O carrapato Riphicephalus (Boophilus) microplus é um ectoparasito hematófago que infesta os rebanhos bovinos de regiões tropicais e subtropicais, causando grandes prejuízos à pecuária. O principal método de controle baseia-se nos acaricidas. No entanto, o uso de vacinas tem sido estudado como um método de controle alternativo. A calreticulina (CRT) é uma proteína multifuncional presente em quase todas as células de animais. A secreção da CRT durante a alimentação pode estar relacionada a modulação da interação parasita hospedeiro. No presente estudo, as CRTs de R. microplus (rBmCRT) e do Haemophisalis longicornis (rHlCRT) foram expressas em Escherichia coli e purificadas por cromatografia. As propriedades imunogênicas e antigênicas da BmCRT e HlCRT foram analisadas por diferentes métodos. In silico, foram comparandos os epítopos das CRTs pelo índice de Jamerson-Wolf, que mostrou 6 regiões com potenciais epítopos antigênicos diferentes entre as CRTs. Enquanto, a análise in silico, da rBmCRT e rHlCRT mostraram 6 regiões que podem interagir com a proteína C1q. In vitro, por Western blot, a rBmCRT, mas não a rHlCRT, foi reconhecida pelo soro de bovino infestado experimentalmente com R. microplus. Em Western blot de extrato de larvas, os soros do coelho imunizado com rBmCRT e bovinos imunizados com rBmCRT ou rHlCRT reconheceram a BmCRT, sugerindo que os anticorpos direcionados às proteínas recombinantes também reconhecem a proteína nativa BmCRT. Também a rBmCRT mostrou um efeito anticoagulante no teste de recalcificação plasmática. In vivo, a rBmCRT e rHlCRT induziram reações de hipersensibilidade cutânea imediata em bovinos imunizados com rBmCRT ou rHlCRT, mas não foi possível detectar alterações na análise histopatológica. Juntos, estes resultados sugerem, que a rBmCRT e rHlCRT são imunogênicas e pode ter funções imunomoduladoras sobre o sistema imune do hospedeiro, mas não suficiente para prevenir o desenvolvimento da imunidade humoral. / The tick Riphicephalus (Boophilus) microplus is a blood-sucking ectoparasite of bovines from tropical and subtropical regions, causing serious damages to the livestock production. The main method of control is based on the acaricides. However, the use of vaccines has been studied as a promising control method. The calretirulin (CRT) is a multifunctional protein present in almost all cells of animals. The secretion of CRT during feeding might be linked to the modulation of the parasite-host interaction. In the present study, recombinant CRTs of R. microplus (rBmCRT) and of Haemaphysalis longicornis (rHlCRT) were expressed in Escherichia coli and purified by ion exchange chromatography. The immunogenic and antigenic capacities of BmCRT e HlCRT were analyzed by different methods. In silico, were comparisons of the CRTs epitopes, identified by Jameson-Wolf antigenic index, indicates that there are three different regions between the tick CRTs. While, in silico analysis showed 6 regions in rBmCRT and in rHlCRT that could interact with C1q protein. In vitro, by Western blot, rBmCRT, but not rHlCRT, was recognized by the serum of bovine experimentally infested with R. microplus. In Western blot with extracts of larvae, the sera of a rabbit immunized with rBmCRT and bovines immunized with rBmCRT or rHlCRT recognized BmCRT; this suggests that antibodies directed to recombinant proteins also recognize native BmCRT. Also, the rBmCRT showed an anticoagulant effect in recalcification time. In vivo, the rBmCRT and rHlCRT induced reactions of immediate cutaneous hypersensitivity in bovines immunized with rBmCRT and rHlCRT, but it was not possible to detect alterations in histopathologic test. Together, these results suggest that the rBmCRT and rHlCRT are immunogenic and could have immunomodulatory functions on the immunity system of the host, but not enough to prevent the development of humoral immunity.

A vigilância epidemiológica é descrita como o conjunto de procedimentos de coleta, processamento e análise de dados utilizado para dar suporte aos processos de tomadas de decisão por parte dos agentes de saúde animal e humana. A crescente atuação de profissionais do setor privado em sanidade animal tem ampliado a vigilância epidemiológica passiva, com geração de montantes significativos de dados. Neste contexto, surge o Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose Animal - PNCEBT que promove, entre suas estratégias, a habilitação de médicos veterinários privados - MVH - para realização de testes diagnóstico dessas enfermidades em bovídeos. Nesta pesquisa, foi realizada uma compilação de todos os dados gerados pelos MVH relacionados ao PNCEBT no ano de 2008 no Rio Grande do Sul, os quais foram posteriormente analisados com distintas técnicas estatísticas, com objetivo de caracterizar o perfil de ocorrência demográfica e espacial destes testes, bem como buscar indicativos de frequência de enfermidades. Foram analisados resultados de 63.226 testes de bovinos e bubalinos realizados em 5.012 estabelecimentos e 332 municípios do estado, devidamente tratados por procedimentos de imputação múltipla e de detecção de valores extremos. Foi possível verificar que os animais de aptidão leiteira representam a maioria dos animais testados, e que motivação econômica, como bonificações, é o principal estímulo para realização dos testes. Os animais de aptidão leiteira apresentaram, ainda, maior frequência em casos positivos para ambas as enfermidades, quando comparados com as demais aptidões. Os animais do sexo feminino apresentaram maior frequência em ambas as enfermidades, com relação aos machos. Foi verificada maior frequência de animais positivos para tuberculose com o avanço da idade, ao passo que a brucelose se revelou mais freqüente em animais entre 48 e 60 meses. A análise espacial demonstra variações entre regiões nos percentuais de animais testados e de positivos em ambas as enfermidades. As maiores frequências de estabelecimentos positivos para tuberculose ocorreram nas mesorregiões metropolitana e centro-oriental do estado, as quais apresentam altas densidades de estabelecimentos por km². Foi constatado ainda que a distância percorrida pelo MVH para realização de testes pode ser fator limitante na ocorrência dos mesmos, sendo que 49,5% dos testes foram realizados em uma distância máxima de 50 km, considerando-se a ida e o retorno. Foi verificado que municípios onde foram realizados testes têm 67,5 vezes mais chance de ter um MVH residente. Foi possível concluir, assim, que o adequado enfoque aos dados de vigilância permite a realização de inferências relevantes, sendo factível a estruturação de sistemas de monitoramento e vigilância - MOSS. Tais sistemas podem incrementar a qualidade e acessibilidade dos dados, permitindo aos gestores públicos e privados a realização de análises customizadas que tragam maior eficiência e eficácia às ações em saúde animal. / Epidemiological surveillance is described as a set of procedures of collecting, processing and data analysis used for supporting the decision making process of animal and human health managers. The growing participation of private sector professionals on animal health issues has been widening the passive epidemiological surveillance, generating significant amounts of data. In this context, the National Program of Animal Brucellosis and Tuberculosis Control and Eradication – PNCEBT, promotes, amongst other strategies, the accreditation of private veterinarians to make diagnosis tests on bovine, increased significantly the amount of data on bovine tuberculosis and brucellosis. In the present research, a compilation of all data from diagnosis tests performed by accredited private veterinarians on behalf of PNCEBT in the state of Rio Grande do Sul in 2008 was made, which was analyzed through distinct statistics techniques, aiming at characterizing the demography and spatial patterns of occurrence, as well as to assess the frequencies of those diseases. Data from 63.226 individual tests performed in 5.012 farms on 332 municipalities were analyzed, after treatment by multiple imputation and outlier values diagnosis. It was possible to conclude that the majority of tests were from dairy related animals; economical reasons, such as bonus programs, were the main motivation for the farmers to perform tests on their properties. Higher frequencies for both diseases were found in dairy cattle, when compared to other purposes animals. Female presented higher frequencies for both diseases when compared to males. It was also observed that the frequency of tuberculosis increased with age, while for brucellosis the frequency was higher between 48 to 60 months-old animals. Spatial analysis evidenced higher frequencies of positive tuberculosis farms in the metropolitana and centro-oriental mesorregions, which had higher farm density per km². It was also verified that the distance by MVH to perform tests might be a limiting factor for them to occur, being 49.5% of the tests performed at maximum round-way distance of 50 km. The municipalities which had tests performed showed 67.5 times more chances of having a resident MVH. It was possible to conclude that an appropriate approach of surveillance data allows the making of relevant inferences, being feasible the establishment of monitoring and surveillance systems - MOSS. These systems could improve data quality and accessibility, allowing public and private managers to perform custom analysis to bring more efficiency and efficacy to animal health programs.

O arsênio é um metaloide encontrado nas formas orgânica e inorgânica em estado de oxidação trivalente ou pentavalente. Na medicina veterinária a intoxicação por arsênio foi associada, no passado, ao contato acidental com pesticidas e ao uso indevido de medicamentos à base de arsênio inorgânico. Atualmente a intoxicação em bovinos tem sido relatada devido à exposição prolongada a ambientes contaminados. No Brasil, devido à proibição do uso de arsênio inorgânico na formulação de pesticidas, herbicidas a base de metanoarseniato ácido monossódico (MSMA), um arsenical orgânico pentavalente, considerado menos tóxico, têm sido utilizados em plantas infestantes em pós-emergência em culturas de algodão, café, cana-de-açúcar e citros. Em maio de 2014, em uma fazenda no município de Barra do Ribeiro, RS, foi realizada aplicação via aérea de um herbicida formulado com MSMA. Cerca de 200 vacas de corte e terneiros estavam sobre o local e apresentaram diarreia acentuada e severa desidratação após ingerir o pasto contaminado. Dezesseis animais morreram em até 20 dias, sendo seis submetidos ao exame de necropsia. As principais alterações macroscópicas consistiram de avermelhamento difuso da mucosa dos pré-estômagos, abomaso, e intestino, múltiplas úlceras e desprendimento multifocal da mucosa de pré-estômagos com acentuado edema de submucosa e hemorragia multifocal nas serosas. Microscopicamente, as principais alterações foram caracterizadas por necrose isquêmica multifocal associada à necrose fibrinoide de vasos e trombose na mucosa e submucosa. Com exceção de um bovino, os níveis de arsênio detectados estavam acima do limite de referência para a espécie, de 0,5 μg/g ou ppm. O exame anatomopatológico dos bovinos demonstrou que o MSMA promove lesões na mucosa de pré-estômagos por meio de necrose fibrinoide da parede de arteríolas e capilares. Apesar de ser classificado como pentavalente, durante sua metabolização, o MSMA pode gerar metabólitos intermediários trivalentes, que poderiam ter contribuído supostamente com as lesões observadas neste surto. As lesões observadas são similares às alterações promovidas pela forma inorgânica trivalente do arsênio em bovinos. A utilização de herbicidas que contém MSMA deve ser cautelosa, evitando-se o contato de animais em pastagens recém-pulverizadas. / Arsenic is a metalloid found in organic and inorganic forms in a state of trivalent or pentavalent oxidation. In veterinary medicine arsenic poisoning has been associated in the past to accidental contact with pesticides and misuse of medicinal products containing inorganic arsenic. Currently subclinical poisoning in cattle has been reported due to prolonged exposure to contaminated environments. In Brazil, due to the ban of of inorganic arsenic in pesticide formulation, herbicides methane arsenate monosodium acid (MSMA), an organic arsenical pentavalent, considered less toxic, has been used against weeds in post-emergent cotton, coffee, sugarcane and citrus. In May 2014, on a farm in the municipality of Barra do Ribeiro, Rio Grande do Sul, Brazil, air application was made on a Tifton cultivated paddock with a MSMA formulated herbicide. About 200 beef cows and calves were on the paddock and showed severe diarrhea and severe dehydration after consuming contaminated pasture. Sixteen animals died in 20 days, six of which were necropsied. The main gross lesions consisted of diffuse reddening of the mucosa of the fore stomachs, abomasum and intestines; multiple ulcers and multifocal detachment of the mucosa with severe edema of submucosa and multifocal hemorrhage in the serous membranes. Microscopically the main changes were characterized by multifocal ischemic necrosis associated with fibrinoid necrosis of vessels and thrombosis in the mucosa and submucosa. Except in one bovine, the levels of organic arsenic detected were above the reference level for the species (0,5 μg/g or ppm). The pathology found in the affected cattle showed that MSMA causes injuries in the mucosal pre-stomachs through fibrinoid necrosis the walls of arterioles and capillaries. Although it is classified as pentavalent, during their metabolism the MSMA can generate trivalent intermediate metabolites, supposedly responsible for the injuries observed in this outbreak. The lesions found in the outbreak of this repot are similar to those caused in cattle by inorganic trivalent form of arsenic. Herbicides containing MSMA must be used with caution, avoiding the contact of the animals with freshly sprayed pasture.

O vírus da diarreia viral bovina (BVDV) é um dos principais patógenos virais dos bovinos e sua infecção causa importantes perdas na produção dos rebanhos afetados. O presente trabalho contém os estudos realizados para esclarecer determinados aspectos da epidemiologia e da detecção da infecção causada pelo BVDV no Estado do Rio Grande do Sul, Brasil. O primeiro artigo consistiu de um estudo transversal onde os níveis de anticorpos contra o BVDV em amostras de tanque de leite que foram correlacionados com os aspectos produtivos dos rebanhos. As amostras e as informações foram coletadas de 300 criações escolhidas aleatoriamente entre 1.656 associados de uma cooperativa de leite na região central do Estado do Rio Grande do Sul e que não utilizaram vacina contra BVDV nos últimos 12 meses anteriores ao experimento. Dessas, 80 foram consideradas positivas para BVDV pela detecção de anticorpos contra vírus em níveis superiores ao ponto de corte do teste de ELISA comercial utilizado. A prevalência aparente estimada foi de 26,7% e, usando um intervalo de confiança de 95%, apresentou uma variação entre 22 e 31%. Os parâmetros de produção mensal de leite, densidade de bovinos (relação vacas/hectare), tipo de armazenamento do leite e origem do sêmen não apresentaram associação com a infecção pelo BVDV, mas o aumento do número total de animais por rebanho foi correlacionado positivamente com a infecção. A prevalência estimada foi considerada baixa para uma população de rebanhos, criados em sistema semi-intensivo de produção de leite, que não usava medidas específicas de controle contra a infecção. A hipótese proposta no presente artigo é que o pequeno número de animais por rebanho está favorecendo a uma provável limpeza ou erradicação da infecção nas criações e que a prevalência encontrada deve corresponder ao ponto de equilíbrio entre a pressão de infecção e a limpeza da infecção destes rebanhos. A baixa prevalência estimada pode ser uma condição favorável para iniciar um programa de controle para BVDV na população estudada. No segundo artigo, um teste da transcrição reversa seguida da reação em cadeia da polimerase (RT-PCR) foi estabelecido para detecção do vírus nas amostras de tanque de leite dos rebanhos suspeitos de infecção ativa pelo BVDV identificados no primeiro artigo. O teste foi capaz de detectar até 0,001 TCID50 de BVDV por mL de leite. Esses resultados demonstraram uma sensibilidade analítica 100 ou 1000 vezes superior aos testes de RTPCR convencionais descritos anteriormente para leite e são semelhantes aos resultados obtidos em testes de RT-PCR em tempo real para BVDV. Na análise das amostras de campo, o teste detectou RNA viral em dois rebanhos entre os 59 analisados. Esses resultados comprovaram a capacidade do teste para identificar amostras naturalmente infectadas e a presença de vacas adultas produtivas e virêmicas em 3% dos rebanhos suspeitos de infecção. Este teste é uma alternativa rápida e sensível para monitorar a infecção pelo vírus em rebanhos leiteiros, a partir de amostras coletivas. O terceiro artigo tratou da detecção do BVDV em carrapatos Rhipicephalus (Boophilus) microplus alimentados em bovino persistentemente infectado (PI). Seu objetivo foi investigar o papel do carrapato bovino R. microplus na transmissão do BVDV. O RNA viral foi detectado nas teleóginas alimentadas no bovino PI, mas não pode ser identificado em sua progênie (ovos e larvas). Esses resultados sugeriram não haver transmissão transovariana do BVDV nos carrapatos. Por outro lado, a infestação experimental de um segundo bovino com as larvas oriundas das teleóginas contaminadas com BVDV não resultou em manifestação clínica e o animal foi negativo no teste de RT-PCR. O experimento demonstrou que o carrapato R. microplus pode ser contaminado com BVDV durante o repasto sanguíneo, reforçando a idéia de que vetores hematófagos possam estar envolvidos na disseminação da doença e merecem mais investigações. / Bovine viral diarrhea virus (BVDV) is one of the main pathogenic agents in cattle and the infection with the agent causes important production losses in the affected herds. The present work contains studies carried out to clarify some aspects of the epidemiology and detection of the infection caused by BVDV in the State of Rio Grande do Sul, Brazil. The first paper consisted of a transversal study, where antibody levels against BVDV in samples of bulk milk tank were correlated with some aspects of milk production in the herds. Samples and information were collected from 300 herds randomly chosen between 1656 associates of a dairy cooperative in the region of the central area of the state of Rio Grande do Sul, Brazil, that were not using routine vaccination against BVDV in the last 12 months previous to the experiment. Among them, 80 were considered positive to BVDV by detection of antibodies against the virus in levels above the cut off point of the commercial ELISA test used. The apparent estimated prevalence was 26.7% and, using a confidence interval of 95%, showed a range between 22 and 31%. The parameters of average milk production, bovine density (relationship cattle/hectare), milk storing process and origin of the semen were not significantly associated with BVDV infection, but the increase in the total number of cows in the herds was positively correlated with the infection. The prevalence was considered low for a population of herds raised in a semi-intensive milk production system that was not using specific measures to control the viral infection. The hypothesis proposed in the present study is that the small number of animals present in the analyzed herds would favors a likely virus clearance in the herd and that the prevalence found would correspond to a point of balance between the pressure of infection and the virus clearance. The low prevalence detected can be a favorable condition to launch a control program for BVDV in the studied population. In the second paper, a reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) was established for BVDV detection in bulk tank milk samples of the herds suspected of active infection with BVDV in the first paper. The test detected up to 0.001 TCID50 of BVDV per mL of milk. These results demonstrated an analytical sensitivity 100 to 1000 times higher than conventional RT-PCR tests described previously for milk and are similar to results obtained by the use of real time RT-PCR already published. In the analysis of field samples, the test detected viral RNA in 2 out of 59 analyzed herds. These results demonstrated the relationship between the ability of the test to identify samples naturally infected and the presence of viremic adult cows in 3% of the herds suspected of the infection. This test represents a fast and sensitive alternative for monitoring virus infection in dairy herds, through the analysis of collective samples. The third article dealt with the detection of BVDV in the tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus fed in a bovine persistently infected (PI). The objective was to investigate the role of the cattle tick R. microplus in the transmission of BVDV. Viral RNA was detected in adult females fed on the PI bovine, but could not be identified in its progeny (eggs and larvae). These results suggest that there is no transovarial transmission of BVDV in ticks. On the other side, experimental infestation of a second bovine with larvae derived from adult cattle contaminated with BVDV did not result in clinical manifestations and the animal was negative in the RT-PCR test. The study demonstrated that the tick R. microplus can be contaminated with BVDV during blood feeding, strengthening the idea that haematophagous vectors could be involved in the dissemination of the disease and would deserve further consideration.

A vigilância epidemiológica é descrita como o conjunto de procedimentos de coleta, processamento e análise de dados utilizado para dar suporte aos processos de tomadas de decisão por parte dos agentes de saúde animal e humana. A crescente atuação de profissionais do setor privado em sanidade animal tem ampliado a vigilância epidemiológica passiva, com geração de montantes significativos de dados. Neste contexto, surge o Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose Animal - PNCEBT que promove, entre suas estratégias, a habilitação de médicos veterinários privados - MVH - para realização de testes diagnóstico dessas enfermidades em bovídeos. Nesta pesquisa, foi realizada uma compilação de todos os dados gerados pelos MVH relacionados ao PNCEBT no ano de 2008 no Rio Grande do Sul, os quais foram posteriormente analisados com distintas técnicas estatísticas, com objetivo de caracterizar o perfil de ocorrência demográfica e espacial destes testes, bem como buscar indicativos de frequência de enfermidades. Foram analisados resultados de 63.226 testes de bovinos e bubalinos realizados em 5.012 estabelecimentos e 332 municípios do estado, devidamente tratados por procedimentos de imputação múltipla e de detecção de valores extremos. Foi possível verificar que os animais de aptidão leiteira representam a maioria dos animais testados, e que motivação econômica, como bonificações, é o principal estímulo para realização dos testes. Os animais de aptidão leiteira apresentaram, ainda, maior frequência em casos positivos para ambas as enfermidades, quando comparados com as demais aptidões. Os animais do sexo feminino apresentaram maior frequência em ambas as enfermidades, com relação aos machos. Foi verificada maior frequência de animais positivos para tuberculose com o avanço da idade, ao passo que a brucelose se revelou mais freqüente em animais entre 48 e 60 meses. A análise espacial demonstra variações entre regiões nos percentuais de animais testados e de positivos em ambas as enfermidades. As maiores frequências de estabelecimentos positivos para tuberculose ocorreram nas mesorregiões metropolitana e centro-oriental do estado, as quais apresentam altas densidades de estabelecimentos por km². Foi constatado ainda que a distância percorrida pelo MVH para realização de testes pode ser fator limitante na ocorrência dos mesmos, sendo que 49,5% dos testes foram realizados em uma distância máxima de 50 km, considerando-se a ida e o retorno. Foi verificado que municípios onde foram realizados testes têm 67,5 vezes mais chance de ter um MVH residente. Foi possível concluir, assim, que o adequado enfoque aos dados de vigilância permite a realização de inferências relevantes, sendo factível a estruturação de sistemas de monitoramento e vigilância - MOSS. Tais sistemas podem incrementar a qualidade e acessibilidade dos dados, permitindo aos gestores públicos e privados a realização de análises customizadas que tragam maior eficiência e eficácia às ações em saúde animal. / Epidemiological surveillance is described as a set of procedures of collecting, processing and data analysis used for supporting the decision making process of animal and human health managers. The growing participation of private sector professionals on animal health issues has been widening the passive epidemiological surveillance, generating significant amounts of data. In this context, the National Program of Animal Brucellosis and Tuberculosis Control and Eradication – PNCEBT, promotes, amongst other strategies, the accreditation of private veterinarians to make diagnosis tests on bovine, increased significantly the amount of data on bovine tuberculosis and brucellosis. In the present research, a compilation of all data from diagnosis tests performed by accredited private veterinarians on behalf of PNCEBT in the state of Rio Grande do Sul in 2008 was made, which was analyzed through distinct statistics techniques, aiming at characterizing the demography and spatial patterns of occurrence, as well as to assess the frequencies of those diseases. Data from 63.226 individual tests performed in 5.012 farms on 332 municipalities were analyzed, after treatment by multiple imputation and outlier values diagnosis. It was possible to conclude that the majority of tests were from dairy related animals; economical reasons, such as bonus programs, were the main motivation for the farmers to perform tests on their properties. Higher frequencies for both diseases were found in dairy cattle, when compared to other purposes animals. Female presented higher frequencies for both diseases when compared to males. It was also observed that the frequency of tuberculosis increased with age, while for brucellosis the frequency was higher between 48 to 60 months-old animals. Spatial analysis evidenced higher frequencies of positive tuberculosis farms in the metropolitana and centro-oriental mesorregions, which had higher farm density per km². It was also verified that the distance by MVH to perform tests might be a limiting factor for them to occur, being 49.5% of the tests performed at maximum round-way distance of 50 km. The municipalities which had tests performed showed 67.5 times more chances of having a resident MVH. It was possible to conclude that an appropriate approach of surveillance data allows the making of relevant inferences, being feasible the establishment of monitoring and surveillance systems - MOSS. These systems could improve data quality and accessibility, allowing public and private managers to perform custom analysis to bring more efficiency and efficacy to animal health programs.

O vírus da leucose enzoótica bovina (VLEB) pode interferir na proporção e na funcionalidade dos linfócitos B e das demais células sanguíneas. Acreditando-se que essas alterações pudessem interferir nos mecanismos de defesa da glândula mamária, o presente estudo avaliou funcionalmente os fagócitos sanguíneos e lácteos de vacas naturalmente infectadas pelo VLEB, por meio da expressão de diferentes receptores de superfície celular de fagócitos e linfócitos; da morte celular dos fagócitos e do linfócito B; pelo potencial de fagocitose e produção intracelular de peróxido de hidrogênio pelas células CD14+ e CH138+. Foram selecionadas nove vacas negativas para a LEB (grupo negativo), dez positivas sem linfocitose (grupo AL) e seis positivas com linfocitose persistente (grupo LP). Independente do perfil hematológico das vacas positivas para a LEB, nas amostras de sangue foram observadas menor expressão de células mononucleares CD14+, de linfócitos T (CD3+) e de linfócitos B CD21+ CD11b+ e maior expressão de linfócitos B (CD21+). As vacas do grupo LP apresentaram menores quantidades de linfócitos T auxiliares (CD3+ CD4+) e de linfócitos B CD21+ CD5- CD11b- e maiores quantidades de linfócitos B CD21+ CD5+ CD11b+. Menores quantidades de linfócitos B CD21+ CD5+ foram observados nas vacas do grupo AL do que nas vacas do grupo negativo. As vacas do grupo LP apresentaram menores índices de fagocitose por Escherichia coli pelas células mononucleares CD14+, menor produção de peróxido de hidrogênio e menores índices de fagocitose por Staphylococcus aureus pelas células polimorfonucleares CH138+. As vacas do grupo LP apresentaram menores índices de necrose, de apoptose e/ou necrose e maior viabilidade das células mononucleares CD14+, das células polimorfonucleares CH138+ e dos linfócitos B (CD21+). Apenas os linfócitos B (CD21+) das vacas do grupo LP apresentaram menores índices de morte por apoptose, e as células mononucleares CD14+ das vacas do grupo AL manifestaram maiores índices de apoptose e/ou necrose do que as vacas negativas. Independente do perfil hematológico das vacas, nas amostras de leite foram observadas maiores quantidades de macrófagos e maiores expressões de linfócitos T (CD3+) e de linfócitos B (CD21+). As vacas do grupo AL apresentaram maior quantidade de linfócitos B (CD21+) do que as vacas negativas. As vacas do grupo LP apresentaram menores quantidades de linfócitos T citotóxicos (CD3+ CD8+), de linfócitos B CD21+ CD11b+ e de linfócitos B CD21+ CD5+ CD11b+ e maior quantidade de linfócitos B CD21+ CD5- CD11b-. As vacas do grupo AL apresentaram menores índices de fagocitose por Escherichia coli pelos macrófagos CD14+ e pelos leucócitos CH138+ e as vacas do grupo LP apresentaram maior produção de peróxido de hidrogênio intracelular. As vacas positivas para LEB apresentaram maiores índices de morte por necrose dos macrófagos CD14+ e dos linfócitos B (CD21+) e menores índices de morte por apoptose dos macrófagos CD14+, dos leucócitos CH138+ e dos linfócitos B (CD21+). Estas vacas também apresentaram maior viabilidade dos macrófagos CD14+ e dos leucócitos CH138+. As vacas do grupo LP apresentaram maiores índices de apoptose e/ou necrose dos macrófagos CD14+, de necrose de leucócitos CH138+ e de viabilidade de linfócitos B (CD21+). Resultados permitem concluir que a o VLEB altera a resposta imune da glândula mamária. / The enzootic bovine leukemia virus (BLV) can influence the amount of lymphocytes B and other blood cells and their functions. Believing that these changes could interfere in the defense mechanisms of the mammary gland, this study evaluated blood and milk phagocytes functions from cows naturally infected VLEB through the expression of different cell surface receptors of phagocytes and lymphocytes; from death cell of phagocytes and B lymphocytes; the phagocytosis and intracellular production of hydrogen peroxide by CD14+ and CH138+ cells. We chose nine cows negative for the LEB (negative group), ten positive without lymphocytosis (LA group) and six positive with persistent lymphocytosis (LP group). In blood samples of positive cows for BLV, it was observed smaller expression of CD14+ mononuclear, T lymphocytes (CD3+) and CD21+ CD11b+ B lymphocytes, along with increased expression of B lymphocytes (CD21+). Cows of the LP group had lower amounts of T helper lymphocytes (CD3+ CD4+) and CD21+ CD5- CD11b- B lymphocytes and higher amounts of CD21+ CD5+ CD11b+ B lymphocytes. In cows of AL group it was observed lower amounts of CD21+ CD5+ B lymphocytes than in cows of negative group. Cows of LP group had lower rates of Escherichia coli phagocytosis by CD14+ mononuclear cells, lower intracellular production of hydrogen peroxide and lower rates of phagocytosis of Staphylococcus aureus by CH138+ polymorphonuclear cells. Cows of LP group showed less necrosis, apoptosis and/or necrosis and increased viability of CD14+ mononuclear cells, CH138+ polymorphonuclear cells and B lymphocytes (CD21+). Only the B-lymphocytes (CD21+) of the cows in the LP group showed less apoptosis, and CD14 + mononuclear cells from cows in the AL group showed higher rates of apoptosis and/or necrosis than the ones from negative cows. In the milk sample, the positive cows showed higher amounts of macrophages and increased expression of T lymphocytes (CD3+) and B lymphocytes (CD21+). Cows of AL group showed a higher amount of B lymphocytes (CD21+) than negative cows. Cows of LP group had lower amounts of T cytotoxic lymphocytes (CD3+, CD8+), CD21+ CD11b+ B lymphocytes and CD21+, CD5+, CD11b+, B lymphocytes and increased amount of CD21 + CD5- CD11b- B lymphocytes. Cows of the AL group had lower rates of Escherichia coli phagocytosis by CD14+ macrophages and CH138+ leukocytes and cows of group LP had higher production of intracellular hydrogen peroxide. The positive cows for LEB had higher rates of death by necrosis of CD14+ macrophages and B lymphocytes (CD21+) and lower rates of apoptosis of CD14+ macrophages, CH138+ leukocytes and B lymphocytes (CD21+). These cows also had higher viability of CD14+ macrophages and CH138+ leukocytes. Cows on the LP group had higher rates of apoptosis and/or necrosis of CD14+ macrophages, necrosis of CH138+ leukocytes and viability of B lymphocytes (CD21+). Results suggested that the VLEB influence the immune response of the mammary gland.

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCV08MA028.pdf: 640511 bytes, checksum: 7739954e4535ca25f1e1be5d8d3266a8 (MD5) Previous issue date: 2008-05-26 / Animal cloning has been associated with developmental abnormalities, with the level of heteroplasmy caused by the procedure per se being one of the potential determining factors for the appearance of the problems. Embryo aggregation may be an alternative to minimize such effects during cloning. The aim of this study was to determine the effect of the heteroplasmy caused by fusion of hemi-cytoplasts or by aggregation of hemi-embryos, varying the final cytoplasmic volume, on development and cell density of embryos produced by handmade cloning (HMC), parthenogenesis or in vitro fertilization (IVF). In vitro-matured bovine oocytes, selected by the presence of a polar body, were manually bisected, followed by fluorescence screening of hemi-cytoplasts. One or two enucleated hemi-cytoplasts were paired and fused with one skin somatic cell. Activated clone and zona-free parthenote embryos and hemi-embryos were in vitro-cultured in microwells (WOW system), being allocated to one of six experimental groups, based on the volume of cytoplasm used for embryo reconstruction either by fusion of hemi-cytoplasts or by aggregation of hemi-embryos or embryo, on a per WOW basis, as follows: single clone or parthenote hemi-embryos (G1: 1 x 50%); aggregation of two (G2: 2 x 50%), three (G3: 3 x 50%) or four (G4: 4 x 50%) clone or parthenote hemi-embryos; single clone or parthenote embryos (G5: 1 x 100%); or aggregation of two clone or parthenote embryos (G6: 2 x 100%). Zona-intact parthenote or IVF embryos (G7: Zona-intact, 100%), used as controls, were in vitro-cultured in 4-well dishes. Data were analyzed by &#967;2, ANOVA, Pearson s correlation or linear regression, for P<0.05. In general, results indicated that the increase in the number of aggregated structures within each WOW was followed by a linear increase in cleavage, blastocyst rate and cell density. Even though those observations were more pronounced in parthenotes, cell density and embryo quality were superior in clone embryos. The increase in cytoplasmic volume, either by fusion or by aggregation, had a positive effect on embryo development, supporting the establishment of pregnancies after transfer to female recipients. Nevertheless, the use of only half of the normal volume did not affect the developmental potential to the blastocyst stage, but reduced cell number. In conclusion, despite the increase in embryo development and cell density per WOW, embryo aggregation did not improve blastocyst yield or cell number, on a hemi-cytoplast basis / A clonagem animal tem sido associada a anormalidades de desenvolvimento, com o nível de heteroplasmia causados pela técnica per se sendo um dos potenciais fatores determinantes do aparecimento dos problemas. A agregação embrionária pode ser uma alternativa para minimizar tais efeitos causados pela clonagem. O objetivo deste estudo foi determinar o efeito da heteroplasmia pela fusão de hemi-citoplastos ou da agregação de hemi-embriões, variando-se o volume citoplasmático final, no desenvolvimento e na densidade celular de embriões produzidos por handmade cloning (HMC), partenogênese ou fecundação in vitro (FIV). Oócitos bovinos maturados in vitro, selecionados pela presença do corpúsculo polar, foram bisseccionados manualmente, seguidos da seleção de hemi-citoplastos por fluorescência. Um ou dois hemi-citoplastos enucleados foram pareados e fusionados a uma célula somática cutânea. Embriões e hemi-embriões de clonagem e de partenogênese (sem zona pelúcida) foram ativados e cultivados in vitro em micropoços (sistema WOW), sendo alocados para um de seis grupos experimentais, baseado no volume de citoplasma utilizado para a reconstrução embrionária pela fusão de hemi-citoplastos ou agregação de hemi-embriões e embriões, por micropoço (WOW), conforme a seguir: um único hemi-embrião de clonagem ou de partenogênese (G1: 1 x 50%); agregação de dois (G2: 2 x 50%), três (G3: 3 x 50%) ou quatro (G4: 4 x 50%) hemi-embriões de clonagem ou de partenogênese; um único embrião de clonagem ou de partenogênese (G5: 1 x 100%); ou agregação de dois embriões de clonagem ou de partenogênese (G6: 2 x 100%). Embriões intactos oriundos de FIV ou de partenogênese (G7: Zona intacta, 100%), utilizados como controle, foram cultivados in vitro em placas de 4 poços. Os resultados foram analisados pelos testes do &#967;2, ANOVA, correlação de Pearson ou regressão linear, para P<0.05. Em termos gerais, os resultados indicaram que o aumento no número de estruturas agregadas em cada micropoço foi seguido por um aumento linear nas taxas de clivagem, de blastocisto e na densidade celular. Mesmo que tais observações tenham sido mais pronunciadas nos partenotos, a densidade celular e a qualidade embrionária foram superiores em embriões clonados. O aumento no volume citoplasmático por fusão ou agregação apresentou um efeito positivo no desenvolvimento embrionário, dando suporte ao estabelecimento de prenhezes após a transferência para fêmeas receptoras. No entanto, a utilização de apenas metade do volume normal não afetou o potencial de desenvolvimento até o estádio de blastocisto, mas reduziu o número de células. Em conclusão, apesar de haver um aumento no desenvolvimento e densidade celular em embriões por micropoço, a agregação embrionária não melhorou a taxa de blastocistos ou o número de células, com base no número de hemi-citoplastos utilizados por embrião

O objetivo deste trabalho foi determinar e quantificar os fatores inerentes ao leilão que afetam o preço de venda de bezerros de corte. Foram coletados em 148 leilões nas cidades de Dois Vizinhos e Francisco Beltrão dados referentes ao preço de venda (PV), local (L) e mês (M) da realização do leilão,grupo genético (GG) e tamanho do lote (TL), peso médio (PE) e sexo (S) dos animais.Foram observados 4.312 lotes correspondendo a 48.588 animais pesando entre 100 e 250 kg de janeiro de 2004 a dezembro de 2014. Os lotes foram classificados de acordo com suas características, em sete grupos genéticos. Nos lotes B, C e Z, predominaram animais de raças Britânicas, Continentais e Zebuínas, respectivamente. Enquanto que, para os grupos BC, BZ e CZ, admitiram-se os seus cruzamentos. Os lotes denominados XX não eram homogêneos geneticamente. Os valores foram deflacionados através do IGP-DI e atenderam os pressupostos paramétricos. O preço de venda foi padronizado em função da mediana anual, assumindo-se que seu valor corresponde a 100%, e os demais valores variaram em sua função. As análises foram realizadas através de funções desenvolvidas e pacotes do software R. A análise de trilha quantificou os efeitos diretos e indiretos das variáveis tomadas como explicativas sobre o preço de venda, em seguida realizaram-se análises de regressão e teste de Tukey. No geral o efeito direto do peso médio foi o maior (0,7), seguido do sexo (0,38). O menor efeito direto foi do grupo genético (-0,075) e do local (-0,04). Observou-se relação exponencial crescente entre peso médio do lote e preço de venda, e relação decrescente (-0,0003 pontos percentuais por quilograma) entre preço kg-1 e peso médio do lote, onde os machos, no geral, foram 15,74% mais valorizados que as fêmeas. O cruzamento entre raças Britânicas x Zebuínas foi o grupo genético mais valorizado, não diferindo das Britânicas (8,93 e 3,57%, respectivamente). E a comercialização no mês de novembro alcançou a maior bonificação, seguida de fevereiro (9,57 e 8,84%, respectivamente, sempre em relação a mediana do ano). O preço de venda cresce linearmente 0,3284 pontos percentuais para cada animal acrescido no lote. Concluiu-se que o peso médio do lote é a variável mais importante na formação do preço de venda, seguido do sexo dos animais. / The objective of this study was to determine and quantify the inherent factors auction that affect the selling price of beef calves. The data were collected in 148 auctions in the cities of Dois Vizinhos and Francisco Beltrao on the selling price (PV), location (L) and month (M) of the auction, genetic group (GG) and lot size (TL) average weight (PE) and sex (S) of animals. 4,312 lots corresponding to 48,588 animals weighing between 100 and 250 kg of January 2004 to December 2014 were observed were classified according to their characteristics in seven genetic groups. In lots B, C and Z, predominated animal breeds British, Continental and Zebu, respectively. While, for BC and BZ CZ groups were admitted their cross. Lots called XX were not genetically homogeneous. The values were deflated by the IGP-DI and met the parametric assumptions. The selling price was standardized by the yearly median, assuming that its value corresponds to 100%, and the other values varied in their function. Analyses were performed by developed functions and software packages R. Path analysis quantified the direct and indirect effects of the variables taken as explanatory of the selling price, then were carried out regression analyzes and Tukey test. Overall the direct effect of the average weight was the highest (0.7), followed by gender (0.38). The smaller direct effect was the genetic group (-0.075) and location (-0.04). There was growing exponential relationship between average weight of the lot and selling price, and decreasing ratio (-0.0003 percentage point per kilogram) between kg-1 price and average weight of the lot, where the males, in general, were 15.74% more valued than females. The cross between British x Zebu breeds was the most valued genetic group did not differ from the British (8.93 and 3.57%, respectively). And the market in November reached the highest bonus, followed by February (9.57 and 8.84%, respectively, always compared to median year). The selling price increases linearly 0.3284 percentage points for each animal plus in the lot. It was concluded that the average weight of the lot is the most important variable in the formation of the selling price, followed by the sex of the animals.

O objetivo deste trabalho foi determinar e quantificar os fatores inerentes ao leilão que afetam o preço de venda de bezerros de corte. Foram coletados em 148 leilões nas cidades de Dois Vizinhos e Francisco Beltrão dados referentes ao preço de venda (PV), local (L) e mês (M) da realização do leilão,grupo genético (GG) e tamanho do lote (TL), peso médio (PE) e sexo (S) dos animais.Foram observados 4.312 lotes correspondendo a 48.588 animais pesando entre 100 e 250 kg de janeiro de 2004 a dezembro de 2014. Os lotes foram classificados de acordo com suas características, em sete grupos genéticos. Nos lotes B, C e Z, predominaram animais de raças Britânicas, Continentais e Zebuínas, respectivamente. Enquanto que, para os grupos BC, BZ e CZ, admitiram-se os seus cruzamentos. Os lotes denominados XX não eram homogêneos geneticamente. Os valores foram deflacionados através do IGP-DI e atenderam os pressupostos paramétricos. O preço de venda foi padronizado em função da mediana anual, assumindo-se que seu valor corresponde a 100%, e os demais valores variaram em sua função. As análises foram realizadas através de funções desenvolvidas e pacotes do software R. A análise de trilha quantificou os efeitos diretos e indiretos das variáveis tomadas como explicativas sobre o preço de venda, em seguida realizaram-se análises de regressão e teste de Tukey. No geral o efeito direto do peso médio foi o maior (0,7), seguido do sexo (0,38). O menor efeito direto foi do grupo genético (-0,075) e do local (-0,04). Observou-se relação exponencial crescente entre peso médio do lote e preço de venda, e relação decrescente (-0,0003 pontos percentuais por quilograma) entre preço kg-1 e peso médio do lote, onde os machos, no geral, foram 15,74% mais valorizados que as fêmeas. O cruzamento entre raças Britânicas x Zebuínas foi o grupo genético mais valorizado, não diferindo das Britânicas (8,93 e 3,57%, respectivamente). E a comercialização no mês de novembro alcançou a maior bonificação, seguida de fevereiro (9,57 e 8,84%, respectivamente, sempre em relação a mediana do ano). O preço de venda cresce linearmente 0,3284 pontos percentuais para cada animal acrescido no lote. Concluiu-se que o peso médio do lote é a variável mais importante na formação do preço de venda, seguido do sexo dos animais. / The objective of this study was to determine and quantify the inherent factors auction that affect the selling price of beef calves. The data were collected in 148 auctions in the cities of Dois Vizinhos and Francisco Beltrao on the selling price (PV), location (L) and month (M) of the auction, genetic group (GG) and lot size (TL) average weight (PE) and sex (S) of animals. 4,312 lots corresponding to 48,588 animals weighing between 100 and 250 kg of January 2004 to December 2014 were observed were classified according to their characteristics in seven genetic groups. In lots B, C and Z, predominated animal breeds British, Continental and Zebu, respectively. While, for BC and BZ CZ groups were admitted their cross. Lots called XX were not genetically homogeneous. The values were deflated by the IGP-DI and met the parametric assumptions. The selling price was standardized by the yearly median, assuming that its value corresponds to 100%, and the other values varied in their function. Analyses were performed by developed functions and software packages R. Path analysis quantified the direct and indirect effects of the variables taken as explanatory of the selling price, then were carried out regression analyzes and Tukey test. Overall the direct effect of the average weight was the highest (0.7), followed by gender (0.38). The smaller direct effect was the genetic group (-0.075) and location (-0.04). There was growing exponential relationship between average weight of the lot and selling price, and decreasing ratio (-0.0003 percentage point per kilogram) between kg-1 price and average weight of the lot, where the males, in general, were 15.74% more valued than females. The cross between British x Zebu breeds was the most valued genetic group did not differ from the British (8.93 and 3.57%, respectively). And the market in November reached the highest bonus, followed by February (9.57 and 8.84%, respectively, always compared to median year). The selling price increases linearly 0.3284 percentage points for each animal plus in the lot. It was concluded that the average weight of the lot is the most important variable in the formation of the selling price, followed by the sex of the animals.

O arsênio é um metaloide encontrado nas formas orgânica e inorgânica em estado de oxidação trivalente ou pentavalente. Na medicina veterinária a intoxicação por arsênio foi associada, no passado, ao contato acidental com pesticidas e ao uso indevido de medicamentos à base de arsênio inorgânico. Atualmente a intoxicação em bovinos tem sido relatada devido à exposição prolongada a ambientes contaminados. No Brasil, devido à proibição do uso de arsênio inorgânico na formulação de pesticidas, herbicidas a base de metanoarseniato ácido monossódico (MSMA), um arsenical orgânico pentavalente, considerado menos tóxico, têm sido utilizados em plantas infestantes em pós-emergência em culturas de algodão, café, cana-de-açúcar e citros. Em maio de 2014, em uma fazenda no município de Barra do Ribeiro, RS, foi realizada aplicação via aérea de um herbicida formulado com MSMA. Cerca de 200 vacas de corte e terneiros estavam sobre o local e apresentaram diarreia acentuada e severa desidratação após ingerir o pasto contaminado. Dezesseis animais morreram em até 20 dias, sendo seis submetidos ao exame de necropsia. As principais alterações macroscópicas consistiram de avermelhamento difuso da mucosa dos pré-estômagos, abomaso, e intestino, múltiplas úlceras e desprendimento multifocal da mucosa de pré-estômagos com acentuado edema de submucosa e hemorragia multifocal nas serosas. Microscopicamente, as principais alterações foram caracterizadas por necrose isquêmica multifocal associada à necrose fibrinoide de vasos e trombose na mucosa e submucosa. Com exceção de um bovino, os níveis de arsênio detectados estavam acima do limite de referência para a espécie, de 0,5 μg/g ou ppm. O exame anatomopatológico dos bovinos demonstrou que o MSMA promove lesões na mucosa de pré-estômagos por meio de necrose fibrinoide da parede de arteríolas e capilares. Apesar de ser classificado como pentavalente, durante sua metabolização, o MSMA pode gerar metabólitos intermediários trivalentes, que poderiam ter contribuído supostamente com as lesões observadas neste surto. As lesões observadas são similares às alterações promovidas pela forma inorgânica trivalente do arsênio em bovinos. A utilização de herbicidas que contém MSMA deve ser cautelosa, evitando-se o contato de animais em pastagens recém-pulverizadas. / Arsenic is a metalloid found in organic and inorganic forms in a state of trivalent or pentavalent oxidation. In veterinary medicine arsenic poisoning has been associated in the past to accidental contact with pesticides and misuse of medicinal products containing inorganic arsenic. Currently subclinical poisoning in cattle has been reported due to prolonged exposure to contaminated environments. In Brazil, due to the ban of of inorganic arsenic in pesticide formulation, herbicides methane arsenate monosodium acid (MSMA), an organic arsenical pentavalent, considered less toxic, has been used against weeds in post-emergent cotton, coffee, sugarcane and citrus. In May 2014, on a farm in the municipality of Barra do Ribeiro, Rio Grande do Sul, Brazil, air application was made on a Tifton cultivated paddock with a MSMA formulated herbicide. About 200 beef cows and calves were on the paddock and showed severe diarrhea and severe dehydration after consuming contaminated pasture. Sixteen animals died in 20 days, six of which were necropsied. The main gross lesions consisted of diffuse reddening of the mucosa of the fore stomachs, abomasum and intestines; multiple ulcers and multifocal detachment of the mucosa with severe edema of submucosa and multifocal hemorrhage in the serous membranes. Microscopically the main changes were characterized by multifocal ischemic necrosis associated with fibrinoid necrosis of vessels and thrombosis in the mucosa and submucosa. Except in one bovine, the levels of organic arsenic detected were above the reference level for the species (0,5 μg/g or ppm). The pathology found in the affected cattle showed that MSMA causes injuries in the mucosal pre-stomachs through fibrinoid necrosis the walls of arterioles and capillaries. Although it is classified as pentavalent, during their metabolism the MSMA can generate trivalent intermediate metabolites, supposedly responsible for the injuries observed in this outbreak. The lesions found in the outbreak of this repot are similar to those caused in cattle by inorganic trivalent form of arsenic. Herbicides containing MSMA must be used with caution, avoiding the contact of the animals with freshly sprayed pasture.