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Expressão da anexina-A1 em leucócitos de pacientes com hanseníaseRibeiro, Afonso Bezerra 22 September 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014-09-22 / A hanseníase é uma doença infecto contagiosa, endêmica, de evolução crônica, granulomatosa causada pelo M. leprae, que representa um grave problema de saúde pública no Brasil e em vários países do mundo. O objetivo deste estudo foi analisar as populações de neutrófilos, monócitos, células T CD4+, T CD8+ e T regulatórias no sangue periférico de pacientes com hanseníase nas formas clínicas multibacilar e paucibacilar bem como a expressão da proteína anti-inflamatória ANXA1 e os níveis de IL-10. A quantificação de leucócitos no sangue periférico dos pacientes com hanseníase e seus controles (indivíduos sadios sem histórico clínico de infecção – controle negativo; e paciente com tuberculose – controle positivo) foi realizada através da contagem em câmara hemocitométrica de Neubauer e diferencial em esfregaço sanguíneo. A determinação do fenótipo das células T CD4+, TCD8+ e Treg foi realizada através de imunofluorescência. A expressão da ANXA1 e os níveis de IL-10 nos leucócitos e plasma forma através das técnicas de imunofluorescência e ELISA. Os resultados foram analisados através da análise de variância (One-way ANOVA) com pós teste de Bonferroni. As associações entre dados não paramétricos foram analisadas por regressão linear e pelo coeficiente de correlação do teste de Spearman. Os resultados demonstraram queos leucócitos totais nos pacientes MB (22,93 x 106 ± 0,37 cel/mL) e PB (26,58 x 106 ± 1,12 cel/mL) apresentaram um aumento significativo do número de células quando comparado ao grupo CS (6,43 x 106 ± 0,74 cel/mL). Já grupo PB apresentou um aumento significativo também em relação ao grupo CP (21,45 x 106 ± 0,38 cel/mL). A população de monócitos nos pacientes MB estava aumentada (1,45 x 106 ± 0,28 cel/mL) quando comparados ao grupo CS (0,59 x 106 ± 0,70 cel/mL) e CP (0,70 x 106± 0,17 cel/mL). O grupo dos PB (0,23 x 106 ± 0,04 cel/mL) quando comparado ao grupo CS e CP não apresentou um aumento significativo entre os grupos. Já os neutrófilos dos pacientes MB (14,04 x 106 ± 0,53 cel/mL) quanto dos PB (14,28 x 106 ± 0,22 cel/mL) apresentaram aumento significativo em relação aos CS (3,42 x 106 ± 0,36 cel/mL) e CP (1,21 x 106 ± 0,06 cel/mL). Nas células T CD4+, foi observado um aumento nas formas clínicas MB (1,99 x 106 ± 0,29 cel/mL) e PB (1,89 x 106 ± 0,18 cel/mL) comparado aos controles sadio e positivo. Em relação as células T CD8+ , o número desse leucócito foi mais expressivo na forma MB (1,14 x 106 ± 0,10 cel/mL), do que o grupo CS (0,62 x 106 ± 0,05 cel/mL), enquanto que o grupo PB (0,28 x 106 ± 0,02 cel/mL) apresentou redução em relação ao grupo CS. Na população de células Treg, a forma clínica MB (1,85 x 106 ± 0,27) apresentou maior número quando comparado ao grupo CS (0,56 x 106 ± 0,07 cel/mL) e CP (0,30 x106 ± 0,02 cel/mL). O grupo PB (0,29 x 106± 0,03 cel/mL) não apresentou aumentou significativo quando comparado ao grupo CS e CP. A ANXA1 apresentou redução em leucócitos circulantes nos pacientes PB e MB, porém apresentou altos níveis liberada no plasma, sendo que os pacientes multibacilares apresentaram níveis superiores aos paucibacilares. Por se tratar de uma molécula reguladora da inflamação, sua ação parácrina poderia estar potencializando a ação anti-migratória e inibindo a ação pró-inflamatória nos leucócitos circulantes na infecção induzida por M. leprae, principalmente nos pacientes multibacilares. Nenhuma correlação foi observada entre a expressão da anexina-A1 e os níveis de IL-10 nos pacientes com hanseníase, indicando que essa proteína não está envolvida no mecanismo de indução de produção dessa citocina nos leucócitos circulantes. / Leprosy is endemic, infectious disease of chronic evolution, granulomatous caused by M. leprae, which represents a serious public health problem in Brazil and in countries around the world. The aim of this study was to analyze the populations of neutrophils, monocytes, TCD4+ cells, TCD8+ and T regulatory peripheral blood of patients with leprosy in multibacillary clinical and paucibacillary forms as well as the expression of anti-inflammatory ANXA1 protein and the levels of IL -10. Quantification of leukocytes in peripheral blood of leprosy patients and controls (healthy individuals without clinical history of infection - negative control, and patient with tuberculosis - positive control) was performed by hemocytometer Neubauer chamber counting and differential blood smear. The determination of the phenotype of TCD4+, TCD8+ and Treg cells was performed by immunofluorescence. The expression of ANXA1 and IL-10 levels in plasma and leukocytes by way of immunofluorescence and ELISA. The results were analyzed by analysis of variance (One-way ANOVA) with Bonferroni post test. The associations between non-parametric data were analyzed by linear regression and the correlation coefficient of Spearman. The results showed that the total leukocytes in patients MB (22.93 ± 0.37 x 106 cells / ml) and BP (26.58 ± 1.12 x 106 cells / ml) showed a significant increase in cell number when compared the CS group (6.43 ± 0.74 x 106 cells / mL). The CP group showed a significant increase also in relation to the CP group (21.45 ± 0.38 x 106 cells / ml). The population of monocytes in MB patients was increased (1.45 ± 0.28 x 106 cells / mL) compared to the CS group (0.59 ± 0.70 x 106 cells / mL) and CP (0.70 x 106 ± 0.17 cells / mL). The group of PB (0.23 x 0.04 ± 106 cells / mL) compared to CS and CP group did not show a significant increase between the groups. Neutrophils of MB patients (14.04 ± 0.53 x 106 cells / mL) and the PB (14.28 ± 0.22 x 106 cells / mL) showed a significant increase from the CS (3.42 x 106 ± 0.36 cell / ml) and CP (1.21 ± 0.06 x 106 cells / ml). TCD4+ cells, an increase was observed in clinical forms MB (1.99 ± 0.29 x 106 cells / ml) and BP (1.89 ± 0.18 x 106 cells / ml) compared to healthy, positive controls. Regarding the TCD8+ cells, the number of leukocytes was more significant in MB (1.14 x 0.10 ± 106 cells / mL) than the CS group (0.62 ± 0.05 x 106 cells / mL ), while the PB group (0.28 ± 0.02 x 106 cells / mL) decreased compared to the CS group. In the population of Treg cells, the clinical form MB (1.85 x 106 ± 0.27) had a higher number compared to the CS group (0.56 ± 0.07 x 106 cells / mL) and CP (0.30 x106 ± 0.02 cells / mL). The CP group (0.29 ± 0.03 x 106 cells / mL) had not increased significantly when compared to the CS group and CP. The ANXA1 decreased in circulating leukocytes in patients PB and MB, but showed high levels released into the plasma, and the multibacillary patients had levels above the paucibacillary. Being a regulatory molecule of inflammation, its paracrine action might be enhancing the anti-migratory action and inhibiting pro-inflammatory action in circulating leukocytes in infection induced by M. leprae, particularly in MB patients. No correlation was observed between the expression of annexin-A1 and IL-10 levels in patients with leprosy, indicating that this protein is not involved in the production of this cytokine induction mechanism in circulating leukocytes.
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Biomarcadores do metabolismo da cartilagem e sua relação com as alterações morfológicas, inflamatórias e funcionais: um estudo sobre a lesão condral secundária em joelhos humanos / Biomarkers of cartilage metabolism and its relationship with morphological, inflammatory and functional changes: a study of secondary chondral injury in human kneesFranco, Renata Nogueron 28 February 2011 (has links)
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Previous issue date: 2011-02-28 / Osteoarthritis (OA), a degenerative joint disease, is one of the most frequent causes of pain in the musculoskeletal system and of the inability to work in Brazil and the world. It is a multifactor, chronic disease, leading to progressive functional inability. It can arise as a result of injuries to structures such as the anterior crossed ligament and/or meniscus (post-traumatic OA), which, in this case, can affect individuals in any age range. The development of osteoarthritis includes multiple changes in the extracellular cartilage matrix, altering the normal morphological configuration of the joint involved, leading to a lack of equilibrium between the synthesis and degradation of products in this matrix. Although OA is not considered primordially as an inflammatory disease, inflammation of the joint has been shown to be a potential amplifier of the degenerative process. Thus the objective of the present study was to analyze potential biological markers in the serum and synovial fluid, and then correlate them with one another and with the morphological, inflammatory and functional alterations found in individuals with chronic injury of the anterior crossed ligament (ACL). The following techniques were used in the study: zymography, to determine the activity of the metallopeptidases 2 and 9 (MMP-2 and MMP-9); an immune-enzymatic assay (ELISA) to determine the presence of systemic and local cytokines; and a manual count of inflammatory cells (mononuclear and polymorphonuclear) by optical microscopy and spectrophotometry, in order to analyze for sulfated glycosaminoglycans (GAGs). The results indicated joint and systemic inflammation in chronic injury of the ACL by the detection of systemic and local cytokines, by the activity of MMP-9 and by the inflow of neutrophils. There were interactions between systemic and local cytokines, in which a cytokine did not always exert the same function in the serum as in the synovial fluid. The interleucines (IL) connected to degradation of the cartilage in chronic injury of the ACL were IL-12, IL-6 and IL-8, and those connected to pain and loss of function were IL-6 and IL-9. In counterpart, MMP-2 showed a negative correlation with the damage to the cartilage. It was concluded that the molecules studied had potential as biomarkers, since alterations were suggestive of injury and degradation of the cartilage. In addition, after the traumatic event resulting in rupture of the ACL, the ambient remained chronically inflamed and this inflammation was crucial for the high index of posttraumatic OA. / A osteoartrite (OA), doença articular degenerativa, é uma das causas mais freqüentes de dor do sistema músculo-esquelético e de incapacidade para o trabalho no Brasil e no mundo. É uma doença crônica, multifatorial, que leva a uma incapacidade funcional progressiva. Pode surgir em decorrência de lesões em estruturas como ligamento cruzado anterior e/ou meniscos (OA pós-traumática), e neste caso, pode afetar indivíduos em qualquer faixa etária. O desenvolvimento da osteoartrite inclui múltiplas mudanças na matriz extracelular da cartilagem, o que altera a configuração morfológica normal da articulação envolvida, levando a um desequilíbrio entre a síntese e degradação dos produtos desta matriz. Apesar da OA não ser considerada primordialmente como uma doença inflamatória, a inflamação articular tem demonstrado um potencial amplificador do processo degenerativo. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi analisar potenciais marcadores biológicos no soro e no líquido sinovial, e em seguida correlacioná-los uns com os outros e com as alterações morfológicas, inflamatórias e funcionais encontradas em sujeitos com lesão crônica do ligamento cruzado anterior (LCA). Para este estudo foram utilizadas técnicas de: zimografia, para verificar a atividade das metalopeptidases 2 e 9 (MMP-2 e MMP-9); Ensaio imunoenzimático (ELISA), para constatar a presença das citocinas sistêmicas e locais; contagem manual de células inflamatórias (mononucleares e polimorfonucleares) por microscopia óptica e espectrofotometria para a análise dos glicosaminoglicanos sulfatados (GAGs). Os resultados apontaram para uma inflamação articular e sistêmica na lesão crônica do LCA, pela detecção de citocinas sistêmicas e locais, pela atividade das MMP-9 e pelo influxo de neutrófilos. Houve interações entre citocinas sistêmicas e locais, nas quais nem sempre uma citocina exerce a mesma função no soro e no líquido sinovial. As interleucinas (IL) ligadas à degradação da cartilagem na lesão crônica do LCA foram IL-12, IL-6 e IL-8 e as ligadas à dor e a perda de função foram IL-6 e IL-8. Em contrapartida, a MMP-2 apresentou correlação negativa com os danos na cartilagem. Conclui-se que, as moléculas estudadas apresentam potencial como biomarcadores, sendo suas alterações sugestivas de lesão e degradação da cartilagem. E ainda, que após o evento traumático responsável pelo rompimento do LCA, o ambiente permanece inflamado cronicamente e que esta inflamação é crucial para o alto índice de OA pós-traumática.
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