Orientador: Nereu Carlos Prestes / Resumo: O presente projeto pretendeu estudar o ciclo hormonal e o metabolismo de cálcio das cadelas durante a gestação e puerpério e testar a eficiência do método da quimioluminescência como uma alternativa ao RIA. Foram utilizadas 10 cadelas adultas com tamanho e peso semelhantes, mantidas sob as mesmas condições de manejo e alimentadas com ração de boa qualidade, sem qualquer suplementação até os 40 dias de gestação, após isto a ração foi substituída por ração de filhote até o final da lactação. As colheitas de sangue foram realizadas durante as fases gestacional e puerperal, nos momentos: M0 (início do diestro citológico), M1 (20 dias pós-M0), M2 (40 dias pós-M0), M3 (momento do parto), M4 (15 dias pósparto), M5 (45 dias pós-parto) e M6 (30 dias pós-desmame). O PTH, osteocalcina, calcitonina, progesterona, estradiol, T3 total, T4 total, T4 livre e calcitriol foram analisados pelo radioimunoensaio; T4 canino, T3 total, T3 livre, T4 total e T4 livre foram analisados pela quimioluminescência e o cálcio, fósforo, proteína total, albumina e fosfatase alcalina foram analisados pelo método colorimétrico. A osteocalcina e calcitonina foram testadas pelo método do RIA e não foram observadas diferenças entre os momentos. O T3 Livre testado pelo método de quimioluminescência e apresentou todos os valores abaixo do limite de detecção. As demais variáveis apresentaram diferenças significativas entre os momentos. Não foram observadas correlações que demonstrem envolvimento dos hormônios dosados com o metabolismo do cálcio e fósforo. Não houve correlação entre o número de filhotes e as demais variáveis estudadas; os resultados demonstram não ter havido tendência a hipocalcemia e correção hormonal; o estudo de correlações não demonstrou um padrão de acontecimento entre as diversas variáveis, principalmente entre o cálcio e as demais variáveis... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: The present project intended to study hormone cycle and calcium metabolism of bitches during gestation and the puerperal period and to test the efficiency of chemoluminescent immune assay as an alternative to RIA. Ten adult bitches of similar size and weight, maintained under the same environmental conditions and fed with high quality dry food without any supplementation until the fortieth day of gestation, then changed to puppy dry food until the end of lactation. Blood samples were collected during gestation and the puerperal period, on moments M0 (beginning of cytologic diestrus), M1 (20 days after M0), M2 (40 days after M0), M3 (at the time of parturition), M4 (15 days after parturition), M5 (45 days after parturition) and M6 (30 days after weaning). PTH, osteocalcin, calcitonin, progesterone, estradiol, total T3, total T4, free T4 and calcitriol were analyzed by RIA; canine T4, total T3, free T3, total T4 and free T4 were analyzed by chemoluminescence and calcium, phosphorus, total protein albumin and alkaline phosphatase were analyzed by colorimetric method. There was no difference between moments on values of osteocalcin and calcitonin. All values of free T3 were below the limit of detection of the test. The other variables studied presented no difference between moments. There was no correlation demonstrating the involvement of tested hormones on calcium and phosphorus metabolism. There was no correlation between litter size and the other parameters studied; the results showed no tendency to hypocalcaemia and hormone correction; the study of correlations did not suggest a pattern of happening among variables, specially between calcium and the other variables; osteocalcin is more specific as bone maker that alkaline phosphatase; nutritional correction may have been the responsible for the quiescence of minerals and related hormones, the same occurring to the values of total protein... (Complete abstract, click electronic address below). / Doutor

Orientador: Renée Laufer Amorim / Banca: Luiz Henrique de Araújo Machado / Banca: Paulo César Maiorka / Resumo: O mastocitoma ou tumor de mastócitos é a neoplasia cutânea mais comum em cães. O sistema de graduação histopatológico proposto por Patnaik et al. (1984), é um importante critério preditivo para o estadiamento da neoplasia e determinação de terapia adjuvante. O grau I representa a neoplasia bem diferenciada, o grau II a moderadamente diferenciada e o grau III a pouco diferenciada ou anaplásica. Alguns autores demonstraram a discrepância entres observadores quando realizadas comparações nas graduações histopatológicas, devendo-se principalmente a subjetividade do sistema atualmente utilizado. A busca de biomarcadores prognósticos pode ser feita utilizando-se anticorpos primários contra as proteínas envolvidas no processo de iniciação, promoção e progressão tumoral, angiogênese, além mediadores inflamatórios. Estudos foram realizados avaliando-se a expressão de c-KIT (indutor de proliferação celular), VEGF (indutor de angiogênese), PGE2 (mediador inflamatório), com a graduação histopatológica. Além de uma avaliação do próprio sistema de graduação. Foi observada uma discrepância ao avaliar 42 casos de mastocitomas, onde em 21,4% dos casos houve concordância entre os quatro observadores envolvidos no estudo. Em 45 mastocitomas avaliados não houve correlação entre a intensidade de expressão de c-KIT com a graduação histopatológica. No entanto o padrão de marcação de c-KIT apresenta correlação com a graduação histopatológica, sendo a membranosa mais frequente no grau I, citoplasmática difusa no grau II e citoplasmática focal no grau III. Ao correlacionar o percentual de células marcadas por campo e a intensidade de coloração do VEGF e PGE2 com a graduação histopatológica de 53 mastocitomas, não houve correlação estatística da expressão de VEGF, visto que todos mastocitomas expressam altas quantidades de VEGF. / Abstract: The mast cell tumor is the most common cutaneous neoplasia in dogs. The histopathologic grading system proposed by Patnaik et al. (1984) is an important predictive criteria for stablishing the neoplasia staging and therapy. The grade I represents a well diferentiated neoplasia, grade II a moderate differentiated, and grade III a poorly diferentiated or anaplasic. Some authors demonstrated a disagreement among pathologists when comparing histopathologic grading, due mainly to the subjective grading system in use. The search for prognostic biomarkers can be made using primary antibodies against proteins involved in the process of tumor initiation, promotion and progression, angiogenesis and inflammatory mediators. Studies were made evaluating c-KIT (cellular proliferation inductor), VEGF (angiogenesis inductor) and PGE2 (inflammatory mediator) expression and its correlation with the histopathologic grading. A evaluation of the grading system itself was also performed. It was found a disagreement when evaluating 42 canine cutaneous mast cell tumors, where 21,4% of the tumors had agreement of all four pathologists. In 45 mast cell tumors evaluated, there was no correlation between the c-KIT expression intensity and the histopathologic grading. However the expression pattern of c-KIT presented a correlation with the histopathologic grading, where the membrane pattern was more frequent in grade I, diffuse citoplasmatic in grade II and focal citoplasmatic in grade III. When correlating the percentual of marked cells and the expression intensity of VEGF and PGE2 with the histopathologic grading of 53 mast cell tumors, there was no statistical correlation of VEGF, due to all mast cell tumors express high levels of VEGF. The PGE2 presented correlation between the percentual of marked cells when comparing grades I and III. / Mestre

Orientador: Antonio Carlos Paes / Banca: Simone Baldini Lucheis / Banca: Luiz Florêncio Margatho / Resumo: O objetivo deste estudo foi investigar o perfil sorológico de 300 cães sem raças definidas, de diferentes faixas etárias e sexo para Leptospira spp, Toxoplasma gondii e Neospora caninum, expostos aos antígenos na cidade de Avaré (SP). Os cães estavam vivendo nas ruas e posteriormente foram levados a um canil privado com alimentação, vermifugação e assistência veterinária desde 2003, onde as amostras de soro foram obtidas. Pela proximidade com o homem, esses cães foram testados para três importantes doenças: leptospirose, toxoplasmose e neosporose caninas. O método diagnóstico utilizado para leptospirose foi a Prova de Soroaglutinação Microscópica (SAM). Os resultados indicaram a prevalência de 9,33% e o sorovar reagente de maior freqüência foi o bratislava 35,7%, cynopteri 17,9%, autumnalis 14,3%, copenhageni 10,7%, com igual proporção de 7,1% para os sorovares: icterohaemorrhagiae, canicola, hardjo e não reação para os sorovares : australis, djasiman, gryppotyphosa, pomona e pyrogenes. Foi utilizado o Método de Aglutinação Direta (MAD-AF) para o diagnóstico da toxoplasmose com 26% dos animais reagentes a toxoplasmose com títulos variando entre 16 e 256, os respectivos números são: 16 (3,33%), 64 (13,66%) e 256 (9%). Para o diagnóstico da neosporose canina utilizado Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), somente 2 dos 300 cães testados mostraram anticorpos para Neospora caninum (0,66%) com diluições de 1:25 e 1:100. / Abstract: The aim of this study was to investigate the serological profile of 300 mongrel dogs various ages and sex, from the city of Avaré (SP), to the antigens of Leptospira spp, Toxoplasma gondii and Neospora caninum. The dogs were living on the streets, and afterwards directed to a private kennel with food, since 2003, receiving vaccine, vermifuge and veterinarian assistance, and the serum samples were obtained in this place. Because of the man proximity, these dogs were tested to three important diseases: leptospirosis, toxoplasmosis and neosporosis. The diagnostic method run for leptospirosis was the Microscopic Aglutination Test (MAT). The results indicated a prevalence of 9,33%, and most frequent reactant serovars were bratislava (35,7%), cynopteri (17,9%), autumnalis (14,3%), copenhageni (10,7%), and 7,1% to all the following serovars: icterohaemorrhagiae, canicola e hardjo. It was no response to the serovars australis, djasiman, grippotyphosa, pomona and pyrogenes. It was used the Modified Agglutination test (MAT) for diagnosis of toxoplasmosis and 26% of animals were positive, with titers varying between 16 and 256, with the following results: 16 (3,33%), 64 (13,66%) and 256 (9%). Neosporosis was diagnosed by the Immunofluorescence antibody test (IFAT). Only two of the 300 tested dogs demonstrated Neospora caninum antibodies (0,66%), with positivity at 1:25 and 1:100 dilution. / Mestre

Orientador: Júlio Carlos Canola / Banca: Paola Castro Moraes / Banca: Carlos Artur Lopes Leite / Resumo: Neste estudo foram radiografadas articulações coxofemorais de seis cães adultos, de duas raças, provenientes de dois Canis da Polícia Militar em três momentos, no período de um ano. Para predizer sobre a influência do exercício sobre a displasia coxofemoral, em estudo retrospectivo, correspondente a um período de oito anos, foram reavaliadas radiografias de 259 cães displásicos procurando estabelecer, entre outras variáveis, as diferentes modalidades de lesões radiográficas visibilizadas nesta afecção, considerando que estes animais, por informações pessoais de seus proprietários, não eram expostos rotineiramente a exercícios físicos. Na fase experimental, a raça Pastor Alemão foi a única acometida, a articulação esquerda se mostrou com maiores alterações e as lesões se mantiveram constantes nos três momentos. Na fase retrospectiva, os animais mais afetados eram das raças Rottweiler, Pastor Alemão e SRD e com mais de cinco anos de idade. O porcentual de machos e fêmeas afetados foi semelhante e o acometimento da displasia coxofemoral foi quase sempre bilateral e com grau de lesões simétrico. Pode-se concluir que o exercício não foi fator de progressão para cães com displasia coxofemoral. Se supervisionado, mesmo intenso, pode ser bastante benéfico para as articulações coxofemorais / Abstract: In this study, the hip joints of six adult dogs of two breeds, from two kennels belonging to the military police were radiographed three times in one year. To predict the influence of exercise on hip dysplasia, 259 radiographs of dysplastic dogs were reviewed in a retrospective study corresponding to a period of eight years trying to establish, among other variables, all types of radiographic lesions found in this condition since these animals, according to personal information of the owners, were not routinely exposed to physical exercise. In the experimental phase of this study, the German Shepherd Dog was the only affected breed, the left joint showed more alterations and lesions remained constant in the three evaluations. In the retrospective phase, the most affected dogs were Rottweiler, German Shepherd Dog and crossbreeds and the most affected were older than five years of age. The percentage of affected males and females was similar and the involvement of hip dysplasia was mainly bilateral and the degree of injury was mostly symmetrical. It can be concluded that the exercise was not a progress factor for dogs with hip dysplasia. If supervised, even when intense, exercise can be quite beneficial for hip joints / Mestre

Orientador: Sônia Regina Verde da Silva / Resumo: A leishmaniose visceral canina é uma zoonose considerada endêmica em algumas regiões do estado de São Paulo e outras localidades do país. Apesar de ser uma enfermidade sistêmica, no cão, os principais sinais clínicos são dermatológicos. Foram avaliados trinta cães com diagnóstico de leishmaniose pelos exames parasitológico e sorológico, divididos em dois grupos: grupo A com descamação cutânea e grupo B com ulceração cutânea. Os padrões histopatológicos encontrados nos animais pertencentes ao grupo A foram de dermatite perianexial (33,3%), perivascular superficial (6,6%), nodular (6,6%), e as mistas (53,3%), sendo, intersticial/perianexial (12,5%), liquenóide/perivascular superficial e profunda (12,5%), perivascular superficial e profunda/perianexial (12,5%) e perivascular superficial/perianexial (62,5%). Os cães do grupo B apresentaram quadros histopatológicos compatíveis com dermatite perivascular superficial e profunda (33,3%), difusa (20%), perianexial (13,3%), nodular (6,6%), e as mistas (26,6%), representadas por intersticial/perivascular superficial e profunda (25%), nodular/perianexial (25%), fibrosante/perianexial (25%) e perivascular superficial e profunda/perianexial (25%). A presença de formas amastigotas foi observada em 8 (53%) cães com descamação e 7 (47%) com ulceração. A presença de linfócitos T CD3+ foi maior em relação aos linfócitos B CD79a +, tanto nas lesões descamativas como nas ulcerativas (69,5/8,8 e 66,1/14,5, respectivamente). Houve diferença estatística entre a população de células CD3+ e CD79a+ dentro do mesmo padrão dermatológico, o mesmo ocorreu quando se comparou a população de células CD79a+ entre os padrões descamativos e ulcerativos (p<0,05). / Abstract: Canine leishmaniasis is an endemic zoonoses, in some São Paulo state regions and other Brazilian cities. Even though it is a systemic disease, in the dog, the main clinical sign is dermatological. Thirty dogs with positive results in serology and parasitological exam for leishmaniasis, were evaluated. They were divided in two groups, one with exfoliative lesions and other with cutaneous ulcers. Histopathological patterns in the first group were: periadnexial dermatitis (33.3%), superficial perivascular (6.6%), nodular (6.6%) and mixeds (53.3%), intersticial/periadnexial (12.5%), lichenoid/perivascular superficial and deep (12.5%), perivascular superficial and deep/periadnexial (12.5%) and superficial perivascular/periadnexial (62.5%). In the ulcerative pattern, the histopathological patterns were: perivascular superficial and deep dermatitis (33.3%), diffuse dermatitis (20%), periadnexial dermatitis (13.3%), nodular dermatitis (6.6%) and mixed dermatitis (26.6%), including intersticial/ perivascular superficial and deep (25%), nodular/periadnexial (25%), fibrosing/perianexial (25%) and perivascular superficial and deep/periadnexial. Parasites were found in 8 dogs (53%) with exfoliative pattern and 7 dogs (47%) with ulcerative pattern. CD3 positive cells (T lymphocytes) were predominant than CD79a positive cells (B lymphocytes), in both dermatological patterns of lesions (69,5/8,8 e 66,1/14,5, respectively). There was no statistical difference between CD3 positive and CD79a cell population concerning exfoliative and ulcerative patterns. There was statistical difference between CD3+ cells and CD79a+ cells, when the same dermatological pattern was considered. The same was observed when compared CD79a+ cells in exfoliative and ulcerative patterns (p<0,05). / Mestre

Orientador: Sonia R. V. da Silva Franco / Resumo:A identificação do agente etiológico da leishmaniose visceral canina (LVC) em tecido cutâneo é importante ferramenta para o controle desta enfermidade. Foram colhidas amostras da cútis, clinicamente sem lesão, de 30 cães pertencentes à área endêmica e com diagnóstico positivo para leishmaniose visceral, com o objetivo de determinar se há uma região preferencial para a realização da biópsia cutânea para o diagnóstico da doença, relacionando esses achados aos aspectos clínicos. Fragmentos cutâneos foram colhidos de seis regiões distintas: plano nasal, pavilhão auricular, toráx, abdome, membro anterior e transição mucocutânea. Foi realizada a técnica de imunoistoquímica em todas as amostras cutâneas e posteriormente, empregou-se a técnica de reação em cadeia pela polimerase (PCR) somente nas amostras que apresentaram resultados negativos à primeira técnica. Os sinais clínicos mais freqüentemente observados nos cães foram emagrecimento (95%), seguido de linfoadenomegalia (55%) e mucosas pálidas (30%). As alterações dermatológicas mais freqüentes foram alopecia e descamação cutânea (90%), seguidas de dermatite ulcerativa (60%), onicogrifose (50%) e hiperpigmentação (40%). A imunoistoquímica revelou resultado positivo em 100% das amostras cutâneas, independente da região dos cães sintomáticos que apresentaram quadro dermatológico. Já nos cães que não apresentaram manifestações dermatológicas, a porcentagem de positividade foi menor, 40% e 30%, dependendo da região e nos animais assintomáticos a positividade foi de 30% e 20%. Todas as regiões avaliadas nos cães com diagnóstico negativo apresentaram resultado negativo a imunoistoquímica. A PCR apresentou maior positividade quando comparada com a imunoistoquímica (P< 0,05) para a região de membro anterior dos cães sintomáticos sem alterações cutâneas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: The identification of Leishmania spp. in the skin is an important tool for the canine visceral leishmaniasis (CVL) control. The aim of this study was to investigate which would be a better clinically normal skin region to perform skin biopsies for the diagnosis of the naturally Leishmania-infected dogs and to associate this finds to clinical signs. Thirty dogs from an endemic visceral leishmaniasis area and positive diagnose for CVL were selected for the study. Five asymptomatics dogs, negative for Leishmania were included as a fourth group. Clinically normal skin samples were collected from the six different sites by punch biopsy: upper part of the muzzle, ear, thorax, abdomen, forelimb and mucocutaneous junction. Immunohistochemistry detection of Leishmania was performed in all skin biopsy specimens and polymerase chain reaction (PCR) was performed in samples that were Leishmania-negative by immunohistochemistry. Weight loss (95%), lymphadenomegaly (55%) and pale mucous membrane (30%) were the main clinical signs observed. The most frequent skin abnormalities were alopecia and desquamation (90%), ulcerative dermatitis (60%), onychogryphosis (50%) and hyperpigmentation (40%). The immunohistochemistry demonstrated 100% of positivity in all skin samples of symptomatics dogs with skin lesions, independing on the region. Symptomatics dogs without skin lesions showed a lower positivity percentage, 40% and 30% depending on the region and asymptomatics dogs showed 30% and 20%. All regions from group 4 showed negative results. PCR showed positivity rates higher when compared to immunohistochemistry (P< 0,05) for the forelimb region from symptomatics dogs without skin lesions. These findings demonstrated that clinically normal skin of dogs from endemic area have parasites independently of clinical signs. / Mestre

Orientador: Simone Biagio Chiacchio / Resumo: O desenvolvimento eletrocortical após o nascimento tem sido investigado em várias espécies, principalmente na humana. Muitos elementos do eletroencefalograma (EEG) que ocorrem no desenvolvimento neonatal ainda não foram determinados em cães. O presente trabalho analisou o desenvolvimento eletrocortical de cães normais no período compreendido do primeiro aos 45 dias de idade. Foram estudados 182 traçados do EEG de 26 cães sem raça definida, com intervalos semanais (sete momentos), obtidos em sono espontâneo para análise visual quantitativa e qualitativa, feitas por dois examinadores independentes sem prévio conhecimento do período registrado. Utilizou-se um eletroencefalógrafo convencional de oito canais com montagens mono e bipolar. Os registros nas 24 horas e no sétimo dia de idade mostraram um padrão de traçado descontínuo, com trechos com surtos de 4,3 a 8,3s caracterizados por aparecimento de atividade cortical (3 a 15Hz e 28 a 35mV) e intervalos intersurtos de 2 a 5s caracterizados por atenuação total ou parcial da atividade cortical. Observaram-se trechos com surtos de atividade alfa-beta "fuso-like" (12-15Hz) registrados principalmente durante o sono ativo. O sono quieto foi registrado com pouca ou nenhuma interferência de movimentos fásicos repentinos generalizados e de movimento lento dos olhos. O desenvolvimento eletrocortical de cães neonatos ocorre de forma gradual e as primeiras mudanças significativas ocorrem com 14 dias de vida com caracterização do sono NREM através dos grafoelementos e aumento de ondas lentas. Após 28 dias há aumento progressivo das ondas lentas e aparecimento do último tipo de sono NREM, sono IV, e aumento crescente dos trechos em vigília. Finalmente com 45 dias de vida, as ondas lentas do sono NREM de alta voltagem, a apresentação de grande quantidade de microdespertar e traçados caracterizando... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: The eletrocortical developmental after birth in various species have been done mainly in human. Many elements of the electroencephalogram (EEG) still were not determined. This work analysed the electrocortical developmental from normal young dogs from first to 45 days of age. Were studied 182 EEG from 26 mongrel dogs, at weekly intervals (seven moments), obtained in espontneous sleep to quantity and quality visual analyses, dones by two independents researchers with no previous known from the registred period. A 8-channel conventional electroncephalography was used with mono and bipolar placement. The registrations in the 24 hours and in the 7o day after birth showed a pattern of traced interrupted with parts of outbreak of 4,3 a 8,3s caracterizing the appearence of cortical activity (3 a 15Hz and 28 a 35mV) and intervals between outbreaks of 2 to 5s caracterized for parcial or total atenuation from cortical actvity. In this period was observed parts with outbreaks of activity alfa-beta "fuso-like" (12-15Hz) registrated principaly during the active sleep. The quiet sleep was registrated with a electrograph pattern of actvity with few or neither interference of generality abrupt fasics movements and the slow movement of eyes. The electrocortical developmental in dogs occurs in a gradual form and the changes significantly occur with 14 days after birth caracterizing sleep NREM trough grafoelements and increase in slow waves. After 28 days with progressive increase of slow waves and appearence of the latest type of sleep NREM, sleep IV, and constant increase of vigils segments. Finaly with 45 days after birth slow, large waves of sleep NREM, presentation of a great quantity of micro awakes; caracterized traces of instability in the maintenance of the sleep and registred of more time in vigil that caracterized a greatest maturity compared with the... (Complete abstract, click electronic address below). / Doutor

Orientador: Simone Baldini Lucheis / Coorientador: Helio Langoni / Banca: Katia Denise Saraiva Bresciani / Banca: Antonio Carlos Paes / Resumo: Devido à proximidade filogenética entre Leishmania spp. e Trypanosoma cruzi (T. cruzi), podem ocorrer reações cruzadas e resultados falso-positivos à sorologia. O objetivo do presente estudo foi contribuir com o diagnóstico elucidativo da leishmaniose e da tripanossomíase caninas, utilizando a Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), o exame parasitológico direto e a pesquisa de DNA, tanto de Leishmania spp., quanto de T.cruzi, pela Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) em amostras de fígado e baço. Para tanto, foram utilizados 100 cães eutanasiados no Centro de Controle de Zoonoses da cidade de Bauru-SP, onde a leishmaniose visceral é endêmica, e 100 cães eutanasiados no canil municipal da cidade de Botucatu-SP, área indene. Sessenta e cinco amostras de soros dos cães de Bauru foram positivas pela RIFI para Leishmania spp. e 40 foram positivas para T.cruzi, enquanto que todas as 100 amostras de cães de Botucatu foram negativas pela RIFI para leishmaniose e somente quatro amostras foram positivas para T. cruzi. Do total de 200 soros testados, 33 (16,5%) apresentaram resultado positivo à sorologia para ambos parasitos. Em 30 amostras de fígado e/ou de baço dos 33 cães que apresentavam anticorpos contra Leishmania spp. e T.cruzi, tanto o exame parasitológico direto como a PCR para Leishmania spp. resultaram positivos, indicando a verdadeira infecção por este parasito. Nenhuma amostra de fígado e baço dos 200 cães de Bauru e Botucatu foi positiva pela PCR para T. cruzi. Estes resultados reforçam a ocorrência de reações cruzadas entre Leishmania spp. e T. cruzi pela RIFI, bem como a necessidade da realização do exame parasitológico direto e/ou da PCR para o diagnóstico elucidativo da leishmaniose e das tripanossomíases caninas. / Abstract: Due Leishmania spp. and Trypanosoma cruzi (T. cruzi) phylogenetical closely, some serological cross-reactions and false-positives results can occur. The objective of this study was to contribute with the elucidative canine leishmaniasis and trypanossomiasis' diagnosis, using Indirect Immunofluorescence (IIF) serologic test, direct parasitological exam and Leishmania spp. and T.cruzi DNA investigation by Polimerase Chain Reaction (PCR) in liver and spleen samples. For this purpose, it were used 100 culled dogs of Zoonosis Control Center in Bauru-SP where Visceral Leishmaniasis (VL) is endemic, and 100 culled dogs of the municipality kennel in Botucatu-SP where VL is non-endemic. Sixty-five (65%) serum samples of dogs from Bauru were positive by IFI for Leishmania spp. and 40 (40%) were positive for T. cruzi. All serum samples (100%) of dogs from Botucatu were negative by IFI for leishmaniasis and only 4 samples were positive for T. cruzi. Of a total of 200 tested serum samples, 33 (16.5%) showed serologic positive results for both parasites. In 30 liver and/or spleen samples of 33 dogs that presented antibodies anti-Leishmania spp. and anti-T.cruzi, both direct parasitological exam and PCR for Leishmania spp. resulted positive, indicating the true dog's infection by this parasite. No liver and spleen samples of 200 dogs from Bauru and Botucatu were positive by PCR for T. cruzi. These results reinforce the occurrence of antibodies cross reactions for Leishmania spp. and T. cruzi by IFI, and also confirm the necessity of a parasitological exam and/or a PCR test for the canine leishmaniasis and trypanosomiasis elucidative diagnosis. / Mestre

Orientador : Maria Denise Lopes / O presente estudo objetivou avaliar a taxa de maturidade nuclear dos ovócitos provenientes de cadelas em estro e em anestro submetidos à maturação em dois meios de cultivo, TCM 199 (Tissue Culture Medium) e SOF (Synthetic Oviduct Fluid) durante 24 horas. A parte experimental foi dividida em dois grupos; grupo 1, cadelas em anestro e grupo 2, constituído de cadelas em estro. Em cada grupo, os ovócitos foram removidos dos ovários e metade deles foi imediatamente corada com Hoescht 33342 e classificados como VG (vesícula germinativa), QVG (quebra da vesícula germinativa), MI (metáfase I) e D/NI (degenerados/não passíveis de identificação) e a outra parte foi maturada em SOF e em TCM 199 por 24 horas, corados e avaliados conforme descrição anterior. Foram recuperados 511 e 373 ovócitos grau I nos grupos 1 e 2 respectivamente. O número médio de ovócitos grau I obtidos por cadela no anestro foi de 46,45 ± 25,23. Para as fêmeas do grupo 2, este valor foi de 62,16 ± 8,18 ovócitos/cadela. O protocolo que utilizou ovócitos provenientes de doadoras em estro e maturação in vitro no SOF foi superior aos demais protocolos testados, demonstrando que a maturação ovocitária é beneficiada pela associação entre a fase do ciclo estral e o meio de maturação in vitro (58% MI). Quando submetidos à maturação in vitro os ovócitos provenientes de fêmeas em estro e em anestro apresentam taxas de QVG semelhantes (21,68% TCM 199 e 23,61% SOF - anestro; 20% TCM199 e 23% SOF - estro), porém a taxa de MI foi superior no grupo de ovócitos provenientes de fêmeas em estro (9,79% TCM 199 e 9,72% SOF - anestro; 25% TCM 199 e 58% SOF - estro). Pôde-se ainda evidenciar que em todos os protocolos testados, o tempo de maturação in vitro de 24 horas foi insuficiente para a obtenção da configuração nuclear de metáfase II. / Abstract: The present study aimed to evaluate the nuclear maturation of in vitro matured oocytes originating from estrus and anoestrus bitches. Two different culture media were used, TCM 199 (Tissue Culture Medium) and SOF (Synthetic Oviduct Fluid). The experimental part was divided into two groups: group 1, consisting of anoestrus bitches, and group 2, consisting of estrus bitches. In each group, oocytes were harvested from ovaries and half of them were immediately stained with Hoechst 33342 and classified as in GV (germinal vesicle), GVBD (germinal vesicle breakdown), MI (metaphase I) and D/NI (degenerated/non identifiable). The other part was matured in SOF or TCM media for 24 hours, stained and evaluated as described previously. There were 511 and 373 grade I oocytes recovered in groups 1 and 2, respectively. The mean number of oocytes obtained per anoestrus bitch was 46.45 ± 25.23. For females in group 2, this value was 62.16 ± 8.18 oocytes / bitch. The protocol that utilized estrus donor's oocytes and in vitro maturation in SOF was superior to the other protocol tested, demonstrating that the association between phase of the estrus cycle and maturation medium is beneficial for oocyte in vitro maturation (58% MI). Oocytes from estrus and anoestrus bitches submitted to in vitro maturation presented similar rates of GVBD (21.68% TCM 199 and 23.61% SOF - anoestrus; 20% TCM199 and 23% SOF - estrus). However the MI rate was higher in the estrus group (9.79% TCM 199 and 9.72% SOF - anoestrus; 25% TCM 199 and 58% SOF - estrus). It was demonstrated, in all the protocols tested, that 24 hours in vitro maturation was insufficient for obtaining nuclear configuration of metaphase II. / Mestre

Orientador: Maria Denise Lopes / Resumo: Neste estudo foram utilizados 20 cães, sem raça definida, de fertilidade desconhecida, com pesos variando entre 15 e 20 Kg, sorologicamente negativos para leptospirose e brucelose canina. Após um período de condicionamento, foram colhidos seis ejaculados de cada cão, por manipulação digital do pênis, sendo três antes da deferentectomia e três após. O sêmen foi imediatamente analisado após a colheita, considerando os seguintes parâmetros: volume, cor, motilidade progressiva, vigor espermático, porcentagem de espermatozóides morfologicamente normais, pH, integridade de membrana (teste hiposmótico e coloração com sondas fluorescentes). Foram determinadas as concentrações de proteínas totais, cloretos totais, cálcio, potássio e sódio. A SDS-PAGE foi realizada utilizando-se duas concentrações de poliacrilamida, 13% e 22%, no gel de separação. Os géis foram corados com coomassie azul brilhante R-250, suas imagens digitalizadas e avaliadas num programa analisador de imagens, onde foram estimados os pesos moleculares e a densidade óptica integrada de cada banda, para cada amostra. Uma correlação negativa foi verificada entre o potássio e a motilidade progressiva, vigor espermático, resultados do teste hiposmótico e porcentagem de espermatozóides com integridade de membrana na coloração com sondas fluorescentes. Apenas o cálcio mostrou-se significativamente mais elevado após a deferentectomia. Foi verificado um total de 37 bandas antes da deferentectomia e 35 após. Antes da deferentectomia, encontrou-se uma correlação positiva e significativa entre duas bandas protéicas, B4 (67 kDa) e a B5 (58,6 kDa) e a motilidade progressiva, vigor espermático, porcentagem de espermatozóides morfologicamente normais, resultados do teste hiposmótico e porcentagem de espermatozóides com integridade de membrana na coloração com sondas fluorescentes... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: In this study 20 mixed breed dogs (15 to 20 Kg of body weight) of unknown fertility were used. The dogs were negative in leptospyrosis and brucelosis tests. After a conditioning time, were collected six ejaculated of each dog by digital manipulation of penis, being three before and three after deferentectomy. Immediately, the semen was analyzed considering the following parameters: volume, color, spermatic motility, vigor, morphological forms of the spermatozoa, pH and membrane integrity (hypoosmotic test and fluorescent stain). The concentrations of total proteins, total chlorides, calcium, potassium and sodium were determined. The SDS-PAGE of each seminal plasma sample was carried out using two polyacrylamide concentrations, 13% and 22%, in the separation gel. The gels were stained with coomassie blue brilliant R-250, the images were digitalized and evaluated in a analyzer software, where the molecular weights were estimated, in accordance with a standard applied in each gel. The integrated optic density of each band for each sample was determined. A negative correlation was verified between the potassium and the spermatic motility, vigor, results of the hypoosmotic test and percentage of spermatozoa with integrity of membrane in the fluorescent stain. The calcium concentrations after of deferentectomy were significantly higher than before. A total of 37 bands before deferentectomy and 35 after were observed. Before the deferentectomy, a positive correlation was verified between two bands, B4 (67 kDa) and the B5 (58,6 kDa), and the spermatic motility, vigor, percentage of normal spermatozoa, results of the hypoosmotic test and percentage of spermatozoa with integrity of membrane in the stain fluorescent. Three bands were significantly different before and after the deferentectomy (B3, of 73,5 kDa, B29, of 7,8 kDa and B27, 3,6 kDa). Keywords: Dog; Seminal Plasma; Proteins; Electrophoresis, Electrolites. / Mestre