Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 462290.pdf: 2133615 bytes, checksum: 5c5628b9cc5fd71ee1dcc7d68f182c36 (MD5) Previous issue date: 2014-08-22 / Tuberculosis (TB) is an infectious disease caused mainly by Mycobacterium tuberculosis. The increasing number of infected patients among immune compromised populations and emergence of drug-resistant strains has created urgent need of new strategies to treat TB. Understanding relevant pathways (as the purine salvage) will reveal details of M. tuberculosis that might be used to develop new strategies to combat this pathogen. Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase (HGPRT) is an enzyme from the purine phosphoribosyltransferase (PRTase) family and catalyzes the conversion of hypoxanthine or guanine and 5-phosphoribosyl-α-1-pyrophosphate (PRPP) to inosine 5 -monophosphate (IMP) or guanosine 5 -monophosphate (GMP), and pyrophosphate (PPi). Here we describe the mode of action of M. tuberculosis HGPRT (MtHGPRT) through kinetic and thermodynamical analysis. Experiments were also performed to determine the oligomeric state in solution, pH, temperature and solvent isotope effects. These data allows us to compare MtHGPRT to homologues from other species and look for similarities and differences in its mechanism and constants. We hope the experiments presented here will contribute to the understanding of this pathogen purine salvage pathway. / A Tuberculose (TB) ? uma doen?a infecciosa causada principalmente por Mycobacterium tuberculosis. O aumento de pacientes infectados entre a popula??o imunocomprometida e a emerg?ncia de cepas resistentes a drogas criam uma necessidade de novas estrat?gias para tartar a TB. Entender como funcionam as vias metab?licas relevantes, como a via de salvamento de purinas, poder? revelar detalhes do M. tuberculosis que poder?o ser ?teis para o desenvolvimento de novas estrat?gias de combate a este pat?geno. A hipoxantina-guanina fosforribosiltransferase (HGPRT) ? uma enzima da familia das purina fosforribosiltransferases (PRTase) e catalisa a convers?o de hipoxantina ou guanina e 5-fosforribosilpirofosfato-α-1-pirofosfato (PRPP) em inosina 5 -monofosfato (IMP) ou guanosina 5 -monofosfato (GMP) respectivamente, com a libera??o de pirofosfato inorg?nico (PPi). Aqui n?s descrevemos o modo de a??o da HGPRT de M. tuberculosis (MtHGPRT) atrav?s de an?lises cin?ticas e termodin?micas. Tamb?m foram realizados experimentos para determinar o estado oligom?rico da enzima em solu??o e os efeitos de pH, temperatura e efeitos isot?picos do solvente. Esses dados nos permitem comparar a MtHGPRT com hom?logos de outras esp?cies e procurar por similaridades e diferen?as nos seu mecanismo e constantes. N?s esperamos que os experimentos apresentados aqui contribuam para o entendimento da via de salvamento de purinas desse pat?geno.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 383074.pdf: 317111 bytes, checksum: 586824978be7b33eb0edbe3378f0449d (MD5) Previous issue date: 2006-09-12 / Introdu??o Devido a sua estrutura mineralizada e inerte, ao seu tamanho e a sua localiza??o, dentes molares e pr?-molares s?o considerados boas fontes para obten??o do DNA necess?rio para a identifica??o molecular de pessoas. V?rias metodologias t?m sido empregadas para obten??o de DNA a partir dos dentes, sendo que o uso do equipamento de pulveriza??o criog?nica Freezer mill ? para a pulveriza??o e da coluna concentradora MicroconTM-100 s?o procedimentos padr?o mais utilizados e difundidos. O uso conjunto dessas duas metodologias ?, por?m, demorado e de custo elevado. N?s desenvolvemos este trabalho com o objetivo de testar e padronizar um novo m?todo econ?mico e r?pido para a obten??o de DNA de dentes para estudos forenses. O resultado deste trabalho vem a atender aos interesses do Conv?nio de Coopera??o entre o Programa de P?s-Gradua??o em Biologia Celular e Molecular da PUCRS (PPGBCM-PUCRS) e o Instituto-Geral de Per?cias (IGP-RS) da Secretaria da Justi?a e da Seguran?a P?blica do Rio Grande do Sul (SJS-RS), o qual visa desenvolver pesquisas que atendam ?s necessidades de avan?o na linha de investiga??o da Biologia Forense. Material Foram utilizados dentes molares ou pr?-molares provenientes de 26 cad?veres n?o identificados previamente, depositados no DML-RS. Para cada cad?ver avaliado foi registrado seu estado geral de apresenta??o, o tempo estimado de morte, a idade e o local onde o cad?ver foi encontrado. Os dentes foram retirados dos cad?veres, armazenados por no m?nimo 24 horas a 80?C e, posteriormente, utilizados nos testes. A escolha dos corpos foi aleat?ria, abrangendo v?rios est?gios de decomposi??o, tempo de morte e locais onde foram encontrados. Metodologia Material Foram utilizados dentes molares ou pr?-molares provenientes de 26 cad?veres n?o identificados previamente, depositados no DML-RS. Para cada cad?ver avaliado foi registrado seu estado geral de apresenta??o, o tempo estimado de morte, a idade e o local onde o cad?ver foi encontrado. Os dentes foram retirados dos cad?veres, armazenados por no m?nimo 24 horas a 80?C e, posteriormente, utilizados nos testes. A escolha dos corpos foi aleat?ria, abrangendo v?rios est?gios de decomposi??o, tempo de morte e locais onde foram encontrados. Metodologia Para a economia: (I) foi usado o moinho mineral?gico IKA (Ika do Brasil RJ- Brasil), de baixo custo em compara??o ao uso do Freezer mill?; (II) foi usado precipita??o do DNA com o uso de isopropanol, de baixo custo em compara??o ao uso do MicroconTM-100. Para a rapidez: foi testado o tempo de duas horas para a incuba??o do tecido no tamp?o de lise celular em compara??o ao tempo padronizado de 12 horas. Procedimentos: N?s usamos o moinho mineral?gico IKA para obten??o de tecido pulverizado dos dentes a fim de extrair DNA na quantidade e qualidade necess?rias para a obten??o de perfil gen?tico. Cada amostra foi mo?da e separada em quatro subamostras, nas quais foi avaliado o tempo de incuba??o (2 ou 12 horas de incuba??o) e o m?todo de precipita??o final do DNA (MicroconTM 100 ou isopropanol). A quantidade e a qualidade do DNA obtido foram testadas. A viabilidade de uso do DNA nuclear e do DNA mitocondrial obtido foi verificada pela capacidade de amplifica??o por t?cnica de Polymerase Chain Reaction (PCR) das amostras atrav?s do uso dos kits apropriados. Resultados e Discuss?o: A utiliza??o do moinho mineral?gico IKA para pulveriza??o de tecido foi eficaz em todas as amostras testadas. As amostras processadas com MicroconTM-100 n?o apresentaram diferen?as significativas na quantidade de DNA obtido quando incubadas por 2 ou 12 horas, o que permite aceitar que uma incuba??o de duas horas ? suficiente para o procedimento padr?o. O mesmo foi verificado nos subgrupos, nos quais, a precipita??o foi realizada com isopropanol. Com o uso do MicroconTM-100 obteve-se uma concentra??o superior de DNA quando comparado ao uso do isopropanol (p<0,001). No entanto, a precipita??o por isopropanol obteve um DNA de pureza superior ao do DNA processado com MicroconTM-100 (p<0,001). Dos 26 casos avaliados, dentes de 20 corpos tiveram seu DNA nuclear autoss?mico identificado com sucesso e, em dois dos 20 casos, foi tamb?m utilizada com sucesso a an?lise do cromossomo Y, n?o excluindo v?nculo patril?neo. Os seis demais casos apenas foram identificados pela an?lise do DNA mitocondrial, n?o excluindo o v?nculo matril?neo. A menor concentra??o de DNA derivada da precipita??o realizada com isopropanol parece ter sido compensada pela maior pureza do material uma vez que houve similaridade do n?meros de loci analisados com sucesso quando se comparam MicroconTM-100 e isopropanol. O estado geral do cad?ver, o tempo estimado de morte, a idade e o local onde o cad?ver foi encontrado n?o foram significativamente associados com a quantidade ou a qualidade do DNA obtido, bem como com o n?mero de loci analisados com sucesso. Conclus?o: A utiliza??o do moinho mineral?gico IKA para pulveriza??o de tecido foi eficaz e pode substituir o uso do Freezer mill? reduzindo o custo dos procedimentos. A precipita??o com isopropanol foi eficaz e pode substituir o uso do MicroconTM-100 reduzindo ainda mais o custo dos procedimentos. Um tempo de duas horas para a incuba??o do tecido no tamp?o de lise celular foi eficaz para reduzir o tempo dos procedimentos. Os experimentos desenvolvidos neste trabalho testaram e padronizaram um novo m?todo r?pido e econ?mico para a obten??o de DNA de dentes para estudos forenses, que pode ser empregado em outros caso de identifica??o de cad?veres humanos. O resultado deste trabalho poder? atender aos interesses do Conv?nio de Coopera??o entre o PPGBCM-PUCRS e o IGP-RS no desenvolvimento e no avan?o na linha de investiga??o da Biologia Forense.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 383071.pdf: 1037097 bytes, checksum: 64845ab6c2bfb968dc78afc6dab91fc8 (MD5) Previous issue date: 2006-06-28 / A avalia??o da citotoxicidade dos materiais dentais ? de grande import?ncia na Odontologia. O formocresol (FC) e o tricresol formalina (TC) s?o duas medica??es utilizadas na odontologia para desinfec??o do canal radicular, que cont?m formalde?do na sua formula??o. Estes produtos s?o considerados bons antimicrobianos, mas pesquisas a respeito da toxicidade destes medicamentos ainda s?o necess?rias. O presente estudo avaliou in vitro a citotoxicidade do formalde?do, do FC e do TC, utilizando tr?s linhagens celulares estabelecidas, as c?lulas HeLa, NIH3T3 e Hep2, cultivadas em condi??es padr?o. As c?lulas foram deixadas em contato com cada produto durante 1, 2, 3, 4 ou 5 minutos, sendo ent?o incubadas por 24 horas, 48 horas ou 7 dias. O teste de citotoxicidade utilizado foi o ensaio MTT. Os resultados deste estudo mostraram que os produtos testados foram t?xicos ?s diferentes linhagens celulares estabelecidas, em todas as condi??es testadas. O formocresol foi o produto que apresentou menor citotoxicidade, sendo este resultado estatisticamente significante quando comparado com o tricresol formalina e o formalde?do.

Submitted by Sandro Camargo (sandro.camargo@unipampa.edu.br) on 2015-05-08T02:26:40Z No. of bitstreams: 1 127110042.pdf: 1189553 bytes, checksum: ea7e59cc1e2251e7776d2f1d3a611d89 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-08T02:26:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 127110042.pdf: 1189553 bytes, checksum: ea7e59cc1e2251e7776d2f1d3a611d89 (MD5) Previous issue date: 2014-08-07 / As pesquisas no desenvolvimento de fármacos a partir de plantas têm apresentado resultados promissores para as mais diversas doenças. Ceiba speciosa A. St. Hill (paineira) é uma espécie arbórea tropical pertencente à família Malvaceae, que no Rio Grande do Sul ocorre principalmente na região de floresta do Alto Uruguai. Existem relatos populares de utilização do chá das cascas desta espécie na região noroeste do Rio Grande do Sul – Brasil, para a redução dos níveis sanguíneos de colesterol. Contudo, ainda não foram encontrados dados científicos sobre a confirmação da eficácia e segurança de seus efeitos, tampouco dados fitoquímicos acerca da espécie. A literatura apresenta estudos sobre outras espécies do gênero Ceiba, sendo que Ceiba pentandra, empregada como agente hipoglicêmico, representa a espécie mais investigada. Dessa forma, este trabalho teve por objetivo realizar uma avaliação preliminar do potencial antioxidante e da toxicidade de Ceiba speciosa (A. St.-Hill). Para tanto, o extrato aquoso de C. speciosa foi preparado conforme o método de uso popular e seco por liofilização (denominado EALCs), para utilização na realização dos testes in vitro. O precipitado obtido a partir do extrato etanólico bruto (Cs1) também foi utilizado nos testes. Dando sequência às análises, foram realizadas: a análise fitoquímica da espécie; determinação do dano oxidativo e do potencial antioxidante e avaliação da genotoxicidade. Os resultados obtidos neste estudo foram analisados através do software estatístico Graph Pad Prism 5.0. O extrato aquoso de Ceiba speciosa e de Cs1 demonstraram potencial antioxidante in vitro frente a lipídeos e proteínas nas concentrações de 50 e 10 μg/mL. Nestas concentrações ainda foi observada uma atividade superior a 50% na avaliação da captação do radical 2,2-difenil-1- pricril-hidrazil (DPPH). Além disso, concentrações de 10, 5 e 2 μg/mL não apresentaram toxicidade nos parâmetros avaliados, sugerindo a relativa segurança na sua utilização popular. Desta forma, é possível indicar que a dose de 10 μg/mL é a dose que teve melhores resultados de forma geral, uma vez que não apresentou toxicidade e demonstrou potencial antioxidante. Por se tratar de uma planta de ampla utilização no noroeste do estado do Rio Grande do Sul, o presente estudo representa a primeira avaliação a respeito da caracterização da espécie, e da segurança de sua utilização, uma vez que as doses que não apresentaram toxicidade estão dentro do parâmetro de ação biológica, em humanos. / The research in developing drugs from plants have shown promising results for many different diseases. Ceiba speciosa (A. St. Hill) is a tropical tree species of the Malvaceae family, which in Rio Grande do Sul occurs mainly in the region of the Upper Uruguay Forest. There are reports of popular use of the bark tea of this species in the Northwestern region of Rio Grande do Sul - Brazil, to reduce blood cholesterol levels. However, both no scientific data to confirm the efficacy and safety of its effects found, or phytochemicals data about the species yet. The literature presents studies on others species of the genus Ceiba; and Ceiba pentandra, employed as a hypoglycemic agent, is the most investigated species. Thus, this study aimed to conduct a preliminary assessment on antioxidant potential and toxicity of Ceiba speciosa. Thus, Ceiba speciosa aqueous extract was prepared according to popular method, and concentrated by freeze-drying use (called EALCs), for use in testing in vitro. The precipitate obtained from crude ethanol extract (Cs1) was also used in these tests. Continuing the analyzis were performed: a phytochemical analysis of the species, determination of oxidative damage and antioxidant potential, and assessment of genotoxicity. The results obtained in this study were analyzed using the statistical software Graph Pad Prism 5.0. The aqueous extract of Ceiba speciosa and Cs1 demonstrated in vitro antioxidant potential against lipid and protein concentrations of 50 and 10 μg/mL. At these concentrations a higher activity and 50% was observed in the evaluation of the capture of the radical 2,2-diphenyl-1-pricril- hydrazyl (DPPH). Furthermore, concentrations of 10, 5 and 2 μg/mL showed no toxicity in the evaluated parameters, suggesting the relative safety of their popular use. Thus, it is possible to indicate that dose of 10 μg/ml is which had better results overall, since it does not present toxicity, and showed potential antioxidant. Because it is a plant of wide use in the Northwest of the state of Rio Grande do Sul, the present study is the first evaluation regarding the characterization of the species and the safety of their use, since the doses showed no toxicity, being within parameter of biological action in humans.

Submitted by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2016-04-04T16:58:41Z No. of bitstreams: 1 Cristiane de Freitas Rodrigues.pdf: 1197178 bytes, checksum: 5dd8d78c2302bcebac49fdf2b31c3c10 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-04T16:58:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cristiane de Freitas Rodrigues.pdf: 1197178 bytes, checksum: 5dd8d78c2302bcebac49fdf2b31c3c10 (MD5) Previous issue date: 2015-09-26 / A Ceratonia siliqua L. popularmente conhecida como alfarroba, faz parte da classe dos diversos alimentos que apresentam uma grande quantidade de antioxidantes, principalmente pela composição dos compostos fenólicos. Além disso, este alimento tem sido utilizado como substituinte do cacau em diversos produtos alimentícios em função do sabor e cor similares, porém com reduzido conteúdo de lipídeos. Alguns estudos sugerem que o extrato aquoso de alfarroba apresenta uma ação protetora contra os radicais livres. Entretanto, são necessários testes in vitro e in vivo a fim de comprovar a eficácia deste alimento funcional. Para tanto, utilizamos o Caenorhabditis elegans como modelo experimental em prol de substituir o uso de mamíferos e oferecer novas possibilidades de ensaios para avaliar a eficácia de produtos naturais. Neste presente estudo observou que o extrato aquoso da alfarroba apresentou um excelente potencial sequestrador de espécies reativas in vitro pelos ensaios de redução do radical DPPH e de redução do Ferro. Tal efeito pode ser devido à presença dos compostos fenólicos, conforme verificado na análise bromatológica. A partir disso, no estudo percorreu as atividades in vivo. O extrato não apresentou toxicidade significativa até a concentração testada (62.0μg/mL), conforme observado nos ensaios de sobrevivência e longevidade. Também foi observado que o extrato de alfarroba protege contra a mortalidade induzida por paraquat em curto prazo, porém o mesmo não ocorreu ao longo prazo. Encontrou-se também redução da peroxidação lipídica e um aumento da atividade enzimática da catalase, sugerindo estar relacionada ao fator de transcrição DAF-16, importante para a defesa antioxidante nestes animais. Além disso, nosso estudo demonstrou que o extrato aquoso da alfarroba é mais eficiente do que o extrato de cacao na redução dos níveis de triglicerídeos em nematoides selvagens e em mutantes tub-1 (mais obesos), não alterando a ingestão alimentar. Este efeito pode estar relacionado com elevado de teor de fibras presentes no extrato, conforme observado pelo ensaio bromatológico. Em 8 conclusão, nosso estudo sugere que a utilização de alfarroba é segura e pode ser de fato bastante benéfica ao consumidor, fornecendo compostos fenólicos e fibras que podem auxiliar no envelhecimento e na redução de peso. / The Ceratonia siliqua L. popularly known as Carob, part of the class of many foods contain a large number of antioxidants, especially phenolic compounds of the composition. Moreover, this food has been used as cocoa substituent in many food products depending on the flavor and color similar, but with reduced lipid content. Some studies suggest that the aqueous extract of carob has a protective effect against free radicals. However, they are necessary in vitro and in vivo in order to prove the effectiveness of this functional food. Therefore, Caenorhabditis.elegans used as an experimental model towards replace the use of mammalian and offer new opportunities assays to assess the efficacy of natural products. Our study has shown that the aqueous extract of carob showed excellent potential kidnapper of reactive species by in vitro assays to reduce the DPPH radical and reduction of iron. This effect may be due to the presence of phenolic compounds as found in chemical analysis. From this, our study ran activities in vivo. The extract showed no significant toxicity to the tested concentration (62.0μg / ml), as noted in survival and longevity tests. It was also noted that the carob extract protects against mortality induced by paraquat in the short term, but the same was not true in the long run. It was found also reducing lipid peroxidation and an increase in the enzymatic activity of catalase, suggesting be related to the transcription factor DAF-16 important for the antioxidant defense in these animals. Furthermore, our study has demonstrated that the aqueous extract of carob is more efficient than cacao extract in reducing triglyceride levels in wild nematodes and tub-1 mutants (most obese) without altering food intake. This effect may be related to high content of fiber present in the extract, as observed by bromatological assay. In conclusion, our study suggests that the use of carob is safe and can be very beneficial to the consumer fact, phenolic compounds and providing fibers which can assist in aging and weight reduction.

Submitted by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2016-04-08T15:22:01Z No. of bitstreams: 1 Emily Pansera Waczuk.pdf: 1582858 bytes, checksum: b6530e7a5d41da951557fd7d3947c87d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-08T15:22:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Emily Pansera Waczuk.pdf: 1582858 bytes, checksum: b6530e7a5d41da951557fd7d3947c87d (MD5) Previous issue date: 2014-03-06 / A Euphorbia tirucalli, popularmente conhecida como avelós, é uma planta tóxica, tradicionalmente usada como um chá na medicina popular brasileira para o tratamento de várias doenças, demonstrando atividades antibacteriana, antiviral e anticarcinogênica. No entanto, não há nenhum relatório científico dos efeitos tóxicos podem surgir a partir de consumo desta planta, bem como os mecanismos pelos quais ela induz sua toxicidade. Portanto, o objetivo do presente estudo foi avaliar in vitroa genotoxicidade e citotoxicidade do extrato aquoso de E. tirucalliem leucócitos humanos usando os testes do ensaio cometa e azul de tripan, respectivamente. Adicionalmente, o efeito do extrato aquoso de E. tirucalli sobre a fragilidade osmótica foi investigada em eritrócitos humanos. Além disso, avaliamos a expressão de genes que codificam enzimas antioxidantes (SOD2, CAT e GPx4)através de qRT-PCR. Os nossos resultados demonstraram que a exposição de E. tirucalli em leucócitos humanos provocou aumentos significativos de danos no DNA nas concentrações mais elevadas testadas (100-150 µg/mL), que foi associada a uma diminuição significativa da viabilidade celular em concentrações de 10 a 150µg/mL. Por outro lado, a E. tirucalli não induziu a hemólise de eritrócitos humanos em todas as concentrações testadas. A exposição de leucócitos humanosàE. tirucalli(10-50µg/mL) causouregulação positiva significativa sobre no RNAm da SOD2 e expressões dos genes daCAT, e diminuiu significativamente o RNAm da GPx4 nas concentrações mais elevadas (100-150µg/mL).Adicionalmente, a expressão genica do gene da SOD2 foi regulada negativamente na maior concentração testada (150 µg/mL). Em resumo, com base nos resultados de genotoxicidade observados em nosso estudo, recomendamos cautela no uso agudo ou crônico deste preparado caseiro.Com todos estes aspectos, nossos resultados sugerem que o extrato da E. tirucalliinduz genotoxicidade e citotoxicidade em leucócitos humanos, possivelmente através da interação com o sistema enzimático antioxidante, assim, aumentando a formação de ROS e diminuindo o nível de tolerância celular para os constituintes químicos desta planta. / Euphorbia tirucalli, popularly known as avelós, is a toxic plant traditionally used as a tea in the Brazilian folk medicine for the treatment of various diseases, by presentingantibacterial, antiviral and anticarcinogenicproperties. However, there is no scientific report regardingthe toxic effects of this plant in human cells which may occurfrom its consumption, as well as the mechanisms by which it induces its toxicity. Therefore, the objectiveof the present study was to evaluate in vitrothe genotoxicity and cytotoxicity potential of aqueous extract of E. tirucalliin human leukocytes using comet assay and trypan blue exclusion respectively. In addition, the effect of the aqueous extract of E. tirucalli on osmotic fragility was investigated in human erythrocytes. Furthermore, we evaluated the qRT-PCR expressions of selected antioxidant mRNA genes (SOD2, CAT and GPx4). Our results demonstrated that exposure of E. tirucalli to human leukocytes caused significant increase in DNA damage at the higher concentrations tested (100-150 µg/mL), which was associated with a significant decrease of cellular viability at concentrations 10 to 150 µg/mL. In contrast, E. tirucallidid not induce hemolysis of human erythrocytes at all the concentrations tested. Exposure of E. tirucalli (10-50µg/mL)to human leukocytes significantly up-regulated the mRNA of SOD2 and CAT genes expressions, and significantly decreasedthe mRNA of GPx4 at higher concentrations (100-150 µg/mL). In addition, the mRNA gene expression of SOD2 was down-regulated at the highest concentration tested (150 µg/mL).In summary, based in the results of genotoxicity observed in our study, we recommend caution in the acute or chronic use of thishomemade prepared.Taken together, our results suggest that the extract aqueous of E. tirucalliinduces genotoxicity and cytotoxicity to human leukocytes, possibly by interacting with the antioxidant enzyme system, thereby, increasing the formation of ROSand decreasing the cellular tolerance level to chemical constituents of this plant. Therefore, we recommend caution in the acute or chronic use of this plant.

Submitted by Hellen Luz (hellencrisluz@gmail.com) on 2017-07-24T16:22:21Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_PerfilMolecularGenes.pdf: 1048037 bytes, checksum: d0479df3122ed434a7a26c2cbc4534bf (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2017-07-25T13:09:26Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_PerfilMolecularGenes.pdf: 1048037 bytes, checksum: d0479df3122ed434a7a26c2cbc4534bf (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-25T13:09:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_PerfilMolecularGenes.pdf: 1048037 bytes, checksum: d0479df3122ed434a7a26c2cbc4534bf (MD5) Previous issue date: 2014-01-23 / Nos últimos anos, novos anticoagulantes têm sido desenvolvidos com o objetivo de minimizar as dificuldades encontradas no manejo clínico das drogas convencionais, porém não existem dados publicados sobre a sua farmacogenética. Diante da hipótese de que os polimorfismos relacionados à sua metabolização possam ser fonte de variabilidade genética, o presente estudo objetiva realizar inferências de epidemiologia molecular dos polimorfismos nos genes CyP3a4 (rs2246709) e CyP2j2 (rs890293), relacionados ao metabolismo do Rivaroxaban, um novo inibidor direto do fator Xa. São analisadas 136 amostras de indivíduos saudáveis de uma população do Norte do Brasil que apresenta um elevado grau de mistura interétnica. Para alcançar o objetivo farmacogenético foi realizada, em paralelo, análise de ancestralidade genômica nos indivíduos investigados. Os resultados demonstraram diferenças significativas entre os genótipos do CyP3a4 observados no estudo, quando comparados a todas as populações ancestrais para o polimorfismo 99365719 a>G (P<0,05). a população miscigenada do Norte do Brasil, portanto, apresentou diferença na distribuição das frequências genotípicas em relação aos grupos ancestrais, formadores de nossa população. O mesmo achado não é observado para polimorfismo do gene do CyP2j2. Destaca-se que o polimorfismo no gene do CyP3a4, na amostra investigada, sofre influência da contribuição étnica européia individual. Considerando, a elevada miscigenação que caracteriza a população local e o avanço da Farmacogenômica na medicina atual, os dados podem contribuir para a melhor compreensão da farmacogenética do novo anticoagulante. / In recent years, new anticoagulants have been developed with the purpose of minimizing the difficulties encountered in the clinical management of conventional dru- gs, but there are no published data on its pharmacogenetics. Considering the hypothe- sis that polymorphisms related to its metabolism may be the source of genetic variability, this study aims to make inferences on molecular epidemiology of polymorphisms in CyP3a4 (rs2246709) and CyP2j2 (rs890293) genes related to the metabolism of Rivaroxaban, a new direct factor Xa inhibitor. 136 samples from healthy individuals in a population of northern Brazil with a high degree of inter-ethnic mix, so as to guarantee that the pharmacogenetic goal was achieved, have been subjected to a parallel analysis of genomic ancestry for the individuals investigated. The results sho- wed significant differences among genotypes for CyP3a4 observed in the study com- pared to all ancestral populations for a polymorphism 99,365,719 a> G ( P < 0.05). The mixed population of northern Brazil, therefore, showed differences in the distribution of genotype frequencies in relation to ancestral groups, forming our population. The same finding was not observed for the CyP2j2 gene polymorphism. It is noteworthy that the polymorphism in the CyP3a4 gene in the investigated sample is influenced by indivi- dual ethnic European contribution. Considering the high miscegenation featuring local people, and the advancement of Pharmacogenomics in current medicine, such data can contribute to a better understanding of the pharmacogenetics of that new anticoagulant.

Submitted by Hellen Luz (hellencrisluz@gmail.com) on 2017-09-20T18:00:09Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_IsolamentoCaracterizacaoAnalise.pdf: 641185 bytes, checksum: 67fcd80f5a59d812927fc3a56104a235 (MD5) / Rejected by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br), reason: Aguardar as orientações on 2017-10-10T16:50:48Z (GMT) / Submitted by Hellen Luz (hellencrisluz@gmail.com) on 2017-10-17T18:08:45Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_IsolamentoCaracterizacaoAnalise.pdf: 641185 bytes, checksum: 67fcd80f5a59d812927fc3a56104a235 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-11-23T17:07:09Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_IsolamentoCaracterizacaoAnalise.pdf: 641185 bytes, checksum: 67fcd80f5a59d812927fc3a56104a235 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-23T17:07:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_IsolamentoCaracterizacaoAnalise.pdf: 641185 bytes, checksum: 67fcd80f5a59d812927fc3a56104a235 (MD5) Previous issue date: 2011-02-01 / FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas / Células-tronco adultas são conhecidas por seu potencial e plasticidade para se diferenciar em vários tipos celulares diferentes (multipotência), tendo assim, implicações para a terapia celular, bem como biotecnologias reprodutivas. No presente trabalho relatamos o isolamento e caracterização de células-tronco mesenquimais (CTM) derivadas de tecido adiposo de bovinos e bubalinos. As células foram isoladas por digestão enzimática da biópsia do tecido adiposo e cultivadas por pelo menos dez passagens in vitro,dando apoio a sua capacidade proliferativa. Estas células também foram submetidas à caracterização imunofenotípica para visualizar a presença de marcadores de CTM, CD90, CD105 e CD79, e ausência de marcadores de Células-Tronco Hematopoiéticas, CD45, CD34 e CD73, A fim de provar a sua multipotência, as células foram induzidas a diferenciação em três tipos de células diferentes e coradas com corantes tecidos-específicos (condrogênico-Alcian Blue, osteogênica-Alizarina Red e adipogênica-Oil-Red O) para confirmar a sua diferenciação em condrócitos, ostoblastos e adipócitos. Nossos resultados indicam que o tecido adiposo de bovinos e bubalinos podem ser usados como fonte de células-tronco mesenquimais (CTM), transformando-as em uma opção interessante de modelos animais para terapia celular e medicina regenerativa. Além disso, essas células podem ser relevantes para a biotecnologia reprodutiva desde o uso de CTM de doadoras nucleares, pois têm sido associadas com um aumento nas taxas de desenvolvimento de embriões clonados. / Adult stem cells are known for their potential and plasticity to differentiate into several different cell types (multipotency), which has implications for cell therapy as well as reproductive biotechnologies. In the present work we report isolation and characterization of mesenchymal stem cells (MSCs) derived from adipose tissue of cattle and buffaloes. Cells isolated by enzymatic digestion of adipose-tissue biopsy were grown for at least ten passages in vitro giving support to of their proliferative capacity. These cells were also subjected to immunophenotypic characterization to visualize the presence, of CD90, CD105 and CD79, and absence, of CD45, CD34 and CD73, wich are positive and negative markers of MSCs, respectively. In order to determine their multipotency, the cells were induced to differentiate into three different cell types and stained with tissue-specific dyes (Chondrogenic-Alcian Blue, Osteogenic- Alizarin Red and Adipogenic-Oil-Red O) to ensure their differentiation into chondrocytes, ostoblasts and adipocytes. Our results indicate that adipose tissue of cattle and buffaloes can be used as a source of mesenchymal stem cells (MSCs), turning them into an interesting option of animal models for cell therapy and regenerative medicine. Additionally, these cells may be relevant for reproductive biotechnology since the use of MSCs as nuclear donors has been linked to an increase in the developmental rates of cloned embryos.

Made available in DSpace on 2017-07-10T14:38:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_claudecir.pdf: 1091974 bytes, checksum: 4f94b2214276891901e6e4d8f8c898c2 (MD5) Previous issue date: 2014-08-08 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Este trabalho teve por objetivo selecionar isolados do fungo Beauveria bassiana em condições de laboratório com potencial de uso em casa de vegetação e campo no controle do ácaro branco. Foi realizada uma seleção com 30 isolados de Beauveria spp., através de pulverização direta de conídios (1×108 conídios/mL) sobre discos foliares de pimenta contendo 15 ácaros. As avaliações foram realizadas ao terceiro e sexto dia contando-se o número de mortos, e confirmação do patógeno em câmara úmida. Parâmetros de diâmetro de colônia e produção de conídios foram realizados com os isolados que causaram mortalidade confirmada acima de 50%. Para o bioensaio em casa de vegetação foram preparados 10 parcelas, com 10 vasos contendo duas mudas de feijão em cada vaso, sendo 5 parcelas destinadas a testemunha, e cinco para aplicação do Unioeste 53 (1×108 conídios/mL em calda formulada, no volume de 800L/ha, utilizando pulverizador costal), a avaliação constou da contagem prévia e posterior à aplicação do número de ácaros vivos em 10 folíolos, tanto nas parcelas destinadas ao tratamento com fungo, quanto na testemunha. A fase de campo seguiu os mesmos padrões, porém, com área experimental total de 225m2, com oito parcelas de 10,24m2, sendo 4 testemunhas e 4 onde foi aplicado o isolado Unioeste 53 seguindo metodologia de aplicação e avaliação já descritas para casa de vegetação. Em laboratório o isolado Unioeste 53 causou mortalidade total de 70% e 57,7% de mortalidade confirmada, em casa de vegetação, apresentou redução da população de 76,71% 16 dias após aplicação, já em campo, a redução da população foi de 66% após 12 dias da aplicação.

Made available in DSpace on 2017-07-10T14:38:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 olga.pdf: 1375254 bytes, checksum: 3324d73a6b00929f314affe8fbb627b4 (MD5) Previous issue date: 2012-08-20 / A água residuária da suinocultura fornece nutrientes para as culturas agrícolas, diminuindo os custos de produção. Assim, o objetivo foi encontrar qual a dose de água residuária da suinocultura mais apropriada, ambientalmente e agronomicamente para fertilizar culturas de importância econômica mundial: soja, milho e aveia. O experimento foi conduzido em esquema fatorial (4x2) com três repetições totalizando vinte e quatro lisímetros de drenagem, nos quais foram aplicados água residuária nas doses de 0, 100, 200 e 300 m³ ha-1 na ausência ou presença de adubação mineral. Foram usadas técnicas estatísticas multivariadas (PCA, PERMANOVA e CLUSTER), avaliando a longo prazo e simultaneamente o sistema, solo-água-planta. As doses mais recomendadas são: para a cultura da soja a de 100 m3 ha-1 isolada da adubação mineral. Para as culturas de milho e aveia a dose de 100 m3 ha-1 associada com a adubação mineral.