Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-01-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Introdução: Em 2004, o NCCLS padronizou a técnica de disco-difusão para ensaios com fluconazol. Este teste permite a análise de grande número de amostras com custo reduzido, resultado rápido e de fácil interpretação, não exigindo equipamento especial, sendo assim de grande utilidade em estudos de vigilância de resistência a fluconazol e voriconazol. Objetivos: 1) Avaliar a distribuição de espécies de Candida identificadas em diferentes materiais biológicos obtidos de pacientes hospitalizados. 2) Descrever o perfil de susceptibilidade pelo método de disco-difusão para as diferentes amostras de Candida spp. frente a fluconazol e voriconazol. 3) Avaliar a prevalência de isolados de Candida spp. resistentes a fluconazol. Material e Métodos: Foram incluídas todas as amostras de Candida spp. isoladas de diversos materiais biológicos, provenientes de dois hospitais terciários da cidade de São Paulo, entre janeiro de 1998 a dezembro de 2003. Após triagem de Candida albicans, utilizando-se meio cromogênico CHROMagar- Candida, os isolados de Candida não-albicans foram identificados por análise do perfil bioquímico pelo método comercial ID-32C, complementados por análise de microcultivo. O perfil de susceptibilidade das amostras frente a fluconazol e voriconazol foi realizado pelo método de disco-difusão, de acordo com a normatização do documento do NCCLS M44-A (2004). A determinação dos diâmetros dos halos inibitórios foi realizada utilizando de um sistema automatizado de leitura de placas para análise das imagens - BIOMIC. Resultados: Avaliou-se 4.625 isolados clínicos de Candida spp., incluindo 2.393 cepas de C. albicans (51,7%), 658 de C. tropicalis (14,2%), 503 de C. glabrata (11%), 495 de C. parapsilosis (10,8%), 292 de C. rugosa (6,3%), 195 de C. guilliermondii (4,2%), 53 de C. krusei (1,1%) e 36 de Candida spp. Na análise dos resultados qualitativos de susceptibilidade a fluconazol as amostras de C. albicans, C. parapsilosis e C. tropicalis apresentaram diâmetro dos halos inibitórios maiores, resultado este que sugere alta susceptibilidade destas cepas a fluconazol. Para os isolados de C. glabrata, C. krusei e C. rugosa os halos obtidos apresentaram menores diâmetros, dado compatível com susceptibilidade reduzida destas espécies a fluconazol. Em relação a voriconazol, os isolados de C. albicans, C. parapsilosis, C. glabrata e C. tropicalis apresentaram diâmetros dos halos inibitórios maiores. Para as amostras de C. krusei e C. rugosa, os halos apresentaram menor diâmetro em relação as espécies mais susceptíveis. Na análise dos resultados quantitativos de susceptibilidade a fluconazol as taxas de SDD/R para os isolados avaliados foram de 2,0 e 5,8%, respectivamente, sendo visto maior porcentagem de SDD/R com C. glabrata, C. krusei e C. rugosa. Com exceção das amostras de C. rugosa, todas as amostras testadas com voriconazol apresentaram valores de CIM90 ≤ 0,5μg/mL. Conclusão: 1. Em nosso estudo, das 4.625 espécies de Candida testadas, C. albicans foi a espécie prevalente em todos os fluídos biológicos avaliados. 2. Entre as leveduras de Candida não-albicans, as espécies mais freqüentes foram C. tropicalis, C. glabrata e C. parapsilosis em ambos os períodos avaliados. 3. Susceptibilidade dose-dependente (SDD) e resistência a fluconazol foram pouco freqüentes, ocorrendo em apenas 2,0 e 5,8% das amostras, respectivamente. As espécies com maior porcentagem de isolados SDD/R para fluconazol foram C. glabrata, C. krusei e C. rugosa. 4. Voriconazol apresentou melhor atividade in vitro comparado a fluconazol, mesmo em cepas fluconazol-resistentes. 5. Não houve aumento de resistência a fluconazol e voriconazol nas amostras de Candida spp. testadas ao longo do período avaliado. / Introduction: The disk diffusion for fluconazole and voriconazole recently standardized by the NCCLS M44-A is suitable to test a large number of samples.. Objectives: 1) Evaluate the distribution of Candida species identified in different biological materials obtained from hospitalized patients in 2 tertiary hospitals. 2) Describe the antifungal susceptibility profile of different Candida species by the disk diffusion technique, using fluconazole and voriconazole disks. 3) Assess the prevalence of fluconazole resistant Candida spp. isolates. Methods: All clinical samples of Candida species originated from various types of biological material, between January 1998 to December 2003 in 2 tertiary hospitals in São Paulo were evaluated in this study. After initial screening for Candida albicans in chromogenic medium CHROMagar® Candida, the samples of non-albicans Candida species were identified by analysis of their biochemical profiles in the commercial system ID 32C and supplemented with microcultive. In vitro susceptibility to fluconazole and voriconazole were evaluated by according to the NCCLS M44-A disk diffusion method that was determination of inhibition diameters was read and interpreted automatically by the BIOMIC® image-analysis plate reader system. Results: A total of 4,625 yeast isolates were tested, including the following species: 2,393 C. albicans (51,7%), 658 C. tropicalis (14,2%), 503 C. glabrata (11%), 495 C. parapsilosis (10,8%), 292 C. rugosa (6,3%), 195 C. guillermondii (4,2%), 53 C. krusei (1.1%) e 36 Candida spp. The analyses of the qualitative results of susceptility profile to fluconazole, C. albicans, C. parapsilosis and C. tropicalis showed large inhibition zones diameters, suggesting high susceptibility of these strains to this antifungal. Isolates of C. glabrata, C. rugosa and C. krusei exhibited smaller diameters, compatible with the reduced susceptibility of these species to fluconazole. Regarding voriconazole, the isolates of C. albicans, C. parapsilosis, C. tropicalis and C. glabrata showed large inhibition zones diameters. However, C. krusei and C. rugosa isolates generated smaller inhibition zones diameters than other species more susceptible. In the analyses of the quantitative results of susceptility profile to fluconazole, a percentage of SDD/R to the isolates evaluated were 2,0% and 5,8%, respectively. The species that exhibited the highest rate of DDS/R were C. glabrata, C. krusei and C. rugosa. Regarding voriconazole, the majority of all yeast isolates tested showed CIM90 ≤ 0,5 µg/mL, except the samples of C. rugosa. Conclusion: 1. Among 4,625 yeast cultures evaluated, C. albicans was the species with the greatest frequency in all biological materials evaluated. 2. Among non-albicans Candida species, C. tropicais, C. glabrata and C. parapsilosis were most frequently in both the period assess. 3. DDS/R were low frequency, occurring in 2,0% and 5,8% of the samples, respectively. The incidence of species judged as DDS/R to fluconazole was C. glabrata, C. krusei and C. rugosa. 4. Voriconazole exhibited better activity in vitro than fluconazole, even in isolates resistant-fluconazole. 5. The resistance of fluconazole and voriconazole did not increase in the isolates of Candida spp. during the evaluated period. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

O gênero Candida acomete cerca de 80% das infecções fúngicas no ambiente hospitalar e constitui causa relevante de infecções na corrente sangüínea. Espécies de Candida não-albicans respondem atualmente por pelo menos 50% das infecções invasivas por Candida spp, apresentando peculiaridades em termos clínicos e suscetibilidade a drogas antifúngicas. A mortalidade geral de fugemias por Candida spp é da ordem de 40-60%, tornando esta complicação infecciosa um grande desafio aos clínicos. O objetivo deste estudo foi a padronização de um ensaio imuno-enzimático (ELISA) para o diagnóstico de infecções hematogênicas devido a Candida spp. Vinte e cinco soros de pacientes com candidemia obtidos do Hospital de Clínicas de Porto Alegre e trinta e dois soros de indivíduos hígidos obtidos do Centro de Biotecnologia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul foram analisados. Foram utilizados os extratos protéicos totais de Candida albicans, Candida tropicalis, Candida parapsilosis, Candida guilliermondii, Candida glabrata, Candida dubliniensis e Candida krusei como antígenos. Nossos resultados demonstraram reatividade cruzada entre as espécies bem como alguns resultados falsonegativos. Estes resultados falso-negativos podem ser devido a resposta imune do paciente estar atrasada, diminuída ou ausente. Isto pode ser melhorado com amostras seriadas do mesmo paciente. Os resultados falso-positivos podem ser minimizados selecionando-se antígenos específicos apropriados, moléculas purificadas ou antígenos recombinantes. / Candida spp is associated to almost 80% of all nosocomial fungal infections and is considered a major cause of blood stream infections. This yeast is the fourth most common cause of blood stream infections in the United States, where this agent is responsible for 8% of all invasive infections documented in this site and the crude mortality rate is between 40 and 60%. At the present, non-albicans species are related to at least 50% of all invasive infections due to Candida spp and they present differences in terms of clinical outcome as well as susceptibility to antifungal drugs. Nevertheless, the hematogenous infections due to Candida spp diagnosis remain an important challenge for all clinicians. The objective of this study was the standardization of an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to diagnose hematogenous infections due to Candida spp. Twenty five sera of patients with candidaemia from Hospital de Clínicas de Porto Alegre, a general tertiary care hospital in Southern Brazil and thirty two sera from healthy people from Centro de Biotecnologia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul were analyzed. As antigens for ELISA, protein extracts from Candida albicans, Candida tropicalis, Candida parapsilosis, Candida guilliermondii, Candida glabrata, Candida dubliniensis and Candida krusei were used. Our results had demonstrated cross-reactivity between species as well as some false-negatives. These false-negatives may be due to a delayed, reduced or absent antibody response, which might be improved increasing the number of samples tested. The false-positives can be improved by selecting more appropriate specific antigens, as purified molecules or recombinant antigens.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-07-14Bitstream added on 2014-06-13T19:14:38Z : No. of bitstreams: 1 scorzoni_l_me_arafcf.pdf: 1618197 bytes, checksum: eb9318b4559acb7fd55cac086d26db34 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / As novas descobertas tecnológicas e o avanço da medicina têm proporcionado a sobrevida de muitos pacientes. No entanto, estes passam a ser mais suscetíveis a infecções, principalmente por fungos. O aumento dessas infecções tem gerado problemas no tocante ao diagnóstico, bem como na terapêutica empregada. A disponibilidade de antifúngicos na prática médica é relativamente pequena, algumas vezes ineficiente e com toxicidade elevada. Recentemente, houve um agravante do quadro devido ao surgimento de resistência a determinadas drogas, o que reforçou a demanda por novas alternativas terapêuticas. Nosso país é privilegiado pela grande biodiversidade. A busca por novos alvos, o entendimento dos mecanismos de virulência, bem como os de resistência microbiana são fundamentais diante do quadro atual. O objetivo deste estudo foi pesquisar extratos e substâncias de plantas com atividade antifúngica para Candida albicans e C. krusei, selecionar os de maior atividade e verificar o perfil de proteínas de ambas as leveduras, antes e após o contato com a substância de origem vegetal, realizando sua caracterização. Os extratos acetato de etila (AcOEt) e etanólico (EtOH) de Kielmeyera rubriflora foram os que apresentaram maior atividade antifúngica. Os componentes protéicos de C. albicans sem tratamento e tratados com 1400 mg/mL de fluconazol e 1000 mg/mL dos extratos AcOEt e EtOH foram analisados por SDS-PAGE e eletroforese bidimensional. O tratamento com fluconazol revelou modificações na expressão de nove proteínas, que variaram seus pIs de 5,64 a 6,67 e massa molecular de 59,1 a 17,4 kDa, enquanto que os extratos de plantas influenciaram na expressão de 10 e 11 proteínas, respectivamente. O extrato AcOEt influenciou na expressão de proteínas na faixa de pIs de 5,7 a 5,2, massa molecular de 90,5 a 18,8 kDa, enquanto que o... / The new discoveries and technological advances in medicine have provided the survival of many patients. However, they become more susceptible to infections, mainly by fungi. The increase in these infections has created problems regarding the diagnosis and the therapy employed. The availability of antifungals in medical practice is relatively small, inefficient and sometimes with high toxicity. Recently, there was an aggravating problem due to the emergence of resistance to certain drugs, which increased the demand for new alternative therapies. Our country is privileged in biodiversity. The search for new targets, the understanding of the mechanisms of virulence, as well as, the microbial resistance is essential before the current framework. This study aimed to find extracts of plants and substances with antifungal activity to Candida albicans and C. krusei, select the extracts with the best activity and verify the profile of proteins of both yeasts, before and after contact with the ethyl acetate (AcOEt) and ethanol (EtOH) extracts from Kielmeyera rubriflora, performing its characterization. The AcOEt and EtOH extracts from K. rubriflora had the greater antifungal activity. The C. albicans and C. krusei cells proteins untreated and treated with 1400 mg / mL of fluconazole and 1000 mg / mL of AcOEt and EtOH extracts were analyzed by SDS-PAGE and two-dimensional electrophoresis. Treatment with fluconazole revealed changes in the expression of nine proteins, which varied its pIs of 6.67 to 5.64 and molecular weight of 59.1 to 17.4 kDa, while the plants extracts influenced the expression of 10 and 11 proteins, respectively. The AcOEt extract influenced the expression of proteins in the range from pIs of 5.7 to 5.2, molecular weight of 90.5 to 18.8 kDa, while the EtOH in pIs of 5.8 to 7.4, and mass molecular of 89.2 to 16.3 kDa. The plants extracts ...(Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-07-20Bitstream added on 2014-06-13T20:16:32Z : No. of bitstreams: 1 colombo_te_me_sjrp.pdf: 855064 bytes, checksum: ad2e08a9f257905e52f58887fb31dbcb (MD5) / Famerp / As leveduras estão amplamente distribuídas em diversos ambientes, sendo também habitantes normais do corpo humano. São consideradas patógenos oportunistas causando infecções que variam desde superficiais até profundas e fatais. Espécies de Candida spp ocupam, atualmente, lugar de destaque como principais causadoras das infecções a corrente sanguínea. A investigação da suscetibilidade antimicrobiana, frente aos antifúngicos rotineiramente preconizados na terapêutica, é de fundamental importância, além disso, métodos moleculares como o RAPD (Polimorfismo do DNA aleatoriamente amplificado) e PFGE (Eletroforese em campo pulsátil) são conhecidos por ajudar na identificação das fontes de infecção e delineamento epidemiológico. O Laboratório de Microbiologia da FAMERP, em parceria com o Hospital de Base de São José do Rio Preto, vem desenvolvendo projetos de pesquisa que envolve o isolamento, a identificação e manutenção de coleção de culturas de espécies microbianas. O presente projeto teve como objetivo identificar as espécies leveduriformes presentes em isolados clínicos e ambientais, avaliar a sua suscetibilidade antimicrobiana, além de estudar a relação genética entre tais isolados por ambas técnicas - RAPD e PFGE, na tentativa de elucidar as possíveis fontes de aquisição, prática considerada fundamental na rede de vigilância. No período de agosto de 2007 a outubro de 2009, foram analisados 119 episódios de candidemia. A distribuição dos casos de candidemia foi mais frequente em pacientes com idade inferior a 1 ano e superior a 60 anos, não havendo tendência para nenhum gênero. O grupo geral manteve como período de internação uma média de 35 dias, com frequência de óbito correspondente a 61%. C. albicans foi a espécie mais prevalente (29%), seguida por C. parapsilosis (28%) e C. tropicalis (23%)... / As leveduras estão amplamente distribuídas em diversos ambientes, sendo também habitantes normais do corpo humano. São consideradas patógenos oportunistas causando infecções que variam desde superficiais até profundas e fatais. Espécies de Candida spp ocupam, atualmente, lugar de destaque como principais causadoras das infecções a corrente sanguínea. A investigação da suscetibilidade antimicrobiana, frente aos antifúngicos rotineiramente preconizados na terapêutica, é de fundamental importância, além disso, métodos moleculares como o RAPD (Polimorfismo do DNA aleatoriamente amplificado) e PFGE (Eletroforese em campo pulsátil) são conhecidos por ajudar na identificação das fontes de infecção e delineamento epidemiológico. O Laboratório de Microbiologia da FAMERP, em parceria com o Hospital de Base de São José do Rio Preto, vem desenvolvendo projetos de pesquisa que envolve o isolamento, a identificação e manutenção de coleção de culturas de espécies microbianas. O presente projeto teve como objetivo identificar as espécies leveduriformes presentes em isolados clínicos e ambientais, avaliar a sua suscetibilidade antimicrobiana, além de estudar a relação genética entre tais isolados por ambas técnicas - RAPD e PFGE, na tentativa de elucidar as possíveis fontes de aquisição, prática considerada fundamental na rede de vigilância. No período de agosto de 2007 a outubro de 2009, foram analisados 119 episódios de candidemia. A distribuição dos casos de candidemia foi mais frequente em pacientes com idade inferior a 1 ano e superior a 60 anos, não havendo tendência para nenhum gênero. O grupo geral manteve como período de internação uma média de 35 dias, com frequência de óbito correspondente a 61%. C. albicans foi a espécie mais prevalente (29%), seguida por C. parapsilosis (28%) e C. tropicalis (23%)... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-03-02Bitstream added on 2014-06-13T18:56:01Z : No. of bitstreams: 1 sartori_lca_me_jabo.pdf: 309501 bytes, checksum: f65ecbb362c11cf287ceffd861806be4 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A mastite representa um dos mais sérios problemas existentes nas fazendas de leite. Os objetivos deste estudo foram identificar leveduras envolvidas nos casos de mastite bovina; avaliar a sensibilidade in vitro de cepas de Candida spp. frente a quatro desinfetantes utilizados no pré e pós-dipping e avaliar a resistência destas leveduras frente à pasteurização e fervura. Cinquenta e cinco amostras (12,8%) foram positivas para o gênero Candida. As espécies mais isoladas foram C. krusei (34,6%), C. parapsilosis (25,4%), C. tropicalis (18,2%) e C. albicans (12,8%). As drogas utilizadas foram clorexidina (2,0%), iodo (0,8%), iodo glicerinado (0,8%) e hipoclorito de sódio (1,0%) em 4 intervalos específicos de tratamento (15″, 30″, 60″ e 300″). Cem por cento das cepas de Candida foram sensíveis a clorexidina nos tempos de 30″, 60″ e 300″, ao iodo glicerinado em 60″ e 300″, ao hipoclorito de sódio em 60″ e 300″ e ao iodo apenas em 300″. Em relação aos tratamentos térmicos, a pasteurização rápida foi o procedimento no qual houve maior índice de resistência (64,44%) por parte das estirpes de leveduras. A mastite provocada por fungos está se tornando um problema crescente devido ao aumento da participação deste microrganismo no desenvolvimento de mastite em bovinos. Além disso, resistência apresentada ao tratamento térmico pelas cepas de Candida representa um problema para o consumo de leite, significando um risco para a saúde pública. Uma conclusão adicional é a importância da realização periódica de avaliações de sensibilidade dos microrganismos aos desinfetantes utilizados, de forma a garantir a eficácia da desinfecção dos tetos / Mastitis is one of the most serious problems in dairy farms. The objectives of this study were to identify yeasts involved in cases of bovine mastitis; evaluate the in vitro susceptibility of strains of Candida spp. Against four disinfectants used in the pre and post-dipping and evaluate the resistance of these strains before pasteurization and boiling. Fifty-five samples (12,8%) were positive for Candida. The most isolated species were C. krusei (34,6%), C. parapsilosis (25,4%), C. tropicalis (18,2%) and C. albicans (12,8%). As active drugs were used chlorhexidine (2,0%), iodine (0,8%), glycerin iodine (0,8%) and sodium hypochlorite (1,0%) at specific intervals of four treatment (15, 30, 60 and 300). One hundred percent of Candida was found to be sensible to chlorhexidine at 30″, 60″, and 300″, to iodine glycerin at 60″ and 300″, to sodium hypochlorite at 60″, and 300″, to iodine only at 300″. In relation to thermal treatments, pasteurization was the quick procedure in which there was a higher resistance index (64,44%) by yeast strains. Moreover, t he resistance of Candida spp. strains after thermal treatment presents a problem for milk consumption what represents a potential risk for public health. A further conclusion was that it is important to undertake a periodic evaluation of the sensibility of microorganisms to the disinfectants commonly used, to guarantee the efficacy of the process of teat disinfecting

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-07-26Bitstream added on 2014-06-13T19:56:07Z : No. of bitstreams: 1 teodoro_gr_me_sjc.pdf: 709207 bytes, checksum: f16e9f82ba0535196596d7e2cbfb2eef (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O interesse pelo desenvolvimento de terapias alternativas para o controle de Candida spp., como a pesquisa de compostos naturais com potencial antifúngico, vem crescendo. Estes micro-organismos são importantes causadores de infecções e têm se tornado resistente aos antifúngicos convencionais. Desta forma, o objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antifúngica de extratos de Buchenavia tomentosa sobre Candida spp. Inicialmente foi realizado screening por meio de teste de difusão em ágar de extratos de B. tomentosa obtidos por diferentes métodos para seleção dos dois mais ativos. A seguir, esses extratos foram caracterizados quimicamente através da técnica de espectrometria de massas por injeção direta. As concentrações inibitória mínima e fungicida mínima (CIMs e CFMs) foram determinadas para amostras padrão, isolados clínicos obtidos de pacientes com candidose bucal e cepas de origem hospitalar de Candida spp. Os resultados do screening demonstraram que os extratos aquosos B (5 minutos/100 °C) e C (60 minutos/55 °C) foram os mais ativos. As CIMs encontradas, em mg/ml, variaram de 0,2 a 25. As CFMs foram verificadas apenas paras cepas de C. krusei (3,12 a 6,25 mg/ml) e para 4 cepas de C. tropicalis (6,25 a 12,5 mg/ml). As cepas mais sensíveis aos extratos foram C. glabrata, C. dubliniensis, C. krusei e C. parapsilosis e as cepas mais resistentes foram C. albicans e C. tropicalis. O extrato B foi mais efetivo para todos os isolados, exceto para C. glabrata. O ácido gálico, corilagina e kaempferol foram encontradas apenas no extrato B. Conclui-se que, exceto os extratos A e E para C. tropicalis, todos os extratos de B. tomentosa tiveram ação antifúngica para... / The interest on the development of alternative therapies for Candida spp. control, as searching of natural compounds with antifungal potential, has increased. These microorganisms are important causative agents of infections and the resistance to conventional antifungals has been growing. The aim of this study was to evaluate the antifungal activity of Buchenavia tomentosa extracts on Candida spp. Screening by using agar diffusion test was performed to select two most active extracts. Then, the extracts were chemically characterized by direct infection mass spectrometry. Minimal inhibitory and fungicide concentrations (MICs and MFC) were determined for standard strains, clinical isolates from oral candidosis patients and nosocomial isolates. The findings of screening showed that aqueous extract B (5 min./100 °C) and C (60 min./55 °C) were the most active. Values of MIC found in, mg/ml, varied from 0.2 to 25. Values of MFC were observed for C. krusei (3.12 to 6.25 mg/ml) and for 4 C. tropicalis isolates (6.25 to 12.5 mg/ml). The most susceptible species were C. glabrata, C. dubliniensis, C. krusei and C. parapsilosis and the most resistant were C. albicans and C. tropicalis. Extract B was effective against all the isolates, except for C. glabrata. Galic acid, corilagin and kaempferol were found only in extract B. It could be concluded that, except extracts A and E against C. tropicalis, all extracts of B. tomentosa had antifungal activity against Candida spp. Besides, the aqueous extracts B and C were the most effective

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-06-16Bitstream added on 2014-06-13T20:49:55Z : No. of bitstreams: 1 majewski_m_me_sjc.pdf: 226691 bytes, checksum: bf111426017106bfa273c02fafa52492 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos da terapia fotodinâmica, utilizando-se os fotossensibilizadores azul de metileno e azuleno associados ao laser em baixa intensidade, sobre cepas de Candida isoladas da cavidade bucal humana. Foram estudadas 20 cepas de Candida, sendo 5 C. albicans, 4 C. tropicalis, 4 C. glabrata, 2 C. parapsilosis, 2 C. kefyr, 1 C. krusei, 1 C. stellatoidea e 1 C. lipolytica. Cada cepa foi submetida a 6 condições experimentais: associação de laser em baixa intensidade com 660 nm e azul de metileno (L+AM+), associação de laser e azuleno (L+AZ+), irradiação com laser (L+F-), tratamento com azul de metileno (L-AM+), tratamento com azuleno (LAZ+) e tratamento apenas com solução fisiológica como controle (L-F-). Após o tratamento de cada cepa, foram realizadas diluições seriadas e semeaduras em ágar Sabouraud dextrose. Os dados de unidades formadoras de colônias (UFC/mL) foram submetidos à análise de variância e teste de Tukey (p<0,05). Os resultados demonstraram que todos os grupos tratados com laser (L+AM+, L+AZ+ e L+F-) apresentaram médias de UFC/mL (Log) inferiores aos grupos sem laser (L-AM+, L-AZ+ e L-F-). Os grupos com terapia fotodinâmica (L+AM+ e L+AZ+) apresentaram média de UFC/mL (Log) semelhante ou superior ao grupo L+F-. Concluiu-se que as cepas de Candida isoladas da cavidade bucal de pacientes submetidos à antibioticoterapia prolongada foram resistentes a terapia fotodinâmica com azul de metileno e azuleno nos parâmetros utilizados neste trabalho. / The aim of this study was to evaluate the effects of the photodynamic therapy using methylene blue and azulene on isolated Candida strains of the oral cavity of patients who underwent a prolonged antibioticotherapy to treat lung tuberculosis. Twenty Candida strains were studied: 5 C. albicans, 4 C. tropicalis, 4 C. glabrata, 2 C. parapsilosis, 2 C. kefyr, 1 C. krusei, 1 C. stellatoidea and 1 C. lipolytica. Each strain underwent 6 experimental conditions: laser in combination with methylene blue (L+MB+), laser in combination with azulene (L+AZ+), irradiation with laser (L+P-), treatment with methylene blue (L+MB+), treatment with azulene (L+AZ+), and treatment with physiologic solution as a control group (L-P-). After the treatment of each strain, serial dilutions and spreading on Sabouraud dextrose agar were performed. Data from colony forming units per milliliter (CFU/ml) were analyzed by Tukey’s test (p<0.05). The results showed that all the groups treated with laser (L+MB+, L+AZ+ and L+P-) presented the lowest mean CFU/ml (Log) value in relation to the groups treated without laser (L+MB+, L+AZ+ and L+F-). The groups treated with photodynamic therapy (L+MB+, L+AZ+) presented an average of CFU/ml (Log) similar or higher to the L+P- group. In summary, the results showed that isolated Candida strains of the oral cavity of patients who underwent a prolonged antibioticotherapy were resistant to the photodynamic therapy with methylene blue and azulene.

Submitted by FELIPE EDUARDO DE OLIVEIRA (felipe.eoliveira@ymail.com) on 2017-04-07T14:51:33Z No. of bitstreams: 1 TESE FELIPE CORRIGIDA.pdf: 5002341 bytes, checksum: 809ad9cdf3b52f15db51efb7247aa675 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-04-17T14:10:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 oliveira_fe_dr_sjc.pdf: 5002341 bytes, checksum: 809ad9cdf3b52f15db51efb7247aa675 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-17T14:10:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 oliveira_fe_dr_sjc.pdf: 5002341 bytes, checksum: 809ad9cdf3b52f15db51efb7247aa675 (MD5) Previous issue date: 2017-02-08 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Muitos produtos probióticos são compostos pela associação de lactobacilos no intuito de potencializar seu efeito benéfico. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a imunomodulação e atividade anti-Candida causada por diferentes combinações de suspensões probióticas em macrófagos e em Galleria mellonella. Lactobacillus rhamnosus (LR), L. acidophilus (LA), e L. paracasei (LP) foram suspendidos para obtenção das suspensões LR, LA, LP, LR+LA, LR+LP, LA+LP e LR+LA+LP. Foram utilizadas suspensões de Candida albicans (CA) ATCC 18804, C. krusei (CK) ATCC 6258 e C. glabrata (CG) ATCC 9030. Macrófagos de camundongo (RAW 264.7) foram ativados por cada suspensão de lactobacilos e desafiados por cada uma das cepas fúngicas. Foram investigadas taxa de fagocitose, produção de citocinas e óxido nítrico e a viabilidade celular. A melhor suspensão probiótica para cada cepa fúngica seria usada nos testes in vivo, com G. mellonella, no entanto, devido à baixa virulência das espécies não-albicans, os testes in vivo prosseguiram com CA e LR. Duas cepas clínicas de CA foram acrescentadas: 21 e 60. Suspensões de LR foram injetadas na hemolinfa das larvas 24 h antes do desafio com as cepas fúngicas. Foram determinadas curva de sobrevivência, contagem de UFC/mL das cepas de C. albicans e de hemócitos. Os resultados foram analisados estatisticamente de acordo com a distribuição normal (ANOVA e Tukey ou Kruskal-Wallis e Dunn) e a curva de sobrevivência pelo teste de Log-rank (Mantel-Cox), p<0,05. As melhores suspensões para CA, CK e CG foram LR (com melhores resultados no perfil de citocinas), LP e LA (com melhores resultados sobre a fagocitose), respectivamente. Em G. mellonella, a suspensão de LR proporcionou aumento da percentagem de sobrevivência e do número de hemócitos e diminuição da contagem de UFC/mL em todos os grupos com diferenças estatisticamente significantes. Sendo assim, pode-se concluir que as suspensões de lactobacilos possuem potencial imunomodulador cepa dependente mas sua mistura não favorece essa qualidade. Além disso, possuem atividade anti-Candida, demonstrada pela diminuição na contagem de Candida. / Many probiotic products are composed by association of lactobacilli in order to potentiate their beneficial effect. Therefore, the objective of this study was evaluating the immunomodulation and anti-Candida activity caused by different combinations of probiotic suspensions in macrophages and in Galleria mellonella. Lactobacillus rhamnosus (LR), L. acidophilus (LA) and L. paracasei (LP) were suspended to obtain the suspensions LR, LA, LP, LR + LA, LR + LP, LA + LP and LR + LA + LP. Suspensions of Candida albicans (CA) ATCC 18804, C. krusei (CK) ATCC 6258 and C. glabrata (CG) ATCC 9030 were used. Mouse macrophages (RAW 264.7) were activated by each suspension of lactobacilli and then challenged by each fungal strain. Phagocytosis, cytokine and nitric oxide production and cell viability were investigated. The best lacobacilli suspension for each fungal strain would be used in the in vivo assays with G. mellonella, however, because of low virulence of the non-albicans species, in vivo tests were performed with CA and LR. Two clinical strains of CA were added: 21 and 60. LR suspensions were injected into the haemolymph of the larvae 24 h before challenging with fungal strains. Survival curve, CA strains CFU/mL counting and hemocytes were determined. The results were statistically analyzed according to their normal distribution (ANOVA and Tukey or Kruskal-Wallis and Dunn) and the survival curve by Log-rank test (Mantel-Cox), p <0.05. The best suspensions for CA, CK and CG were LR (which obtained the best results in the cytokine profile), LP and LA (which obtained the best results on phagocytosis), respectively. In G. mellonella, LR suspension increased percentage survival and hemocyte counting and decreased CFU/mL counting in all groups, with statistically significant differences in the results. Thus, it can be concluded that the suspensions of lactobacilli have immunomodulatory potential strain-dependent but their association does not favor this quality. Besides, they showed anti-Candida activity, demonstrated by the decrease of Candida counting.

O gênero Candida acomete cerca de 80% das infecções fúngicas no ambiente hospitalar e constitui causa relevante de infecções na corrente sangüínea. Espécies de Candida não-albicans respondem atualmente por pelo menos 50% das infecções invasivas por Candida spp, apresentando peculiaridades em termos clínicos e suscetibilidade a drogas antifúngicas. A mortalidade geral de fugemias por Candida spp é da ordem de 40-60%, tornando esta complicação infecciosa um grande desafio aos clínicos. O objetivo deste estudo foi a padronização de um ensaio imuno-enzimático (ELISA) para o diagnóstico de infecções hematogênicas devido a Candida spp. Vinte e cinco soros de pacientes com candidemia obtidos do Hospital de Clínicas de Porto Alegre e trinta e dois soros de indivíduos hígidos obtidos do Centro de Biotecnologia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul foram analisados. Foram utilizados os extratos protéicos totais de Candida albicans, Candida tropicalis, Candida parapsilosis, Candida guilliermondii, Candida glabrata, Candida dubliniensis e Candida krusei como antígenos. Nossos resultados demonstraram reatividade cruzada entre as espécies bem como alguns resultados falsonegativos. Estes resultados falso-negativos podem ser devido a resposta imune do paciente estar atrasada, diminuída ou ausente. Isto pode ser melhorado com amostras seriadas do mesmo paciente. Os resultados falso-positivos podem ser minimizados selecionando-se antígenos específicos apropriados, moléculas purificadas ou antígenos recombinantes. / Candida spp is associated to almost 80% of all nosocomial fungal infections and is considered a major cause of blood stream infections. This yeast is the fourth most common cause of blood stream infections in the United States, where this agent is responsible for 8% of all invasive infections documented in this site and the crude mortality rate is between 40 and 60%. At the present, non-albicans species are related to at least 50% of all invasive infections due to Candida spp and they present differences in terms of clinical outcome as well as susceptibility to antifungal drugs. Nevertheless, the hematogenous infections due to Candida spp diagnosis remain an important challenge for all clinicians. The objective of this study was the standardization of an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to diagnose hematogenous infections due to Candida spp. Twenty five sera of patients with candidaemia from Hospital de Clínicas de Porto Alegre, a general tertiary care hospital in Southern Brazil and thirty two sera from healthy people from Centro de Biotecnologia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul were analyzed. As antigens for ELISA, protein extracts from Candida albicans, Candida tropicalis, Candida parapsilosis, Candida guilliermondii, Candida glabrata, Candida dubliniensis and Candida krusei were used. Our results had demonstrated cross-reactivity between species as well as some false-negatives. These false-negatives may be due to a delayed, reduced or absent antibody response, which might be improved increasing the number of samples tested. The false-positives can be improved by selecting more appropriate specific antigens, as purified molecules or recombinant antigens.

As leveduras do gênero Candida são responsáveis por 80% das infecções fúngicas sistêmicas. Nas Unidades de Terapia Intensiva, essas leveduras estão envolvidas em aproximadamente 17% das infecções. Essas doenças aumentam o tempo de hospitalização, resultando em aumento de gastos; além disso, as infecções sistêmicas causadas por Candida spp. apresentam elevada taxa de mortalidade. A candidemia representa grande parte das candidíases invasivas e sua epidemiologia pode variar de acordo com o local de estudo, práticas hospitalares e país estudado. Assim, o objetivo do presente estudo foi caracterizar 79 isolados de candidemia de pacientes internados no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto de junho de 2014 a novembro de 2015. Para isso, os isolados foram submetidos a testes de microdiluição em caldo para a determinação da Concentração Inibitória Mínima dos antifúngicos anfotericina B, caspofungina, fluconazol e voriconazol; testes para avaliar a produção de fatores de virulência: hemolisina, fosfolipase e proteinase; e genotipagem por Pulsed-field Gel Electrophoresis, Microsatellite Length Polymorphism e Multilocus Sequence Typing. Como esperado, C. albicans foi a espécie predominante (44%), seguida por C. glabrata (19%), C. tropicalis (19%), C. parapsilosis (14%) e C. orthopsilosis (4%). Os isolados, em geral, não apresentaram resistência aos antifúngicos testados. Entretanto, todos os isolados de C. glabrata e um isolado de C. parapsilosis apresentaram-se suscetíveis dose-dependentes ao fluconazol, três isolados de C. glabrata foram suscetíveis dose-dependentes à caspofungina, um isolado de C. albicans foi suscetível dose-dependente ao voriconazol e um isolado de C. albicans apresentou-se resistente ao fluconazol e voriconazol. Os isolados da espécie C. albicans foram os principais produtores de fatores de virulência. Os resultados dos testes de genotipagem indicaram a espécie C. glabrata apresentou menor variabilidade genética. A incidência de candidemia no período estudado foi de 1,52/1000 admissões e a taxa de mortalidade foi de 52%. O principal fator de risco foi antibioticoterapia (86%), seguido de sonda vesical (68%), acesso venoso central (60%), cirurgias (54%), nutrição parenteral (42%) e neutropenia (14%). Das doenças de base, o câncer sólido estava presente em 28% dos pacientes, seguido por diabetes (23%), doenças gastrointestinais (20%) e doenças hepáticas (15%). Finalmente, os resultados obtidos são úteis para o melhor entendimento do perfil da candidemia no hospital estudado e podem auxiliar na escolha da terapia empírica para essa doença / Candida spp. are responsible for 80% of all systemic fungal infections. In the Intensive Care Units, these yeasts are present in 17% of all infections. These diseases result in extended hospitalization, leading to increased hospital costs; besides, the systemic infections caused by Candida spp. are related to high mortality rates. Candidemia is the main invasive candidiasis and its epidemiology may vary among study location, local healthcare practices and studied countries. Therefore, the aim of this study was to characterize 79 bloodstream isolates from patients of the Hospital das Clínicas of Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, from June 2014 to November 2015. The Minimal Inhibitory Concentration of amphotericin B, caspofungin, fluconazole and voriconazole was determined using broth microdilution; virulence factor production was analyzed; and the strains were typed by Pulsed-field Gel Electrophoresis, Microsatellite Length Polymorphism and Multilocus Sequence Typing. As expected, C. albicans was the most predominant species (44%), followed by C. glabrata (19%), C. tropicalis (19%), C. parapsilosis (14%) and C. orthopsilosis (4%). In general, the strains did not show resistance to the tested antifungals. However, all C. glabrata and one C. parapsilosis isolates exhibited dose-dependent susceptibility to fluconazole, three C. glabrata isolates exhibited dose-dependent susceptibility to caspofungin, one C. albicans isolate was susceptible dose-dependent to voriconazole and one C. albicans isolate was resistant to fluconazole and voriconazole. Candida albicans strains were the main virulence attributes producer. C. glabrata isolates showed less genetic variability than the others studied species. The candidemia incidence was 1.52 per 1,000 admissions, and the mortality rate was 52%. The main risk factors were antibiotic therapy (86%), followed by urinary catheterization (68%), central venous access (60%), surgical procedures (54%), parenteral nutrition (42%) and neutropenia (14%). The most common underlying diseases were solid cancer (28%), diabetes (23%), gastrointestinal disease (20%) and liver disease (15%). Finally, the results are useful to bring a better comprehension of candidemia in the studied hospital and can help in the identification of efficient empirical treatment strategies