Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-06-22T12:57:35Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 319159 bytes, checksum: 8d72d6ab6696a56a96a793b0fd4e402a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-22T12:57:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 319159 bytes, checksum: 8d72d6ab6696a56a96a793b0fd4e402a (MD5) Previous issue date: 2001-06-07 / Foi avaliado o efeito do cravo-da-índia (Syzygium aromaticum) sobre Salmonella e Staphylococcus aureus inoculados em salame tipo italiano na concentração de, aproximadamente, 10 3 a 10 4 UFC/g do produto. O pH final do salame tipo italiano foi em torno de 4,4 e a concentração de ácido lático variou de 65,9 mmolL -1 no início do processamento para 249,4 mmolL -1 ao final de 20 dias. Os salames processados neste estudo resultaram num produto final com a w de, aproximadamente, 0,91 e um percentual de umidade estimada de 49,1%. A adição de 0,2% de cravo no salame não resultou em diferenças significativas nas características físico-químicas do produto, com exceção do pH que foi mais baixo nos embutidos adicionados de cravo. Foi constatado que, nos salames tipo italiano fabricados com a adição de 0,2% de cravo, compreendendo 65 μ g de eugenol por grama de produto, e naqueles salames do tratamento controle, sem cravo, houve uma redução de até quatro ciclos logarítmicos no número de células viáveis de Salmonella. O número de ciclos logarítmicos reduzidos na população de Salmonella foi significativamente maior(p<0,05) nos embutidos produzidos com 0,2% de cravo, quando se utilizou o meio BPLS para a contagem de colônias típicas de Salmonella. Ao final de 20 dias de processamento do salame tipo italiano não foi possível detectar a presença de Salmonella no produto adicionado de 0,2% de cravo, pela técnica do Número Mais Provável (NMP) nem por método imunoanalítico. Pela técnica de imunoanálise em apenas uma, das quatro repetições do tratamento controle, sem a adição de cravo, pode ser constatada a presença de Salmonella nos embutidos prontos. O número de células viáveis de S. aureus reduziu aproximadamente, meio ciclo logarítmico no período de fermentação. Os resultados mostraram que a adição de 0,2% de cravo no salame tipo italiano, nas condições experimentais usadas, não resultou em efeito inibidor adicional sobre S. aureus durante o período de processamento do produto. / The effect of clove (Syzygium aromaticum) on Salmonella and Staphylococcus aureus inoculated into Italian salami at, approximately, 10 3 to 10 4 CFU/g of finished salami was studied. Lactic acid concentrations varied from 65.9 mmolL -1 , at the beginning of processing, to 249.4 mmolL -1 at the end, after 20 days, when a final pH of about 4.4 was recorded. Finished salami had an approximate a w of 0.91 and an estimated moisture content of 49.1%. Except for the lower pH values recorded, the addition of clove at 0.2% to the salami did not result in significant changes in the physical and chemical characteristics of the product. In the Italian salami prepared with clove at 0.2%, a concentration equivalent to 65 μg eugenol per gram of salami, and in the control treatment without clove, a reduction of up to four logarithmic cycles in the numbers of viable cells of Salmonella was observed. This reduction was significantly higher (p<0.05) in the product prepared with clove at 0.2% when the BPLS medium was used for counting typical Samonella colonies. At the end of 20 days of processing, Salmonella could not be detected in the salami containing clove at 0.2% either by the most probable number technique (MPN) or by immunoanalytical methods. The use of immunoanalyses allowed the detection of Salmonella in the finished product in only one of the four replications of the control treatment. The numbers of viable S. aureus decreased half a logarithmic cycle during fermentation. These results showed that, under the experimental conditions tested, the addition of clove at 0.2% to Italian Salami did not cause any additional inhibition of S. aureus during salami processing. / Dissertação importada do Alexandria

Submitted by Cleber Casali (clebercasali@ufv.br) on 2017-06-28T17:49:26Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 513358 bytes, checksum: 7242180a7732569bdf7d045237f2e6ba (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-28T17:49:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 513358 bytes, checksum: 7242180a7732569bdf7d045237f2e6ba (MD5) Previous issue date: 2001-03-20 / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A seqüência completa de nucleotídeos do gene pepg1 foi determinada. A análise desta seqüência mostrou que este gene apresenta dois possíveis introns de 58 pares de bases, um potencial cis elemento TATA na posição -151 e um potencial CAAT Box na posição -273. A região codificadora contém 1110 pb, após a retirada dos introns, e a partir dessa seqüência foi deduzida uma proteína com 370 aminoácidos. A seqüência de aminoácidos apresenta grande homologia com poligalacturonases de outros fungos filamentosos, com massa molecular deduzida de 38,4 KDa e ponto isoelétrico teórico de 8,31. Quatro fagos recombinantes foram isolados a partir do banco genômico de Pencillium expansum, utilizando-se como sonda um fragmento de DNA de 1,6 Kb contendo o gene pgg1 de P. griseoroseum, os quais foram denominados λPEPG1, λPEPG2, λPEPG3 e λPEPG4. Os fagos λPEPG3 e λPEPG4 apresentaram fragmentos genômicos clonados de 14,5 e 16,6 Kb. Fragmentos de DNA de Bam HI de 3,6 e 5,1 Kb dos fagos λPEPG3 e λPEPG4 respectivamente, que hibridizaram com a sonda, foram subclonados no vetor pBluescript® SK+, originando os plasmídeos recombinantes pEPG3 e pEPG4. O gene pepg1 foi usado na transformação de protoplastos do mutante nia/pab/faw de P. expansum na presença de polietilenoglicol e CaCl2. Para a seleção dos transformantes, em meio mínimo contendo nitrato de sódio como fonte de nitrogênio, foi usado o gene nia de Fusarium oxysporum. Cento e cinqüenta e cinco, dentre os 234 transformantes obtidos, foram considerados estáveis quanto ao gene de nitrato redutase, e foram analisados quanto à produção de pectinase total em meio mineral sólido tamponado contendo pectina. Foram observadas linhagens transformantes apresentando halos de degradação da pectina maiores e menores que os da linhagem selvagem e mutante, mas a maioria dos transformantes apresentou resultado similar ao dessas linhagens. Cinqüenta e três transformantes foram caracterizados quanto à produção de poligalacturonase. Foram observados transformantes com atividade de PG inferior à da linhagem selvagem, mas a maioria dos transformantes analisados apresentou aumento na atividade dessa enzima, variando de 10 a 89 % em relação à linhagem selvagem. A hibridização do DNA total dessas linhagens, clivado com enzimas de restrição, revelou a ocorrência de integração heteróloga e de múltiplas cópias em tandem do gene pepg1 no genoma de P. expansum. / The nucleotide sequence of a polygalacturonase encoding gene (pepg1) from Penicillium expansum was determined. Putative TATA and CAAT motifs were seen at position -151 and -273, respectively, from the translation start site. The pepg1 gene encodes a predicted protein of 370 aas after splicing of two introns of 58 bp. The estimated molecular mass of the polypeptide is 38.4 KDa with pI of 8.31. Multiple sequence alignment of PG protein sequences revealed high homology between PEPG1 and PG from several filamentous fungi. In order to isolate other PG genes a genomic bank from Penicillium expansum was reprobed with a 1.6 Kb DNA fragment which corresponds to a PG gene from P. griseoroseum. Four recombinant phages were isolated and designated λPEPG1, λPEPG2, λPEPG3 and λPEPG4. DNA fragments of 3.6 Kb and 5.1 Kb from phages λPEPG3 and λPEPG4, respectively, were subcloned into pBluescript® SK+ vector. These plasmids were named pEPG3 and pEPG4. Protoplasts of the mutant strain nia/pab/faw of P. expansum were transformed with the pepg1 gene in the presence of polyethylene glycol and CaCl2 . Transformants were selected in minimal medium containing sodium nitrate as nitrogen source, using the nia gene of Fusarium oxysporum. One hundred and fifty-five transformants among 234, stably maintained the nia gene and were screened for PG overproduction by a plate assay on minimal medium containing pectin. Most transformants showed halo size similar to the mutant and wild-type strains, although smaller and larger halos were also detected. The PG production of fifty-five transformants was analyzed and some transformants had lower PG activity when compared to the wild-type strain. However, most transformants produced significantly more PG than the wild type. Southern analysis of the transformed strains detected heterologous and tandem integration of multiple copies of the pepg1 gene.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-29T17:27:04Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 712981 bytes, checksum: b711f4dd24dc47c82aad0cd26f809731 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-29T17:27:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 712981 bytes, checksum: b711f4dd24dc47c82aad0cd26f809731 (MD5) Previous issue date: 2000-06-28 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A carência de estudos acerca da vegetação da Zona da Mata mineira e a necessidade de melhor conhecer sua vegetação foram os objetivos do presente trabalho, que visou determinar a composição florística e a estrutura da vegetação arbórea de um fragmento de Floresta Estacional Semidecidual no município de Viçosa e compará-las com de outros remanescentes florestais. Para amostragem, utilizou-se o método de Ponto-Quadrante, com 200 pontos sistematicamente alocados no fragmento, a partir dos quais se mediram as quatro árvores mais próximas de cada ponto que estivessem com o perímetro do tronco à altura do peito igual ou superior a 15 cm. As comparações florísticas e estruturais entre as amostras foram realizadas por meio do Índice de Sφrensen e da Distância Euclidiana, respectivamente. Foram amostrados 800 indivíduos arbóreos, dos quais 77 estavam mortos e em pé. Os 723 espécimes vivos estão distribuídos em 83 espécies, pertencentes a 63 gêneros e 32 famílias botânicas. A família Leguminosae, com cinco espécies em cada uma das suas três subfamílias, foi a que apresentou a maior riqueza específica. Nas análises de similaridade florística, a Fazenda Tico-Tico apresentou níveis de ligação que variaram entre 0,43 com a Mata da Garagem, localizada no "Campus" da UFV e 0,13 com a Mata de Nova-Ponte, no Triângulo Mineiro. Contudo, na totalidade das amostras comparadas, a maior semelhança entre dois fragmentos foi constatada na Fazenda São Geraldo, localizada a 15 km de Viçosa, e no Jardim Botânico nordeste, no "Campus" da UFV. Com relação à fitossociologia, as espécies Pseudopiptadenia contorta, Mabea fistulifera e Apuleia leiocarpa foram as que apresentaram os maiores valores quanto aos parâmetros densidade, dominância e freqüência relativas, enquanto 21 espécies (25%) estaram representadas por um único indivíduo. O Índice de Diversidade de Shannon-Weaver e a eqüabilidade encontrados foram de 3,62 e 0,817 nats/espécie, respectivamente. A análise estrutural dos fragmentos comparados evidenciou a maior similaridade entre as amostras da Fazenda São Geraldo e da Mata da Garagem, ligadas em nível de 33,29. A menor similaridade encontrada foi entre a Mata da Biologia e a Fazenda Tico-Tico (77,94), tendo esta última apresentado menor distância em relação à Mata da Silvicultura, com a qual se ligou em nível de 50,19. / The lack of studies of Zona da Mata vegetation in Minas Gerais and the need for a better understanding of its vegetation were the objectives of the present work, which aimed to determine the floristic composition and the structure of the arboreal vegetation of a Semideciduous Seasonal Forest fragment in the municipality of Viçosa and to compare them with other forest remnants. Sampling was carried out by the Quadrant-Point method, with 200 points systematically placed into the fragment, from which the four trees nearest each point, having the trunk perimeter at chest level or superior to 15 cm, were measured. Floristic and structural comparisons among samples were performed by means of the Sφrensen Index and the Euclidean Distance, respectively. Eight hundred arboreal individuals were sampled, among them 77 were dead and upright. The 723 alive specimen are distributed in 83 species, belonging to 63 genus and 32 botanical families. The Leguminosae family, with five species in each of its tree sub-families, presented the greatest richness of species. In the analysis of floristic similarity, Tico-Tico Farm presented levels of linking varying from 0.43 for the Mata da Garagem , located in the UFV University Park to 0.13 for the Mata de Nova-Ponte , in the Triangulo Mineiro region. Howerer, the greatest similarity between two fragments was verified in the São Geraldo Farm, located 15 km from Viçosa, and in the Botanical Garden Northeast, in the UFV University Park. With relation to phytosociology, the species Psiudoptadenia contarta, Mabea fistulifera and Apuleia leiocarpa presented the greatest values for density, relative dominance and frequency parameters, while 21 species (25%) were represented by an individual alone. The Shannon-Weaver Diversity Index and equability were 3.62 and 0.817 nats/species, respectively. The structural analysis of the compared fragments indicated the greatest similarity between the samples of São Geraldo Farm and Mata da Garagem , linked at 33.29. The smallest similarity was found between Mata da Biologia , and Tico-Tico Farm (77.94), having the latter showed smaller distance in relation to Mata da Silvicultura, with linking level at 50.19.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-07-04T18:14:17Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 492073 bytes, checksum: 6ad56958fb94f4a0587a049b848c5bd2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-04T18:14:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 492073 bytes, checksum: 6ad56958fb94f4a0587a049b848c5bd2 (MD5) Previous issue date: 2001-03-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A família Coccinellidae (Coleoptera) apresenta, aproximadamente, 4.000 espécies. Muitas delas têm sido utilizadas com eficiência tanto em programas de manejo de pragas quanto em estudos relacionados com impacto ambiental, causado por plantas transgênicas. As análises citogenéticas, na família Coccinellidae, espécies, foram sendo que realizadas a maioria somente em, aproximadamente, 4,3% das restringiu-se à descrição do número de cromossomos. Neste trabalho, foram realizadas análises citogenéticas em Eriopis connexa, Olla v-nigrum e Cycloneda sanguinea, visando: 1. adaptar a técnica para obtenção de cromossomos em células mitóticas e meióticas; 2. determinar o número e morfologia dos cromossomos metafásicos por coloração convencional; 3. avaliar o comportamento dos cromossomos durante a meiose, descrevendo o sistema de determinação sexual; 4. caracterizar a distribuição da heterocromatina constitutiva utilizando banda-C, banda HSS (Hot Saline Solution), enzimas de restrição (Msp-I e Hae-III) e fluorocromo (CMA 3 ); 5. aplicar metodologia de banda Ag-NOR para localizar a atividade gênica da região organizadora de nucléolo; 6. mapear, por meio de FISH, os cromossomos carreadores de genes rDNA. O número cromossômico foi 2n=18+XX para fêmeas e 2n=18+Xy para os machos, em todas as espécies. A única espécie que apresentou um cromossomo B eucromático restrito a fêmeas foi E. connexa. A meiose dos machos revelou a meio-fórmula n=9+Xy p , e o modo de associação dos cromossomos sexuais foram do tipo pára-quedas, em todas as espécies. Em C. sanguinea, durante a prófase I (paquíteno), a associação dos cromossomos sexuais ocorreu de maneira ponta-a- ponta linearmente até formar um pseudo-anel. Os resultados das metáfases mitóticas avaliadas por banda NOR, tanto em E. connexa quanto em C.sanguinea , mapearam a região organizadora de nucléolo ativa em um par autossômico. A análise com fluorocromo CMA 3 , realizada em E. connexa, foi consistente com a banda NOR sendo positiva nesta região. Em células meióticas de O. v-nigrum, a região NOR ativa esteve presente na vesícula sexual, sendo confirmada por FISH com genes rDNA. Entretanto, os resultados das análises da mitose e meiose de C. sanguinea , por banda NOR e coloração seqüencial FISH/AgNOR, foram controversos. Os genes ativos localizaram-se em um par autossômico (metáfase espermatogonial), porém a vesícula sexual (prófase I) e o lúmen do pára-quedas (metáfase I) ficaram fortemente impregnados por prata. O FISH mapeou os genes rDNA fora da vesícula sexual. Com base nestes resultados sugeriu-se que essas substâncias sejam proteínas nucleolares, sintetizadas pelo par autossômico e importadas durante a associação dos cromossomos sexuais (prófase I). Tanto em C. sanguinea quanto em E. connexa, a heterocromatina constitutiva avaliada por banda-C, localizou-se principalmente na região pericentromérica de todos os cromossomos. Esta região foi rica em pares de base GC (digerida pela Hae III). Entretanto, alguns blocos de heterocromatina constitutiva (telômeros) não foram digeridos. A banda HSS (Hot Saline Solution) extraiu toda a heterocromatina, sugerindo-se que a heterocromatina seja rica, também, em seqüências repetitivas de bases AT, conferindo, portanto, uma natureza molecular heterogênea. A utilização da enzima Msp-I forneceu resultado negativo. / The family Coccinellidae (Coleoptera) comprises about 4,000 species in which some environmental of them disturbance are used studies in pest caused by management transgenic programs plants. and in Cytogenetic analyses of Eriopis connexa, Olla v-nigrum and Cycloneda sanguinea were made with the following purposes: 1. Modification of methodology with the purpose of obtaining best mitotic and meiotic chromosome preparations; 2. Establishment of number and morphology of mitotic chromosomes obtained by conventional staining; 3. Evaluation of meiotic chromosome behavior and description of sexual determination system; 4. Characterization of constitutive heterochromatin by C-band, HSS-band (Hot Saline Solution), restriction enzymes (Msp-I and Hae III), and CMA 3 fluorochrome; 5. Determination of genetic activity of NOR-region by Ag-NOR band; 6. Application of FISH methodology with the purpose of locating the chromosomes with rDNA genes. All the species studied showed 2n = 18 + XX for females and 2n = 18 + Xy for males. E. connexa was the only species with an euchromatic B-chromosome in female individuals. The male meiosis showed n= 9 + Xy p , with a parachute association of sexual chromosomes in all species studied. In prophase I of C. sanguinea , the association of sexual chromosomes were initially end -to-end, finishing in a pseudo-ring formation. The NOR-band technique in E. connexa and C. sanguinea showed the nucleolar organizing region in a pair of autosomic chromosomes. These chromosomes in E. connexa were also stained by CMA 3 fluorochrome. Both NOR and CMA 3 bands stained the same chromosome region. In meiotic cells of O. v -nigrum, an active NOR-region was observed in sexual vesicle, which was confirmed by FISH/rDNA probe. However, the results of C-band and sequential staining by FISH/agNOR were controversial. The functional genes were located in an autosomic pair (spermatogonial metaphase); however, the sexual vesicle (prophase I) and the parachute lumen (metaphase I) were staining strongly with Ag. The FISH methodology showed the rDNA genes out of the sexual vesicle. These results suggested that nucleolar proteins made in the autosomic pair were imported during the association of sexual chromosomes (prophase I). Both in C. sanguinea and E. connexa, constitutive heterochromatin showed by C-band was found mainly in pericentromeric regions of all chromosomes. These regions were GC-rich (digested by Hae III), but some heterochromatic blocks (telomere) were not digested by Hae III). The HSS band extracted all the heterochromatin, suggesting that this chromosome region was also AT-rich with a heterogeneous molecular nature. A negative result was seen with digestion by Msp I restriction enzyme. / Tese importada do Alexandria

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-06T18:08:21Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 361405 bytes, checksum: d7af395d244a4c5caf920b5a199ed4d3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-06T18:08:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 361405 bytes, checksum: d7af395d244a4c5caf920b5a199ed4d3 (MD5) Previous issue date: 2001-04-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O presente trabalho teve como objetivo estudar técnicas adequadas de conservação pós-colheita para que as inflorescências de esporinha possam ser comercializadas como flor de corte. As inflorescências foram uniformizadas em tamanho e distribuídas ao acaso nos seguintes tratamentos: soluções de condicionamento, por 30, 60, 90 e 120 minutos, com sacarose nas concentrações de 5, 10, 15 e 20% ou tiossulfato de sódio (STS) nas concentrações de 0,2; 0,4; 0,6; 0,8 e 1,0 mM e o controle (água destilada); soluções de condicionamento, por 30 minutos, com STS 0,2; 0,4; 0,6; 0,8 e 1,0 mM combinados com sacarose a 5% e controle; e, soluções de ácido aminooxiacético (AOA) (0; 0,5; 1,0; 1,5 e 2,0 mM) ou ácido acetilsalicílico (ASA) (0, 5, 10, 15 e 20 mM) pulverizadas diretamente nas flores. Os resultados dos tratamentos foram avaliados com base no critério de notas do murchamento e da porcentagem de abscisão das flores em vaso, respiração e produção de etileno. Os tratamentos das inflorescências com sacarose não influenciaram na vida em vaso e a abscisão das flores, quando comparados com o controle. O uso das soluções de condicionamento com STS combinado ou não com sacarose a 5%, e independente do tempo de condicionamento, foi eficaz em prolongar a vida em vaso das flores e reduzir o processo de abscisão e de murchamento das flores. Recomenda-se a utilização de 1,0 mM de STS, nas soluções de condicionamento, por 30 minutos, para aumentar a vida em vaso de 8 dias (controle) para 16 dias, reduzir a taxa de abscisão para 17,5% e inibir a produção de etileno e CO2 das flores. A maior produção de etileno e de CO2 ocorreu no 6° dia após a colheita e coincidiu com a fase final da senescência floral. Não houve diferenças entre as taxas de produção de etileno e de CO2 , após pulverização com soluções de AOA ou ASA em relação ao controle. / The present work had the objective to develop suitable postharvest techniques, for C. ajacis inflorescence being commercialized as cut flower. The inflorescences were standardized in length and distributed at random in various treatments: pulsing solutions for 30, 60, 90 e 120 minutes with sucrose at concentrations of 5, 10, 15 e 20% or silver tiosulfate (STS) 0,2; 0,4; 0,6; 0,8 and 1,0 mM and control (distillated water); pulsing solutions for 30 minutes with silver thiosulfate (STS) at 0,2; 0,4; 0,6; 0,8 and 1,0 mM combined or not with 5% sucrose and control; and flowers were sprayed with aminooxyacetic acid (AOA) (0; 0,5; 1,0; 1,5 e 2,0 mM) or acid acetylsalicylic (ASA) (0; 5, 10, 15 e 20 mM) solutions. The results of treatments were evaluated based on in wilting criteria and percentage of flower abscission, respiration, ethylene production and flower senescence. The inflorescence treatments with sucrose did not influence the longevity and flower abscission, when compared with the control. The use of pulsing solution with STS, combined or not with 5% sucrose and regardless of pulsing time were effective on prolonging the flower longevity or reduction of abscission and wilting. We recommend the utilization of 1,0 mM of STS in the pulsing solution for 30 minutes to increase the vase life to 16 days, reduce abscission to 17,5% and to inhibit the ethylene, and CO2 production of flowers. The highest ethylene and CO2 production occurs at the sixth day after the harvest and it is coincident with the final phase of the flower senescence. The ethylene and CO 2 production were similar between for AOA or ASA act and control.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-10T16:44:41Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 604815 bytes, checksum: 299964cd825884ce449176c3d3e98887 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-10T16:44:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 604815 bytes, checksum: 299964cd825884ce449176c3d3e98887 (MD5) Previous issue date: 2001-02-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O gene que codifica nitrato redutase em Penicillium expansum foi isolado de um banco genômico construído no vetor fago lambda EMBL3. Um fragmento de DNA de 3,17 Kb, contendo parte da região codificadora do gene da nitrato redutase de Penicillium chrysogenum, foi utilizado como sonda. Quatro fagos recombinantes foram isolados e denominados λPENR1, λPENR3, λPENR5 e λPENR6, com fragmentos de DNA clonados de 14,4; 14,4; 12,3 e 12,6 Kb, respectivamente. A análise por hibridização do DNA dos fagos recombinantes, clivado com Sal I, identificou fragmentos cujos tamanhos correspondiam a 4,7 Kb (λPENR1), 6,0 Kb (λPENR3), 8,4 Kb (λPENR5) e 7,6 Kb (λPENR6). Para a construção do mapa físico de restrição do fago recombinante λPENR3, foram feitas clivagens simples e duplas com enzimas de restrição. A análise de restrição e hibridização dos fragmentos de DNA do fago recombinante λPENR3 revelou que o gene nia estava presente em um fragmento de 6,5 Kb. Este fragmento foi subclonado no plasmídeo pBluescript SK+, e o plasmídeo recombinante foi denominado pPENR. Para a construção do mapa físico de restrição de pPENR, foram feitas clivagens simples e duplas com enzimas de restrição. O plasmídeo recombinante pPENR foi utilizado na transformação dos mutantes Nia^- de P. expansum e Penicillium griseoroseum, sendo obtida uma freqüência de 16 transformantes por μg de DNA. / The gene encoding nitrate reductase from Penicillium expansum was isolated from a lambda EMBL3 genomic DNA library. A 3.17 Kb DNA fragment containing part of the coding region for nitrate reductase from Penicillium chrysogenum was used as a probe. Four recombinant phages were isolated and the recombinant phages were labeled λPENR1, λPENR3, λPENR5 e λPENR6, containing cloned DNA fragments of 14.4; 14.4; 12.3 and 12.6 Kb, respectively. DNA hybridization analysis of the recombinant phages cleaved with Sal I identified DNA fragments whose sizes were 4.7 Kb (λPENR1), 6.0 Kb (λPENR3), 8.4 Kb (λPENR5) and 7.6 Kb (λPENR6). For the construction of the a physical restriction map of the recombinant phage λPENR3, single and double digestions with restriction enzimes were performed. Restriction and hybridization analysis of the recombinant phage λPENR3 DNA fragments showed that the nia gene was present in a 6.5 Kb DNA fragment. This fragment was subcloned in the plasmid pBluescript SK+ resulting in plasmid pPENR. For the construction of the a physical restriction map of pPENR, single and double digestions with restriction enzymes were carried out. The recombinant plasmid pPENR was used for transformation of nitrate non-utilising strains of P. expansum and Penicillium. griseoroseum, and a frequency of 16 transformants per μg of DNA was achieved.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-11T11:27:37Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 904628 bytes, checksum: 5d0accfed4bf3ffa5b534f9e166eeacc (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-11T11:27:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 904628 bytes, checksum: 5d0accfed4bf3ffa5b534f9e166eeacc (MD5) Previous issue date: 2001-08-09 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A proteína BiP (Binding Protein) está envolvida no dobramento correto de proteínas secretórias e retenção no RE de proteínas dobradas ou montadas incorretamente. BiP também atua auxiliando na solubilização de agregados protéicos durante períodos de estresses. Dois clones de BiP de soja, denominados gsBiP6 e gsBiP9, foram isolados a partir das bibliotecas genômicas provenientes dos fagos λEMBL3 e λZAP II, respectivamente. Os promotores de gsBiP6 e gsBiP9 possuem cis-elementos gerais, característicos de promotores de genes de plantas, como as seqüências de transcrição CAAT e TATA, e cis-elementos que respondem a estresses do retículo endoplasmático (ERSE), além de elementos G-box. Os promotores de BiP foram fusionados ao gene repórter gus e usados para transformar Nicotiana tabacum via A. tumefaciens. Análises histoquímicas de plantas transformadas com as construções -358pbip6-gus ou -2200pbip9-gus revelaram que os promotores de BiP produziram um padrão uniforme de expressão de GUS em folhas, caules e raízes. Intensa atividade histoquímica de GUS foi observada nos feixes vasculares de folhas, caule e raízes e em regiões de traço foliar, assim como, no meristema apical, local onde ocorre intensa divisão celular. Este padrão de distribuição espacial da atividade de GUS sugere estar correlacionado com uma expressão desses genes em tecidos que apresentam alta atividade celular secretória e alta proporção de células em um processo ativo de divisão celular. Coerente com esta observação, a atividade histoquímica de GUS é muito menos intensa no parênquima xilemático. Deleções do promotor de gsBiP6 foram conduzidas na orientação 5’-3’ (- 138pbip6-gus) e no interior do clone Δ(-226/-82)pbip6-gus. Análise dessas deleções em plantas transformadas, identificaram 2 domínios regulatórios cis-atuantes, denominados CRD1 (-358 a -226) e CRD2 (-226 a -82). A região CRD1 exibe atividade de enhancer, já que foi capaz de restaurar altos níveis de expressão basal do gene repórter gus, quando ligada à extremidade 5’ na posição -82 do promotor de BiP6. A região CRD2 contém tanto cis -elementos regulatórios positivos quanto cis -elementos negativos que contribuem para o padrão tecido-específico de expressão controlado pelo promotor de gsBiP6. A expressão do gene repórter na região do procâmbio em raízes, no meristema apical e no floema de caule foi absolutamente dependente da região CRD2. Em contraste, deleção de CRD2 resultou em acúmulo acentuado de atividade de GUS no parênquima xilemático. A ativação dos promotores BiP6 e BiP9 em resposta ao acúmulo de proteínas anormais no retículo endoplasmático (UPR) e em respostas a estresse osmótico foi avaliada em discos foliares transgênicos. Tratamento dos discos foliares com tunicamicina, ativador da via UPR, e com PEG, indutor de um estresse osmótico, induziu a expressão de GUS, sob o controle do pro motor BiP6 e do promotor BiP9. A deleção da região CRD2 (-226 a -82) no promotor BiP6 causou a perda da inducibilidade da expressão gênica em resposta a tunicamicina e PEG, indicando que CRD2 contém elementos cis-atuantes de resposta a estresse. De fato, dois cis-elementos conservados atuantes na via UPR (UPRE) foram identificados na região CRD2. Coletivamente, estes resultados sugerem que o controle da expressão de BiP em plantas depende de uma complexa integração de múltiplos cis-elementos regulatórios no promotor. / The binding protein BiP is involved in the correct folding of secretory proteins and retention in the RE of unfolded proteins. BiP also prevents nonproductive intermolecular interactions of folding intermediates and subsequent misaggregation of proteins during stress conditions. We have isolated two genomic clones named gsBiP6 and gsBiP9 from λEMBL3 and λZAP II genomic libraries, respectively. The gsBiP6 and gsBiP9 promoters have general motifs founded in plant gene promoters, such as CAAT and TATA sequence, and specific motifs, such as endoplasmatic reticulum stress response element (ERSE) and G-box elements. The BiP promoters were fused to the reporter gene β-glucuronidase (GUS) and introduced into tobacco plants via Agrobacterium tumefaciens transformation. Histochemical analysis of transformed plants with the constructions -358pbip6-gus or -2200pbip9-gus revealed that the BiP promoters produced a uniform pattern of the GUS expression in leaves, stems, and roots. Intense GUS histochemical activity was observed in the vascular region of leaves,stems and roots, and in the leaf trace region as well as in the apical meristem, place where intense cellular division happens. This pattern of space distribution of the GUS activity suggests to be correlated with an expression of those genes in places that have high cellular secretory activity and high proportion of cells in an active process of cellular division. Coherent with this observation, the histochemical activity of GUS is much less intense in the xylem parenchyma. The gsBiP6 promoter deletions were driven in the 5'-3' orientation (-138pbip6-gus) and intern region Δ(-226/- 82)pbip6-gus. Analysis of those deletions in transformed plants identified two regulatory domains cis-acting, denominated CRD1 (-358 to -226) and CRD2 (- 226 to -82). The CRD1 exhibits enhancer activity, since it was capable to recuperate high levels of basal expression of the gus reporte r gene when linked to the extremity 5' in the position -82 of the BiP6 promoter. The CRD2 contains positive regulatory cis -elements, as negative regulatory cis -elements that contribute to the specific pattern of expression controlled by the gsBiP6 promoter. The reporter gene expression in the root procambium region, in the apical meristem and in the phloem stem, was absolutely dependent on the CRD2. In contrast, CRD2 deleted resulted in accentuated accumulation of GUS activity in the xylem parenchyma. The activation of the BiP6 and BiP9 promoters, in response to the unfolded proteins response in the endoplasmatic reticulum (UPR) and osmotic stress condition, were evaluated in transgenic leaf disks. Leaf disks incubated with tunicamycin, activator of the UPR, and with PEG, inductor of an osmotic stress, induced the expression of GUS, under the BiP6 and BiP9 promoters control. The CRD2 (-226 to -82) deleted in the BiP6 promoter caused the loss of the induction of the expression in response to tunicamycin and PEG, indicating that CRD2 contains responsive cis-acting elements under stress conditions. In fact, two conserved cis-acting elements in the UPR (UPRE) were identified in the CRD2. Collectively, these results suggest that the control of the expression of BiP in plants depends on a complex integration of multiple regulatory cis-elements in the promoter.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-07-18T18:24:17Z No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 370583 bytes, checksum: 949df73c78eb106c4c4cee4a0d7df145 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-18T18:24:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 370583 bytes, checksum: 949df73c78eb106c4c4cee4a0d7df145 (MD5) Previous issue date: 2002-02-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A ingestão de grãos de leguminosas, como a soja e derivados, resulta no aparecimento de sintomas desagradáveis, o que limita o seu consumo. Dentre os sintomas desagradáveis, destaca-se a flatulência, que é resultante do metabolismo anaeróbico de α-1,6-galactosídeos de rafinose (RO: oligossacarídeos de rafinose) presentes nos grãos das leguminosas em geral. A remoção desses açúcares das sementes ou do extrato hidrossolúvel poderia aumentar o consumo de alimentos derivados de soja. Vários processos para redução do conteúdo de RO em derivados de soja já foram descritos; entretanto, a hidrólise enzimática dos RO, catalisada por α-galactosidases, parece ser o mais promissor. O objetivo deste trabalho foi verificar a eficiência da α-galactosidase de sementes de soja em germinação para hidrolisar os RO presentes no extrato de soja. Sementes de soja (Glycine max , vr. CAC-1) foram germinadas por 60 h, a 27 °C. O extrato enzimático foi obtido pela trituração das sementes em tampão citrato/fosfato de sódio, pH 5,0. A suspensão foi filtrada e centrifugada, e o extrato enzimático resultante, utilizado para a purificação da α-galactosidase. Em uma primeira abordagem, o extrato enzimático foi fracionado em um sistema de duas fases aquosas (SDFA), formado por uma mistura de 16% (p/p) de PEG 1500, 16% (p/p) de fosfato de sódio pH 5,0 e 12% (p/p) de NaCl. A enzima presente na fase superior do SDFA foi dialisada e submetida à cromatografia de troca iônica em coluna de CM-Sepharose, pH 4,0. As frações com atividade de α-galactosidase, eluídas com um gradiente de NaCl (0-0,8M), foram reunidas, concentradas por ultrafiltração, originando a α-galactosidase semi-purificada. A α-galactosidase foi purificada 12,4 vezes e o rendimento do processo de purificação foi de 13,5%. Atividade máxima de α-galactosidase foi detectada em pH 5-6 a 50 °C. A enzima manteve-se em torno de 100% da atividade original após pré- incubação por 3 h, a 35 e 40 °C, mas somente 50% da atividade original foi mantida após pré-incubação a 45 °C. K M ap para ρNPGal, melibiose e rafinose determinados pelo método do duplo-recíproco foram de 0,30 mM, 0,63 mM e 6,16 mM, respectivamente. A enzima hidrolisou com maior intensidade rafinose, seguido de ρNPGal, estaquiose e melibiose. Galactose, rafinose, melibiose, CuSO 4 , SDS e CAC-1l 2 atuaram como inibidores da atividade da enzima parcialmente purificada. Resultados do tratamento do leite de soja com a enzima mostraram redução de 72,3% de estaquiose e 89,2% de rafinose após um período de incubação de 6h, a 40 °C. Com o objetivo de aumentar o rendimento do processo de purificação, visando futuras aplicações em ensaios biológicos, um segundo protocolo foi estabelecido. O extrato enzimático obtido, como já descrito, foi submetido à crioprecipitação, precipitação ácida, fracionamento com sulfato de amônio (20-50% de saturação) e cromatografia de filtração gélica em Sephadex G-100. A α-galactosidase foi semi purificada em quatro etapas, com índice de purificação de 21,33 vezes e recuperação de 44% da atividade enzimática. Em conclusão, observamos que a adição de α -galactosidase ao extrato de soja hidrolisou uma fração significativa dos carboidratos não digeríveis, estaquiose e rafinose, podendo diminuir a flatulência causada por esses oligossacarídeos e assim aumentar o uso desta fonte protéica vegetal na alimentação humana e animal. Além disso, essa enzima apresenta características cinéticas compatíveis com as exigências para sua utilização em processos industriais, visando a diminuição nos teores dos oligossacarídeos de rafinose. / The ingestion of legume seeds, like soy and derived products, results in unpleasant symptoms, which limits its consumption. Among the unpleasant symptoms, flatulence is the major one, which results from the anaerobic metabolism of α-1,6-galactosides of raffinose (RO: Raffinose oligosaccharides) generally presents in legume seeds. Removal of those sugars from soy seeds or soybean derived products would have a positive impact in soy food consumption. Several processes for RO content reduction in soy products were described, however, enzymatic hydrolyze of RO by α-galactosidase seems to be the most promising. The objectives of this work were to text α -galactosidase the efficiency from germinated soy seeds to hydrolyze RO present in soybean milk. Soy seeds (Glycine max , cv CAC-1) were allowed to germinate for 60 h, at 27 °C. The enzymatic extract was obtained by seed trituration in a citrate /sodium phosphate, pH 5.0. Then the suspension was filtered, centrifuged and the resulting enzymatic crude extract used for α-galactosidase purification. First, the enzymatic extract was fractionated in a Aqueous Two-Phase System (ATPS) consisted of a 16 % (w/w) polyethyleneglycol (PEG 1500) solution, 16% (w/w) of sodium phosphate pH 5.0 and 12% (w/w) of NaCl. The enzyme present in the upper phase of the ATPS was dialyzed and loaded onto a CM-Sepharose Fast Flow ionic exchange column, pH 4.0. The fractions with activity of α- galactosidase, were eluted with a gradient of NaCl (0-0.8M), they were pooled together, concentrated by ultra filtration, producing α-galactosidase partially purified. α-Galactosidase was partially purified in two stages. Purification index was 12.4 times with enzymatic activity recovery of 13.5%. Maximum α- galactosidase activity was detected in pH range of 5-6 and 50 °C. The enzyme maintained near 100% of original activity after pre-incubation for 3h at 35 and 40 °C, but only 50% of original activity after pre-incubation at 45 °C. K M app values for hydrolyze of ρNPGal, melibiose and rafinose was of 0.30, 0.63 and 6.16 mM, respectively. The enzyme was able to hydrolyze better rafinose, followed by ρNPGal, stachyose and melibiose. Galactose, raffinose, melibiose, CuSO 4 , SDS and CAC-1l 2 inhibited the enzyme activity. Soybean milk treated with α-galactosidase showed reduction of 72.3 and 89.2% in the stachyose and raffinose contents, respectively, after incubation for 6h at 40oC. In order to increasing the purification process efficiency, seeking future application in biological assays, a second protocol was established. Enzymatic extract was submitted to cryoprecipitation, acid precipitation and fractionation with ammonium sulphate (20-50% of saturation) and filtrated by gel chromatography. The extract was loaded onto Sephadex G-100 column. α-Galactosidase was partially purified in four stages. Purification index was 21.33 times with enzymatic activity recovery of 44%. In conclusion, we observed that the addition of α-galactosidase to soybean extract hydrolyzed a significant fraction of the carbohydrates non digestible, rafinose oligosaccharides, that can reduce the flatulence caused by those oligosaccharides and also can increase the use of this protein vegetable source in the human and animal feeding. Besides, that enzyme presents compatible kinetic characteristics for use in industrial processes, with the objective to reduce rafinose oligosaccharides content. / Dissertação importada do Alexandria

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-07-20T13:35:31Z No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 286988 bytes, checksum: d9f6fc5b932ecff9285c6e82130b932f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-20T13:35:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 286988 bytes, checksum: d9f6fc5b932ecff9285c6e82130b932f (MD5) Previous issue date: 2001-03-06 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Este trabalho teve como objetivo analisar alguns aspectos da tolerância ao Al em dois cultivares de arroz: Maravilha (sensível: CNA-6843-1) e Fernandes (tolerante: CNA-1158), em solução nutritiva. Num primeiro experimento, plantas dos dois cultivares foram expostas ao Al em soluções nutritivas com diferentes proporções de NO 3- :NH 4+ e avaliados os efeitos do Al sobre o crescimento das plantas e sobre a liberação de H + para a solução nutritiva. Independente da proporção NO 3- :NH 4+ , tanto o comprimento quanto a produção de matéria seca de raízes e parte aérea diminuíram na presença de Al, nos dois cultivares, principalmente no sensível. O cultivar tolerante mostrou-se mais eficiente no consumo de H + quando o N disponível estava exclusivamente na forma nítrica. O sensível, entretanto, mostrou-se mais eficiente na liberação de H + para a solução nutritiva quando o N foi fornecido sob duas formas ou exclusivamente na forma amoniacal. Num segundo experimento, as plantas dos dois cultivares foram expostas a duas concentrações de Al e avaliados seus efeitos sobre os teores, as taxas de absorção líquida e os índices de eficiência de utilização de alguns elementos minerais, nas duas partes das plantas. Na presença de Al as plantas apresentaram teores mais elevados deste elemento nas duas partes da planta, principalmente nas raízes. O cultivar tolerante mostrou-se mais eficiente na retenção deste elemento nas raízes. Na presença de Al, observou-se redução nos teores de todos os elementos minerais estudados, tanto nas raízes como na parte aérea, exceto no de Ca nas raízes e no de K na parte aérea, do cultivar tolerante. De modo geral, as reduções nos teores destes elementos minerais foram mais intensas no cultivar sensível, nas duas partes das plantas. As taxas de absorção líquida, sofreram reduções crescentes com os níveis de Al na solução nutritiva, tendo o cultivar tolerante apresentado, de modo geral, taxas mais elevadas para todos os elementos minerais estudados. O efeito do Al sobre os índices de eficiência de utilização dos elementos minerais estudados foi variado. No cultivar tolerante, observou-se aumento nos índices de eficiência de utilização de P, Ca e Mg, permanecendo inalterado o de K. No cultivar sensível, os índices de eficiência de utilização de P e K diminuíram, o de Ca permaneceu inalterado e o de Mg aumentou. Na ausência de Al os cultivares não diferiram entre si quanto a estes índices, mas na presença deste elemento, seus valores foram, de modo geral, mais elevados no cultivar tolerante. / The objective of this work was to study some aspects of Al tolerance in two rice cultivars: Maravilha (sensitive: CNA-6843-1) and Fernandes (tolerant: CNA:1158), grown in nutrient solution. In a first experiment, plants of the two cultivars were exposed to Al in nutrient solutions with different NO 3- :NH 4+ proportions and the Al effects on plant growth and on H + exsudation to the nutrient solution were evaluated. Independent of the NO 3- :NH 4+ proportion, both the length and dry matter yield of roots and shoots decreased in Al presence, in both cultivars, mainly in the sensitive. The tolerant cultivar showed higher efficiency in the H + consumption in nutrient solution with the nitric form. The sensitive, however, showed higher the N exclusively in efficiency in the exudation of H + to the nutrient solution, when N was supplied in both N forms or exclusively in the ammonium form. In a second experiment, plants of both cultivars were exposed to two Al concentrations and its effects on the contents, on the net absorption rates and on the use efficiency indices of some mineral elements, were evaluated in both parts of the plants. In Al presence the plants exhibited increased contents of these element in both parts of the plant, mainly in the roots. The tolerant cultivar was more efficient in the Al retention in the roots than the sensitive one. In Al presence, the contents of all mineral elements decreased in both roots and shoots, except the content of Ca in the roots and of K in the shoots, of the tolerant cultivar. In general, the reductions in the mineral contents were stronger in the sensitive cultivar, in both parts of the plants. The net absorption rates reductions increased with Al levels in the nutrient solution. The tolerant cultivar, in general, exhibited higher absorption rates of all mineral elements studied. Aluminum effect on the use efficiency indices was quite variable. In the tolerant cultivar, the use efficiency indices of P, Ca and Mg increased and of K remained unaffected. In the sensitive cultivar, the use efficiency indices of P and K decreased, of Ca remained unaffected and of Mg increased. In Al absence there was no difference between cultivars with respect to these indices, but in the presence of this element, the tolerant cultivar showed higher values. / Dissertação importada do Alexandria

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-28T13:45:34Z No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 1182586 bytes, checksum: e4dbe84cb873193781b886c6f32cfe7e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-28T13:45:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 1182586 bytes, checksum: e4dbe84cb873193781b886c6f32cfe7e (MD5) Previous issue date: 2001-12-12 / Ovelhas deslanadas em diferentes estágios reprodutivos foram inoculadas com taquizoítos de N. caninum amostra “NC-beef” com o intuito de estudar a patofisiologia da doença nestes animais e verificar a possibilidade de serem usadas como um modelo experimental de neosporose bovina. Utilizaram -se cinco ovelhas gestantes (uma com 15 dias, duas com 30 dias, duas com 90 dias), três não gestantes e duas com 10 dias após o parto. Os animais eram sorologicamente negativos para N.caninum e T. gondii. Duas ovelhas gestantes, não inoculadas, foram utilizadas como controle negativo. Todas as ovelhas inoculadas apresentaram anticorpos contra o parasita a partir da quarta semana pós- inoculação. Igualmente, todos os cordeiros nascidos de ovelhas inoculadas apresentaram anticorpos anti-N. caninum. Nenhuma das ovelhas gestantes apresentou aborto, porém, nas inoculadas com 30 dias de gestação, constatou-se reabsorção fetal. A ovelha inoculada com 15 dias teve um cordeiro aparentemente normal e aquelas inoculadas com 90 dias de gestação tiveram o nascimento a termo de um cordeiro morto e outro fraco com dificuldade de se locomover. Os cordeiros necropsiados, nascidos de ovelhas inoculadas antes ou durante a gestação, apresentaram alterações histopatológicas em diferentes tecidos, sendo as mais severas observadas no sistema nervoso central, caracterizadas pela presença de formas císticas do parasita, associadas com infiltrado inflamatório predominantemente mononuclear, áreas de necrose e em alguns casos presença de calcificação. Os cordeiros nascidos de ovelhas inoculadas 10 dias após o parto não apresentaram sinais clínicos da doença nem anticorpos contra o parasita. O cordeiro necropsiado não apresentou lesões em nenhum dos tecidos analisados. Um cordeiro nascido de ovelha não inoculada, não apresentou alterações microscópicas em nenhum dos tecidos analisados. Pelas lesões observadas nos cordeiros nascidos de animais inoculados pode-se concluir que ovelhas deslanadas podem ser usadas como modelo experimental de neosporose bovina. / Sheep out of wool, in different reproductive stages, were inoculated with N. caninum tachizoites strain “NC-beef” with the purpose of study the pathophysiology of the disease and the possibility of using them as an experimental model of bovine neosporosis. Inoculation by intravenous route was used. Five pregnant sheep (one with 15 days, two with 30 days, two with 90 days), three not pregnant and two with 10 days post partum were inoculated. By serology, the animals were negative for N.caninum and T. gondii. Two pregnant sheep, not inoculated, were used as negative controls. Fourth weeks after the inoculation, all animals showed antibodies (IgG) against the parasite and so did their lambs. Abortion wasn’t observed in sheep inoculated during pregnancy. In the animals inoculated with 30 days of gestation, was verified fetal reabsorption. A clinical normal lamb born from 15 days of gestation inoculated sheep and two weak lambs from those inoculated with 90 days of gestation. All lambs born from sheep inoculated before or during the gestation showed hystopathologic alterations in different tissues. The most severe were observed in the central nervous system. Inflammatory nonsuppurative processes with or without dystrophic mineralization were the most common lesions. Presence of tissue cysts was also observed. Clinical signs of the disease or antibodies against the parasite in the lambs born from sheep inoculated 10 days post partum weren’t observed. In the necropsy of one lamb belonging to this group no pathologic sign was observed. None of the animals of the control group showed hystopathologic alterations. After analyzing the lesions found, we can conclude that sheep out of wool can be used as an experimental model of bovine neosporosis.