As neoplasias mamárias em cadelas são afecções de significativa importância em medicina veterinária pela sua alta frequência, além de serem modelo para o estudo do câncer de mama na mulher. Nesse sentido, se faz necessária a realização de estudos continuados acerca da frequência de tumores e suas características clinicopatológicas. Constituem ainda um grupo heterogêneo de tumores quanto aos padrões histológicos e comportamento biológico, o que torna mais complexo e urgente a identificação de fatores de prognóstico e que possibilitem diagnosticar e tratar de forma mais eficaz animais portadores de tumor de mama. Nos últimos anos, tem se intensificado estudos dirigidos à identificação de marcadores moleculares envolvidos nos inúmeros eventos celulares que ocorrem durante a carcinogênese, como crescimento e diferenciação celular, proliferação, invasão e metástase. O receptor do fator de crescimento epidérmico humano tipo 2 (HER-2) é uma glicoproteína de membrana da família tirosina-quinase, codificada por um gene de mesmo nome, diretamente relacionada a mudanças significativas na proliferação celular e sobrevivência das células tumorais. Durante o processo de mutação desse gene ocorre hiperativação da cascata de sinalização intracelular, que resulta em rápido crescimento das células tumorais. Na mulher, a superexpressão de HER-2 está associada a neoplasias mamárias cujos parâmetros morfológicos sugerem malignidade e pior prognóstico, resultando em alta taxa de recidiva e de mortalidade no estágio inicial da doença, além de elevada incidência de metástases. Entretanto, na cadela, estudos que investigaram o papel do HER-2 nas neoplasias mamárias, com emprego da imunohistoquímica, não são consensuais até então, mantendo obscuro o significado da sobrexpressão de HER-2 nestas neoplasias. Com intuito de auxiliar na determinação de fatores prognósticos fidedignos para os tumores mamários nas cadelas, o presente trabalho teve como objetivos: determinar a prevalência de lesões mamárias diagnosticadas em cadelas no Laboratório de Patologia Veterinária da Universidade Federal de Uberlândia entre 2004 e 2014, bem como a relação entre aspectos epidemiológicos (idade e raça) e clínicopatológicos (ulceração, tamanho do tumor e comportamento biológico) na ocorrência dos tumores de mama; e verificar a expressão de HER-2 em carcinomas mamários de cadelas e sua relação com o tipo e grau histológico, idade das cadelas, metástase em linfonodos e à distância, tamanho tumoral e estadiamento clínico. / Mammary tumors in female dogs are important diseases in veterinary medicine due to their high frequency, besides being a model for the study of breast cancer in women. So, it is necessary to continuous studies on the frequency of tumors and their clinicopathological characteristics. They also constitute a heterogeneous group of tumors in correlation with histological patterns and biological behavior, which makes it more complex and urgent to identify prognostic factors and to make it possible to diagnose and treat animals with mammary tumors more effectively. In the last years, there have been intensified the number of studies about the identification of molecular markers involved in the innumerable cellular events that occur during carcinogenesis, such as cell growth and differentiation, proliferation, invasion and metastasis. HER-2 is a membrane glycoprotein of the tyrosine kinase family, encoded by a gene with the same name, directly related to significant changes in cell proliferation and survival of tumor cells. During mutation process of this gene, hyperactivation of intracellular signaling cascade results in a rapid growth of tumor cells. In women, HER-2 overexpression is associated with breast neoplasms whose morphological parameters suggest poor prognosis and malignancy, resulting in a high rate of recurrence and mortality in the early stage of the disease, as well as a high incidence of metastases. However, in the female dog, until now the extensive variability of results obtained from immunohistochemical protocols proposed for molecular classification, keeps the meaning of HER-2 overexpression in these neoplasms obscure. In order to assist determination of the reliable prognostic factors for canine breast neoplasms, the present study: determined the prevalence of breast lesions diagnosed in female dogs in Laboratory of Veterinary Pathology of the Federal University of Uberlândia between 2004 and 2014, as well as the correlation between epidemiological aspects (age and breed) and clinicopathological (ulceration, tumor size and biological behavior) in the occurrence of breast tumors; verified the HER-2 expression in female mammary carcinomas of dogs and their relationship with the type and histological grade, age of patient, metastasis in lymph nodes or distants, tumor size and clinical staging. / Tese (Doutorado)

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 NIVIA faria.pdf: 1723183 bytes, checksum: 8c7fa557f1d9e528a75b069ae5bd4fbf (MD5) Previous issue date: 2009-12-18 / The transmissible venereal tumor (TVT) is among the most common cancers in dogs in Brazil. This is a sexually transmitted cancer through a mechanism of transplantation of viable tumor cells, it has high incidence among dogs of both sexes in reproductive age, with high occurrence in areas of high concentration of dogs with poor control of reproduction. The diagnosis made in the routine of clinical medicine is usually based only on clinical symptoms and the chemotherapy of choice has been the vincristine sulfate. This drug has been shown in most cases a good response to treatment with complete regression of the tumor, but there are also cases where the tumor appears resistant to treatment. This study aimed to demonstrate the practicality of using fine needle aspiration cytology as a method of diagnosis and cytomorphologic classification, being effective and safe as well as measuring the response of different cytomorphologic groups forward to treatment with vincristine sulfate. Also evaluating the clinical response, hematologic and biochemical tests using serum liver function (ALT) and renal (creatinine), in the therapy instituted. Were evaluated and treated 18 dogs of both sexes, carrying TVT, which received six consecutive weeks during the administration of vincristine sulfate in the dosage of 0.03 mg / kg administered intravenously. The animals underwent weekly prior to medication, clinical assessment, haematological and biochemical. It was observed in this study that cytological examination is a simple technique, minimally invasive and painless, and a safe method that provides no risk to the patient's life and does not require the use of sophisticated equipment, sedation or anesthesia for their achievement. Animals carrying the TVT plasmacytoid type, had higher rate of tumor resistance to treatment in relation to established groups and linfocytic mixed, showing a greater resistance to treatment with this group of vincristine sulfate. The efficiency of response to treatment was presented by the linfocytic group. The vincristine sulfate showed few side effects, low hematological, hepatic and renal toxicity, it is therefore an effective option in the control of transmissible venereal tumor in not resistant cases. / O tumor venéreo transmissível (TVT) é uma das neoplasias mais freqüentes em cães no Brasil. Trata-se de uma neoplasia sexualmente transmissível, através de um mecanismo de transplantação de células tumorais viáveis, apresenta alta incidência entre cães de ambos os sexos em idade reprodutiva, tendo grande ocorrência em ambientes de alta concentração de cães errantes e com deficiente controle de reprodução. O diagnóstico realizado na rotina da clínica médica geralmente se baseia apenas na sintomatologia clínica e o quimioterápico de eleição tem sido o sulfato de vincristina. Este quimioterápico tem demonstrado na maioria dos casos boa resposta ao tratamento com regressão completa da neoplasia, mas também há casos onde o tumor se mostra resistente ao tratamento. O presente trabalho visou demonstrar a praticidade do uso da citologia aspirativa por agulha fina como método de diagnóstico e de classificação citomorfológica eficaz e seguro, assim como mensurar a resposta dos diferentes grupos citomorfológicos frente ao tratamento com sulfato de vincristina. Avaliando também a resposta clínica, hematológica e por meio de provas bioquímicas séricas a função hepática (ALT) e renal (creatinina), frente à terapia instituída. Foram avaliados e tratados 18 cães de ambos os sexos, portadores de TVT, os quais receberam durante seis semanas consecutivas a administração de sulfato de vincristina na dosagem de 0,03 mg/kg administrado via intravenosa. Os animais foram submetidos semanalmente previamente a medicação, avaliação clínica, hematológica e bioquímica. Observou-se com este estudo que o exame citológico constitui-se em uma técnica simples, minimamente invasiva e indolor, sendo um método seguro, que não proporciona riscos à vida do paciente e não requer o uso de equipamento sofisticado, sedação ou anestesia para sua realização. Os animais portadores do TVT do tipo plasmocitóide, apresentaram maior índice de resistência tumoral ao tratamento estabelecido em relação aos grupos linfocitóide e misto, demonstrando uma maior resistência deste grupo ao tratamento com sulfato de vincristina. A maior eficácia de resposta ao tratamento foi apresentada pelo grupo linfocitóide. O sulfato de vincristina apresentou poucos efeitos colaterais, baixa toxicidade hematológica, hepática e renal constituindo, portanto em opção eficaz no controle do tumor venéreo transmissível em casos não resistentes.

O transplante intrauterino de células-tronco (TIUCT) é um método de tratamento de doenças genéticas, congênitas, hematológicas e imunológicas em um feto durante a gestação. Em pesquisa básica este modelo permite o estudo da dinâmica de migração, enxertia e estado funcional de diferentes tipos de células-tronco (CT). Estas células podem ser transplantadas em diferentes momentos do período gestacional, que pode ser dividido em três momentos do desenvolvimento fetal, sendo estes, diferentes funcionalmente. A escolha deste momento para o transplante influenciará tanto no comportamento celular quanto no resultado. Para o TIUCT são utilizadas as CT mesenquimais derivadas da medula óssea ou fetais ou hematopoiéticas. Para esta pesquisa utilizamos células-tronco derivadas da polpa dentária imatura humana (CTIPDh) as quais apresentam potencial pluripotente e propriedades imunomodulatórias. Nosso principal objetivo foi avaliar a capacidade migratória, bem como de proliferação e endereçamento (homing) das CTIPDh durante o terceiro período gestacional do desenvolvimento fetal no modelo canino. Todos os procedimentos experimentais foram elaborados sob protocolo anestésico apropriado e aprovados pelo comitê de ética da FMVZ da USP. Foram transplantadas via intraperitoneal (IP) 1x106 CTIPDh GFP+ em cada feto, durante procedimento cirúrgico de laparotomia exploratória com ultrassonografia guiada intraoperatóriamente em quatro fetos com idade gestacional aproximada de 45 dias, e outros dois fetos os quais não receberam o transplante, utilizados como controle. Avaliamos os fetos pré e pós-transplante através do ultrasson. Após sete dias, realizamos a ovário-salpingo-histerectomia (OSH) para a colheita dos fetos. Em seguida coletamos seus órgãos e tecidos os quais foram fixados em paraformoldeído a 4% e criopreservados a temperatura de -80oC. Analisamos a biodistribuição das CTIPDh dentro dos órgãos e tecidos em criocortes de 5µm sob microscopia Confocal. Constatamos o homing das CTIPDh nos órgãos derivados das linhas germinativas endodermais, ectodermais e mesodermais. No estômago e intestinos as CTIPD/GFP+ foram identificadas tanto no espaço intraglandular, como na camada muscular da mucosa; no fígado no parenquima hepático; no coração especialmente no tecido muscular do miocárdio; no cérebro nos vasos da substância branca, e cerebelo entre células de Purkinje. Na placenta estas células foram encontradas especialmente junto aos vasos. Quantificamos as CTIPD GFP+ utilizando a citometria de fluxo. Comparativamente dentre os órgãos analisados, obtivemos resultados expressivos do homing celular no miocárdio (~50%), no baço e fígado. Nossos resultados foram confirmados através das análises de imunohistoquímica e imunofluorescência utilizando os anticorpos Anti-núcleo (HuNu), Anti-CTIPD e Anti-GFP humanos. Concluímos que as CTIPDh apresentam grande potencial migratório e proliferativo após o TIUCT em fetos caninos. Estas células indiferenciadas demonstraram homing, especialmente nos tecidos: hematopoiéticos fetais (placenta, fígado e baço), tecido epitelial e glandular de órgãos, bem como de nichos perivasculares de CT. Estes dados sugerem que as CTIPD através do TIU, é uma alternativa viável, segura e promissora para o tratamento de doenças genéticas, congênitas, hematológicas e imunológicas. / Intra-uterine stem cells transplantation (IUSCT) is a method for the treatment of genetic, congenital, hematological, and immunological diseases. In basic research it provides a model for studying the dynamics of migration, graft and functional status of different types of stem cells. The cells can be transplanted in different moments of gestational period, which can be divided into quarters that are not functionally equivalent. The choice of the cells and quarter where the stem cells will be applied can influence cells behavior and results of transplantation. Fetal and adult hematopoietic or bone marrow derived mesenchymal stem cells (MSCs) were mainly used for IUSCT. We previously obtained human immature dental pulp stem cell (IDPSCs), which showed pluripotent potential and immune-compatible properties. The goal of our study was to evaluate migration capacity, proliferation and homing of IDPSCs after IUSCT during the third fetal period in dogs. All experimental procedures were approved by the Ethical Committee of the School of Veterinary Medicine and Animal Science of São Paulo University and were performed under appropriate anesthesia. 1x106 of undifferentiated GFP-positive human IDPSCs were transplanted following laparotomy and intraperitoneal injection under intra-operative ultrasound control into 5 fetuses at the 45 days of gestation. Five fetuses, which did not receive IDPSCs, were used as a control. Ultrasound analyses were performed daily before collection of the fetuses. After 7 days ovarian hysterectomy was performed, fetuses were collected; organs and tissues were isolated and fixed in 4% paraformaldehyde or cryopreserved. Biodistribution of IDPSCs within the organs and tissues were analyzed on cryosections (5µm) under Confocal Microscopy. Homing of IDPSCs was observed in organs derived from three germ lines, endoderm, ectoderm and mesoderm. In stomach and in intestine GFP IDPSCs were found in intraglandular space as well as in muscularis mucosae. In liver they appeared in hepatic parenchyma; in heart in myocardium and in brain in bold vessels, in cerebellum within Purkinje cells. Using Flow cytometry assay GFP IDPSCs graft was quantified. Among the different organs an expressive homing was observed in myocardium of heart (~50%), in spleen and liver. The IDPSCs were also found in canine placenta, especially in blood vessels. These data were confirmed using anti-human nucleus (HuNu), anti-GFP and anti-IDPSCs anti-bodies. Human IDPSCs showed high migration and proliferation potential after IUSCT in dog fetuses. Undifferentiated IDPSCs demonstrated homing in fetal hematopoietic (placenta), epithelial (gastric glands) and perivascular stem cells niches. Our data suggest that IDPSCs is a new promising source for genetic, congenital, hematological, and immunological treatment for those diseases through IUSCT.