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O papel da concentração salivar e sérica da proteína SLPI (inibidor de protease secretada por leucócitos) na progressão do carcinoma epidermoide da cavidade bucal / The Role of Tumor Expression and Salivary and Serum Concentration of Protein SLPI (Protein Inhibitor Secreted by Leukocytes) in Progression of Squamous Cell Carcinoma of the Oral Cavity

Silva, Tarsila Guimarães Vieira da 27 February 2018 (has links)
Introdução: A avaliação dos processos inflamatórios em pacientes com tumores de boca é assunto atual na literatura científica. Poucos estudos, entretanto avaliaram a expressão da Proteína Inibidora de Protease Secretada por Leucócito (SLPI), marcador específico de inflamação, em pacientes com câncer de boca Objetivos: 1.Descrever a frequência da concentração de SLPI salivar e sérica em pacientes com câncer bucal. 2. Avaliar a associação dessas concentrações com características clínicas, sociodemográficas e de estilo de vida. Metodologia: Realizou-se a quantificação de SLPI em soro por meio do teste ELISA em pacientes com carcinoma epidermoide da cavidade bucal atendidos no Hospital Heliópolis da Secretaria de Estado da Saúde do Estado de São Paulo no período entre 2011 e 2017. Dados relativos a estadiamento do tumor, características sócio demográficas dos pacientes, hábitos alimentares e estilo de vida foram coletados por meio de prontuários médicos e questionários aplicados aos pacientes. Foram realizados teste de correlação de Spearman e teste qui-quadrado para testar possíveis associações. Resultados: Foram encontradas: correlação positiva entre SLPI em saliva maços-ano de tabagismo (p=0,03) e correlação negativa entre SLPI bochecho para frequência no consumo de carne vermelha (p=0,01). A quantificação de SLPI em soro por quartis apresentou associação com significância estatística para escolaridade (maior proporção de pessoas com ensino médio completo no quartil mais baixo de SLPI), frequência de escovação dentária (maior proporção de pessoas que escovam os dentes mais do que uma vez por dia no quartil com maior SLPI) e estadiamento patológico (2º quartil com maior proporção de estadiamentos 3 e 4). Na avaliação de SLPI em saliva e bochecho, houve associação com o consumo de carne vermelha, havendo indivíduos com consumo mais baixo apenas nos quartis mais superiores de SLPI Conclusão: Este estudo concorda com a hipótese de que o SLPI em pacientes com câncer de boca se relaciona com estilo de vida e estadiamento da lesão. / Introduction: The evaluation of inflammatory processes in patients with oral tumors is a current topic in the scientific literature. Few studies, however, have evaluated the expression of the Leukocyte Secreted Protein Inhibitor Protein (SLPI), a specific marker of inflammation in patients with oral cancer. Objectives: 1. To describe the frequency of salivary and serum SLPI in patients with oral cancer. 2. To evaluate the association of these concentrations with clinical, sociodemographic and lifestyle characteristics. Methodology: Serum SLPI was quantified by ELISA in patients with squamous cell carcinoma of the oral cavity treated at the Hospital Heliópolis of the State Health Department of the State of São Paulo in the period between 2011 and 2017. Data on staging of the tumor, socio-demographic characteristics of patients, eating habits and lifestyle were collected through medical records and questionnaires applied to patients. Spearman\'s correlation test and chi-square test were performed to test possible associations. Results: There was a positive correlation between SLPI in saliva and malnutrition SLPI (p = 0.03). The quantification of SLPI in serum by quartiles was associated with statistical significance for schooling (higher proportion of people with complete secondary education in the lowest quartile of SLPI), frequency of toothbrushing (a higher proportion of people brushing their teeth more than once per day in quartile with higher SLPI) and pathological staging (2nd quartile with a higher proportion of stages 3 and 4). In the evaluation of SLPI in saliva and mouthwash, there was an association with red meat consumption, with individuals with lower consumption only in the higher quartiles of SLPI. Conclusion: This study agrees with the hypothesis that SLPI in patients with oral cancer is related to lifestyle and staging of the lesion.
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O papel da concentração salivar e sérica da proteína SLPI (inibidor de protease secretada por leucócitos) na progressão do carcinoma epidermoide da cavidade bucal / The Role of Tumor Expression and Salivary and Serum Concentration of Protein SLPI (Protein Inhibitor Secreted by Leukocytes) in Progression of Squamous Cell Carcinoma of the Oral Cavity

Tarsila Guimarães Vieira da Silva 27 February 2018 (has links)
Introdução: A avaliação dos processos inflamatórios em pacientes com tumores de boca é assunto atual na literatura científica. Poucos estudos, entretanto avaliaram a expressão da Proteína Inibidora de Protease Secretada por Leucócito (SLPI), marcador específico de inflamação, em pacientes com câncer de boca Objetivos: 1.Descrever a frequência da concentração de SLPI salivar e sérica em pacientes com câncer bucal. 2. Avaliar a associação dessas concentrações com características clínicas, sociodemográficas e de estilo de vida. Metodologia: Realizou-se a quantificação de SLPI em soro por meio do teste ELISA em pacientes com carcinoma epidermoide da cavidade bucal atendidos no Hospital Heliópolis da Secretaria de Estado da Saúde do Estado de São Paulo no período entre 2011 e 2017. Dados relativos a estadiamento do tumor, características sócio demográficas dos pacientes, hábitos alimentares e estilo de vida foram coletados por meio de prontuários médicos e questionários aplicados aos pacientes. Foram realizados teste de correlação de Spearman e teste qui-quadrado para testar possíveis associações. Resultados: Foram encontradas: correlação positiva entre SLPI em saliva maços-ano de tabagismo (p=0,03) e correlação negativa entre SLPI bochecho para frequência no consumo de carne vermelha (p=0,01). A quantificação de SLPI em soro por quartis apresentou associação com significância estatística para escolaridade (maior proporção de pessoas com ensino médio completo no quartil mais baixo de SLPI), frequência de escovação dentária (maior proporção de pessoas que escovam os dentes mais do que uma vez por dia no quartil com maior SLPI) e estadiamento patológico (2º quartil com maior proporção de estadiamentos 3 e 4). Na avaliação de SLPI em saliva e bochecho, houve associação com o consumo de carne vermelha, havendo indivíduos com consumo mais baixo apenas nos quartis mais superiores de SLPI Conclusão: Este estudo concorda com a hipótese de que o SLPI em pacientes com câncer de boca se relaciona com estilo de vida e estadiamento da lesão. / Introduction: The evaluation of inflammatory processes in patients with oral tumors is a current topic in the scientific literature. Few studies, however, have evaluated the expression of the Leukocyte Secreted Protein Inhibitor Protein (SLPI), a specific marker of inflammation in patients with oral cancer. Objectives: 1. To describe the frequency of salivary and serum SLPI in patients with oral cancer. 2. To evaluate the association of these concentrations with clinical, sociodemographic and lifestyle characteristics. Methodology: Serum SLPI was quantified by ELISA in patients with squamous cell carcinoma of the oral cavity treated at the Hospital Heliópolis of the State Health Department of the State of São Paulo in the period between 2011 and 2017. Data on staging of the tumor, socio-demographic characteristics of patients, eating habits and lifestyle were collected through medical records and questionnaires applied to patients. Spearman\'s correlation test and chi-square test were performed to test possible associations. Results: There was a positive correlation between SLPI in saliva and malnutrition SLPI (p = 0.03). The quantification of SLPI in serum by quartiles was associated with statistical significance for schooling (higher proportion of people with complete secondary education in the lowest quartile of SLPI), frequency of toothbrushing (a higher proportion of people brushing their teeth more than once per day in quartile with higher SLPI) and pathological staging (2nd quartile with a higher proportion of stages 3 and 4). In the evaluation of SLPI in saliva and mouthwash, there was an association with red meat consumption, with individuals with lower consumption only in the higher quartiles of SLPI. Conclusion: This study agrees with the hypothesis that SLPI in patients with oral cancer is related to lifestyle and staging of the lesion.
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Análise da expressão da proteína Akt em cultura de células de carcinomas epidermóides de cabeça e pescoço tratadas com curcumina / Analysis of pAkt protein expression in squamous carcinoma cell culture of head and neck treated with curcumin

Moraes, Síntique Nunes Schulz 18 March 2016 (has links)
Diversas alterações genéticas estão associadas à patogênese do carcinoma epidermoide (CE), neoplasia maligna mais comum de cabeça e pescoço. Algumas dessas alterações comprometem proteínas pertencentes à via de sinalização do Akt, envolvida em diferentes fenômenos celulares. Este trabalho teve como objetivo estudar a expressão da proteína pAkt em linhagens celulares de carcinomas epidermoides de cabeça e pescoço, de forma a verificar possíveis alterações na transcrição dessa molécula em células de CE tratadas com Curcumina. Foram utilizadas duas linhagens celulares de CE de cabeça e pescoço (FaDu e SCC9) e uma linhagem de queratinócitos normais (HaCat) divididas em dois grupos: a. Grupo controle não tratado; b. Células tratadas com Curcumina. A proliferação celular foi monitorada através do teste de viabilidade celular e a análise da expressão de proteína foi realizada através da técnica do Western Blotting que revelou supressão do pAkt na linhagem celular SCC9 nos tempos de 24 e 48 horas. Desta forma, conclui-se que a Curcumina na via do Akt em carcinomas epidermoides de cabeça e pescoço tem importante ação supressora do gene pAkt. / Several genetic alterations are associated with the pathogenesis of squamous cell carcinoma (SCC), the most common malignant neoplasm of the head and neck. Some of these changes compromise the proteins belonging to the Akt signaling pathway, involved in various cellular phenomena. The objective of this study to explores the expression of the pAkt protein in cell lines of the squamous cell carcinomas of the head and neck to verify possible changes in the transcription of this molecule in EC cells treated with curcumin. The study used two cell lines of EC head and neck (FaDu and SCC9) and a normal line of keratinocytes (HaCat), split into two groups: A. the controlled group, untreated; B. Cells treated with curcumin. The cell proliferation it was observed by cell viability test and analysis of protein expression performed through Western blotting technique revealed suppression of pAkt in SCC9 cell line at 24 and 48 hours. Thus, it is concluded that the Curcumin on the path of Akt in squamous cell carcinoma of the head and neck has a significant suppressive effect of gene Akt.
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Análise imuno-histoquímica do CXCR4 em carcinoma epidermoide de cavidade oral / Immunohistochemical analysis of CXCR4 in squamous cell carcinoma of the oral cavity

Tonin, Letícia Oliveira 26 April 2018 (has links)
O câncer de cavidade oral é uma das neoplasias mais comuns no Brasil e no mundo, porém seu prognóstico ainda é incerto principalmente devido ao diagnóstico tardio e presença de metástases. A análise de fatores relacionados ao prognóstico dessa doença é de suma importância e, o receptor de quimiocina denominado CXCR4, está sendo relacionado a um pior prognóstico devido a maior capacidade de invasão das células que o expressam, em diversas neoplasias. Apesar dessa relação estar demonstrada em vários tipos de cânceres, com relação ao de cavidade oral pouco se sabe até o momento. Assim, objetivo desse trabalho foi analisar a expressão imuno-histoquímica do receptor de quimiocina CXCR4 em carcinomas epidermóides de cavidade oral, e relacioná-la com variáveis clínicas e histológicas. Foram obtidos 94 blocos de carcinomas epidermóides oriundos de instituições parceiras para obtenção de cortes histológicos convencionais, corados com hematoxilina e eosina (HE), e cortes de TMA (tissue microarray). Foi realizado imuno-histoquímica para anticorpo anti-CXCR4 (ab124824, ABCAM, EUA) e análise da marcação em lâminas de TMA utilizando o software Image J (versão 1.49u). A intensidade de marcação imuno-histoquímica foi correlacionada com dados clínicos (TNM, tabagismo, etilismo e sobrevida) e histopatológicos (diferenciação histológica, infiltrado inflamatório e infiltração vascular, linfática e perineural) dos pacientes. Dos casos analisados 74,4% exibiram uma marcação fortemente positiva para o CXCR4, enquanto que o epitélio não tumoral mostrou uma marcação negativa ou fracamente positiva (71,1%; p=0,011). Tumores classificados como \"bem diferenciados\" apresentaram marcação fortemente positiva para a proteína estudada (53,3%; p=0,049). Não houve associação entre a marcação imuno-histoquímica do CXCR4 com sobrevida global em 5 anos (?2= 0.3, p=0.565). Os resultados sugerem que a alta expressão dessa proteína não influencia no prognóstico e na sobrevida desses pacientes. / Oral cancer is one of the most common neoplasia in Brazil and the world. Mainly due to a late diagnosis and presence of metastases its prognosis is still uncertain. Finding biological markers related to the prognosis of this disease is of paramount importance. The chemokine receptor CXCR4 is being related to a worse prognosis in several neoplasms because cells expressing it acquire a greater capacity of invasion. Although this relationship is demonstrated in several types of cancers, in the oral cavity it is uncertain. The aim of this study was to analyze by immunohistochemistry the CXCR4 chemokine receptor expression in oral squamous cell carcinomas, and related to clinical and histological variables. Conventional histological sections stained with hematoxylin and eosin (HE) were acquired from 94 blocks of oral squamous cell carcinoma for histological analysis. TMA (tissue microarray) was assembled from these blocks for anti-CXCR4 immunohistochemistry (ab124824, ABCAM, USA). Staining analysis was performed using Image J software (version 1.49u). The immunohistochemical signal intensity was correlated with clinical (TNM, smoking, alcoholism and survival) and histopathological parameters (histological differentiation, inflammatory infiltration, vascular, lymphatic and perineural infiltration). From the cases studied 74.4% showed a strong positivity for CXCR4, and the non-tumoral epithelium was negative or weakly positive (71.1%; p = 0.011). Tumors histologically well differentiated were strongly positive for the protein studied (53.3%; p = 0.049). There was no association between CXCR4 signal and global survival in 5 years (?2= 0.3, p=0.565). These results suggest that a high expression of CXCR4 it is not related to prognosis and survival of patients of patients with oral squamous cell carcinoma.
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Aspectos da E-caderina na invasão óssea do carcinoma epidermóide da mucosa oral / E-cadherin expression in oral squamous cells carcinoma with boné invasion

Toledo, Durval 13 April 2016 (has links)
O carcinoma epidermóide da mucosa oral (CEMO) é uma neoplasia maligna comum; no Brasil, são estimados, para 2016, 15.490 novos casos. A invasão óssea ocorre em casos avançados.; esta é classificada em erosiva e infiltrativa. Aparentemente, o processo de transição epitélio-mesenquimal, com o envolvimento da E-caderina, é implicado. Foi investigada a expressão de E-caderina, por meio da imunoistoquímica em 15 casos avançados de CEMO e avaliada sua correlação com as características clínicas e histológicas da invasão óssea. A imunoexpressão da E-caderina foi estudada nos 15 casos de CEMO com evidência histológica de invasão óssea. A maioria dos pacientes eram homens (10 pacientes) e apresentavam invasão em mandíbula (9 casos). A expressão de E-caderina foi negativa em CEMOs com invasão erosiva e positiva nos casos que apresentavam infiltração óssea. A expressão de E-caderina na invasão óssea sugere que a participação do fenômeno de transição epitélio-mesenquimal é um fator diretamente envolvido com o tipo de invasão óssea. / Oral squamous cell carcinoma (OSCC) is a common malignancy; in Brazil it is estimated, in 2016,15.490 new cases. Bone invasion occurs in advanced cases; it is classified in erosive and infiltrative patterns. Apparently, the epithelial-mesenchymal phenomenon, with important participation of E-cadherin is implicated. We investigated the expression of E-cadherin in advanced OSSC and correlated its expression with the clinical characteristics and histologic patterns of bone invasion. Immunoexpression of E-cadherin was studied in 15 cases of OSCC with histological evidence of bone invasion. Most patients were men (10 patients) and presented mandible invasion (9 cases). The expression of E-cadherin was negative in OSCC in erosive bone invasion and positive in the infiltrative bone invasion. E-cadherin expression in bone invasion suggests that participation of epithelial-mesenchymal phenomenon is dependent on the patterns of tumour bone invasion.
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Estudo da mutação do gene TP53 e análise da expressão imuno-histoquímica de p53, Bcl2 e Fas em queilite actínica e carcinoma epidermoide de lábio / Study of TP53 gene mutation and immunohistochemical analysis of p53, Bcl2 e Fas expression in actinic cheilitis and lip squamous cell carcinoma

Costa, Alexandra Fontes da 28 January 2011 (has links)
A radiação ultravioleta ao atingir os seres humanos em grande quantidade e durante uma longa exposição pode provocar danos específicos ao DNA, sendo causa de várias lesões como o carcinoma epidermoide de lábio e a queilite actínica, que é considerada uma lesão precedente ao aparecimento da primeira. Entre os danos causados pela radiação UV está a alteração genética do TP53, provocando anomalias na proteína por ele codificada. A produção da proteína p53 somente é recrutada em situações de estresse como: radiação ionizante, hipoxia ou ativação de oncogenes, nas quais sua função é regular o ciclo celular e ativar vias de apoptose. Contudo, sabe-se que no processo de carcinogênese não somente as alterações não reparadas do DNA são responsáveis pelo aparecimento de uma lesão. Outro fator de extrema importância nesse processo são os mecanismos de apoptose, entre os quais estão as vias do Bcl2 e do Fas. A queilite actínica normalmente é classificada segundo seus graus de displasia, o que para alguns sugeriria os passos percorridos por essa lesão até o carcinoma epidermoide de lábio já que esta lesão possui um potencial de malignização. Os resultados deste trabalho demonstraram que não há diferença estatística na expressão gênica e imuno-histoquímica de p53 entre os diversos graus de displasia. Demonstraram ainda que as vias de apoptose de Bcl2 e Fas estavam ocorrendo normalmente. Sugere-se então que não há comprovação de que ocorra uma progressão para a malignização passando por todos os graus de displasia da queilite actínica tendo, todos a mesma possibilidade de se transformarem em um carcinoma epidermoide de lábio. / The long exposition of the human tissues to the ultraviolet radiation causes DNA damages and consequently several lesions might appear. Among them, lip squamous cell carcinoma and actinic cheilitis which is considered to be a condition that precedes squamous cell carcinomas. The TP53 mutation is a well-known effect of UV radiation, leading to the synthesis of an anomalous protein. The p53 production is only recruit in stress conditions like: ionizing radiation, hypoxia or oncogene activation, where it plays a role in cell cycle regulation and apoptosis activation. Apoptosis is also a fundamental mechanism associated to carcinogenesis. Bcl2 e Fas pathways are central in the regulation of this process. It is usual to classify the epithelial dysplasia degree in actinic cheilitis as a prognosticator. This type of classification suggests a one way path towards malignization. Our results have shown that there is no statistical difference in TP53 status and p53 expression among the different degrees of actinic cheilitis epithelial dysplasia and squamous cell carcinoma. Based on the findings, there is no prove that the malignant transformation occurs as the epithelial dysplasia progresses. Therefore, should be considered that any degree has the same probability to become a lip squamous cell carcinoma
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Estudo da mutação do gene TP53 e análise da expressão imuno-histoquímica de p53, Bcl2 e Fas em queilite actínica e carcinoma epidermoide de lábio / Study of TP53 gene mutation and immunohistochemical analysis of p53, Bcl2 e Fas expression in actinic cheilitis and lip squamous cell carcinoma

Alexandra Fontes da Costa 28 January 2011 (has links)
A radiação ultravioleta ao atingir os seres humanos em grande quantidade e durante uma longa exposição pode provocar danos específicos ao DNA, sendo causa de várias lesões como o carcinoma epidermoide de lábio e a queilite actínica, que é considerada uma lesão precedente ao aparecimento da primeira. Entre os danos causados pela radiação UV está a alteração genética do TP53, provocando anomalias na proteína por ele codificada. A produção da proteína p53 somente é recrutada em situações de estresse como: radiação ionizante, hipoxia ou ativação de oncogenes, nas quais sua função é regular o ciclo celular e ativar vias de apoptose. Contudo, sabe-se que no processo de carcinogênese não somente as alterações não reparadas do DNA são responsáveis pelo aparecimento de uma lesão. Outro fator de extrema importância nesse processo são os mecanismos de apoptose, entre os quais estão as vias do Bcl2 e do Fas. A queilite actínica normalmente é classificada segundo seus graus de displasia, o que para alguns sugeriria os passos percorridos por essa lesão até o carcinoma epidermoide de lábio já que esta lesão possui um potencial de malignização. Os resultados deste trabalho demonstraram que não há diferença estatística na expressão gênica e imuno-histoquímica de p53 entre os diversos graus de displasia. Demonstraram ainda que as vias de apoptose de Bcl2 e Fas estavam ocorrendo normalmente. Sugere-se então que não há comprovação de que ocorra uma progressão para a malignização passando por todos os graus de displasia da queilite actínica tendo, todos a mesma possibilidade de se transformarem em um carcinoma epidermoide de lábio. / The long exposition of the human tissues to the ultraviolet radiation causes DNA damages and consequently several lesions might appear. Among them, lip squamous cell carcinoma and actinic cheilitis which is considered to be a condition that precedes squamous cell carcinomas. The TP53 mutation is a well-known effect of UV radiation, leading to the synthesis of an anomalous protein. The p53 production is only recruit in stress conditions like: ionizing radiation, hypoxia or oncogene activation, where it plays a role in cell cycle regulation and apoptosis activation. Apoptosis is also a fundamental mechanism associated to carcinogenesis. Bcl2 e Fas pathways are central in the regulation of this process. It is usual to classify the epithelial dysplasia degree in actinic cheilitis as a prognosticator. This type of classification suggests a one way path towards malignization. Our results have shown that there is no statistical difference in TP53 status and p53 expression among the different degrees of actinic cheilitis epithelial dysplasia and squamous cell carcinoma. Based on the findings, there is no prove that the malignant transformation occurs as the epithelial dysplasia progresses. Therefore, should be considered that any degree has the same probability to become a lip squamous cell carcinoma
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Expressão imuno-histoquímica das proteínas ki-67, MCM3 e p27 em leucoplasias e carcinoma epidermóide de boca / Imunohistochemical expression of ki-67 protein, MCM3 and p27 in leukoplakia and squamous cell carcinoma of the mouth

Aladim Gomes Lameira 14 October 2013 (has links)
O propósito deste estudo foi identificar o padrão de expressão de Ki-67, MCM3 e p27 em mucosa normal (MN), em leucoplasias de orais ( leves, moderadas e intensas ) e em carcinomas epidermoides de boca (CEB), com objetivo de sugerir a participação dessas proteínas na aquisição do fenótipo malígno. Os espécimes foram removidos de 37 pacientes com leucoplasias bucais (13 com displasias leves- DL, 12 com displasias moderadas-DM e 12 com displasias intensas-DI). Onze amostras de mucosa normal de soalho bucal (MN) e 50 amostras de CEB de soalho e língua de pacientes não tratados foram incluídas neste estudo. As amostras foram imunomarcadas com anticorpos contra, Ki-67, MCM3 e p27. O teste Kruskal Wallis e o teste de Dunns foram usados para determinar a diferença dos grupos entre si. Para avaliar a correlação das proteínas entre si foi utilizado o teste de correlação de Pearson. Ki-67 mostrou índices de marcação estatisticamente maior em casos de CEB quando comparados com o grupo que continha MN (p<0.001) e DL (p<0.01) e índices de marcação estatisticamente menor na MN quando comparada com os grupos que continham DM e DI (p<0.05). A proteína p27 mostrou índice de expressão estatisticamente menor quando as amostras com CEB foram comparadas com os grupos que continham a MN, DL; DM e DI (p<0.001). A proteína MCM3 mostrou índices de marcação estatisticamente menor no grupo que continha a MN quando se correlacionou com o que apresentava DI e CEB (p<0.001) e o grupo com DL mostrou índices estatisticamente menores quando foi correlacionado tanto com o grupo de DI (p0.01) quanto com o que continha as amostras de CEB (p<0.001). Outros resultados dignos de nota foram a significante correlação entre as proteínas MCM3 e p27 ( r=0.31 e p< 0.03 ), Ki-67 e p27 ( r=0.31 e p< 0,03281 ) e MCM3 e ki- 67 ( r=0,69 p< 0,01 ) em CEB e MCM3 e p27 ( r=0.58 e p< 0.05 ) em displasia moderadas.Também observamos correlação estatísticamente significante nas amostras que continham mucosa normal entre as proteínas KI-67 e p27 ( r=0.83 e p<0.01 ), MCM3 e p27 ( r=0.62 e p<0.04 ) e MCM3 e KI67 ( r=0.65 e p<0.03 ). È importante resaltar a forte correlação entre a proteína KI-67 e MCM3 quando a proporção de imunomaracão é observada em todas as lesões em conjunto ( r=0.76 e p< 0.0001 ). Em conclusão, MCM3 apresenta-se como um melhor marcador de proliferação do que a proteína Ki-67 para avaliar lesões displásicas bucais, que a relação entre MCM3 e p27 em displasia moderada e Ki-67 e MCM3 em displasias intensas podem ser úteis para identificar a relação proliferação e diferenciação celular. / The aim of this study was to identify the expression of MCM3, Ki-67 and p27 in normal mucosa (MN) in leukoplakia and Oral Squamous Cell Carcinoma Epidemiology (OSCCE), and to determine whether altered expression could serve as a prognostic marker of a malignant progression of dysplasia lesions. The samples were collected from 37 patients with oral leukoplakia (13 with mild dysplasia - MLD, 12 with moderate dysplasia - MD and 12 with severe dysplasia - SD). Eleven samples of mouth floor mucocele (M) and 50 floor and tongue samples OSCCE of untreated patients were included in this study. Immunohistochemical MCM3, Ki-67 and p27 expression of all the groups was analyzed. Kruskal Wallis and Dunns test were used to determine differences among groups, and a Pearson correlation test was used to evaluate the correlation between the proteins. Ki-67 expression was higher in OSCCE than M (p0.001) and MLD (p0.01) groups, and there was a lower expression in MN compared with MD and ID (p0.05). Ki-67 expression did not show significant difference between MD, SD and OSCCE. Regarding p27, its expression was lower in OSCCE compared with M, MD and SD (p<0,001). MCM3 expression was lower in M compared with SD and OSCCE (p0.001) and MLD showed a lower expression when compared SD (p0.01) and OSCCE (p0.001). The present study showed that MCM3 could be a better marker than Ki67 for evaluation dysplastic oral lesions.
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Detecção dos herpesvirus humanos na mucosa oral de pacientes irradiados para tratamento de carcinoma epidermoide em região de cabeça e pescoço / Detection of human herpesvirus in oral mucosa of patients undergoing radiotherapic treatment for head and neck squamous cell carcinoma

Michelle Palmieri 08 April 2016 (has links)
A radioterapia para tratamento das neoplasias malignas em região de cabeça e pescoço é acompanhada de diversas complicações, decorrentes do comprometimento dos tecidos radiossensíveis localizados próximos ao tumor. Entre essas complicações a mucosite é a que merece maior destaque. A mucosite é uma reação tóxica inflamatória da mucosa oral causada pelo tratamento citorredutivo induzido pela radioterapia (RT) ou pela quimioterapia (QT). Ela manifesta-se com sinais de edema, eritema, úlcera e formação pseudomembrana, resultando em sintomas de ardência, que pode progredir para dor intensa e consequente prejuízo na alimentação e comunicação verbal. Infecções bacterianas, fúngicas ou virais podem acometer a mucosa bucal irradiada e exacerbar a manifestação da mucosite oral por meio da ativação de fatores de transcrição da resposta inflamatória. Existem poucos dados na literatura sobre a participação dos herpesvirus humanos na mucosite oral induzida pela radioterapia. A proposta desse trabalho foi avaliar a excreção oral dos herpesvirus humanos (HSV-1, HSV-2, EBV, CMV, VZV, HHV6, HHV7 e HHV8) e sua possível associação com o desenvolvimento e agravamento da mucosite oral, em pacientes diagnosticados com carcinoma epidermoide (CEC) de boca e orofaringe, submetidos à radioterapia associado à quimioterapia. Nesse estudo foram analisadas 158 amostras de lavado bucal, de 20 pacientes, submetidos à radioterapia para CEC em região de cabeça e pescoço, coletadas semanalmente, durante todo o tratamento. Foi realizada a extração do DNA dessas amostras e em seguida sua amplificação através da PCR utilizando dois conjuntos de primers: HSVP1/P2 para os subtipos HSV-1, HSV-2, EBV, CMV e HHV-8 e o VZVP1/P2 para os subtipos VZV, HHV-6 e HHV-7. As amostras positivas foram submetidas à digestão enzimática com enzimas de restrição BamHI e BstUI para determinação específica de cada um dos oito herpesvirus. Foi também avaliada clinicamente, a mucosite oral, em cada uma das coletas, seguindo os critérios da OMS e NCIC. As análises da amostra mostraram a excreção do EBV, HHV-6 e HHV-7, em todas as semanas de tratamento radioterápico, enquanto que a excreção do HSV1 não pode ser observada no momento da triagem. Considerando-se todos os períodos em conjunto (Triagem, semanas de radioterapia e Controle), a maior frequência foi de pacientes que excretaram EBV (55,0%), seguida daqueles que excretaram HHV-7 (20,5%). A frequência de excreção de EBV foi significativamente maior do que a dos demais vírus (Teste ?2, p<0.001 para todos os cruzamentos). A frequência de excreção de HHV-7 foi significativamente maior do que a de HSV-1 (5,9%) e HHV-6 (5,5%) (Teste ?2, p=0.001 para ambos os cruzamentos). Não houve diferenças estatísticas significantes entre as frequências de HSV-1 e HHV-6. Como conclusão, verificou-se uma correlação positiva entre a excreção oral do EBV e a presença de mucosite induzida pela associação de radioterapia e quimioterapia com graus >=2, sobretudo se considerarmos as três últimas semanas de radioterapia, período este em que a severidade da mucosite foi estatisticamente maior. Esses achados nos possibilitam inferir que o ambiente inflamatório local de mucosites com grau >=2 seja mais favorável para excreção oral do EBV. / The radiotherapy (RT) treatment for head and neck tumors is accompanied by various complications resulting from the damage of the radiosensitive tissues located close to the tumor. Among these complications, mucositis is the one that deserves a special attention. Mucositis is an inflammatory toxic reaction of the oral mucosa caused by cytoreductive treatment induced by radiotherapy (RT) or chemotherapy (QT). The clinical manifestations of mucositis are: edema, erythema, ulcers and pseudo membrane formation, resulting in symptoms of burning, which may progress to severe pain and consequent loss in deglutition and verbal communication. The development of bacterial, fungal or viral infections, may affect the oral mucosa that has been irradiated, exacerbating the manifestation of oral mucositis through the activation of transcription factors of the inflammatory response. There are few data in the literature on the participation of human herpesvirus in oral mucositis caused by radiotherapy treatment. The aim of this study is to evaluate the oral excretion of human herpesvirus (HSV-1, HSV-2, EBV, CMV, VZV, HHV6, HHV7 and HHV-8) and its possible association with the development and aggravation of oral mucositis, in patients diagnosed with squamous cell carcinoma (CEC) of oral cavity and oropharynx, undergoing radiotherapy treatment associated with chemotherapy. On our study, we analyzed 158 oral rinsing samples, collected weekly, from 20 patients during the whole radiotherapy treatment for squamous cell carcinoma in head and neck. From these samples, we extracted the DNA and afterwards we amplified them with PCR using two sets of primers: HSVP1/P2 for the subtypes HSV-1, HSV-2, EBV, CMV, and HHV-8 and VZVP1/P2 for the subtypes VZV, HHV 6, and HHV-7. The positive samples were subjected to enzymatic digestion with BamHI and BstUI restriction enzymes for specific determination of each one, of the eight\'s herpesvirus. It has also been clinically evaluated in each time, the oral mucositis, following the WHO and NCIC criteria. The analysis of the sample showed the excretion of EBV, HHV-6 and HHV-7, in all the weeks of radiotherapy, whereas the excretion of HSV-1 could not be observed during screening. Considering all periods together (Screening, weeks of radiotherapy and Follow up), the highest frequency was of patients with EBV excretion (55.0%), followed by those with HHV-7 excretion (20.5%). EBV shedding frequency was significantly higher than the other viruses (?2 test, p <0.001 for all junctions). The frequency of HHV-7 excretion was significantly higher than the HSV-1 excretion (5.9%), and HHV-6 excretion (5.5%) (?2 Test, p = 0.001 for both junctions). There were no statistically significant differences between the frequencies of HSV-1 and HHV- 6. In conclusion, there was a positive correlation between oral EBV excretion and the presence of grade >=2 of mucositis caused by radiotherapy associated with chemotherapy, particularly if we consider the last three weeks of radiotherapy, a period in which the severity of mucositis was statistically higher. These findings allow us to infer that the local inflammatory environment of mucositis grade >=2, is more favorable for oral excretion of EBV.
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Análise da expressão da proteína Akt em cultura de células de carcinomas epidermóides de cabeça e pescoço tratadas com curcumina / Analysis of pAkt protein expression in squamous carcinoma cell culture of head and neck treated with curcumin

Síntique Nunes Schulz Moraes 18 March 2016 (has links)
Diversas alterações genéticas estão associadas à patogênese do carcinoma epidermoide (CE), neoplasia maligna mais comum de cabeça e pescoço. Algumas dessas alterações comprometem proteínas pertencentes à via de sinalização do Akt, envolvida em diferentes fenômenos celulares. Este trabalho teve como objetivo estudar a expressão da proteína pAkt em linhagens celulares de carcinomas epidermoides de cabeça e pescoço, de forma a verificar possíveis alterações na transcrição dessa molécula em células de CE tratadas com Curcumina. Foram utilizadas duas linhagens celulares de CE de cabeça e pescoço (FaDu e SCC9) e uma linhagem de queratinócitos normais (HaCat) divididas em dois grupos: a. Grupo controle não tratado; b. Células tratadas com Curcumina. A proliferação celular foi monitorada através do teste de viabilidade celular e a análise da expressão de proteína foi realizada através da técnica do Western Blotting que revelou supressão do pAkt na linhagem celular SCC9 nos tempos de 24 e 48 horas. Desta forma, conclui-se que a Curcumina na via do Akt em carcinomas epidermoides de cabeça e pescoço tem importante ação supressora do gene pAkt. / Several genetic alterations are associated with the pathogenesis of squamous cell carcinoma (SCC), the most common malignant neoplasm of the head and neck. Some of these changes compromise the proteins belonging to the Akt signaling pathway, involved in various cellular phenomena. The objective of this study to explores the expression of the pAkt protein in cell lines of the squamous cell carcinomas of the head and neck to verify possible changes in the transcription of this molecule in EC cells treated with curcumin. The study used two cell lines of EC head and neck (FaDu and SCC9) and a normal line of keratinocytes (HaCat), split into two groups: A. the controlled group, untreated; B. Cells treated with curcumin. The cell proliferation it was observed by cell viability test and analysis of protein expression performed through Western blotting technique revealed suppression of pAkt in SCC9 cell line at 24 and 48 hours. Thus, it is concluded that the Curcumin on the path of Akt in squamous cell carcinoma of the head and neck has a significant suppressive effect of gene Akt.

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