RODIGUES, F. E. A.; LEMOS, T. L. G. Processos biocatalíticos utilizando a casca da laranja da terra (Citrus aurantium L.). 2012. 141 f. Dissertação (Mestrado em Química) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2012. / Submitted by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2014-11-06T21:11:40Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_ffmsilva.pdf: 4587488 bytes, checksum: 958fd1d877db405b9fab0c8299731f6a (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2015-11-24T17:47:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_ffmsilva.pdf: 4587488 bytes, checksum: 958fd1d877db405b9fab0c8299731f6a (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-24T17:47:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_ffmsilva.pdf: 4587488 bytes, checksum: 958fd1d877db405b9fab0c8299731f6a (MD5) Previous issue date: 2012 / The Brazil is the producing greater of world of orange and orange juice, being this sector of great importance for Brazilian, responsible economy for generating 400 thousand jobs and more than and putting into motion ciphers of billions per year. But, this sector also is responsible for the production of great amount of industrial rejetcs, that are equivalent 50% of the weight of the fruit, being these used residues most of the time as animal ration. Therefore the use efficient of these rejetcs if makes necessary in a world where the natural reserves come if depleting. In this direction biocatalysis is presented as a promising tool in the use of these residues, that contains enzymes in its constitution, for attainment of products of high added value, the substances enantiopure. The application of different methodologies, practical and of low cost, made possible the chiral alcohols synthesis with high enantiomeric excess (ee) and good taxes of conversion. Hydrolysis reactions and reduction had been processed in aqueous way e, the reactions of esterification had been carried through in organic solvent, using the rind of the orange as source of biocatalysis for such reactions. The use of the peel of the orange as biocatalysis source presented resulted sufficiently promising, demonstrating catalytic capacity in some reactions (reduction/oxidation, hydrolysis/esterification) through simple methodologies and of low cost. Conversions of 46,90-96,70% had been reached in the reactions of bioreduction shown of ee varying of 21,15-99,00%. In the hydrolysis reactions taxes of 19,20-80,82% conversions and ee had been verified varying of 9,60-45,52%. Already in the esterification reactions, ee above of 99% had been observed and bigger conversions that 80% had been reached. From there, this study it opens precedents for an ample band of application of this source of biocatalysis (pells of the orange), that currently it is considered as one reject industrial, contributing excessively to add value all a productive and industrial sector in which Brazil is leader, the orange juice industry / O Brasil é o maior produtor mundial de laranja e de suco de laranja, sendo este setor de grande importância para economia brasileira, responsável por gerar mais de 400 mil empregos e movimentar cifras de bilhões de reais por ano. Mas, este setor também é responsável pela produção de grande quantidade de rejeitos industriais, que equivalem a 50% do peso da fruta, sendo estes resíduos utilizados na maioria das vezes como ração animal. Portanto o uso eficiente destes rejeitos se faz necessário em um mundo em que as reservas naturais vêm se esgotando. Neste sentido a biocatálise mostra-se como uma ferramenta promissora no uso destes resíduos, que possuem enzimas em sua constituição, para obtenção de produtos de alto valor agregado, as substâncias enantiopuras. A aplicação de diferentes metodologias, práticas e de baixo custo, possibilitou a síntese de alcoóis quirais com alto excesso enantiomérico (ee) e boas taxas de conversão. Reações de hidrólise e redução foram processadas em meio aquoso e, as reações de esterificação foram realizadas em solvente orgânico, utilizando as casca da laranja como fonte de biocatalisadores. O uso das cascas da laranja como fonte de biocatalisador apresentou resultados bastante promissores, demonstrando capacidade catalítica em várias reações (redução/oxidação, hidrólise/esterificação) através de metodologias simples e de baixo custo. Conversões de 46,90-96,70% foram alcançadas nas reações de biorredução acompanhado de ee variando de 21,15-99,00%. Nas reações de hidrólise verificaram-se taxas de conversões de 19,20-80,82% e ee variando de 9,60-45,52%. Já nas reações de esterificação, ee acima de 99% foram observados e conversões maiores que 80% foram alcançadas. Portanto, este estudo abre precedentes para uma ampla faixa de aplicação desta fonte de biocatalisador (cascas da laranja), que atualmente é considerado como um rejeito industrial, contribuindo sobremaneira para agregar valor a todo um setor produtivo e industrial no qual o Brasil é líder, a indústria de suco de laranja.

O uso descontrolado de suplementos alimentares indicados para emagrecer e alcançar maior definição muscular desencadeou uma grande preocupação. Dentre estes produtos, destacam-se aqueles contendo efedrina (de Ephedra sinica). Devido à associação com problemas cardíacos, isquemias e hipertensão, alguns países proibiram a venda de suplementos contendo este alcalóide, o qual tem sido substituído por p-sinefrina (de Citrus aurantium). Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar o perfil toxicológico de extratos de C. aurantium e do padrão racêmico de psinefrina. Foi validada uma metodologia analítica por CLAE/UV para a quantificação de p-sinefrina nos extratos. Para a avaliação do perfil toxicológico os extratos (300, 500, 1000, 2500, 3500 e 5000 mg/kg) e a p-sinefrina (150, 300, 450, 600, 800, 1000 e 2000 mg/kg) foram submetidos ao teste de toxicidade aguda em camundongos, onde foram observados sinais como piloereção, ofego, sialorréia, exoftalmia e diminuição da atividade locomotora em todos os tratamentos, porém, não foram observadas mortes. A diminuição da locomoção foi confirmada através da avaliação em caixas de atividade locomotora. No teste de toxicidade subcrônica, camundongos foram tratados por 28 dias com C. aurantium 400, 2000 e 4000 mg/kg e p-sinefrina 30 e 300 mg/kg, foram realizadas análises hematológicas, bioquímicas e de marcadores do estresse oxidativo. Pode-se observar aumento dos níveis de GSH nas doses de C. aurantium 4000 mg/kg e p-sinefrina 30 e 300 mg/kg, e inibição da enzima GPx nos animais tratados com C. aurantium 400 e 2000 mg/kg e psinefrina 30 e 300 mg/kg. Devido ao alto consumo destes produtos por mulheres em idade reprodutiva, os efeitos de C. aurantium e p-sinefrina foram avaliados, juntamente com E. sinica e efedrina, no sistema reprodutor feminino através do ensaio uterotrófico em ratas imaturas. Foi detectada uma ação antiestrogênica para a efedrina na dose de 5 mg/kg, e houve diminuição do peso relativo das adrenais em todos os tratamentos. Assim, apesar da baixa toxicidade apresentada, suplementos contendo C. aurantium/p-sinefrina devem ser usados com cautela, pois estão geralmente associados a estimulantes, que podem potencializar seus efeitos. / The uncontrolled use of dietary supplements to lose weight and reach a higher muscular definition is concerning. Among these products, are the ones containing ephedrine (from Ephedra sinica). Due to the association with cardiac problems, ischemia and hypertension, some countries banned the commercialization of supplements containing this alkaloid, which has been substituted by p-synephrine (from Citrus aurantium). The aim of this study was to investigate the toxicological profile of C. aurantium extracts and the racemic standard of p-synephrine. An analytical method using HPLC/UV was validated and optimized for quantification of p-synephrine in the extracts. To toxicological profile evaluation extracts (300, 500, 1000, 2500, 3500 or 5000 mg/kg) and p-synephrine (150, 300, 450, 600, 800, 1000 or 2000 mg/kg) where submitted to acute toxicology test in mice, being observed signs such as: piloerection, gasping, salivation, exophtalmy and decrease in locomotor activity in all treatments, however deaths not occurred. Decrease in locomotion was confirmed in spontaneous locomotor activity test. In subchronic toxicity, mice were treated for 28 days with C. aurantium 400, 2000 or 4000 mg/kg and p-synephrine 30 or 300 mg/kg, it were analyzed hematological and biochemical parameters, and oxidative stress biomarkers. It was noted an increase in GSH levels in C. aurantium 4000 mg/kg and p-sinefrina 30 and 300 mg/kg and inhibition of the GPx activity in animals treated with C. aurantium 400 and 2000 mg/kg and psinefrina 30 and 300 mg/kg. Due to the high consume of these products by young women, the effects of C. aurantium and p-synephrine, so as E. sinica and ephedrine, were evaluated in female reproductive system by means of uterotrophic assay in immature female rats. An antiestrogenic activity was detected in ephedrine 5 mg/kg treated-rats, and there were a decrease in adrenals relative weight in all treated groups. In spite of low toxicity presented, dietary supplements containing C. aurantium/p-synephrine should be used with concern, since they are frequently associated to stimulants, which can potentializes his action.

O uso descontrolado de suplementos alimentares indicados para emagrecer e alcançar maior definição muscular desencadeou uma grande preocupação. Dentre estes produtos, destacam-se aqueles contendo efedrina (de Ephedra sinica). Devido à associação com problemas cardíacos, isquemias e hipertensão, alguns países proibiram a venda de suplementos contendo este alcalóide, o qual tem sido substituído por p-sinefrina (de Citrus aurantium). Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar o perfil toxicológico de extratos de C. aurantium e do padrão racêmico de psinefrina. Foi validada uma metodologia analítica por CLAE/UV para a quantificação de p-sinefrina nos extratos. Para a avaliação do perfil toxicológico os extratos (300, 500, 1000, 2500, 3500 e 5000 mg/kg) e a p-sinefrina (150, 300, 450, 600, 800, 1000 e 2000 mg/kg) foram submetidos ao teste de toxicidade aguda em camundongos, onde foram observados sinais como piloereção, ofego, sialorréia, exoftalmia e diminuição da atividade locomotora em todos os tratamentos, porém, não foram observadas mortes. A diminuição da locomoção foi confirmada através da avaliação em caixas de atividade locomotora. No teste de toxicidade subcrônica, camundongos foram tratados por 28 dias com C. aurantium 400, 2000 e 4000 mg/kg e p-sinefrina 30 e 300 mg/kg, foram realizadas análises hematológicas, bioquímicas e de marcadores do estresse oxidativo. Pode-se observar aumento dos níveis de GSH nas doses de C. aurantium 4000 mg/kg e p-sinefrina 30 e 300 mg/kg, e inibição da enzima GPx nos animais tratados com C. aurantium 400 e 2000 mg/kg e psinefrina 30 e 300 mg/kg. Devido ao alto consumo destes produtos por mulheres em idade reprodutiva, os efeitos de C. aurantium e p-sinefrina foram avaliados, juntamente com E. sinica e efedrina, no sistema reprodutor feminino através do ensaio uterotrófico em ratas imaturas. Foi detectada uma ação antiestrogênica para a efedrina na dose de 5 mg/kg, e houve diminuição do peso relativo das adrenais em todos os tratamentos. Assim, apesar da baixa toxicidade apresentada, suplementos contendo C. aurantium/p-sinefrina devem ser usados com cautela, pois estão geralmente associados a estimulantes, que podem potencializar seus efeitos. / The uncontrolled use of dietary supplements to lose weight and reach a higher muscular definition is concerning. Among these products, are the ones containing ephedrine (from Ephedra sinica). Due to the association with cardiac problems, ischemia and hypertension, some countries banned the commercialization of supplements containing this alkaloid, which has been substituted by p-synephrine (from Citrus aurantium). The aim of this study was to investigate the toxicological profile of C. aurantium extracts and the racemic standard of p-synephrine. An analytical method using HPLC/UV was validated and optimized for quantification of p-synephrine in the extracts. To toxicological profile evaluation extracts (300, 500, 1000, 2500, 3500 or 5000 mg/kg) and p-synephrine (150, 300, 450, 600, 800, 1000 or 2000 mg/kg) where submitted to acute toxicology test in mice, being observed signs such as: piloerection, gasping, salivation, exophtalmy and decrease in locomotor activity in all treatments, however deaths not occurred. Decrease in locomotion was confirmed in spontaneous locomotor activity test. In subchronic toxicity, mice were treated for 28 days with C. aurantium 400, 2000 or 4000 mg/kg and p-synephrine 30 or 300 mg/kg, it were analyzed hematological and biochemical parameters, and oxidative stress biomarkers. It was noted an increase in GSH levels in C. aurantium 4000 mg/kg and p-sinefrina 30 and 300 mg/kg and inhibition of the GPx activity in animals treated with C. aurantium 400 and 2000 mg/kg and psinefrina 30 and 300 mg/kg. Due to the high consume of these products by young women, the effects of C. aurantium and p-synephrine, so as E. sinica and ephedrine, were evaluated in female reproductive system by means of uterotrophic assay in immature female rats. An antiestrogenic activity was detected in ephedrine 5 mg/kg treated-rats, and there were a decrease in adrenals relative weight in all treated groups. In spite of low toxicity presented, dietary supplements containing C. aurantium/p-synephrine should be used with concern, since they are frequently associated to stimulants, which can potentializes his action.

O uso descontrolado de suplementos alimentares indicados para emagrecer e alcançar maior definição muscular desencadeou uma grande preocupação. Dentre estes produtos, destacam-se aqueles contendo efedrina (de Ephedra sinica). Devido à associação com problemas cardíacos, isquemias e hipertensão, alguns países proibiram a venda de suplementos contendo este alcalóide, o qual tem sido substituído por p-sinefrina (de Citrus aurantium). Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar o perfil toxicológico de extratos de C. aurantium e do padrão racêmico de psinefrina. Foi validada uma metodologia analítica por CLAE/UV para a quantificação de p-sinefrina nos extratos. Para a avaliação do perfil toxicológico os extratos (300, 500, 1000, 2500, 3500 e 5000 mg/kg) e a p-sinefrina (150, 300, 450, 600, 800, 1000 e 2000 mg/kg) foram submetidos ao teste de toxicidade aguda em camundongos, onde foram observados sinais como piloereção, ofego, sialorréia, exoftalmia e diminuição da atividade locomotora em todos os tratamentos, porém, não foram observadas mortes. A diminuição da locomoção foi confirmada através da avaliação em caixas de atividade locomotora. No teste de toxicidade subcrônica, camundongos foram tratados por 28 dias com C. aurantium 400, 2000 e 4000 mg/kg e p-sinefrina 30 e 300 mg/kg, foram realizadas análises hematológicas, bioquímicas e de marcadores do estresse oxidativo. Pode-se observar aumento dos níveis de GSH nas doses de C. aurantium 4000 mg/kg e p-sinefrina 30 e 300 mg/kg, e inibição da enzima GPx nos animais tratados com C. aurantium 400 e 2000 mg/kg e psinefrina 30 e 300 mg/kg. Devido ao alto consumo destes produtos por mulheres em idade reprodutiva, os efeitos de C. aurantium e p-sinefrina foram avaliados, juntamente com E. sinica e efedrina, no sistema reprodutor feminino através do ensaio uterotrófico em ratas imaturas. Foi detectada uma ação antiestrogênica para a efedrina na dose de 5 mg/kg, e houve diminuição do peso relativo das adrenais em todos os tratamentos. Assim, apesar da baixa toxicidade apresentada, suplementos contendo C. aurantium/p-sinefrina devem ser usados com cautela, pois estão geralmente associados a estimulantes, que podem potencializar seus efeitos. / The uncontrolled use of dietary supplements to lose weight and reach a higher muscular definition is concerning. Among these products, are the ones containing ephedrine (from Ephedra sinica). Due to the association with cardiac problems, ischemia and hypertension, some countries banned the commercialization of supplements containing this alkaloid, which has been substituted by p-synephrine (from Citrus aurantium). The aim of this study was to investigate the toxicological profile of C. aurantium extracts and the racemic standard of p-synephrine. An analytical method using HPLC/UV was validated and optimized for quantification of p-synephrine in the extracts. To toxicological profile evaluation extracts (300, 500, 1000, 2500, 3500 or 5000 mg/kg) and p-synephrine (150, 300, 450, 600, 800, 1000 or 2000 mg/kg) where submitted to acute toxicology test in mice, being observed signs such as: piloerection, gasping, salivation, exophtalmy and decrease in locomotor activity in all treatments, however deaths not occurred. Decrease in locomotion was confirmed in spontaneous locomotor activity test. In subchronic toxicity, mice were treated for 28 days with C. aurantium 400, 2000 or 4000 mg/kg and p-synephrine 30 or 300 mg/kg, it were analyzed hematological and biochemical parameters, and oxidative stress biomarkers. It was noted an increase in GSH levels in C. aurantium 4000 mg/kg and p-sinefrina 30 and 300 mg/kg and inhibition of the GPx activity in animals treated with C. aurantium 400 and 2000 mg/kg and psinefrina 30 and 300 mg/kg. Due to the high consume of these products by young women, the effects of C. aurantium and p-synephrine, so as E. sinica and ephedrine, were evaluated in female reproductive system by means of uterotrophic assay in immature female rats. An antiestrogenic activity was detected in ephedrine 5 mg/kg treated-rats, and there were a decrease in adrenals relative weight in all treated groups. In spite of low toxicity presented, dietary supplements containing C. aurantium/p-synephrine should be used with concern, since they are frequently associated to stimulants, which can potentializes his action.

Citrus aurantium L. var. amara. (CA) é uma árvore pertencente à família Rutaceae que apresenta a amina adrenérgica p-sinefrina como principal constituinte de seus frutos. A p-sinefrina constitui-se uma feniletilamina similar em termos estruturais com a efedrina, principal alcalóide do gênero Ephedra (Ephedraceae). Em abril de 2004, após a proibição da utilização de suplementos alimentares contendo Ephedra e/ou efedrina pela agência americana FDA (Food and Drug Administration), suplementos conhecidos como "Ephedra-free", geralmente contendo CA associado com extratos de outras plantas, proteínas e aminoácidos, foram lançados no mercado internacional. A quantificação de p-sinefrina em produtos derivados de CA geralmente é realizada por cromatografia a líquido acoplada a detector de ultravioleta (CLAE/UV ou CLAE/DAD). A principal limitação desta metodologia devese a falta de especificidade. Um método apropriado para quantificação desta amina por extração em fase sólida (SPE) e cromatografia a gás acoplada com detector de ionização de chama (CG/DIC) e detector de massas (CG/EM) em produtos de origem vegetal ainda não se encontra disponível. Assim, o objetivo deste trabalho foi desenvolver e validar um novo procedimento mais seletivo para a quantificação e identificação de p-sinefrina em produtos derivados de CA por CG/DIC, seguido pela confirmação por CG/EM, após clean-up por SPE e derivação. Derivados trifluoroacetilados e oxazolidinas foram preparados, após reação com anidrido trifluoroacético e cicloexanona, e analisados por ressonância magnética nuclear (RMN 1H e 13C), CG/DIC e GC/EM. Cartuchos de troca iônica (SCX) e a cicloexanona apresentaram melhor desempenho como fase estacionária e reagente de derivação, respectivamente. O método de CG/DIC apresentou-se linear na faixa de concentração de 125-500 mg% (r=0,9997; R2= 0,9993; y = 535,11x-30063). A precisão intra-dia (expressa como DPR%) foi de 3,60% e a precisão inter-dias foi de 3,59%. A recuperação média estabelecida a partir do extrato de CA foi de 78,1 ± 3,64%. Melhor seletividade foi alcançada por confirmação do derivado oxazolidina de p-sinefrina por CG/EM. O método validado foi aplicado para a análise de psinefrina em derivados de CA como frutos, extrato e composto emagrecedor com resultados satisfatórios. / Citrus aurantium var. amara (CA) is a plant belonging to the Rutaceae family, characterized by the presence of adrenergic amine p-synephrine in its fruits. p- Synephrine is a phenyletilamine structurally similar to ephedrine, the main active component of plants of the genus Ephedra (Ephedraceae). After the ban of Ephedra and/or ephedrine in dietary supplements in April 2004 by FDA (Food and Drug Administration), "Ephedra-free" products generally containing CA associated with other herbs extracts, proteins, and aminoacids, gain the international market. The quantification of p-synephrine in products containing CA is currently out by HPLC/UV or HPLC/DAD analysis. The limit of this approach is that of lack in the specificity. An appropriated method to the quantification of this amine by solid phase extraction (SPE), gas chromatography method with flame ionization detection (GC/FID) and mass spectrometry detector (GC/MS) in herbal products, need to be developed. In this way, the aim of this study was to develop and validate a new procedure for quantification and identification of p-synephrine in CA products based on GC/FID followed by GC/MS confirmation analysis, after clean-up by solid phase extraction and derivatization. Trifluoroacetylated derivatives and oxazolidines were prepared after reaction with trifluoroacetic anhydride and cyclohexanone (CH), respectively, and were subjected to analysis by nuclear magnetic ressonance (NMR 1H and 13C), GC/FID and GC/MS. The results indicate that SCX stationary phase for SPE and CH agent afforded the best performance. The GC/FID method developed was validated and was found to be linear in the range of 125-500 mg% (r=0.9997; R2= 0.9993; y = 535,11x-30063). Intra-day precision (calculated as %R.S.D) was 3.60% and interday precision was 3.59%. Mean recovery from extract of CA was 78.1 ± 3.64%. The method selectivity was further improved by confirmation of oxazolidine derivative of p-synephrine by CG/MS. The validated method was applied to analysis in products containing CA like extract, fruits and weight loss preparation with satisfactory results.

Citrus aurantium L. var. amara. (CA) é uma árvore pertencente à família Rutaceae que apresenta a amina adrenérgica p-sinefrina como principal constituinte de seus frutos. A p-sinefrina constitui-se uma feniletilamina similar em termos estruturais com a efedrina, principal alcalóide do gênero Ephedra (Ephedraceae). Em abril de 2004, após a proibição da utilização de suplementos alimentares contendo Ephedra e/ou efedrina pela agência americana FDA (Food and Drug Administration), suplementos conhecidos como "Ephedra-free", geralmente contendo CA associado com extratos de outras plantas, proteínas e aminoácidos, foram lançados no mercado internacional. A quantificação de p-sinefrina em produtos derivados de CA geralmente é realizada por cromatografia a líquido acoplada a detector de ultravioleta (CLAE/UV ou CLAE/DAD). A principal limitação desta metodologia devese a falta de especificidade. Um método apropriado para quantificação desta amina por extração em fase sólida (SPE) e cromatografia a gás acoplada com detector de ionização de chama (CG/DIC) e detector de massas (CG/EM) em produtos de origem vegetal ainda não se encontra disponível. Assim, o objetivo deste trabalho foi desenvolver e validar um novo procedimento mais seletivo para a quantificação e identificação de p-sinefrina em produtos derivados de CA por CG/DIC, seguido pela confirmação por CG/EM, após clean-up por SPE e derivação. Derivados trifluoroacetilados e oxazolidinas foram preparados, após reação com anidrido trifluoroacético e cicloexanona, e analisados por ressonância magnética nuclear (RMN 1H e 13C), CG/DIC e GC/EM. Cartuchos de troca iônica (SCX) e a cicloexanona apresentaram melhor desempenho como fase estacionária e reagente de derivação, respectivamente. O método de CG/DIC apresentou-se linear na faixa de concentração de 125-500 mg% (r=0,9997; R2= 0,9993; y = 535,11x-30063). A precisão intra-dia (expressa como DPR%) foi de 3,60% e a precisão inter-dias foi de 3,59%. A recuperação média estabelecida a partir do extrato de CA foi de 78,1 ± 3,64%. Melhor seletividade foi alcançada por confirmação do derivado oxazolidina de p-sinefrina por CG/EM. O método validado foi aplicado para a análise de psinefrina em derivados de CA como frutos, extrato e composto emagrecedor com resultados satisfatórios. / Citrus aurantium var. amara (CA) is a plant belonging to the Rutaceae family, characterized by the presence of adrenergic amine p-synephrine in its fruits. p- Synephrine is a phenyletilamine structurally similar to ephedrine, the main active component of plants of the genus Ephedra (Ephedraceae). After the ban of Ephedra and/or ephedrine in dietary supplements in April 2004 by FDA (Food and Drug Administration), "Ephedra-free" products generally containing CA associated with other herbs extracts, proteins, and aminoacids, gain the international market. The quantification of p-synephrine in products containing CA is currently out by HPLC/UV or HPLC/DAD analysis. The limit of this approach is that of lack in the specificity. An appropriated method to the quantification of this amine by solid phase extraction (SPE), gas chromatography method with flame ionization detection (GC/FID) and mass spectrometry detector (GC/MS) in herbal products, need to be developed. In this way, the aim of this study was to develop and validate a new procedure for quantification and identification of p-synephrine in CA products based on GC/FID followed by GC/MS confirmation analysis, after clean-up by solid phase extraction and derivatization. Trifluoroacetylated derivatives and oxazolidines were prepared after reaction with trifluoroacetic anhydride and cyclohexanone (CH), respectively, and were subjected to analysis by nuclear magnetic ressonance (NMR 1H and 13C), GC/FID and GC/MS. The results indicate that SCX stationary phase for SPE and CH agent afforded the best performance. The GC/FID method developed was validated and was found to be linear in the range of 125-500 mg% (r=0.9997; R2= 0.9993; y = 535,11x-30063). Intra-day precision (calculated as %R.S.D) was 3.60% and interday precision was 3.59%. Mean recovery from extract of CA was 78.1 ± 3.64%. The method selectivity was further improved by confirmation of oxazolidine derivative of p-synephrine by CG/MS. The validated method was applied to analysis in products containing CA like extract, fruits and weight loss preparation with satisfactory results.

Citrus aurantium L. var. amara. (CA) é uma árvore pertencente à família Rutaceae que apresenta a amina adrenérgica p-sinefrina como principal constituinte de seus frutos. A p-sinefrina constitui-se uma feniletilamina similar em termos estruturais com a efedrina, principal alcalóide do gênero Ephedra (Ephedraceae). Em abril de 2004, após a proibição da utilização de suplementos alimentares contendo Ephedra e/ou efedrina pela agência americana FDA (Food and Drug Administration), suplementos conhecidos como "Ephedra-free", geralmente contendo CA associado com extratos de outras plantas, proteínas e aminoácidos, foram lançados no mercado internacional. A quantificação de p-sinefrina em produtos derivados de CA geralmente é realizada por cromatografia a líquido acoplada a detector de ultravioleta (CLAE/UV ou CLAE/DAD). A principal limitação desta metodologia devese a falta de especificidade. Um método apropriado para quantificação desta amina por extração em fase sólida (SPE) e cromatografia a gás acoplada com detector de ionização de chama (CG/DIC) e detector de massas (CG/EM) em produtos de origem vegetal ainda não se encontra disponível. Assim, o objetivo deste trabalho foi desenvolver e validar um novo procedimento mais seletivo para a quantificação e identificação de p-sinefrina em produtos derivados de CA por CG/DIC, seguido pela confirmação por CG/EM, após clean-up por SPE e derivação. Derivados trifluoroacetilados e oxazolidinas foram preparados, após reação com anidrido trifluoroacético e cicloexanona, e analisados por ressonância magnética nuclear (RMN 1H e 13C), CG/DIC e GC/EM. Cartuchos de troca iônica (SCX) e a cicloexanona apresentaram melhor desempenho como fase estacionária e reagente de derivação, respectivamente. O método de CG/DIC apresentou-se linear na faixa de concentração de 125-500 mg% (r=0,9997; R2= 0,9993; y = 535,11x-30063). A precisão intra-dia (expressa como DPR%) foi de 3,60% e a precisão inter-dias foi de 3,59%. A recuperação média estabelecida a partir do extrato de CA foi de 78,1 ± 3,64%. Melhor seletividade foi alcançada por confirmação do derivado oxazolidina de p-sinefrina por CG/EM. O método validado foi aplicado para a análise de psinefrina em derivados de CA como frutos, extrato e composto emagrecedor com resultados satisfatórios. / Citrus aurantium var. amara (CA) is a plant belonging to the Rutaceae family, characterized by the presence of adrenergic amine p-synephrine in its fruits. p- Synephrine is a phenyletilamine structurally similar to ephedrine, the main active component of plants of the genus Ephedra (Ephedraceae). After the ban of Ephedra and/or ephedrine in dietary supplements in April 2004 by FDA (Food and Drug Administration), "Ephedra-free" products generally containing CA associated with other herbs extracts, proteins, and aminoacids, gain the international market. The quantification of p-synephrine in products containing CA is currently out by HPLC/UV or HPLC/DAD analysis. The limit of this approach is that of lack in the specificity. An appropriated method to the quantification of this amine by solid phase extraction (SPE), gas chromatography method with flame ionization detection (GC/FID) and mass spectrometry detector (GC/MS) in herbal products, need to be developed. In this way, the aim of this study was to develop and validate a new procedure for quantification and identification of p-synephrine in CA products based on GC/FID followed by GC/MS confirmation analysis, after clean-up by solid phase extraction and derivatization. Trifluoroacetylated derivatives and oxazolidines were prepared after reaction with trifluoroacetic anhydride and cyclohexanone (CH), respectively, and were subjected to analysis by nuclear magnetic ressonance (NMR 1H and 13C), GC/FID and GC/MS. The results indicate that SCX stationary phase for SPE and CH agent afforded the best performance. The GC/FID method developed was validated and was found to be linear in the range of 125-500 mg% (r=0.9997; R2= 0.9993; y = 535,11x-30063). Intra-day precision (calculated as %R.S.D) was 3.60% and interday precision was 3.59%. Mean recovery from extract of CA was 78.1 ± 3.64%. The method selectivity was further improved by confirmation of oxazolidine derivative of p-synephrine by CG/MS. The validated method was applied to analysis in products containing CA like extract, fruits and weight loss preparation with satisfactory results.

Submitted by Viviane Lima da Cunha (viviane@biblioteca.ufpb.br) on 2016-06-13T13:31:14Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1146243 bytes, checksum: 2ac3979c90cb9c57ae77cc1c96b6704e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-13T13:31:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1146243 bytes, checksum: 2ac3979c90cb9c57ae77cc1c96b6704e (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / The chemical dependency today is a widely discussed phenomenon, and among the most destructive drugs stands out the crack. The crack addicts, who seek treatment to dump the drug use, face abstinence – surrounded period of anxiety. With a large number of crack addicts in our country, it is necessary to search for alternative measures that help to reduce anxiety levels. The present study aimed to investigate the clinical anxiolytic potential of Citrus aurantium L. on crack addicts in abstinence. The study was developed with internal users admitted to therapeutic farms in Paraiba, Brazil. The sample consisted of 51 volunteers, who were divided into three groups. To elicit anxiety, were used the Public Speech Simulation (PSS). Physiological measurements was evaluated in the experiment using appropriate equipment, as also psychological measures of anxiety levels, using the State Trait Anxiety Inventory (STAI) and Analog Scale Humo (EAH). The essential oil of Citrus aurantium L. was administered by nebulization. The experiment was developed in unique and individual sessions and consolidated in four stages: (I) Basal (II) Stressor, (III) During and (IV) Final. Data analysis was performed using parametric and non-parametric statistical methods. The results showed that the volunteers of the groups using the OE kept anxiety levels controlled during the PSS, with statistical difference when compared to "control". Volunteers, who used the OE also maintained stable levels of the "discomfort" and "Cognitive Impairment" measured by EAH in moments of realization of PSS. It follows that internal crack users individuals in abstinence have a high trait anxiety, and the EO Citrus aurantium L. nebuliser presented acute anxiolytic effect on internal crack users in abstinence submitted to PSS. / A dependência química na atualidade é um fenômeno amplamente discutido, entre as drogas de maior poder de destruição destaca-se o crack. Os dependentes de crack que procuram tratamento para abandono do uso da droga enfrentam a abstinência, período cercado de ansiedade. Com um número elevado de dependentes de crack em nosso país faz-se necessário à busca por medidas alternativas que contribuam para a redução dos níveis de ansiedade. O estudo teve como objetivo a investigação clínica do potencial ansiolítico do Citrus aurantium L. em dependentes de crack em estado de abstinência. O estudo foi desenvolvido com usuários internos em fazendas terapêuticas na Paraíba. A amostra foi constituída por 51 voluntários, que foram subdivididos em três grupos. Para eliciar a ansiedade foi utilizado o Teste de Simulação de Falar em Público (TSFP). Foram mensuradas medidas fisiológicas nos momentos do experimento utilizando equipamentos adequados e medidas psicológicas dos níveis de ansiedade utilizando o Inventário de Ansiedade Traço- Estado (IDATE) e a Escala Analógica do Humo (EAH). O óleo essencial do Citrus aurantium L. foi administrado por nebulização. O experimento foi desenvolvido em sessões únicas e individuais e se consolidou em quatro momentos: (I) Basal, (II) Estressor, (III) Durante e (IV) Final. A análise dos dados foi realizada utilizando métodos estatísticos paramétricos e não-paramétricos. Os resultados demostraram que os voluntários dos grupos que utilizaram o OE mantiveram níveis de ansiedade controlados durante a realização do TSFP, apresentando diferença estatística em relação ao grupo ―Controle‖. Os voluntários que utilizaram o OE também mantiveram estáveis os níveis de ―Desconforto‖ e ―Prejuízo Cognitivo‖ mensurados pela EAH nos momentos de realização do TSFP. Conclui-se que indivíduos usuários de crack internos em abstinência apresentam um alto traço de ansiedade e que o OE de Citrus aurantium L. por nebulização apresentou efeito ansiolítico agudo em usuários de crack internos em abstinência submetidos ao TSFP.

Made available in DSpace on 2015-05-14T12:59:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2188223 bytes, checksum: 91cbd456f19ae2f1e9821a11aa90b5a1 (MD5) Previous issue date: 2011-12-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Noise is a physical agent which can cause both auditory and extra-auditory effects. Regarding the extra-auditory effects related to noise, anxiety is a symptom still little studied, but it is a common psychiatric disorder in the population exposed to occupational noise. It could be defined as an emotional response characterized by physiologic, psychological and behavioral reaction to situations of threat or undetermined danger. In order to treat or minimize the anxiety disorders, there are available anxiolytics drugs such as benzodiazepines, selective serotonin reuptake inhibitors, monoamine oxidase inhibitors and tricyclic antidepressants, among others. However, they cause side effects, which often preclude the use of the drug. Presently, there have been developed researches which employ essential oils to treat anxiety, reducing the possibility of side effects. The Citrus aurantium L. essential oil has not only demonstrated action on the central nervous system by reducing the behavioral effects in animals, but also it has been used by health professionals to restore emotional well-being, reduce depression, anxiety and stress. The aim of this study was to evaluate the effect of the Citrus aurantium L essential oil on the anxiety of workers exposed to occupational noise. It was a clinical trial (phase II) and model of experimental study. The study sample consisted of 48 workers of a paper industry in Paraíba, Brazil, exposed to occupational noise, aged between 20 and 51 years, all male. The workers, who met the inclusion criteria for the study, were divided into four groups, matched according to their ages: experimental high anxiety group (n = 8), high-anxiety control group (n = 8), experimental low anxiety group (n = 16) and low-anxiety control group (n = 16). Workers in the experimental group were exposed to inhalation of Citrus aurantium L. (10 mL) for 25 minutes alone in a room with a stretcher. The psychological parameters (STAI-state) as well as the physiological parameters (blood pressure, heart rate, extremities temperature and electrical conductance of the skin) were evaluated before and immediately after the exposure, in another room. The individuals of the control groups have participated of the same trial, but without inhalation of the essential oil. The results were analyzed by means of parametric ANOVA tests and Pearson s correlation. There was a positive correlation between STAI-trait and SRQ-20, with the high anxiety groups presenting higher scores. Through the application of the STAI-state, before and after inhalation of Citrus aurantium L., it was demonstrated a reduction of the scores of those with low and high experimental anxiety. Concerning the measure of physiological parameters, it was observed a reduction of the blood pressure, heart rate and skin electrical conductance only in the low anxiety group. Therefore, the results are evidence of the Citrus aurantium L anxiolytic effect immediately after an acute intervention in the groups of low anxiety and high anxiety, regarding psychological parameters; but, considering the physiological parameters, only in the low anxiety group. / O ruído é um agente físico que pode causar efeitos auditivos e extra-auditivos. Tratando-se dos efeitos extra-auditivos, a ansiedade é um sintoma ainda pouco estudado relacionando-se com o ruído, mas é uma desordem psiquiátrica comum na população exposta ao ruído ocupacional. Para tratar ou minimizar os transtornos de ansiedade existem disponíveis medicamentos ansiolíticos, tais como, benzodiazepínicos, antidepressivos, dentre outros. Entretanto, estes provocam efeitos colaterais (sonolência, tontura, diminuição da atenção e concentração), fato que, muitas vezes, impede o uso do medicamento. Atualmente, pesquisas utilizando óleos essenciais buscam o tratamento da ansiedade, reduzindo a possibilidade de ocorrência de efeitos colaterais. O óleo essencial de CiaL. demonstrou ação no Sistema Nervoso Central, reduzindo os efeitos comportamentais em animais (permanência em campo aberto, entrada e saída no labirinto em cruz-braços aberto e tempo de permanência no mesmo) e vem sendo utilizada por profissionais da saúde para restabelecer o bem-estar emocional, reduzir depressão, ansiedade e estresse. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do óleo essencial de CiaL. na ansiedade de trabalhadores expostos ao ruído ocupacional. Tratou-se de um ensaio clínico, cuja amostra do estudo foi composta por 48 trabalhadores expostos a ruído ocupacional de uma indústria de papel da Paraíba com idade entre 20 e 51 anos, sendo todos do sexo masculino. Os trabalhadores, que atenderam aos critérios de inclusão da pesquisa, foram divididos em quatro grupos de forma não-aleatória, pareados de acordo com a idade e de acordo com liberação do setor de produção: grupo alta ansiedade experimental (n=8); grupo ata ansiedade controle (n=8); grupo baixa ansiedade experimental (n=16) e grupo baixa ansiedade controle (n=16). Os trabalhadores do grupo experimental foram expostos à inalação do CiaL. (10 mL), durante 25 minutos, individualmente em uma sala e os parâmetros psicológicos (Inventário de Ansiedade Traço e Estado- estado) e fisiológicos (pressão arterial, frequência cardíaca, temperatura de extremidade e condutância elétrica da pele) foram avaliados antes e imediatamente após a exposição. Os indivíduos dos grupos controle participaram do mesmo ensaio clínico, mas sem inalação do óleo essencial. Os resultados foram analisados por meio de teste paramétricos ANOVA e correlação de Pearson. Observou-se correlação positiva entre Inventário de Ansiedade Traço e Estado -traço e Self report questionnaire-20, com escores mais elevados nos grupos alta ansiedade. Com a aplicação do IDATE-estado, antes e depois da inalação do Citrus aurantium L., demonstrou-se redução dos escores para os grupos baixa e alta ansiedade experimental. Na mensuração dos parâmetros fisiológicos, observou-se redução da pressão arterial, frequência cardíaca e condutância elétrica apenas para o grupo baixa ansiedade. Portanto, os resultados encontrados evidenciam o efeito ansiolítico do CiaL. ,imediatamente após intervenção aguda, nos grupos de baixa ansiedade/alta ansiedade conforme parâmetros psicológicos e apenas no grupo de baixa ansiedade, considerando os parâmetros fisiológicos.

The strong advertising appeal, the search for a good physique, and the improvement in physical performance, has risen the popularity of food supplements and other therapies with slimming supplements based on plant extracts. Since the law exempts food supplements from registration, they are easy targets for importation, commercialization e consumption by the population, which worsens malpractice cases of adulterations. Thus, the objectives of the present work were: research the presence of stimulants in food supplements for both slimming and weight gain; study the addition of synthetic caffeine in natural products based on plants used for weight loss; develop chromatographic methods using HPLC with photodiode detection to detect caffeine, salicin, ephedrine, hordenine, tyramine, octopamine and synephrine (including the L and D enantiomers). The stimulants were separated by reverse phase chromatography using octadecylsilane columns (C18). For L and D synephrine, chromatography with chiral phase of β-cyclodextrin was used. Detection limits varied from 0.02 mg L-1 to 0.35 mg L-1, while quantification limits ranged from 0.07 mg L-1 to 1.16 mg L-1 for the separation of stimulants in food supplements. For analyses of caffeine in herbal products, the LOD and LOQ were 0.048 mg L-1 and 0.16 mg L-1, respectively. For the anlysis of the enantiomers of p-synephrine, the L enantiomer presented a detection limit of 0.11 mg L-1 and quantification limit of 0.36 mg L-1, while the D enantiomer exhibited a detection limit of 0.41 mg L-1 and a quantification limit of 1.36 mg L-1. Each method developed was then applied to the sample, which were, dietary supplement samples (n = 47), herbal products (n = 100), and fruits of Citrus aurantium. Caffeine was the most frequent of the studied stimulants, often exceeding the labeled content and the maximum dose per day recommended (420 mg). The food supplements presented caffeine, synephrine and ephedrine as main stimulants in 53% of the studied samples. / O forte apelo do mercado publicitário, aliado à busca por um corpo padrão e à melhora no desempenho físico faz com que a popularidade dos suplementos alimentares e a associação destes com outras terapias envolvendo compostos emagrecedores a base de plantas seja cada vez maior. A lei que isenta de registro os suplementos alimentares, os torna alvo de fácil importação, comercialização e consumo pela população em geral, agravando ainda a prática de adulteração sobre os mesmos. Logo, este trabalho teve como objetivos: pesquisar a presença de estimulantes em suplementos alimentares para fins de emagrecimento, estudar a incidência de cafeína sintética adicionada em produtos naturais à base de plantas utilizadas para perda de peso; desenvolver métodos cromatográficos emplregando HPLC com detecção com arranjo de fotodiodos (DAD) para a determinação de cafeína, salicina, efedrina, hordenina, tiramina, octopamina e sinefrina (incluindo seus enantiômeros L e D). Os estimulantes foram separados por cromatografia de fase reversa em colunas de octadecilsilano (C18) e os enantiômeros por cromatografia de par iônico com fase quiral de β ciclodextrina. Os limites de detecção (LD) variaram de 0,02 mg L-1 a 0,35 mg L-1, já os limites de quantificação (LQ) ficaram na faixa de 0,07 mg L-1 e 1,16 mg L-1 na separação dos estimulantes em suplementos alimentares. Para as análises de cafeína em produtos naturais a base de plantas, os LD e LQ foram 0,048 mg L-1 e 0,16 mg L-1 respectivamente. Para os enantiômeros da p-sinefrina, o enantiômero L apresentou LD de 0,11 mg L-1 e LQ de 0,36 mg L-1, já o enantiômero D exibiu um LD de 0,41 mg L-1 e LQ de 1,36 mg L-1. Cada método desenvolvido foi posteriormente aplicado em amostras de suplementos alimentares (n=47), produtos naturais à base de plantas (n=100) e fruto de Citrus aurantium. Dos compostos estudados, a cafeína foi a que se apresentou mais frequente, muitas vezes excedendo os teores rotulados nos produtos, ou então a dose máxima recomendada por dia (420 mg). Já os suplementos alimentares apresentaram cafeína, sinefrina e efedrina como principais estimulantes em 53% das amostras estudadas.