Yes / We describe a novel protocol to quantitatively and simultaneously compare the chemotactic responses of cells towards different chemokines. In this protocol, droplets of agarose gel containing different chemokines are applied onto the surface of a Petri dish, and then immersed under culture medium in which cells are suspended. As chemokine molecules diffuse away from the spot, a transient chemoattractant gradient is established across the spots. Cells expressing the corresponding cognate chemokine receptors migrate against this gradient by crawling under the agarose spots towards their centre. We show that this migration is chemokine-specific; meaning that only cells that express the cognate chemokine cell surface receptor, migrate under the spot containing its corresponding chemokine ligand. Furthermore, we show that migration under the agarose spot can be modulated by selective small molecule antagonists present in the cell culture medium.

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karolinska institutet, 2006. / Härtill 4 uppsatser.

Dans la tuberculose, Mycobacterium tuberculosis forme des granulomes dans les poumons avec, au centre, des cellules myéloïdes mono et multi-nucléées et autour, des lymphocytes. Nous avons étudié la biologie des cellules géantes dans ces granulomes tuberculeux : formation, mécanismes de survie et fonctions. Notre groupe a publié que l’IL-17A déclenche la fusion des cellules dendritiques (DC). Notre travail démontre que cette cytokine induit BCL2A1/BFL1, qui régule la survie des DC et les chémokines CCL2 et CCL20 qui dirigent le regroupement nécessaire à leur fusion. In situ, l'IL-17A est exprimée par les lymphocytes T de la couronne du granulome tuberculeux. BCL2A1, CCL2 et CCL20 sont exprimés par les cellules myéloïdes mono-et multi-nucléées. Ensuite, nous avons caractérisé le phénotype, les fonctions immunitaires et l'activité microbicide des DC traitées par l'IL-17A. Nous avons trouvé qu’elles co-expriment des marqueurs de DC et de macrophages, conservent les fonctions classiques des DC, synthétisent un profil spécifique d’enzymes destructrices et exercent une microbicidie variable suivant les souches de Mycobactéries. Nous avons nommé GMIC (Giant Myeloid Inflammatory Cell), ces cellules géantes induites par l'IL-17A. Nous proposons qu'elles constituent un nouvel effecteur myéloïde qui contrôle les mycobactéries. Ainsi, l'IL-17A participerait au maintien du cœur myéloïde du granulome tuberculeux en favorisant la formation des cellules géantes possédant des fonctions destructrices et microbicides. Les mécanismes moléculaires que nous avons documentés devraient permettre le développement de nouvelles stratégies thérapeutiques et vaccinales contre la tuberculose. / Tuberculosis, caused by Mycobacterium tuberculosis infection, results in the development of granulomas in affected tissues. These structures are formed by a myeloid cell core including multinucleated giant cells and surrounded by T lymphocytes. We studied mechanisms of survival, formation and functions of giant cells in Mycobacterium granulomas. Previously, our group showed that the cytokine IL-17A induces the fusion of dendritic cells (DC). Here, we identified molecules induced by the IL-17A genetic program in myeloid cells: BFL1 regulated DC survival, while the chemokines CCL2 and CCL20 directed clustering required for DC fusion. In situ, in human TB granulomas, we found that IL-17A was expressed by T lymphocytes while BFL1, CCL2 and CCL20 were expressed by the mono- and multi-nucleated myeloid cells. Then we characterized phenotype, immune functions and microbicidal activity of IL-17A-treated DC and their derived giant cells. They expressed a mixed DC-macrophage phenotype, retained classical DC functions, synthesized several destructive enzymes and had increased and differential microbicidal activities against Mycobacterium species. We named GMIC (giant myeloid inflammatory cells) these IL-17A-dependent giant cells, and propose that they constitute a new inflammatory myeloid effector with potent microbicidal activities. Altogether, our results show that IL-17A may participate in the maintenance of the myeloid core of human tuberculosis granuloma by promoting the formation of GMIC with potent destructive and microbicidal functions. The molecular mechanisms we have documented should help the development of new tuberculosis therapeutic and vaccination strategies.

by Li Pok Wai. / Thesis (M.Phil.)--Chinese University of Hong Kong, 2006. / Includes bibliographical references (leaves 94-114). / Abstracts in English and Chinese. / Acknowledgements --- p.I / Abbreviations --- p.II / Abstract --- p.V / 摘要 --- p.VIII / Publications --- p.XI / Table of contents --- p.XII / Chapter Chapter 1 --- Introduction / Chapter 1.1 --- Human Th lymphocytes and their immunopathogenic roles --- p.1 / Chapter 1.1.1 --- Characteristics of Th lymphocytes --- p.1 / Chapter 1.1.2 --- Migration and activation --- p.1 / Chapter 1.1.3 --- Th cell differentiation --- p.2 / Chapter 1.1.4 --- Pathological roles --- p.4 / Chapter 1.2 --- Cytokines as modulator in Th lymphocyte activation --- p.6 / Chapter 1.2.1 --- IL-18 --- p.6 / Chapter 1.2.2 --- IL-25 --- p.7 / Chapter 1.3 --- Surface marker expression in Th lymphocytes --- p.8 / Chapter 1.3.1 --- Adhesion molecules --- p.8 / Chapter 1.3.2 --- Cytokine and chemokine receptors --- p.9 / Chapter 1.3.3 --- Costimulatory molecules --- p.11 / Chapter 1.4 --- Cytokine and chemokine release from Th lymphocytes / Chapter 1.4.1 --- Thl cytokines --- p.13 / Chapter 1.4.2 --- Th2 cytokines --- p.14 / Chapter 1.4.3 --- Chemokines --- p.15 / Chapter 1.5 --- Intracellular signaling pathways in Th lymphocytes --- p.19 / Chapter 1.5.1 --- p38 MAPK pathway --- p.19 / Chapter 1.5.2 --- ERK pathway --- p.20 / Chapter 1.5.3 --- JNK pathway --- p.20 / Chapter 1.5.4 --- NF- k B pathway --- p.21 / Chapter 1.6 --- Pharmacological intervention of signaling pathways --- p.22 / Chapter 1.7 --- Aims and scope of the study --- p.24 / Chapter Chapter 2 --- Materials and Methods / Chapter 2.1 --- Materials --- p.26 / Chapter 2.1.1 --- Blood samples --- p.26 / Chapter 2.1.2 --- Media and reagents for cell culture --- p.26 / Chapter 2.1.3 --- Antibodies for costimulation of Th cells --- p.28 / Chapter 2.1.4 --- Recombinant human cytokines --- p.28 / Chapter 2.1.5 --- "Signaling pathway inhibitors: SB203580, PD98035, SP600125 and BAY117082" --- p.28 / Chapter 2.1.6 --- Monoclonal antibodies and reagents for immunofluorescent staining --- p.29 / Chapter 2.1.7 --- Reagents and buffers for the purification of human Th lymphocytes --- p.31 / Chapter 2.1.8 --- Reagents and buffers for protein array --- p.32 / Chapter 2.1.9 --- Reagents and buffers for Thl/2 cytokine and chemokine detection --- p.32 / Chapter 2.1.10 --- Reagents and buffers for protein extraction --- p.32 / Chapter 2.1.11 --- Reagents and buffers for SDS-polyacrylamide gel electrophoresis --- p.33 / Chapter 2.1.12 --- Reagents and buffers for Western blot analysis --- p.35 / Chapter 2.1.13 --- Reagents and buffers for non-radioactive electromobility shift assay (EMSA) --- p.37 / Chapter 2.1.14 --- Reagents and buffers for cell viability and proliferation assay --- p.39 / Chapter 2.1.15 --- Reagent kit for endotoxin level assay --- p.39 / Chapter 2.1.16 --- Other reagent kits --- p.40 / Chapter 2.2 --- Methods --- p.41 / Chapter 2.2.1 --- Purification of human Th lymphocytes and cell culture --- p.41 / Chapter 2.2.2 --- Measurement of total and allergen-specific IgE concentrations --- p.41 / Chapter 2.2.3 --- Immunophenotyping of cells by flow cytometry --- p.42 / Chapter 2.2.4 --- Protein array --- p.42 / Chapter 2.2.5 --- Quantitative analysis of cytokines and chemokines by flow cytometry --- p.43 / Chapter 2.2.6 --- Quantitative analysis of IFN-γ by ELISA --- p.43 / Chapter 2.2.7 --- SDS-PAGE --- p.44 / Chapter 2.2.8 --- Western blot analysis --- p.44 / Chapter 2.2.9 --- EMSA / gel shift assay --- p.45 / Chapter 2.2.10 --- MTT assay --- p.46 / Chapter 2.2.11 --- Cell proliferation assay --- p.46 / Chapter 2.2.12 --- Endotoxin level assay --- p.47 / Chapter 2.2.13 --- Statistical analysis --- p.47 / Chapter Chapter 3 --- Results / Chapter 3.1 --- Effects of IL-18 and IL-25 on the induction of Thl/2 cytokine and chemokine release from costimulated Th lymphocytes --- p.48 / Chapter 3.1.1 --- IL-18 and IL-25 could up-regulate the protein expression of cytokines and chemokines --- p.48 / Chapter 3.1.2 --- IL-18 but not IL-25 induced the release of IFN-γ and TNF-α --- p.48 / Chapter 3.1.3 --- "IL-18 and IL-25 induced the release of IL-5, IL-6 and IL-10" --- p.49 / Chapter 3.1.4 --- "IL-18 induced the release of IP-10, MIG, RANTES, MlP-lα and IL-8" --- p.49 / Chapter 3.1.5 --- "IL-25 induced the release of IP-10, MIG and RANTES" --- p.49 / Chapter 3.1.6 --- IL-18 and IL-25 did not enhance the proliferation of costimulated Th cells --- p.49 / Chapter 3.2 --- "Effects of IL-18 and IL-25 on the activation of p38 MAPK, ERK, JNK and NF- k B" --- p.58 / Chapter 3.2.1 --- "Costimulation with or without IL-18 and IL-25 could activate p38 MAPK, ERK and JNK" --- p.58 / Chapter 3.2.2 --- Costimulation with or without IL-18 and IL-25 could induce NF- k B activity --- p.58 / Chapter 3.3 --- Effects of inhibitors on the IL-18 and IL-25-induced release of Thl/2 cytokines and chemokines --- p.63 / Chapter 3.3.1 --- "Optimal dosage of SB203580, PD98035, SP600125 and BAY117082" --- p.63 / Chapter 3.3.2 --- "SB203580, PD98035 and BAY 117082 but not SP600125 suppressed the IL-18 and IL-25-induced release of Thl/2 cytokines" --- p.63 / Chapter 3.3.3 --- SP600125 suppressed the IL-18 and IL-25-induced release of chemokines --- p.64 / Chapter 3.4 --- Effects of inhibitors on the cell surface expression of IL-18 and IL-25 receptors --- p.72 / Chapter 3.4.1 --- "SB203580, PD98035, BAY 117082 but not SP600125 could suppress IL-18 receptor on costimulated Th cells" --- p.72 / Chapter 3.4.2 --- "SB203580, SP600125, PD98035 and BAY 117082 could not suppress IL-25 receptor on costimulated Th cells" --- p.72 / Chapter 3.5 --- Effects of costimulation on the expression of cell surface markers on Th lymphocytes --- p.75 / Chapter Chapter 4 --- Discussion / Chapter 4.1 --- Effects of IL-18 and IL-25 on the release of Th1/2 cytokines and chemokines --- p.80 / Chapter 4.2 --- "Regulation of Thl/2 cytokines and chemokines through intracellular p38 MAPK, ERK, JNKand NF-kB" --- p.83 / Chapter 4.3 --- Effects of costimulation on different surface markers in Th cells --- p.87 / Chapter 4.4 --- Concluding remarks and future perspectives --- p.90 / References --- p.94

Thesis (Ph. D.)--University of Missouri--Columbia, 2003. / Typescript. Vita. Includes bibliographical references (leaves 139-154).

Liver progenitor cells (LPCs) play a major role in the regeneration process following chronic liver damage. LPCs can differentiate into hepatocytes and cholangiocytes and thus are capable of replenishing the damaged liver. Due to their plasticity and robust nature in culture systems, they are promising candidates for use in cell therapy. However, to be able to use LPCs as tissue regenerating stem cell-like cells in the clinic, we need to fully understand how they are controlled. Although a strong association between LPCs and inflammation has been shown in many chronic liver diseases, the role of the immune system in LPC-mediated hepatic regeneration is poorly understood. We hypothesise that specific immune cells and mediators are needed to induce the LPC compartment, and that these are common to the LPC response in different injury settings. Therefore, the present study focused on the characterisation of the inflammatory environment in the LPC response, which generates this niche. The aims of this study were (i) to identify the immune cells that are important for the LPC response, (ii) to define the cytokine profile and (iii) to determine the role of the cytokine producing cells during liver regeneration. To study hepatic inflammation following liver injury, a diet-induced model of liver injury (choline-deficient, ethionine-supplemented diet, CDE diet) was compared to two transgenic mouse models of immune-mediated hepatitis (Met-Kb, 178.3). Although all three models are characterised by hepatitis, histological analysis revealed that LPCs were only detectable in the CDE and Met-Kb livers. In the 178.3 model, livers regenerated from proliferating hepatocytes. An LPC response could not be induced in these mice even when liver damage was made more severe. In the other two models, LPC numbers increased over time showing the highest numbers one week after the peak of liver injury. LPCs were often found in close proximity to inflammatory cells, in particular macrophages.

Les chimiokines, petites protéines sécrétées par de nombreux types cellulaires, régulent le trafic et la fonction des populations leucocytaires en interagissant avec leurs récepteurs spécifiques, qui appartiennent à la superfamille des récepteurs à 7 domaines transmembranaires couplés aux protéines G. Dans le contexte tumoral, les chimiokines jouent des rôles ambivalents, en régulant le recrutement des leucocytes, ainsi que la croissance et l’angiogenèse des tumeurs. Aussi, les chimiokines semblent également contribuer à déterminer les sites métastatiques des tumeurs malignes.<p>Notre travail porte sur l’étude du rôle de chimiokines et récepteurs, fréquemment exprimés au sein de tumeurs, dans un modèle tumoral chez la souris, la lignée cellulaire LLC (Lewis Lung Carcinoma). Chaque gène d’intérêt (CCR3, CCR6, CCR7, CXCR4, CXCR5, CCL19, CCL20, CCL21, CXCL13) a été exprimé dans la lignée LLC, ces différentes lignées ont été greffées à des souris syngéniques, et les caractéristiques phénotypiques des tumeurs ont été analysées, notamment la croissance tumorale, la fréquence et la distribution des métastases, et l’importance des réactions immunitaires de l’hôte.<p>Nous avons montré que la croissance tumorale n’est pas affectée par l’expression des différents récepteurs étudiés, ni par celle des chimiokines CCL19 et CCL21, alors que l’expression de CXCL13 et de CCL20 par les cellules LLC réduit leur croissance in vivo. La quantification des métastases pulmonaires a montré que l’expression de CCR3, CXCR5, CCR7, CCL19 ou CCL21 par les cellules tumorales n’affecte pas significativement le potentiel métastatique des cellules LLC. Par contre, l’expression de CXCR4 entraîne une augmentation, et CCR6 une diminution, du nombre de métastases pulmonaires. La diminution du potentiel métastatique des tumeurs LLC/CCR6 implique notamment l’augmentation des propriétés d’adhésion de ces cellules. Les cellules LLC produisent naturellement de petites quantités du ligand CCL20. Nous postulons que la stimulation autocrine de CCR6 par CCL20 dans ces cellules in vivo augmente leurs propriétés d’adhésion et diminue leur potentiel métastatique. Dans le contexte de l’implication des chimiokines et récepteurs dans la détermination des sites métastatiques, nous proposons dès lors un modèle plus général :les récepteurs aux chimiokines dirigent les cellules tumorales vers les sites métastatiques où est produit le ligand correspondant ;cependant, si le ligand est produit au niveau de la tumeur, il favorise le maintien des cellules tumorales au niveau du site primaire.<p>L’effet anti-tumoral de CCL20 ne dépend apparemment pas d’un recrutement plus important de cellules dendritiques, de lymphocytes T et de cellules NK exprimant le récepteur CCR6. Nos observations suggèrent plutôt un effet de CCL20 sur l’angiogenèse tumorale. <p> / Doctorat en Sciences médicales / info:eu-repo/semantics/nonPublished

published_or_final_version / Anatomy / Doctoral / Doctor of Philosophy

Le cancer du sein est le cancer le plus fréquent chez la femme et représente un problème de santé publique majeur. L'agressivité des tumeurs mammaires varie notamment en fonction de leurstatut pour le récepteur α des oestrogènes (ERα). Les cancers du sein n'exprimant pas ERα ont unmauvais pronostic, de part leur capacité métastatique plus importante. Cependant, les facteurs sous jacents à cette plus grande agressivité des cancers ERα-négatifs restent mal compris. Il est aujourd'hui admis que la progression tumorale et la dissémination métastatique dépendent, non seulement des propriétés intrinsèques des cellules cancéreuses, mais également des régulations exercées sur ces cellules par le micro environnement tumoral. Les interactions entre les cellules cancéreuses et les cellules présentes au niveau du site tumoral, telles que les cellules leucocytaires,les cellules endothéliales, ainsi que les cellules stromales, sont nécessaires au développement et à l'évolution de la tumeur. Ces interactions sont médiées via la production d'hormones, de cytokines ainsi que de chimiokines. Les cellules stromales mésenchymateuses (MSC) sont de composants essentiels du stroma tumoral. Leur rôle dans la progression des tumeurs reste, pour le moment, très controversé. L'objectif de notre projet a été de comprendre les raisons pour lesquelles les MSC peuvent favoriser ou inhiber le développement tumoral. Nous nous sommes, dans un premier temps,intéressés aux interactions entre les cellules cancéreuses mammaires et les MSC. Nous avons déterminé si le fait que les cellules cancéreuses soit métastatiques ou non modifiait le phénotype des MSC et leur réponse dans les régulations de la croissance tumorale. Nous avons ainsi constaté quel es facteurs sécrétés spécifiquement par les cellules cancéreuses métastatiques ERα-négativesinduisaient la production de certaines chimiokines, dont CXCL5. Ces chimiokines peuvent êtressécrétées par les cellules du microenvironnement mais également par les cellules cancéreuses ellesmêmes.Nous avons donc étudié le rôle de CXCL5 dans l'agressivité des tumeurs mammaires. Nousavons ainsi montré que ces chimiokines induisent, in vitro, une augmentation des propriétésprolifératives, invasives et migratoires des cellules cancéreuses. Cette étude nous à permis demontrer que les chimiokines et les interactions entre les cellules cancéreuses et les MSC pouvaientêtre impliquées dans la progression tumorale ainsi que dans l'agressivité des tumeurs mammaires. / Breast cancer remains in Europe and USA the first cause of death by cancer for women.Breast cancer aggressiveness relies in particular on estrogen receptor α (ERa) status. Breast cancers which do not express ERα are more metastatic and have a poorer prognosis, than ERα-positivetumors. However underlying factors involved in these invasive properties are poorly understood.Today, it is established that tumor progression is regulated by intrinsic cancer cells properties, and byinteractions between cancer cells and surrounding microenvironment. Several evidences suggest thatleukocytes, endothelial cells, fibroblasts and infiltrating cells present in stromal compartment caninteract with tumor cells through the production of hormones, cytokines and chemokines.Mesenchymal stromal cells (MSC) belong also to the stromal compartment. Recent studies havehighlighted their potential role in cancer growth and metastasis. However, the ability of MSC to favor orprevent cancer progression remains controversial. The aim of this work was to understand the roles ofMSC in tumor progression and to explain the differential effects of MSC on cancer cells, depending onthe type of cancer cells involved. First, we were analyzed MSC and cancer cells interactions, anddetermined if metastatic cancer cells could affect MSC phenotypes and its response in terms of tumorgrowth. We observed that metastatic breast cancer cells secreted factors, which could highly enhancethe release by MSC of several chemokines, including CXCL5. CXCL5 can be secreted by stromal cellsbut also by cancer cells themselves. We next showed in vitro that CXCL5 increased proliferative,invasive and migratory properties of breast cancer cells. This study allowed us to demonstrate thatchemokines play a role in the cross-talk between MSC and breast cancer cells, and that they play akey role in tumor proliferation and aggressiveness.

Les chimiokines sont des protéines appartenant à la famille des cytokines. A l'origine, ces molécules ont été étudiées pour leur implication dans la régulation du trafic leucocytaire. Depuis une dizaine d'années, de nombreuses études ont cependant démontré que les chimiokines sont aussi impliquées dans les différentes étapes de la cancérogénèse : inhibition de l'immunité anti-tumorale, rôle de facteur de croissance des cellules tumorales, régulation de l'angiogénèse et particulièrement induction de la migration des métastases. En effet, les chimiokines sont capables de guider les cellules métastatiques de la tumeur primaire vers leur lieu d'implantation. Ce guidage passe par la liaison de la chimiokine à son récepteur, ce qui conduit à l'activation de différentes cascades signalétiques intracellulaires qui aboutiront in fine à la migration et le guidage des cellules le long du gradient de chimiokine, et ce jusqu'au lieu d'implantation où une tumeur secondaire pourra alors se former.C'est la compréhension du rôle des chimiokines dans la migration des métastases qui a conduit à l'étude de l'expression de leurs récepteurs dans le cancer. Après avoir étudié dans un premier temps les outils nécessaires à l'obtention de résultats fiables notamment en PCR quantitative, le profil d'expression de différents récepteurs aux chimiokines a été analysé chez des patients atteints d'un cancer colorectal. Les résultats montrent que seules les expressions des récepteurs CCR10 et CXCR4 diminuent chez les patients ayant développé des métastases. De plus cette baisse est corrélée à un mauvais pronostique. Cependant, des études in vitro démontrent que les lignées coliques métastatiques surexpriment ces récepteurs, et que la migration de celles-ci est sensible à un gradient de CCL27, le ligand du récepteur CCR10.Ces résultats a priori paradoxaux prennent tout leur sens lorsqu'on rapproche le concept métastatique du concept de cellule souche. Dans les deux cas, ces types cellulaires aux capacités phénotypiques communes (migration, survie, prolifération) peuvent donner une population cellulaire hétérogène. La mise au point d'une méthode permettant de faire passer les cellules tumorales (prolifératives) en cellules métastatiques (migratoires) et vice versa nous a conduit à un concept syncrétique dans lequel les notions de cellules tumorales, de métastases et de cellules souches se confondent. Dans celui-ci, les cellules tumorales, qu'elles soient ou non issues de cellules souches saines, sont capables de changer réversiblement de phénotype pour former des métastases (équivalent de la transition épithélio-mésenchymateuse). La notion de réversibilité est ici essentielle car elle permet d'expliquer comment une cellule métastatique, une fois implantée, peut s'activer et redonner une population cellulaire tumorale proliférative. Cela implique aussi que les métastases, capables de rester plusieurs mois en dormance, partagent les mêmes mécanismes que les cellules souches.Enfin, l'étude en parallèle de nouvelles voies de régulation de l'angiogénèse - qui fournit aux métastases le moyen de quitter la tumeur primaire - faisant intervenir le récepteur à la thrombine PAR1 d'une part et la chimiokine CXCL4, plus communément appelée PF4 d'autre part, pourrait aboutir à l'élaboration de nouvelles molécules à visée thérapeutique. / Chimiokines are proteins belonging to the cytokines' family. In the beginning, chemokines were studied for their implication in the leucocytic trafic regulation. Since ten years, many studies however show that chemokines are also implied in all of carcinogenesis steps: antitumor immunity inhibition, role of growth factor of tumoral cells, angiogenesis regulation and especially metastases migration induction. Indeed, chemokines are able to guide metastatic cells from the primary tumour towards their secondary site thanks to chemokine / chemokine receptors interactions which lead to metastases migration along a chemokine gradient until their secondary site. Then, metastases activation will lead to the development of a secondary tumour.It is the understanding of chemokines' role in metastases migration that led to the study of their receptors expression in cancer. After having initially studied the tools that were necessary to obtain reliable results in particular in quantitative PCR, expression profile of several chemokine receptors was established on patients developing a colorectal cancer. Results show that only CCR10 and CXCR4 expressions significantly decrease in patients who develop metastases. Moreover this decrease is correlated with poor prognostic. However, in vitro studies show that metastatic colon cell lines overexpress the both receptors, and that migration of those cells is sensitive to a CCL27 gradient, the CCR10 ligand.These paradoxical results may however be easily explained if the metastatic concept is compared to the stem cell one. In both cases, these cellular types share phenotypical properties (migration, survival, proliferation) and are able to give a heterogeneous cellular population. The development of a protocol that turns proliferative tumoral cells into migratory metastatic ones (and vice versa) led us to a syncretic concept in which tumoral cells, metastases and stem cells notions are merging. In this concept, tumoral cells (which result or not from healthy stem cells), are able to reversibly change their phenotype to form metastases (‘epithelial-mesenchymal transition' equivalent). Reversibility is actually an essential concept because it may explain how a metastatic cell, once established, can be activated again and become a proliferative tumoral cell. That also implies that metastases, able to remain several months in dormancy, share the same mechanisms as stem cells ones.Lastly, the study of new angiogenesis regulation pathways - which provides to metastases the means of leaving the primary tumour - involving on the one hand PAR1 thrombin receptor, and on the other hand chemokine CXCL4 (also called PF4), may lead to the development of new therapeutic molecules.