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Introducción a la configuración de conocimientos previos en niños de 5 a 6 años para el estudio de la célula.

Carreño Zamora, Hernán January 2006 (has links)
No description available.
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Transplante interespecífico de células germinativas-tronco em Siluriformes Neotropicais

López Suárez, Lucia January 2018 (has links)
Orientador: José Augusto Senhorini / Resumo: No Brasil os siluriformes neotropicais são o segundo grupo mais ameaçado de extinção com 91 espécies. Neste trabalho, foi empregada a técnica de quimerismo usando duas espécies de siluriformes neotropicais o mandi (Pimelodus maculatus) e o bagre sapo (Pseudopimelodus mangurus), visando a reconstituição da segunda espécie. Para tal foi estabelecido um protocolo de isolamento, separação, transplante e criopreservação de células germinativas tronco. As gônadas de P. mangurus foram digeridas enzimáticamente e as células germinativas tronco foram separadas por gradiente descontinuo de densidade, marcadas com PKH26 e transplantadas via papila urogenital em 32 receptores triploides de P. maculatus. Oito gônadas de P. maculatus que receberam transplantes foram analisadas por cortes histológicos e microscopia de epifluorescência para identificação das células germinativo tronco transplantadas, sendo encontradas células do doador em duas gônadas receptoras. Parte das gônadas, bem como do tecido muscular de P. maculatus e de P. mangurus foram utilizados para a extração do DNA genômico e serão utilizados para análise molecular, por a construção de primers, para confirmação do quimerismo. O protocolo estabelecido de criopreservação de células germinativas-tronco de P. mangurus permitirá transplante via intraperitoneal em larvas triploides, durante o período reprodutivo. Este trabalho é pioneiro no transplante de células germinativas-tronco em espécies de siluriformes neotropicais, usando ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In Brazil, Neotropical siluriformes are the second more endangered group with 91 species. In this work, the technique of chimerism was used with two species of Neotropical siluriformes, □mμandi□(¶ Pimelodus maculatus) and □baμgre sapo□¶□ (Pseudopimelodus mangurus), aiming the reconstitution of the second species. Therefore, was established a protocol for isolation; separation and transplantation of stem germ-cells. The gonads of P. mangurus were enzymatic digested and the stem germ-cells separated using a discontinuous density gradient, labeled with PKH26 and transplanted through the urogenital papillae in 32 triploids recipients of P. maculatus. The gonads of eight fish that have received the stem germ-cells were analyzed by histology and fluorescent microscopy for identification of the germ-cell transplanted, and cells from the donor fish were identified in the recipient gonads. For confirmation of chimerism, part of the gonads, as well the muscle tissue of P. maculatus and P. mangurus was used for extraction of genomic DNA, for primers construction and confirmation of the chimerism. The developed protocol for cryopreservation of stem germ-cells of P.mangurus will allow the transplant via urogenital papila in triploid larvae during the spawning season. This work is pioneer in the transplant of stem germ-cells in Neotropical siluriformes using adult triploids as recipients. The results of this study may be applied in future endangered native species or with importance to aqu... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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Instabilidades cinéticas em células a combustível - oscilações de potencial em PEMFC com ânodo de Pd-Pt/C ou Pd/C e em DMFC / Kinetic instabilities in fuel cells - potential oscillations in PEMFC with Pd-Pt/C or Pd/C anode and in DMFC

Nogueira, Jéssica Alves 12 February 2015 (has links)
Essa dissertação dedica-se ao estudo de instabilidades cinéticas em células a combustível de membrana trocadora de prótons (PEMFC, do inglês proton exchange membrane fuel cell). As PEMFC apresentam baixíssima perda por polarização quando operadas com H2. Contudo, quando o processo de produção de H2 se dá por reforma catalítica de hidrocarbonetos, CO está presente em níveis inaceitáveis para PEMFC equipada com ânodo de Pt/C. Dentre as propostas para superar esse problema, ligas bimetálicas de Pt têm se mostrado uma alternativa promissora para tornar a célula mais tolerante à CO. Além disso, é plausível que um comportamento dinâmico surja nesse tipo de sistema eletroquímico, devido à interação de fatores como transferência de massa, corrente, potencial do eletrodo e a presença de um veneno catalítico, nesse sistema o CO, que pode ser uma impureza do H2 ou um intermediário de reação (em células a combustível alimentadas diretamente com metanol, ácido fórmico ou etanol). Uma das motivações em se estudar tais instabilidades cinéticas é que uma célula a combustível operando em regime oscilatório pode resultar em um desempenho superior, uma vez que a limpeza auto-organizada da superfície previne que o ânodo seja completamente envenenado por CO. Nesse contexto, estudou-se a emergência de instabilidades cinéticas em PEMFC operando com ânodo de Pd-Pt/C ou Pd/C durante a oxidação de H2 e H2/CO, assim como em célula a combustível a metanol direto (DMFC, do inglês direct methanol fuel cell) com ânodo de Pt black. Os resultados indicaram que oscilações de potencial surgem na PEMFC durante a oxidação H2/CO sobre Pd-Pt/C assim como sobre Pd/C. Acoplando as medidas de potencial com espectrometria de massas on line na saída do ânodo, investigou-se o consumo de CO e a produção de CO2 durante as oscilações. Observou-se que as oscilações de potencial levam a variações na fração molar de CO e CO2. Adicionalmente, identificou-se oscilações de potencial em DMFC, fenômeno até então não relatado na literatura. / This dissertation deals with kinetic instabilities in proton exchange membrane fuel cells (PEMFC). PEMFCs show very small polarization losses when operating with pure H2. However, when the H2 production takes place by catalytic reforming of hydrocarbons, CO is present in the fuel stream at unacceptable levels for PEMFC equipped with a Pt/C anode. Among the possibilities to overcome this problem, bimetallic Pt alloys have proven to be a promising alternative to increase CO tolerance. Furthermore, it is plausible that a dynamic behavior emerge in such electrochemical system due to the interaction of factors like mass transfer, current, potential, and the presence of a catalyst poison, for this system CO which can be a H2 impurity or a reaction intermediate (in direct methanol/formic acid/ethanol fuel cells). One of the motivations for studying kinetic instabilities is that a fuel cell operating under oscillatory regime might result in higher performance, because the self-organized cleaning of the surface prevents the anode to be completely poisoned by CO. In this context, kinetic instabilities were studied in PEMFC operating with Pt-Pd/C or Pd/C anode during the oxidation of H2 and H2/CO mixture, as well as in direct methanol fuel cell (DMFC) with Pt black anode. It was observed the emergency of potential oscillations during the H2/CO oxidation on both catalysts, Pt-Pd/C and Pd/C. By coupling the potential measurements with on line Mass Spectrometry in the anode outlet it was investigated a variation in the concentration of CO and CO2 during oscillatory dynamic. It was found that the potential oscillations lead to variations in the molar fraction of CO and CO2. Additionally, it was observed potential oscillations in DMFC, phenomenon not previously reported in the literature.
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Célula fotovoltaica orgânica de heterojunção de Poli (3-Hexiltiofeno) (P3HT) e P(NDI20D-T2) (N2200) : preparação e caracterização / Heterojunction organic photovoltaic cell of Poly (3-Hexylthiophene) (P3HT) and P(NDI20D-T2) (N2200) : preparation and characterization

Silva, Patrick Pascoal de Brito 15 February 2016 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Tecnologia, Departamento de Engenharia Elétrica, 2016. / Neste trabalho são apresentados os passos para desenvolvimento de uma célula solar orgânica de heterojunção dos polímeros semicondutores P3HT e N2200. O dispositivo foi desenvolvido em forma de filmes de materiais poliméricos sobrepostos sobre um substrato de vidro (FTO). Foram testadas algumas misturas com proporções em peso de P3HT:N2200 como filme fino da camada ativa. Os métodos de deposição dos filmes foram o de spin coater (com as soluções preparadas usando o clorofórmio) e evaporação térmica em câmara de alto vácuo. O PEDOT:PSS foi usado como camada transportadora de buracos e o C60 como camada transportadora de elétrons. O alumínio foi usado como eletrodo de topo. O trabalho experimental foi dividido em duas partes. Na primeira, foi realizada a caracterização óptica e morfológica dos filmes resultantes da deposição pelo método de spin coating. O espectro de absorção do filme de P3HT apresentou uma banda entre 350 e 670nm. O espectro de absorção do filme de N2200 apresentou duas bandas: a primeira entre 350 e 465nm e a segunda entre 477 e 850nm. Os espectros de todos os filmes das misturas apresentaram uma grande banda de absorção, variando de 350nm a 850nm. A caracterização morfológica dos filmes da mistura dos dois polímeros permitiu observar a presença de furos nos filmes. Na segunda parte, foi feita a caracterização óptica e morfológica em novos filmes para efeitos de comparação. Os espectros de absorção dos filmes se comportaram de maneira semelhante aos obtidos na primeira parte. Houve uma pequena variação na intensidade de absorção ocasionada pela mudança da concentração das soluções usadas para deposição. O estudo de fotoluminescência dos filmes permitiram observar a emissão do P3HT entre 600 e 800nm e uma faixa de emissão do N2200 entre 760 e 850nm. As morfologias dos filmes feitos na segunda parte não apresentaram furos, mas sim alguns glóbulos por toda a área analisada. A caracterização elétrica foi realizada somente na segunda parte do trabalho e foi feita em dispositivos montados com a seguinte estrutura: FTO/PEDOT:PSS/P3HT:N2200/C60/Alumínio. Além das diferentes proporções do filme da camada ativa, foram feitos dois tipos de dispositivos com filmes de C60: o primeiro com espessura de 10nm e o segundo com 30nm. Os dispositivos com a camada de 30nm de C60 apresentaram melhores valores de eficiência de conversão de potência (η) quando comparados aos dispositivos com 10nm. O dispositivo com melhor eficiência (η = 0,22%) foi o de proporção 1:1 de P3HT:N2200 e filme de C60 com 30nm. Nas análises de eficiência quântica externa (IPCE) foi observada uma maior contribuição da absorção do C60 para a fotocorrente. A contribuição da absorção do P3HT e do N2200 (bem pequena) só pôde ser vista nos dispositivos com 30nm de C60. / This work shows the steps for development of an organic solar cell semiconductor heterojunction polymer P3HT and N2200. The device is designed in the form of polymeric material films superimposed on a glass substrate (FTO). They were tested some blends with ratio by weight of P3HT: N2200 as thin film of the active layer. The methods of film deposition were spin coater (with solutions prepared using the chloroform) and thermal evaporation in a high vacuum chamber. The PEDOT: PSS was used as a hole transporting layer and the C60 as electron transport layer. Aluminum was used as the top electrode. The experimental work was divided in two parts. At first, the optical and morphological characterization of the films resultant from deposition by spin coating method was performed. The P3HT film absorption spectrum showed a band between 350 and 670nm. Already, N2200 film absorption spectrum showed two bands: the first between 350 and 465nm, and the second between 477 and 850nm. The spectra of all blends films showed a large absorption band ranging from 350nm to 850nm. The morphological characterization of films of the two polymers of the blend allowed to observe the presence of holes in the film. The second part was made optical and morphological characterization in new films for comparison. Films absorption spectra whether behaved in a manner similar to those obtained in the first part. There was a small variation in the absorption intensity caused by the change of the concentration of the solutions used for deposition. The photoluminescence study of the films allowed to observe the emission of P3HT between 600 and 800nm and an emission range of between 760 and 850nm N2200. The morphology of the films made in the second part showed no holes, but some globules throughout the analyzed area. The electrical characterization was performed only in second part and was made into assembled with the following structure: FTO/PEDOT: PSS/P3HT:N2200/C60/Aluminium. Besides, the different ratios of the active layer film, there have been two types of devices with C60 films: the first with a thickness of 10nm and seconds with 30nm. The devices with the layer of 30nm C60 showed better power conversion efficiency (η) values compared to devices with 10nm. The device with better efficiency (η = 0.22%) was the 1: 1 ratio of P3HT: C60 N2200 and film with 30nm. The external quantum efficiency (IPCE) analysis was observed a greater contribution of C60 absorption to the photocurrent. The contribution of absorption of P3HT and N2200 (very small) could only be seen on devices with 30nm C60.
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Caracterização de marcadores de espermatogônias tronco e sua regulação endócrina e parácrina em zebrafish (Danio rerio) / Characterization of spermatogonia stem cell markers and its endocrine and paracrine regulation in zebrafish (Danio rerio)

Doretto, Lucas Benites 20 December 2018 (has links)
Submitted by Lucas Benites Doretto (lucasbdoretto@gmail.com) on 2019-02-01T13:11:58Z No. of bitstreams: 1 Doretto_2018.pdf: 4650233 bytes, checksum: 9bea19edf8684552c0f36f3b98fe9df8 (MD5) / Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2019-02-01T18:19:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 doretto_lb_me_bot.pdf: 4650233 bytes, checksum: 9bea19edf8684552c0f36f3b98fe9df8 (MD5) / Made available in DSpace on 2019-02-01T18:19:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 doretto_lb_me_bot.pdf: 4650233 bytes, checksum: 9bea19edf8684552c0f36f3b98fe9df8 (MD5) Previous issue date: 2018-12-20 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As células tronco são classificadas em dois grandes grupos de acordo com sua origem e capacidade de diferenciação. Células tronco embrionárias (CTE) são originadas do zigoto, e podem ser classificadas como totipotentes, isto é, capazes de originar um indivíduo inteiro, ou pluripotentes, quando originam os três folhetos embrionários (ecto, meso e endoderme). As células tronco adultas (CTA) são as células tronco encontradas nos tecidos fetais e adultos; classificadas como uni, oligo ou multipotentes dependendo da variedade de tecidos originados a partir delas. Marcadores de células tronco, como antígenos de superfície específicos, fatores de trancrição como OCT4 e NANOG são expressos em CTE e algumas CTA, mas são rapidamente reprimidos à medida que as células se diferenciam. O presente trabalho tem como objetivo identificar marcadores de células tronco e com isso, os efeitos do hormônio endócrino Fsh e do fator parácrino GDNF na atividade proliferativa e gênica dessas populações de células e também de células de Sertoli. Foi observado que os marcadores Pou5f3 e Gfra1a são principalmente expressos em espermatogônias tronco indiferenciadas e que sua expressão reduz significativamente sob efeito do recombinante zebrafish Fsh. Por outro lado, genes como o igf3, nanos3 e nanog tiveram sua expressão aumentada significativamente. O recombinante humano GDNF não altera significativamente a expressão desses genes, porém estimula a proliferação de espermatogônias tipo Aund e Adiff e células de Sertoli associadas. Logo, conclui-se que o rzfFsh atua de maneira endócrina na diferenciação de espermatogônias tronco Pou5f3+ e Gfra1a+ via células de Sertoli, visto que seu receptor é principalmente expresso em cistos indiferenciados. O rhGDNF, que por sua vez é expresso em células germinativas, estimula a proliferação de Aund e Adiff e células de Sertoli associadas através de seu receptor Gfra1a, expresso em ambas populações. / 2016/12101-4
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Caracterização de marcadores de espermatogônias tronco e sua regulação endócrina e parácrina em zebrafish (Danio rerio)

Doretto, Lucas Benites. January 2018 (has links)
Orientador: Rafael Henrique Nóbrega / Resumo: As células tronco são classificadas em dois grandes grupos de acordo com sua origem e capacidade de diferenciação. Células tronco embrionárias (CTE) são originadas do zigoto, e podem ser classificadas como totipotentes, isto é, capazes de originar um indivíduo inteiro, ou pluripotentes, quando originam os três folhetos embrionários (ecto, meso e endoderme). As células tronco adultas (CTA) são as células tronco encontradas nos tecidos fetais e adultos; classificadas como uni, oligo ou multipotentes dependendo da variedade de tecidos originados a partir delas. Marcadores de células tronco, como antígenos de superfície específicos, fatores de trancrição como OCT4 e NANOG são expressos em CTE e algumas CTA, mas são rapidamente reprimidos à medida que as células se diferenciam. O presente trabalho tem como objetivo identificar marcadores de células tronco e com isso, os efeitos do hormônio endócrino Fsh e do fator parácrino GDNF na atividade proliferativa e gênica dessas populações de células e também de células de Sertoli. Foi observado que os marcadores Pou5f3 e Gfra1a são principalmente expressos em espermatogônias tronco indiferenciadas e que sua expressão reduz significativamente sob efeito do recombinante zebrafish Fsh. Por outro lado, genes como o igf3, nanos3 e nanog tiveram sua expressão aumentada significativamente. O recombinante humano GDNF não altera significativamente a expressão desses genes, porém estimula a proliferação de espermatogônias tipo Aund e Adiff e célul... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre
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Concepção e simulação de célula robotizada para operações de acabamento

Barbosa, João Pedro Marques January 2010 (has links)
Tese de mestrado integrado. Engenharia Mecânica (Opção de Automação). Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto. 2010
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Efeito genotóxico da artemisinina e do artesunato em células de mamíferos /

Aquino, Ivani. January 2011 (has links)
Orientador: Edson Luis Maistro / Banca: Eliana Aparecida Varanda / Banca: Cláudia Aparecida Rainho / Resumo: O tratamento para combater a Malária, recomendado pela Organização Mundial da Saúde (OMS), é feito com medicamentos derivados da artemisinina (tais como o artesunato), o princípio ativo extraído da Artemisia annua. Com base nesta informação, foi avaliado neste projeto o potencial genotóxico da artemisinina (ATM) e do artesunato (ART) em células HepG2 (Human hepatocellular liver carcinoma cell line), in vitro, além da investigação do potencial genotóxico e/ou mutagênico do artesunato, em células de camundongos in vivo. Nestas análises foram utilizados o ensaio cometa e o teste de micronúcleo, para a verificação da genotoxicidade e mutagenicidade; nos ensaios in vitro, também foram realizados testes de citotoxicidade e análise da expressão dos genes SOD1 e Casp3. Nos ensaios in vivo, utilizando camundongos tratados com ART, foi verificado através do Ensaio Cometa que, nas células de sangue periférico, apenas a maior dose testada (2000mg/kg) foi genotóxica, quando comparada ao grupo controle negativo. Já nas células de fígado, as doses de 5mg, 50mg e 2000mg/kg mostraram-se genotóxicas, com p<0,05. Quanto à mutagenicidade, os tratamentos com ART nas doses de 50mg, 100mg e 2000mg/kg apresentaram aumento significativo no número de células micronucleadas em relação ao grupo controle. Nos testes in vitro, os resultados do ensaio cometa com a ATM e o ART mostraram um aumento significativo (p<0,001) no número de células com danos no DNA, em relação ao controle negativo, em todos os tratamentos e para ambas as substâncias, o que indica um efeito genotóxico da ATM e do ART. Já na análise da expressão gênica, houve um aumento na expressão de Caspase 3, nas células tratadas com as duas substâncias, porém, a expressão de SOD1 foi maior em células tratadas com ATM, enquanto nas células tratadas com o ART, houve uma diminuição na expressão deste gene.... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The treatment to combat malaria, recommended by the World Health Organization (WHO), is done with drugs artemisinin derivatives (such as artesunate), the active ingredient extracted from Artemisia annua. Based on this information, and the lack of data on genotoxicity of these compounds in mammalian cells, was evaluated in this project the genotoxic potential of artemisinin (ATM) and artesunate (ART) in HepG2 cells (Human Hepatocellular liver carcinoma cell line), in vitro as well as investigating the potential genotoxic and / or mutagenic of artesunate, in mice in vivo. In these tests we used the comet assay and micronucleus test, to check the genotoxicity and mutagenicity, in vitro assays were also performed cytotoxicity tests and analysis of genes expression SOD1 and Casp3. In vivo tests using mice treated with ART, was determined using the Comet assay that in peripheral blood cells, only the highest dose tested (2000mg/kg) was genotoxic when compared to negative control group. Already in the liver cells, doses of 5mg, 50mg and 2000mg/kg were shown to be genotoxic, p <0.05. For mutagenicity, treatment with ART in doses of 50mg, 100mg and 2000mg/kg showed a significant increase in the number of micronucleated cells in the control group. In vitro tests, the results of the comet assay with the ATM and ART showed a significant increase (p <0.001) in the number of cells with DNA damage, compared to negative control in all treatments and for both substances, the indicates that a genotoxic effect of ATM and ART. The analysis of gene expression, there was an increase in the expression of Caspase 3, in cells treated with both substances, however, the expression of SOD1 was higher in cells treated with ATM, whereas in cells treated with ART, there was a decrease in expression of this gene. Although the analysis of gene expression did not reach statistical significance... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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Desenvolvimento de células de combustível microbiana

Lehnen, Débora Rosa January 2014 (has links)
Células de combustível microbianas despertaram interesse nos últimos anos devido à aplicação em tratamento de águas, biorremediação e geração de eletricidade. Um dos organismos que tem sido estudado a fundo para a aplicação em células de combustível microbianas é a Geobacter sulfurreducens. Esta espécie de Geobacter, que gera eletricidade pela oxidação de compostos, mostrou gerar uma quantidade significativa de energia devido a múltiplos mecanismos extracelulares de transferência de elétrons através de pilis ou citocromos do tipo C. Outra espécie de Geobacter que desperta grande interesse é a Geobacter metallireducens por ser capaz de oxidar compostos aromáticos e reduzir metais nocivos solúveis (até mesmo radioativos) à forma inofensiva insolúvel. Porém, o aumento na densidade de potência destes dispositivos é essencial para que sejam competitivos com outras fontes de energia renovável. Neste trabalho foi feito o estudo da melhor configuração visando a ausência de limitações catódicas para aumento da densidade de potência nas células, o que demostrou que medidas como diminuição do tamanho no ânodo, proximidade dos eletrodos e substituição do cátodo de oxigênio por ferricianeto melhoram a desempenho da célula. Também foram feitas comparações de densidade de potência em células de combustível microbianas de culturas puras de G. metalirreducens e G. sulfurreducens e uma cocultura das duas espécies. Essa comparação demonstrou que G. metallireducens além de poder ser utilizada para biorremediação apresenta uma densidade de potência elevada, podendo ser usada também como cultura pura em células de combustível microbianas, para a produção de eletricidade. Também se pode perceber uma relação direta entre a espessura do biofilme e a potência produzida nas três células. A espécie G. metallireducens demonstrou ainda ser útil na utilização de glicerol como fonte de carbono, podendo servir como espécie remediadora para este resíduo. / Microbial fuel cells aroused interest in recent years due to the application in water treatment, bioremediation and electricity generation. One of the microorganisms that has been studied thoroughly for application in microbial fuel cells is the Geobacter sulfurreducens. This specie of Geobacter, which generates electricity by oxidizing compounds, showed generate a significant amount of energy due to multiple mechanisms of extracellular electron transfer through Pilis or c type cytochromes. Another specie of Geobacter that arouses great interest is the Geobacter metallireducens by being able to oxidize aromatic compounds and soluble reducing harmful metals to insoluble harmless. However, the increased power density of these devices is essential to be competitive with other renewable energy sources. This present work studied the best configuration aiming the absence of cathodic limitations to increasing power density of the cells. Measurements have shown that reduced anode size, location of the electrodes and replacement of oxygen by ferricyanide, improves the performance of the cells. Comparisons of power density between pure cultures of G. sulfurreducens and G. metalirreducens and a coculture of the two species were also made. This comparison showed that G. metallireducens can be used for bioremediation and also in a microbial fuel cell to produce electricity due the high power density produced. Direct relationships between the thickness of the biofilm and the power produced in the three cells have been notice. The specie G. metallireducens also showed to use glycerol as a carbon source, which may be an alternative for glycerol consumption.
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Estudo da modulação do metabolismo lipídico de células dendríticas humanas na infecção por Toxoplasma gondii / Estudo da modulação do metabolismo lipídico de células dendríticas humanas na infecção por Toxoplasma gondii

Costa, Beatriz Guerreiro Basilio January 2012 (has links)
Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-10-03T11:40:07Z No. of bitstreams: 1 Beatriz Guerreiro Basilio Costa.pdf: 1448715 bytes, checksum: 9fad325ac3484b88b47961c78ef5db34 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-03T11:40:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Beatriz Guerreiro Basilio Costa.pdf: 1448715 bytes, checksum: 9fad325ac3484b88b47961c78ef5db34 (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A toxoplasmose é uma doença de alta prevalência no mundo, causada pelo Toxoplasma gondii, um parasita intracelular obrigatório. O T. gondii possui mecanismos de modulação do metabolismo do seu hospedeiro que garantem sua sobrevivência e a instalação da infecção crônica. Um dos tipos celulares mais permissivos à infecção e multiplicação do T. gondii são as células dendríticas (DC), paradoxalmente as células apresentadoras de antígeno mais eficazes, com capacidade de deflagrar uma resposta imune protetora eficaz e duradoura. Neste trabalho, estudamos a modulação do metabolismo lipídico de células dendríticas humanas na infecção por T. gondii. Mostramos que o parasita induziu a maturação da célula e um padrão misto de resposta inflamatória, com altas concentrações das citocinas pró-inflamatórias IL-6 e TNF- e da citocina antiinflamatória IL-10. Após 3 horas de infecção, verificamos que T. gondii induziu a expressão gênica de ciclooxigenase-2 (COX-2). De forma importante, observamos por qRT-PCR que a infecção com T. gondii regulou positivamente a expressão do gene do receptor nuclear (RN) regulado por lipídios PPAR, mas não do LXR. Já a expressão do mRNA das moléculas envolvidas no transporte e estoque de lipídios, FABP4 e ADRP, alvos do PPAR, e ABCA1, alvo do LXR, foram aumentadas pela infecção de 3 horas com o parasita. Utilizando duas técnicas distintas (BODIPY e coloração com ósmio) avaliamos a biogênese de corpúsculos lipídicos (CL) após infecção com o T. gondii e constatamos que essas organelas não foram induzidas após 3 horas de infecção. Entretanto, após 24 horas, 90% das DC apresentaram CL e o número de CL por DC foi estatisticamente maior. Observamos a presença de CL em DC não infectadas pelo parasita, mostrando que a indução da biogênese de CL é um fenômeno parácrino, não dependente da infecção celular. Avaliamos também a importância do PPAR na infecção por T. gondii, através do tratamento das DC com seu agonista ou antagonista. Após 3 horas, apenas os genes ADRP, FABP4 e ABCA1, alvos dos receptores nucleares, foram modulados. Por último, investigamos a influência do T. gondii na expressão das moléculas apresentadoras de antígenos lipídicos. Por citometria de fluxo, constatamos que não há alteração na expressão de membrana dessas moléculas. Contudo, por qRT-PCR, observamos que o T. gondii regula negativamente a expressão dos genes cd1d e cd1e. Em conclusão, mostramos que T. gondii foi capaz de regular positivamente o metabolismo lipídico das DC e negativamente as moléculas apresentadoras de lipídios CD1, sem a participação essencial de PPAR nesses processos. / Toxoplasmosis is a worldwide high prevalence disease caused by Toxoplasma gondii, an obligate intracellular parasite. T. gondii developed mechanisms for modulating the metabolism of its host, ensuring their survival and the chronic infection. Dendritic cells (DC) are one of the most permissive cell types to T. gondii infection and replication and are, paradoxically, considered the most effective antigen presenting cells, triggering an effective and long-lasting protective immune response. In this work, we studied the modulation of lipid metabolism in human dendritic cells infected with T. gondii. We showed that the parasite induced cell maturation, and a mixed pattern of inflammatory response with high levels of proinflammatory cytokines IL-6 and TNF-, and anti-inflammatory cytokine IL-10. After 3h of infection, we found that T. gondii induced increased gene expression of cyclooxygenase-2 (COX-2). Importantly, we observed by qRT-PCR that T. gondii infection upregulated the nuclear receptor (RN) PPAR gene expression, while the levels of LXR were unchanged. Furthermore, the mRNA expression of molecules involved in the transport and storage of lipids, FABP4 and ADRP, PPARtargets, and ABCA1, LXR target, were also increased at 3h of infection with the parasite. In parallel, using two different techniques, (BODIPY and osmium staining), we evaluated the biogenesis of lipid droplets (LD) after infection with T. gondii, and observed that these organelles were not induced after 3 hours of infection. However, after 24 hours, 90% of DC showed LD and the number of LD per DC was statistically enhanced. We observed the presence of LD in DC not infected with the parasite, showing that induction of biogenesis of LD is a paracrine phenomenon not dependent on cell infection. We also evaluated the role of PPAR in T. gondii infection by treating DC with its agonist or antagonist. After 3 hours of infection only the nuclear receptor target genes ADRP, FABP4 and ABCA1 were modulated. Finally, we investigated the influence of T. gondii in the expression of lipid antigens presenting molecules. By flow cytometry, we observed no variation in expression of these molecules in cell membrane. However, by qRT-PCR, we found that the T. gondii downregulated gene expression of cd1d and cd1e. In conclusion, we showed that T. gondii was able to upregulate the DC lipid metabolism, and downregulate CD1 lipid presentation. Apparently, the RN PPAR has no essential role in this process.

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