine embryos at stages of blastocyst (E7) and hatched blastocyst (E10). The RNA was extracted from embryos at each stage of embryonic development (n= 7) and from the inner cell mass (ICM) and epiblasts isolated from 20 embryos by immunosurgery. The expression of mRNA was obtained by reverse transcriptase-polymerase chain reaction (real-time qPCR), quantified by the standard curve method and normalized by geometric mean of genes YWHAZ, SDHA and GAPDH. The data from five replicates were analyzed by ANOVA followed by comparisons, in pairs by Tukey test. The relative expression levels of SOX2 mRNA was significantly higher in blastocysts (E7) than in hatched blastocysts (E10) (P<0.05), whereas that the expression in MCI was 40X greater than the expression obtained in blastocyst (P< 0.05). The relative expression of STAT3 mRNA did not differ between blastocysts (E7) and hatched blastocysts (E 10) (p>0.05). There was no difference between blastocyst hatched (E10) and epiblasts for SOX2 and STAT3. By Comparing the relative level of GBX2 mRNA between blastocysts (E7) and ICM and blastocyst hatched (E10) and epiblasts no difference was detected (P>0.05), ICM and epiblasts corresponded to approximately 90% of expression observed in embryos in their respective stages of development. Therefore, with the development of the blastocyst, there is a tendency for increased levels of STAT3 and SOX2 mRNA in the pluripotent cells of epiblasts; the level of GBX2 mRNA is constant in blastocysts with high expression in pluripotent cells

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade em Agronomia e Veterinária, 2016. / Submitted by Camila Duarte (camiladias@bce.unb.br) on 2016-09-14T19:07:12Z No. of bitstreams: 1 2016_LuziaRenatadeOliveiraDias.pdf: 585188 bytes, checksum: c1d67f8ad9c30dc53f569fab1b6a16a0 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-10-24T11:06:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_LuziaRenatadeOliveiraDias.pdf: 585188 bytes, checksum: c1d67f8ad9c30dc53f569fab1b6a16a0 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-24T11:06:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_LuziaRenatadeOliveiraDias.pdf: 585188 bytes, checksum: c1d67f8ad9c30dc53f569fab1b6a16a0 (MD5) / A criopreservação de embriões produzidos in vitro (PIV) é afetada pelas altas concentrações de gotículas lipídicas que se acumulam no interior dos blastômeros. A remoção parcial de lipídios intracitoplasmáticos, por estímulo da lipólise química no citoplasma celular ou pela diminuição da captação e síntese de ácidos graxos pelas células, pode ser uma alternativa para melhorar a criopreservação desses embriões. Neste sentido, objetivou-se estimar o efeito de alguns agentes delipidantes, L-carnitina e o isômero trans-10 cis-12 do ácido linoleico conjugado (CLA), durante o cultivo na quantidade, qualidade e conteúdo lipídico de embriões bovinos produzidos in vitro. Foram utilizados 2.448 ovócitos de grau 1 e 2 obtidos de ovários de abatedouro, que foram maturados in vitro por 24h a 38,5ºC, 5% de CO2. Após a co-incubação dos complexos cumulus ovócitos (COC) com os espermatozoides (16-18 horas), os possíveis zigotos foram distribuídos em quatro tratamentos: T1) Controle (n=616): meio fluido de oviduto sintético (SOF), suplementado com 5% de soro fetal bovino (SFB); T2) L-carnitina (n=648): meio SOF suplementado com 5% de SFB, acrescido de 0,6 mg mL-1de L-carnitina; T3) CLA (n=627): meio SOF suplementado com 5% de SFB, acrescido de 100 μM de trans-10 cis-12 CLA; e T4) L-carnitina+CLA (n=597): meio SOF suplementado com 5% de SFB, acrescido de 0,6 mg mL-1de L-carnitina e 100 μM de trans-10 cis-12 CLA. As taxas de clivagem e blastocisto foram avaliadas no dia 2 e dia 7 de cultivo e, os blastocistos expandidos (Bx) foram armazenados para quantificação de lipídios utilizando o corante Sudan Black B. Os dados de produção de embriões foram analisados pelo teste Chi-quadrado (P<0,05) e os de quantificação de lipídios por análise de variância (ANOVA) (P<0,05). A taxa de clivagem foi semelhante (P>0,05) entre todos os tratamentos (T1=95±4,3; T2=95±3,5; T3=95±3,7 e T4=95±3,1). A taxa de blastocisto foi superior (P<0,05) no grupo controle do que nos demais tratamentos que não diferiram (P>0,05) entre si tanto no D6 (T1=19±2,7; T2=13±2,4; T3=14±2,6 e T4=13±2,6), quanto no D7 (T1=49±3,5; T2=39±3,0; T3=42±3,9 e T4=39±3,9). Não foi observada diferença entre os tratamentos (P>0,05) quanto à velocidade de desenvolvimento, sendo que em todos os grupos a maioria dos embriões de D7 encontravam-se no estágio de blastocisto expandido. Os embriões do T2 apresentaram menor quantidade de lipídios no citoplasma do que os de T1 (P=0,0138) e de T3 (P=0,0261), sendo que os do T4 foram semelhantes (P>0,05) aos demais tratamentos. Os resultados obtidos indicaram que a suplementação com agentes delipidantes não afeta a qualidade, mas afeta negativamente a produção de embriões. Entretanto, a presença de L-carnitina durante o cultivo in vitro (CIV) diminuiu a quantidade de lipídios sugerindo que sua utilização pode resultar em embriões com maior resistência a criopreservação. ________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cryopreservation of in vitro produced (IVP) embryosis affected by the high concentrations of lipid droplets that accumulate inside the blastomeres. Therefore, the partial removal of intracytoplasmic lipids by chemical lipolysis stimulation or by decreasing uptake or synthesis of fatty acids by cells can be an alternative to improve cryopreservation of IVP embryos. For that, this study aimed to evaluate the effect of some delipidant agents, L-carnitine and the trans-10 cis-12 isomer conjugated linoleic acid (CLA), during culture on the quantity, quality and lipid content of bovine embryos produced in vitro. A total of 2,448 oocytes graded 1 and 2, obtained from slaughterhouse ovaries were matured in vitro for 24 hours at 38.5 ° C, 5% CO2. After co-incubation (16-18 hours) of sperm and cumulus oocyte complex (COC), the presumptive zygotes were distributed into four treatments: T1) Control (n=616): sinthect oviduct fluid (SOF) medium supplemented with 5% bovine calf serum (FCS); T2) L-carnitine (n=648): SOF medium supplemented with 5% FCS plus 0.6 mg ml-1 of L-carnitine; T3) CLA (n=627): SOF medium supplemented with 5% FCS plus 100 uM trans-10 cis 12 CLA; and T4) L-carnitine + CLA (n=597): SOF medium supplemented with 5% FCS plus 0.6 mg ml-1 of L-carnitine and 100 uM of trans-10 cis-12 CLA. The cleavage and blastocyst rates were evaluated on day 2 and day 7 of culture, and expanded blastocysts (Bx) were stored for lipid quantification by Sudan Black B stain. Embryo production data were analyzed by Chi-square test (P<0.05) and lipids quantification by analysis of variance (ANOVA) (P<0.05). Cleavage rate was similar (P>0.05) among all treatments (T1=95±4.3; T2=95±3.5; T3=95±3.7 e T4=95±3.1). Blastocyst rate was higher (P<0.05) on the control group than the other treatments, wich were similar (P>0.05) among on D6 (T1=19 ± 2.7; T2=13±2.4; T3=14±2.6 and T4=13±2.6) and on D7 (T1=49±3.5; T2=39±3.0; T3=42±3.9 and T4=39±3.9). There was no difference between treatments (P>0.05) on the development speed, and for all treatments the majority of D7 embryos were already on expanded blastocyst stage. Embryos from T2 showed lower cytoplasmic lipids than those from T1 (P=0.0138) and T3 (P=0.0261), being T4 similar to all treatments. The results suggested that supplementation with delipidant agents had not affected quality but had negatively affected embryo production. However, the presence of L-carnitine during in vitro culture (CIV) decreased the amount of lipids, suggesting that its use can result in bovine IVP embryos more resistant to cryopreservation.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-16Bitstream added on 2014-06-13T19:38:28Z : No. of bitstreams: 1 000748839.pdf: 1424826 bytes, checksum: 8b005873ea1e668e7352dd202f004baf (MD5) / A produção in vitro de embriões (PIVE) bovinos é uma biotecnologia de grande impacto econômico por maximizar o potencial reprodutivo de animais geneticamente superiores resultando em maior eficiência reprodutiva. Apesar dos avanços da PIVE, a porcentagem de embriões que se desenvolvem ainda são inferiores aos produzidos in vivo. Epigenética é a regulação da expressão gênica sem alteração na sequência do DNA. Mecanismos epigenéticos, como o remodelamento das histonas, controlam expressão gênica e são fundamentais para o correto desenvolvimento embrionário. Dessa forma, modificações específicas nas histonas podem reprimir ou estimular a transcrição gênica. Os mecanismos epigenéticos são vulneráveis aos fatores ambientais, assim, os sistemas de cultivo in vitro podem ter um impacto no perfil de expressão de importantes genes relacionados ao desenvolvimento embrionário pré-implantacional. Dada a importância e a aplicabilidade da PIVE como biotecnologia reprodutiva, o papel vital dos mecanismos epigenéticos durante o desenvolvimento embrionário, e a importante correlação entre as condições de cultivo embrionário e o perfil epigenético, o presente estudo investigou a influência de diferentes condições de cultivo durante o desenvolvimento embrionário por meio da utilização de diferentes concentrações de soro fetal bovino (SFB) (0% ou 2,5%) e diferentes tensões de oxigênio (O2) (5% ou 20%) durante o cultivo embrionário in vitro (CIV) na regulação epigenética, especificamente no remodelamento das histonas H3K9me2 (repressiva) e H3K4me2 (permissiva) de embriões bovinos produzido in vitro. Para este fim, foram delineados quatro tratamentos durante o cultivo embrionário. T1: embriões foram cultivados em meio de cultivo “Synthetic Oviduct Fluid” (SOF) com 0% SFB sob tensão de 5% de O2; T2: embriões foram cultivados em meio SOF com 2,5% SFB sob... / In vitro production (IVP) of bovine embryos is a biotechnology of great economic impact, as it maximizes the reproductive potential of genetically superior animals, resulting in greater reproductive efficiency. Despite advances in technology in IVP, the percentage of embryos that develop to the transfer stage is still inferior to those seen in vivo. Epigenetics is the regulation of gene expression without altering DNA sequence. Epigenetic processes, such as histone remodeling, control gene expression and are essential for proper embryo development. Specific histone modifications can repress or stimulate gene transcription. Epigenetic mechanisms are under intense environmental control, therefore in vitro culturing systems can impact the expression patterns of genes that support pre-implantation embryo development. Given the importance of IVP as a reproductive biotechnology, the role of epigenetic processes during embryo development, as well the important correlation between culture conditions and epigenetic patterns, the present study was designed to investigate the influence of different culture conditions on embryo development, through the use of different concentrations of fetal bovine serum (FBS) (0% and 2,5%) and different oxygen tensions (O2) (5% and 20%) during in vitro culture, in epigenetic regulation, specifically in the histone remodeling H3K9me2 (repressive) and H3K4me2 (permissive) marks, in bovine embryos produced in vitro. Four treatments were designed and utilized during embryo culture: T1: embryos were cultured in Synthetic Oviduct Fluid (SOF) media with 0% FBS, under 5% O2 tension; T2: embryos were cultured in SOF media with 2.5% FBS, under 5% O2 tension; T3: embryos were cultured in SOF media with 0% FBS, under 20% O2 tension and T4: embryos were cultured in SOF media with 2.5% FBS, under 20% O2 tension. Cleavage and expanded blastocyst development rates were evaluated, as ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-05-28Bitstream added on 2014-06-13T20:59:30Z : No. of bitstreams: 1 mattos_mcc_me_botfmvz.pdf: 2029467 bytes, checksum: 940e4724967df5043139371eecb13c64 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivou-se com o presente estudo avaliar a criotorerância de mórulas e blastocistos produzidos in vivo de doadoras da raça Sindi e Nelore (Bos indicus) e Holandês Preto e Branco (HPB - Bos taurus). No Experimento 1, 24 fêmeas lactantes e não lactantes da raça Sindi foram superovuladas com 100 mg de FSH suíno com protocolos em que as duas últimas aplicações de FSH foram substituídas ou não por 300 UI de eCG. Sete dias após a indução da ovulação, os embriões foram colhidos e avaliados quanto ao estágio de desenvolvimento embrionário e grau de qualidade. Dois terços dos embriões foram destinados à criopreservação, dos quais metade foi congelada pelo método convencional, com curva de resfriamento de –0,5ºC/min e a outra metade foi vitrificada pela técnica de Cryotop. Em seguida, foram descongelados e transferidos para receptoras sincronizadas, de maneira contemporânea aos embriões frescos. No Experimento 2, 31 fêmeas da raça Nelore foram superovuladas com 133 mg de FSH suíno e os dois terços dos embriões colhidos foram criopreservados e transferidos semelhantemente ao Experimento 1. No Experimento 3, 67 vacas lactantes e novilhas da raça HPB foram superovuladas com 500 e 300 UI de FSH suíno, respectivamente, e após a colheita dos embriões foram adotados os mesmos procedimentos realizados nos Experimentos 1 e 2. Os resultados foram analisados por modelos lineares generalizados e estão apresentados na forma de média dos quadrados mínimos ± erro padrão. Nos Experimentos 1 e 2, os embriões transferidos a fresco apresentaram maior taxa de concepção aos 30 dias do que os vitrificados e congelados (54,8±7,4a, 17,7±7,3b e 19,5±6,6%b; respectivamente; P 0,0013) na raça Sindi (n=231 embriões) e (46,0±6,1a; 31,2±5,4b e 28,1±5,3%b; respectivamente, P 0,04) na raça Nelore (n=297 embriões). O estágio de desenvolvimento embrionário parece não... / The aim of this study was to evaluate the cryotolerance of morulae and blastocysts produced in vivo in Sindhi and Nelore (Bos indicus) and Holstein (Bos taurus) donnors. In Experiment 1, 24 lactating and non-lactating Sindhi donnors were superovulated with 100 mg porcine FSH with protocols in which the last two FSH treatments were replaced or not by 300 IU eCG. Embryos were collected 7 days after ovulation induction and embryo development and quality degree were accessed. Two thirds of the embryos were cryopreserved, by the conventional freezing or Cryotop method. After that, embryos were thawed and transferred to synchronized recipients, simultaneously to fresh embryos. In Experiment 2, 31 Nelore cows were superovulated with 133 mg porcine FSH and two thirds of the embryos were cryopreserved and transferred similarly to Experiment 1. In Experiment 3, 67 Holstein lactating dairy cows and heifers were superovulated with 500 and 300 IU pFSH, respectively, and the same procedures were performed as in Experiments 1 and 2. Results were analyzed using generalized linear models and are presented as least squares means ± standard error. In Experiments 1 and 2, fresh embryos had a higher conception rate at Day 30 than those vitrified and frozen (54.8±7.4a, 17.7±7.3b and 19.5±6.6%b; respectively; P 0.0013) in Sindhi donnors (n=231 embryos) and (46.0±6.1a; 31.2±5.4b and 28.1±5.3%b; respectively; P 0.04) in Nelore donors (n = 297 embryos). Embryo developmental stage seems to have not influenced conception rates of Zebu embryos, especially cryopreserved ones. Finnaly, in Experiment 3, conception rates of fresh and cryopreserved embryos were similar (37.4±12.3, 24.5±11.3 and 21.0±9.5%; respectively, P>0.15) and also no difference was detected for the cryotolerance of morulae versus blastocysts (P>0.10)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004-02-19Bitstream added on 2014-06-13T20:19:16Z : No. of bitstreams: 1 resende_mv_me_jabo.pdf: 500037 bytes, checksum: dcdabb9ddd0a9d7b7a657398caa401ff (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Anticorpos anti H-Y foram produzidos em ratas da linhagem isogênica Wistar Furth, e utilizados no sistema de cultivo in vitro de embriões bovinos, com o objetivo de desviar a proporção sexual. As ratas foram imunizadas com leucócitos do baço de machos de mesma linhagem, e a atividade biológica dos anticorpos verificada por ELISA. Cento e trinta e quatro embriões foram produzidos in vitro e quando atingiram o estádio de mórula foram incubados em meio de cultivo contendo 5% de anticorpos anti H-Y a 38,5 °C com 5% de CO2, 5% de O2 e 90% de N2 , por um período de 24 horas. Os embriões do grupo controle foram cultivados nas mesmas condições, sem adição de anticorpos anti H-Y. Após o cultivo com anticorpos anti H-Y, os embriões foram classificados em dois grupos: 1) embriões inibidos que permaneceram no estádio de mórula (classificados como machos) e 2) embriões que se desenvolveram e houve a formação de blastocele (classificados como fêmeas). Conseguimos produzir anticorpos anti H-Y com títulos de até 1:2048. Dos 134 embriões produzidos, 79 embriões (58,96%) tiveram o desenvolvimento inibido, e 55 embriões (41,04%) não sofreram inibição. O sexo de 124 embriões pode ser verificado com a PCR para confirmação dos resultados. Das 78 mórulas, 49 (62,82%) eram do sexo masculino e dos 46 blastocistos, 22 (47,83%) eram do sexo feminino. No grupo controle a proporção sexual foi de 55,57% de embriões fêmeas e 44,43% de embriões machos, totalizando 70 embriões. O teste do Qui-quadrado indicou que somente na sexagem de mórulas obteve-se desvio da proporção sexual (P<0,05) em relação ao grupo controle. Os resultados da sexagem foram diferentes dos apresentados na literatura o que pode ser devido à qualidade morfológica inferior dos embriões produzidos in vitro comparada aos embriões produzidos in vivo, ou também, a influência do meio de cultivo. / Anti-H-Y antibodies were produced in female rats of the isogenic strain Wistar Furth, immunized with spleen leukocytes of males of the same strain, and the biological activity of the antibody was verified by ELISA. One hundred and thirty four embryos were produced in vitro and when they reached the morula stage they were incubated with anti-H-Y antibodies at 38.5°C under 5% CO2, 5% O2 and 90% N2 , for a period 24 hours. The embryos in the control group were cultured under same conditions, without addition of the anti-H-Y antibodies. After culture of the embryos in the medium containing anti H-Y antibodies, they were classified in two groups: 1) arrested embryos that remained in morula stage (classified as male) and 2) embryos that developed and formaed a blastocoele (classified as female). With the isogenic rats used, had been antibodies were obtained with titers up to 1:2048. Of the 124 embryos, 79 of them (58.96%) were arrested, and 55 embryos (41.04%) were not. The sex of 124 embryos was identified by PCR. Of the 78 morulas, 49 (62.82%) were confirmed as being male sex and of the 46 blastocysts, 22 (47.83%) were confirmed as being of the female sex. In the control group the sexual ratio was of 55.57% of femle embryos and 44.43% of male embryos, totalizing 70 embryos. Using the Chi-Square Test it was possible to observe that in the sexing of morulas it was obtained only statistical difference (P<0.05) in relation to the sexual ratio of the control group, while for sexed blastocysts no statistical difference was detected. The different results found compared with those reported in the literature could be due to the poor morphogical quality of the in vitro produced embryos when compared with the in vivo produced ones, or also, to the influence of the culture medium used during the in vitro production of embryos with anti-H-Y antibodies.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2001-07-18Bitstream added on 2014-06-13T19:17:44Z : No. of bitstreams: 1 dayan_a_me_botfmvz.pdf: 264427 bytes, checksum: 27a8348b7bcdc6cd677cb5317cbb7845 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As técnicas de aspiração folicular (OPU) e fecundação in vitro (FIV) vêm surgindo como uma alternativa importante para a produção de embriões bovinos. Estas técnicas aplicam-se tanto para vacas com problemas reprodutivos adquiridos, como para melhorar a performance de vacas saudáveis, gestantes, novilhas e animais de idade avançada. Vários trabalhos relatam fatores que interferem no processo de OPU-FIV. O presente trabalho tem como objetivo identificar alguns dos fatores que interferem na produção, como a influência da raça e da sazonalidade na recuperação de oácitos, produção de embriões e taxa de gestação; a influência do estádio de desenvolvimento embrionário e da sincronização da receptora no momento da transferência e, posteriormente, a 5 interação entre o estádio embrionário e a sincronização da receptora. Foram avaliadas 1.841 aspirações foliculares em 566 doadoras das raças Nelore, Brahman, Gir, Guzerá, Blond D'Aquitaine, Limousin, Holandesa e Pardo suíço em 29 propriedades. A idade das doadoras variou entre 12 e 240 meses. De um total de 19.~659 oócitos viáveis, foram produzidos 7.116~ embriões (36,20%), dos quais foram transferidos 3.572 embriões originando 1.147 gestações (32,11 %). As raças Nelore e Blond D'Aquitaine apresentaram maior produção de oócitos (15,52±3,15 e 14,85±2,40 respectivamente). A maior produção de embriões por sessão de OPU foi das raças Brahman, Blond D'Aquitaine e Nelore (5,54±2,36; 4,43±1,92; 4,04±2,47, respectivamente). No inverno a produção de oócitos foi superior ao outono (15,22±3,62 e 13,36±3,48, respectivamente), no entanto a produção de embriões foi melhor no verão e outono (4,35±2,38e 4,14±2,49, respectivamente) e pior no inverno e na primavera (3,46±2,31 e 3,83±2,54, respectivamente). A mesma relação foi observada na taxa de gestação para o verão, outono, inverno e...