Le mélanome est un cancer en recrudescence depuis 10 ans. Il est devenu de ce fait une préoccupation majeure de santé publique. Au cours de la progression tumorale, l’expression des molécules d’adhérence (intégrines et cadhérines) ainsi que le récepteur à l’IGF de type I (IGF-IR) sont modulées. Notamment, il est observé un « switch des cadhérines » de la E vers la N, une surexpression des intégrines α2 et αv, et de l’IGF-IR. C’est dans cette optique que nous nous sommes intéressés aux dialogues croisés entre les molécules d’adhérence et l’IGF-IR. Dans un premier temps, nous avons mis en évidence un dialogue entre la N-cadhérine et l’intégrine αv lors de la migration des mélanomes. Dans un second temps, nous avons démontré que les dialogues entre l’IGF-IR, l’intégrine α2 et les cadhérines différent selon la nature de la cadhérine incriminée. Ces modifications de dialogues ont un impact important sur la propension migratoire des mélanomes. / Cutaneous malignant melanoma is an aggressive melanocyte malignancy that is characterized by early metastasis, bad prognosis, and poor survival. Altered cell-cell adhesion (cadherins), cell-extracellular matrix (integrins) interaction, and IGF type I receptor (IGF-IR) are playing an important role in melanoma progression. In particular, we observed a "cadherins switch" from E to N, and α2- αv-integrins and IGF-IR over-expression. In this optics, we were interested in the crosstalk between adhesion molecules and IGF-IR. First, we brought to light a crosstalk between N-cadherin and αv-integrin during melanoma migration. Secondly, we demonstrated that the dialogues between the IGF-IR, α2-integrin and cadherins are different according to the nature of the cadherin involved. Such modulation in the crosstalk may have an important impact on the migratory inclination of melanomas.

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"Epigenetic" refers to a heritable change in the gene expression pattern that is not mediated by any alterations in the primary nucleotide sequence of a gene in the genome. This change involves methylation of DNA in the gene promoter regions, modification of histone residues and chromatin remodeling. Among them, methylation of DNA promoter region is an essential step in epigenetic gene silencing and is known to be closely related to carcinogenesis and cancer progression. / Our preliminary study on effect of treatments of some potential anti-cancer drug candidates, namely Pheophorbide A (Pa), Pa combining with photodynamic therapy, Polyphyllin D (designated as HK-18), and its derivative designated as HK-27 on human breast cancer cell lines MCF-7 and MDA-MB-231 showed that the promoter methylation of CDH1 was decreased in response to treatments of Pa, HK-18, and HK-27 in MDA-MB-231 cells. / The aim of this study was to explore whether any methylation of DNA promoters mechanism is involved in drug resistance of a doxorubicin-induced human multidrug resistant hepatocellular carcinoma sub-linage R-HepG2 which was established from the doxorubicin sensitive HepG2 cell line in our laboratory. In this project, it was observed that the DNA promoter methylations of ESR1, Rassf2A, CDH1 and MDR1 in R-HepG2 were higher than those in HepG2 cells respectively by methylation specific polymerase chain reaction method. Bisulfite sequencing showed that the total 32 CpGs of CDH1 promoter region in R-HepG2 cells were hypermethylated while they were hypomethylated in HepG2 cells. CDH1 is the encoding gene of E-cadherin. The promoter hypermethylation induced CDH1 silencing in R-HepG2 cells was confirmed by reverse transcription polymerase chain reaction and Western blotting that CDH1 transcription and E-cadherin expression were maintained in HepG2 cells but both were lost in R-HepG2 cells. RT-PCR of 10 multidrug resistant related genes revealed that transcription of MDR1 was obviously increased in R-HepG2 cells, transcription of MRP1 and MRP5 were slightly increased in R-HepG2 cells, transcription of MRP6 and BCRP were slightly decreased in R-HepG2 cells comparing to those in the parental HepG2 cells. This result suggests that up-regulation of P-glycoprotein expression which is the protein product of MDR1 may be one of the major causes of multidrug resistance in R-HepG2 cells. Transient transfection of CDH1 cDNA increased the CDH1 transcription and E-cadherin expression in R-HepG2 cells. I also found that the CDH1 transfected R-HepG2-CDH1 cells showed increased amount of doxorubicin uptake, increased apoptotic population of cells exposed to doxorubicin, suppressed cell migration, and decreased P-glycoprotein expression comparing to those in R-HepG2 cells. It was also found that the transcription levels of SNAI2, TWIST1, ASNA1 and FYN were obviously higher in R-HepG2 cells than those in HepG2 cells. The transcription of FYN and TWIST1 were obviously decreased in CDH1 cDNA transfected R-HepG2-CDH1 cells which displayed a negative correlation with the transcription level of CDH1 and these results imply a suppressive role of CDH1 in regulating these genes which were involved in cancer metastasis and multidrug resistance. / Jiang, Lei. / Adviser: Kwok-Pui, Fang. / Source: Dissertation Abstracts International, Volume: 73-02, Section: B, page: . / Thesis (Ph.D.)--Chinese University of Hong Kong, 2010. / Includes bibliographical references (leaves 144-171). / Electronic reproduction. Hong Kong : Chinese University of Hong Kong, [2012] System requirements: Adobe Acrobat Reader. Available via World Wide Web. / Electronic reproduction. [Ann Arbor, MI] : ProQuest Information and Learning, [201-] System requirements: Adobe Acrobat Reader. Available via World Wide Web. / Abstract also in Chinese.

published_or_final_version / Surgery / Master / Master of Philosophy

INTRODUÇÃO: O papilomavírus humano (HPV) é o agente mais frequentemente encontrado em doenças sexualmente transmissíveis e é responsável por cerca de 40% dos cânceres vulvo-vaginais. Esse trabalho abordou a resposta imune em lesões vulvares, considerando-se as células dendríticas CD1a+, FXIIIa+ e S-100+, citocinas TNF-, IFN- e IL-10 e a molécula de adesão E-caderina. MÉTODOS: Foram utilizadas 49 lesões de vulva pelo HPV (condiloma acuminado, NIV-I, NIV-II e NIV-III) e 11 bióspias com diagnóstico de vulvite crônica inespecífica. Foram constituídos quatro grupos: lesões de baixo grau (condiloma e NIV I), lesões de alto grau (NIV II e III), vulvites inespecíficas e pele normal. A detecção das células, citocinas e E-caderina foi feita através de método imuno-histoquímico. RESULTADOS: As células de Langerhans (CD1a+) estavam distribuídas em todo o epitélio, sobretudo nas camadas suprabasal e espinhosa. Não diferiram entre os grupos de lesões HPV+, mas estavam diminuídas em número e tamanho quando comparadas à pele normal (p<0.0001). As células S-100+ ou FXIIIa+ estavam localizadas em toda a extensão do estroma, sem diferença estatística entre as lesões pelo HPV. Embora os DDFXIIIa+ estivessem aumentados em tamanho nas lesões de vulva, seu número não diferiu da pele normal. Não se observou diferenças numéricas das células S-100+ entre os grupos de lesão e pele normal. Foi possível detectar maior número de DDFXIIIa+ sobre as células S-100+ no grupo de lesões de baixo grau (p = 0,0008) e de alto grau (p = 0,0031). As citocinas foram detectadas em pequenas quantidades nos grupos de lesões, porém sem diferença estatística. Para a análise da expressão de e-caderina, o grupo de vulvites crônicas inespecíficas foi utilizado como controle. Em 91.0% das vulvites inespecíficas foi observado padrão homogêneo e difuso da expressão de e-caderina na camada espinhosa baixa e média. Ambos os grupos de lesões HPV+ exibiram padrões semelhantes de expressão de e-caderina, com marcação difusa ou focal na camada espinhosa baixa e média. Não houve imuno-reatividade nas áreas de displasias. Como resultado da reação de dupla-marcação, feita através da utilização da hibridização in situ para detecção do DNA do HPV e imunohistoquímica para DDFXIIIa+, foi possível identificar antígenos virais no citoplasma dessas células. CONCLUSÕES: o HPV interfere na expressão das células de Langerhans, pois estas estavam diminuídas, com morfologia alterada em relação à pele normal; os DDFXIIIa+ apresentam-se aumentados em número sobre as células S-100+, o que poderia refletir um mecanismo local compensatório contra o HPV; as lesões de baixo e alto grau não apresentam diferenças significativas quanto à densidade de células expressando TNF-, IFN- e IL-10, embora TNF- predomine entre as três citocinas; há uma correlação positiva entre os DDFXIIIa+ e a expressão de TNF-, o que poderia ser explicado por sua capacidade em produzir tal citocina a partir de um provável estímulo desencadeado pelo HPV; o HPV influencia na expressão de E-caderina na vulva, com destaque para a ausência de expressão nas áreas de displasia; o DNA do HPV encontrado no interior dos DDFXIIIa+ aliado às alterações na morfologia celular, a sobreposição destas sobre as células S-100+ e a relação encontrada com a citocina TNF-, nos permitem sugerir que os DDFXIIIa+ têm um papel importante como células apresentadoras de antígeno frente à infecção pelo HPV. / INTRODUCTION: The human papillomavirus (HPV) is the most frequent agent in sexually transmitted diseases and is responsible for almost 40% of vulvovaginal cancer. We studied the immune response in vulvar lesions, considering the CD1a+, FXIIIa+ and S-100+ dendritic cells, TNF-, IFN- and IL-10 cytokines and the adhesion molecule E-cadherin. METHODS: We used 49 vulvar lesions mediated by HPV (condylomata acuminata, VIN-I, VIN-II e VIN-III) and 11 biopsies diagnosed as chronic non-specific vulvitis. Four groups were formed: low-grade lesions (condylomata and VIN-I), high-grade lesions (VIN-II and III), non-specific vulvitis and normal skin. The detection of cells, cytokines and e-cadherin was performed by immunohistochemistry reaction. RESULTS: Langerhans cells (CD1a+) were distributed through epithelia, mainly in suprabasal and spinous layer. They did not differ between HPV groups, but were decreased in number and size when compared to normal skin (p<0.0001). The S-100+ ou FXIIIa+ cells were distributed through stroma and did not differ between HPV lesions. Although the FXIIIa+DD were increased in size in vulvar lesions, their number did not differ from normal skin. The S-100+ cells did not differ in number between the groups of lesions and normal skin. We detected an increased number of FXIIIa+DD over S-100+ cells in the group of low-grade (p = 0.0008) and high-grade lesions (p = 0.0031). The cytokines were detected in small quantities in both the lesions groups, with no statistical difference. The group of chronic non-specific vulvitis was used as control group to analyse the expression of e-cadherin. 91.0% of non-specific vulvitis presented a homogeneous and diffuse pattern of expression in spinous layer Both the HPV+ groups of lesions presented similar patterns of e-cadherin expression, with a focal or diffuse localization in spinous layer. The dysplastic epithelium did not present immunoreactivity. As a result of the double-staining, using in situ hibridization to detect DNA of HPV and immunohistochemistry to FXIIIa+DD, it was possible to observe viral antigens in the cytoplasm of such cells. CONCLUSIONS: The HPV interfere with the expression of Langerhans cells, since they were decreased when compared to the normal skin; the FXIIIa+DD were increased in number over S-100+ cells, suggesting a local compensatory mechanism against the HPV; the low and high grade lesions did not differ in the number of cells expressing TNF-, IFN- and IL-10, although TNF- predominate among the three cytokines; there is a positive correlation between the FXIIIa+DD and the expression of TNF- that could be explained by their role as TNF-producing cells following a stimulus of HPV; the HPV changes the expression of E-cadherin in vulvar lesions, mainly in dysplastic epithelium; HPV DNA visualized in the cytoplasm of FXIIIa+DD and the cellular morphological changes, the increased number over S-100+ cells and the correlation with TNF-, allow us to suggest that FXIIIa+DD play an important role as antigen presenting cells in the infection by HPV.

A carcinogênese oral é um processo multifásico, onde componentes genéticos levam a desregulação de vias de sinalização celular que controlam funções celulares básicas, como divisão, diferenciação e morte celular. Uma das maneiras de compreender a natureza biológica dos cânceres, além do curso clínico, é através do entendimento do processo de progressão e metástase destas neoplasias. Este estudo teve como objetivo avaliar a participação da proteína Twist no desenvolvimento e progressão dos carcinomas epidermóides orais. Com tal proposta, também foi avaliada a participação das proteínas caderina-E e p-Akt, e sua possível interação com Twist no processo de carcinogênese oral. O trabalho em questão analisou a expressão imuno-histoquímica destas proteínas em 30 espécimes de displasia oral, 20 de carcinoma epidermóide oral e 10 de mucosa oral normal, e avaliou também a possível inter-relação dessas proteínas em linhagens derivadas de carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço por meio dos ensaios de Western Blotting e imunofluorescência. Os resultados deste estudo demonstraram uma relação inversamente proporcional entre Twist e caderina-E desde os estágios mais precoces da carcinogênese oral. Tal afirmação baseou-se na presença de diferenças significantes entre a expressão imuno-histoquímica de Twist e Caderina-E na amostras de epitélio oral, epitélio displásico e nos espécimes de carcinoma epidermóide oral. Adicionalmente, foi observada a relação inversa entre Twist e a Caderina-E nas linhagens de carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço, sendo este evento constatado pelo decréscimo nos níveis protéicos da Caderina-E frente a uma elevação de Twist. Estes resultados sugerem um importante papel de Twist na progressão do carcinoma epidermóide oral, e juntamente com a Caderina-E, pode representar um relevante marcador biológico do câncer oral. / The oral carcinogenesis is a multi-stage process, where genetic components leads to deregulation of cell signaling pathways that control basic cellular functions such as division, differentiation and cell death. One way to understand the biological nature of cancers, besides the clinical course, is through understanding the process of progression and metastasis of these neoplasms. This study aimed to evaluate the role of Twist protein in the development and progression of oral squamous cell carcinomas. With this proposal, was also evaluated the involvement of E-cadherin and p-Akt proteins, and its possible interaction with Twist in the process of oral carcinogenesis. The work in question examined the immunohistochemical expression of these proteins in 30 specimens of oral dysplasia, 20 oral squamous cell carcinoma and 10 normal oral mucosa, and also evaluated the possible interrelationship of these proteins in lines derived from squamous cell carcinoma of head and neck by means of Western blotting assays and immunofluorescence. The results of this study showed an inverse relationship between Twist and E-cadherin since the earliest stages of oral carcinogenesis. These results were based on the presence of significant differences between the immunohistochemical expression of Twist and ECadherin in samples of oral epithelium, dysplastic epithelium and in specimens of oral squamous cell carcinoma. In addition, we observed the inverse relationship between Twist and E-Cadherin in the lines of squamous cell carcinoma of head and neck; this event was evidenced by the decrease in protein levels of E-Cadherin forward to a high of Twist. These results suggest an important role of Twist in the progression of oral squamous cell carcinoma, and along with E-cadherin may represent a relevant biomarker of oral cancer.

Objetivo: As moléculas de adesão celular (MAC) são essenciais para a manutenção do fenótipo epitelial. Alguns estudos têm relatado associação entre as alterações de sua expressão e a carcinogênese, mas o seu papel no câncer de próstata não é claro. Nosso objetivo foi estudar o perfil de expressão de E-caderina, cateninas e integrinas em espécimes cirúrgicos de câncer de próstata e associar as suas expressões com a evolução do tumor. Avaliamos também o perfil de expressão em metástases ósseas e linfonodais, a fim de compreender a influência destes marcadores na progressão do câncer de próstata. Materiais e Métodos: Foram selecionados 111 pacientes com câncer de próstata localizado tratados com prostatectomia radical pelo mesmo cirurgião. Sessenta pacientes não apresentaram recidiva tumoral após acompanhamento médio de 123 meses. A expressão das MAC foi avaliada por imuno-histoquímica (IH) em microarranjo tecidual (TMA), contendo duas amostras de cada tumor. Empregamos análise semiquantitativa para avaliação da expressão e determinamos a associação entre a expressão de cada MAC com a recorrência do tumor após a cirurgia. Avaliamos também a expressão das MAC por IH em TMA contendo espécimes de 28 metástases ósseas e em outro TMA contendo 19 metástases linfonodais com seus 19 tumores primários correspondentes. Resultados: Nos tumores primários a análise multivariada mostrou que a expressão das integrinas 3 e 3 1 relaciona-se com recidiva da doença. Quando a expressão de 3 foi forte e a expressão de 3 1 foi positiva, as chances de recorrência foram de 3,0 e 2,5 vezes maior. Apenas 19% e 28% dos pacientes estavam livres de recidiva após seguimento médio de 123 meses, quando os tumores apresentavam forte imunoexpressão de 3 ou positiva para 3 1 respectivamente. Outras integrinas apresentaram expressão reduzida, exceto 6 que foi expressa pela maioria dos tumores primário e metástases. A E-Caderina e as cateninas não mostraram associação com o prognóstico no tumor de próstata localizado. No sítio metastático, houve perda global de expressão das MAC. Encontramos ganho de expressão com a progressão do câncer de próstata somente para a integrina 3 que mostrou forte expressão em metade das metástases ósseas e linfonodais. Encontramos forte expressão de e -catenina foi em 94% dos linfonodos e 45% Conclusões: Nossos experimentos demonstram que a expressão das integrinas 3 e 3 1 está independentemente associada à recidiva de câncer de próstata após prostatectomia radical, e que a perda das moléculas de adesão celular pode ser considerada uma característica da progressão desta neoplasia / Purpose: Cell adhesion molecules (CAM) are essential for the maintenance of epithelial phenotype. Some studies have reported correlations between abnormalities in their expression and carcinogenesis, but their role in prostate cancer is unclear. Our aim was to study the expression profile of E-cadherin, catenins and integrins in surgical specimens of prostate cancer and associate their expression with outcome. We also assessed these expressions in bone and lymph node metastases in order to understand their influence in the progression of prostate cancer. Materials and Methods: We selected 111 patients with localized prostate cancer who underwent radical prostatectomy performed by the same surgeon. Sixty patients had no tumor recurrence after a median follow-up of 123 months. The CAM expression was evaluated by immunohistochemistry in a tissue microarray (TMA) containing two samples of each tumor. A semiquantitative analysis was employed and we measured the association between the expression of CAM and tumor recurrence. We also evaluated CAM expression by immunohistochemistry in a TMA containing 28 bone metastases and in other TMA containing 19 lymph node metastases with their corresponding 19 primary tumors. Results: In primary tumors, multivariate analysis showed that expression of 3 and 31 integrins was related to worse outcome. When 3 expression was strong and 31 expression was positive,the odds of recurrence were 3.0 and 2.5 fold higher. Only 19% and 28% of patients were recurrence-free in a mean follow up period of 123 months, when tumors showed strong 3 or positive 31 immuno-expression respectively. Other integrins have shown reduced expression, except 6 , which was expressed in most primary and metastatic cases. E-cadherin and catenins expressions were not associated with primary tumor outcome. At the metastatic setting, there was a global loss of CAM expression. We observed reliable gain of expression with prostate cancer progression only for integrin 3 that showed strong expression in half of bone and lymph node metastases. Interestingly, strong expression of and -catenin was observed in 94% of lymph node and 45% of bone metastases. Conclusions: We have demonstrated that the expression of integrins 3 and 31 was independently associated with recurrence after radical prostatectomy. In addition, we have shown that the loss of cell adhesion molecules can be considered a characteristic of prostate cancer progression

INTRODUÇÃO: O papilomavírus humano (HPV) é o agente mais frequentemente encontrado em doenças sexualmente transmissíveis e é responsável por cerca de 40% dos cânceres vulvo-vaginais. Esse trabalho abordou a resposta imune em lesões vulvares, considerando-se as células dendríticas CD1a+, FXIIIa+ e S-100+, citocinas TNF-, IFN- e IL-10 e a molécula de adesão E-caderina. MÉTODOS: Foram utilizadas 49 lesões de vulva pelo HPV (condiloma acuminado, NIV-I, NIV-II e NIV-III) e 11 bióspias com diagnóstico de vulvite crônica inespecífica. Foram constituídos quatro grupos: lesões de baixo grau (condiloma e NIV I), lesões de alto grau (NIV II e III), vulvites inespecíficas e pele normal. A detecção das células, citocinas e E-caderina foi feita através de método imuno-histoquímico. RESULTADOS: As células de Langerhans (CD1a+) estavam distribuídas em todo o epitélio, sobretudo nas camadas suprabasal e espinhosa. Não diferiram entre os grupos de lesões HPV+, mas estavam diminuídas em número e tamanho quando comparadas à pele normal (p<0.0001). As células S-100+ ou FXIIIa+ estavam localizadas em toda a extensão do estroma, sem diferença estatística entre as lesões pelo HPV. Embora os DDFXIIIa+ estivessem aumentados em tamanho nas lesões de vulva, seu número não diferiu da pele normal. Não se observou diferenças numéricas das células S-100+ entre os grupos de lesão e pele normal. Foi possível detectar maior número de DDFXIIIa+ sobre as células S-100+ no grupo de lesões de baixo grau (p = 0,0008) e de alto grau (p = 0,0031). As citocinas foram detectadas em pequenas quantidades nos grupos de lesões, porém sem diferença estatística. Para a análise da expressão de e-caderina, o grupo de vulvites crônicas inespecíficas foi utilizado como controle. Em 91.0% das vulvites inespecíficas foi observado padrão homogêneo e difuso da expressão de e-caderina na camada espinhosa baixa e média. Ambos os grupos de lesões HPV+ exibiram padrões semelhantes de expressão de e-caderina, com marcação difusa ou focal na camada espinhosa baixa e média. Não houve imuno-reatividade nas áreas de displasias. Como resultado da reação de dupla-marcação, feita através da utilização da hibridização in situ para detecção do DNA do HPV e imunohistoquímica para DDFXIIIa+, foi possível identificar antígenos virais no citoplasma dessas células. CONCLUSÕES: o HPV interfere na expressão das células de Langerhans, pois estas estavam diminuídas, com morfologia alterada em relação à pele normal; os DDFXIIIa+ apresentam-se aumentados em número sobre as células S-100+, o que poderia refletir um mecanismo local compensatório contra o HPV; as lesões de baixo e alto grau não apresentam diferenças significativas quanto à densidade de células expressando TNF-, IFN- e IL-10, embora TNF- predomine entre as três citocinas; há uma correlação positiva entre os DDFXIIIa+ e a expressão de TNF-, o que poderia ser explicado por sua capacidade em produzir tal citocina a partir de um provável estímulo desencadeado pelo HPV; o HPV influencia na expressão de E-caderina na vulva, com destaque para a ausência de expressão nas áreas de displasia; o DNA do HPV encontrado no interior dos DDFXIIIa+ aliado às alterações na morfologia celular, a sobreposição destas sobre as células S-100+ e a relação encontrada com a citocina TNF-, nos permitem sugerir que os DDFXIIIa+ têm um papel importante como células apresentadoras de antígeno frente à infecção pelo HPV. / INTRODUCTION: The human papillomavirus (HPV) is the most frequent agent in sexually transmitted diseases and is responsible for almost 40% of vulvovaginal cancer. We studied the immune response in vulvar lesions, considering the CD1a+, FXIIIa+ and S-100+ dendritic cells, TNF-, IFN- and IL-10 cytokines and the adhesion molecule E-cadherin. METHODS: We used 49 vulvar lesions mediated by HPV (condylomata acuminata, VIN-I, VIN-II e VIN-III) and 11 biopsies diagnosed as chronic non-specific vulvitis. Four groups were formed: low-grade lesions (condylomata and VIN-I), high-grade lesions (VIN-II and III), non-specific vulvitis and normal skin. The detection of cells, cytokines and e-cadherin was performed by immunohistochemistry reaction. RESULTS: Langerhans cells (CD1a+) were distributed through epithelia, mainly in suprabasal and spinous layer. They did not differ between HPV groups, but were decreased in number and size when compared to normal skin (p<0.0001). The S-100+ ou FXIIIa+ cells were distributed through stroma and did not differ between HPV lesions. Although the FXIIIa+DD were increased in size in vulvar lesions, their number did not differ from normal skin. The S-100+ cells did not differ in number between the groups of lesions and normal skin. We detected an increased number of FXIIIa+DD over S-100+ cells in the group of low-grade (p = 0.0008) and high-grade lesions (p = 0.0031). The cytokines were detected in small quantities in both the lesions groups, with no statistical difference. The group of chronic non-specific vulvitis was used as control group to analyse the expression of e-cadherin. 91.0% of non-specific vulvitis presented a homogeneous and diffuse pattern of expression in spinous layer Both the HPV+ groups of lesions presented similar patterns of e-cadherin expression, with a focal or diffuse localization in spinous layer. The dysplastic epithelium did not present immunoreactivity. As a result of the double-staining, using in situ hibridization to detect DNA of HPV and immunohistochemistry to FXIIIa+DD, it was possible to observe viral antigens in the cytoplasm of such cells. CONCLUSIONS: The HPV interfere with the expression of Langerhans cells, since they were decreased when compared to the normal skin; the FXIIIa+DD were increased in number over S-100+ cells, suggesting a local compensatory mechanism against the HPV; the low and high grade lesions did not differ in the number of cells expressing TNF-, IFN- and IL-10, although TNF- predominate among the three cytokines; there is a positive correlation between the FXIIIa+DD and the expression of TNF- that could be explained by their role as TNF-producing cells following a stimulus of HPV; the HPV changes the expression of E-cadherin in vulvar lesions, mainly in dysplastic epithelium; HPV DNA visualized in the cytoplasm of FXIIIa+DD and the cellular morphological changes, the increased number over S-100+ cells and the correlation with TNF-, allow us to suggest that FXIIIa+DD play an important role as antigen presenting cells in the infection by HPV.

A carcinogênese oral é um processo multifásico, onde componentes genéticos levam a desregulação de vias de sinalização celular que controlam funções celulares básicas, como divisão, diferenciação e morte celular. Uma das maneiras de compreender a natureza biológica dos cânceres, além do curso clínico, é através do entendimento do processo de progressão e metástase destas neoplasias. Este estudo teve como objetivo avaliar a participação da proteína Twist no desenvolvimento e progressão dos carcinomas epidermóides orais. Com tal proposta, também foi avaliada a participação das proteínas caderina-E e p-Akt, e sua possível interação com Twist no processo de carcinogênese oral. O trabalho em questão analisou a expressão imuno-histoquímica destas proteínas em 30 espécimes de displasia oral, 20 de carcinoma epidermóide oral e 10 de mucosa oral normal, e avaliou também a possível inter-relação dessas proteínas em linhagens derivadas de carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço por meio dos ensaios de Western Blotting e imunofluorescência. Os resultados deste estudo demonstraram uma relação inversamente proporcional entre Twist e caderina-E desde os estágios mais precoces da carcinogênese oral. Tal afirmação baseou-se na presença de diferenças significantes entre a expressão imuno-histoquímica de Twist e Caderina-E na amostras de epitélio oral, epitélio displásico e nos espécimes de carcinoma epidermóide oral. Adicionalmente, foi observada a relação inversa entre Twist e a Caderina-E nas linhagens de carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço, sendo este evento constatado pelo decréscimo nos níveis protéicos da Caderina-E frente a uma elevação de Twist. Estes resultados sugerem um importante papel de Twist na progressão do carcinoma epidermóide oral, e juntamente com a Caderina-E, pode representar um relevante marcador biológico do câncer oral. / The oral carcinogenesis is a multi-stage process, where genetic components leads to deregulation of cell signaling pathways that control basic cellular functions such as division, differentiation and cell death. One way to understand the biological nature of cancers, besides the clinical course, is through understanding the process of progression and metastasis of these neoplasms. This study aimed to evaluate the role of Twist protein in the development and progression of oral squamous cell carcinomas. With this proposal, was also evaluated the involvement of E-cadherin and p-Akt proteins, and its possible interaction with Twist in the process of oral carcinogenesis. The work in question examined the immunohistochemical expression of these proteins in 30 specimens of oral dysplasia, 20 oral squamous cell carcinoma and 10 normal oral mucosa, and also evaluated the possible interrelationship of these proteins in lines derived from squamous cell carcinoma of head and neck by means of Western blotting assays and immunofluorescence. The results of this study showed an inverse relationship between Twist and E-cadherin since the earliest stages of oral carcinogenesis. These results were based on the presence of significant differences between the immunohistochemical expression of Twist and ECadherin in samples of oral epithelium, dysplastic epithelium and in specimens of oral squamous cell carcinoma. In addition, we observed the inverse relationship between Twist and E-Cadherin in the lines of squamous cell carcinoma of head and neck; this event was evidenced by the decrease in protein levels of E-Cadherin forward to a high of Twist. These results suggest an important role of Twist in the progression of oral squamous cell carcinoma, and along with E-cadherin may represent a relevant biomarker of oral cancer.

The adaptability and robustness of the central nervous system is partially explained by the vast diversity of neuronal identities. Molecular mechanisms generating such heterogeneity have evolved through multiple independent pathways. The olfactory sensory system provides a unique and tractable platform for investigating at least two orthogonal gene expression systems that generate neuronal diversity through stochastic promoter choice: olfactory receptor genes and clustered protocadherins. Olfactory sensory neuron identity is defined by the specific olfactory receptor (OR) gene chosen. Greater than 1300 OR genes are scattered throughout the mouse genome, and expression of an OR defines a unique sensory neuron class that responds to a selective set of odorants. This work further delineated an unprecedented network interchromosomal (trans) interactions indispensable for singular OR choice. In a largely orthogonal gene expression system, I sought to understand the molecular mechanisms governing stochastic protocadherin choice. Clustered protocadherins are an evolutionary- conserved system that is involved in cell-cell identification through a series of homo- and heterophilic interactions. This work uncovered a methylation-dependent mechanism for generating stochastic gene expression in the context of cis-regulatory elements. Overall, this work highlighted divergent cis and trans transcriptional regulatory mechanisms for generating stochastic gene expression and neuronal diversity.