Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-04-09Bitstream added on 2014-06-13T19:08:48Z : No. of bitstreams: 1 andreota_rc_me_rcla.pdf: 1095020 bytes, checksum: 849f970f9b61ff625a1f282da278410b (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A família Orchidaceae compreende cerca de 25.000 espécies distribuídas em cinco subfamílias. Os representantes terrícolas constituem cerca de 20% das orquídeas e encontramse incluídos principalmente na subfamília Orchidoideae, dentro da qual se encontra a tribo Cranichideae. No Brasil a tribo Cranichideae possui representantes das subtribos Cranichidinae, Goodyerinae e Spiranthinae. No presente estudo foram analisados os órgãos vegetativos das seguintes espécies: Cranichis candida e Prescottia oligantha (Cranichidinae), Microchilus arietinus e Zeuxine strateumatica (Goodyerinae), Cyclopogon apricus, C. congestus, C. variegatus, Mesadenella cuspidata, Pteroglossa roseoalba e Sauroglossum nitidum (Spiranthinae), visando apontar caracteres estruturais relacionados ao hábito terrestre e potencialmente úteis na delimitação taxonômica do grupo. As raízes estudadas constituem, proporcionalmente, o órgão mais desenvolvido da planta e apresentam características que podem auxiliar na absorção/retenção de água, como a ocorrência de um sistema velame/exoderme, bem como a presença de tilossomos nas Cranichidinae e Spiranthinae. As folhas são portadoras de mesofilos estreitos e homogêneos, recobertas por epiderme unisseriada e revestidas por cutículas finas. Os feixes condutores da nervura central são envolvidos por células parenquimáticas e as células do xilema se dispõem ao pares ou em forma de V invertido, como nas demais orquídeas da tribo Cranichideae / Orchidaceae comprises ca. 25.000 species currently divided in five subfamilies. Terrestrial species constitute almost 20% of the family and are included mainly in the subfamily Orchidoideae, to which belong the tribe Cranichideae. In Brazil Cranichideae is represented by species of subtribes Cranichidinae, Goodyerinae and Spiranthinae. In this study, vegetative organs of the following species were analised: Cranichis candida and Prescottia oligantha (Cranichidinae), Microchilus arietinus and Zeuxine strateumatica (Goodyerinae), Cyclopogon apricus, C. congestus, C. variegatus, Mesadenella cuspidata, Pteroglossa roseoalba and Sauroglossum nitidum (Spiranthinae). The aims were to find structural features related to the terrestrial habit and potentially useful in the taxonomic delimitation of the group. The roots are, proportionally, the most developed organ of the plant, showing characteristics that might help in absorbing or retaining water, such as: velamen/exoderm system, in all species, and tilossomes, in the Cranichidinae and Spiranthinae representatives. Leaves possess an one-layered epidermis covered by a thin cuticle and a narrow and homogeneous mesophyll. Vascular bundles of the midrib are enclosed by parenchymatic cells and the xylem conducting cells are organised in pairs or “inverted V”, as in other Cranichideae

Orientador: Maria das Graças Sajo / Coorientador: Fábio de Barros / Banca: Sandra Maria Carmello Guerreiro / Banca: Adelita Aparecida Sartori Paoli / Resumo: A família Orchidaceae compreende cerca de 25.000 espécies distribuídas em cinco subfamílias. Os representantes terrícolas constituem cerca de 20% das orquídeas e encontramse incluídos principalmente na subfamília Orchidoideae, dentro da qual se encontra a tribo Cranichideae. No Brasil a tribo Cranichideae possui representantes das subtribos Cranichidinae, Goodyerinae e Spiranthinae. No presente estudo foram analisados os órgãos vegetativos das seguintes espécies: Cranichis candida e Prescottia oligantha (Cranichidinae), Microchilus arietinus e Zeuxine strateumatica (Goodyerinae), Cyclopogon apricus, C. congestus, C. variegatus, Mesadenella cuspidata, Pteroglossa roseoalba e Sauroglossum nitidum (Spiranthinae), visando apontar caracteres estruturais relacionados ao hábito terrestre e potencialmente úteis na delimitação taxonômica do grupo. As raízes estudadas constituem, proporcionalmente, o órgão mais desenvolvido da planta e apresentam características que podem auxiliar na absorção/retenção de água, como a ocorrência de um sistema velame/exoderme, bem como a presença de tilossomos nas Cranichidinae e Spiranthinae. As folhas são portadoras de mesofilos estreitos e homogêneos, recobertas por epiderme unisseriada e revestidas por cutículas finas. Os feixes condutores da nervura central são envolvidos por células parenquimáticas e as células do xilema se dispõem ao pares ou em forma de V invertido, como nas demais orquídeas da tribo Cranichideae / Abstract: Orchidaceae comprises ca. 25.000 species currently divided in five subfamilies. Terrestrial species constitute almost 20% of the family and are included mainly in the subfamily Orchidoideae, to which belong the tribe Cranichideae. In Brazil Cranichideae is represented by species of subtribes Cranichidinae, Goodyerinae and Spiranthinae. In this study, vegetative organs of the following species were analised: Cranichis candida and Prescottia oligantha (Cranichidinae), Microchilus arietinus and Zeuxine strateumatica (Goodyerinae), Cyclopogon apricus, C. congestus, C. variegatus, Mesadenella cuspidata, Pteroglossa roseoalba and Sauroglossum nitidum (Spiranthinae). The aims were to find structural features related to the terrestrial habit and potentially useful in the taxonomic delimitation of the group. The roots are, proportionally, the most developed organ of the plant, showing characteristics that might help in absorbing or retaining water, such as: velamen/exoderm system, in all species, and tilossomes, in the Cranichidinae and Spiranthinae representatives. Leaves possess an one-layered epidermis covered by a thin cuticle and a narrow and homogeneous mesophyll. Vascular bundles of the midrib are enclosed by parenchymatic cells and the xylem conducting cells are organised in pairs or "inverted V", as in other Cranichideae / Mestre

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-05-16Bitstream added on 2014-08-13T18:01:28Z : No. of bitstreams: 1 000747183_20150516.pdf: 388655 bytes, checksum: 28bb4ca0fd35b64c1425eeff151db6dc (MD5) Bitstreams deleted on 2015-05-19T12:01:09Z: 000747183_20150516.pdf,Bitstream added on 2015-05-19T12:01:40Z : No. of bitstreams: 1 000747183.pdf: 1675711 bytes, checksum: 172952b37ea05e8baceeccb4e6e6ea8f (MD5) / A franca expansão das florestas de eucalipto observada nos últimos anos em diferentes estados brasileiros aumentou a dependência tecnológica da cultura, tornando necessária a sua inserção no contexto biotecnológico. Para tal, a disponibilidade de ferramentas moleculares que viabilizem a produção de árvores geneticamente modificadas se faz necessária. Nesse contexto, o presente trabalho visou validar funcionalmente dois promotores de Eucalyptus grandis, o primeiro relacionado a um gene que codifica uma Lacase (denominado EgLac) com expressão específica em caule (câmbio), e o segundo relacionado a uma actina (denominado EgAct) com expressão ubíqua. Um cassete de expressão contendo o promotor EgLac em fusão transcricional com o gene repórter GUS (previamente construído) foi inserido em plantas de Arabidopsis thaliana, e uma expressão vascular foi constatada em testes histoquímicos. Em cortes histológicos observou-se que a expressão de GUS ficou restrita ao floema de raízes e folhas. Em paralelo, o gene EgAct teve a sua expressão ubíqua validada em diferentes órgãos/tecidos de eucalipto, e a sua região promotora foi amplificada. Um cassete de expressão contendo o promotor EgAct em fusão ao repórter GUS foi igualmente inserido em plantas de A. thaliana. Análises histoquímicas revelaram uma expressão vascular do gene repórter distribuída ao longo de toda a planta. Por outro lado, a quantificação da expressão de GUS em plantas transformadas revelaram níveis variáveis de acumulação de transcrição de acordo com a idade e o órgão/tecido analisado / The rapid expansion of eucalyptus plantations observed in recent years in different Brazilian states increased the technological dependence of the culture, and its inclusion in the biotechnological context is an urgent need. For this, the availability of molecular tools that enable the production of genetically modified trees is necessary. In this context, the present work aimed to functionally characterize two promoters of Eucalyptus grandis, the first one related to a gene encoding a laccase (called EgLac) with specific expression in stem (cambium region), and the second one related to a gene encoding an ubiquitously expressed actin (called EgAct). An expression cassette containing the EgLac promoter transcriptionally fused to the GUS reporter gene was inserted into Arabidopsis thaliana, and a vascular expression pattern was observed in histochemical tests. Histological sections showed that GUS expression was restricted to the phloem of roots and leaves. In parallel, the ubiquitous expression of EgAct was validated using different eucalyptus organs/tissues, and its promoter region was amplified. An expression cassette containing the EgAct promoter fused to the GUS reporter was also inserted into A. thaliana. Histochemical analysis revealed a vascular expression of the reporter gene distributed throughout the plant. Moreover, quantification of GUS expression in transformed plants revealed variable levels of transcript accumulation according to the age and organ/tissue analyzed

Orientador: Ivan de Godoy / Banca: Celso Luis Marino / Banca: Márcio José da Silva / Resumo: A franca expansão das florestas de eucalipto observada nos últimos anos em diferentes estados brasileiros aumentou a dependência tecnológica da cultura, tornando necessária a sua inserção no contexto biotecnológico. Para tal, a disponibilidade de ferramentas moleculares que viabilizem a produção de árvores geneticamente modificadas se faz necessária. Nesse contexto, o presente trabalho visou validar funcionalmente dois promotores de Eucalyptus grandis, o primeiro relacionado a um gene que codifica uma Lacase (denominado EgLac) com expressão específica em caule (câmbio), e o segundo relacionado a uma actina (denominado EgAct) com expressão ubíqua. Um cassete de expressão contendo o promotor EgLac em fusão transcricional com o gene repórter GUS (previamente construído) foi inserido em plantas de Arabidopsis thaliana, e uma expressão vascular foi constatada em testes histoquímicos. Em cortes histológicos observou-se que a expressão de GUS ficou restrita ao floema de raízes e folhas. Em paralelo, o gene EgAct teve a sua expressão ubíqua validada em diferentes órgãos/tecidos de eucalipto, e a sua região promotora foi amplificada. Um cassete de expressão contendo o promotor EgAct em fusão ao repórter GUS foi igualmente inserido em plantas de A. thaliana. Análises histoquímicas revelaram uma expressão vascular do gene repórter distribuída ao longo de toda a planta. Por outro lado, a quantificação da expressão de GUS em plantas transformadas revelaram níveis variáveis de acumulação de transcrição de acordo com a idade e o órgão/tecido analisado / Abstract: The rapid expansion of eucalyptus plantations observed in recent years in different Brazilian states increased the technological dependence of the culture, and its inclusion in the biotechnological context is an urgent need. For this, the availability of molecular tools that enable the production of genetically modified trees is necessary. In this context, the present work aimed to functionally characterize two promoters of Eucalyptus grandis, the first one related to a gene encoding a laccase (called EgLac) with specific expression in stem (cambium region), and the second one related to a gene encoding an ubiquitously expressed actin (called EgAct). An expression cassette containing the EgLac promoter transcriptionally fused to the GUS reporter gene was inserted into Arabidopsis thaliana, and a vascular expression pattern was observed in histochemical tests. Histological sections showed that GUS expression was restricted to the phloem of roots and leaves. In parallel, the ubiquitous expression of EgAct was validated using different eucalyptus organs/tissues, and its promoter region was amplified. An expression cassette containing the EgAct promoter fused to the GUS reporter was also inserted into A. thaliana. Histochemical analysis revealed a vascular expression of the reporter gene distributed throughout the plant. Moreover, quantification of GUS expression in transformed plants revealed variable levels of transcript accumulation according to the age and organ/tissue analyzed / Mestre

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-06-07T10:20:44Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1642997 bytes, checksum: a9190cecf7b70ea7e238c98b99466014 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-07T10:20:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1642997 bytes, checksum: a9190cecf7b70ea7e238c98b99466014 (MD5) Previous issue date: 2014-09-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os membros da família de fatores de transcrição NAC (acrônimo de NAM, ATAF e CUC) são específicos de plantas e são conhecidos por atuarem tanto no desenvolvimento quanto na regulação da resposta a estresse. Dentre os genes NAC envolvidos em respostas contras estresses bióticos e abióticos já identificados em soja (Pinheiro et al., 2009, Le et al., 2011),o gene GmNAC081 é induzido pela expressão de NRPs (Faria et al., 2011) e por diferentes condições de estresses fisiológicos (Pinheiro et al., 2009) portanto, é possível que elementos em cis presentes no seu promotor promovam a integração de diferentes sinais que resultem em morte celular mediada por GmNAC081.A presente investigação teve como objetivos principais confirmar a presença de domínios discretos no promotor do gene GmNAC081 responsivos a estresses osmótico, induzido por PEG, e do retículo endoplasmático, induzido por tunicamicina e avaliar a expressão basal e tecido- específica do promotor em condições de cultivo in vitro e em casa de vegetação. Além disso, foi avaliado a atividade do promotor GmNAC081 durante o desenvolvimento. Para isso, foram utilizadas plantas transgênicas contendo o promotor GmNAC081 na extensão de 1000 pb, 750 pb e 500 bp fusionadas ao gene repórter GUS. Análises fluorimétricas quantitativas de GUS revelaram a presença de elementos em cis responsivos a PEG na regiao contida pelas posições -1000 a -750. Pelo menos dois elementos responsivos a tunicamincina devem estar contidos nas regioes -1000 a -750 e -750 a -500. Os resultados da presente investigação revelaram que a atividade do promotor de 1000pb de GmNAC081 está relacionada às condições de cultivo de plantas trangênicas de Nicotiana tabacum, sendo fortemente induzido durante a senescência. Estes resultados foram confirmados por meio de análises histoquímicas. De fato, a região 5’ de -1000pb que flanqueia o gene GmNAC081 é induzível por estresses osmótico e do retículo endoplasmático em diferentes orgãos e tecidos (Rosado, 2012). As sequências de 1000pb do promotor de GmNAC081 foram capazes de direcionar a expressão de GUS no tecido vascular em plantas cultivadas in vitro. Além disso, as análises histoquímicas de atividade de GUS confirmaram que o promotor de GmNAC081 é fortemente induzido em tecidos em estádios avançados de desenvolvimento. Coletivamente, estes resultados demonstram que a inducão do gene GmNAC081 por estresses e durante a senescência ocorre no nível transcricional por meio de elementos cis-regulatórios presentes em regiões discretas do promotor. Além disso, os resultados de atividade do promotor GmNAC081 substanciam o argumento de que GmNAC081 esteja envolvido em resposta a estresse e no processo de senescência natural. / The members of the NAC (NAM, ATAF and CUC acronyms) family are plant- specific transcriptional factors, which are involved in development and stress responses. Among the abiotic and biotic stress response NAC genes already identified in soybean, GmNAC081 is induced by NRP expression and different conditions of physiological stresses; hence it is possible that cis-regulatory elements on its promoter cause the integration of different stimuli that result in GmNAC081 mediated cell death. The present investigation aimed at confirming the presence of discrete domains on the GmNAC081 promoter, which are responsive to osmotic stress, induced by PEG, and endoplasmic reticulum stress, induced by tunicamycin as well as at evaluating the basal and tissue-specific expression of the promoter under in vitro and greenhouse growth conditions. In addition, the GmNAC081 promoter activity was evaluated during development under greenhouse conditions. For this, we used transgenic plants harboring different extensions (up to positions -1000, -750 and -500) of the GmNAC081 promoter fused to the GUS reporter gene. Quantitative fluorometric analyses of GUS revealed the presence of cis-elements responsive to PEG in the region delimitated by the positions -1000 to -750. At least two responsive cis-elements to tunicamycin may be present in the regions -1000 to -750 and -750 to -500. The results of the present investigation also revealed that the GmNAC081 promoter (1000bp) activity is related to the cultivation conditions of Nicotiana tabacum transgenic plants and it is strongly induced during natural senescence. These results were further confirmed through histochemical analyses. In fact, the 1000-bp 5’ flanking sequences of GmNAC081 is induced by osmotic stress and reticulum endoplasmic stress in different organs and tissues. The 1000-bp sequences of the GmNAC081 promoter were capable of directing GUS expression in the vascular tissue of in vitro cultivated plants. Furthermore, the histochemical analyses of GUS activity confirmed a strong induction of the GmNAC081 promoter in tissues under advanced stages of development. Taken together, these results demonstrate that the induction of GmNAC081 expression by stresses and during senescence occurs at the transcriptional level through positive cis-regulatory elements presents in discrete regions of the promoter. In addition, the pattern of the GmNAC081 promoter activity substantiates the argument that GmNAC081 is involved in the process of natural senescence.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-06-08T16:52:10Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 5343332 bytes, checksum: f2f90ec724baa672785c57612ee8a420 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-08T16:52:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 5343332 bytes, checksum: f2f90ec724baa672785c57612ee8a420 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O Brasil é o maior produtor mundial de café, e o café arábica (Coffea arabica L.) é o mais apreciado pelos países consumidores. Minas Gerais destaca-se como principal estado produtor de café no país, mas suas lavouras apresentam diferentes situações nutricionais, principalmente no teor de micronutrientes, como B e Cu. Condições de deficiência e excesso de nutrientes podem ocasionar o aparecimento de sintomas macroscópicos característicos e prejudicar a produção. Mesmo quando os sintomas macroscópicos não ocorrem, as plantas podem apresentar “fome ou toxidez oculta”, observados apenas anatômica e ultraestruturalmente, ou por avalição do estado nutricional. Sendo assim, objetivou-se avaliar os efeitos de doses de deficiência e excesso de B e Cu sobre os aspectos macroscópicos, anatômicos e ultraestruturais e avaliar o estado nutricional dos cafeeiros cultivados em sistema hidropônico. O cafeeiro pode ser considerado mais tolerante ao excesso de B do que à deficiência, pois sob condições de deficiência menor quantidade de B chega aos ápices caulinares pelo xilema (via apoplasto), o que promove uma série de alterações morfoanatômicas e ultraestruturais nas plantas. A deficiência de B, causa primariamente, alteração na síntese de pectinas durante a formação de novas paredes celulares de primórdios foliares em expansão. Essa alteração desencadearia uma série de processos até a abscisão foliar e, finalmente, morte do meristema apical. Além disso, a destruição dessas regiões associadas à síntese de auxina (AIA) provocaria um desbalanço hormonal em toda a planta e, nas raízes, os níveis inadequados de AIA causariam diferenciação precoce de células e tecidos, formação de raízes ramificadas e encurtadas, até necrose do ápice radicular. Assim, o evento final da deficiência de B seria a diminuição da área do sistema radicular e do potencial de absorção de água e nutrientes. Como ocorre brotação após a abscisão dos órgãos em expansão sob deficiência de B, sugere-se que também ocorra retranslocação deste nutriente pelo floema (via simplástica), das folhas mais velhas para folhas mais novas. O acúmulo de B nas folhas mais novas após a brotação corrobora com essa possibilidade. Em contrapartida, a alteração dos cloroplastos é o sintoma ultraestrutural primordial da deficiência ou do excesso de Cu em folhas de cafeeiros, o que reforça a importância desse nutriente no processo fotossintético. Porém, o atraso no surgimento de sintomas morfoanatômicos da deficiência e do excesso de Cu em cafeeiros pode ser consequência do acúmulo deste nutriente nas raízes e da retranslocação para as folhas mais novas, favorecendo a manutenção de concentrações adequadas na planta. / Brazil is the world's largest coffee producer, and arabica (Coffea arabica L.) is the most specie appreciated by the consuming countries. Minas Gerais stands out as the main coffee producing state in the country, but their crops have different nutrient conditions, especially in the micronutrient content, such as B and Cu. Conditions of deficiency and excess nutrients can cause the appearance of characteristic macroscopic symptoms and impair production. Even when the macroscopic symptoms do not occur, the plants may have "hidden hunger or toxicity," observed only anatomical and ultrastructure, or assessment of nutritional status. Therefore, this study aimed to evaluate the effects of doses of deficiency and excess of B and Cu on the macroscopic, anatomical and ultrastructural aspects and assess the nutritional status of coffee grown hydroponically. The coffee may be considered more tolerant to excessive B than the deficiency. Under conditions of deficiency of B minor amount of B reaches the xylem to the shoot tip (apoplastic pathway), which promotes a series of morphoanatomic and ultrastructural alterations in plants. Deficiency of B, cause primarily, changes in pectin synthesis during the formation of new cell walls of leaf primordia expanding. This change would trigger a series of processes to leaf abscission, and ultimately death of apical meristem. Furthermore, the destruction of these regions associated with auxin synthesis (AIA) would trigger a hormonal disbalance throughout the plant and the roots. In roots, inadequate levels of AIA cause early differentiation of cells and tissues, formation of branched and shortened roots, and necrosis of the apex. Thus, the final event of B deficiency would be to reduce the area of the root system and the potential for absorption of water and nutrients. As occur regrowth after abscission of organs expanding deficiency in B, it is suggested that also this nutrient translocation occurs through phloem (symplastic pathway), older leaves to young leaves. The accumulation of B in younger leaves after regrowth corroborates this possibility. In contrast, the change of chloroplasts is the primary ultrastructural symptom of deficiency or excess Cu in coffee leaves, which reinforces the importance of this nutrient in the photosynthetic process. However, the delay in the onset of morphoanatomic symptoms of deficiency and excess Cu in coffee may be a consequence of the accumulation of this nutrient in the roots and translocation to the younger leaves, favoring the plant rebalancing. .