Leucotrienos (LTs) são mediadores lipídicos derivados do ácido araquidônico. Existem evidências que receptores da imunidade inata interagem com receptores para LTs amplificando funções efetoras de macrófagos. Investigamos se LTs modulam a fagocitose e a atividade microbicida via receptores Manose, Dectina -1 e PTX3 em macrófagos alveolares (AMs) e os mecanismos moleculares envolvidos. Nossos resultados mostram que: 1) AMs sintetizam LTs quando fagocitam C. albicans, Zy e Zy-PTX3; 2) LTs potencializam a fagocitose de C. albicans e Zy, mas não de Zy-PTX3. Este efeito dos LTs depende: do reconhecimento via receptor manose (LTB4) e Dectina-1 (LTD4); da integridade de lipid rafts; da ação em mecanismos de polimerização de actina; do aumento dos níveis de F-actina por inativação da Cofilina-1; da ativação das LIMKs, que regulam Cofilina-1; da ativação de PKC<font face=\"Symbol\">d e PI3K3) LTs aumentam a capacidade de AMs em matar C. albicans por ativação de NADPH oxidase. Em conjunto, mostramos que LTs potencializam programas de sinalização específicos para determinados PRRs. / Leukotrienes (LTs) are lipid mediators derived from arachidonic acid. There is evidence that innate immunity receptors and leukotrienes receptors interact and amplify macrophage effector functions. We investigated if LTs receptors modulate phagocytosis and microbicidal activity mediated by Mannose receptor, Dectin-1 and PTX3 in alveolar macrophages (AMs) and the molecular mechanisms involved. Our results showed that: 1) AMs produce LTs when stimulated with C.albicans, Zy, Zy-PTX3; 2) LTs enhance phagocytosis of C.albicans and Zymosan, but not Zy-PTX3. This is dependent on: recognition via mannose receptor (LTB4) and Dectin-1 (LTD4); integrity of lipid rafts; its action on actin polimerization mechanisms; enhancement of F-actin levels by induction of Cofilin-1 inactivation; activation of LIMKs that regulate Cofilin-1; activation of PKC<font face=\"Symbol\">d and PI3K3) LTs enhance killing of C.albicans by activation of NADPH oxidase. Taken together, our results showed that LTs specifically influence signaling programs of keys PRRs.

Orientador: Altair Antoninha Del Bel Cury / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-17T15:28:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gomes_PriscilaNogueira_D.pdf: 18801720 bytes, checksum: 026aef1649b772f202792184935cb7cb (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: O biofilme de Candida spp. formado na superfície de próteses removíveis, é o principal fator etiológico da candidose, sendo a C. albicans e a C. glabrata as espécies mais prevalentes nesta condição. O antifúngico fluconazol (FLZ) é frequentemente utilizado no tratamento da candidose, porém o sucesso tem sido limitado devido a resistência desenvolvida pela Candida a esse medicamento. Considerando a importância da estrutura e morfologia do biofilme de Candida na candidose, o objetivo neste estudo foi avaliar o efeito de FLZ na bioatividade, bioestrutura e morfologia celular de biofilmes de Candida spp. desenvolvidos na presença deste antifúngico. Espécimes (10 mm x 2 mm) foram confeccionados utilizando resina de poli(metilmetacrilato) (PMMA), polimerizada por banho de água quente. Películas de saliva foram formadas na superfície da PMMA, e biofilmes de um isolado referência e dois isolados clínicos de C. albicans (ATCC 90028, P01, P34) e C. glabrata (ATCC 2001, P11, P31) foram desenvolvidos por 48h. Dois grupos foram formados: controle e experimental. FLZ a 2,56 µg/mL, concentração biodisponivel na saliva, foi adicionado ao meio de cultura do grupo experimental. Os meios de cultura do grupo controle e experimental foram trocados a cada 24 h. As bioatividades dos biofilmes foram avaliadas utilizando análise colorimétrica de redução por XTT. A bioestrutura analisada através do Microscópio Confocal à Laser e a morfologia celular avaliada utilizando o Microscópio Eletrônico de Transmissão. Os dados foram analisados pelo Test t de Student com nível de significância de 5%. A presença do FLZ reduziu a bioatividade de todos os biofilmes de C. albicans (p<0.001), porém não alterou a estrutura e morfologia da C. albicans P34. Quanto à bioatividade e bioestrutura dos biofilmes de C. glabrata, não foram encontradas diferenças estatisticamente significantes entre os grupos controle e experimental. Pode-se concluir que as alterações da bioatividade, bioestrutura e morfologia celular, como resposta ao tratamento com FLZ, na concentração biodisponível na saliva, depende da cepa de Candida spp. avaliada. / Abstract: Candida spp. biofilm formed on removable denture surfaces is considered the main etiologic factor of candidosis, being the C. albicans and C.glabrata the species most frequently found in this condition. The antifungic fluconazol (FLZ) is commonly used in the treatment of candidosis, however its success is limited due to the resistance developed by Candida to this medicament. Considering the importance of the structure and morphology of Candida biofilms in the candidosis, the aim of this study was to evaluate the effect of FLZ on the bioactivity, biostructure and morphology of Candida spp. biofilms formed in the presence of this antifungal agent. Specimens (10 mm x 2 mm) were fabricated using water bath poly(methylmethacrylate) resin (PMMA). Salivary pellicles were formed on the PMMA surface, and biofilms of a reference strain and two clinical isolates of C. albicans (ATCC 90028, P01, P34) and C. glabrata (ATCC 2001, P11, P31) were developed for a period of 48h. Two groups were formed: control and experimental. FLZ at 2.56 µg/mL, concentration bioavailable in saliva, was added to the medium of the experimental group. The culture mediums of the control and experimental groups were changed at 24 hours. The bioactivities of the biofilms were evaluated with XTT reduction colorimetric assay. The biostructure was analyzed by the Confocal Scanning Laser Microscopy and the cell morphology analyzed by the Transmission Electron Microscopy. The data were analyzed by Student's t-test, with significance level set at 5%. The presence of FLZ decreased the bioactivity of all C. albicans biofilms (p<0.001), it did not change the structure and morphology of P34. As regards C. glabrata biofilms bioactivity and biostructure, no statistically significant differences were found between control and experimental groups for biofilms of all strains. It could be concluded that the alterations in bioactivity, biostructure and cell morphology in response to the treatment with fluconazole, bioavailable concentration present in saliva, depends on the Candida spp. strain / Doutorado / Protese Dental / Doutor em Clínica Odontológica

Orientadores: Altair Antoninha Del Bel Cury, Wander José da Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-16T00:32:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vieira_AnaPaulaCoelho_M.pdf: 9359911 bytes, checksum: ce3ea88b4fe614a7aecf6b9d7b4454ed (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Os reembasadores para base de prótese, após a exposição à cavidade bucal, apresentam alterações de superfície facilitando a adesão e a colonização por micro-organismos. Para a limpeza de superfície desses materiais são indicados os limpadores químicos para evitar os danos mecânicos que podem ser provocados pelas cerdas das escovas dentais. Assim, o objetivo nesta pesquisa foi avaliar a eficácia de limpadores químicos na remoção de biofilme de Candida spp. desenvolvido sobre a superfície de um reembasador classificado como permanente à base de poli-metilmetacrilato e na prevenção da re-colonização dessa superfície, especialmente a Candida spp., comumente associada ao desenvolvimento da candidíase. Espécimes (10 mm diâmetro X 3 mm altura) de resina acrílica reembasada com um reembasador mais representativo disponível comercialmente teve sua rugosidade de superfície mensurada antes (baseline) e biofilme de C. albicans ATCC 90028 ou C. glabrata ATCC 2001 foi desenvolvido sobre os mesmos. Após a formação dos biofilmes os espécimes foram aleatorizados e submetidos aos tratamentos (n=16): AD - Água destilada (Controle), 15 min; POL - Polident 3 minutos, 3 min; EFF - Efferdent, 15 min; HPS - Hipoclorito de sódio a 0,5%, 10 minutos. Metade destes espécimes (n=8) foi utilizada para determinação da eficácia dos limpadores, utilizando contagem de células viáveis, enquanto os espécimes remanescentes (n=8), após os tratamentos, foram novamente colocados em meio de cultura estéril e incubados por mais 48 h a fim de determinar o efeito dos limpadores na prevenção da recolonização. Após os tratamentos os espécimes tiveram a rugosidade de superfície determinada, considerada pós-tratamento. Alguns espécimes de cada uma das espécies de Candida tiveram a superfície analisada após os tratamentos, por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os dados foram submetidos à análise de variância e teste de Tukey HSD em nível de significância de 5%. A rugosidade de superfície foi significantemente maior após os tratamentos (P<0,05). Quantos aos tratamentos, o HPS mostrou-se efetivo tanto para a desinfecção quanto na recolonização de ambas as espécies de Candida, pois houve ausência total de crescimento. Na avaliação da desinfecção, imediatamente após os tratamentos, quando C. albicans foi considerada, não houve diferença significativa entre os peróxidos alcalinos (p>0,05) e ambos diminuíram o número de células fúngicas (p<0,05) comparado ao tratamento com AD. Entretanto, para C. glabrata, os tratamentos com ADD e peróxidos alcalinos não se diferenciaram entre si (p>0,05). Na análise dos resultados para a recolonização foi observada que houve inversão no comportamento, pois enquanto, para C. albicans, os tratamentos com AD e peróxidos alcalinos não diferiram entre si (p>0,05), para C. glabrata os tratamentos com peróxidos alcalinos apresentaram valores similares e menores (p>0,05),quando comparados com o tratamento com AD (p<0,05). Na comparação entre as espécies de Candida observou-se que C. glabrata apresentou os maiores níveis de células viáveis quando os dados foram avaliados na situação de imediatamente após os tratamentos com os peróxidos alcalinos e foi diferente de C albicans (p<0,05). Entretanto não houve diferença para a recolonização (p>0,05). Os resultados sugerem que os limpadores a base de peróxidos alcalinos não foram efetivos na remoção total dos micro-organismos e também não impediram a recolonização por Candida spp / Abstract: The denture liners exhibits surface changes in oral environment by constant loss of its constituent elements, which facilitate microorganisms adherence that leads to biofilm formation. Denture liners surface can be cleaned by brushing or using denture cleaners, which are recommended, in order to avoid mechanic injuries to denture liners by brushing it. Therefore, the aim of this study was to evaluate the long term efficacy of denture cleansers on Candida spp. biofilm recolonization on liner surface. Specimens of poly (methylmethacrilate) were lined according to manufacturer instructions (10 mm diameter X 3.0 mm thickness). Surface roughness was measured at baseline and after the treatments. Next, biofilms of C. albicans ATCC 90028 and C. glabrata ATCC 2001 were allowed to develop on liner surface for 48 h. Subsequently, the specimens were randomly assigned for the cleaning treatments (n=16): distilled water (DW - control), 15 min; Polident 3 minutes (POL) - 3min; Efferdent (EFF)-15 min; sodium hypochlorite (HYP) - 10 min. After the treatments, specimens (n=8) were sonicated for biofilm disruption and the viable cells were counted (cell/mL). To determine the long term effectiveness of the cleaning process, a set of cleaned specimens (n=8) were submitted to new biofilm growth conditions. After 48 h, biofilm were disrupted by sonication and cell number estimated. Scanning electron microscopy was performed to analyze the specimen topography after denture cleanser treatment. Data were analyzed by ANOVA and Tukey's HSD test was used as post-ANOVA employing a significance level fixed at 5%. The liner surface was rougher after the treatments (P<0.05). Results showed significant differences in cleanliness among the treatments (p<0.05), however for Candida species (p<0.05) no significant difference was observed in the recolonization condition (p>0.05). Alkaline denture cleansers showed similar cleaning performance and both showed lower cells counts compared with the control (p<0.05). Hypochlorite was the only effective treatment as no viable cells were detected even after the recolonization test. Within the limits of this study, it can be concluded that alkaline denture cleansers were not effective on biofilm removal, once denture liner surface by Candida spp biofilm recolonization was not prevented / Mestrado / Protese Dental / Mestre em Clínica Odontológica

Orientador: Altair Antoninha Del Bel Cury / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-10T17:01:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_MariaAureaFeitosa_D.pdf: 2857977 bytes, checksum: 7b67b3ca7a58610f31bdf75ed5e2f13b (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Candida albicans está associada com a etiologia da estomatite protética, patologia que acomete entre 11 a 67% dos usuários de próteses removíveis. Entretanto, mais recentemente, a Candida glabrata tem se destacado por apresentar hidrofobicidade e adesão à superfície de resina acrílica superior à da Candida albicans. Em acréscimo, características de superfície dos materiais como rugosidade (Ra) e energia livre de superfície (ELS) podem contribuir para a adesão de microrganismos. Desse modo, o objetivo desta pesquisa foi avaliar a rugosidade e energia livre de superfície dos rembasadores de próteses à base de poli - metilmetacrilato (Coe Soft e Kooliner) e silicone (Ufi Gel P) antes da contaminação com C. albicans ATCC 90028 e C. glabrata ATCC 2001, bem como verificar a eficácia dos limpadores químicos à base de peróxidos (Polident 3 minutes e Efferdent) e Hipoclorito de sódio a 0,5% na remoção desses microrganismos.Assim, para cada material rembasador foram confeccionadas 64 bases de resina acrílica Onda CryI (25 x 12 x 1mm), preparadas conforme as instruções do fabricante e, reembasadas constituindo dessa forma os corj'i>osde prova. Estes tiveram a rugosidade e energia de superfície determinadas. A seguir, foram separadas aleatoriamente em 2 grupos constituídos de 32 amostras cada, conforme o tipo de Candida. Em seguida, estes foram subdivididos em 4 grupos de 8 de acordo com os tratamentos: G1 - Água destilada (Controle); G2 - Polident ; 3 minutes; G3 - Efferdent; G4 - Hipoclorito de sódio 0,5%. Todas as amostras foram imersas em saliva humana durante'30 minutos para a formação da película adquirida. Posteriormente, foram submetidas ao teste de adesão durante período de 2 horas com uma das candidas, e então submetidos aos tratamentos nos tempos de: G1 - 15 minutos; G2 - 3 minutos; G3 -15 minutos e G4 -10 minutos. A contagem das células remanesce.ntes após o tratamento foi realizada em microscópio de luz (400x). Os dados foram submetidos à análise de variância e teste de Tukey (rugosidade de superfície e aderência fúngica) e ANOVA on Ranks para ELS, com nível de significância de 5%. O rembasador à base de silicone (Ufi Gel P) apresentou os menores valores de rugosidade comparados aos rembasadores à base de poli-imetil metacrilato (Coe 50ft e Kooliner), p<0,05. Entretanto, todos os materiais diferiram entre si para a energia de superfície (p<0,05), sendo que o Coe 50ft e o Ufi Gel P apresentaram os maiores e menores valores, respectivamente. Candida glabrata apresentou o maior número de células remanescentes aderidas, independente do rembasador utilizado (p<0,01). Dentre os limpadores, apenas o hipoclorito de sódio 0,5% diferiu do controle (p=0.001), apresentando um menor número de células remanescentes aderidas. Condui-se que o hipoclorito de sódio a 0,5% foi eficaz na remoção das células aderidas dos rembasadores, independente da espécie de Candida / Abstract: Candida albicans is associated with denture stomatitis etiology, pathology which affect about 11 to 67% of removable prostheses users. However, more recently, the Candida glabrata has been highlighted for presenting superior hydrophobicity and resin acrylic surface adherence when compared to the C. albicans. In addition, surface characteristics' materiais such roughness (Ra) and surface free energy (EL8) may contribute to the microorganisms' adhesion. Thus, the purpose of this study was to evaluate the surface roughness and surface free energy of methyl methacylate liners materiais (Coe 80ft and Kooliner) and silicone (Ufi Gel P) before contamination with C. albicans (ATCC 90028) and C. glabrata (ATCC2001), as well to verify the peroxide chemical denture cleansers efficacy (Polident 3 minutos and Efferdent) and 0.5% sodium hypochlorite - NaOCl, in the miaoorganisms' removing. Thus, 64 rectangular bases measuring 25 x 12 x 1 mm using microwave-polymerized acryli~ resins, following manufacturers' recommendations, to each material were made, then were relined and after surface roughness and surface free energy were measured. Next, the samples were randomly separated by lottery into two groups of 32 each, according to the fungus and these were subdivided into four groups of eight as the treatments: G1 - Distilled water (Control); G2 - Polident 3 min. utes; G3 - Efferdent; G4 - 0,5% NaOCI. Ali the samples rested in human whole saliva for 30 minutes to form an acquired pellicle. After, they were submitted to the adherence assay with one of the fungus for two hours, and then, treated, following these times: G1 - Distilled water (15 minutes); 2 - Polident 3 minutes (3 minutes); 3 - Efferdent (15 minutes); 4 - 0,5% sodium hypochlorite (10 minutes). The adhered cells were counted using a light microscope (Axiostar 2 Plus, Carl Zeiss, Jena, Germany) at 400 x magnification. The data were submitted to the analysis of variance and Tukey test (roughness and fungus adherence) and ANOVA on Ranks for EL8, with significance levei of 5%. The silicone-based liner (Ufi Gel P) showed lower values of roughness compared to the methyl methacrilate-based liners (Coe 80ft and Kooliner), (p<0.05). However, ali these materiais were different among them for surface free energy (p<0.05), where the Coe 80ft and Ufi Gel P showed the highest and lowest values, respectively. Candida glabrata showed the highest number of adhered cells for ali materiais (p<0.01). Among evaluated cleansers, only 0.5% sodium hypochlorite differed from the control (p=0.001), showing the lowest number of remaining cells adhered. The conclusion is that the 0.5% sodium hypochlorite was the only one chemical cleanser efficient in the adhered cells removing in ali denture liners independent of the Candida specie / Doutorado / Protese Dental / Doutor em Clínica Odontológica

Orientador: Célia Marisa Rizzatti Barbosa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-18T20:42:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Leal_CristianeMariaBrasil_D.pdf: 1004692 bytes, checksum: 29697b5c7bdbece2ba32ca361de7e805 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: As propriedades de superfície de resinas e reembasadores a base de polimetilmetacrilato utilizados em próteses dentais removíveis podem interferir na adesão, colonização e formação do biofilme de Candida spp., microrganismo associado à estomatite protética. O objetivo desta pesquisa foi avaliar a influência da rugosidade e da energia livre de superfície de uma resina a base de polimetilmetacrilato e um reembasador rígido na adesão e estrutura de biofilmes de Candida albicans. Discos de resina acrílica termopolimerizável e de reembasador rígido à base de polimetilmetacrilato foram confeccionados nas dimensões de 10 x 2 mm. As diferentes rugosidades de superfície dos espécimes foram obtidas por meio de diferentes acabamento/polimento. A energia livre de superfície variou pela formação de películas de saliva ou plasma ou a combinação de ambos sobre os espécimes. Após a mensuração da rugosidade e da energia livre de superfície, os espécimes foram divididos aleatoriamente de acordo com os grupos experimentais. Biofilmes de Candida albicans ATCC 90028 foram formados sobre as superfícies e avaliados quanto à contagem celular, bioatividade e arquitetura (bio-volume, espessura média e rugosidade média) nas fases de adesão e após 48 horas. Os dados foram analisados utilizando-se a análise de variância a dois critérios seguido do teste de Tukey. O nível de significância foi de p=0,05. Os resultados revelaram que mesmo havendo diferenças significantes (p<0,001) entre os valores da rugosidade, isto não se refletiu nos parâmetros avaliados do biofilme de C. albicans no período de 48 horas. Não houve diferença significativa nos valores da energia livre de superfície, no entanto, a diferença das películas provocou alterações significativas do biofilme de C. albicans na fase de adesão e 48 horas (p>0,05). Pode-se concluir que a alteração da rugosidade de superfície não afeta a estrutura do biofilme de C. albicans de 48 horas, no entanto, a alteração da energia livre de superfície por meio da deposição de proteínas salivares e/ou plasmáticas altera a estrutura do biofilme nas fases de adesão e 48 horas / Abstract: The properties of surface of the resins and reliners base of polymethymethacrylate used in removable dental prosthesis can interfere in the adhesion, colonization and formation of biofilm of Candida spp., microorganism associated to the prosthetic stomatitis. The objective of this research was to evaluate the influence of the roughness and the free energy of surface of the resin the base of polymethymethacrylate and a rigid reliner in the adhesion and structure of biofilms of C. albicans. Discs of the termopolymerized acrylic resin and rigid reliner to the base of polymethymethacrylate had been confectioned in the dimensions 10 x 2 mm. The differents roughness of surface of the specimens were obtained by means of different finishing/polishing. The free energy of surface varied for the formation of pellicle of saliva or serum or the combination of both on the specimens. After the measurement the roughness and the free energy of surface, the specimens were divided randomly in accordance to the experimental groups. Biofilms of Candida albicans ATCC 90028 were formed on the surfaces and evaluated for cell count, bioactivity and architecture (bio-volume, average thickness and average roughness) in the adhesion phases and after 48 hours. The data were analyzed using analysis of variance with two criteria followed by the Tukey test. The significance level was p=0,05. The results showed that even with significant differences (p<0.001) between the values of roughness, it did not reflect in the parameters evaluated of biofilm of C. albicans in 48 hours. There was no significant difference in the values of the free energy of surface; however, the difference of the pellicles caused significant alterations of biofilm of C. albicans in the adhesion phase and 48 hours (p>0,05). It can be concluded that the alteration of the roughness of surface don't affect the structure of biofilm of C. albicans of 48 hours, however, the alteration of the free energy of surface by deposition of salivary and/or serum proteins modifies the structure of biofilm in the adhesion phases and 48 hours / Doutorado / Protese Dental / Doutor em Clínica Odontológica

Orientador: Ana Claudia Pavarina / Resumo: O fungo Candida albicans, em situações de desequilíbrio imunológico no hospedeiro, pode se tornar um patógeno oportunista e provocar infecções. Tendo em vista a resistência que os microrganismos desenvolveram a fármacos convencionais, a Terapia Fotodinâmica Antimicrobiana (aPDT) vem apresentando resultados promissores como uma terapia alternativa. O objetivo deste estudo foi avaliar o potencial que aPDT possuiu em desenvolver resistência, tolerância ou susceptibilidade em C. albicans em associação com o Photodithazine (PDZ- 25 µg/L; 660 nm; 18 J/cm2) e Curcumina (CUR- 40 µg/L; 455 nm; 18 J/cm2) plaqueados em meio sem e com suplementação de Fluconazol (8 µg/L). C. albicans (ATCC 90028) em culturas planctônicas e biofilme foram submetidas à aplicações sucessivas de aPDT (10 aplicações), como também, a ciclos de recuperação e re-cultivo das colônias que sobreviveram ao tratamento até o momento que não houvesse mais células viáveis para a recuperação e continuação das aplicações. O plaqueamento foi realizado em placas de Ágar Sabourand Dextrose suplementadas ou não com Fluconazol, e os valores das unidades formadoras de colônia por mililitro (UFC/mL) foram determinados. O teste de produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) foi realizado nos primeiros e últimos ciclos de aPDT. O perfil biomolecular das células sobrevivetes as aplicações 1, 4 e 7 de aPDT mediada por PDZ foi investigado através do teste de RT-qPCR. Foi observado no grupo tratamento de aPDT (P+L+) mediada por P... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The fungus Candida albicans, in situations of immune imbalance in the host, can become an opportunistic pathogen and cause infections. Because of the resistance that microorganisms have developed to conventional drugs, Antimicrobial Photodynamic Therapy (aPDT) has shown promising results as an alternative therapy. The main goal of this study was to evaluate the potential of aPDT to develop resistance in C. albicans in association with Photodithazine (PDZ-25 µg/L; 660 nm; 18 J/cm2) and Curcumin (CUR-40 µg/L; 455 nm; 18 J/cm2) grown with and without Fluconazole (8 µg/L). C. albicans (ATCC 90028), in planktonic and biofilm cultures, were submitted to successive applications of aPDT (10 applications), as well as cycles of recovery and re-cultivation of colonies that survived treatment until no longer viable cells were present for application recovery and continuation. Plating was performed on Sabourand Dextrose Agar plates supplemented or not with Fluconazole, and values of colony forming units per milliliter (CFU/mL) were determined. The reactive oxygen species (ROS) production test was performed in the first and last cycles of aPDT. The biomolecular profile of surviving cells as applications 1, 4 and 7 of PDZ-mediated aPDT was investigated using the RT-qPCR test. PDZ-mediated treatment of aPDT (P+L+) was observed to reduce approximately 6.8 log10 in planktonic cultures and approximately 6.2 log10 in C. albicans biofilm in both methodologies used. In the aPDT (C+L+) treatment gr... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

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The virulence of the opportunistic fungal pathogen Candida albicans is in part due to its ability to switch between a yeast and hyphal form; permitting physical rupture and escape from macrophages after phagocytosis. This interesting feature makes C. albicans a good model organism to study in the context of phagosome maturation and in particular, the role of the small GTPase Rab14 in this process. Rab14 is recruited to bacterial phagosomes containing Chlamydia trachomatis (Capmany & Damiani, 2010) and Mycobacterium bovis BCG (Kyei et al, 2006) and aids their survival in macrophages but its role in phagosomes containing fungal pathogens is not known. Here, an important role for Rab14 in protecting macrophages against hyphal mediated lysis by C. albicans is demonstrated. Macrophages were transfected to express eGFP-Rab14, or dominant negative variants (eGFP-Rab14 S25N and eGFP-Rab14N124I); or were transfected with anti-Rab14 siRNA; then infected with live C. albicans and observed using sophisticated live cell imaging and analysis tools. Phagosomes containing live C. albicans became transiently Rab14-positive within 2 minutes following engulfment. Interestingly, a prolonged retention of Rab14 on phagosomes depended on C. albicans morphology. Phagosomes containing hyphal forms retained Rab14 for twice as long as for phagosomes containing the yeast form. Depletion of endogenous Rab14 did not affect macrophage migration towards C. albicans, the rate of engulfment or acquisition of markers of early phagosome maturation to phagosomes containing C. albicans. Furthermore, reduced Rab14 expression did not influence the kinetics of Rab5 localisation to phagosomes in macrophages that were co-transfected. Importantly, partially depleting Rab14 delayed the appearance of late phagosome maturation indicators LAMP1 and activated cathepsin in phagosomes containing live C. albicans.Rab14 knockdown was associated with a significant increase in macrophage killing by C. alibica The data presented in this thesis demonstrate the dynamic relationship between host and pathogen which can be visualised in real time at the level of individual phagosomes. Rab14 plays an important role during phagosome maturation which impacts on the later stages of phagosome maturation and is important for phagocyte survival after phagocytosis of C. albicans.

published_or_final_version / Paediatrics / Doctoral / Doctor of Philosophy

published_or_final_version / Dentistry / Doctoral / Doctor of Philosophy