Bielefeld, Univ., Diss., 2003. / Computerdatei im Fernzugriff.

Bielefeld, Univ., Diss., 2003. / Computerdatei im Fernzugriff.

Thesis (M.S.)--University of Hawaii at Manoa, 2003. / Includes bibliographical references (leaves 79-88). Also available via World Wide Web.

Universiẗat, Diss., 2003--Bielefeld.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:37:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 377290 bytes, checksum: eb36e78ff600491e214dd9a22c4c4723 (MD5) Previous issue date: 2008-02-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Six semi-selective media used for detection of Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis (Cmm), developed elsewhere and reported in international literature, were evaluated for their efficacy to recover 20 Cmm isolates collected in different regions of Brazil. From these, only MB1M, D2ANX, and KBT allowed the growth of Cmm isolates, thus indicating differential resistance of Brazilian isolates to the antimicrobials used in the semi-selective media. Because they restrict the pathogen, the media SCM, mSCM and DCNS cannot be used for epidemiological studies in Brazil, such as detection on seed lots. MB1M, D2ANX and KBT also proved to be suppressive to contaminants associated with three tomato seed samples and two tomato leaf samples. The morphological characterization of colonies of each isolated was performed in these semi-selective media in comparison with the 523 media (Kado & Heskett, 1970). There was variation in the size, color and necessary time for formation of the colonies in the different semi-selective media. However, the typical characteristics of the colonies, as circular form, raised surface, smooth texture and smooth edges had been same for all the isolates, in all the semi-selective media. Thus, the format of colonies is a solid characteristic for the identification of Cmm. The biochemical tests proved to be useful to detect variability among the Brazilian isolates, as well among other isolates reported in the literature. The characteristics which showed consistency could be recommended for confirmation of the identity of Cmm isolates. In a complementary study, hypersensitivity reaction (HR) of all 20 Cmm isolates were positive on Mirabilis jalapa and Phaseolus vulgaris, but not on Coffea arabica. / Seis meios semi-seletivos utilizados para detecção de Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis (Cmm), desenvolvidos em outras localidades e relatados na literatura, foram avaliados quanto à sua eficácia em permitir o crescimento de 20 isolados de Cmm, provenientes de diferentes regiões do Brasil. Quando as substâncias antimicrobianas foram excluídas dos meios semi-seletivos, houve crescimento dos isolados de Cmm em todos os meios básicos. Quando da adição desses compostos, apenas os meios MB1M, D2ANX e KBT permitiram o crescimento dos isolados, indicando, que os isolados brasileiros apresentam sensibilidade a alguns compostos antimicrobianos usados nos meios semi-seletivos. Devido os meios SCM, mSCM e CNS terem reprimido o crescimento de todos os isolados de Cmm, estes não devem ser utilizados em estudos epidemiológicos no Brasil, tais como detecção em lotes de sementes. Avaliou-se a supressividade nos meios MB1M, D2ANX e KBT, sendo que todos foram mais eficientes que o meio padrão (meio 523) em suprimir o crescimento de contaminantes associados a sementes e folhas de tomateiro, em todas as amostras testadas. Realizou-se, também, a caracterização morfológica das colônias de cada isolado de Cmm nesses três meios semi- seletivos e no meio padrão. Houve variação no tamanho, cor e tempo necessário para formação das colônias nos diferentes meios. Porém, as características típicas das colônias, como forma circular, superfície elevada, textura lisa e bordos inteiros foram as mesmas para todos os isolados, em todos os meios. Assim, o formato de colônias é uma característica estável para a identificação do patógeno. Os testes diagnósticos realizados permitiram verificar a variabilidade bioquímica e fisiológica entre os isolados brasileiros, bem como em relação a outros isolados relatados na literatura. Algumas características se mostraram consistentes e devem, portanto, ser utilizadas na confirmação da identidade de isolados, após a comprovação da fitopatogenicidade. Estudos de reação de hipersensibilidade (HR) foram conduzidos em três espécies de plantas não-hospedeiras de Cmm, como: Mirabilis jalapa, Phaseolus vulgaris e Coffea arabica. Reações típicas de HR foram observadas somente em Mirabilis jalapa e Phaseolus vulgaris.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:37:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 4434052 bytes, checksum: e6bd53f46965b44a3dcdbb9a5a63b4ff (MD5) Previous issue date: 2008-02-19 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / This work aimed to select tomato prokaryotic phylloplane residents for biocontrol purposes, by using Xanthomonas campestris pv. vesicatoria and Alternaria solani as challenging pathogens. Additionally, to perform a screening test using detached leaves. Consequently, leaves from healthy tomato plants were collected at Viçosa, MG and epiphytic prokaryote populations were extracted by shacking them in PBS (0,85% NaCl in 0,1M phosphate buffer saline, pH 7.0) following sonication (60Hz, 20 minutes) and serial dilution and plating in culture medium. Three hundred bacterial isolates were obtained and preserved in refrigerator, with periodical tubetube transfer, in a refrigerator. The screening was performed in two selection cycles. In the first selection in greenhouse, with three replicates per isolate and Xanthomonas campestris pv. vesicatoria as challenging pathogen, 79 isolates were able to reduce disease by 82%. In a second selection cycle, using 6 replicates per isolate, the 33 isolates were able to reduce severity by 50% in average. The 33 isolates had their antagonistic potential tested against the tomato fungal and bacterial pathogens Pseudomonas syringae pv. tomato, Pseudomonas corrugata, Xanthomonas campestris pv. vesicatoria, Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis, Alternaria solani and Corynespora cassiicola in vitro conditions. Out of the 33 isolates, the isolate RFK-24 inhibited growth of Xathomonas campestris pv. vesicatoria, Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis and Alternaria solani while isolate RFS-183 was able to inhibit Alternaria solani, Xanthomonas campestris pv. vesicatoria, Pseudomonas syringae pv. tomato e Pseudomonas corrugata, but none of them inhibited Corynespora cassiicola. Being RFK-24 and RFS- 183 the ones with a wider antagonistic potential out of the 33 previously selected, they were chosen for continuing the research with detached leaves and the challenging pathogens Alternaria solani e Xanthomonas campestris pv. vesicatoria. There was a positive correlation between disease severity reduction in plants the greenhouse and in detached leaves, for both antagonists. For situations involving large number of isolates to undergo mass screening, the approach with detached organs may replace the laborious and time consuming greenhouse screening. / O presente trabalho teve como objetivo isolar procariotos residentes de filoplano de tomateiro como agentes de biocontrole contra o patógeno Xanthomonas campestris pv. vesicatoria. 300 isolados foram obtidos a partir de folhas sadias de tomateiros coletadas na micro-região de Viçosa-MG, as quais foram submetidas à extração das populações procarióticas epifíticas em solução de tampão fosfato (PBS) com emprego de ultra-som (60Hz, 20 min.) e semeadura de diluições em série em placas de Petri contendo meio 523. Em casa-de-vegetação, numa primeira etapa 79 isolados apresentaram capacidade de reduzir, em média, 82 % da severidade de doença. Desses, numa segunda etapa, 33 isolados apresentaram redução média da severidade de doença em 50 %. Os 33 isolados foram submetidos a testes de antibiose in vitro, em que foi avaliada a potencialidade em inibir o crescimento bacteriano e fúngico dos seguintes patógenos do tomateiro: Pseudomonas syringae pv. tomato, Pseudomonas corrugata, Xanthomonas campestris pv. vesicatoria, Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis, Alternaria solani e Corynespora cassiicola. Dos 33 isolados pré- selecionados verificou-se que o isolado RFK-24 foi capaz de inibir o crescimento dos patógenos, Xanthomonas campestris pv. vesicatoria, Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis e Alternaria solani e o RFS-183 em inibir o crescimento dos patógenos Alternaria solani, Xanthomons campestris pv. vesicatoria, Pseudomonas syringae pv. tomato e Pseudomonas corrugata, mas ambos não inibiram o crescimento da Corynespora cassiicola. Os dois isolados foram selecionados para ensaios in vivo e em folíolos destacados, contra os patógenos desafiantes Alternaria solani e Xanthomons campestris pv. vesicatoria. Para ambos foi observada a correlação entre a severidade de doença apresentada em casa-de-vegetação e os resultados em folíolos destacados, como a inibição da germinação de conídios do patógeno fúngico e a supressividade em meio semi-seletivo dos antagonistas sob o patógeno bacteriano. Os resultados obtidos com o método com folíolos destacados e sua correlação com os dados de biocontrole experimental em casa-de-vegetação permitem deduzir que o uso de folíolos destacados pode ser utilizado como método para seleção massal.

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