A tripanossomíase sul-americana, também conhecida como Doença de Chagas é uma enfermidade endêmica da América Latina.A doença é causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, cuja transmissão em seres humanos e outros mamíferos ocorrem, principalmente, através das fezes do inseto \"barbeiro\" (triatoma infestans) infectado.Desde a descoberta já foram realizadas inúmeras tentativas de tratamento sem obter quimioterapia eficaz. Hoje o tratamento é realizado pelo uso do fármaco nitroheterocíclico benznidazol. Porém esse composto só é utilizado na fase aguda da doença e tem sua eficácia variada de acordo com a área geográfica, provavelmente como consequência de variação de cepas do parasita e apresenta graves efeitos colaterais. Uma ferramenta interessante em Química Medicinal é o uso do bioisosterismo para a síntese de moléculas análogas, que por possuírem propriedades biológicas relacionáveis geralmente atuam no mesmo alvo farmacológico como agonistas ou antagonistas. Por outro lado, as reações relacionadas às condensações de cicloadição 1,3 dipolar catalisadas por Cu(I), envolvendo estratégias de \"click chemistry\" tem como pontos positivos o fato de geralmente não formarem subprodutos, serem de fácil execução e apresentarem rendimentos elevados. Partindo de dois compostos comerciais (benzilamina e cloreto de cloro acetila) efetuou-se a síntese de uma biblioteca de vinte e três compostos análogos ao benznidazol através de uma rota sintética curta e de fácil execução. Foram realizados ensaios de atividade tripanocida envolvendo a cepa Tulahuen de T.cruzi, bem como ensaios de citotoxicidade. / The South American trypanosomiasis, also known as Chagas\' disease is an endemic disease in Latin America. The disease is caused by the protozoan Trypanosoma cruzi, whose transmission in humans and other mammals occur primarily through the faeces of the insect \"barbeiro\" (triatoma infestans) infection. Since the discovery already been carried out many attempts to obtain effective chemotherapy treatment. Today\'s treatment is accomplished through the use of the drug nitro-heterocyclic benznidazole. However this compound is only used in the acute phase of the disease and its effectiveness is varied in accordance with the geographical area, probably as a consequence of the variation of strains of the parasite and presents serious side effects. An interesting tool in medicinal chemistry is the use of bioisosterism for the synthesis of analogous molecules, which possess biological properties relatable generally act on the same target as pharmacological agonists or antagonists. Moreover, the reactions related to condensations of 1.3 dipolar cycloaddition catalyzed by Cu(I), involving strategies \"click chemistry\" has the strengths of the fact usually do not form byproducts, being easy to perform and present high yields. Starting from two commercial compounds benzylamine and chloro acetyl chloride) we performed the synthesis of a library of twenty-three analog compounds to benznidazole via a synthetic route short and easy to perform. Tests of trypanocidal activity involving Tulahuen strain of T. cruzi, and cytotoxicity assays.

A doença de Chagas, causada pelo Trypanosoma cruzi, é uma doença tropical que aflige milhões de pessoas, gerando consequências sócio-econômicas devastadoras. Ela tem sido considerada uma doença tropical super-negligenciada, já que os únicos fármacos disponíveis para o seu tratamento apresentam baixa eficácia e causam vários efeitos colaterais. Além disso, os mesmos foram introduzidos há mais de três décadas. Com esse cenário, é evidente a necessidade da descoberta, desenvolvimento e introdução de novos fármacos para o tratamento eficiente e seguro da doença de Chagas. A enzima gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH) é um alvo biomacromolecular atraente para a descoberta de novos fármacos contra os tripanossomatídeos, em virtude das enzimas da via glicolítica exercerem um papel fundamental no fornecimento de energia para a sobrevivência do parasito. Essa enzima foi selecionada neste trabalho de tese para a realização de estudos em química medicinal com base em quiminformática com o objetivo de identificar potenciais inibidores enzimáticos e do T. cruzi. Na primeira etapa desta tese, o ensaio virtual baseado na estrutura do alvo (SBVS) foi usado na identificação e seleção dos compostos. Como resultado do planejamento in silico, vinte compostos foram selecionados e avaliados experimentalmente na segunda etapa do trabalho empregando a técnica de calorimetria de titulação isotérmica (ITC). Destes, onze inibiram a GAPDH de T. cruzi resultando numa elevada taxa de acerto (>= 20%). Os novos inibidores apresentam excelente eficiência do ligante (LE), bem como mostram ligeira seletividade pela enzima do parasito. O ensaio dos inibidores contra a forma tripomastigota do T. cruzi identificou dois compostos capazes de inibir essa forma infectiva e um deles também mostrou ser um potente inibidor da forma amastigota do parasito, além de apresentar baixa toxidez. As duas melhores classes de inibidores da GAPDH e do parasito foram selecionadas para o estabelecimento de relações quantitativas entre a estrutura química e a atividade biológica (QSAR). Estudos de QSAR 2D (HQSAR) forneceram modelos com elevada capacidade preditiva e proporcionaram a identificação de características estruturais importantes para a otimização dos ligantes a compostos-matrizes. / Chagas disease, caused by Trypanosoma cruzi, is a tropical disease, which afflicts millions of people, thus generating devastating socio-economic consequences. It has been pointed out that it is a super-neglected tropical disease, based on available drugs with low efficacy and that give rise to many side effects. In addition, these drugs were introduced three decades ago. With this scenario, it is clear the necessity of the discovery, development and introduction of new efficient drugs to treat Chagas disease. The enzyme glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase is a promising target for the development of new drugs against trypanosomatides, since the enzymes of the glycolytic pathway display a fundamental role in the energy supply to parasite survival. In this thesis, this enzyme was selected for medicinal chemistry within the cheminformatics framework aiming at the identification of potential enzymatic and parasite inhibitors. In the first part, structure-based virtual screening (SBVS) methods were employed in the selection and identification of compounds. Based on the in silico design, twenty compounds were selected and experimentally evaluated in the second part using the isothermal titration calorimetry (ITC) technique. Out of these, eleven compounds inhibited the T. cruzi GAPDH, resulting in high hit rates (>= 20 %). The new selected inhibitors display excellent ligand efficiency (LE), as well as some selectivity for the parasite enzyme. The inhibitors assay against the trypomastigote form of T. cruzi was used to identify two compounds able to inhibit this infective form, and one showed to be a strong amastigote parasite inhibitor, also disclosing low cytotoxicity profile. The best two classes of GAPDH and parasite inhibitors were selected for the establishment of a quantitative structure-activity relationship (QSAR). 2D QSAR (HQSAR) studies resulted in linear models with high predictive power, amenable for the identification of important structural features in the process of hit-to-lead optimization.

A presente investigação constitui um estudo de caso sobre a tripanossomíase americana, conhecida como doença de Chagas, em seus aspectos epistemológicos e sociais, articulados através da análise de diferentes valores envolvidos nas pesquisas sobre essa enfermidade. Na elaboração de uma biografia procuramos enfatizar dois aspectos dessa patologia. Por um lado, que a tripanossomíase americana pode ser interpretada como um agente histórico, na medida em que a identidade dessa entidade nosológica não pode ser dissociada de sua caracterização científica e social, tampouco reduzida a apenas uma dessas dimensões. Por outro lado, colocar a doença como protagonista dessa história nos permite evidenciar de que modo o predomínio da narrativa das instituições médicas e científicas legitimou a invisibilização da perspectiva das pessoas afetadas por essa patologia. A primeira parte da tese está centrada sobre a faceta científica e médica da doença, a qual permitiu que a nova patologia humana fosse estabelecida como um fato. Com relação aos aspectos sociais da doença, estes são focalizados na segunda parte da tese, onde examinamos as ideias envolvidas nas representações dos trópicos e das populações rurais como sinônimos de atraso. / The present investigation is a case study of American trypanosomiasis, known as Chagas disease, in its epistemological and social aspects, articulated through an analysis of the different values involved in research on this disease. In the elaboration of a biography, we aim to emphasize two aspects of this pathology. On the one hand, American trypanosomiasis can be interpreted as a historical agent, to the extent that the identity of this nosological entity cannot be dissociated from its scientific and social characterization, nor can it be reduced to just one of these dimensions. On the other hand, to put the disease as the protagonist of this history allows us to show the ways in which the predominance of medical and scientific institutions narrative has legitimated the invisibility of the perspectives of the ones affected by this pathology. The first part of this thesis is centered on the scientific and medical facet of the disease, which allowed the new human pathology to be established as a fact. The social aspects of the disease will be focalized in the second part of the thesis, where we examine the ideas involved in representations of the tropics and of rural populations as synonyms of backwardness.

A cardiomiopatia chagásica crônica é a consequência mais grave da Doença de Chagas, quadro infeccioso humano causado pelo protozoário Trypanosoma cruzi. Uma vez que os cardiomiocitos podem ser invadidos pelo T. cruzi, é nosso interesse averiguar se esta população estrutural reconhece o parasita in vivo através dos TLRs (Toll Like receptors). Visto que a maioria dos TLRs sinaliza através da molécula adaptadora MyD88, no presente trabalho temos estudado a participação deste elemento transdutor. Para isto fomos examinar a infecção pelo T. cruzi em camundongos F2 (Mer / MyD88flox+/+), modelo animal no qual o tratamento com a droga Tamoxifeno deve eliminar a molécula MyD88 exclusivamente nos cardiomiócitos. Resultados: em um estudo prévio, constatamos que cardiomiócitos tumorais murinos HL-1, em repouso ou após infecção pelo T. cruzi, transcrevem a molécula MyD88. A seguir, validamos o modelo experimental in vivo, ao mostrar que o tratamento com tamoxifeno dos animais F2 resulta na diminuição de MyD88 no coração, mas não no baço. Ainda, constatamos que a transcrição de MyD88 é mais intensa na aurícula do que no ventrículo, sendo igualmente abolida dos animais F2 pelo tratamento com tamoxifeno. Por outro lado, verificamos que o tamoxifeno determina um aumento da parasitemia em ambos os animais F2 e controle (MerCreMer+/+), não se observando diferenças significativamente entre estes. Finalmente, estudos preliminares mostraram que a eliminação de MyD88 nos cardiomiócitos dos animais F2 não altera significativamente o quadro de patologia (parasitismo e infiltração leucocitária) aos 10 ou 28 dias de infecção pelo T. cruzi, quando comparado ao de animais controle (MerCreMer+/+) igualmente tratados com tamoxifeno e infectados. / Chronic Chagas cardiomyopathy is the most serious consequence of Chagas Disease, caused by Trypanosoma cruzi. Cardiomyocytes are invaded by T. cruzi, it is our interest to see if this structural population in vivo recognizes the parasite through TLRs. Since most TLRs signal through MyD88, we studied in vivo participation of Myd88 in cardiomyocyte response. Treatment with tamoxifen (Tam) eliminate the MyD88 molecule exclusively from cardiomyocytes in F2 mice, which we used to understand its role on T. cruzi infection. Results: HL-1 cells, a murine cardiomyocyte tumor line, in infection with T. cruzi, transcribe the MyD88 molecule. Transcription of MyD88 is more intense in the atria than in ventricle. Tam treatment of F2 mice eliminates the MyD88 at the heart completely, but not at spleen. Tam caused increased parasitaemia, no differences were observed in the parasitaemia curve of infected F2 and MerCreMer+/+ (control) mice. Finally, MyD88 elimination in cardiomyocytes of F2 mice does not alters the pathology frame at days 10 and 28 post infection.

Triatoma sordida é considerada de importância secundária no ciclo da Doença de Chagas humana, uma vez que vem ocupando o lugar de Triatoma infestans no peri-domicílio das casas. Triatoma costalimai é considerada uma espécie silvestre e endêmica do cerrado brasileiro. Recentemente tem ocorrido um aumento do número de invasões domiciliares por T. sordida e T. costalimai, devido ao impacto causado pelo homem no meio ambiente. Ambas as espécies já foram encontradas naturalmente infectadas por Trypanosoma cruzi e, portanto, contribuem para o ciclo antropozoótico da doença. O presente trabalho teve como objetivo verificar a variabilidade genética e morfológica dessas duas espécies, por morfometria geométrica alar e da cabeça e marcadores moleculares mitocondriais sendo T. sordida coletado nos estados de Mato Grosso do Sul (5 populações), Goiás (4 populações) e Minas Gerais (3 populações); e T. costalimai coletados nos estados da Bahia (1 população), Goiás (2 populações) e Minas Gerais (1 população). A hipótese Os resultados mostram que as populações de T. sordida encontram-se altamente estruturadas geneticamente, e que a morfologia alar apresenta uma heterogeneidade, o que permite concluir que mesmo estruturadas geneticamente, não há um processo de especiação ocorrendo para essa espécie. As populações de T. costalimai apresentam alta variabilidade morfológica do conexivo, embora as asas e cabeças apresentam certa similaridade entre as populações estudadas. Os marcadores genéticos indicam distinção entre espécimes que apresentam uma linha laranja continua no conexivo daqueles que apresentam manchas laranjas triangulares. As diferenças encontras sugerem que T. costalimai compreende duas subespécies, com diferenças morfológicas e cromáticas. / Triatoma sordida is considered of secondary importance in the cycle of Human Chagas Disease, since it has occupied the place of Triatoma infestans in the peri-domicile of the houses. Triatoma costalimai is a wild and endemic species of Brazilian cerrado. Recently there has been an increase in the number of home invasions by these species, due to the impact caused by man in the environment. Both species have already been found naturally infected by Trypanosoma cruzi and, therefore, contribute to the antropozootic cycle of the disease. The present work had as objective to verify the genetic and morphological variability of these two species, through the geometric morphometry of the head and mitochondrial molecular markers. The results show that the populations of T. sordida are highly structured genetically, and that the wing morphology shows heterogeneity in the wing shape, which allows to conclude that even if genetically structured, there is no speciation process occurring for this species. The populations of T. costalimai have high morphological variability of the connexivum, although the wings and heads present some similarity between the populations studied. Genetic markers indicate a distinction between specimens with a continuous orange line in the connexivum of those with triangular orange spots. The differences found suggest that T. costalimai comprises two subspecies, with morphological and chromatic differences.

A doença de Chagas compromete o cólon em torno de 10% dos pacientes soro positivos, levando ao megacólon adquirido. O tratamento é cirúrgico, sendo a operação de Duhamel-Haddad a mais utilizada no Estado de Goiás, cuja execução pode levar a alterações do plexo nervoso vesical durante a dissecção do espaço retro-retal, ou ainda, a retirada do segmento colônico dilatado, levar a possíveis modificações da função miccional. O objetivo deste estudo foi avaliar através da urodinâmica se ocorrem alterações funcionais da bexiga no pós-operatório da cirurgia de Duhamel- Haddad, tendo como controle o próprio paciente, avaliado no pré-operatório. Foram estudados prospectivamente 16 pacientes (7 homens e 9 mulheres) no período de 2001 a 2002, cuja idade variou entre 30 e 71 anos. Para a realização deste exame, utilizou-se o aparelho Urosystem DS-5600 com cateter uretral de duas vias - 7 French e sonda retal com balão. A perfusão foi realizada com água destilada à temperatura ambiente e velocidade de 50 ml/min. Os parâmetros observados foram a fluxometria livre, cistometria e estudo miccional, utilizando-se os testes t-student e a regra de sinais de Descartes para a análise estatística. Os resultados deste estudo foram divididos em três grupos: 1- masculino e feminino; 2- feminino; 3- masculino. No primeiro grupo observou-se diminuição na pressão detrusora máxima. No segundo grupo, diminuição da pressão detrusora no fluxo máximo. No terceiro grupo, evidenciou-se aumento do fluxo urinário máximo e médio, diminuição do tempo de micção e pressão de abertura vesical (P < 0,05) / Acquired megacolon caused by Chagas disease is found in around 10% of chronic infected patients. Chagasic megacolon evolves with constipation and the advocated treatment is surgical. Duhamel-Haddad procedure has been one of the most used techniques in many centers. The necessity of rectal dissection and excision of the rectossigmoid dilated part may cause urinary malfunction. This study addressed urodynamic outcomes in patients submitted to surgical treatment of chagasic megacolon by the Duhamel-Haddad procedure. Sixteen patients (9 females), aged between 30 to 71 years old, were evaluated by urodynamic study in the pre and post operative period. Uroflowmetry, cystometry and pressure flow studies were analyzed. Statistical analysis was carried out applying the Student t-test. Each patient was considered his own control. There was an overall decrease of the maximum detrusor pressure. A decrease of the maximum urinary flow was found in the female group while in the male group an increase of the maximum urinary flow and a decrease of urinary flow time and opening pressure were observed (P < 0.05)

Orientador: Márcia Miguel Castro Ferreira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-18T23:41:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barbosa_EuzebioGuimaraes_D.pdf: 4420345 bytes, checksum: e9da09f02df7f4d6c0756041fc40eb36 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: LQTA-QSAR é uma metodologia computacional para QSAR-4D desenvolvida pelo Laboratório de Quimiometria Teórica e Aplicada implementada em um software de acesso livre. O método permite considerar simultaneamente as vantagens da representação molecular multiconformacional e os descritores de campos de interação. Esta tese apresenta a evolução da proposta inicial da metodologia LQTA-QSAR independente de receptores para uma abordagem dependente de receptores. Sua aplicação é demonstrada na construção de modelos de QSAR-4D para a previsão da atividade inibitória de compostos fenotiazínicos da enzima tripanotiona redutase. Foi obtido um modelo com bom poder de previsão (Qprev = 0,78) e com descritores de fácil interpretação. Tal modelo pode ser usado para a proposição de compostos que poderão vir a ser usados para o tratamento da doença de chagas. Para a filtragem e seleção de descritores foi necessário o desenvolvimento de um protocolo completamente distinto daquele disponível na literatura. Foi proposto um procedimento automatizado para identificar e eliminar descritores irrelevantes quando a correlação e um algoritmo que elimina descritores com distribuição díspar em relação à atividade biológica. Foram introduzidos também testes de validação de modelos QSAR nunca antes usados para modelos que utilizam descritores de campo de interação. O protocolo completo foi testado em três conjuntos de dados e os modelos obtidos tiveram capacidade de previsão superior aos da literatura. Os modelos mostraram ser bastante simples e robustos quando submetidos aos testes leave-N-out e y-randomization / Abstract: The New Receptor-Dependent LQTA-QSAR approach is proposed as a new 4D-QSAR method. The RD-LQTA-QSAR is an evolution to the receptor independent LQTA-QSAR. This approach make use of the simulation package GROMACS to carry out molecular dynamics simulations and generate a conformational ensemble profile for each compound. Such ensemble is used to build molecular interaction field based QSAR models, as in CoMFA. To verify the usefulness of the methodology it was chosen some phenothiazine derivatives that are specific competitive T. cruzi trypanothione reductase inhibitors. Using a combination of molecular docking and molecular dynamics simulations the binding mode of 38 phenotiazine derivatives was evaluated in a simulated induced fit approach. The ligands¿ alignment, necessary to the methodology, was performed using both ligand and binding site atoms hereafter enabling unbiased alignment. The obtained models were extensively validated by Leave-N-out cross-validation and y-randomization techniques to test robustness and absence of chance correlation. The final model presented Q LOO of 0.87 and R of 0.92 and suitable external prediction = 0.78. It is possible to use the obtained adapted binding site of to perform virtual screening and ligand structures based design, as well as using models descriptors to design new inhibitors. In the process of QSAR modeling, the relevance of correlation and distribution profiles were tested in order to improve prediction power. A set of tools to filter descriptors prior to variable selection and a protocol for molecular interaction field descriptors selection and models validation are proposed. The algorithms and protocols presents are quite simple to apply and enable a different and powerful way to build LQTA-QSAR models / Doutorado / Físico-Química / Doutor em Ciências

Orientadores: Sandra Cecília Botelho Costa, Eros Antonio de Almeida / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-18T22:05:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Aguiar_Camilade_M.pdf: 837829 bytes, checksum: 57896de2ff8b7f0604c8ed0b22187d76 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A doença de Chagas afeta aproximadamente 9 milhões de pessoas em todo mundo, sendo a maioria dessa população constituída de indivíduos cronicamente infectados, o que a caracteriza como um importante problema de saúde pública. O seu agente etiológico é o protozoário Trypanosoma cruzi, transmitido, principalmente, por meio de insetos vetores triatomíneos. Outras formas de transmissão podem ocorrer via transfusão sanguínea, congênita, oral ou acidental. Durante a fase aguda da doença, o diagnóstico laboratorial é baseado na observação direta do parasito, através de exames microscópicos de amostras de sangue de indivíduos infectados. Na fase crônica, devido à parasitemia intermitente e ao aumento de anticorpos anti-T. cruzi, são utilizados métodos sorológicos convencionais (IFI e ELISA) para o diagnóstico. Como métodos confirmatórios, podem ser usados testes parasitológicos indiretos (hemocultura e xenodignóstico), porém, ambos apresentam baixa sensibilidade nessa fase. O tratamento etiológico da infecção por Trypanosoma cruzi tem como objetivo a eliminação do parasito, o que pode retardar a evolução clínica da infecção e prevenir lesões futuras características da doença, como o comprometimento do tecido cardíaco ou de órgãos do trato digestivo. Há dois medicamentos principais para a terapêutica da doença de Chagas: o nifurtimox (indisponível no Brasil) e o benzonidazol, ambos com efeitos colaterais importantes. A eficácia do tratamento é maior em pacientes tratados na fase aguda da infecção ou naqueles que se encontram recentemente na fase crônica da doença. O maior problema do tratamento, além da baixa eficácia quando aplicado à fase crônica, é a avaliação do critério de cura. As técnicas parasitológicas disponíveis são pouco sensíveis para detecção do parasito e resultados negativos não indicam, necessariamente, cura. Além disso, os testes sorológicos convencionais geralmente permanecem positivos por um longo período após o tratamento, tornando-os inadequados para a monitoração terapêutica. Atualmente, estudos relatam a eficiência da técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) como uma ferramenta para a monitoração adequada do tratamento etiológico da doença de Chagas. Assim, o presente estudo objetivou avaliar a nested-PCR (N-PCR) como uma alternativa na determinação da eficácia do tratamento etiológico com benzonidazol, comparando-a com os testes sorológicos convencionais e a hemocultura. Para isso, realizou-se um estudo retrospectivo em pacientes que realizaram o tratamento corretamente entre 1980 e 2010, todos com testes sorológicos e/ou parasitológicos positivos para doença de Chagas antes do tratamento. Dos 29 pacientes incluídos no estudo, 14 (48,3%) apresentaram resultados positivos pela N-PCR, 12 (41,4%) apresentaram resultados negativos e 3 (10,3%) inconclusivos. Em relação à hemocultura, todos os pacientes (100%) tiveram resultados negativos. Os testes sorológicos mantiveram-se positivos após o tratamento em 27/29 (93%) dos casos, sendo 7% de resultados inconclusivos. Portanto, pode-se concluir que a avaliação de cura da doença de Chagas apresenta uma grande dificuldade para o controle dessa enfermidade e que a técnica de N-PCR pode contribuir com o estabelecimento de critérios confiáveis para a determinação da eliminação do parasito após tratamento específico, além de constatação precoce de falha terapêutica / Abstract: Chagas disease affects 9 million persons around the world, the major of them chronic infected individuals, characterizing it as an important public health problem. Etiologic agent, named Trypanosoma cruzi, is a protozoan transmitted by triatominae insects. Other routes of transmission are via blood transfusion, congenital, oral or accidental. During the acute phase, laboratorial diagnosis are based on direct visualization of parasites on blood by microscopic tests. In chronic stage, because of the intermittent parasitemia and increased anti-T. cruzi antibodies, conventional serology (IIF and ELISA) is used for diagnosis. Hemoculture and xenodiagnosis could be performed as confirmatory methods, however, both are low of sensitivity in this stage. Etiologic treatment of T. cruzi infection is focused on the elimination of the parasites, which should arrest the evolution of the disease and avert its irreversible long-term consequences such as cardiac and digestive damage. There are two drugs for specific treatment of Chagas disease: nifurtimox (not available in Brazil) and benzonidazole, both of them with considerable adverse effects. Therapeutic efficacy is more significant in the acute and recent chronic phase of infection. Besides the low efficacy of treatment in chronic patients, the major problem is the criteria of cure. Parasitological methods of routine are poor of sensitivity and negative results do not indicate cure, necessarily. In addition, conventional immunological tests remain positive during a long time after treatment and are not indicated to monitor chemotherapy. Recently, authors reported the usefulness of polymerase chain reaction (PCR) as an efficient tool of etiological treatment evaluation in Chagas disease. This work aimed to evaluate nested-PCR (N-PCR) as an alternative to determinate efficacy of etiological treatment with benzonidazole in comparison to serology and hemoculture. It was carried out a retrospective study in treated patients between 1980-2010, all of them with positive serological and/or parasitological tests before treatment. Out of 29 individuals studied, 14 (48,3%) had positive N-PCR, 12 (41,4%) had negative and 3 (10,3%) inconclusive results. All patients (100%) had negative hemoculture and serology was positive in 27/29 (93%) of the cases, with 7% of inconclusive results. We conclude that criteria of cure is a great difficulty of Chagas disease control and N-PCR assay may contribute to determinate parasite clearance as well earlier therapeutic failure / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_debora_pedroso.pdf: 815380 bytes, checksum: db4c202243281a1794848721f2e3153e (MD5) Previous issue date: 2012-03-16 / Chagas Disease was discovered by Carlos Chagas in 1909. It is an hematological and tissue infection caused by flagellate protozoan Trypanosoma cruzi, which is transmitted by an hematophagous insect. In addition to transmission by the vector this parasitic infection can be acquired by humans in other ways, such as blood transfusion, laboratory accidents, organ transplants, oral transmission by penetration of trypomastigotes through oral mucosa or through placenta. Although blood transmission shows a decline after implementation of donor screening this is still present, and therefore needs constant vigilance. In view of this, the study aims to describe from a retrospective analysis a serological profile for Chagas disease in blood donors from the municipality of Santiago located in the northwestern state of Rio Grande do Sul, in which high levels of endemic disease appeared in past decades. The results of serological blood donors from the Blood Bank of municipality of Santiago were analyzed during the period 2001-2011. Of the 10,164 units of blood collected, with an average of 1,016 units per year, 2.68% were reactive to T. cruzi, being the main cause of discarding blood bags. The higher frequency of positive cases occurred in men, with mean age of 38.84 years old, coming from the urban area of the municipality of Santiago. Regarding the positive cases among women, 25% were younger than 31 years old. From these results, an expressive serum reactivity to T. cruziamong donors in this region could be noticed during the study period, more frequently in men over thirty years old. Although serological screening detects the majority of cases positive for Chagas disease, it does not make impossible transmission via transfusion. Therefore it is important to devise epidemiological strategies to determine the main form of infection that is occurring in the region. / A doença de Chagas, descoberta em 1909 por Carlos Chagas, é uma infecção tecidual e hematológica causada pelo protozoário flagelado Trypanosoma cruzi, esse protozoário é transmitido por intermédio do inseto hematófago. Além da transmissão pelo vetor a infecção parasitária pode ser adquirida pelo homem por outras vias, tais como transfusões sanguíneas, acidentes de laboratório, transplantes de órgãos, transmissão oral através da penetração de tripomastigotas pela mucosa oral e por via placentária. Embora a transmissão transfusional mostre um declínio após a implementação da triagem de doadores, esta ainda permanece presente, necessitando, portanto, de constante vigilância. Em vista disso, o presente estudo visa descrever,a partir de uma análise retrospectiva, o perfil sorológico para doença de Chagas em doadores de sangue da cidade de Santiago, localizada na região noroeste do estado do Rio Grande do Sul, na qual a endemia figurava em índices elevados em décadas passadas.Para isso foram analisados os resultados sorológicos de doadores de sangue do Banco de sangue de Santiago durante o período de 2001-2011. Das 10.164 unidades de bolsas de sangue coletadas, com uma média de 1.016 bolsas de sangue por ano, destas 2,68% apresentaram reatividade para T. cruzi, sendo a primeira causa de descarte de bolsas de sangue. A maior frequência de casos positivos ocorreu em homens, com idade média de 38,84 anos, procedentes da zona urbana do município de Santiago. Com relação aos casos positivos do sexo feminino 25% delas tinham idade inferior a 31 anos. A partir destes resultados constatou-se a presença expressiva de soro-reatividade a T. cruzi entre os doadores da região, sendo mais frequente em homens acima de 30 anos. Embora a triagem sorológica detecte a maioria dos casos positivos para doença de Chagas, isso não inviabiliza totalmente a transmissão via transfusional, fazendo-se importante traçar estratégias epidemiológicas para determinar a principal forma de infecção que está ocorrendo na região.

Orientadores: Luiz Augusto Corrêa Passos, Ana Maria Aparecida Guaraldo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-26T12:27:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LabelloBarbosa_Rodrigo_D.pdf: 3872986 bytes, checksum: eed1c71b567c33f273e37132ebefabcc (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Na amazônia brasileira, microepidemias de doença de Chagas aguda (DCA) humana são notificadas por meio de caracterização clínica e epidemiológica após associação ao consumo de polpa in natura de açaí contaminada com Trypanosoma cruzi. Dada a sua relevância econômica, cultural e considerando que a refrigeração e o congelamento não são métodos eficientes à prevenção da DCA de transmissão alimentar, os objetivos desse estudo foram determinar um binômio "temperatura x tempo" mínimo necessário à inativação ou morte do T. cruzi em polpa de açaí e avaliar a possibilidade experimental da transmissão dessa parasitose, proveniente de vetores e reservatório de diferentes localizações do Estado do Pará, por contaminação acidental no alimento. Na primeira etapa, 105 tripomastigotas da cepa Y de T. cruzi foram misturadas à polpa in natura de açaí e submetidas a tratamentos térmicos entre 37ºC e 49ºC em um banho ultratermostático de alta precisão, por até uma hora, sob homogeneização constante. Na segunda etapa, 105 tripomastigotas de T. cruzi (TcI) de diferentes fontes e localizações do Pará, comparando-se à cepa Y de T. cruzi (TcII), foram misturadas, à temperatura ambiente, à polpa in natura de açaí. Em ambas etapas, quando necessário, as misturas contaminadas foram submetidas à tamisação forçada. O inóculo (controle negativo, controle positivo ou grupo teste), de até 200?L, foi administrado via intraperitoneal, gavagem ou oral em hospedeiros isogênicos imunodeficientes C.B-17-Prkdcscid/Pas Unib ou B6.129S7Rag1-/-tmMom/J Unib, sob antibioticoterapia prévia (1,75mg/dia). A parasitemia foi realizada de acordo com o método de Brener e a mortalidade foi registrada. T. cruzi preservou sua virulência em polpa de açaí à 43±0,1ºC durante 20 minutos, causou DCA e morte em até 24 dias após as infecções experimentais, via intraperitoneal. T. cruzi de R. pictipes da Mata do Val-De-Cans, de Belém, apresentou DCA, com início de parasitemia e morte, respectivamente, nos dias 32,0±3,0 e 40,0±3,0. T. cruzi de R. pictipes do Rio Ajuaí, de Abaetetuba, apresentou DCA, com início de parasitemia e morte, respectivamente, nos dias 35,0±1,0 e 49,0±1,0. T. cruzi de P. opossum da Ilha do Combu, de Belém, apresentou DCA, com início de parasitemia e morte, respectivamente, nos dias 45,0±2,0 e 51,0±1,0, via oral. Não houve diferença significativa para a DCA de vetores de diferentes localizações, contudo, houve diferença significativa para a DCA entre T. cruzi de vetores e reservatório, bem como em relação à cepa Y de T. cruzi (teste de Duncan, 99% de confiança). Portanto, a cocção da polpa in natura de açaí acima de 44ºC poderá prevenir a DCA de transmissão alimentar. T. cruzi obtidos de diferentes fontes e localizações do Pará, após o contato com a polpa in natura de açaí, à temperatura ambiente, foram capazes de preservar sua virulência in vivo, causar DCA e morte em até 52 dias após as infecções experimentais. Uma educação básica de qualidade facilitará que boas práticas de higiene ocorram durante toda a cadeia produtiva do açaí e evitará a ocorrência de DCA de transmissão alimentar na região Norte do país nas próximas décadas / Abstract: In the Brazilian Amazon, outbreaks of acute Chagas¿ disease (ACD) in humans are reported by clinical and epidemiological characterization after association with the ingestion of in natura fruit¿s açai of pulp contaminated with T. cruzi. Due the economic and cultural relevance and considering that the cooling and freezing are not efficient to prevent the ACD foodborne, the aims of this study were determine a minimum binomial "temperature x time" and necessary to inactivation or death of T. cruzi in fruit¿s açai of pulp and evaluate the possibility of experimental transmission of this parasitosis, from vectors and reservoir at different locations at Pará State, in an accidental contamination in food. In the first stage, 105 trypomastigotes of T. cruzi Y strain were mixed with in natura fruit¿s açai of pulp and heat-treated between 37ºC and 49ºC in a high-precision water bath, by up to an hour, under constant homogenization. In the second stage, 105 trypomastigotes of T. cruzi (TcI) from different sources and locations at Pará, comparing with T. cruzi Y strain (TcII), were mixed with in natura fruit¿s açai of pulp, at room temperature. In both stages, when necessary, contaminated mixtures were subjected to forced sieving process. The inoculum (negative control, positive control or test group), up to 200 ?L, was administered intraperitoneal, gavage or oral in inbred immunodeficient hosts CB-17-Prkdcscid/Pas Unib or B6.129S7Rag1-/-tmMom/J Unib, under previous antibiotic therapy (1,75 mg/day). Parasitemia was scored as recommended by Brener and mortality registered. T. cruzi retained its virulence in fruit¿s açai of pulp at 43±0,1ºC for 20 minutes, caused ACD and death in mice up to 24 days after experimental infections, intraperitoneally. T. cruzi from Rhodnius pictipes, Val-de-Cans¿ forest, Belém, presented ACD and death, respectively, on days 32,0±3,0 and 40,0±3,0. T. cruzi from R. pictipes, Ajuaí River, Abaetetuba, presented ACD and death, respectively, on days 35,0±1,0 and 49,0±1,0. T. cruzi from Philander opossum, Combu¿s Island, Belém, presented ACD and death, respectively, on days 45,0±2,0 and 51,0±1,0, orally. There was not significant difference for the ACD from vectors of different locations, however, there was significant difference for the ACD between T. cruzi from vectors and reservoir, as well as for the T. cruzi Y strain (Duncan test, ? 0,01). Therefore, cooking in natura fruit¿s açai of pulp above 44ºC can prevent ACD foodborne. T. cruzi from different sources and locations at Pará, after contact with in natura fruit¿s açai of pulp, at room temperature, can retain its virulence in vivo, cause ACD and death in up to 52 days after experimental infections. A quality basic education will facilitate good hygiene practices occur throughout the productive chain of açai and will prevent ACD foodborne in the northern region of Brazil in next decades / Doutorado / Parasitologia / Doutor em Parasitologia