Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Introducción La población de adultos mayores ha presentado un importante incremento a nivel mundial. La patología oral mas prevalente en esta población es la estomatitits protésica (EP), proceso inflamatorio crónico de la mucosa masticatoria, asociado al uso de prótesis removible (PR). La etiología de la EP es multifactorial, pero se asocia fuertemente a levaduras del género Candida, infección conocida como candidiasis oral. La alteración de los parámetros salivales como pH, velocidad de flujo salival (VFS) y concentración total de proteínas en saliva ha sido relacionada con la enfermedad, pudiendo jugar un rol en la patogenia de la EP asociada a candidiasis. Los probióticos se definen como microorganismos vivos que al ser administrados en cantidades adecuadas, confieren beneficios al hospedero. El propósito de este estudio fue analizar el efecto del consumo de un producto lácteo enriquecido con probiótico o placebo en los parámetros salivales de adultos mayores portadores de PR con EP asociada a candidiasis oral y en adultos mayores sanos luego de 3 meses. Metodología El presente estudio incluyó 66 voluntarios mayores de 60 años pertenecientes a un establecimiento de larga estadía para adultos mayores (ELEAM) y a la clínica de prótesis totales, de la Facultad de Odontología de la Universidad de Chile, todos portadores de PR. La muestra se dividió en 4 grupos, pacientes con EP que consumieron el lácteo con probiótico, pacientes con EP que consumieron el lácteo con placebo, pacientes sanos que consumieron el lácteo con probiótico y pacientes sanos que consumieron el lácteo con placebo. Previa firma del consentimiento informado, la recolección de datos se realizó mediante una ficha clínica, se obtuvieron muestras salivales al inicio del estudio y luego de 3 meses de consumo del producto lácteo, las cuales fueron analizadas para determinar VFS, pH y concentración total de proteínas en la saliva. Resultados Hubo diferencia estadística en la variable pH solo en aquellos pacientes que consumieron el lácteo con placebo. En cuanto a la VFS, solo hubo diferencia estadística en el grupo de pacientes portadores de PR con EP asociada a candidiasis oral que consumieron el lácteo con placebo. Al analizar la variable concentración de proteínas en saliva hubo diferencias estadísticas en todos los grupos, excepto en el grupo sano que consumó el lácteo con probiótico. Conclusiones No es posible comprobar un efecto del probiótico en el pH salival o VFS, ya que estos parámetros se mantuvieron dentro de los valores normales, tanto en los pacientes que recibieron el probiótico como el placebo. Es posible relacionar el consumo de probiótico con un aumento en la concentración total de proteínas en saliva, sin embargo para comprobar esta correlación son necesarios futuros estudios cualitativos que establezcan un perfil proteico de cada grupo estudiado.

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:34:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_5800_.pdf: 2180083 bytes, checksum: e02a70326674378f47a4ff79ca722f6a (MD5) Previous issue date: 2012-08-10 / Leveduras são fungos oportunistas responsáveis pela maior parte das infecções fúngicas nos seres humanos e Candida albicans é a espécie mais frequentemente associada a essas infecções. A candidíase oral se destaca pela alta incidência e pelo uso frequente de drogas antifúngicas, o que pode levar à ocorrência de resistência e falência no tratamento da infecção. Há uma constante necessidade de pesquisas sobre novos agentes para a profilaxia e tratamento eficaz da candidíase oral. O principal objetivo deste trabalho foi a avaliação do potencial efeito antifúngico de extratos das plantas Gossypium hirsutum L., Arctium lappa, Equisentum sp., Cecropia pachystachya Trécul. e Pogostemon heyneanus sobre células não aderidas de Candida albicans e a avaliação do efeito dos antissépticos bucais Cepacol® Cool Ice, Listerine® Cool Mint, Periogard® e Plax® Whitening sobre células não aderidas e biofilmes de Candida albicans. As metodologias utilizadas basearam-se na avaliação da susceptibilidade de isolados clínicos de C. albicans através da determinação da inibição de crescimento celular por turbidimetria e por para determinação das Concentrações Inibitórias Mínimas (CIM). Os resultados obtidos nos testes com células não aderidas revelaram-se promissores com extratos de Cecropia pachystachya Trécul., com valores de CIM entre 7,81 e 3,91 µg/mL. Os antissépticos Cepacol® e Periogard® apresentaram os menores valores de CIM, entre 0,20 e 0,10%; Plax® Whitening variou entre 1,56% e 0,39% e Listerine® apresentou valores entre 6,25% e 0,39%. As diferenças estatísticas (Kruskal-Wallis, p< 0,0001) revelaram que os antissépticos Cepacol® Cool Ice e Periogard® apresentaram os melhores resultados. Em relação a inibição de formação de biofilmes, as CIMs encontradas foram similares para os antissépticos testados, variando de 50% a 0,20%, sem diferenças estatísticas entre estes (Kruskal-Wallis, p= 0,6915). Palavras-chave: Candida albicans; biofilme; antissépticos bucais; extratos vegetais; CIM.

Made available in DSpace on 2016-04-01T17:54:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-05-25. Added 1 bitstream(s) on 2016-04-01T18:00:10Z : No. of bitstreams: 1 000860821.pdf: 2915690 bytes, checksum: 1ff5640161c93a6edf44ddc1558a8eeb (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Candida albicans é um fungo oportunista capaz de causar infecções superficiais e até sistêmicas. A maioria das infecções é mediada pela formação de biofilme que confere resistência aos agentes antifúngicos e ao sistema imune, porém os mecanismos de desenvolvimento do biofilme e patogenicidade ainda não foram completamente elucidados. No presente estudo foram selecionados 9 genes de C. albicans com função desconhecida, dentre 34 cepas mutantes que apresentaram fenótipo alterado para formação de biofilme. Os biofilmes foram formados em placas de 96 poços ou discos de poliestireno e avaliados em diferentes tempos de desenvolvimento. A seguir foram construídas 4 cepas complementadas que foram avaliadas quanto à susceptibilidade a agentes estressantes, crescimento sob limitação de nutrientes e testes de filamentação. A arquitetura dos biofilmes foi analisada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os biofilmes também foram avaliados quanto à quantidade de β-1,3-glucana e quitina. Para os modelos de infecção, células epiteliais bucais (TR-146) foram utilizadas para análise de aderência, invasão e dano. A patogenicidade das cepas foi avaliada em ovos embrionados de galinha durante 7 dias, após a inoculação das cepas. Células planctônicas e biofilmes foram submetidos a testes antifúngicos com os agentes fluconazol, anfotericina B e caspofungina. A reação em cadeia da polimerase quantitativa foi realizada para verificar a expressão dos genes MRV8 e NDT80 em células fúngicas em interação com células epiteliais e MRV8, MRV1 e MRV6 em células crescidas em biofilme. Os resultados foram analisados por teste t de Student, ANOVA, Tukey e testes de Log-rank (Mantel-Cox) (p < 0,05). Foram construídas 4 cepas complementadas para os genes selecionados ORF19.823, ORF19.7170, ORF19.6847 e MRV8. A função de ORF19.823 ainda permanece desconhecida, pois nãofoi observado fenótipo msignificativo para a cepa.... / Candida albicans is an opportunistic fungi capable of causing superficial and systemic infections. Most of infections are mediated by biofilm formation which confers resistance to antifungal agents and immune system, but the mechanisms of biofilm development and pathogenicity were not thoroughly elucidated yet. In the presente study, 9 unknown function genes of C. albicans were selected among 34 mutant strains that presented altered phenotype for biofilm formation. The biofilms were formed on 96-well microtitle plates or on polystyrene disks and evaluated in different time intervals. Next, 4 complemented strains were constructed and evaluated for susceptibility to stressor agents, growth under nutrient limitation and filamentation tests. The biofilm architecture was analyzed by scanning electron microscopy (SEM). The biofilms were also assessed as the quantity of β-1,3-glucan and chitin. For the infection models, buccal epithelial cells (TR-146) were used for adherence, invasion and damage assays. The pathogenicity of the strains was evaluated in embrionated chicken eggs for 7 days, after inoculation of the strains. Planktonic cells and biofilms were submitted to antifungal tests with fluconazole, amphotericin B, and caspofungin. Quantitative polymerase chain reaction was performed to verify the expression of MRV8 and NDT80 genes in fungal cells in interaction with epithelial cells and MRV8, MRV1, and MRV6 genes in cells grown in biofilm. The results were submitted to the Student t test, ANOVA, Tukey's test, and Log-rank test (Mantel-Cox) (p < 0.05). Four complemented strains were constructed for the selected genes ORF19.823, ORF19.7170, ORF19.6847, and MRV8. The function of the ORF19.823 is still unknown, because the mutant strain did not show any significative phenotype for the tests performed. The mutant strain for the ORF19.7170 caused less damage on epithelial cells, but the result was not significant and the gene was dispensable... / FAPESP: 2011/21346-7

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-25Bitstream added on 2014-06-13T20:06:11Z : No. of bitstreams: 1 000740082.pdf: 4167341 bytes, checksum: 8fe87af8a33480548b14b44df006b99a (MD5) / A capacidade de aderência dos micro-organismos a diferentes superfícies, a resistência a medicamentos, bem como a interação entre as espécies visam garantir a sobrevivência e a proliferação dos mesmos, resultando em menor susceptibilidade dos patógenos aos tratamentos e aos procedimentos de desinfecção. Este estudo teve como objetivo avaliar in vitro a eficácia da Terapia Fotodinâmica (PDT) mediada pelos fotossensibilizadores (FSs) Photodithazine® (PDZ) e Curcumina (Cur) sobre biofilmes multi-espécies compostos por Streptococcus mutans, Candida albicans e Candida glabrata. Para isso, o estudo foi divido em três partes: 1- avaliação do efeito fotodinâmico das diferentes concentrações de PDZ (100, 150, 175, 200 e 250mg/L) associada à luz LED (660nm/ 37,5J/cm2) na inativação de biofilme multi-espécies formado em fundo de placa de 96 orifícios; 2- avaliação do efeito fotodinâmico quando realizadas uma e três aplicações sucessivas de PDT, mediada por PDZ (175 e 200mg/L) e luz LED (660nm/ 37,5J/cm2) na inativação de biofilmes multi-espécies, formado sobre corpos-de-prova de resina acrílica. 3- avaliação do efeito fotodinâmico de diferentes concentrações do FS Cur (80, 100 e 120μM) associada à luz LED (455nm/ 37,5J/cm2) sobre biofilmes multi-espécies cultivados por diferentes períodos (24 e 48h) sobre corpos-de-prova de resina acrílica. Adicionalmente para cada condição avaliada foi verificado o efeito da aplicação isolada de cada concentração dos FSs PDZ e Cur em contato com o biofilme na ausência de luz (P+L-) e o efeito isolado da luz (P-L+). Além disso, foi realizado o grupo controle positivo, no qual o biofilme não esteve em contato com o FS e não foram iluminados com luz LED (P-L-). Após a aplicação dos tratamentos propostos, a viabilidade dos micro-organismos foi avaliada por meio da contagem de colônias (UFC/mL), teste do XTT, determinação da... / The ability of adhesion of microrganisms to different surfaces, the drug resistance, as well as the interaction among the species help to ensure the survival and proliferation of these microrganisms and result in lower susceptibility of these pathogens to treatment and disinfection procedures. This study aimed to evaluate the in vitro efficacy of PDT mediated by photosensitizers (FSs) Photodithazine ® (PDZ) and Curcumin (Cur) against multispecies biofilms formed by Candida albicans, Candida glabrata and Streptococcus mutans. This study was divided into three parts: 1. evaluation of the effect of photodynamic therapy of different concentrations of PDZ (100, 150, 175, 200 and 250mg / L) associated with the LED light (660 nm / 37.5 J/cm2) in the inactivation of multspecies biofilms formed in 96-well microtiter plates; 2. evaluation of the photodynamic effect of one PDT applications only and three successive PDT applications mediated by PDZ (175 and 200 mg / L) and LED light (660 nm / 37.5 J/cm2) in the inactivation of multispecies biofilms, formed on acrylic resin samples; 3. evaluation of the photodynamic effect of different concentrations of Cur FS (80, 100, and 120μM) associated with LED light (455nm / 37.5 J/cm2) against multispecies biofilms grown during different periods (24 and 48h) on acrylic resin samples. Additional samples were treated either with FSs (PDZ or Cur) (P+L-) or LED light (P-L+) only. Positive control samples had neither light nor FSs (PDZ or Cur) (P-L-). After applying the proposed treatments, the viability of microrganisms was assessed by Colony Count (CFU / mL), the XTT assay, determination of the total biomass (CV) and confocal laser scanning microscopy (CLSM).The results were analyzed using ANOVA or Kruskal-Wallis test followed by Tukey or Dunn, respectively. For the biofilm formed in 96-well plate, the concentrations of 175 and 200mg/L showed greater reduction in cell...

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:25:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-03-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:46:30Z : No. of bitstreams: 1 000846057_20170327.pdf: 263652 bytes, checksum: 108c987b7002f95370d568dcefddbd17 (MD5) Bitstreams deleted on 2017-03-31T12:19:18Z: 000846057_20170327.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-03-31T12:20:21Z : No. of bitstreams: 1 000846057.pdf: 955739 bytes, checksum: c0b1f415f6242a93590cb11b950f1198 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A Candida albicans, presente nos biofilmes orais, é a principal responsável pela estomatite protética. Normalmente essa infecção é assintomática, porém, quando os sinais e sintomas estão presentes podem causar sangramento das mucosas, edema local, ardor ou outras sensações dolorosas. Os medicamentos tópicos, como a nistatina e o miconazol, têm sido utilizados, entretanto, o efeito diluente da saliva, movimentação da língua e da musculatura bucal reduzem a dose desses agentes a concentrações subterapêutica, além do alto índice de recorrência da infecção. Assim, é importante a procura por novos antifúngicos, que sejam eficientes e não tóxicos. A cavidade bucal é constantemente banhada de saliva, um fluido biológico com potente atividade antifúngica e bacteriana. Com o recente progresso na análise do proteoma salivar, o número de proteínas salivares identificado aumentou consideravelmente. A Histatina 5 gerada proteoliticamente a partir de Hst-3, durante a maturação dos grânulos nas glândulas salivares das parótidas tem sido extensivamente estudada devido a sua maior ação fungicida sua notável ação contra a C. albicans. Métodos baseados em medidas da atividade metabólica e viabilidade celular, como o ensaio de redução do sal XTT (hidróxido de 2,3-bis (2-metoxi-4-nitro-5-sulfofenil) -5 - [(fenilamino) carbonil] -2H-tetrazólio ) e contagem de unidades formadoras de colônia (UFC) tem sido utilizados para a avaliação de novos medicamentos capazes de inibir a formação do biofilme. Por serem feitos separadamente, esses ensaios demandam tempo, alto custo e variabilidade entre as amostras. Assim, este estudo teve como objetivo avaliar inicialmente, i) os efeitos do sal XTT e os demais compostos utilizados para realizar o ensaio de redução de XTT, sobre a viabilidade celular dos biofilmes de C. albicans e S. Mutans; ii) avaliar o potencial da histatina...(Resumo completo clicar acesso eletrônico) / Candida albicans, present in oralbiofilms, is primarily responsible for denture stomatitis. Usually the infection is asymptomatic, but when signs and symptoms are present it can cause mucosal bleeding, swelling, burning or other painful sensations. Topical drugs such as miconazole and nystatin have been used, however, the diluent effect of saliva, the tongue and oral muscles movements reduce the dose of these agents to subtherapeutic concentrations, besides the high rate of recurrence of the infection. Thus, it is important to search for new antifungals, which are efficient and non-toxic. The oral cavity is constantly in presence of saliva, a biological fluid with potent antifungal and bacterial activity. With the recent progress in analysis of saliva proteome, the number of identified salivary proteins has increased considerably. The histatin-5 generated proteolytically from Hst-3, during maturation of the granules in the salivary glands of the parotid has been extensively studied due to their greater fungicidal action his remarkable action against C. albicans. Methods based on measurements of metabolic activity and cell viability as reduction assay salt XTT (2,3-bis hydroxide (2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl) -5 - [(phenylamino) carbonyl] - 2H-tetrazolium) and counting of colony forming units (CFU) have been used for the exploration of new drug potential on inhibitory development of biofilm. The associations between the metabolic activities experiments with counting CFU are labor-intensive processes that need to be done separately. This study aimed to evaluate initially i) the effects of XTT salt and other compounds used to make the XTT reduction assay on cell viability of biofilms of C. albicans and S. mutans; ii) evaluate the potential of histatin 5 in protecting the human oral epithelium against C. albicans and iii) identify the heterotypic complexes formed between the histatin 5, a natural...(Complete abstrat electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:51:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-06Bitstream added on 2014-08-13T17:59:41Z : No. of bitstreams: 1 000775944.pdf: 1525174 bytes, checksum: 243559115d903e6589baa6f94c5ac6c3 (MD5) / As interações entre fungos e bactérias estão presentes na natureza e tem grande importância médica e ambiental. O desenvolvimento adequado de modelos in vitro e in vivo para caracterizar essas interações é essencial para o entendimento da patogênese das doenças e descoberta de novas estratégias terapêuticas. O objetivo desse estudo foi avaliar as interações microbianas entre Streptococcus mutans e Candida albicans em modelos de biofilmes formados in vitro e em modelo experimental de Galleria mellonella. No estudo in vitro, foram avaliados os efeitos de S. mutans sobre a formação de biofilme por C. albicans e sobre a capacidade de filamentação de C. albicans. Em ambos os testes, foram avaliados os efeitos diretos das células de S. mutans sobre C. albicans e também os efeitos indiretos de S. mutans sobre C. albicans, utilizando apenas o sobrenadante da sua cultura. Além disso, foram testados os efeitos de S. mutans sobre C. albicans em diferentes fases de crescimento da cultura bacteriana (4, 6, 18 e 24 h). Para a realização do estudo in vivo, pela primeira vez na literatura, foram inoculados S. mutans juntamente com C. albicans em lagartas de G. mellonella para indução de infecção experimental. Os efeitos de S. mutans sobre a candidose experimental em G. mellonella foram avaliados pela análise da curva de sobrevivência, pelo estudo da cultura da hemolinfa para quantificação de C. albicans e através da avaliação histológica da presença de hifas de C. albicans nos tecidos do hospedeiro. Os resultados dos testes in vitro e da contagem de UFC/mL em G. mellonella foram submetidos à Análise de Variância e teste de Tukey. Os dados obtidos na curva de sobrevivência de G. mellonella foram analisados pelo método de Log-rank. Em todos os testes, foi considerado nível de significância de 5%. Os resultados in vitro demonstraram que as células de S. mutansfavoreceram a formação de biofilme por C. albicans .... / Interactions between fungi and bacteria are present in nature and has great medical and environmental importance. The development of adequate models in vitro and in vivo to characterize these interactions are essential for understanding the pathogenesis of diseases and discovery of new therapeutic strategies. The aim of this study was to evaluate the microbial interactions between Streptococcus mutans and Candida albicans in vitro and in an experimental model of Galleria mellonella. In the in vitro study, the effects of S. mutans on biofilm formation and on the filamentation ability by C. albicans were evaluated. On both tests, we evaluated the direct effects of S. mutans cells and indirect effects of the supernatant culture of S. mutans on C. albicans. Furthermore, the effects of the S. mutans were tested on C. albicans at different stages of growth of the bacterial culture (4, 6, 18 and 24 h). In vivo study, were inoculated S. mutans together with C. albicans in larvae of G. mellonella for induction of experimental infection. The effects of S. mutans on experimental candidiasis in G. mellonella was evaluated by analysis of the survival curve, the study of the culture of hemolymph for quantification of C. albicans and by histological evaluation the formation of hyphae of C. albicans in the host tissues. The results of in vitro tests and number of CFU/mL in G. mellonella were submitted to ANOVA and Tukey's test. The data obtained in the survival of G. mellonella were analyzed using the log- rank test. In all tests, were adopted significance level 5%. In vitro results showed that cells of S. mutans favored biofilm formation by C. albicans, however when C. albicans was put in contact with the only supernatant of a culture of S. mutans, there was a reduction in biofilm formation and inhibition of the morphological transition of C. albicans. In the in vivo study, it was found that the injection of ....

Orientador: Débora de Barros Barbosa / Banca: Denisi Pedrini Ostini / Banca: Cristiane Duque / Banca: Elaine Cristina Guerbach Conti Vieira / Banca: Adelisa Rodolfo Ferreira Tiveron / Resumo: As p ropriedades antimicrobianas da r omã são atribuídas aos c ompostos fenólicos, mais especificamente a os taninos hidrolisáveis (THs) galotaninos (ácido gálico) e elagitaninos (ácido elágico), substâncias naturais de defesa da planta. O s objetivo s deste estudo foram avaliar os níveis de ácido elágico e fenóis totais, rendimento dos métodos de extração e o potencial inibitório sobre Candida albicans de extratos de partes da Punica granatum. Amostras em triplicata de cascas, sementes e folhas desidratadas, trituradas, pulverizadas, foram submetid as a dois métodos de ex tração: s oxhlet tendo como solventes etanol e metanol e percolação tendo como solvente o etanol . Após a obtenção dos extratos, foram determinados os teores de ácido elágico por cromatografia liquida de alta eficiência e fenóis totais expressos em ácido gál ico pelo método espectrofotométrico. A atividade antifúngica dos extratos foi avaliada pelo método de difusão em disco, seguindo - se as normas do National Committee for Clinical and Laboratory Standards ( NCCLS document M2 - A8, 2003a .) . As maiores concentraçõ es de fenóis totais e de ácido elágico foram encontrad a s nas folhas e na casca da romã . Verificou - se maior eficiência de rendimento por meio da percolação . Os resultados de difusão em disco revelaram maior sensibilidade da cepa de C. albicans aos extratos etanólicos da casca por ambos os métodos de extração . O método percolação alcoólica a 70% e 25ºC e a casca da romã apresentaram a maior eficiência de extraç ão e de atividade anti - fúngica contra uma cepa clínica de C. albicans. / Abstract: The antimicrobial properties of pomegranate are attributed to the phenolic compounds, more specifically the hydrolyzable tannins (THs) galotaninos (gallic acid) and elagitaninos (ellagic acid), natural plant defense substances. The objectives of this study were to evaluate the levels of ellagic acid and total phenols, yield of the extraction methods and the inhibitory potential against Candida albicans of extracts from parts of Punica granatum . Samples of dried, peels, seeds and leaves were used in triplicates and the extracts were obtained by Soxhlet system and percolation using respectively ethanol, methanol and ethanol solvents. After obtainin g the extracts, the ellagic acid contents were determined by high performance liquid chromatography (HPLC) and total phenols expressed in gallic acid by the spectrophotometric method. The antimicrobial activity was evaluated by the disc diffusion method, f ollowing the standards of the National Committee for Clinical and Laboratory Standards (NCCLS document M2 - A8, 2003a.). The highest concentrations of THs were found in leaves and pomegranate peel. Greater yield efficiency was verified by percolation. The re sults of diffusion on disc revealed higher sensitivity of the C. albicans strain to the ethanolic extracts of peels by both methods of extraction, presenting inhibition halos of approximately 10 mm. The alcoholic percolation method at 70% and 25ºC and the pomegranate peel showed the highest extraction efficiency and antifungal activity against a clinical strain of C. albicans . / Doutor

Orientador: Ana Claúdia Pavarina / Banca: Juliana Campos Junqueira / Banca: Claúdia Helena Lovato da Silva / Banca: Ewerton Garcia de Oliveira Mima / Banca: Eunice Teresinha Giampaolo / Resumo: A capacidade de aderência dos micro-organismos a diferentes superfícies, a resistência a medicamentos, bem como a interação entre as espécies visam garantir a sobrevivência e a proliferação dos mesmos, resultando em menor susceptibilidade dos patógenos aos tratamentos e aos procedimentos de desinfecção. Este estudo teve como objetivo avaliar in vitro a eficácia da Terapia Fotodinâmica (PDT) mediada pelos fotossensibilizadores (FSs) Photodithazine® (PDZ) e Curcumina (Cur) sobre biofilmes multi-espécies compostos por Streptococcus mutans, Candida albicans e Candida glabrata. Para isso, o estudo foi divido em três partes: 1- avaliação do efeito fotodinâmico das diferentes concentrações de PDZ (100, 150, 175, 200 e 250mg/L) associada à luz LED (660nm/ 37,5J/cm2) na inativação de biofilme multi-espécies formado em fundo de placa de 96 orifícios; 2- avaliação do efeito fotodinâmico quando realizadas uma e três aplicações sucessivas de PDT, mediada por PDZ (175 e 200mg/L) e luz LED (660nm/ 37,5J/cm2) na inativação de biofilmes multi-espécies, formado sobre corpos-de-prova de resina acrílica. 3- avaliação do efeito fotodinâmico de diferentes concentrações do FS Cur (80, 100 e 120μM) associada à luz LED (455nm/ 37,5J/cm2) sobre biofilmes multi-espécies cultivados por diferentes períodos (24 e 48h) sobre corpos-de-prova de resina acrílica. Adicionalmente para cada condição avaliada foi verificado o efeito da aplicação isolada de cada concentração dos FSs PDZ e Cur em contato com o biofilme na ausência de luz (P+L-) e o efeito isolado da luz (P-L+). Além disso, foi realizado o grupo controle positivo, no qual o biofilme não esteve em contato com o FS e não foram iluminados com luz LED (P-L-). Após a aplicação dos tratamentos propostos, a viabilidade dos micro-organismos foi avaliada por meio da contagem de colônias (UFC/mL), teste do XTT, determinação da... / Abstract: The ability of adhesion of microrganisms to different surfaces, the drug resistance, as well as the interaction among the species help to ensure the survival and proliferation of these microrganisms and result in lower susceptibility of these pathogens to treatment and disinfection procedures. This study aimed to evaluate the in vitro efficacy of PDT mediated by photosensitizers (FSs) Photodithazine ® (PDZ) and Curcumin (Cur) against multispecies biofilms formed by Candida albicans, Candida glabrata and Streptococcus mutans. This study was divided into three parts: 1. evaluation of the effect of photodynamic therapy of different concentrations of PDZ (100, 150, 175, 200 and 250mg / L) associated with the LED light (660 nm / 37.5 J/cm2) in the inactivation of multspecies biofilms formed in 96-well microtiter plates; 2. evaluation of the photodynamic effect of one PDT applications only and three successive PDT applications mediated by PDZ (175 and 200 mg / L) and LED light (660 nm / 37.5 J/cm2) in the inactivation of multispecies biofilms, formed on acrylic resin samples; 3. evaluation of the photodynamic effect of different concentrations of Cur FS (80, 100, and 120μM) associated with LED light (455nm / 37.5 J/cm2) against multispecies biofilms grown during different periods (24 and 48h) on acrylic resin samples. Additional samples were treated either with FSs (PDZ or Cur) (P+L-) or LED light (P-L+) only. Positive control samples had neither light nor FSs (PDZ or Cur) (P-L-). After applying the proposed treatments, the viability of microrganisms was assessed by Colony Count (CFU / mL), the XTT assay, determination of the total biomass (CV) and confocal laser scanning microscopy (CLSM).The results were analyzed using ANOVA or Kruskal-Wallis test followed by Tukey or Dunn, respectively. For the biofilm formed in 96-well plate, the concentrations of 175 and 200mg/L showed greater reduction in cell... / Doutor

Orientador: Juliana Campos Junqueira / Co-orientador: Olavo Cardoso Jorge / Banca: Ana Marisa Fusco Almeida / Banca: Mariella Vieira Pereira Leão / Banca: Luciane Dias de Oliveira / Resumo: As interações entre fungos e bactérias são abundantes na natureza e tem importância médica e ambiental. O desenvolvimento adequado de modelos in vitro e in vivo para caracterizar essas interações é essencial para o entendimento do desenvolvimento da doença e descoberta de novas estratégias terapêuticas. O objetivo desse estudo foi avaliar as interações entre Lactobacillus acidophilus e Candida albicans em modelos de estudo in vitro e em modelo experimental de invertebrado. No estudo in vitro, foram avaliados os efeitos de L. acidophilus sobre a formação de biofilme por C. albicans e sobre a capacidade de filamentação de C. albicans. Em ambos os testes, foram avaliados os efeitos diretos das células de L. acidophilus sobre C. albicans e também os efeitos indiretos, utilizando apenas o sobrenadante da cultura de Lactobacilos. Além disso, foram testados os efeitos de L. acidophilus sobre C. albicans em diferentes fases de crescimento da cultura bacteriana (4, 6, 18 e 24 h). Para a realização do estudo in vivo, as cepas de L. acidophilus foram inoculadas juntamente com C. albicans em lagartas de Galleria mellonella para indução de infecção experimental. Os efeitos de L. acidophilus sobre a candidose experimental foram avaliados pela análise de curva de sobrevivência de G. mellonella, quantificação de UFC/mL de C. albicans e avaliação histológica da filamentação de C. albicans nos tecidos do hospedeiro. Os resultados dos testes in vitro e da contagem de UFC/mL em G. mellonella foram submetidos à Análise de Variância e teste de Tukey. Os dados obtidos na curva de sobrevivência de G. mellonella foram analisados pelo método de Log-rank. (P ≤ 0,05). Os resultados in vitro demonstraram que a cultura de 24 h de L. acidophilus foi capaz de inibir a formação de biofilme e a filamentação por C. albicans. Esses efeitos inibitórios também foram observados... / Abstract: Interactions between fungi and bacteria are abundant in nature and are of medical and environmental importance. The developments of adequate models in vitro and in vivo to characterize these interactions are essential to understand diseases and to discover new therapeutic strategies. The aim of this study was to evaluate the microbial interactions between Lactobacillus acidophilus and Candida albicans on in vitro study models and experimental models of invertebrates. In the in vitro study, we analyzed the effects of L. acidophilus on C. albicans biofilm formation as well as its filamentation ability. On both tests, the direct effects of L. acidophilus cells and indirect effects of the supernatant culture of L. acidophilus were evaluated , as well as the L. acidophilus effects on C. albicans at different bacterial culture growth stages (4, 6 18 and 24h). To perfom the in vivo study, L. acidophilus and C. albicans strains were inoculated in Galleria mellonella model to induce experimental infection. The L. acidophilus effects on experimental candidosis have been evaluated by the analysis of the survival killing curve of G. mellonella, quantify C. albicans colony forming units per millimeter (CFU/mL) and through histological evaluation of C. albicans filamentation ability on the host tissues. The in vitro test results and the CFU/mL number in G. mellonella were submitted to ANOVA and Tukey's test. The obtained data on G. mellonella killing curves have been analyzed using the long-rank test method. A 5% significance level has been considered on all tests. The in vitro results showed that the L. acidophilus 24 hour culture was able to inhibit the formation of biofilm and filamentation by C. albicans. These inhibitory effects were also observed when the supernatant of the L. acidophilus culture was placed in contact with C. albicans, suggesting that the inhibitory action occurred by the .... / Doutor

Orientador: Denise Madalena Palomari Spolidorio / Banca: Cristiane Duque / Banca: Regina Maria Puppin-Rontani / Resumo: O óleo essencial de Melaleuca alternifolia (TTO) é um extrato de ação antifúngica e preventiva em escala farmacêutica ou cosmética. O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia do TTO e Terpinen-4-ol sobre isolados clínicos de Candida albicans. Este estudo foi realizado em três fases: 1- Identificação da CIM (Concentração Inibitória Mínima) e CFM (Concentração Fungicida Mínima) do TTO (0,25 a 2%) e Terpinen-4- ol (0,11 a 0,95%) sobre C. albicans na forma planctônica. 2- Análise das diferentes concentrações do óleo sobre biofilme monoespécie de C. albicans por meio da contagem das UFC/mL e avaliação da atividade metabólica das células pelo método colorimétrico de XTT. 3- Análise da ação inibitória das soluções de TTO e Terpinen-4- ol sobre biofilmes de C.albicans (cepa padrão e isolados clínicos) formados em corpos de prova de resina acrílica termopolimerizável previamente cobertos com saliva humana, por meio do teste de XTT e por microscopia confocal de varredura à laser (MCVL). A nistatina (Sigma) foi utilizada como controle positivo. Os resultados mostraram que isolados de C. albicans planctônicos foram sensíveis ao TTO 1%, Terpinen-4-ol 0,47% e Nistatina 8 μg/mL. As menores concentrações fungicidas para os isolados foram TTO 2 %, Terpinen-4-ol 0,95 % e Nistatina 16 μg/mL. Quando analisado em biofilme através da quantificação (UFC/mL) e teste de XTT as concentrações de TTO 2 % e Terpinen-4-ol 0,95 % foram eficazes quando comparado ao controle, sendo que as amostras da genotipagem A2 e B1 foram as mais resistentes. Os resultados de MCVL mostraram que todos os biofilmes desenvolvidos em corpos de resina acrílica apresentaram-se semelhantes à ação da Nistatina. Os extratos avaliados apresentaram ação antifúngica para os isolados clínicos e podem ser considerados tratamento alternativo para paciente com candidíase. / Abstract: The essential oil of Melaleuca alternifolia (TTO) is an extract of antifungal action and preventive in pharmaceutical or cosmetic scale. The aim of this study was to evaluate the efficacy of TTO and Terpinen-4-ol against clinical isolates of Candida albicans. This study was conducted in three phases: 1- Identification of MIC (Minimum Inhibitory Concentration) and CFM (Minimum Fungicidal Concentration) of TTO (0.25 to 2%) and Terpinen-4-ol (0.11 to 0.95 %) on C. albicans in planktonic form . 2- Analysis of different concentrations of oil on C. albicans biofilm single species by counting CFU/mL and evaluation of the metabolic activity of cells by XTT colorimetric method. 3- Analysis of the inhibitory action of TTO and Terpinen-4-ol solutions on C. albicans biofilms (standard strain and clinical isolates) formed in specimens of polymerizable resin acrylic microwave previously coated with human saliva , by means of the XTT test and confocal laser scanning microscopy (CLSM) . The nystatin (Sigma) was used as a positive control. The results showed that isolates of C. albicans planktonic were sensitive to TTO 1%, Terpinen-4-ol 0.47% and Nystatin 8 mg/mL. The smaller fungicidal concentrations for the isolates were TTO 2%, Terpinen-4-ol 0.95% and Nystatin 16 mg / mL. When analyzed by quantifying biofilm (CFU / ml) and XTT test, the concentrations TTO 2% and Terpinen-4-ol 0.95% were effective when compared to the control, and genotyping of samples A2 and B1 were more resistant. The CLSM results showed that all biofilms developed in bodies of acrylic resin were similar to the action of Nystatin. The extracts showed antifungal action for the clinical isolates and can be considered an alternative treatment for patients with candidiasis. / Mestre