Made available in DSpace on 2016-08-29T15:37:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_6936_LORENA BIANCHIENE AREAL DE AZEVEDO.pdf: 670487 bytes, checksum: a0461882f403eaf10a3ccb9a0034a233 (MD5) Previous issue date: 2014-07-17 / Fapes / A adição ao crack tem se apresentado como um grave problema social e de saúde pública no mundo, principalmente em países emergentes como o Brasil. Esta droga, que tem a cocaína como princípio ativo, possui maior potencial de abuso em relação às formas cheirada e inalada, além de estar relacionada a maiores índices de violência e a um descontrole comportamental característico. O presente estudo objetivou verificar a ocorrência de alterações comportamentais, bioquímicas e moleculares em modelo animal de inalação crônica de crack, focando nos sistemas dopaminérgico e endocanabinóide no córtex pré-frontal. Dados na literatura sugerem um envolvimento desses sistemas nos mecanismos da adição à cocaína, mas essa relação no córtex pré-frontal, principal região responsável pelo controle comportamental, ainda não está bem elucidada. Camundongos C57BL/6 machos foram divididos em um grupo controle e um grupo crack, sendo o último submetido a duas inalações diárias de crack, por um período de 11 dias. As concentrações de cocaína e seus metabólitos, com destaque à metilecgonidina (MEG), no sangue dos animais, foram avaliadas por GC-MS. A concentração de MEG, um metabólito exclusivo do crack, com maior potencial neurotóxico do que a cocaína em si e neurotoxicidade aditiva quando associado a ela, foi muito maior do que a da própria cocaína e, também, maior do que já descrito em outros trabalhos. Observou-se que os animais expostos ao crack apresentaram hiperlocomoção durante todo o experimento, mas não houve diferença ao longo das sessões de inalação. Além disso, esses camundongos apresentaram um comportamento peculiar, caracterizado por pulos repetitivos nos cantos da caixa durante teste no campo aberto, aparentando uma tentativa de fuga, e a frequência desse comportamento aumentou ao longo das inalações. Após avaliação da expressão gênica no córtex pré-frontal por qPCR, verificou-se que os níveis de mRNA de ΔFosB, um fator de transcrição importante no desenvolvimento da adição, estava aumentada nos animais submetidos à inalação de crack. Os genes dos receptores dopaminérgicos D1R, D2R e D3R, além da enzima de síntese de dopamina tirosina hidroxilase, apresentaram upregulation nos animais do grupo crack, enquanto que genes relacionados ao sistema endocanabinóide, como o receptor CB1 e as enzimas de degradação FAAH e MAGL, apresentaram downregulation. Essas alterações também foram observadas na expressão proteica. Além disso, por meio da quantificação por HPLC, observou-se uma diminuição dos níveis de dopamina e seus metabólitos no córtex pré-frontal dos animais submetidos à inalação de crack. Avaliando em conjunto os dados obtidos, o protocolo experimental e as informações encontradas na literatura, podemos inferir que após onze dias de inalação de crack os camundongos se encontraram em um estágio de dessensitização do sistema mesocorticolímbico, e que os efeitos observados nos sistemas dopaminérgico e endocanabinóide no córtex pré-frontal podem ser os mediadores dessa neuroadaptação. Considerando que a inalação crônica de crack promoveu alterações ainda não descritas para modelos com cloridrato de cocaína, e que os níveis de MEG encontrados no sangue dos animais submetidos à inalação foi muito maior do que os da cocaína, surge a possibilidade dessas alterações serem mediadas pelo MEG, e não apenas pela cocaína.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2017-02-14T03:07:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 343684.pdf: 3983252 bytes, checksum: 9c21e57851242970d9839907700965a0 (MD5) Previous issue date: 2016 / A utilização intencional de substâncias modificadoras do estado de consciência é prática milenar entre as civilizações. O consumo abusivo na sociedade contemporânea cresce vertiginosamente, disseminado por todas as esferas sociais, fomentando um rentável e disputado mercado ilegal. A íntima relação do uso de drogas e mortes violentas é tema amplamente debatido em levantamentos e estudos científicos. O conhecimento do perfil destes óbitos e as substâncias mais recorrentes alicerçam o desenvolvimento técnico-científico para atender às especificidades desta demanda. O Instituto Geral de Perícias de Joinville (IGP/Joinville) conta com software institucional que armazena dados relacionados aos atendimentos e os respectivos laudos das ocorrências, viabilizando levantamentos desta natureza. No âmbito forense a realização de exames toxicológicos é importante ferramenta para auxiliar na determinação da causa morte. Todavia, o estado do cadáver pode ser fator limitante para a coleta de espécimes de referência. O humor vítreo (HV) figura como matriz alternativa de grande aplicabilidade por apresentar boa correlação com os níveis sanguíneos. A microextração em fase sólida (SPME) destaca-se pela alta sensibilidade, fácil execução, viabiliza a análise de pequenos volumes e integração automatizada ao cromatógrafo gasoso com espectrômetro de massas (GC/MS). O presente estudo efetuou levantamento do perfil de óbitos atendidos pelo IGP/Joinville no período de 2013 a 2015, ponderando a natureza jurídica das mortes distribuídas em homicídios, suicídios, acidentes de trânsito e outras formas, o gênero e a idade das vítimas, a coleta de amostras biológicas e as substâncias mais detectadas. Os acidentes de trânsito compreenderam o maior número de óbitos, abrangendo 40,9% dos casos, seguidos por homicídios com 29%, enquanto os suicídios contabilizaram 9,1% e outras formas de morte 21%. Entre as amostras não coletadas as justificativas se alternaram entre óbitos em ambiente hospitalar (54,1%), cadáveres putrefeitos (7,7%), carbonizados (0,6%), politraumatizados (1,3%), ossadas (0,9%) e não justificados (35,4%). Os homicídios abarcaram o maior percentual de toxicológicos detectados (70,5%). Os suicídios apresentaram detecção em 51,6%, acidentes de trânsito em 50% e outras formas de morte em 51,9% dos casos. A cocaína (COC) foi a substância ilícita mais recorrente entre as classificações de morte com exposição concomitante ao álcool. A exposição associada leva a formação do cocaetileno (CE), composto mais tóxico que os precursores. Diante deste cenário, foi validado método para a detecção de COC e CE em HV por SPME e GC/MS. A técnica compreendeu a análise de 0,5 mL de HV, adicionados de 1,0 mL de tampão borato, extração por SPME (fibra DVB/PDMS) sob temperatura (60ºC) e agitação constantes durante 20 min., exposição da fibra no injetor a 250ºC por 5 min e limpeza a 250ºC por 5 min. O método demonstrou precisão sob repetibilidade, apresentando coeficientes de variação (CVs) dos tempos de retenção de 0,4% e 0,3% para COC e CE respectivamente, limite de detecção estipulado em 5 ng/mL com CVs de triplicatas inferiores a 20%, ausência de interferentes na detecção dos analitos de interesse, considerando-se os compostos nicotina, lidocaína e cafeína, e procedimento de limpeza eficaz para a eliminação do efeito carryover. A aplicação do método em amostras post mortem de HV reproduziu os resultados de detecção obtidos em sangue e urina, assim como confirmou a não detecção dos analitos nos casos negativos testados. Os achados demonstraram a viabilidade de emprego do HV na ausência das matrizes de referência e a importância da coleta de matrizes diversificadas visando ampliar a janela de detecção dos analitos de interesse.<br> / Abstract : The intentional use of substances that modify the state of consciousness has been happening for thousands of years among civilizations. The abusive use in the contemporary society has grown wildly, is has been spread by all social spheres, fostering a profitable and disputed illegal market. The close relation between the use of drugs and violent deaths is an issue widely discussed in surveys and scientific researches. The knowledge about the profile of these deaths and the most recurrent substances, anchors the scientific development to meet the needs of these demands. The Instituto Geral de Perícias de Joinville (IGP/Joinville) has institutional software that store data related to the attendance and respective occurrence reports, making surveys of this kind feasible. In the forensic scope, the procedure of toxic exams is a very important tool to determine the cause of death. Nevertheless, the state of the corpse may be a limiting factor when it comes to collecting reference specimen. The vitreous humor (VH) features as alternative matrix of big applicability for showing good correlation with blood levels. The extraction by solid phase microextraction (SPME) stands out for high sensibility, easiness to use, making feasible the analysis of small volumes and automated integration to gas chromatography-mass spectrometry (GC/MS). The presented study has carried out a survey about the profile of deaths assisted by IGP/Joinville between the years 2013 and 2015, considering the legal status of the deaths among homicide, suicides, traffic accidents and others, gender, victims age, collection of biological samples and the most detected substances. Traffic accidents make the highest number of deaths, comprehending 40,9% of occurrences, followed by homicides with 29%, other forms of deaths with 21% and suicides with 9,1%. Among the cases not collected the reasons are deaths in hospitals (54,1%), putrefied corpses (7,7%), burned corpses (0,6%), multiple-injured bodies (1,3%), bones (0,9%) and non justifies (35,4%). The homicides comprised the biggest percentage of positive toxicological (70,5%) followed by others (51,9%), suicides (51,6%) and traffic accidents (50%). The cocaine (COC) was the most detected compound in all deaths classification with concomitantly consumption of alcohol. They lead to formation of cocaethylene (CE), compound that is more toxic than the former ones. In this situation, the method for detection of COC and CE was validated in VH by SPME and GC/MS. The technique includes the addiction of 0,5 mL of VH and 1,0 mL of borax buffer, exposed to SPME (DVB/PDMS fiber) for 20 min at 60ºC and constant agitation. After the fiber was exposed in the inlet (250ºC) for 5 min and then cleaned for 5 min at 250ºC. The method has shown precision on repeatability with coefficient of variation (CVs) of retention time by 0,4% (COC) and 0,3% (CE), limit of detection estimated in 5 ng/mL with CVs of triplicates lower than 20%, absence of interfering compounds in the detection of analytes of interest, considering the compounds nicotine, lidocaine and caffeine, and procedures of effective cleaning in order to eliminate the carryover effect. The application of this method in post mortem samples of VH has shown correlation with the positive results obtained by COC and CE in blood and urine, as well as it has confirmed the non-detection of analytes in tested negatives. The findings have shown the importance of varied matrix collection in order to enlarge the window of detection and the feasibility of the use of VH in the absence of reference matrixes.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Química, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-05-25T18:07:52Z No. of bitstreams: 1 2014_GustavoBrandaoSouza.pdf: 1489838 bytes, checksum: b8bd304fff5c3f752d90fe6066b13025 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-05-25T19:33:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_GustavoBrandaoSouza.pdf: 1489838 bytes, checksum: b8bd304fff5c3f752d90fe6066b13025 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-25T19:33:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_GustavoBrandaoSouza.pdf: 1489838 bytes, checksum: b8bd304fff5c3f752d90fe6066b13025 (MD5) / A necessidade de uma ferramenta mais rápida, precisa e confiável para estimar o consumo de drogas de abuso tem dado espaço à abordagem conhecida como epidemiologia do esgoto. Este trabalho, por sua vez, tem o objetivo de desenvolver um método analítico baseado em UPLC-MS/MS para determinar cocaína, benzoilecgonina e 8 outros metabólitos, anfetamina, metanfetamina e outros 4 anfetamínicos, além de 3 dos principais metabólitos da cannabis, canabidiol, 11-nor-9-hidroxi-Δ-9-tetrahidrocanabinol e 11-nor-9-carboxi-Δ-9-tetrahidrocanabinol; com o objetivo de produzir estimativas de consumo utilizando epidemiologia do esgoto. Para o desenvolvimento do método, foi realizada otimização dos parâmetros instrumentais do espectrômetro de massa baseado em MRM para todos os analitos e foi desenvolvido método cromatográfico capaz de separar satisfatoriamente as substâncias-alvo. Planejamento fatorial 23 foi realizado para estudar os efeitos das seguintes variáveis – solvente de condicionamento, solvente de eluição e pH da amostra – sobre o processo de extração em fase sólida SPE. O método de extração final foi capaz de apresentar recuperações satisfatórias para 14 dos 19 analitos propostos inicialmente. Amostras de esgoto coletadas nos finais de semana dos jogos da Copa do Mundo FIFA realizados em Brasília – DF foram analisadas seguindo o método analítico desenvolvido. Foram detectadas no esgoto benzoilecgonina, cocaína, anidroecgonina, fenacetina e levamisol. A concentração de benzoilecgonina foi utilizada para estimar o consumo de cocaína, que variou de 6,3 a 22,8 doses por dia para cada 1000 habitantes. Sendo a região norte, composta por Asa Norte, Lago Norte, Varjão e Estrutural, detentora dos maiores consumos de cocaína. ______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The need for a faster, trustful and more precise tool to estimate drug abuse consumption has given space to the approach called sewage epidemiology. This work aims to develop analytical method based on UPLC-MS/MS to determine COC, BE and 8 other metabolites, AMP, MAMP and 4 other amphetamine-like substances, and 3 of the major metabolites of cannabis, CBD, OH -THC and THC-COOH; in order to estimate the consumption using sewage epidemiology. For the development of the method, an optimization of MRM parameters for all analytes was carried out and a chromatographic method to adequately separate the target substances was developed. 23 factorial planning was conducted to study the effects of two different levels for conditioning solvent, elution solvent and pH value for the samples. The final extraction method was able to produce satisfactory recoveries for 19 of the 14 originally proposed analytes. Sewage samples were collected on the weekends of the FIFA World Cup games that occurred in Brasilia – DF. They were analyzed using the analytical method developed in this work. BE, COC, AE, phenacetin and levamisole were detected in the sewage samples. The BE concentrations were used to produce cocaine consumption estimations, which ranged from 6.3 to 22.8 doses per day for each 1,000 habitants. Being the northern region, that comprises Lago Norte, Asa Norte, Varjão and Estrutural, holder of the largest cocaine consumption.

A dependência de cocaína ou crack (DCC) é atualmente um grande problema de saúde pública, estando associada à violência urbana e marginalização social. A DCC é um transtorno psiquiátrico altamente influenciado pela genética, com uma herdabilidade estimada em 70%. Dessa forma, a identificação de fatores possivelmente envolvidos no curso desse transtorno é uma demanda de saúde pública emergente. Dentre os fatores biológicos, um grande número de evidências sugere o estresse, a partir da ação do eixo hipotálamo-pituitária-adrenal (HPA), como um mecanismo biológico envolvido na DCC. Mudanças na liberação de cortisol geradas por alterações do eixo HPA parecem ter um papel tanto na iniciação, quanto na manutenção e recaída ao uso de cocaína e crack. Além disso, o funcionamento do eixo HPA é individualmente heterogêneo e influenciado pelo alto grau de variabilidade nos genes que codificam as proteínas desse sistema. Dessa forma, a presente Tese de Doutorado teve como objetivo principal avaliar os efeitos de variações em genes que codificam proteínas do eixo HPA, marcas moleculares do estresse, eventos traumáticos sofridos na infância e suas potenciais interações e correlações na dependência de crack. A partir de duas amostras, uma de mulheres (n = 288) e outra de homens (n = 280) dependentes de crack, essa Tese pôde mostrar que variantes nos genes que codificam os receptores de mineralocorticoide (NR3C2), de glicocorticoide (NR3C1) e do hormônio liberador de corticotrofina (CRHR1) estão envolvidas em diversos aspectos da DCC, incluindo susceptibilidade, resposta ao tratamento de desintoxicação e gravidade dos sintomas de depressão. Variantes nesses genes também foram associadas com o histórico de adversidades sofridas na infância, incluindo relatos de abuso e negligência. Além disso, os efeitos de variantes genéticas do sistema de estresse nos níveis séricos do fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF) não foram detectados nos dependentes de crack, possivelmente devido à grande influência da DCC nos níveis dessa neurotrofina. No caso de marcas moleculares, como o encurtamento dos telômeros, nossos dados também sugerem que a DCC torna indetectável a bem conhecida associação entre envelhecimento celular precoce e transtorno depressivo maior, e isso pode estar relacionado ao grande tamanho de efeito que a DCC apresenta sobre essa marca molecular do estresse. Assim, os dados da presente Tese de Doutorado corroboram a hipótese inicial de que a variabilidade genética do sistema de estresse está associada à DCC. A partir de esforços gerados durante o desenvolvimento desse trabalho, uma nova perspectiva envolvendo análises de varredura genômica e epigenômica resultará, no futuro próximo, em uma maior compreensão dos mecanismos biológicos envolvidos no desenvolvimento e curso clínico da DCC. / Cocaine or crack addiction is currently a major public health problem, associated with urban violence, social marginalization, and early death. It is a psychiatric disorder highly influenced by genetics, presenting a heritability estimated at 70%. Thus, the identification of sociodemographic and biological factors possibly involved in the course of this disorder is an emerging public health demand, mainly in Brazil, the # 1 consumer of crack. Among the possible factors, a bulk of evidence suggests that stress, related to the action of the hypothalamicpituitary- adrenal (HPA) axis, is a biological mechanism involved in cocaine or crack addiction. Dysregulations in cortisol release generated by altered response of the HPA axis appear to play an important role on several aspects of this addiction, including initiation, maintenance, and relapse. Furthermore, the functioning of the HPA axis is individually heterogeneous and influenced by the high degree of variability in the genes coding the proteins of that system. Therefore, this Doctoral thesis aimed to evaluate the role of stress-related polymorphisms, childhood adversities, molecular signatures of stress, and their potential interactions and correlations on crack addiction. Using two clinical samples, one composed by crack addicted women (n = 288) and another by crack addicted men (n = 280), this thesis suggested that variants in genes coding the mineralocorticoid receptor (NR3C2), the glucocorticoid receptor (NR3C1) and the corticotropin releasing hormone receptor 1 (CRHR1) are involved in many aspects of crack addiction, including susceptibility, response to detoxification treatment, and severity of depression symptoms. Variants in these genes were also associated with a history of childhood adversities, including reports of abuse and neglect. Additionally, the effects of stress-related genetic variants on brain-derived neurotrophic factor (BDNF) serum levels were not detected in crack addicted patients, possibly due to the large influence of crack addiction on this neurotrophin levels. Regarding molecular signatures of stress, such as accelerated shortening of telomeres, our findings also suggest that crack addiction renders undetectable the well-known association between accelerated cellular aging and major depressive disorder, and this may be related to the large effect size that crack addition has on this molecular signature. Therefore, data from the present Doctoral thesis corroborates the initial hypothesis that the genetic variability in stress system-related genes is associated with crack addiction. The efforts employed in the development of this work also led to a new perspective involving genome and epigenome wide analyses, which will soon contribute to a better comprehension of the biological underpinnings involved in the development and clinical course of cocaine or crack addiction.

Introdução: Desde que surgiu no Brasil, no final da década de 1980, o crack vem se popularizando entre homens e mulheres de diferentes faixas etárias e atualmente constui-se em um grave problema de saúde pública. Este é um estudo pioneiro sobre a trajetória de usuários de crack com desfechos de recaída, reinternação e tratamento após a alta hospitalar. Objetivos: Seguir uma coorte de adolescentes usuários de crack, 30 e 90 dias após a alta hospitalar, para avaliar a recaída ao uso de crack aferida pela Crack Users Relapse Scale (CURS) e seguir uma coorte retrospectiva e prospectiva de usuários de crack - entre 2010 e 2012 - utilizando a pesquisa na base de dados nacionais do Mistério da Saúde. Método: Primeiro artigo: Estudo qualitativo com 14 entrevistas de usuários de crack internados, 9 homens e 5 mulheres. Os relatos foram a base para a construção da CURS. Segundo artigo: Estudo piloto com 30 usuários de crack os quais referiram 35 frases relacionadas à recaída e ao uso de crack. A validação psicométrica utilizou a Análise Fatorial Exploratória (AFE) em um estudo transversal com 333 usuários de crack internados. No terceiro artigo, utilizou-se a Análise Fatorial Confirmatória (AFC) para verificar os índices de adequação da CURS. O quarto artigo apresentou uma coorte de 88 adolescentes usuários de crack (30 e 90 dias após a alta da internação no Hospital Psiquiátrico São Pedro (HPSP) e na Clínica São José (CSJ) em Porto Alegre. Instrumentos: Entrevista semi-estruturada para avaliar os dados sociodemográficos e também os padrões de uso de substâncias psicoativas; CURS; Questionário de Seguimento para Usuários de Crack; K-SADS-PL. As análises complementares apresentaram uma coorte retrospectiva e prospectiva – entre 2010 e 2012, na qual se utilizou o método de linkagem de arquivos para analisar três bases de dados: usuários de crack internados no HPSP e CJS em Porto Alegre/RS, dados de internação hospitalar do Estado do RS e dados de atendimento ambulatorial dos Centros de Atenção Psicossocial do Estado do RS. Resultados: No primeiro artigo os usuários de crack entrevistados referiram dificuldades de acesso à hospitalização e ocorrência de recaída após a alta, também sendo prevalente o abandono do tratamento. Homens envolveram-se com o crime, enquanto as mulheres envolveram-se com a prostituição e infeccionaram-se com o HIV. No segundo artigo, o alpha de Cronbach para a escala total foi 0,86 e a AFE com rotação oblimin conservou os 25 itens da CURS, uma escala Likert de 5 pontos, (Carga fatorial>0,40), com 6 fatores definitivos, os quais explicam 62,1% da variância total. No terceiro artigo, a AFC demonstrou que a CURS apresenta bons indices de adequação, ou seja, realmente avalia o que se propõe. No quarto artigo, o seguimento de 30 dias após a alta da internação apontou que 65,9% tinham recaído e no seguimento de 90 dias, cerca de 86,4% referiram ter recaído. A média de dias até a recaída foi de 27 dias (SD=3,78) e metade dos sujeitos recaíram em até 10 dias. Observamos que 34% reinternaram na rede pública de saúde e 36% tinham se envolvido com a criminalidade ao cabo dos 3 meses de seguimento. Nas análises complementares, a linkagem dos dados hospitalares, com base nos 293 sujeitos da amostra, 127 registros de “pares verdadeiros” apontaram 43,34% de reinternações na rede pública de saúde, considerando o período entre 2010 e 2012. Na linkagem dos dados ambulatoriais, com base nos 293 sujeitos da amostra, 40 registros de “pares verdadeiros” apontaram 13,6% de atendimentos ambulatoriais na rede pública de saúde, considerando o período entre 2010 e 2012. Conclusions: Este é um dos primeiros estudos que apontam a prevalência impactante de recaída precoce em adolescentes usuários de crack após a alta e grande taxa de reinternações em uma amostra de adultos e adolescentes, o que leva-nos a questionar o custo/benefício do tratamento hospitalar como medida isolada para esta população. Além disso, esses resultados corroboram estudos prévios os quais sugerem que usuários de psicoestimulantes necessitam tratamento ambulatorial intensivo (Intensive Outpatient Treatment) com o manejo de contingências e outras estratégias comportamentais, a fim de aumentar a adesão e reduzir a recaída no uso da droga. Porém, essa modalidade terapêutica específica ainda é escassa e deve ser desenvolvida no Brasil.

A presente tese abordou o tema de potenciais biomarcadores em uma população altamente vulnerável – díades mães/bebês com história de exposição ao crack na gestação. Foram avaliados 57 bebês expostos e 99 não expostos, e as suas mães. No primeiro artigo, a ênfase foi à ativação inflamatória, onde se detectou um aumento da IL-6 (perfil pró-inflamatório) nos expostos, mesmo mediante ajuste para confundidores (10.208,54 IC95% 1.328,54–19.088,55 vs. 2.323,03 IC95% 1.484,64–3.161,21; p= 0.007). A IL-10 (perfil antiinflamatório) também se mostrou elevada nos bebês expostos (432,22 IC95% 51,44–812,88 vs. 75,52 IC95% 5,64– 145,39, p = 0.014). A IL-6 esteve aumentada nas mães expostas ao crack (25.160,05, IC95% 10.958,15–39.361,99 vs. 8.902,14 IC95% 5.774,97–12.029,32; p = 0.007), sem alterações de IL-10 entre as puérperas. Não houve correlação entre os níveis de citocina materna e do bebê (Spearman test; p ≥ 0.28). Neste estudo, concluiu-se que IL-6 e IL-10 podem ser marcadores da ativação inflamatória precoce em bebês com exposição intrauterina ao crack. Nossos resultados corroboram com os achados da literatura indicando que as citocinas possam ser mediadores potenciais para explicar os efeitos comportamentais e cognitivos do estresse prénatal sobre o feto, integrando imunologia e a hipótese da neuroinflamação a saúde mental da criança. No segundo artigo, avaliou-se uma medida de estresse oxidativo (EO), o TBARS, e de Fator Neurotrófico Derivado do Cérebro (BDNF), nas referidas díades. Os resultados encontrados na análise multivariada do TBARS no sangue de cordão umbilical (SCU) apontam para um menor EO nos bebês expostos (63,97 IC95% 39,43 – 88,50 em expostos vs 177,04 IC95% 140,93 – 213,14 em não expostos, p < 0.001). Trata-se de um achado inovador, apontando na direção de uma ativação do sistema antioxidante endógeno nos recém-nascidos expostos, em função da ruptura da homeostase causada pela toxicidade do crack durante a gestação. O feto mobilizaria rotas de antioxidantes endógenos desde muito precocemente no seu desenvolvimento, como a promovida pela Cocaine and Amphetamine Regulated Transcript (CART). Ainda neste estudo, pode-se ver um aumento de BDNF nos bebês expostos (3,86 IC95% 2,29 – 5,43 vs 0,85 IC95% 0,47- 1,23; p < 0.001), mas uma diminuição nas gestantes expostas em relação às não expostas (4,03 IC95% 2.87 – 5.18 vs 6,67 IC95% 5,60 – 7,74; p = 0.006). Os dados de BDNF em bebês expostos ao crack são bastante inovadores, mas coerentes com a literatura, no sentido de uma reação de neuroplasticidade. Em gestantes, o dado surpreende, tendo em vista que a literatura de adultos indica aumento de BDNF em usuários de crack em relação a controles. Uma possibilidade para explicar este achado é uma possível variação na cronicidade e intensidade no consumo de crack do grupo teste. Alternativamente, a maior prevalência de estresse pós-traumático (TEPT) nas gestantes usuárias de crack poderia justificar este achado. Pacientes com TEPT tendem a apresenta níveis de BDNF menores que os controles normais. Em suma, apontam-se quatro possíveis biomarcadores, em uma população de difícil acesso e de alta relevância em saúde pública. Percebe-se que pode haver diferentes respostas de acordo com a etapa do desenvolvimento e que gestantes podem ter um perfil de recrutamento de neurotrofinas, e talvez outros biomarcadores, diferentes do que não gestantes. Portanto, observa-se que as mudanças estruturais, fisiológicas e moleculares promovidas pela cocaína resultam do envolvimento de uma vasta rede de neurotransmissores, interligados, e atuantes em diferentes áreas do cérebro e em diferentes momentos de maturação. / The present thesis addressed the theme on potential biomarkers in a highly vulnerable population – dyads mothers/babies with a history of exposure to crack/cocaine during the pregnancy 57 exposed babies and 99 not exposed babies and their mothers were assessed. In the first article, the emphasis was the inflammatory activation, were detected an increase of IL-6 (pro-inflammatory profile) in exposed, even within adjustments for confounders (10,208.54, 95%CI 1,328.54–19,088.55 vs. 2,323.03, 95%CI 1,484.64–3,161.21; p= 0.007). The IL-10 (anti-inflammatory profile) was also shown elevated on exposed babies (432.22, 95%CI 51.44–812.88 vs. 75.52, 95%CI 5.64–145.39, p = 0.014). The IL-6 was increased in the mothers exposed to crack (25,160.05, 95%CI 10,958.15–39,361.99 vs. 8,902.14, 95%CI 5,774.97–12,029.32; p = 0.007), without alterations of IL-10 amongst the mothers. There were no correlation amongst the levels of maternal cytosine and the babies (Spearman test; p>0.28). In this study, it was concluded that IL-6 and IL-10 could be markers of early inflammatory activation on babies exposed to crack/cocaine. Our results support the findings of the literature indicating that the cytosine could be potential mediators to explain the behavior and cognitive effects of prenatal stress on the fetus, integrating immunology and the hypothesis of the neuroinflammation to the child’s mental health. In the second article, we assessed a measurement of oxidative stress, the TBARS and the BDNF in the referred dyads. The results found in the multivariate analysis of the TBARS in the umbilical chord’s blood (UCB) point to a less oxidative stress in the babies exposed to (63.97, 95%CI 39.43 – 88.50 in exposed vs. 177.04, 95%CI 140.93 – 213.14 non exposed, p < 0.001). This is an innovative finding, pointing in the direction of an endogenous antioxidant activation system on the newly born exposed, on the basis of the homeostasis rupture caused by the crack toxicity during the pregnancy. The fetus would mobilize endogenous antioxidant routes since very early in its development, as promoted by Cocaine and Amphetamine Regulated Transcript (CART). Still in this study, we can see the increase of the BDNF in the exposed babies (3.86, 95%CI 2.29 – 5.43 vs 0.85, 95%CI 0.47- 1.23; p < 0.001), but a decrease in the exposed pregnant women in relation to the non-exposed (4.03, 95%CI 2.87 – 5.18 vs. 6.67, 95%CI 5.60 – 7.74; p = 0.006). The data of BDNF in babies exposed to crack are highly innovative, but consistent to the literature in the sense of a reaction of neuroplasticity. In pregnant women the data is surprising, having in mind that the adult literature indicates an increase of BDNF in crack/cocaine users in relation to controllers. A possibility to explain this finding is a possible variation in the practicality and intensity of usage of crack/cocaine from the test group. Alternatively the most prevalence post-traumatic stress (PTSD) in the crack pregnant users could justify this finding. Patients with PTSD tend to present levels of BDNF less than the normal controllers. This leads us to four possible biomarkers, in a population difficult to access and in a highly relevance to public health. We can tell that there are different answers according to the development stage and that the pregnant women could have a neurotrophins recruitment profile and perhaps other biomarkers, different to non pregnant. Therefore, we can observe that structural, physiological, molecular changes promoted by cocaine result from an involvement from a vast network of neurotransmitters integrated and active in different areas of the brain and in different moments of maturation.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Química, Programa de Pós-Graduação em Química, 2012. / Submitted by Marília Freitas (marilia@bce.unb.br) on 2013-01-29T11:28:14Z No. of bitstreams: 1 2012_RafaelFeitosadaSilva.pdf: 1016739 bytes, checksum: 352b5699acf98872f72ca31a13e51ba5 (MD5) / Rejected by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br), reason: on 2013-01-29T11:32:55Z (GMT) / Submitted by Marília Freitas (marilia@bce.unb.br) on 2013-01-29T11:33:54Z No. of bitstreams: 1 2012_RafaelFeitosadaSilva_PARCIAL.pdf: 1016739 bytes, checksum: 352b5699acf98872f72ca31a13e51ba5 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-03-11T11:03:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_RafaelFeitosadaSilva_PARCIAL.pdf: 1016739 bytes, checksum: 352b5699acf98872f72ca31a13e51ba5 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-11T11:03:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_RafaelFeitosadaSilva_PARCIAL.pdf: 1016739 bytes, checksum: 352b5699acf98872f72ca31a13e51ba5 (MD5) / Trabalhos recentes têm buscado estabelecer uma nova abordagem para estimar de forma rápida e segura o consumo de drogas de abuso (DA) considerando-se a análise do esgoto bruto gerado por uma população quanto à concentração dessas substâncias e de seus metabólitos. Nesse contexto, o presente trabalho apresenta uma estimativa do consumo de cocaína (COC) da população do Distrito Federal (DF) obtida a partir da análise de amostras de esgoto coletadas em oito estações de tratamento de esgoto (ETE) durante uma única campanha realizada em abril de 2012. A estimativa foi realizada com base nos valores de concentração de benzoilecgonina (BE), principal metabólito urinário da COC, em amostras de esgoto bruto. A determinação envolveu etapas de extração e concentração dos analitos empregando extração em fase sólida (SPE) e determinação por HPLC-MS/MS. Para avaliar a eficiência do método SPE testes de recuperação foram realizados com base em um planejamento fatorial 23. As melhores recuperações foram obtidas com cartuchos SPE Strata-X, condicionamento da fase sólida e eluição das substâncias de interesse com solução de ACN/MeOH (60:40) e passagem da amostra acidificada a pH 2. Pela primeira vez, testes de preservação das amostras foram realizados para investigar o comportamento da COC e da BE durante o envio das amostras de esgoto bruto pelos correios. A acidificação da amostra bruta a pH 2 mostrou-se a maneira mais eficaz de reduzir as variações nas concentrações dos analitos. A presença de COC e BE foi confirmada em todas as amostras analisadas e as concentrações ficaram entre 519 e 1260 ng L-1 e 1228 e 4297 ng L-1, respectivamente. A região correspondente a ETE Brasília Norte apresentou o maior consumo per capita de COC base livre (4453 doses ano-1 1000 hab-1), seguida da ETE Samambaia (4049 doses ano-1 1000 hab-1) e da ETE Gama (3607 doses ano-1 1000 hab-1). O consumo de COC base livre para a população do DF foi estimado em 753 kg ano-1, o que corresponde a um consumo per capita de aproximadamente 2930 doses ano-1 1000 hab-1. A partir da análise de amostras de esgoto coletadas da ETE Brasília Norte durante o período de 19 a 25 de abril de 2012, também foi possível estabelecer o perfil semanal de consumo da região norte de Brasília, DF. O maior consumo de COC foi observado nos finais de semana. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The battle against drug use and trafficking depends on many factors. Among them, stands out the obtention of information regarding consumption trends including the amount of drugs of abuse (DA) used by a given population. In this context, recent studies aimed to establish an alternative approach for drug use estimates based on the analysis of the raw sewage generated by a population through the quantification of selected substances and their metabolites in the samples. For that reason, this work presents an estimate of cocaine (COC) use in the Brazilian Federal District (FD) obtained from the analysis of raw sewage samples collected at eight wastewater treatment plants (WTP) serving more than 70% of the FD inhabitants. The estimate was based on the quantification of benzoylecgonine (BE), the main urinary metabolite of COC, in samples of raw sewage. Solid phase extraction (SPE) and HPLC-MS/MS were employed for sample preparation and analysis, respectively. Based on a 23 factorial design, recovery tests were carried out to evaluate the efficiency of the SPE method. Better recoveries were obtained using acidified samples (pH 2) and comercial hydrophilic/lipophilic solid phases with conditioning and elution steps based on the use of a 60:40 mixture of acetonitrile:methanol. For the first time, to the best of our knowledge, preservation tests of sewage samples were carried out to investigate the stability of COC and BE during shipment of samples through the mail. The acidification of the sample of sewage to pH 2 showed to be the most effective procedure in order to avoid analyte degradation and/or transformation. The occurrence of COC and BE was confirmed in all analyzed samples and the concentrations varied between 519 to 1260 ng L-1 for COC and from 1228 to 4297 ng L-1 for BE. The region corresponding to the North Brasilia WTP had the highest per capita consumption of COC free base (4453 doses year-1 1000 inhab-1), followed by Samambaia WTP (4049 doses year-1 1000 inhab-1) and Gama WTP (3607 doses year-1 1000 inhab-1). The consumption of COC free base for the DF population was estimated at 753 kg year-1, which corresponds to a per capita consumption of approximately 2930 doses year-1 1000 inhab-1. The weekly consumption profile of the north region of Brasilia was established based on the analysis of sewage samples collected for seven consecutive days. The weekly profile showed concentration peaks on Saturday and valleys on Tuesday reflecting the highest COC consumption on weekends. The results also showed the possible existence of distinct groups of users who make constant and/or intermittent use of COC.

Made available in DSpace on 2018-08-01T21:58:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_10611_Flavia Tosato.pdf: 3350639 bytes, checksum: 70973978751713caf9a8020e18b13280 (MD5) Previous issue date: 2016-12-09 / Análises rápidas, baratas e eficientes são necessárias para as rotinas laboratoriais, principalmente quando aplicada em química forense. As utilizações de fontes ambientes permitem que as análises sejam diretas e rápidas. Assim, são opções inovadoras para melhorar a sensibilidade e seletividade. Neste trabalho, foi desenvolvida uma metodologia utilizando a espectrometria de massas ambiente por paper spray ionization mass spectrometry (PS-MS) para diferentes matrizes de dados: (i) identificar e quantificar cocaína e seus adulterantes a partir da cromatografia em camada delgada acoplada ao PS-MS; (ii) realizar a discriminação ou classificação de dez marcas brasileiras de cervejas em pilsen e lager; e (iii) identificar a falsificação controlada de Uisque com cachaça visando quantificar o volume de cachaça adicionado na mistura. Na análise de cocaína e adulterantes, os padrões foram identificados na CCD e analisados por PS-MS, e uma curva de calibração foi otimizada. A cerveja foi previamente fracionada usando a metodologia de extração em fase sólida (SPE) com água/metanol e os quatro extratos foram caracterizados no modo positivo de ionização, PS(+)MS. Para ambos os casos, foram aplicados de 20 µL do analito sobre a superfície do papel do PS-MS. Na quantificação de cachaça em misturas de whisk-cachaça. Os resultados indicam que, utilização da CCD acoplado ao PS-MS possibilita a identificação de cocaína e seus adulterantes uma ótima linearidade paras as curvas foi encontrada (cocaína (R2 = 0,9989), benzocaína, (R2 = 0,9934), a cafeína (R2 = 0,9988), a fenacetina (R2 = 0,9966), e a lidocaína (R2 = 0,9987)) e LOD inferior ao da técnica de CCD. Para as amostras de cerveja os sinais de açúcares se sobressaem sobre os demais grupos, e após a extração com água/metanol foi possível distinguir os espectros das diferentes marcas de cervejas e classifica-las em pilsen e lager pela técnica de PCA. Utilizando o PS(±)-MS e PLS com seleção de variáveis foi possível estimar quantitativamente o teor de cachaça misturado ao uísque. Com isso, utilização de fontes ambientes, como PS mostra-se eficaz para identificação de diversas matrizes, facilitando as análises de rotina.

Introdução: Desde que surgiu no Brasil, no final da década de 1980, o crack vem se popularizando entre homens e mulheres de diferentes faixas etárias e atualmente constui-se em um grave problema de saúde pública. Este é um estudo pioneiro sobre a trajetória de usuários de crack com desfechos de recaída, reinternação e tratamento após a alta hospitalar. Objetivos: Seguir uma coorte de adolescentes usuários de crack, 30 e 90 dias após a alta hospitalar, para avaliar a recaída ao uso de crack aferida pela Crack Users Relapse Scale (CURS) e seguir uma coorte retrospectiva e prospectiva de usuários de crack - entre 2010 e 2012 - utilizando a pesquisa na base de dados nacionais do Mistério da Saúde. Método: Primeiro artigo: Estudo qualitativo com 14 entrevistas de usuários de crack internados, 9 homens e 5 mulheres. Os relatos foram a base para a construção da CURS. Segundo artigo: Estudo piloto com 30 usuários de crack os quais referiram 35 frases relacionadas à recaída e ao uso de crack. A validação psicométrica utilizou a Análise Fatorial Exploratória (AFE) em um estudo transversal com 333 usuários de crack internados. No terceiro artigo, utilizou-se a Análise Fatorial Confirmatória (AFC) para verificar os índices de adequação da CURS. O quarto artigo apresentou uma coorte de 88 adolescentes usuários de crack (30 e 90 dias após a alta da internação no Hospital Psiquiátrico São Pedro (HPSP) e na Clínica São José (CSJ) em Porto Alegre. Instrumentos: Entrevista semi-estruturada para avaliar os dados sociodemográficos e também os padrões de uso de substâncias psicoativas; CURS; Questionário de Seguimento para Usuários de Crack; K-SADS-PL. As análises complementares apresentaram uma coorte retrospectiva e prospectiva – entre 2010 e 2012, na qual se utilizou o método de linkagem de arquivos para analisar três bases de dados: usuários de crack internados no HPSP e CJS em Porto Alegre/RS, dados de internação hospitalar do Estado do RS e dados de atendimento ambulatorial dos Centros de Atenção Psicossocial do Estado do RS. Resultados: No primeiro artigo os usuários de crack entrevistados referiram dificuldades de acesso à hospitalização e ocorrência de recaída após a alta, também sendo prevalente o abandono do tratamento. Homens envolveram-se com o crime, enquanto as mulheres envolveram-se com a prostituição e infeccionaram-se com o HIV. No segundo artigo, o alpha de Cronbach para a escala total foi 0,86 e a AFE com rotação oblimin conservou os 25 itens da CURS, uma escala Likert de 5 pontos, (Carga fatorial>0,40), com 6 fatores definitivos, os quais explicam 62,1% da variância total. No terceiro artigo, a AFC demonstrou que a CURS apresenta bons indices de adequação, ou seja, realmente avalia o que se propõe. No quarto artigo, o seguimento de 30 dias após a alta da internação apontou que 65,9% tinham recaído e no seguimento de 90 dias, cerca de 86,4% referiram ter recaído. A média de dias até a recaída foi de 27 dias (SD=3,78) e metade dos sujeitos recaíram em até 10 dias. Observamos que 34% reinternaram na rede pública de saúde e 36% tinham se envolvido com a criminalidade ao cabo dos 3 meses de seguimento. Nas análises complementares, a linkagem dos dados hospitalares, com base nos 293 sujeitos da amostra, 127 registros de “pares verdadeiros” apontaram 43,34% de reinternações na rede pública de saúde, considerando o período entre 2010 e 2012. Na linkagem dos dados ambulatoriais, com base nos 293 sujeitos da amostra, 40 registros de “pares verdadeiros” apontaram 13,6% de atendimentos ambulatoriais na rede pública de saúde, considerando o período entre 2010 e 2012. Conclusions: Este é um dos primeiros estudos que apontam a prevalência impactante de recaída precoce em adolescentes usuários de crack após a alta e grande taxa de reinternações em uma amostra de adultos e adolescentes, o que leva-nos a questionar o custo/benefício do tratamento hospitalar como medida isolada para esta população. Além disso, esses resultados corroboram estudos prévios os quais sugerem que usuários de psicoestimulantes necessitam tratamento ambulatorial intensivo (Intensive Outpatient Treatment) com o manejo de contingências e outras estratégias comportamentais, a fim de aumentar a adesão e reduzir a recaída no uso da droga. Porém, essa modalidade terapêutica específica ainda é escassa e deve ser desenvolvida no Brasil.

Doctor en Psicología / Autor no autoriza la publicación de su tesis a texto completo en el portal de Tesis Electrónica / La presente investigación, tuvo como propósito avanzar en la comprensión de la configuración de la identidad personal en personas adultas de ambos sexos, que reúnen los criterios clínicos de adicción a la cocaína. para este efecto, se extractó los antecedentes conceptuales más relevantes acerca de la cocaína y sus consideraciones en el ámbito clínico, como fenómeno multideterminado, como así mismo desde la perspectiva fenomenológica– hermenéutica considerando las dimensiones de la subjetividad y temporalidad de Paul Ricoeur, complementadas por teorías psicológicas del sí mismo de Guidano y Liotti, Arciero y Gergen. Se realizó un estudio cualitativo a través de entrevistas en profundidad a 20 personas adictas (diez hombres y diez mujeres) en un rango etario de 25 a 35 años. Se procedió a un análisis narrativo estructurado en los tópicos de análisis de las dimensiones descritas. Se concluyó que la construcción de la identidad personal en personas adictas de ambos sexos tiene un modo particular de configurarse que les es característico, lo que abre un interesante campo de estudio para considerar estos hallazgos dentro de las actividades preventivas y asistenciales, entre otras disciplinas de las ciencias sociales