Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-07-31T22:53:12Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Glêzia Renata da Silva Lacerda.pdf: 4644374 bytes, checksum: 02485394848694860d6eb63dbaec6f39 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-02T17:22:24Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Glêzia Renata da Silva Lacerda.pdf: 4644374 bytes, checksum: 02485394848694860d6eb63dbaec6f39 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-02T17:22:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Glêzia Renata da Silva Lacerda.pdf: 4644374 bytes, checksum: 02485394848694860d6eb63dbaec6f39 (MD5) Previous issue date: 2017-02-22 / CAPES / Streptomyces é produtor de diversos metabólitos secundários, incluindo L-asparaginase, uma enzima que hidrolisa a asparagina em ácido aspártico e amônia. Logo, tem sido utilizada como agente quimioterápico no tratamento da leucemia linfoblástica aguda, pois estas células não produzem asparagina e dependem do aminoácido livre para a síntese proteica. O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade citotóxica, genotóxica e imunomodulatória da L-asparaginase produzida por Streptomyces ansochromogenes UFPEDA-3420. A enzima foi produzida a partir da determinação dos parâmetros ideais de cultivo do micro-organismo. Sua atividade foi determinada pela dosagem de amônia liberada por Nesslerização. O extrato bruto foi purificado por métodos cromatográficos. O peso molecular foi determinado por eletroforese SDS-PAGE. O efeito citotóxico da L-asparaginase foi observado frente às linhagens de células tumorais: HEp-2 (carcinoma de laringe), NCIH-292 (carcinoma mucoepidermoide de pulmão), MOLT-4 (Leucemia linfoblástica humana), K562 (leucemia mielóide), HL-60 (leucemia aguda promielocítica) e MCF-7 (adenocarcinoma de mama), utilizando o ensaio do MTT. Os efeitos genotóxicos foram determinados pelos Testes Cometa Alcalino e de Micronúcleo nas linhagens tumorais NCIH-292, MCF-7 e MOLT-4 e em células normais PBMC (Células Mononucleadas de Sangue Periférico), utilizando as concentrações 12,5, 25 e 50 μg/mL de L-asparaginase, como controle positivo a Doxorrubicina na concentração da sua IC₅₀ para cada célula tumoral: 0,5 μg/mL (NICH-292), 0,04 μg/mL (MOLT-4) e 0,2 μg/mL (MCF-7) e como controle negativo as células sem tratamento. Os parâmetros ideais de cultivo foram fermentação em meio M9, 48 horas, pH=6, 37ºC e rendimento máximo de 743.29 UI/mL. A enzima foi purificada até homogeneidade com fator de purificação 6,06, rendimento 27,68% da atividade inicial e atividade específica final 35.205,76 UI/mg. A enzima purificada apresentou peso molecular de 63,99 kDa, com atividade catalítica ótima em pH=7 e 40ºC. L-asparaginase apresentou valores de Km de 3,224 mM e Vmax de 161,29 UI/min. Quanto aos efeitos citotóxicos, apresentou IC₅₀ de 25 μg/mL frente à linhagem MOLT-4. Foi observado que esta substância possui efeitos genotóxicos sobre as linhagens estudadas. No parâmetro Índice de Danos, as três linhagens tumorais apresentaram resultados significativos para todas as concentrações testadas quando comparadas com células não tratadas, exceto na concentração de 12,5 μg/mL na linhagem MOLT-4. No Teste do micronúcleo, foi observado que em todas as células houve indução à formação de micronúcleos, coferindo efeito genotóxico a enzima. Isso demonstra que nas linhagens MOLT-4 e PBMC, tanto o parâmetro células micronucleadas quanto a frequência de micronúcleos aumentaram de acordo com o aumento da concentração de L-asparaginase, demonstrando um efeito dose/resposta positivo. L-asparaginase induziu a ativação e proliferação de linfócitos TCD8+ e produziu níveis elevados de TNF-α, IFN-γ, IL-2 e IL-10 em 24 horas. O presente estudo possui grande relevância científica, pois consiste no primeiro relato de produção de L-asparaginase por Streptomyces ansochomogenes UFPEDA-3420, sua ação genotóxica em células tumorais e normais e atividade imunomodulatória, de forma inédita. Esse fato é importante, pois L-asparaginase tem sido empregada nas terapias convencionais de controle e tratamento do câncer. Dessa forma, esta enzima configura-se como molécula promissora para utilização em modelos in vivo e para aprofundar testes pré-clínicos. / Streptomyces is a producer of several secondary metabolites, including L-asparaginase, an enzyme that hydrolyzes asparagine in aspartic acid and ammonia. Therefore, it has been used as chemotherapeutic agent in the treatment of acute lymphoblastic leukemia, since these cells doesn’t produce asparagine and depend on free amino acid for protein synthesis. The objective of this study was to evaluate the cytotoxic, genotoxic and immunomodulatory activity of L-asparaginase produced by Streptomyces ansochromogenes UFPEDA-3420. The enzyme was produced from the determination of the ideal microorganism culture parameters. Its activity was determined by the dosage of ammonia released by Nesslerization. The crude extract was purified by chromatographic methods. The molecular weight was determined by SDS-PAGE electrophoresis. The cytotoxic effect of L-asparaginase was observed against tumor cell lines: HEp-2 (laryngeal carcinoma), NCIH-292 (mucoepidermoid carcinoma of the lung), MOLT-4 (human lymphoblastic leukemia), K562(myeloid leukemia), HL-60 (promyelocytic acute leukemia) and MCF-7 (breast adenocarcinoma) using the MTT assay. The genotoxic effects were determined by Alkaline Comet and Micronucleus Tests in NCIH-292, MCF-7 and MOLT-4 tumor cell lines and in PBMC (Mononuclear Peripheral Blood Cells), using the concentrations 12.5, 25 and 50 μg/mL of L-asparaginase, as a positive control to Doxorubicin at the concentration of its IC50 for each tumor cell: 0.5 μg/mL (NICH-292), 0.04 μg/mL (MOLT-4) and 0.2 μg/mL (MCF-7) and as a negative control the cells without treatment. The ideal culture parameters were fermentation in M9 medium, 48 hours, pH=6.37 and maximum yield of 743.29 IU/mL. The enzyme was purified to homogeneity with purification factor 6.06, yield 27.68% of the initial activity and final specific activity 35,205.76 IU/mg. The purified enzyme had a molecular weight of 63.99 kDa, with optimum catalytic activity at pH=7 and 40ºC. L-asparaginase had values of Km of 3.224 mM and Vmax of 161.29 IU/min. Regarding the cytotoxic effects, IC50 of 25 μg/mL was presented in relation to the MOLT-4 lineage. It was observed that this substance has genotoxic effects on the studied strains. In the parameter Damage Index, the three tumor lines presented significant results for all the concentrations tested when compared to untreated cells, except in the concentration of 12.5 μg/mL in the MOLT-4 lineage. In the Micronucleus test, was observed that in all the cells there was induction to the formation of micronuclei, cofering genotoxic effect to the enzyme. This demonstrates that in the MOLT-4 and PBMC lines, both the micronucleate parameters and micronucleus frequency increased as the L-asparaginase concentration increased, demonstrating a positive dose/response effect. L-asparaginase induced the activation and proliferation of TCD8+ lymphocytes and produced elevated levels of TNF-α, IFN-γ, IL-2 and IL-10, in 24 hours. The present study has great scientific relevance, since it consists of the first report of production of L-asparaginase by Streptomyces ansochomogenes UFPEDA-3420, its genotoxic action in normal and tumor cells and immunomodulatory activity, in an unprecedented way. This fact is important because L-asparaginase has been used in conventional cancer treatment and control therapies. Thus, this enzyme is configured as a promising molecule for use in vivo models and to deepen preclinical tests.

Orientadores: Kazue Panetta, Aarão Mendes Pinto-Neto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-22T13:55:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cairo_AureaAkemiAbe_D.pdf: 6105267 bytes, checksum: 5bb7616c7bb0864c1a5ad3db9a836a3e (MD5) Previous issue date: 1997 / Doutorado

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-04-14T17:23:12Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE_Fábio José Fidélis Almeida_PPGCB_CCB_UFPE_2014.pdf: 3974294 bytes, checksum: d2b2efb337f0554425391a756119bc51 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-14T17:23:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE_Fábio José Fidélis Almeida_PPGCB_CCB_UFPE_2014.pdf: 3974294 bytes, checksum: d2b2efb337f0554425391a756119bc51 (MD5) Previous issue date: 2014-02-26 / FACEPE / tratamento, a eficácia terapêutica ainda é limitada. O ácido úsnico (AU) é um dos mais bem conhecidos e estudados derivados liquênicos, trata-se de um metabólito secundário liquênico que apresenta diversas atividades biológicas, dentre elas a antitumoral. O presente estudo objetivou desenvolver, caracterizar e avaliar a atividade antitumoral de nanocápsulas de ácido úsnico furtivas e sítio-específicas contendo folato em sua superfície (NC-PEG-FOL/AU). As nanocápsulas foram desenvolvidas pelo método de deposição interfacial de polímero préformado. As formulações foram caracterizadas por tamanho de partícula, índice de polidispersão, carga de superfície e eficiência de encapsulação. A atividade antitumoral in vivo do AU foi avaliada em camundongos machos Swiss, onde os animais receberam doses diárias de 15 mg/kg/dia do fármaco em suspensão e encapsulado em NC-PEG-FOL por 7 dias. Os resultados demonstraram que o método de preparação permitiu a formação de nanocápsulas nanométricas (Ø = 157,4 ± 2,97 nm), homogêneas (PDI = 0,27), com carga negativa (ζ = -10.58 ± 0.6 mV) e com uma alta eficiência de encapsulação do fármaco (EE = 98,0 ± 0,28 %). Nos estudos de citotoxicidade, as NC-PEG-FOL/AU exibiram citotoxicidade relevante (IC50 = 2,13 ± 0,02) quando comparada ao fármaco livre (IC50 = 10,04 ± 0,04). Observações em microscopia de fluorescência revelaram que as nanocápsulas sítio-específicas foram capturadas pelas células de Sarcoma-180. A distribuição da fluorescência nas células variou com o tempo. Nos estudos in vivo a atividade antitumoral do AU foi confirmada com inibição do crescimento tumoral em 40%. No entanto, a encapsulação em nanocápsulas furtivas e sítio-específicas potencializou a ação do AU resultando em inibição da massa tumoral acima de 80%. As nanocápsulas folato-específicas contendo ácido úsnico foram desenvolvidas como uma nova alternativa de aplicação destes sistemas para liberação seletiva do AU em células cancerígenas que expressam o receptor do folato, potencializando a ação do fármaco, visando uma futura aplicação terapêutica. / treatment, the therapeutic efficacy is still limited. The usnic acid (UA), one of the most well known and studied compounds of natural origin, is a secondary metabolite liquenic that presents several biological activities, such as antitumor. The goals of this study were to develop, characterize and evaluate the antitumor activity of usnic acid (UA) encapsulated into targeted nanocapsules (UA/FOL-PEG-NC) and develop a simple, rapid and specific analytical method for quantification of UA in rat plasma by high performance liquid chromatography efficiency. Nanocapsules were developed by interfacial deposition of preformed polymer method. Formulations were characterized by particle size, polydispersity index, surface charge and encapsulation efficiency. The in vivo antitumor activity of the UA was evaluated in male Swiss mice, where animals received daily doses of 15 mg / kg / day of the drug in suspension and encapsulated in FOL-PEG-NC for 7 days. Results showed that the method of preparation allowed the formation of nanometric nanocapsules (Ø = 157.4 ± 2.97 nm) in homogeneous dispersion (PDI = 0.27), negatively surface charged (ζ = -10.58 ± 0.6 mV) and high drug encapsulation efficiency (EE = 98.0 ± 0.28 %). Concerning the cytotoxicity study, UA/FOL-PEG-NC exhibited relevant activity on Sarcoma-180 cell (IC50 of 3.67 ± 0.08) compared to the free drug (IC50 = 11.35 ± 0.32). Fluorescence microscopy revealed the uptake of targeted nanocapsules by Sarcoma-180 cells. The antitumor activity of the UA was confirmed by inhibition of tumor growth by 40%. However, the encapsulation in targeted nanocapsules increased the UA action, resulting in an inhibition of tumor mass above 80%. The folate-specific nanocapsules containing usnic acid have been developed as a new alternative for application of these systems for selective release of the UA in cancer cells that expressing folate receptor, potentiating the action of the drug, seeking a future therapeutic application.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Pós-Graduação em Nanociência e Nanobiotecnologia, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-06-13T18:51:55Z No. of bitstreams: 1 2017_JanaínaMoreiraCoelho.pdf: 4112557 bytes, checksum: b0f62a77d0c9b0c1e874699c9e11c4a9 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-06-27T20:30:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_JanaínaMoreiraCoelho.pdf: 4112557 bytes, checksum: b0f62a77d0c9b0c1e874699c9e11c4a9 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-27T20:30:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_JanaínaMoreiraCoelho.pdf: 4112557 bytes, checksum: b0f62a77d0c9b0c1e874699c9e11c4a9 (MD5) Previous issue date: 2017-06-27 / Doxorrubicina (DOX) é um fámaco altamente utilizado no tratamento de diversos tipos de câncer, porém apresenta efeitos adversos, tais como cardiotoxicidade irreversível. O óleo de rícino, um triacilglicerídeo natural vem sendo investigado como veículo de fármacos. O objetivo geral deste trabalho consistiu em desenvolver nanocápsulas com núcleo de óleo de rícino e DOX e avaliar sua atividade contra células de câncer de mama humano e murino in vitro. Foram obtidas nanocápsulas com núcleo de óleo de rícino e doxorrubicina com invólucro de poli (metil vinil-éter co-anidrido maléico) modificado com n-octadecilamina. As nanocápsulas apresentaram-se estáveis e monodispersas. Nos ensaios in vitro, foram utilizadas as células de adenocarcinoma mamário murino (4T1), fibroblasto murino (NIH-3T3), adenocarcinoma mamário humano (MCF-7) e célula de epitélio mamário humano (MCF-10A). O tratamento com NCR-DOX (nanocápsulas com invólucro de PVM/MA e núcleo contendo óleo de rícino e DOX) diminuiu a viabilidade e a adesão de células tumorais. NCR-DOX foi mais interiorizada que DOX livre em células tumorais. A distribuição intracelular da NCR-DOX foi identificada no citoplasma e no núcleo. Os tratamentos com DOX e NCR-DOX em 4T1 e MCF-7 alteraram os padrões morfológicos e diminuíram a confluência de células cancerosas, além disso, provocaram despolarização da membrana e causaram necrose e apoptose tardia. NCR-DOX causou menos fragmentação de DNA do que DOX. Concluiuse que nanocápsulas com núcleo de óleo de rícino e doxorrubicina são eficazes contra células tumorais MCF-7 e 4T1. / Doxorubicin (DOX) is an often used drug for the treatment of several types of cancer, but it has adverse side effects such as irreversible cardiotoxicity. Castor oil, a naturally occurring triacylglyceride, has been investigated as a drug vehicle. The overall objective of this work was to develop nanocapsules with castor oil nuclei containing DOX and evaluate its activity against human and murine breast cancer cells in vitro. Nanocapsules were obtained using with castor oil core and doxorubicin with noctadecylamine modified poly (methyl vinyl ether co-anhydride) casing. The nanocapsules were stable and monodisperse. In the in vitro assays, murine mammary adenocarcinoma (4T1), murine fibroblast (NIH-3T3), human mammary adenocarcinoma (MCF-7) and human mammary epithelial cells (MCF-10A) were used. NCR-DOX treatment decreased the viability and adhesion of tumor cells. NCR-DOX was more internalized than free DOX in tumor cells. The intracellular distribution of NCR-DOX was identified in the cytoplasm and nucleus. The DOX and NCR-DOX treatments in 4T1 and MCF-7 altered the morphological patterns and decreased the confluence of cancer cells. In addition, they provoked depolarization of the membrane and caused necrosis and late apoptosis. NCR-DOX caused less DNA fragmentation than DOX. It was concluded that castor oil core doxorubicin nanocapsules is effective against MCF-7 and 4T1 tumor cells.

Orientador : Nelson Adami Andreollo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-19T09:40:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Camara_RejaneGodeiroCarlos_M.pdf: 6410586 bytes, checksum: 690db922c872f293ffe97cb3af9851b0 (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: É complexa a interrelação entre câncer, desnutrição e imunidade. A desnutrição nos pacientes hospitalizados que se submeteram ao tratamento cirúrgico atinge elevados Índices, o que contribui para aumentar as complicações pós-operatórias, permanência hospitalar e consequentemente aumentar o custo com o tratamento deste doente. O objetivo deste estudo foi reverter a desnutrição em pacientes com câncer de cabeça e pescoço que se submeteram ao tratamento antineoplãsico, obtendo um diagnóstico nutricional precoce e instituindo uma terapêutica nutricional específica. 0 total de 28 casos com câncer de cabeça e pescoço foram submetidos à avaliação nutricional global (ANG), ao suporte nutricional enteral (SNE) e foram monitorados durante sua internação. Foi instituído a terapêutica nutricional e a avaliação final foi através dos parâmetros: clínicos, subjetivos, bioquímicos, imunológicos e índices compostos, segundo as seguintes medidas: percentual de perda de peso recente (%PP), circunferência muscular do braço (CMB), prega cutânea do tríceps (PCT), perímetro do braço {PB) linfocítometria (LINF), proteínas totais (PT), albumina (ALB), transferrina (TRANSF), balanço nitrogenado (EN), índice creatinina altura (ICA) e gasto energético total (GET). As medidas aferidas de BN, %PP recente e a linfocitometria apresentaram melhora estatisticamente significante (p< 0,05), mostrando que o SNE pode reverter os transtornos nutricionais em câncer de cabeça e pescoço. Houve uma correlação positiva entre o GET administrado e o GET estimado, mostrando que o SNE pode fornecer as RDAs estabelecida para o doente. Nas condições em que foi realizada a pesquisa, as conclusões são de que a ANG e o SNE são adjuvantes do tratamento antineoplasico proposto. Assim, em 21 doentes desnutridos, o total de 42,9% desenvolveram a desnutrição hipoalbuminêmica aguda adquirida (DHAA) e possivelmente a síndrome de imunodeficiência nutricional adquirida (NAIDS), que aumentou 3,6 vezes a permanência hospitalar quando foi comparado com os doentes sem desnutrição. Assim, a doença e o potencial do doente desenvolver a DHAA ou NAIDS durante a internação hospitalar, deve ser considerada como um fator essencial e necessita ser melhor definida, mais especificamente nas situações que levam à imunossupressão como em câncer de cabeça e pescoço. 0 diagnóstico nutricional precoce poderá contribuir na reversão da caquexia no câncer, e também ser um indicador do prognóstico do paciente. 0 SNE pode reverter esta grave situação melhorando a resposta orgânica e provavelmente a resposta imune do hospedeiro. / Abstract: Malnutrition is very common in hospitalized surgical cancer patient and envolves immune and organic response of the host in all modality of antineoplasic therapy, increasing the morbimortalifcy and septics complications and the permanence of the patient at hospital. The nutritional reserve of the host is necessary for adequate function and for improving the immune response for the sucessfull antineoplasic treatment in these complex cases. These factors bring great benefice in complex cases, because wound healing and immune response are adjuvant in cancer surgical recovery. The main objective of this study was to evaluate the nutritional effect of using an enteric feeding tube and assessment the nutritional status by global, clinics, subjectives and biochemical methods in advanced head and neck cancer patient. Besides, establishing an adequate nutritional therapy and dietary immunomodulation, changing this serious situation of malnutrition and decreasing the incidence of postoperative septic complications. Twenty eight advanced head and neck cancer patient were submitted to the global nutritional assessment (GNA) and nutritional support therapy. They were prospectively, monitorized and the following measurements were performed: % recent weight loss (%LW), mid-circunference arm (CMA), mid~circunference muscular arm (MCMA), triceps skinfold thickness (TST), serum albumin (SA) , serum total protein (STP) , serum limphocitometry (SL), serum transferin (ST), nitrogen balance (NB), creatinine height index (ICH) and rate energy expenditure (REE). This study was showed by GNA an elevation of the malnutrition index of 75% and different types of malnutrition. The GNA revealed a good method for diagnose of nutritional disorders. Enteric feeding tube improved significantly the clinic parameters (p<0,05) and by improving recent weight loss %(LW), serum limphocitometry (SL) and nitrogen balance (NB). The absolute values were improved for all clinic parameters, but without statistically significance. The total enteral nutrition (TEH) attended a single nutritional requirement and Recommended Dietary Allowances (*RDA) for all patients. The conclusions were: The specific nutritional therapy and nutritional assessment by global and subjective evaluation were of great benefit for recoverine the clinic and nutritional protein defficiency. They improved the outcome of the head and neck, cancer patient and could reverse malnutrition. It is possible the recovering of the immune and organic response. The diet'ary therapy and immunomodulation with enteric feeding tube could reduce septic complications and morfoimortality. Similarly it may help to reduced surgical cancer patient hospitalization and avoid the acquired immune nutritional defficiency (NAIDS), which normally worsen the patient situation. Additionally, the nutritional support is very important for the good outcome with nutritional, therapy and early nutritional diagnose. In summary, this research demostrated that enteric feeding tube can reverse malnutrition in advanced head and neck cancer patient. Probably, the enteral nutrition help to improve the raiune response favourably in all modality of antineoplasic treatment, mainly in oncologic surgical patient. / Mestrado / Mestre em Ciência da Nutrição

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2008. / Submitted by Natália Cristina Ramos dos Santos (nataliaguilera3@hotmail.com) on 2009-09-18T20:14:53Z No. of bitstreams: 1 Dissert_Erika dos Santos Carvalho.pdf: 996427 bytes, checksum: 3f0017b2a10f9fbae5ccb4e03b64c2df (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2010-03-15T15:40:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissert_Erika dos Santos Carvalho.pdf: 996427 bytes, checksum: 3f0017b2a10f9fbae5ccb4e03b64c2df (MD5) / Made available in DSpace on 2010-03-15T15:40:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissert_Erika dos Santos Carvalho.pdf: 996427 bytes, checksum: 3f0017b2a10f9fbae5ccb4e03b64c2df (MD5) Previous issue date: 2008 / A indução de câncer em animais e o cultivo de células neoplásicas são abordagens importantes para a investigação da dinâmica tumoral, bem como para a avaliação da terapia fotodinâmica. O objetivo da dissertação foi desenvolver modelo experimental de câncer de boca, pela inoculação, na língua de ratos wistar, de células de Walker 256, para posterior avaliação dos efeitos da terapia fotodinâmica nas lesões malignas. Foram utilizados 14 ratos wistar, machos, com 12 semanas de vida, isogênicos, pesando cerca de 200 gramas. Para a manutenção e o armazenamento de células de Walker 256, foram utilizados 2 ratos. Os 12 animais restantes foram inoculados com células de Walker 256 na língua. No dia 8 da inoculação do tumor, os murinos foram tratados da seguinte forma: grupo I, sem tratamento; grupo II, aplicação de laser de arsenieto de gálio-alumínio (100 J/cm²); grupo III, aplicação de azul de metileno e laser de arsenieto de gálio-alumínio (100 J/cm²); grupo IV, aplicação de cloridrato de aminolevulinato de metila e laser de arsenieto de gálio-alumínio (75 J/cm²). Os animais foram mortos no dia 10 da inoculação. A análise histopatológica revelou a presença de neoplasia maligna de origem indeterminada e de comportamento agressivo em todos os ratos. O efeito da terapia fotodinâmica nos grupos III e IV apresentou resultado indeterminado, embora com substancial presença de apoptose, diferenças no padrão de necrose e no quadro hemorrágico, sugerindo resposta sistêmica dos medicamentos. _________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The induction of cancer in animals and the cultivation of neoplasic cells are important approaches for the investigation of the tumor growth dynamics, as well as for the evaluation of the phototodinamic therapy. The objective of the dissertation was to develop an experimental model of mouth cancer by the inoculation of Walker 256 cells on wistar mice tongues for the subsequent evaluation of the effects of phototodinamic therapy in malign lesions. Fourteen, 12-week-old, isogenic male wistar mice, weighing about 200 grams each, were used. For the maintenance and storage of Walker 256 cells, 2 mice were used in the investigation. The 12 remaining animals were inoculated with Walker 256 cells on their tongues. On inoculation day 8 of the tumor, the murines were treated in the following way: group I, without any treatment; group II, with the application of Gallium- Aluminum-Arsenide laser (100 J/cm²); group III with the application of blue methilen and Gallium-Aluminum-Arsenide laser (100 J/cm²); group IV with the application of methyl aminolevulinato hydrochloride and Gallium-Aluminum-Arsenide laser (75 J/cm²). The animals were dead on day 10 of the inoculation. The histopatologic analysis revealed the presence of uncertain origin and aggressive behavior malign neoplasm in all mice. The effect of phototodinamic therapy in groups III and IV presented uncertain results, although with substantial presence of apoptose, besides differences in the necrosis pattern and in the hemorrhagic picture, suggesting systemic reaction to medicine.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências Médicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2015. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2015-12-22T17:09:22Z No. of bitstreams: 1 2015_ClaudiaOttaianoRodriguesFrota.pdf: 626565 bytes, checksum: 43cb641dd3dd27efdd2d37b66a64cfc2 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2016-01-25T15:26:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_ClaudiaOttaianoRodriguesFrota.pdf: 626565 bytes, checksum: 43cb641dd3dd27efdd2d37b66a64cfc2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-25T15:26:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_ClaudiaOttaianoRodriguesFrota.pdf: 626565 bytes, checksum: 43cb641dd3dd27efdd2d37b66a64cfc2 (MD5) / INTRODUÇÃO: O câncer colorretal (CCR) é o terceiro tumor maligno mais frequente no mundo, sendo superado em incidência apenas pelos tumores de pulmão e mama. A quimioterapia realizada após a abordagem principal, também denominada de quimioterapia adjuvante, tem como objetivo primordial o controle da doença micrometastática, com consequente diminuição da recidiva e do óbito; e deve ser realizada nos pacientes em estadio III (presença de acometimento linfonodal) e no estadio II de alto risco. O acréscimo da oxaliplatina aos esquemas de quimioterapia adjuvante baseada em fluorouracil trouxe ganhos de sobrevida livre de doença em estudos que avaliaram isoladamente os esquemas FOLFOX e FLOX. No entanto, os esquemas FLOX e FOLFOX nunca foram comparados em um mesmo estudo. Diante das dificuldades de internação e da aquisição da bomba de infusão contínua e na ausência de dados que definam a superioridade de um esquema em relação ao outro, por vezes optamos por estratégias de quimioterapia em bolus visando o tratamento exclusivamente ambulatorial. OBJETIVO: Avaliar o impacto oncológico do tipo de infusão do fluorouracil nas associações com a oxaliplatina, comparando os dados oncológicos de sobrevida global, sobrevida livre de doença, recidiva e mortalidade específica por câncer dos esquemas adjuvantes FLOX e FOLFOX. MÉTODOS: Estudo longitudinal retrospectivo que avaliou os pacientes adultos com cancer colorretal tratados por ressecção cirúrgica seguida de quimioterapia adjuvante no Centro de Alta Complexidade em Oncologia do Hospital Universitário de Brasília (CACON-HUB) e no Centro de Câncer de Brasília CETTRO (CETTRO), ambos localizados em Brasília, DF, Brasil. RESULTADOS: Foram incluídos 75 pacientes, sendo 31 pacientes tratados com esquema FLOX e 44 pacientes tratados com esquema FOLFOX. A mediana do tempo de seguimento dos grupos foi de 42 meses. A mediana de idade foi similar entre os grupos. As variáveis que foram diferentes entre os dois grupos foram sexo, ASA, redução de dose, acometimento de linfonodos, intervalo para início da quimioterapia, além do próprio esquema de quimioterapia FLOX vs. FOLFOX. Os pacientes tratados com o esquema FLOX tiveram maior recorrência global (HR 4,48; p= 0,04) e tendência a maior mortalidade específica por câncer (HR 6,74; p= 0,05) do que aqueles tratados com o esquema FOLFOX. A sobrevida global e a sobrevida livre de doença foram similares nos dois grupos. Não houve diferença entre as toxicidades encontradas nos grupos. CONCLUSÃO: Os resultados deste estudo demostraram que os pacientes tratados com esquema FLOX tiveram maior recorrência global e tendência a maior mortalidade específica por câncer do que os pacientes tratados com o esquema FOLFOX. Estudos prospectivos e com maior número de pacientes devem ser realizados para que o esquema FLOX deixe de ser uma opção de tratamento adjuvante no CCR. No entanto é favorável o uso do esquema FOLFOX nos pacientes que tiverem acesso à quimioterapia em infusão contínua. / BACKGROUND: Colorectal cancer is the third most frequent malignant tumor in the world. Curative surgery followed by adjuvant chemotherapy has become the standard of care in patients with high risk stage II and stage III colorectal cancer. The addition of oxaliplatin to adjuvant chemotherapy based on fluorouracil improves disease-free survivals in studies that evaluated the FOLFOX and FLOX treatments isolatedly. However, the FLOX and FOLFOX treatments have never been compared in one single study. PURPOSE: Analyse overall survival, disease-free-survival, distant and local recurrences and cancer-specific mortality of the adjuvant FLOX and FOLFOX treatments. METHODS: Retrospective longitudinal study that evaluated adult patients with colorectal cancer, treated with surgery followed by adjuvant chemotherapy at the Centro de Alta Complexidade em Oncologia do Hospital Universitário de Brasília (CACON-HUB) and at the Centro de Câncer de Brasília CETTRO (CETTRO), both located in Brasilia, DF, Brazil. RESULTS: A total of 75 patients were included: 31 of them were patients treated with FLOX and 44 patients treated with FOLFOX. Median follow-up was 42 months. The median of the age was similar between the groups. The differing characteristics of the patients between the groups were gender, ASA, dose reduction, lymph node involvement, interval to begin the chemotherapy, besides the chemotherapy treatment: FLOX vs. FOLFOX. FLOX group had a higher global recurrence (HR 4,48; p= 0,04) and a tendency to a higher cancer-specific mortality (HR 6,74; p= 0,05) than those who were treated with FOLFOX. The global survival and the disease-free survival were similar in both groups. The toxicity was the same as shown in scientific literature, with the exception of the 23% incidence of diarrhea grade 3/4 in the FOLFOX group. CONCLUSION: Patients that received FLOX chemotherapy had a higher global recurrence and a tendency to higher cancer-specific mortality than patients treated with FOLFOX adjuvant chemotherapy.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Enfermagem, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-10-19T16:45:57Z No. of bitstreams: 1 2017_PrisciladeSouzaMaggiBontempo.pdf: 14805650 bytes, checksum: 03addc7ae2ffd2d82e779ce056c79785 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-10-20T12:29:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_PrisciladeSouzaMaggiBontempo.pdf: 14805650 bytes, checksum: 03addc7ae2ffd2d82e779ce056c79785 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-20T12:29:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_PrisciladeSouzaMaggiBontempo.pdf: 14805650 bytes, checksum: 03addc7ae2ffd2d82e779ce056c79785 (MD5) Previous issue date: 2017-10-20 / A radioterapia consiste em uma modalidade clínica que utiliza a radiação ionizante com finalidade terapêutica para tratamento do câncer. Dentre os efeitos adversos inerentes à essa terapêutica destaca-se a radiodermatite, reação cutânea desconfortável caracterizada por hipersensibilidade, hiperpigmentação, dor, prurido ou descamação. Dependendo da severidade desta reação, pode ocorrer a suspensão do tratamento provocando atrasos e comprometimento do sucesso terapêutico. A ocorrência da radiodermatite não é conhecida em âmbito nacional uma vez que a maioria dos estudos de grande impacto nesta área é internacional. Há uma necessidade em dirimir esta lacuna haja vista que o conhecimento desta ocorrência pode determinar políticas e protocolos essenciais à prática clínica e controle desta radiotoxicidade. Este estudo teve por objetivo verificar a ocorrência de radiodermatite em pacientes com câncer submetidos à radioterapia, identificar o tempo para o surgimento e classificar o grau e a severidade da radiodermatite ao longo do tratamento. Foi conduzido uma coorte prospectiva, realizada no setor de Radioterapia da UNACON/HUB. A amostra foi constituída por 112 pacientes submetidos à radioterapia durante o período de 15 de março de 2016 a 04 de maio de 2017, dentre os quais 31 com câncer de cabeça e pescoço, 50 de mama e 31 na região da pelve (próstata, colo uterino e endométrio). Os dados foram analisados por meio de estatística descritiva, utilizando medidas de frequência e proporção, por meio do software Statistical Package for the Social Sciences (SPSS). Todos os pacientes submetidos à radioterapia para câncer de cabeça e pescoço (100%) apresentaram algum grau de radiodermatite ao longo do tratamento, com tempo médio de ocorrência de 11 dias. Na segunda semana de tratamento, 61% dos pacientes já haviam desenvolvido eritema leve. A quinta semana foi a que apresentou maior severidade nas reações, uma vez que houve maior proporção de pacientes com descamação seca (61%), além de 2 pacientes com descamação úmida. Dentre os pacientes com câncer de mama, 98% desenvolveram radiodermatite no decorrer do tratamento, com tempo médio de surgimento de 11 dias. O eritema foi o sinal mais predominante estando presente em todas as cinco semanas de acompanhamento. Na quinta semana de tratamento, 20% dos pacientes apresentaram descamação seca e 14% descamação úmida. Dentre os pacientes que irradiaram a região da pelve, 80% das pacientes com câncer de colo uterino apresentaram algum grau de radiodermatite, com tempo médio de ocorrência de 7 dias. O eritema esteve presente principalmente na terceira e quarta semanas. Dentre as pacientes com câncer de endométrio, houve ocorrência de radiodermatite em 33%, com tempo médio de 11 dias. Dos pacientes com câncer de próstata 52% desenvolveram radiodermatite ao longo do tratamento, e apresentaram tempo médio de ocorrência tardio (18 dias), quando comparado às demais regiões. Houve maior ocorrência de desenvolvimento de eritema leve. O desenvolvimento de estudos observacionais e experimentais que investigam a radiodermatite permitem conhecer melhor essa radiotoxicidade para propor medidas de manejo e controle mais precisas e no tempo certo. Espera-se que os resultados deste estudo contribuam para o desenvolvimento de ações para prevenção, tratamento e controle da radiodermatite. / Radiotherapy consists in a clinical modality that uses ionizing radiation for therapeutic purposes to treat cancer. Among the adverse effects, inherent to this therapy is radiodermatitis, uncomfortable cutaneous reaction characterized by hypersensitivity, hyperpigmentation, pain, pruritus or desquamation. Depending on the severity of this reaction, treatment may be discontinued causing delays and compromising the therapeutic success. The occurrence of radiodermatitis is not known at the national level since the majority of the studies of great impact in this area are international. There is a need to resolve this gap since the knowledge of this occurrence can determine policies and protocols that are essentials to the clinical practice and control of this radiotoxicity. This study aimed to verify the occurrence of radiodermatitis in cancer patients submitted to radiotherapy, to identify the time of its appearance and to classify the degree and severity of radiodermatitis throughout the treatment. An prospective cohort study was conducted in the Radiotherapy sector of UNACON/HUB. The sample consisted of 112 patients submitted to radiotherapy during the period of March 15th, 2016 to the 4th of May, 2017, of which 31 had head and neck cancer, 50 had a breast cancer and 31 had cancer at pelvic region (prostate, cancer of the uterine cervix and endometrial). Data were analyzed using descriptive statistics, using frequency and proportion measurements, by using the Statistical Package for the Social Sciences (SPSS) software. All patients submitted to radiotherapy for head and neck cancer (100%) presented some degree of radiodermatitis throughout the treatment, with an average time of occurrence of 11 days. By the second week of treatment, 61% of the patients had already developed mild erythema. The fifth week was the one with the greatest severity in the reactions, since there was a higher proportion of patients with dry desquamation (61%), besides 2 patients with moist desquamation. Among the patients with breast cancer, 98% developed radiodermatitis during the treatment, with an average time of onset of 11 days. Erythema was the most prevalent sign being present at all five weeks of follow-up. In the fifth week of treatment, 20% of the patients presented dry desquamation and 14% wet desquamation. Among the patients that irradiated the pelvic region, 80% of patients with cancer of the uterine cervix presented some degree of radiodermatitis, in a mean time of 7 days. Erythema was present mainly in the third and fourth weeks. Among the patients with endometrial cancer, radiodermatitis occurred in 33%, with an average time of 11 days. 52% of patients with prostate cancer developed radiodermatitis throughout the treatment, and presented an average time of late occurrence (18 days) when compared to the other regions. There was a greater occurrence of development of mild erythema. The development of observational and experimental studies that investigate radiodermatitis allows a better understanding of this radiotoxicity in order to propose more precises measures of control and management, in an accurate time. The results of this study are expected to contribute to the development of actions for the prevention, treatment and control of radiodermatitis. / La radioterapia consiste en una modalidad clínica que utiliza la radiación ionizante con finalidad terapéutica para el tratamiento del cáncer. Entre los efectos adversos inherentes a esta terapéutica se destaca la radiodermatitis, reacción cutánea incómoda caracterizada por hipersensibilidad, hiperpigmentación, dolor, prurito o descamación. Dependiendo de la severidad de esta reacción, pueden ocurrir la suspensión del tratamiento provocando retrasos y el comprometimiento del éxito terapéutico. La ocurrencia de la radiodermatitis no es conocida a nivel nacional, ya que la mayoría de los estudios de gran impacto en esta área son internacionales. Hay una necesidad de suprimir esta laguna ya que el conocimiento de esta ocurrencia puede determinar políticas y protocolos esenciales a la práctica clínica y control de esta radiotoxicidad. Este estudio tuvo como objetivo verificar la ocurrencia de radiodermatitis en pacientes con cáncer sometidos a la radioterapia, identificar el tiempo para el surgimiento y clasificar el grado y la severidad de la radiodermatitis al largo del tratamiento. Se realizó un estudio cohorte prospectiva, realizado en el sector de Radioterapia de UNACON/ HUB. La muestra fue constituida por 112 pacientes sometidos a la radioterapia durante el período de 15 de marzo de 2016 a 04 de mayo de 2017, entre los cuales 31 con cáncer de cabeza y cuello, 50 de mama y 31 en la región de la pelvis (próstata, cuello Uterino y endometrio). Los datos fueron analizados por medio de estadística descriptiva, utilizando medidas de frecuencia y proporción, a través del software Statistical Package for the Social Sciences (SPSS). Todos los pacientes sometidos a radioterapia para cáncer de cabeza y cuello (100%) presentaron algún grado de radiodermatitis a lo largo del tratamiento, con tiempo promedio de ocurrencia de 11 días. En la segunda semana de tratamiento, el 61% de los pacientes ya habían desarrollado eritema leve. La quinta semana fue la que presentó mayor severidad en las reacciones, una vez que hubo mayor proporción de pacientes con descamación seca (61%), además de 2 pacientes con descamación húmeda. Entre los pacientes con cáncer de mama, el 98% desarrolló radiodermatitis en el transcurso del tratamiento, con tiempo medio de surgimiento de 11 días. El eritema fue el signo la reacción más predominante que está presente en las cinco semanas de seguimiento. En la quinta semana de tratamiento, el 20% de los pacientes presentaron descamación seca y 14% descamación húmeda. Entre los pacientes que irradiaron la región de la pelvis, el 80% de las pacientes con cáncer de cuello uterino presentaron algún grado de radiodermatitis, con tiempo promedio de ocurrencia de 7 días. El eritema estuvo presente principalmente en la tercera y cuarta semanas. Entre las pacientes con cáncer de endometrio, hubo ocurrencia de radiodermatitis en 33%, con tiempo promedio de 11 días. El 52% de los pacientes con cáncer de próstata desarrollaron radiodermatitis a lo largo del tratamiento, y presentaron tiempo promedio de ocurrencia tardía (18 días), cuando comparado a las demás regiones. Se ha producido un mayor desarrollo de eritema leve. Se espera que los resultados de este estudio contribuyan al desarrollo de acciones para prevención, tratamiento y control de la radiodermatitis.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2010. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-06-13T18:45:48Z No. of bitstreams: 1 2010_LarissaCostaSouza.pdf: 1921437 bytes, checksum: 95665a015ade6f8fd6913fc4218169c1 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2016-06-20T13:38:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_LarissaCostaSouza.pdf: 1921437 bytes, checksum: 95665a015ade6f8fd6913fc4218169c1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-20T13:38:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_LarissaCostaSouza.pdf: 1921437 bytes, checksum: 95665a015ade6f8fd6913fc4218169c1 (MD5) / Dietas ricas em leguminosas têm sido associadas à baixa incidência de câncer em populações humanas, sendo essas plantas, ricas em inibidores de proteases. O BTCI (black-eyed pea trypsin/chymotrypsin inhibitor) é um inibidor de protease da família Bowman-Birk, isolado de sementes da leguminosa Vigna unguiculata (feijão-de-corda), que inibe a tripsina e a quimotripsina simultaneamente. Diversos estudos mostraram o efeito de um Inibidor Bowman-Birk (BBI) no controle de vários tipos de câncer. Recentemente, o BTCI foi caracterizado como um agente anticarcinogênico em estudos in vitro utilizando células de câncer de mama. Os resultados encontrados nesse estudo apontam para efeitos citotóxicos e citostáticos, no entanto, o mecanismo molecular envolvido nesses eventos ainda não foi elucidado. Considerando que o câncer está, de forma geral, relacionado a disfunções no ciclo celular, a via ubiquitina-proteassoma torna-se alvo promissor para o controle de células cancerosas. A investigação dos efeitos do BTCI no proteassoma é uma das principais metas que nortearam o presente trabalho. A caracterização físico-química e molecular da associação BTCI-proteassoma é fundamental para a compreensão da atividade do BTCI, relacionada ao controle do ciclo celular de células de câncer de mama, visando à possível aplicação desse inibidor como agente anticarcinogênico. O BTCI apresentou inibição contra as três atividades proteolíticas do proteassoma 20S: quimotripsina, tripsina e caspase-like. Adicionalmente, peptídeos derivados do BTCI, com apenas um sítio de inibição, apresentaram inibição do proteassoma com menor afinidade, ou ativação de algumas atividades proteolíticas desse complexo macromolecular. O BTCI e o proteassoma 20S formaram complexos estáveis em temperaturas até 55ºC e em pHs neutros e básicos, sendo esse complexo sensível ao NaCl. Estudos in vitro mostraram que o BTCI é colocalizado com o proteassoma em células de câncer de mama MCF-7 no citoplasma e no núcleo e não altera a ubiquitinação de proteínas nessas células. O peptídeo derivado de BTCI, Pep1, que inibe o sítio da quimotripsina, não afeta o conteúdo de proteínas ubiquitinadas nas células MCF-7, o que pode estar relacionado com a inibição de proteínas E3 ligase, envolvidas na ubiquitinação de proteínas celulares. Esses dados indicam que a via ubiquitina-proteassoma está relacionada aos efeitos anticarcinogênicos do inibidor BTCI em células de câncer de mama, MCF-7, o que justifica a ampliação dos estudos nessa linha de pesquisa, visando à aplicação biotecnológica desse inibidor na terapia contra o câncer de mama. _______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Diets rich in leguminous, a rich source of protease inhibitors, have been associated with low incidence of cancer in humans. The BTCI (black-eyed pea trypsin/chymotrypsin inhibitor) is a Bowman-Birk protease inhibitor isolated from Vigna unguiculata (black-eyed pea) seeds, which inhibits trypsin and chymotrypsin simultaneously. Several studies have shown the effect of a Bowman-Birk inhibitor (BBI) in various types of cancer. Recently, BTCI was characterized as an anticancer agent in studies in vitro using breast cancer cells. The results from this study show cytotoxic and cytostatic effects of BTCI, however, the molecular mechanism involved in these events has not yet been elucidated. Considering that cancer is, in general, related to dysfunction in the cell cycle, the ubiquitin-proteasome pathway becomes a promising target for cancer cells control. The investigation of the BTCI effects on proteasome is one of the main purposes of the present study. The physical-chemical and molecular characterization of the BTCI-proteasome association is essential for understanding the activity of BTCI, related to cell cycle control in breast cancer cells, in order to consider its pharmacological application as anticarcinogenic agent. BTCI showed inhibition against all three proteolytic activities of 20S proteasome: chymotrypsin, trypsin and caspase-like. Additionally, peptides derived from BTCI, with only one inhibition site, showed proteasome inhibition with lower affinity or activation of some proteolytic activities of this macromolecular complex. The BTCI and the 20S proteasome formed stable complexes at temperatures up to 55°C and neutral and alkaline pHs, however, this complex is sensitive to NaCl. In vitro studies showed that BTCI colocalizes with the proteasome in breast cancer cells, MCF-7, at cytoplasm and nucleus, and does not alter the ubiquitination of proteins in these cells. The peptide derived from BTCI, Pep1, which inhibits the chymotrypsin site, does not affect the ubiquitinated proteins content in MCF-7 cells, which may be related to inhibition of E3 ligase protein, involved in the ubiquitination of cellular proteins. These data indicate that the ubiquitin-proteasome pathway is related to the anticarcinogenic effects of BTCI in breast cancer cells MCF-7, which justifies the further studies in the same research line, aimed the biotechnological application of this inhibitor in therapy against breast cancer.

Dissertação (mestrado)–Universidade de Brasília, Universidade UnB de Planaltina, Programa de Pós-Graduação em Ciência de Materiais, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-07-15T13:21:44Z No. of bitstreams: 1 2016_IsisPiresThomé.pdf: 1759165 bytes, checksum: 802581531ad1c8049db8b4a6e5545850 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-08-19T11:51:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_IsisPiresThomé.pdf: 1759165 bytes, checksum: 802581531ad1c8049db8b4a6e5545850 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-19T11:51:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_IsisPiresThomé.pdf: 1759165 bytes, checksum: 802581531ad1c8049db8b4a6e5545850 (MD5) / O câncer é uma doença muito agressiva que atinge milhões de pessoas no mundo. Entre os vários tipos de câncer, o carcinoma mamário é o segundo mais frequente no mundo e o que mais acomete as mulheres. A quimioterapia é uma abordagem terapêutica bastante empregada, especialmente no caso de doença metastática. Contudo, este tipo de tratamento apresenta limitações como falta de especificidade às células tumorais e ocorrência de quimioresistência. Por isso, faz-se necessário o desenvolvimento de tratamentos mais eficazes contra esta doença. Com o objetivo de melhorar a eficácia da quimioterapia para aumentar a expectativa de vida dos pacientes, várias propostas têm sido sugeridas. Os complexos metálicos vêm se mostrando agentes antitumorais promissores. Dentre eles, os complexos de Rutênio (Ru), como o KP1019, têm se destacado, pois apresentam (1) capacidade em se ligar à biomoléculas como transferrina; (2) considerável labilidade química; (3) atuação em células que desenvolveram resistência à cisplatina e (4) capacidade em participar de reações de oxirredução permitindo a existência dos mais importantes estados de oxidação em meio biológico. No presente trabalho, foi realizada a síntese do KP1019 e sua caracterização por ressonância magnética nuclear (RMN). Além disso, avaliou-se o efeito citotóxico deste complexo em células murinas de carcinoma mamário (4T1) e normais de fibroblastos (NIH-3T3). A citotoxicidade do KP1019 foi avaliada por testes de viabilidade celular por meio do método colorimétrico de MTT. As células foram tratadas com doses que variaram de 1,25 a 200 μM de KP1019 e cisplatina por períodos de 24, 48 e 72 horas. O KP1019 foi sintetizado e depois caracterizado por RMN e avaliado quanto à sua toxicidade. Após 24 h de tratamento, KP1019 induziu citotoxicidade semelhante à cisplatina em ambas as linhagens celulares. Além disso, notou-se que as linhagens 4T1 e NIH-3T3 tiveram a mesma sensibilidade ao tratamento com KP1019. No período de 48 horas, o KP1019 induziu diferente citotoxicidade nas duas linhagens, sendo que este não apresentou citotoxicidade para 4T1, enquanto que a cisplatina foi mais citotóxica para esta linhagem (doses acima de 12,5 μM). Em contrapartida, o KP1019 foi mais citotóxico para NIH-3T3 em doses a partir de 25 μM. Já no período de 72 horas, ambos os complexos foram similarmente citotóxicos em ambas as linhagens celulares a partir das doses 12,5 μM. Além disso, o efeito citotóxico de KP1019 e cisplatina foram diferentes na linhagem 4T1 (doses 1,25 e 2,5 μM). Ademais, a morfologia das células 4T1 foi analisada em microscópio óptico após tratamento por 24 horas com 20 μM de KP1019 ou cisplatina (IC50) e observou-se várias alterações relacionadas à citotoxicidade como arredondamento das células e aumento na quantidade de vesículas citoplasmáticas. Dessa forma, sugere-se que o efeito citotóxico de KP1019 foi dependente da dose, linhagem celular e tempo avaliados e, esta citotoxicidade está associada a alterações morfológicas provenientes de processo de morte celular, o que reforça o excelente potencial de KP1019 para uso na quimioterapia do câncer de mama. ________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cancer is a very aggressive disease that affects millions of people worldwide. Among the various types of cancer, breast cancer is the second most frequent in the world and that most affects women. Chemotherapy is fairly a therapeutic approach employed, particularly for metastatic disease. However, this treatment has limitations such as lack of specificity for tumor cells and occurrence of chemoresistance. Therefore, it is necessary to develop more effective treatments for this disease. In order to improve the effectiveness of chemotherapy to increase the life expectancy of patients, various proposals have been suggested. The metal complexes have shown to be promising antitumor agents. Among them, the complexes of ruthenium (Ru) as the KP1019, have been highlighted as present (1) the ability to bind to biomolecules such as transferrin; (2) substantial chemical lability; (3) operating in cells that have developed resistance to cisplatin and (4) the ability to participate in redox reactions allowing the existence of the most important oxidation states in biological medium. In the present work, the synthesis of KP1019 and its characterization by nuclear magnetic resonance imaging was performed (NMR). In addition, it evaluated the cytotoxic effect of this complex on murine mammary carcinoma cells (4T1) and normal fibroblasts (NIH-3T3). The cytotoxicity of KP1019 was evaluated by cell viability tests using the MTT colorimetric method. Cells were treated with doses ranging from 1.25 to 200 mM of KP1019 and cisplatin for periods of 24, 48 and 72 hours. The KP1019 was synthesized and then characterized by NMR and evaluated for their toxicity. After 24 h of treatment, KP1019 induced cytotoxicity similar to cisplatin in both cell lines. Furthermore, it was observed that the 4T1 and NIH-3T3 lines showed the same sensitivity to treatment with KP1019. Within 48 hours, the KP1019 induced cytotoxicity in two different strains, and this showed no cytotoxicity for 4T1, while cisplatin was more cytotoxic to this strain (over 12.5 uM doses). In contrast, KP1019 was more cytotoxic to NIH-3T3 at doses from 25 uM. In the 72-hour period, both complexes were cytotoxic similar in both cell lines from 12.5 uM doses. Additionally, the cytotoxic effect of cisplatin were KP1019 and different in lineage 4T1 (doses 1.25 and 2.5 uM). Furthermore, the morphology of 4T1 cells was examined under an optical microscope after treatment for 24 hours with 20 uM of KP1019 or cisplatin (IC50) and observed several changes related to cytotoxicity and rounding of the cells and increasing the amount of cytoplasmic vesicles. Thus, it is suggested that the cytotoxic effect of KP1019 was dose-dependent cell line and evaluated time and this cytotoxicity is associated with morphologic changes from cell death process, which enhances the excellent potential KP1019 for use in cancer chemotherapy breast cancer.