A terapia celular para doenças cardiovasculares representa uma nova e promissora opção terapêutica, principalmente para a cardiopatia isquêmica. A injeção de células mononucleares de medula óssea (CMMO) pela via intracoronariana (ICO) é a mais estudada em ensaios clínicos. Embora já se tenha documentado efeitos benéficos com essa terapia, dados relativos aos mecanismos de interação entre as células transplantadas e o ambiente microvascular cardíaco são escassos. A avaliação das CMMO na microcirculação miocárdica tem o potencial de esclarecer seus mecanismos de ação, abrindo novas possibilidades terapêuticas. O objetivo do estudo foi descrever e avaliar uma inovadora técnica de injeção ICO direta e visualização in vivo das CMMO na microcirculação miocárdica de pequenos roedores, após um período de isquemia miocárdica global (IMG) seguida de reperfusão, na presença e na ausência da aterosclerose. Materiais e Métodos: A técnica de transplante cardíaco heterotópico cervical (TCHC) em murinos foi modificada com a inserção e fixação de um microcateter conectado a uma seringa, no tronco braquiocefálico do animal doador. IMG foi induzida ocluindo-se a artéria nutridora do enxerto com um microclamp vascular, por 1 hora. As CMMO foram isoladas e marcadas antes da injeção ICO. Microscopia intravital de fluorescência (MIF) foi usada para análise da microcirculação coronariana do ventrículo direito (VD), incluindo arteríolas, capilares e vênulas pós-capilares. Parâmetros de perfusão e permeabilidade microvasculares e as interações entre as CMMO e células endoteliais foram estudados. O impacto da aterosclerose na recuperação, fenótipo e função celular também foi avaliado. Resultado: A MIF permitiu análise detalhada da microcirculação coronariana e da cinética das CMMO injetadas pela via ICO. A IMG afetou a microcirculação, reduzindo a densidade capilar funcional (DCF). Tal redução foi maior na presença de aterosclerose. A principal área de retenção celular foi a rede capilar e não as arteríolas ou vênulas. Nem a presença de isquemia, nem de aterosclerose alterou o número de células retidas. O número de CMMO retidas não aumentou na presença de isquemia, nem de aterosclerose e não se correlacionou com a perfusão microvascular ou inflamação prévios à injeção. Houve forte correlação entre o número de CMMO retidas e a expressão de CXCR4. A injeção de CMMO não afetou negativamente a DCF e a microcirculação. Aterosclerose não alterou o número de CMMO obtidas após isolamento por gradiente de Ficoll. A expressão de CD54 estava reduzida em camundongos ApoE-/-. CMMO de doadores ateroscleróticos geraram um número aumentado de unidades formadoras de colônias de granulócitos e macrófagos. A análise ecocardiográfica da função do VD do enxerto cardíaco cervical foi exeqüível. Conclusões: A injeção ICO direta e a visualização detalhada da cinética das CMMO na microcirculação coronária in vivo por MIF foi possível. A IMG provocou redução da densidade capilar funcional. A retenção das CMMO após injeção ICO se deu nos capilares e provavelmente depende da expressão de CXCR4. / Cell therapy for cardiovascular disease represents a promising new therapeutic option, especially for ischemic heart disease. The intracoronary (ICo) injection of bone marrow mononuclear cells (BMMC) is the most commonly studied rote in clinical trials. Although it has been documented beneficial effects with this therapy, data pertaining the mechanisms of interaction between transplanted cells and cardiac microvascular environment are lacking. Assessment of BMMC in myocardial microcirculation has the potential to clarify its mechanisms of action, opening new therapeutic possibilities. The objective of the study was to describe and to evaluate an innovative technique of direct ICo injection and in vivo visualization of BMMC in myocardial small rodents, after a period of global cardiac ischemia (GMI) and reperfusion, in the presence and absence of atherosclerosis. Materials and Methods: The syngeneic murine cervical heterotopic heart transplantation (CHHT) technique was modified by inserting and fixing a catheter connected to a syringe into the donor animal brachiocephalic trunk. GMI was induced occluding the nutritive artery of the graft for 1 hour. Bone marrow mononuclear cells were isolated and labeled prior to ICo injection. Intravital fluorescence microscopy (IFM) was used for analysis of the coronary microcirculation of the right ventricle (RV), including arterioles, capillaries and venules. Parameters of microvascular perfusion, microvascular permeability and the interactions between the BMMC and endothelial cells were studied. The impact of atherosclerosis on the recovery, phenotype and cellular function was also evaluated. Results: The IFM has allowed detailed analysis of both the coronary microcirculation, as the kinetics of BMMC. The GMI affected microcirculation, reducing the functional capillary density (FCD). This reduction was higher in the presence of atherosclerosis. The main area of cell retention was the capillary network, not the arterioles or venules. The number of BMMC retained was not increased in the presence of ischemia, neither of atherosclerosis and didnt correlate with microvascular perfusion or inflammation before injection. Cell retention was strongly correlated with BMMC expression of CXCR4. BMMC injection didnt affect negatively the FCD and microcirculation. Atherosclerosis didnt change the number of BMMC recovered after Ficoll gradient isolation. BMMC expression of CD54 was reduced in ApoE-/- mice. BMMC of atherosclerotic donors have generated a greater number of colony forming units of granulocytes and macrophages. The RV function analyses of the cardiac graft could be performed by echocardiography. Conclusions: The direct ICo injection and detailed visualization of BMMC kinetics in the coronary microcirculation in vivo was possible. The IRCG caused reduction of functional capillary density. Retention BMMC after ICo injection occurred in the capillaries and probably depends on the expression of CXCR4.

As células-tronco adultas possuem capacidade de se transformar em certos tipos de tecidos. Surge desta forma, uma nova modalidade de tratamento para doenças cardíacas, assim, uma avaliação na distribuição e quantificação do número de células por diferentes vias de infusão tornam-se importantes, pois o microambiente e interação célula/célula interferem no processo de transdiferenciação e/ou fusão. Foram utilizados nove cães, com peso entre 25 e 30kg e hígidos, no qual foi realizada punção, separação, marcação e infusão de células mononucleares da medula óssea pelas vias intracoronariana, transendocárdica e venosa retrógrada. Pôde-se observar a presença de células por todo tecido cardíaco em todas as vias, contudo o padrão de distribuição das mesmas difere, no qual há um predomínio de células em tecido conjuntivo, principalmente em epicárdio nas vias transendocárdica e venosa retrógrada e um padrão intersticial muscular intracoronariana. Há diferenças significativas na quantidade de células nas regiões apical, basal, medial e apical quando relacionada à via de infusão (P<0,01). / The adult stem cells have a capacity to transform in different kinds of tissue. It is emerges like a new treatment modality of cardiac diseases, so, an evaluation in cell distribution and quantification by different routes of infusion in heart are necessary, because the microenvironment and the interaction cell/cell age in the transdifferentiation and fusion process. It was used 09 healthy mongrel dogs, with 25 -30kg of weight, which was performed a punction of iliacal crest, bone marrow mononuclear cells separation by Ficoll density, stained with Hoechst and infusion by intracoronary, transendocardial and retrograde routes. The marked cells was observed in all cardiac tissue, however, the pattern of distribution of the same ones differs, however in the transendocardial and retrograde route the cells could be founded mainly into the connective tissue - epicardium and sub-epicardic connective tissue and in the intracoronary route, the cells was observed mainly in the muscular interstice. It was observed a significant number of cells in the atrial, basal, medium and apical cardiac region when related with the route of infusion.

Doenças pulmonares intersticiais fibrosantes são doenças que afetam homens, mulheres e crianças, tem prognóstico ruim e os pacientes possuem sobrevida estimada entre 3 e 5 anos após a confirmação diagnóstica, sobretudo os portadores de Fibrose pulmonar idiopática. Estudos recentes demonstram a capacidade das células-tronco em se diferenciar em diferentes linhagens celulares e tecidos, como já comprovado em órgãos como coração, fígado, trato gastrointestinal, sistema nervoso e pulmão. Os objetivos deste trabalho foram os de estabelecer a espécie suína como modelo experimental e utilizar a terapia celular experimentalmente como possibilidade de estudo para tratamento das doenças pulmonares intersticiais fibrosantes. Para estabelecer o modelo experimental e induzir a doença nos dois grupos de animais estudados (grupos tratado e controle) foi utilizado sulfato de bleomicina pela via intratraqueal em procedimento único. Após a instalação da doença, os animais dos grupos tratado e controle foram submetidos a tomografia computadorizada de alta resolução (TCAR); um grupo tratado com terapia celular e após noventa dias os dois grupos reavaliados com TCAR antes da eutanásia, totalizando para os dois grupos, cento e oitenta dias de doença instalada. As análises tomográficas mostraram que o tempo para que a doença intersticial seja estabelecida ocorre até três meses após a infusão de bleomicina. As provas histológicas corroboram a viabilidade do modelo testado e as análises imunohistoquímicas sugerem a migração das células mononucleares de medula óssea para os pulmões, bem como a presença de populações celulares que indicam provável reestruturação do parênquima pulmonar. / Fibrotic Interstitial pulmonary illnesses affect men, women and children, and presents bad prognostic, 3-5 years depending on the diagnostic confirmation, mainly in idiopathic pulmonary fibrosis. Recent studies demonstrate the capacity of the stem cells in differentiating into different cellular lineages and different tissues, as in heart, liver, gastrointestinal, nervous system and lung. The objectives of this study were to investigate the possibility to consider the swine as experimental model of fibrotic pulmonary disease and experimental stem cell therapy. Bleomycin sulphate was injected into the trachea to induce the pulmonary disease in control and treatment groups. High resolution computed scan (TCAR) was carried out in both groups after the confirmation of the disease. The tomographic analyses showed that the interstitial illness was established after three months of the bleomicine infusion. Histologic investigation revealed the viability of the tested model and the imunohistochemical analyses suggest the migration of the mononuclear cells to the lungs, as well as the presence of new cellular populations that would indicate probable reorganization of the pulmonary parenchyma.

As doenças cardiovasculares continuam sendo a primeira causa de morte no Brasil (32%) representando a terceira maior causa de internação hospitalar. Apesar dos avanços terapêuticos das últimas décadas, estudos epidemiológicos consideram o infarto agudo do miocárdio (AMI) uma das maiores causas de morbidade e mortalidade, sendo a maioria, ligados a realização de terapias não adequadas, dos quais 50% das mortes ocorrem nas primeiras 2 horas do ocorrido e 14% morrem antes de receber atendimento médico. O objetivo deste estudo foi de avaliar a técnica de infusão transpericárdica de células mononucleares de medula óssea (CMMO) em suínos. Três suínos fêmeas, pesando 25Kg foram induzidas ao AMI, com auxilio de cateter balão colocado no 1° ramo diagonal da artéria coronária interventricular por 45 minutos, seguido por infusão de 1x108 CMMO marcadas com Hoechst® pela via transpericárdica. O grupo controle foi composto por 3 animais, os quais receberam infusão de 1x108 CMMO marcadas com Hoechst® através da mesma técnica. Os resultados revelaram distribuição homogênea das CMMO no miocárdio, concentrando-se especialmente na área infartada, enquanto que o grupo controle apresentou distribuição homogênea ao longo do miocárdio. Nós concluímos que a técnica transpericárdica é viável para infusão de CMMO em processos de isquemia cardíaca. / Cardiovascular illnesses continue to be the first cause of death in Brazil (32%), representing the third major reason of hospital internment. Although the therapeutics advances in the last decades, epidemiologic studies considered the acute myocardium infarct (AMI) to be one of the most causes of morbidity and mortality (30%), most of, related to the institution of non-adequate therapy, thereby 50% of deaths in the early two hours of the event and 14% dying before any medical assistance. Currently therapies include stent angioplasty, Thrombolytic medication and aortic-coronary venous grafting; while in experimental area the cellular therapy has been largely investigated being the cells infusion technique investigation the most enthusiastic issue. This study aimed to evaluate the transepicardic infusion technique of bone marrow mononuclear cells (BMMC) in swine. Three female swine, averaging 25 kg, were induced to AMI, with the aid of a balloon catheter displaced on the first interventricular diagonal branch of the coronary artery for 45 minutes, following to the infusion of 1x108 BMMC stained with Hoescht® by the transepicardic technique. Sham operation was carried out in three animals (Control group), which received infusion of 1x108 BMMC stained with Hoescht® by the same technique. The results revealed an inhomogeneous distribution of the BMMC in the myocardium, being more concentrated in the infarcted area, while the control group presented a homogeneous distribution along the myocardium. We concluded the transpericardic technique would be acceptable to the infusion of BMMC in cardiac ischemic processes.

O Transtorno Depressivo Maior (TDM) é uma condição psiquiátrica que afeta 4,4% da população mundial, exibindo um substancial sofrimento pessoal, incapacidade e custos sociais, e estima-se que ele será a principal causa de incapacidade no mundo em 2030. O surgimento de novas ferramentas e modelos de pesquisa envolvendo o TDM irá auxiliar no entendimento desta doença. Deste modo, o objetivo deste trabalho foi gerar uma coleção de células-tronco pluripotentes induzidas humanas (hiPSCs) de um grupo de indivíduos com TDM. Foram coletadas amostras de células mononucleares (MNCs) de 66 indivíduos afetados, e geradas 6 linhagens de hiPSCs. Através de diversos testes de caracterização, a pluripotência destas células foi confirmada. Além disto, também foi padronizada a diferenciação destas hiPSCs em neurônios serotonérgicos. Neurônios derivados dessas hiPSCs poderão constituir material de estudo para outros grupos de pesquisa interessados no estudo da TDM, e ser utilizados em testes futuros para prever resposta a medicamentos. / Major Depressive Disorder (MDD) is a psychiatric condition that affects 4.4% of the world\'s population, exhibiting substantial personal suffering, disability and social costs, and is estimated to be the leading cause of disability in the world by 2030. Emergence of new tools and research models involving TDM will aid in the understanding of this disease. Thus, the objective of this work was to generate a collection of human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) from a group of individuals with MDD. Samples of mononuclear cells (MNCs) of 66 affected individuals were collected, and 6 lines of hiPSCs were generated. Through several characterization tests, the pluripotency of these cells was confirmed. In addition, the differentiation of these hiPSCs into serotonergic neurons was also standardized. Neurons derived from these hiPSCs could constitute study material for other research groups interested in the study of MDD, and be used in future tests to predict drug response.

O enfisema pulmonar define-se como a destruição das paredes alveolares e consequente dispneia progressiva. Este trabalho objetivou a adequação de um modelo de transplante celular in vivo de BMMC em camundongos com enfisema pulmonar. O enfisema foi induzido por instilação nasal de elastase (4 UI por animal). O diâmetro alveolar médio para os grupos não tratados e tratados com elastase apresentou diferença estatisticamente significativa, e mudanças no padrão de expressão de metaloproteinases envolvidas no processo inflamatório foram detectadas, indicando que a instilação de uma dose de elastase promove lesão semelhante ao enfisema pulmonar. Infundiu-se 0,4ml de BMMC (7x106 céls./ml) nestes animais. No grupo tratado com células, detectou-se mudanças morfométricas e no padrão de expressão de metaloproteinases, indicando melhora na evolução da lesão pulmonar 21 dias após a infusão. Foram ainda avaliadas duas e três doses do pool de BMMC, porém os resultados das análises mostraram que não há diferenças entre estre grupos e os grupos controle. / Pulmonary emphysema is defined as the destruction of the alveolar walls and consequent progressive dyspnea. This study aimed the adequacy of a model of BMMC transplantation in vivo in mice with pulmonary emphysema. Emphysema was induced by nasal instillation of elastase (4 IU per animal). The mean linear intercept for the groups untreated and treated with elastase showed a statistically significant difference, and changes in the pattern of expression of metalloproteinases involved in inflammation were detected, indicating that the instillation of a dose of elastase promotes lung damage similar to emphysema. 0.4 ml of BMMC (7x106 céls. / ml) was infused in these animals. In the group treated with cells there were detected and morphometric changes in the pattern of expression of metalloproteinases, indicating an improvement in the evolution of lung injury 21 days after infusion. Were also evaluated two and three doses of the pool BMMC, but the results of the analysis showed no differences between experimental and the control groups.

A Imunodeficiência de Variável Comum (ICV) é caracterizada por baixos níveis de imunoglobulinas com susceptibilidade a. Analisamos a distribuição de linfócitos, apoptose espontânea e a expressão gênica de receptores de morte, ligantes, adaptadores, moléculas reguladoras, inibidoras e anti-apotóticas em células CD4+ e CD8+ de 19 pacientes ICV e 19 controles. Pacientes com ICV apresentam diminuição na frequência de linfócitos TCD4+ e CD4+CD45RA+ e menor relação CD4/CD8 que indivíduos saudáveis. O grupo de pacientes mostrou maior frequência de apoptose espontânea em linfócitos totais e CD4+. Células CD4+ dos indivíduos afetados apresentaram menor expressão gênica de TRAIL-R, BCL-2, FLIPL e FADD; células CD8+ apresentaram diminuição da expressão gênica de TRAIL, FADD, BCL-2, BCL -xL e um aumento de FLIPs. Os resultados sugerem um desequilíbrio nos mecanismos que controlam a apoptose de linfócitos nestes pacientes, o que pode ajudar a elucidar as alterações observadas no compartimento de células T dos pacientes com ICV. / Common Variable Immunodeficiency (CVID) is is characterized by low immunoglobulins levels with susceptibility to infections. We have analyzed T cell distribution and spontaneous apoptosis in peripheral blood of CVID, as well as gene expression of several molecules involved in apoptosis, including death receptors, ligands, adapters, regulatory and anti-apototic molecules in CD4+ and CD8+ cells of 19 CVID patients and 19 healthy subjects. CVID subjects present decreased frequency of TCD4+ and CD4+ CD45RA+ cells and lower CD4/CD8 ratio than healthy controls. CVID group also presented higher frequency of spontaneous apoptosis in lymphocytes and CD4+ cells. CD4+ showed lower expression of TRAIL-R, BCL-2, FLIPL and FADD; CD8+ cells presented lower expression of TRAIL, FADD, BCL-2, BCL-xL and a augment of FLIP. Results suggest an imbalance in mechanisms controlling cell death of those patients lymphocytes, which might help to elucidate the changes observed in T cell compartment of CVID patients.

O carcinoma epidermoide é a neoplasia maligna mais comum em boca e está entre as principais causas de morbidade e mortalidade em todo o mundo, devido a seu comportamento agressivo, evoluindo à metástase loco regional e a distância. O microambiente tumoral contém numerosos tipos celulares e muita atenção tem sido dada na literatura científica sobre a participação das células inflamatórias no desenvolvimento e progressão do câncer, pois as células neoplásicas são capazes de subverter a resposta imune. Os linfócitos T são o componente central na imunidade antitumoral, através da produção de citocinas por células e morte celular. Pouco se sabe sobre como substratos derivados de células neoplásicas influenciam as células no microambiente tumoral. Assim, o presente estudo propôs analisar a influência do meio condicionado derivado de células de carcinoma epidermoide de língua (SCC4 e MC SCC9) sobre linfoblastos (CEM) e células mononucleares do sangue periférico (PBMC-A e PBMC-B) para compreender melhor seu papel na imunidade anti-tumoral, imunoedição e evasão imune. Após estimulação com meio condicionado, os linfoblastos e as PBMCs foram submetidas ao ensaio de viabilidade celular, de citometria de fluxo e RT-qPCR para analisar a expressão de genes de apoptose e citocinas. O meio condicionado também foi coletado e avaliado por ELISA para verificar as citocinas secretadas pelas SCCs, bem como pela CEM e PBMC. Ambos meios condicionados foram capazes de reduzir a viabilidade da CEM e das PBMCs. A expressão de BCL2 e BAK não foi afetada na CEM, enquanto que MC SCC4 aumentou a expressão de BAK na PBMC-B. Os MCs das SCCs apresentaram expressão reduzida de IL-1?, IL-10 e INF-?. A IL-6 e IL-8 são expressas em níveis um pouco maiores pela SCC4 e superexpressas pela SCC9. A linhagem CEM não apresentou expressão de RNAm de IL-6, enquanto que a PBMC-B apresentou redução da expressão de IL-6 quando cultivada com ambos meios, sendo significativa com o meio MC SCC9. A expressão de RNAm de IL-8 reduziu na CEM e aumentou na PBMC-B com ambos os meios. A diferenciação para células CD4+ aumentou com ambos os MCs nas duas linhagens, reduzindo células CD34+. O MC SCC4 não alterou o número de linfócitos T CD4+/FOXP3+ da CEM e PBMC-B. O MC SCC9 induziu aumento da população CD4+/CD8+ na PBMC-B e amos os MCs induziram aumento da população CD8+/FOXP3+ da PBMC-B. Os resultados sugerem que os produtos derivados de carcinoma epidermoide de língua podem variar nas linhagens celulares, reduzindo a viabilidade, alterando a expressão de citocinas e aumentando as células CD4+ nas duas linhagens e aumentando o perfil CD8+/FOXP3+ e CD4+/CD8+ nas PBMCs. / Squamous cell carcinoma is the most common malignant neoplasm of the oral cavity, featuring as one of the main causes of morbidity and mortality due to its aggressive behavior, locoregional and distant metastases. Attention has been given to the tumor microenvironment and the role of the inflammatory cells may develop in the progression of cancer, because neoplastic cells are capable of subverting the immune response. T cells play is a central actor in the antitumor immunity because of their cytokine production by living and dying cells. Little is known about how the products derived from neoplastic cells interact with the cells in the tumor microenvironment. Therefore, the present study aimed to analyze the influence of a conditioned medium (CM) derived from tongue squamous carcinoma cells (SCC4 and SCC9) on lymphoblasts (CEM) and peripheral blood mononuclear cells (PBMC-A e PBMC-B), in order to better understand its role in the antitumor immunity, immunoediting and immune evasion. Lymphoblast and PBMCs were stimulated by the conditioned medium and then submitted to a cell viability assay, flow cytometry and RT-qPCR in order to analyze the expression of apoptotic and cytokine-related genes. To verify which cytokines were secreted by SCCs as well as by CEM and PBMCs, the conditioned medium was also collected and evaluated by ELISA. Both types of conditioned medium reduced CEM and PBMC viability. For CEM, BCL2 and BAK expression remained unaffected, wherea s for PBMC-B there was an increase in the expression of BAK using the CM-SCC4. CMs showed reduced expression of IL-1?, IL-10 and INF-?. IL-6 and IL-8 are expressed a bit higher levels by SCC4 and high expressed by SCC9.CEM showed no IL-6 mRNA expression. PBMC-B reduced the expression of IL-6 when cultivated with both types of CM, with a significant reduction with the CM- SCC9. For both types of medium, IL-8 mRNA was reduced in CEM and increased in PBMC-B. The differentiation towards CD4+ cells was increased with both MCs in the two cell lines. CM-SCC4 did not altered the number of CD4+/FOXP3 cells of CEM and PBMC-B. CM-SCC9 increased the population of CD4+/CD8+ cells of PBMC-B and both types of CM increased the population of CD8+/FOXP3+ of PBMC-B. Collectively, our results suggest that the products derived from tongue squamous cell carcinoma may vary between the cell lines and reduce the viability, change cytokine expression and increase CD4+ cells and also increase the population of CD8+/FOXP3+ and CD4+/CD8+ in PBMCs.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:53:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LEANDRO DOBRACHINSKI.pdf: 1309361 bytes, checksum: 9ed7a6a6c3ff40cb207d958b59532e76 (MD5) Previous issue date: 2012-03-13 / Venomous snakes have a real cocktail of pharmacological active substances and drugs that act powerfully against microorganisms. The objective of the present study was to evaluate in vitro the potential cytotoxic activity of Caudisona durissa terrificus venom in mononuclear cells (MNC) of peripheral human blood. After obtaining MNC for cell culture, the cytotoxic effect of different concentrations of crude venom was evaluated. The peripheral blood MNC were separated using a density gradient and were incubated (2x105 cells/well) with different venom concentrations (50, 5, 0,5, 0,05, 0,005 e 0,0005 µg/mL) for different times (1, 3, 6, 24, 48 e 72h) and in different substrates (PHA, IL lly examining the plates after 24, 48 and 72 hours. Was also observed with different concentrations of crude venom induced ADN fragmentation in MNC. We observed that the toxicity of crude C. d. terrificus venom varies proportionally with concentration, i.e., the higher the concentration, the higher its cytotoxicity. For this reason the 0.0005µg/mL concentration of crude Caudisona durissa terrificus venom presented the lowest cytotoxic activity in peripheral human blood MNC and that the fragmentation of cellular ADN was not seen in this study. Thus, it is suggested to employ two or more different assays to confirm the induction of cell death is occurring through apoptosis. / Serpentes peçonhentas produzem uma variedade de toxinas altamente citotóxicas. Possuem um verdadeiro coquetel de substâncias farmacológicas, tornando-se uma , que atualmente vem sendo utilizados por inúmeros pesquisadores, para o desenvolvimento de novos fármacos com potente ação contra microorganismos. O presente estudo visou avaliar a potencial atividade citotóxica da peçonha de Caudisona durissa terrificus em células mononucleares (CMN) do sangue periférico humano, in vitro. Após a padronização da obtenção de CMN para cultivo celular, foi realizada a avaliação do efeito citotóxico de diferentes concentrações do veneno bruto. As CMN do sangue periférico foram separadas por meio gradiente de densidade e incubadas (2x105 células/poço) com diferentes concentrações do veneno (50, 5, 0,5, 0,05, 0,005 e 0,0005 µg/mL), em diferentes tempos (1, 3, 6, 24, 48 e 72h) e substratos (PHA, IL 2). A avaliação da atividade citotóxica do veneno foi realizada, por meio da leitura das células em câmara de neubauer, após 24, 48 e 72 horas. Em conclusão, foi possível identificar que a citotoxicidade do veneno bruto de C. d. terrificus varia de forma proporcional à concentração, ou seja, quanto maior a concentração do veneno, maior a sua citotoxicidade. Com isso, a concentração de 0,0005µg/mL do veneno bruto de Caudisona durissa terrificus, neste experimento, apresentou uma baixa atividade citotóxica em CMN de sangue periférico humano e que a fragmentação do DNA celular não foi visualizada neste estudo. Desta forma, sugere-se empregar dois ou mais ensaios distintos para confirmar se a indução da morte celular está ocorrendo por meio de apoptose.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:53:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MARILISSA MACIEL MAINERI.pdf: 1118474 bytes, checksum: eb4934dbea4478c904915745c3e64da5 (MD5) Previous issue date: 2012-03-22 / Venomous snakes have a real cocktail of pharmacological active substances and drugs that act powerfully against microorganisms. The objective of the present study was to evaluate in vitro the potential cytotoxic activity of Caudisona durissa collilineata venom in mononuclear cells (MNC) of peripheral human blood. After obtaining MNC for cell culture, the cytotoxic effect of different concentrations of crude venom was evaluated. The peripheral blood MNC were separated using a density gradient and were incubated (2x105 cells/well) with different venom concentrations (50, 5, 0,5, 0,05, 0,005 e 0,0005 µg/mL) for different times (1, 3, 6, 24, 48 e 72h) and in different substrates (PHA, IL visually examining the plates after 24, 48 and 72 hours. Was also observed with different concentrations of crude venom induced ADN fragmentation in MNC. We observed that the toxicity of crude C. d. collilineata venom varies proportionally with concentration, i.e., the higher the concentration, the higher its cytotoxicity. For this reason the 0.0005µg/mL concentration of crude Caudisona durissa collilineata venom presented the lowest cytotoxic activity in peripheral human blood MNC and that the fragmentation of cellular ADN was not seen in this study. Thus, it is suggested to employ two or more different assays to confirm the induction of cell death is occurring through apoptosis. / Serpentes peçonhentas produzem uma variedade de toxinas altamente citotóxicas. Possuem um verdadeiro coquetel de substâncias farmacológicas, tornando-se uma , que atualmente vem sendo utilizados por inúmeros pesquisadores, para o desenvolvimento de novos fármacos com potente ação contra microorganismos. O presente estudo visou avaliar a potencial atividade citotóxica da peçonha de Caudisona durissa collilineata em células mononucleares (CMN) do sangue periférico humano, in vitro. Após a padronização da obtenção de CMN para cultivo celular, foi realizada a avaliação do efeito citotóxico de diferentes concentrações do veneno bruto. As CMN do sangue periférico foram separadas por meio gradiente de densidade e incubadas (2x105 células/poço) com diferentes concentrações do veneno (50, 5, 0,5, 0,05, 0,005 e 0,0005 µg/mL), em diferentes tempos (1, 3, 6, 24, 48 e 72h) e substratos (PHA, IL 2). A avaliação da atividade citotóxica do veneno foi realizada, por meio da leitura das células em câmara de neubauer, após 24, 48 e 72 horas. Em conclusão, foi possível identificar que a citotoxicidade do veneno bruto de C. d. collilineata varia de forma proporcional à concentração, ou seja, quanto maior a concentração do veneno, maior a sua citotoxicidade. Com isso, a concentração de 0,0005µg/mL do veneno bruto de Caudisona durissa collilineata, neste experimento, apresentou uma baixa atividade citotóxica em CMN de sangue periférico humano e que a fragmentação do DNA celular não foi visualizada neste estudo. Desta forma, sugere-se empregar dois ou mais ensaios distintos para confirmar se a indução da morte celular está ocorrendo por meio de apoptose.