Foram desenhados três pares de primers, sendo um deles dirigido ao gene que codifica uma proteína periplasmática da Brucella (BP26) e dois outros dirigidos para a região interespaçadora entre os gene 16S e 23S do RNA ribossômico (ITS). Com os primers acima, foram padronizadas três PCRs, potencialmente capazes de detectar qualquer espécie de Brucella e denominadas PCR-ITS1, PCR-ITS2 e PCR-BP26. Soluções de DNA de sangue de cão livre de Brucella foram contaminadas com quantidades decrescentes de DNA de B. canis (RM6/66) e, então, submetidas às PCRs descritas anteriormente. Para a avaliação das PCRs quanto à capacidade de detecção de Brucella spp. em sangue de animais naturalmente infectados, foram utilizadas 75 amostras de sangue de cães provenientes de canis comerciais onde foram registrados casos clínicos sugestivos de infecção por Brucella. As 75 amostras de sangue de cães foram colhidas com anti-coagulante (citrato de sódio) por punção da veia jugular. As amostras foram separadas em duas alíquotas, uma das quais (2 ml) foi submetida ao isolamento e identificação bacteriológica e a outra alíquota (1ml), às PCRs. O DNA total das amostras de sangue foi extraído por método baseado em digestão com proteinase K, SDS e CTAB seguido de purificação com fenol e clorofórmio. Considerando os resultados da PCR de melhor desempenho (PCR-ITS1), entre as 35 amostras positivas pelo isolamento bacteriano, 30 (85,71%) foram positivas pela técnica de PCR, enquanto entre as 40 amostras negativas pelo cultivo bacteriológico, 11 (27,5%) foram positivas pela PCR. A PCR-ITS1 foi capaz de detectar um mínimo de 3,78fg de DNA bacteriano misturado a 450ng de DNA de cão, o que representa, teoricamente, a massa genômica de 1,26 bactérias. Pela aparente superior capacidade de classificar animais positivos que o método de cultura bacteriológica, a PCR-ITS1 parece ser uma técnica promissora para o diagnóstico direto da brucelose em cães. / Three pair of primers were designed against Brucella genetic sequences. Two of them were directed to 16S-23S rRNA interspacer and the other was directed to a periplasmatic protein coding gene (BP26). Three PCRs assays named PCR-ITS1, PCR-ITS2 and PCR-BP26, each one putatively capable of amplifying DNA from any Brucella species were tested using the aforementioned primers. Nucleic acid extracts from whole-blood from naïve dogs were spiked with decreasing amounts of B. canis (RM6/66) DNA and the resulting solutions were tested by PCR. The capability of the PCRs to amplify Brucella spp. genetic sequences from naturally infected dogs was evaluated by using 75 whole-blood samples from dogs raised in commercial kennels were clinically affected animals have already been detected with signs suggestive of Brucella infection. The whole-blood samples were collected with sodium citrate as anti-coagulant by venal puncturing the jugular vein. The samples were split into two aliquots, one of them (2mL) being submitted to bacterial isolation and identification and the remaining sample (1mL) to PCR. The DNA from whole-blood was extracted by using proteinaseK, SDS and CTAB following phenol-chloroform purification. Considering the results from the PCR with the best performance (PCR-ITS1), within 35 isolation positive samples, 30 were positive by PCR. Within 40 isolation negative samples, 11 were positive by PCR. PCR-ITS1 was capable of detecting as few as 3.78fg of bacterial DNA mixed to 450ng of host DNA. Theoretically, 3.78fg of Brucella DNA represents the total genomic mass of 1.26 bacterial cells. The superior ability of PCR-ITS1 on classifying positive animals suggest that PCR-ITS1 is a promising tool for the direct detection of canine brucellosis.

Caracterizou-se a brucelose bovina em Mato Grosso por um estudo transversal realizado em 2003 pelo Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento, Instituto de Defesa Agropecuária do Estado de Mato Grosso e o Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo. O Estado foi estratificado em 4 circuitos pecuários (CP1, CP2, CP3, CP4) e 1152 rebanhos foram sorteados aleatoriamente. Foram utilizados os testes RTB (Teste de Rosa Bengala) para a triagem e RTB e 2-mercaptoetanol concomitantemente para o resultado conclusivo. A constante sistemática da prova foi 10 amostras em rebanhos até 99 fêmeas e 15 naqueles com 100 ou mais fêmeas com idade igual ou superior a 24 meses. Analisaram-se 1115 rebanhos bovinos, descartando-se 37 rebanhos (34 inconclusivos nas provas e 3 com bubalinos). Para o Estado, a prevalência estimada em propriedades foi de 41,19% e nos quatro circuitos pecuários foi de 36,91%, 27,25%, 40,4% e 50,33%, respectivamente. A prevalência estimada em animais foi 10,25% para o Estado, e 7,92%, 4,11%, 8,13% e 15,26% nos quatro circuitos pecuários, respectivamente. Um rebanho bubalino e 428 bovinos foram soropositivos para brucelose. Registraram-se as coordenadas geográficas das sedes das propriedades por ocasião da colheita que permitiu a análise epidemiológica espacial, mas não foram identificados agrupamentos de focos de brucelose no Estado de Mato Grosso. Na análise univariada estudaram-se 28 variáveis independentes e mantiveram-se as variáveis com P<0,20 para a análise de regressão múltipla. Foram variáveis associadas: exploração corte (OR=1,8), exploração mista (OR =1,8), propriedades com 11 a 50 fêmeas (OR=4,81), propriedades com 51 ou mais fêmeas (OR=6,8), e ocorrência de aborto (OR =1,7) para o Estado; produção de leite acima de 50 litros (OR=5,4) e presença de aborto (OR=2,7) no CP1; propriedades com mais de 242 fêmeas (OR=3,6) e propriedades que realizam teste de brucelose apenas quando compram animais ou quando é exigido para trânsito (OR=3,8) no CP2; propriedades com 135 a 333 fêmeas (OR=2,4), propriedades que abatem as fêmeas no final da vida reprodutiva em estabelecimento com inspeção (OR=4,0), propriedades que abatem as fêmeas no final da vida reprodutiva em estabelecimento sem inspeção ou na própria fazenda (OR=2,5) no CP3; exploração mista (OR=2,7), propriedades com 38 a 96 fêmeas (OR=2,6), e acima de 361 fêmeas (OR =4,1) no CP4. Essa análise nos permite verificar que a brucelose está homogeneamente distribuída no Estado de Mato Grosso, favorecendo a utilização de medidas sanitária uniformes no território matogrossense. Os fatores de risco com valores mais elevados de OR estão relacionados a propriedades com rebanhos maiores, o que justifica a adoção de medidas sanitárias específicas para estas propriedades. Como medida adicional homogênea para o Estado, sugere-se a intensificação da vacinação de fêmeas, sendo que, com base em estudos anteriores, os benefícios advindos desta medida poderão levar décadas. / To characterize bovine brucellosis in Mato Grosso State, a transversal study was carried out in 2003 by the Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento, Instituto de Defesa Agropecuária do Estado de Mato Grosso, and Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo. The State was stratified in 4 cattle production regions (CP1, CP2, CP3, CP4) and 1152 herds were randomly sampled. Sera were tested using a serial testing procedure with the Rose Bengal Test as the screening method and both Rose Bengal Test and 2-mercaptoethanol as the confirmatory method. The systematic constant of the test was 10 samples in herds up to 99 females and 15 in those with 100 or more females over 24 months of age. 1115 bovine were analysed and 37 herds were not considered (34 with inconclusive tests and 3 with buffaloes). In the State, the estimated prevalence of herds 41.19%, and 36.91%, 27.25%, 40.4% and 50.33% in the four cattle regions, respectively. The estimated prevalence of animals was 10.25% in the State and 7.92%, 4.11%, 8.13%, 15.26% in the four regions, respectively. A buffalo and 428 bovine herds tested positive for brucellosis. Geographic coordinates of the farms were obtained, but no cluster of positive herds was observed in the spatial analysis. In the univariate analysis 28 independent variables were analysed, but only those with P<0.20 were kept for the multiple regression analysis. The herd characteristics most associated with the presence of disease were: beef cattle farming (OR=1.8), mixed (beef and dairy) cattle farming (OR=1.8), farms with 11 to 50 females (OR=4.8), farms with more than 51 females (OR=6.8) and presence of abortion (OR=1.7), for the whole State; milk production above 50 liters (OR=5.4) and presence of abortion (OR=2.7) in CP1; farms with more than 242 females (OR=3.6) and farms that perform brucellosis tests only when animals are bought or when it is required for animal transportation (OR=3.8) in CP2; farms with 135 to 333 females (OR=2.4), farms that slaughter females by the end of their reproductive lives in inspected slaughterhouses (OR=4.0) and farms that slaughter females by the end of their reproductive lives in uninspected slaughterhouses or in the farm (OR=2.5) in CP3; mixed cattle farming (OR=2.7), farms with 38 to 96 females (OR=2.6) and with more than 361 females (OR=4.1) in CP4. Once brucellosis is homogeneously distributed in Mato Grosso State, uniform sanitary measures might be adopted for the whole State. Risk factors with the highest OR values are related to farms with big herd sizes, what justifies the adoption of sanitary measures specific for these farms. As a homogeneous additional measure for the State, we suggest the intensification of the females vaccination, whose results, based on previous studies, might take decades to be observed.

Os objetivos desse trabalho foram avaliar in vitro a sensibilidade de zigotos murinos à Brucella abortus, assim como a eficácia das lavagens seqüenciais e do tratamento com tripsina, padronizados pela International Embryo Transfer Society, na sua remoção e/ou inativação, a fim de estabelecer um modelo acessível para o estudo de interações embriões-patógenos. Para a coleta dos zigotos, foram utilizados camundongos fêmeas (Swiss Webster), púberes, nulíparas, 6-8 semanas de idade, acasaladas com machos inteiros da mesma linhagem, após superestimulação ovariana. Para a infecção foi utilizada a bactéria B.abortus 1119.3. A suspensão de bactérias foi preparada no momento da inoculação, na diluição de 106 bactérias/ml. Os zigotos obtidos foram separados em controle e infectados. A infecção dos zigotos foi feita com 30&micro;l da suspensão de bactérias, e após 24h e 96h foram analisados quanto à morfologia e taxa de clivagem. Os procedimentos de lavagem seqüencial e tratamento com tripsina foram realizados após 24h. Para detecção da bactéria após os procedimentos de lavagem, as amostras foram inoculadas em cultura de bactérias e submetidas ao teste de reação em cadeia pela polimerase (PCR). Uma amostra da última gota de lavagem de cada grupo também foi testada. Para analise estatística dos resultados foi utilizado o teste do &chi;2. No grupo controle não foram verificadas alterações morfológicas, já no infectado foi possível verificar a presença de blastômeros irregulares, falha de divisão, citoplasma com granulação e aspecto degenerativo. As taxas de clivagem obtidas foram de 77,4% (controle) e 59,2% (infectados) (&chi;2 de 0,001674; p<0,05) após 24h e após 96h de infecção 14,5% (controle) e 7% (infectados) (&chi;2 de 0,141616; p<0,05). Não foi possível isolar B.abortus em cultura após os procedimentos de lavagem para ambos os grupos. As amostras do grupo controle apresentaram-se negativas na PCR. Já no grupo infectado foram obtidos resultados positivos e negativos, para os embriões e para a alíquota da última gota de lavagem dos grupos tratados com a lavagem seqüencial. Foi verificada apenas em uma amostra a presença de embriões positivos para a B.abortus com amostra da última gota de lavagem negativa. Para outras duas amostras os embriões apresentaram-se livres de B.abortus, mas foram detectadas na alíquota da última gota de lavagem. Apenas em uma amostra foram obtidos resultados negativos tanto para os embriões, quanto para o meio de lavagem. Os resultados da PCR para os grupos infectados tratados com tripsina foram positivos para praticamente todas as amostras, contendo embriões ou apenas da alíquota da última gota de lavagem, com exceção dos embriões de uma amostra que apresentaram-se negativos. As novas tecnologias desenvolvidas em reprodução animal promovem manipulação invasiva do embrião. Portanto, tratamentos preconizados para a remoção de patógenos podem não ser eficazes. O risco a ser considerado é da presença de patógenos associados à zona pelúcida ou nas proximidades, que possam ser introduzidos, ou ter sua entrada facilitada no embrião. Considerando os dados apresentados, torna-se clara a importância do desenvolvimento de um modelo animal para estudos de interações embriões- patógenos, a fim de se evitar a transmissão e disseminação de doenças. / The aim of this study was evaluate in vitro mouse zygotes sensitivity to Brucella abortus, such as the embryo washing procedure and trypsin treatment, recommended by the International Embryo Transfer Society, efficacy in its removal and/or inactivation, with the purpose of established an accessible model for embryo- pathogen interaction studies. The female mice (Balb C) aging 6 to 8 weeks were superovulated and matted with fertile males of the same strain, then the zygote retrieval was performed. The bacterial suspension was prepared in the moment of inoculation and the dilution was 106 brucellas/ml. The zygotes were divided in control and infected groups (30&micro;l of the bacterial suspension); after 24h and 96h their morphology and viability were analised. The zygotes of each group were washed sequentially or treated with trypsin after 24h exposition. To verify the presence of B. abortus pos-washing the zygotes and a sample of the last wash drop of each group were tested on bacterial culture system and polimerase chain reaction (PCR). The statistical analyses was performed with the &chi;2 test. Morphological changes were not observed at the control group, but the infected one presented irregular blastomeres, clivage defective, granular cytoplasm with degenerative like morphology. The clivage rates were 77,4% (control) and 59,2% (infected) (&chi;2 de 0,001674; p<0,05) after 24h and after 96h 14,5% (control) e 7% (infected) (&chi;2 de 0,141616; p<0,05). Our results showed that the bacterial culture presented negative growing for all groups tested. The control group presented only negative results on PCR analyses. The infected group presented positive and negative results on PCR, for embryos or last wash drop sample, submitted to the sequential washing procedure. Positive embryos were found in just one sample with the last wash drop negative. To two other samples embryos presented negative PCR results but positive at the last wash drop. Negative results for embryos and last wash drop was found in just one sample. The PCR results for the groups treated with trypsin were almost all positives, for embryos or last wash drop samples, except one embryo sample that presented negative. The recent developed reproductive technologies promote excessive manipulation of the embryo. Therefore, preexistent procedures for microorganisms\' removal could not be efficient. The preeminent risk to be considered here is the potential or probability of the presence of pathogens associated with or in proximity to the zona pelúcida, which could be introduced, or facilitated its entrance on embryo. According to the data presented become clear the importance of develop a model for studies of embryo- pathogen interactions, with the aim of avoid disease transmission.

Foram desenhados três pares de primers, sendo um deles dirigido ao gene que codifica uma proteína periplasmática da Brucella (BP26) e dois outros dirigidos para a região interespaçadora entre os gene 16S e 23S do RNA ribossômico (ITS). Com os primers acima, foram padronizadas três PCRs, potencialmente capazes de detectar qualquer espécie de Brucella e denominadas PCR-ITS1, PCR-ITS2 e PCR-BP26. Soluções de DNA de sangue de cão livre de Brucella foram contaminadas com quantidades decrescentes de DNA de B. canis (RM6/66) e, então, submetidas às PCRs descritas anteriormente. Para a avaliação das PCRs quanto à capacidade de detecção de Brucella spp. em sangue de animais naturalmente infectados, foram utilizadas 75 amostras de sangue de cães provenientes de canis comerciais onde foram registrados casos clínicos sugestivos de infecção por Brucella. As 75 amostras de sangue de cães foram colhidas com anti-coagulante (citrato de sódio) por punção da veia jugular. As amostras foram separadas em duas alíquotas, uma das quais (2 ml) foi submetida ao isolamento e identificação bacteriológica e a outra alíquota (1ml), às PCRs. O DNA total das amostras de sangue foi extraído por método baseado em digestão com proteinase K, SDS e CTAB seguido de purificação com fenol e clorofórmio. Considerando os resultados da PCR de melhor desempenho (PCR-ITS1), entre as 35 amostras positivas pelo isolamento bacteriano, 30 (85,71%) foram positivas pela técnica de PCR, enquanto entre as 40 amostras negativas pelo cultivo bacteriológico, 11 (27,5%) foram positivas pela PCR. A PCR-ITS1 foi capaz de detectar um mínimo de 3,78fg de DNA bacteriano misturado a 450ng de DNA de cão, o que representa, teoricamente, a massa genômica de 1,26 bactérias. Pela aparente superior capacidade de classificar animais positivos que o método de cultura bacteriológica, a PCR-ITS1 parece ser uma técnica promissora para o diagnóstico direto da brucelose em cães. / Three pair of primers were designed against Brucella genetic sequences. Two of them were directed to 16S-23S rRNA interspacer and the other was directed to a periplasmatic protein coding gene (BP26). Three PCRs assays named PCR-ITS1, PCR-ITS2 and PCR-BP26, each one putatively capable of amplifying DNA from any Brucella species were tested using the aforementioned primers. Nucleic acid extracts from whole-blood from naïve dogs were spiked with decreasing amounts of B. canis (RM6/66) DNA and the resulting solutions were tested by PCR. The capability of the PCRs to amplify Brucella spp. genetic sequences from naturally infected dogs was evaluated by using 75 whole-blood samples from dogs raised in commercial kennels were clinically affected animals have already been detected with signs suggestive of Brucella infection. The whole-blood samples were collected with sodium citrate as anti-coagulant by venal puncturing the jugular vein. The samples were split into two aliquots, one of them (2mL) being submitted to bacterial isolation and identification and the remaining sample (1mL) to PCR. The DNA from whole-blood was extracted by using proteinaseK, SDS and CTAB following phenol-chloroform purification. Considering the results from the PCR with the best performance (PCR-ITS1), within 35 isolation positive samples, 30 were positive by PCR. Within 40 isolation negative samples, 11 were positive by PCR. PCR-ITS1 was capable of detecting as few as 3.78fg of bacterial DNA mixed to 450ng of host DNA. Theoretically, 3.78fg of Brucella DNA represents the total genomic mass of 1.26 bacterial cells. The superior ability of PCR-ITS1 on classifying positive animals suggest that PCR-ITS1 is a promising tool for the direct detection of canine brucellosis.

Com o objetivo de se conhecer a situação epidemiológica da brucelose bovina no Estado de Santa Catarina, o mesmo foi subdividido em cinco áreas epidemiológicas. Para o planejamento amostral foi utilizada a amostragem aleatória sistemática. Além do cálculo da prevalência da brucelose bovina, foi realizada a caracterização epidemiológica das propriedades em cada uma das cinco áreas e verificada a possibilidade de agrupamento de algumas delas de acordo com as semelhanças existentes. Para o estudo foram colhidas amostras de soro de 7756 animais e questionários epidemiológicos foram aplicados em 1579 propriedades. As prevalências de focos e de animais soropositivos para brucelose bovina no Estado de Santa Catarina foram 0,02% (0,00-0,15%) e 0,06% (0,01-0,40%), respectivamente. Nas áreas 1 e 2, a prevalência de focos foi de 0,00% (0,00-1,23%); na área 3 foi de 0,00% (0,00-0,93%), na área 4 foi de 0,34% (0,00-1,86%) e na área 5 foi de 0,00% (0,00-1,26%). Em relação à prevalência de animais soropositivos para brucelose bovina, com exceção da área 4, cuja prevalência foi de 0,89% (0,13-5,76%), as demais áreas tiveram prevalência de 0,00% (0,00-0,00%). A maioria das propriedades das cinco áreas possui criação extensiva e bovinos mestiços, utiliza ordenha manual e não utiliza inseminação artificial. Com exceção da área 5, cuja maioria é de exploração leiteira, as demais são predominantemente de exploração mista. A área 3, que possui a maior mediana de produção diária de leite (7,5 litros), é a única cuja maioria das propriedades fazem o resfriamento do leite. A área 1 é a que possui maior mediana do número de bovinos (16 bovinos por propriedade). De acordo com as análises realizadas, sugere-se que as áreas 3 e 4 sejam agrupadas. / For this study Santa Catarina has been divided in five epidemiological areas in order to know the epidemiological situation of bovine brucellosis in this state. Systematic random sampling was used for the sampling design. The prevalence of bovine brucellosis was determined as well as the epidemiological characterization of the farms in each of the five areas, and the possibility of grouping some of them according to existent similarity was tested. Serum samples of 7756 animals were collected and an epidemiological survey using questionnaires was carried out in 1579 farms. The prevalence of positive holdings and animals for bovine brucellosis in Santa Catarina state were 0,02% (0,00-0,15%) and 0,06% (0,01-0,40%), respectively. In areas 1 and 2, the prevalence of positive holdings was 0,00% (0,00-1,23%); in area 3 it was 0,00% (0,00-0,93%), in area 4 it was 0,34% (0,00-1,86%) and in area 5 it was 0,00% (0,00-1,26%). Regarding prevalence of serum-positive animals for bovine brucellosis, all areas had prevalence 0,00% (0,00-0,00%), except area 4, which had prevalence 0,89% (0,13-5,76%). Most of the farms of five areas raise the animals extensively, grow mixed-breed cattle, make use of manual milking and do not use artificial insemination. The great majority of the areas develop mixed exploration except area 5 in which most farms grow dairy cattle. Area 3, which has the highest median of dairy milk production (7,5 liters), is the only one where the cooling of the milk is practiced in most of the farms. Area 1 has the highest median of number of bovine (16 bovines per farm). According to the analysis developed, it is suggested that areas 3 and 4 be grouped

Para dar suporte à implantação do PNCEBT no Estado do Tocantins, foi realizado um estudo para caracterizar a situação epidemiológica da doença, entre fevereiro de 2002 e agosto de 2003. O Estado foi divido em seis áreas com características produtivas homogêneas (circuitos produtores). Para cada área, foi calculada uma amostragem simples aleatória de 300 propriedades, com o objetivo de estimar a prevalência de focos de brucelose além da prevalência de fêmeas bovinas adultas soropositivas. Para isso, foram amostradas de 10 a 15 vacas com idade superior a dois anos em cada propriedade. Um total de 20.908 soros foi obtido de 1.842 propriedades. Verificou-se uma prevalência de focos de brucelose (propriedades com, ao menos, um animal positivo) de 21,22% [19,33;23,11] e uma prevalência de fêmeas bovinas adultas soropositivas de 4,43% [3,57;5,29] para o Estado. Quando considerados os circuitos produtores, observou-se que os circuitos 1, 2, 3 e 5 tiveram prevalências de focos significativamente maiores que os demais, respectivamente 16,01% [12,08;20,61], 37,63% [32,08;43,43], 26,38% [21,54;31,69] e 29,26% [24,26;34,66]. Nos circuitos 4 e 6, as prevalências foram 5,84% [3,50;9,08] e 8,57% [5,72;12,23], respectivamente. Em cada propriedade, foi aplicado um questionário epidemiológico, com o objetivo de avaliar o grau de associação de possíveis fatores de risco a doença. A análise dos fatores de risco teve como resultado: rebanho de bovinos fêmeas > 24 meses acima de 120 animais (OR=2.00); vacinar contra brucelose ou vacinar fêmeas de qualquer idade (OR=0.37); presença de piquetes de parição (OR=0.72); exploração de leite (OR=0.63) e abate de reprodutores na fazenda (OR=1.52). / In order to support the implementation of PNCEBT in Tocantins State, a study was conducted to characterize the epidemiological situation of the disease from February 2002 to august 2003. The State was divided into six areas with a homogeneous productive system (production circuits). For each area, a simple random sample was calculated, to estimate the prevalence both in farms and cows over two years old. To achieve this, 10 15 adult cows (over two years old) were sampled. A total of 20,908 sera from 1,842 farms were obtained. For the whole State of Tocantins, the prevalence of positive farms (or farms with at least one positive animal) was 21.22% [19.33;23.11]. When the production circuits were considered, the positive farms prevalences from the circuits 1, 2, 3 and 5 were significantly higher than the other circuits: 16.01% [12.08;20.61], 37.63% [32.08;43.43], 26.38% [21.54;31.69] and 29.26% [24.26;34.66], respectively. In the circuits 4 and 6, the prevalences were 5.84% [3.50-9.08] and 8.57% [5.72;12.23], respectively. In each visited farm, a questionnaire was applied, in order to evaluate the association with possible risk factors and the brucellosis. The results of risk factors analysis were: herds of cows > 24 months above 120 animals (OR=2.00); vaccinate against brucellosis or vaccinate cows above 8 months (OR=0.37); presence of birth paddock (OR=0.72); Milk exploitation (OR=0.63) and slaughter of breeding animals in farm (OR=1,52).

A técnica de PCR, utilizando-se \"primers\" desenhados a partir do gene que codifica uma proteína imunogênica de 31 KDa de Brucella abortus, foi empregada na detecção de Brucella spp. em 300 amostras de produtos lácteos clandestinos apreendidas em municípios dos Estados de São Paulo (SP) e de Minas Gerais (MG). Foram analisadas 49 amostras de queijo minas frescal e 18 de queijo meia-cura provenientes de MG, e 92 amostras de queijo minas frescal, 33 amostras de queijo meia-cura e 108 amostras de leite cru provenientes de SP. O isolamento bacteriano foi tomado como referência, porém não se isolou Brucella spp. de nenhuma das amostras cujos cultivos mostraram-se contaminados com outros gêneros bacterianos. Pela PCR foi observado que 37 amostras de queijo foram positivas: 29/141 (20,56 %) das amostras de queijo minas frescal e 8/51 (15,68%) das amostras de queijo meia-cura. Todas as amostras positivas na PCR para Brucella spp. foram confirmadas como sendo da espécie Brucella abortus pela técnica de PCR utilizando-se \"primers\" espécie-específicos. Foi instituída a reação de hemi-nested PCR para a diferenciação da cepa em B19 ou campo tomando-se como base a deleção genética de 702 pb existente na cepa vacinal B19. A padronização da técnica permitiu que todas as cepas de Brucella spp. fossem diferenciadas, revelando que 30 (81,08%) amostras eram B19 e 7 (18,92%) eram cepas de Brucella abortus de campo. A concordância estimada entre as técnicas de PCR e do cultivo microbiológico através do indicador Kappa foi considerada baixa (K = 0) devido ao não isolamento do microrganismo. / A PCR assay using primers designed based on the gene that encodes a 31 KDa immunogenic protein from Brucella abortus was used in the detection of Brucella spp. in 300 samples of illegal dairy products obtained in cities of the states of São Paulo (SP) and Minas Gerais (MG), Brazil. A total of 49 samples of minas frescal cheese and 18 samples of meia-cura cheese from MG were analyzed, besides 92 samples of minas frescal cheese, 33 samples of meia-cura cheese and 108 samples of raw milk from SP. Although bacterial isolation was used as reference, Brucella spp. was not isolated from any samples in which culture was contaminated by other genera of bacteria. PCR showed that 37 samples were positive for Brucella spp.: 29/141 (20,56 %) of the minas frescal cheese samples and 8/51 (15,68%) of the meia-cura cheese samples. All positive samples for Brucella spp. were confirmed as Brucella abortus by PCR using species-specific primers. Hemi-nested PCR was used for the differentiation between B19 and field strains, based on the genetic deletion of 702 pb in the vaccinal strain. Standardization of the technique enabled the differentiation of all Brucella spp. strains, showing that 30 of them (81,08%) were B19 and 7 (18,92%) of them were Brucella abortus field strains. Estimated agreement between PCR and microbiological culture as determined by Kappa indicator was considered to be poor (K = 0) due to the absence of isolation of the microorganism.

A vigilância epidemiológica é descrita como o conjunto de procedimentos de coleta, processamento e análise de dados utilizado para dar suporte aos processos de tomadas de decisão por parte dos agentes de saúde animal e humana. A crescente atuação de profissionais do setor privado em sanidade animal tem ampliado a vigilância epidemiológica passiva, com geração de montantes significativos de dados. Neste contexto, surge o Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose Animal - PNCEBT que promove, entre suas estratégias, a habilitação de médicos veterinários privados - MVH - para realização de testes diagnóstico dessas enfermidades em bovídeos. Nesta pesquisa, foi realizada uma compilação de todos os dados gerados pelos MVH relacionados ao PNCEBT no ano de 2008 no Rio Grande do Sul, os quais foram posteriormente analisados com distintas técnicas estatísticas, com objetivo de caracterizar o perfil de ocorrência demográfica e espacial destes testes, bem como buscar indicativos de frequência de enfermidades. Foram analisados resultados de 63.226 testes de bovinos e bubalinos realizados em 5.012 estabelecimentos e 332 municípios do estado, devidamente tratados por procedimentos de imputação múltipla e de detecção de valores extremos. Foi possível verificar que os animais de aptidão leiteira representam a maioria dos animais testados, e que motivação econômica, como bonificações, é o principal estímulo para realização dos testes. Os animais de aptidão leiteira apresentaram, ainda, maior frequência em casos positivos para ambas as enfermidades, quando comparados com as demais aptidões. Os animais do sexo feminino apresentaram maior frequência em ambas as enfermidades, com relação aos machos. Foi verificada maior frequência de animais positivos para tuberculose com o avanço da idade, ao passo que a brucelose se revelou mais freqüente em animais entre 48 e 60 meses. A análise espacial demonstra variações entre regiões nos percentuais de animais testados e de positivos em ambas as enfermidades. As maiores frequências de estabelecimentos positivos para tuberculose ocorreram nas mesorregiões metropolitana e centro-oriental do estado, as quais apresentam altas densidades de estabelecimentos por km². Foi constatado ainda que a distância percorrida pelo MVH para realização de testes pode ser fator limitante na ocorrência dos mesmos, sendo que 49,5% dos testes foram realizados em uma distância máxima de 50 km, considerando-se a ida e o retorno. Foi verificado que municípios onde foram realizados testes têm 67,5 vezes mais chance de ter um MVH residente. Foi possível concluir, assim, que o adequado enfoque aos dados de vigilância permite a realização de inferências relevantes, sendo factível a estruturação de sistemas de monitoramento e vigilância - MOSS. Tais sistemas podem incrementar a qualidade e acessibilidade dos dados, permitindo aos gestores públicos e privados a realização de análises customizadas que tragam maior eficiência e eficácia às ações em saúde animal. / Epidemiological surveillance is described as a set of procedures of collecting, processing and data analysis used for supporting the decision making process of animal and human health managers. The growing participation of private sector professionals on animal health issues has been widening the passive epidemiological surveillance, generating significant amounts of data. In this context, the National Program of Animal Brucellosis and Tuberculosis Control and Eradication – PNCEBT, promotes, amongst other strategies, the accreditation of private veterinarians to make diagnosis tests on bovine, increased significantly the amount of data on bovine tuberculosis and brucellosis. In the present research, a compilation of all data from diagnosis tests performed by accredited private veterinarians on behalf of PNCEBT in the state of Rio Grande do Sul in 2008 was made, which was analyzed through distinct statistics techniques, aiming at characterizing the demography and spatial patterns of occurrence, as well as to assess the frequencies of those diseases. Data from 63.226 individual tests performed in 5.012 farms on 332 municipalities were analyzed, after treatment by multiple imputation and outlier values diagnosis. It was possible to conclude that the majority of tests were from dairy related animals; economical reasons, such as bonus programs, were the main motivation for the farmers to perform tests on their properties. Higher frequencies for both diseases were found in dairy cattle, when compared to other purposes animals. Female presented higher frequencies for both diseases when compared to males. It was also observed that the frequency of tuberculosis increased with age, while for brucellosis the frequency was higher between 48 to 60 months-old animals. Spatial analysis evidenced higher frequencies of positive tuberculosis farms in the metropolitana and centro-oriental mesorregions, which had higher farm density per km². It was also verified that the distance by MVH to perform tests might be a limiting factor for them to occur, being 49.5% of the tests performed at maximum round-way distance of 50 km. The municipalities which had tests performed showed 67.5 times more chances of having a resident MVH. It was possible to conclude that an appropriate approach of surveillance data allows the making of relevant inferences, being feasible the establishment of monitoring and surveillance systems - MOSS. These systems could improve data quality and accessibility, allowing public and private managers to perform custom analysis to bring more efficiency and efficacy to animal health programs.

A vigilância epidemiológica é descrita como o conjunto de procedimentos de coleta, processamento e análise de dados utilizado para dar suporte aos processos de tomadas de decisão por parte dos agentes de saúde animal e humana. A crescente atuação de profissionais do setor privado em sanidade animal tem ampliado a vigilância epidemiológica passiva, com geração de montantes significativos de dados. Neste contexto, surge o Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose Animal - PNCEBT que promove, entre suas estratégias, a habilitação de médicos veterinários privados - MVH - para realização de testes diagnóstico dessas enfermidades em bovídeos. Nesta pesquisa, foi realizada uma compilação de todos os dados gerados pelos MVH relacionados ao PNCEBT no ano de 2008 no Rio Grande do Sul, os quais foram posteriormente analisados com distintas técnicas estatísticas, com objetivo de caracterizar o perfil de ocorrência demográfica e espacial destes testes, bem como buscar indicativos de frequência de enfermidades. Foram analisados resultados de 63.226 testes de bovinos e bubalinos realizados em 5.012 estabelecimentos e 332 municípios do estado, devidamente tratados por procedimentos de imputação múltipla e de detecção de valores extremos. Foi possível verificar que os animais de aptidão leiteira representam a maioria dos animais testados, e que motivação econômica, como bonificações, é o principal estímulo para realização dos testes. Os animais de aptidão leiteira apresentaram, ainda, maior frequência em casos positivos para ambas as enfermidades, quando comparados com as demais aptidões. Os animais do sexo feminino apresentaram maior frequência em ambas as enfermidades, com relação aos machos. Foi verificada maior frequência de animais positivos para tuberculose com o avanço da idade, ao passo que a brucelose se revelou mais freqüente em animais entre 48 e 60 meses. A análise espacial demonstra variações entre regiões nos percentuais de animais testados e de positivos em ambas as enfermidades. As maiores frequências de estabelecimentos positivos para tuberculose ocorreram nas mesorregiões metropolitana e centro-oriental do estado, as quais apresentam altas densidades de estabelecimentos por km². Foi constatado ainda que a distância percorrida pelo MVH para realização de testes pode ser fator limitante na ocorrência dos mesmos, sendo que 49,5% dos testes foram realizados em uma distância máxima de 50 km, considerando-se a ida e o retorno. Foi verificado que municípios onde foram realizados testes têm 67,5 vezes mais chance de ter um MVH residente. Foi possível concluir, assim, que o adequado enfoque aos dados de vigilância permite a realização de inferências relevantes, sendo factível a estruturação de sistemas de monitoramento e vigilância - MOSS. Tais sistemas podem incrementar a qualidade e acessibilidade dos dados, permitindo aos gestores públicos e privados a realização de análises customizadas que tragam maior eficiência e eficácia às ações em saúde animal. / Epidemiological surveillance is described as a set of procedures of collecting, processing and data analysis used for supporting the decision making process of animal and human health managers. The growing participation of private sector professionals on animal health issues has been widening the passive epidemiological surveillance, generating significant amounts of data. In this context, the National Program of Animal Brucellosis and Tuberculosis Control and Eradication – PNCEBT, promotes, amongst other strategies, the accreditation of private veterinarians to make diagnosis tests on bovine, increased significantly the amount of data on bovine tuberculosis and brucellosis. In the present research, a compilation of all data from diagnosis tests performed by accredited private veterinarians on behalf of PNCEBT in the state of Rio Grande do Sul in 2008 was made, which was analyzed through distinct statistics techniques, aiming at characterizing the demography and spatial patterns of occurrence, as well as to assess the frequencies of those diseases. Data from 63.226 individual tests performed in 5.012 farms on 332 municipalities were analyzed, after treatment by multiple imputation and outlier values diagnosis. It was possible to conclude that the majority of tests were from dairy related animals; economical reasons, such as bonus programs, were the main motivation for the farmers to perform tests on their properties. Higher frequencies for both diseases were found in dairy cattle, when compared to other purposes animals. Female presented higher frequencies for both diseases when compared to males. It was also observed that the frequency of tuberculosis increased with age, while for brucellosis the frequency was higher between 48 to 60 months-old animals. Spatial analysis evidenced higher frequencies of positive tuberculosis farms in the metropolitana and centro-oriental mesorregions, which had higher farm density per km². It was also verified that the distance by MVH to perform tests might be a limiting factor for them to occur, being 49.5% of the tests performed at maximum round-way distance of 50 km. The municipalities which had tests performed showed 67.5 times more chances of having a resident MVH. It was possible to conclude that an appropriate approach of surveillance data allows the making of relevant inferences, being feasible the establishment of monitoring and surveillance systems - MOSS. These systems could improve data quality and accessibility, allowing public and private managers to perform custom analysis to bring more efficiency and efficacy to animal health programs.

A vigilância epidemiológica é descrita como o conjunto de procedimentos de coleta, processamento e análise de dados utilizado para dar suporte aos processos de tomadas de decisão por parte dos agentes de saúde animal e humana. A crescente atuação de profissionais do setor privado em sanidade animal tem ampliado a vigilância epidemiológica passiva, com geração de montantes significativos de dados. Neste contexto, surge o Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose Animal - PNCEBT que promove, entre suas estratégias, a habilitação de médicos veterinários privados - MVH - para realização de testes diagnóstico dessas enfermidades em bovídeos. Nesta pesquisa, foi realizada uma compilação de todos os dados gerados pelos MVH relacionados ao PNCEBT no ano de 2008 no Rio Grande do Sul, os quais foram posteriormente analisados com distintas técnicas estatísticas, com objetivo de caracterizar o perfil de ocorrência demográfica e espacial destes testes, bem como buscar indicativos de frequência de enfermidades. Foram analisados resultados de 63.226 testes de bovinos e bubalinos realizados em 5.012 estabelecimentos e 332 municípios do estado, devidamente tratados por procedimentos de imputação múltipla e de detecção de valores extremos. Foi possível verificar que os animais de aptidão leiteira representam a maioria dos animais testados, e que motivação econômica, como bonificações, é o principal estímulo para realização dos testes. Os animais de aptidão leiteira apresentaram, ainda, maior frequência em casos positivos para ambas as enfermidades, quando comparados com as demais aptidões. Os animais do sexo feminino apresentaram maior frequência em ambas as enfermidades, com relação aos machos. Foi verificada maior frequência de animais positivos para tuberculose com o avanço da idade, ao passo que a brucelose se revelou mais freqüente em animais entre 48 e 60 meses. A análise espacial demonstra variações entre regiões nos percentuais de animais testados e de positivos em ambas as enfermidades. As maiores frequências de estabelecimentos positivos para tuberculose ocorreram nas mesorregiões metropolitana e centro-oriental do estado, as quais apresentam altas densidades de estabelecimentos por km². Foi constatado ainda que a distância percorrida pelo MVH para realização de testes pode ser fator limitante na ocorrência dos mesmos, sendo que 49,5% dos testes foram realizados em uma distância máxima de 50 km, considerando-se a ida e o retorno. Foi verificado que municípios onde foram realizados testes têm 67,5 vezes mais chance de ter um MVH residente. Foi possível concluir, assim, que o adequado enfoque aos dados de vigilância permite a realização de inferências relevantes, sendo factível a estruturação de sistemas de monitoramento e vigilância - MOSS. Tais sistemas podem incrementar a qualidade e acessibilidade dos dados, permitindo aos gestores públicos e privados a realização de análises customizadas que tragam maior eficiência e eficácia às ações em saúde animal. / Epidemiological surveillance is described as a set of procedures of collecting, processing and data analysis used for supporting the decision making process of animal and human health managers. The growing participation of private sector professionals on animal health issues has been widening the passive epidemiological surveillance, generating significant amounts of data. In this context, the National Program of Animal Brucellosis and Tuberculosis Control and Eradication – PNCEBT, promotes, amongst other strategies, the accreditation of private veterinarians to make diagnosis tests on bovine, increased significantly the amount of data on bovine tuberculosis and brucellosis. In the present research, a compilation of all data from diagnosis tests performed by accredited private veterinarians on behalf of PNCEBT in the state of Rio Grande do Sul in 2008 was made, which was analyzed through distinct statistics techniques, aiming at characterizing the demography and spatial patterns of occurrence, as well as to assess the frequencies of those diseases. Data from 63.226 individual tests performed in 5.012 farms on 332 municipalities were analyzed, after treatment by multiple imputation and outlier values diagnosis. It was possible to conclude that the majority of tests were from dairy related animals; economical reasons, such as bonus programs, were the main motivation for the farmers to perform tests on their properties. Higher frequencies for both diseases were found in dairy cattle, when compared to other purposes animals. Female presented higher frequencies for both diseases when compared to males. It was also observed that the frequency of tuberculosis increased with age, while for brucellosis the frequency was higher between 48 to 60 months-old animals. Spatial analysis evidenced higher frequencies of positive tuberculosis farms in the metropolitana and centro-oriental mesorregions, which had higher farm density per km². It was also verified that the distance by MVH to perform tests might be a limiting factor for them to occur, being 49.5% of the tests performed at maximum round-way distance of 50 km. The municipalities which had tests performed showed 67.5 times more chances of having a resident MVH. It was possible to conclude that an appropriate approach of surveillance data allows the making of relevant inferences, being feasible the establishment of monitoring and surveillance systems - MOSS. These systems could improve data quality and accessibility, allowing public and private managers to perform custom analysis to bring more efficiency and efficacy to animal health programs.