Orientador: Tereza Cristina Cardoso / Banca: Maria Cecília Rui Luvizotto / Banca: Alessandra Mara Alves Ragozo / Resumo: Atualmente, as culturas celulares são consideradas uma das ferramentas mais importantes na virologia. Os meios de cultura utilizados na manutenção destes sistemas não oferecem capacidade às células de adsorver e se multiplicar em matrizes plásticas sem a adição suplementar de soro fetal bovino (SFB). Entretanto, o uso do SFB não é aconselhável devido às variações encontradas entre os lotes, o alto grau de proteína animal e a possibilidade da presença de agentes infecciosos. Além dos aspectos sanitários, existe o aspecto ético em relação à obtenção deste produto biológico. Com o aumento dos ensaios in vitro a quantidade estimada de produção de soro fetal bovino no mundo é de aproximadamente 500.000 litros/ano, isto significa, mais de 1.000.000 de fetos bovinos sacrificados para obtenção de SFB. O objetivo deste estudo foi cultivar as células CER (chicken embryo related) em diferentes meios de cultura: M-VSFM, 293- SFMII, VP-SFM, VP-SFM AGT, Glasgow, Leibovitz 15, adicionados de 2mg/ml ou 5mg/ml de IGF-1 (Insulin-like Growth Factor) e verificar a possibilidade das estirpes virais Lukert e Farangher de se adaptarem neste sistema. Nesta cultura a expressão da fibronectina e da laminina (LB1 e LB2) foram dectadas por imunofluorescência e imunoperoxidase indireta, respectivamente. As monocamadas de células CER foram infectadas pela estirpe Lukert e Farangher, sendo a m.o.i (multiplicidade de infecção) utilizada de 1.0. Após três passagens, o RNA viral foi extraído para determinar as substituições genéticas. A região hipervariável do gene VP2 foi amplificada por RT/PCR. Para confirmar as mutações, os produtos da PCR foram seqüênciados e comparados com as seqüências de VDIB publicadas no GenBank. Os resultados demonstraram que o meio VP-SFM e 5µg/mL de IGF-1 aplicado às culturas foi o melhor para a adaptação direta do cultivo das monocamadas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Currently, the cell culture are considered one of the tools most important in the virology. The culture medium used in the maintenance those systems do not offer capacity to the cells of attachment and if spread in plastic surfaces without the supplementary addition of foetal bovine serum (FBS). However, the use FBS is not advisable due to batch-tobatch variation in composition, the high animal protein content, and the possibility of the presence of infectious agents. Beyond the sanitary aspects, exists the ethical aspect in relation to the attainment of this biological product. With the increase of in vitro assays the amount of FBS produced in the world is estimated at approximately 500.000 litres/year, this carry in 1.000.000 bovine fetuses sacrified for FSB attainment. The aim of this study was to adapt the CER cells (chicken embryo related) on different medium: M-VSFM, 293-SFMII, VP-SFM, VP-SFM AGT, Glasgow, Leibovitz 15, supplemented by 2mg/ml or 5mg/ml IGF-1 (Insulin-like Growth Factor) and to verify the possibility the Lukert and Farangher viral strain adapted in this system. The expression of the fibronectin and laminin (LB1 and LB2) were detected by immunofluorescence and indirect immunoperoxidase, respectively. The CER cells monolayer had been infected by Lukert and Farangher strain, being the m.o.i (infection multiplicity) used of 1.0. After three passages, viral RNA was isolated to determine the genetic changes. The hypervariable regions of the VP2 gene was amplified by RT/PCR. To confirm the genetic changes, PCR products were sequenced and compared to the sequences of the GenBank published VDIB strain.The results had demonstrated that the medium VP-SFM and 5µg/mL IGF-1 applied to the cultures was optimum for the direct adaptation of the culture of the monolayers without addition of FBS. In relation the detection of the extracellular protein, the fibronectin was induced... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciencias Agrarias / Made available in DSpace on 2012-10-17T00:48:34Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Foram avaliados no cultivo de Lactobacillus plantarum o meio de cultura SS e os meios constituídos de melaÇo de cana-de-açúcar a 3%, enriquecidos com extrato de levedura 0,5%, citrato de amônio 0,5% e acetato de sódio 0,5% (meio experimental 1) e extrato de levedura 0,5%, acetato de sódio 0,5%, fosfato de amônio 0,5%, citrato de amônio 0,2%, Tween 80 0,1% e sulfato de manganês 0,005% (meio experimental 2). Os experimentos foram realizados em triplicata em fermentador de 5 litros com volume útil de 3,5 litros, sob agitação de 150 rpm, temperatura 35°C 0,1°C, aeração de 0,7 vvm, pH inicial de 6,0 0,2, tempo de fermentação de 24 horas, inóculo aproximado de 6,0 Logl0 UFC/ml e tomada de amostras em intervalos de 2 horas. Lactobacillus plantarun cresceu nos três meios estudados, confirmando a viabilidade dos meios experimentais para o cultivo desta espécie. O número médio de células viáveis (Log10 UFC/ml) ao final das fermentações foi de: 28,68 no caldo MRS; 19,36 no meio experimental 1 e 25,80 no meio experimental 2. A concentração final de biomassa foi maior no meio MRS (2,22 g/l), enquanto nos meios experimental 1 e 2 foi de 1,37 e 2,01 gL, respectivamente. O consumo de açúcares totais foi maior no meio MRS (87,21%), seguido dos meios experimental 1 e 2 com 60,11% e 83,80%.

Orientador: Mary Luci de Souza Queiroz / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T05:13:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dantas_DeniseConceicaoMesquita_D.pdf: 3363409 bytes, checksum: 45e0f5535d4bc39dc990f5f2b9bb1047 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Neste trabalho estudamos os efeitos imunofarmacológicos do extrato da Chlorella vulgaris (ECV), sobre a resposta imunológica de camundongos BALB/c _infectados com a bactéria Usteria monocytogenes. . O efeito do ECV foi verificado sobre o número de células progenitoras hematopoiéticas da medula óssea para a série granulócito-macrófago (CFU-GM) e sobre a atividade estimuladora de colônia (CSA), presente no soro de animais infectados com a L. monocytogenes, tratados com o ECV e tratados e infectados. Além disso, investigamos nestes animais os efeitos do ECV sobre a atividade de células "Natural Killer" (NK) e sobre a resposta específica 'a infecção através das citocinas produzidas pelas sub-populações de células T auxiliares "T helper-1" (Th1) através dos níveis de interleucina-2 (IL-2) e interferon-gama (IFN-y), e de "Thelper-2"(Th2) pelos níveis de interleucina-4 (IL-4) e interleucina-10 (IL-10). Para a realização dos experimentos os animais foram tratados por via oral durante cinco dias consecutivos com o ECV na dose de 50 mg/Kg/dia. Ao final do tratamento, os animais foram infectados com uma dose sub-letal da bactéria (1x104 bactérias/animal). Os animais inoculados com a bactéria apresentaram uma mielosupressão que foi revertida pelo tratamento prévio com o ECV, observada nos animais tratados e infectados em relação àqueles somente infectados. Essa mesma relação também foi verificada quanto a atividade estimuladora de colônia (CSA), investigada no soro destes animais, nas 48 e 72 horas após a infecção. Com relação a atividade de células NK, o ECV produziu uma estimulação dessas .células mesmo em animais controle (sem infecção), promovendo um aumento mais pronunciado, na vigência da infecção; entretanto, quando os animais foram previamente tratados com o ECV e infectados um aumento adicional pôde ser detectado. o ECV também demonstrou ter um efeito estimulador sobre a produção de citocinas. Nossos resultados apresentaram um aumento da IL-2 em animais tratados com o ECV e infectados em relação aos controles. Em resposta à infecção, todos os grupos demonstraram um aumento de IFN-y que, entretanto, observou-se serem mais elevados nos animais que receberam tratamento prévio com o ECV e foram infectados, do que em animais apenas inoculados com a bactéria. Porém, o aumento significativo de IFN-y foi detectado 72 horas após a infecção, comparado ao respectivo grupo somente infectado. Das citocinas produzidas por Th2 (IL-4 e IL-1 O) e em relação ao grupo controle, a L-4 apresentou um ligeiro aumento, verificado apenas no grupo tratado e infectado (48h), contrariamente à IL-10 que não apresentou níveis alterados em grupo algum. Para avaliar a resistência dos animais à infecção, realizamos uma curva de sobrevida utilizando uma dose letal da L. monocytogenes (3x105 bactérias/animal), e duas doses do ECV, 50 e 500 mg/Kg/dia durante cinco dias de tratamento prévio à infecção. A dose de 50 mg/Kg protegeu 20% dos animais infectados e a de 500 mg/Kg do ECV conferiu a estes animais uma sobrevida de 52%, quando comparados aos animais controle, apenas infectados, onde a mortalidade foi de 100%. Diante dos resultados obtidos neste trabalho, podemos sugerir que o ECV aumenta a resistência dos camundongos BALB/c infectados com a L. monocytogenes .Através da modulação da resposta imunológica inespecífica verificada pelo aumento dos precursores hematopoiéticos da medula óssea, da atividade de células NK; como também pelo aumento da resposta Th1, através dos níveis de IFN-y e IL-2 que se sobrepôs sobre a resposta Th2 / Abstract: In the present study, we have investigated the effects of the Ch/orella vu/garis extract (CVE) on the growth and differentiation of bone marrow hematopoietic cells (CFU-GM), and on serum colony stimulating activity (CSA) in normal and Usteria monocytogenes infected mice. We have also investigated the effects of the CVE on Natural Killer cells and on Th1 cells activity (by IL-2 and IFN-y production) and Th2 activity (by IL-4 and IL-10) in normal and infected mice.Mice were pre-treated with dive doses of CVE (50 mg/Kg/day) and then infected with a sub lethal dose (1x104 bacterialanimal) of L monocytogenes. The treated mice showed an increased number of CFU-GM in the bone marrow and increased serum colony stimulating activity, at 48 and 72 hours after the infection, when compared to the infected mice. In relation to the NK cells activity, the CVE produced a significant increase in normal (non-infected) animals compared to the controls. Similarly, the infection alone praduced a signiticant increase on NK activity at 48 and 72 hours after the infection. When the animais were pre-treated with CVE and infected, an additional increase on the NK activity was observed. Regarding the cytokines production, in the treated and infected animals there was an increase on IL-2 and IFN-y compared to the contrails. However, the IFN-y showed an increase in the treated and infected group in relation to the infected group at 72 hours after the inoculation of the bacteria. The Th2 activity was not significant. Just the IL-4 showed an increase in the treated and infected group (48h) compared to the control group. The CVE treatment (50 and 500 mg/Kg) of mice infected with a dose of 3x105 bacterialanimal, which was lethal for all the non-treated contrails, has produced a dose response protection which led to a 20% and 52% survival, respectively / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Maria Lucia Furlan Wada / Texto em ingles e portugues / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T20:50:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Haas_VeradaRosa_M.pdf: 5069943 bytes, checksum: 4bd884484141aaef6d2214bdb72ce74a (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: As células Vero, uma linhagem estabelecida a partir de células renais de macaco verde africano (Cercopithecus aethiops), foram mantidas utilizando a técnica de cultivo em sanduíche. Dois tipos de sanduíche foram utilizados vidro/colágeno e colágeno/colágeno, com 10% e 20% de soro feta! bovino (SFB), com o objetivo de se verificar o comportamento das células Vero neste método de cultivo. As células foram avaliadas quanto a morfologia utilizando-se a coloração com hematoxilina-eosina (HE), citoquimicamente por meio de azul de toluidina pH 4,0 (A T) e xylidine Ponceau pH 2,5 (XP), e imunocitoquimicamente com anticorpos anti-colágeno IV e anti-Iaminina. As células cultivadas durante um período de 7 dias, no sanduíche vidro-colágeno com 10% e 20% de SFB cresceram em ambos os substratos. As células que permaneceram sobre o vidro apresentaram morfologia variada com predomínio de células alongadas, sendo que em vários locais as lamínulas não apresentavam células mostrando que as mesmas foram capazes de migrar contra a força da gravidade em direção à matriz colagênica. Essas células que migraram para o colágeno I apresentaram formato alongado ou arredondado, sendo que este último predominou quando houve infiltração para o interior do gel colagênico. Observou-se também a contração do mesmo, ou seja, a redução do tamanho e a formação de dobras no gel de colágeno. Nas regiões onde as células não infiltraram, estas cresceram formando uma lâmina basal. No cultivo com a técnica de sanduíche colágeno/colágeno as células aderiram, proliferaram e infiltraram no colágeno existente abaixo e sobre as células, apresentando alterações na forma celular, caracterizando um processo de diferenciação induzido pelo substrato. O colágeno apresentou contração nas duas camadas do sanduíche. Nas regiões em que não houve infiltração das células Vero para o interior do gel, houve a formação de um tecido com características semelhantes as de um epitélio, com produção de uma lâmina basal, sendo este resultado igual ao observado no sanduíche vidro/colágeno. Na análise cito química, as células Vero, em ambos os sanduíches, quando coradas com A T mostraram núcleos, nucléolos e citoplasma basófilos e em algumas regiões evidenciou-se grânulos basófilos no meio extracelular. Quando as amostras foram coradas com XP , as células Vero apresentaram intensa coloração vermelho-alaranjado, onde pôde ser visualizada uma região acelular mais intensamente corada, entre as células e o colágeno, representando uma lâmina basal, que em algumas regiões era evidente e em outras não. Nesta região, os resultados imunocitoquímicos confirmaram a presença de uma membrana basal rica em colágeno IV e laminina. Tendo por base estes resultados, conclui-se que as células Vero apresentam comportamento similar quando cultivados sobre o colágeno ou quando cultivadas pela técnica de sanduíche. As células em contato com o colágeno diferenciaram-se e passaram a exibir características de um tecido epitelial, inclusive com a formação de uma lâmina basal, ou se infiltraram para o interior do gel colagênico. O comportamento celular é similar quando se usa 10% ou 20% de SFB no meio de cultivo, sendo que neste último caso, a formação de uma membrana basal foi mais evidente e ocorreu menor infiltração das células para o interior do gel / Abstract: Vero cells were cultured using the sandwich technique. Two sandwich types, the glass/collagen and collagen/coUagen variations, were used with 10% and 20% fetal calf serum (FCS), intending to define Vero cell behavior in these conditions. The cells were morphologically analyzed with hematoxilin-eosin staining, while cytochemical information was obtained with Toluidine blue at pH 4.0 (TB) and xylidine Ponceau at pH 2.5 (XP), and immunocytochemical data with anti-coUagen IV and anti-Iaminin antibodies. Cells cultured in the glass/collagen sandwich with 10% and 20% FCS grew on both substrata after 7 days. The cells on the glass surface had varied shapes but were predominantly elongated. In some regions of the coverslip, there were no ceUs, showing that these were able to migrate against gravity into the collagen covering. The migrated cells were elongated or rounded, with a greater number of rounded cells as they moved into the collagen I gel. The contraction, seen as folding and shrinkage of the collagen gel, was observed in this case. In the regions where cells did not penetrate the collagen layer, a basal lamina was produced. During cultivation in the collagen/collagen sandwich, the cells adhered, proliferated and infiltrated into the upper and lower gels, resulting in altered shapes, typical of substrate induced differentiation. Both collagen substrata contracted. In regions where cells did not penetrate the collagen layer, they formed a separating basal lamina as observed in the glass/collagen sandwich. Cytochemical analysis in both types of sandwich, with TB staining showed basophilic nuclei, nucleoli, and cytoplasm. In some regions, there were also extracellular vbasophilic granules. When the samples were XP stained, the Vero cells were stained strongly orange-red, bordered by a more intensely staining, acellular basallamina, although this layer was not always present. In the basal lamina, the presence of collagen IV and laminin was immunocytochemically confirmed. With these results, it can be concluded that Vero cells behave similarly when cultured on collagen or with the sandwich technique. Vero cells in contact with collagen undergo differentiation, expressing epithelial cell characteristics, including the formation of a basal lamina, or they may infiltrate into the collagen gel. Cell behavior is similar when 10% or 20% FCS is added to the culture medium, although the basal lamina is more evident, and there is less cellular penetration into the collagen in the higher serum concentration / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Nora Marcela Haun Quiros / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-13T22:40:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_MaristelaFreitas_M.pdf: 5394098 bytes, checksum: 196918fd6013613b4ad87f3241daf8bf (MD5) Previous issue date: 1991 / Resumo: A Doença de Chagas é uma infecção parasitária que afeta milhões de latino-americanos, causando nas ares endêmicas, uma entre 10 mortes nos indivíduos de 25 a 64 anos de idade. A quimioterapia da doença é baseada principalmente no uso de dois medicamentos, Nifurtimox (Bay 2502 : Lampit) e Benznidazole (Ro 7-1051 ; Radanil, Rochagan). Ambas as drogas possuem atividade genotóxica comprovada tanto in vitro, quanto in vivo. Assim sendo, resolvemos investigar os efeitos citóxicos do pigmento biossintético de Chromobacterium violaceum (Cepa BB-78), o 1,3-dihidro-2H-inol-2 ona, comumente denominado como Violaceína, bem como de seus derivados, Bromo-Violaceína e Matilol-Violaceína, já que este composto apresentou um perfil biológico interessante, mostrando-se com baixo poder hemolítico, ação microbiana e o mais importante, atividade tripanocida in vitro. Entretanto, Violaceína exibiu uma alta toxidade para células V79/M8, assim como Bromo-Violaceína. Já o derivado Metilol-Violaceína exibiu uma citotoxidade baixa em relação aos outros 2 compostos. A atividade citotóxica de Nifrutimox e Benznidaole também foi testada em células V79/M8. Entretanto, estes 2 compostos se comportaramde maneira similar ao Metilol-Violaceína, tanto na sobrevivência celular, quanto para a inibição da síntese de DNA. Sabe-se no entanto, que os efeitos tóxicos dos medicamentos são devidos à sua biotransformação niotrorredutiva para radicais que possam reagir com constituintes celulares, causando efeitos deletérios. Dosagens preliminares realizadas durante o tratamento das células com Violaceína, indicaram a presença de 'H IND. 2¿'O IND. 2¿ no meio reacional, apontando assim, para uma possibilidade de ser uma espécie pesponsável pelos efeitos cito e genotóxicos encontrados nestes estudos. ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Chagas¿Disease is a parasitic infection that effects million of Latinamericans, inducing in endemic areas one in ten deaths in humans between 25 to 64 years old. Disease¿s chemotherapy is based on the use of two drugs, Nifurtimox (Bay 2502 : Lampit) and Benznidazole (Ro 7-1051 ; Radanil : Rochagen). Both drugs have a confirmed genotoxic activities in vitro and in vivo. We decided to test the cytotoxic effects of the biosynthetic pigment of Chromobacterium violaceum (strain BB-78), usually knowm as Violacein. This last compound has interesting biological profiles as low hemolytic effect, microbian action and principally in vivo trypanocide activity. Violacein and Br-Violacein exhibited a high toxity in V79/M8 cell. The Methhyl-Violacein derivative showed a low cytotoxicity compared to the other two compounds. Nifurtimox and Benznidazole cytotoxic activity was also tested in V79/m8 cells. However, the profile of both was similar to Methyl-Violacein in cellular survival and DNA inhibition synthesis experiments. It is known that the toxic effects of those drugs are due to their nitroreductive biotransformation to reactive free radicals, interacting with cellular constituents causing the deleterious effects. On prelimary studies using incubation medium of Violacein treatments in V79/M8 cells we observed 'H IND. 2¿'O IND. 2¿ formation, a reactive species that may be responsible for the detected cyto and genotoxic effects. ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Ciências Biológicas

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciencias Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Neurociências. / Made available in DSpace on 2012-10-23T02:32:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 245549.pdf: 688863 bytes, checksum: 08229c2ff00580bb3b9b76fe6d568954 (MD5) / As células da crista neural (CN) têm origem a partir das bordas entre a placa neural e a epiderme durante o processo de neurulação. Na neurulação estas células sofrem transição de fenótipo epitelial para mesenquimal tornando-se migratórias, onde se destinam a povoar vários órgãos e tecidos em desenvolvimento. As regiões povoadas pelas células da CN ao longo do eixo embrionário formam subdivisões: cranial, vagal, truncal e sacral e poduzem uma enorme variedade de derivados, incluindo neurônios, células gliais, melanócitos, células endócrinas e glandulares além de tecidos esqueléticos e conjuntivos da cabeça e pescoço, além das meninges cerebrais. As células da crista neural truncal (CNT) são compostas de populações de precursores já determinados e células pluripotentes capazes de originar diversos fenótipos. O destino dos precursores pluripotentes vai depender de vários fatores e o microambiente nos sítios de migração exerce papel fundamental neste processo. Vários fatores de crescimento têm sido identificados como sendo capazes em direcionar progenitores multipotentes da CN inclusive da região truncal para específicos tipos celulares incluindo o fator de crescimento de fibroblasto 2 (FGF2). Nesse estudo, verificamos que o FGF2 aumenta a proliferação de células da CNT influenciando na divisão celular e direcionando estas células para um estágio mais indiferenciado, sendo este resultado mais evidente em concentrações de 10ng/mL. Em adição, o FGF2 estimula a renovação e proliferação dos precursores mais indiferenciados e pluripotentes da CNT mantendo-os indiferenciados. Ao mesmo tempo, este fator estimula programas de diferenciação celular para as linhagens glial e neuronal às expensas da diferenciação melanocítica e miofibroblástica, cuja diferenciação terminal só ocorre com a retirada de FGF2. The neural crest (CN) is originated at the edges between the neural plate and the epidermis during the neurulation. During this process, the NC cells undergo an epithelial-mesenquimal transition, became migratory, and populate many organs and tissues in development. The NC is classified in four subdivisions according the embryonic axis: cranial, vagal, trunk and sacral. The NC cells produce an enormous variety of derivatives, including glial cells and neurons of the peripheral nervous system, melanocytes, endocrine and glandulares cells in addition to the skeletal and connective tissue of the head and neck. The trunk NC cells (TNC) correspond to a mixed populations already defined precursors and pluripotentes cells capable to originate diverse phenotypes. The fate of pluripotent precursors depends on the microenvironmental factor found in the migratory pathways and in final destiny of these cells. Some growth factors have been identified directing multipotent TNC to specific cell phenotypes including the fibroblast growth factor 2 (FGF2). In this study, we verify that the FGF2 increases the proliferation of TNC cells and maintain these cells in an undifferentiated state, being the most evident result obtained with concentrations of 10ng/mL. In addition, FGF2 stimulates the renewal and proliferation of multipotent precursors. At the same time, the factor stimulates programs of cellular differentiation for glial cells and neuronos at the expenses of the melanocytic and myofibroblastic differentiation, whose terminal differentiation only occurs with the FGF2 withdrawal.

Submitted by Programa de Pós-graduação em Biotecnologia (mebiotec.ufba@gmail.com) on 2017-09-14T14:50:18Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Final- Roseane Vieira.pdf: 1667496 bytes, checksum: 33e7b129ca1046278a4c54de04972385 (MD5) / Approved for entry into archive by Edvaldo Souza (edvaldosouza@ufba.br) on 2017-09-19T18:55:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação Final- Roseane Vieira.pdf: 1667496 bytes, checksum: 33e7b129ca1046278a4c54de04972385 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-19T18:55:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Final- Roseane Vieira.pdf: 1667496 bytes, checksum: 33e7b129ca1046278a4c54de04972385 (MD5) / Capes / A meta desse trabalho é testar fatores do processo de cultivo que podem diretamente influenciar no rendimento da produção de exopolissacarídeos (EPS) por uma cepa de Enterobacter amnigenus LABEM em meio salino. A produção de EPS em meio salino foi pensada para dar suporte a um potencial processo de reutilização in situ de água de produção que é gerada durante a recuperação de petróleo em poços maduros situados em plataformas marinhas. Dessa forma o EPS produzido poderia ser utilizado para suplementar a água de injeção, que é também utilizada no processo de recuperação de petróleo. A base do meio, portanto, é a água de produção salina suplementada com uma fonte adicional de carbono para ajudar a sustentar o crescimento microbiano. O glicerol foi testado em um trabalho anterior por ser uma substância de baixo custo e facilmente disponível na indústria do petróleo e de biocombustível. Essa pesquisa dá prosseguimento ao trabalho mencionado e os testes de otimização foram baseados em informações de literatura. Foram escolhidos 6 fatores nutricionais com potencial para influenciar o aumento da produção de EPS: (i) adição de biosurfactante, (ii) adição de etanol, (iii) combinação de etanol e biosurfactante, (iv) complementos de substâncias nitrogenadas orgânicas e inorgânicas como: ácido casamínico, L-aspargina e nitrato de amônio, respectivamente, (v) adição de substância estressante/estimulante como o ácido bórico e (vi) mudanças na relação C:N. Os três primeiros fatores foram testados através da experimentação estatística de “Superfície de Resposta”. Os complementos nutricionais foram testados de acordo com concentrações sugeridas em literatura. A melhor produção de EPS (4,8 g.L-1) aconteceu nas condições de 240 rpm, 35°C e com a suplementação de 0,015% de surfactante e 2% de etanol em pH 7. Esse valor foi 3 vezes maior do que o controle (1,49 g.L-1). As suplementações com ácido bórico, ácido casamínico, L-aspargina e nitrato de amônio apresentaram uma produção média de 2,21; 2,94; 2,46 e 2,63 g.L-1, respectivamente. Portanto, conclui-se que a adição do surfactante e etanol aumentaram significativamente a produção de EPS pela cepa Enterobacter amnigenus LABEM em meio salino

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-11-25T16:31:14Z No. of bitstreams: 1 2014_AndressaFabioLucianodosSantos.pdf: 2463096 bytes, checksum: 0f94b500d050b15c1c40a228929105d3 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2014-11-26T11:09:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_AndressaFabioLucianodosSantos.pdf: 2463096 bytes, checksum: 0f94b500d050b15c1c40a228929105d3 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-26T11:09:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_AndressaFabioLucianodosSantos.pdf: 2463096 bytes, checksum: 0f94b500d050b15c1c40a228929105d3 (MD5) / O objetivo deste estudo foi avaliar a citotoxicidade transdentinária de sistemas adesivos universais sobre cultura primária de células pulpares. Setenta discos de dentina foram obtidos de dentes terceiros molares humanos íntegros e divididos em sete grupos considerando sua condutância hidráulica. Os discos foram montados em câmaras pulpares artificiais e sob sua superfície pulpar, foram cultivadas células por 48 horas. Os grupos foram definidos da seguinte forma: G1 - controle (PBS), G2 - convencional de 3 passos (Adper™ Scotchbond™ Multi-purpose); G3 - autocondicionante de passo único (Clearfil™ SE3 Bond); G4 e G5 - autocondicionante de passo único e convencional de 2 passos, respectivamente (Scothbond™ Universal); G6 e G7 - autocondicionante e convencional de 2 passos, respectivamente (Peak® Universal Bond). Decorridos 24 horas, foram avaliados o metabolismo celular pelo teste do MTT e a morfologia pela MEV. O meio de cultura em contato com as células foi coletado e utilizado para análise de morte celular utilizando o sistema de imagem celular GE InCell Analyzer 2000. Os dados foram avaliados pelos testes não-paramétricos de Kruskal-Wallis seguido do teste comparativo de Mann-Whitney (p<0,05). Todos os sistemas adesivos testados reduziram a porcentagem do metabolismo celular, comparados com o grupo controle. Os mais citotóxicos foram os grupos G5 e G2. Os grupos G2, G3, G4, G5, G6 e G7 reduziram o metabolismo em 33,7%, 19,2%, 16,83%, 42,27%, 28,83% e 8,86%, respectivamente. O potencial citotóxico dos adesivos foi G5 > G2 > G6 > G3 > G4 > G7. O G6 produziu o efeito mais fraco de indução de morte por apoptose nas células da polpa, por outro lado, os grupos G2 e G7 resultaram nos maiores valores (16,58% e 15,03%), respectivamente. A maior porcentagem de necrose foi induzida pelo grupo G2 (63,44%), sendo esta estatisticamente diferente de todos os grupos, exceto para o G4. Morte celular por necrose foi o tipo mais prevalente induzida pelos adesivos estudados. Todos os sistemas adesivos testados causaram morte (apoptose e necrose), lesão celular e alterações de morfologia, o que indica potencial citotóxico para as células pulpares. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The aim of this study was to evaluate the transdentinal cytotoxicity of universal adhesive systems using pulp cells culture. Seventy dentin disks were obtained from intact human third molars and divided into seven groups considering their hydraulic conductance. The disks were adapted on artificial pulp chamber and cells were seeded over their pulpal surface. After 48 hours, the chambers were inverted and the adhesive procedures were performed according to the groups: G1 - control (PBS), G2 – etch-and-rinse 3 step (Adper ™ Scotchbond ™ Multi-purpose); G3 – self-etch single step (Clearfil ™ SE3 Bond); G4 and G5 – etch-and-rinse single step and self-etch 2 steps, respectively (Scothbond ™ Universal); G6 and G7 – etch-and-rinse and self-etch 2 steps, respectively (Peak Universal Bond ®). After 24 hours, cell metabolism was evaluated by MTT assay and morphology by SEM. The culture medium in contact with the cells was collected and used to analyze death cell using the system image GE Incell Cell Analyzer 2000. Data were analyzed by non-parametric Kruskal-Wallis test followed by comparison Mann-Whitney (p <0.05). All adhesive systems reduced the percentage of cell metabolism compared with the control group. The lowest value of SDH production was observed for G5, followed by G2. The reduction of cell metabolism were of 33.7%, 19.2%, 16.83%, 42.27%, 28.83% and 8.86% for G2, G3, G4, G5, G6 and G7, respectively. The cytotoxic potential of the adhesive systems were G5> G2> G6> G3> G4> G7. G6 produced the weakest effect of inducing cell death by apoptosis. On the other hand, G2 and G7 groups produced the highest values (16.58% and 15.03%), respectively. The highest percentage of necrosis was induced by G2 (63.44%), statistically different from all groups, except from the G4. Necrotic cell death was the most prevalent type of cell death for all adhesives tested. All adhesive systems caused cell death (apoptosis and necrosis), reduction of cellular metabolism and alterations on cell morphology, indicating their cytotoxic potential for pulp cells.

Orientador: Mary Anne Heide Dolder / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-21T12:09:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lombello_ChristianeBertachini_M.pdf: 9479025 bytes, checksum: 9986dd2f70f0ff8ce310e7c3fa559cfc (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Foram realizados sete experimentos de cultura de túbulo seminíferos abrangendo variações das condições de fragmentação, manipulação e de cultura. As variações aplicadas à cultura visaram minimizar os sinais de desorganização e degeneração tecidual. Verificou-se que as técnicas de fragmentação introduziram alterações na organização do epitélio seminífero, como o deslocamento de populações celulares germinativas em direção ao lúmen tubular. Como conseqüência desta movimentação celular apareceram também espaços intercelulares no epitélio germinativo. Esta desorganização tecidual interfere na integridade das interações entre as populações celulares presentes, necessárias para seu desenvolvimento. Apareceram sinais de degeneração celular progressivos como a descaracterização das células de Sertoli, acúmulo de gotículas de Iipídios, vacuolização nuclear e citoplasmática e presença de resíduos celulares. As alterações não puderam ser revertidas. O teste de complementos no meio de cultura (soro fetal bovino-SFB, e hormônio folículo estimulante-FSH) objetivou o aprimoramento da técnica. A presença de SFB ativou populações celulares inespecíficas, as células mióides, causando alterações morfológicas nestas cél ulas, como o arredondamento nuclear. Estas células cresceram desordenadamente e a parede tubular apresentou-se espessada. Já a presença de FSH teve efeito positivo, retardando o aparecimento dos sinais de degeneração. Foi importante estabelecer quais as condições ideais de cultura, meio HAMFlO:DMEM, na presença de HEPES(15mMlml), bicarbonato de sódio (1,2g/1), BSA(1g/I), MIX(O,lmMll), FSH(O,4ug/ml) e gentamicina(lOO/-lg/ml), em estufa a 32°C, por um período de 3 dias. Nestas condições obtivemos o mínimo possível de alterações do epitélio seminífero. Estabelecemos então um padrão das alterações introduzidas através da técnica de cultura em si. Frente a este controle foram realizados dois experimentos de aplicação do cádmio às culturas de túbulos seminíferos. Estes experimentos foram realizados num período de três dias, com fixações diárias, utilizando as condições de cultura pré-estabelecidas. Foram testadas três concentrações do metal (1;10 e IOO/-lM) durante uma hora de exposição. Também foi realizado um controle com exposição direta dos túbulos seminíferos em cultura ao cádmio I/-lM. Foi constatada a intensificação e o aceleramento dos sinais de degeneração devido à presença do metal no meio de cultura / Abstract: Cultures of seminiferous tubules were made according to seven experiments including variations of fragmentation conditions, of manipulation and of culture medium. Tubule fragmentation and manipulaÍion introduced disturbances of the eminiferous epithelium, such as the dislocation of germ cells directed towards the tubular lumen. As a consequence of this movement there were intercellular spaces. The epithelial integrity is fundamental for cellular interactions necessary for cellular development. During the culture period cellular degeneration occurred progressively. Morphological disturbances of the Sertoli cells, marked accumulation of lipid droplets, nuclear and citoplasmatic vacuolization and the presence of cellular debris were observed. The addition of calffetal serum (CFS) to the medi um activated myoid cell populations and caused morphological alterations of these cells (such as nuclear rounding). These changes were accompanied by the thickening of the tubular wall. On the other hand the presence ofFSH in the culture medium was very positive, delaying and reducing degeneration signs. It was important to establish the disturbances caused by the culture techniques and the period during which the seminiferous tubules can be maintained with minimum alterations to be used as a control situation. Two experiments were made wíth cadmium applied to the semíníferous tubules cultures. These experiments were based on culture conditions established by the previous experiments and they were monitored with daily fixations during a three day period. Three concentrations of this metal (1, 10 e 1O0_M) were tested during a one hour period of exposition. A control of direct exposition oftubules to the metal (l_M) was carried out entire culture período As a consequence of cadmium present ín the culture, degeneration was intensified and accelerated. It was established that cadmium can act directly on germ cells causing degenerative alterations / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Nora Marcela Haun Quiros / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-23T13:00:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RodriguezCarvajal_JaimeAntonio_D.pdf: 7418205 bytes, checksum: 44f4a47d48d171c03138c929be69d78f (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Foi estudada a atividade antiulcerogênica, a toxidade aguda e subcronica e a citoxicidade da trans-desidrocrotomina (DHC) um pequeno diterpno isolado da arvore Cróton cajucara Benth. As propriedades antiulcerogênicas da DHC foram estudadas em quatro modelos de úlcera gástrica induzida em rato. A administração oral de DHC 100mg/Kg mostrou um significativo efeito antiulcerogênico nos modelos de úlcera induzida por estresse hipotérmico, etanol e ligadura do piloro. Não foram observados efeitos significativos sobre as lesões gástricas induzidas pela indometacina nem modificações em alguns parâmetros gástricos como conteúdo de muco, taxa de secreção gástrica, pH e conteúdo de ácido depois do tratamento com DHC.OS efeitos toxicológicos agudos da DHC foram avaliados em camundongos. Os valores das 'LD IND. 50¿ foram 876,0 mg/Kg e 47,2 mg/Kg para as mudanças oral e intraperitoneal respectivamente. No experimento de toxicidade subcrônica ratos machos e fêmeas Wistar foram tratados oralmente durante 35 dias com doses de DHC 25,50, 100 mg/Kg. Ao término do tratamento foi observado aumento significativo, do peso dos fígados, dose ¿ dependente nos ratos de ambos os sexos e redução significativa no nível plasmático da fosfotalase alcana e do colesterol além do aumento da enzima gama glutamil transpeptidase na dose alta (100mg/Kg) em ratos fêmeas / Abstract: The major diterpene isolated from Cróton cajucar Benth trans-Dehydrocrotonin (DCD), was assayed for antiulcerogenic activity, acute and subcronic and toxicity and citotoxicity. The antiulcerogenic properties of DHC were studied on four induced gastric models in rat. The oral dose of 100 mg/Kg DHC showed a dignificance antiulcerogenic effect on hypothermic restrain stress, ethanol and pylorus ligature ulcers. No significance changes were found after DHC treatment on indomethacin-induced gastric lesions r on some gastric parameters such as wall mucus secretion rate, pH and total acid content. Acute toxilogical effects of DHC were assessed in mice. The 'LD IND.50¿ values were 876,0 mg/Kg and 47,2 mg/Kg for oral and intraperictoned administrations, respectively.In the subchoronic toxicity experiment rats were orally a significant dose-dependent increase in liver weighth was observed in both male and femele rats. Whereas in felefe rats a significance reduction in plasma alkaline.phospate and cholesterol levels and a increase sof gamma glutamyl trasnspeptasee and cholesterol levls and an icrease aos ggamma glutamyl transpeptidase was found only at high as doses (100 mg;/Kg ). The subcronic admintration of DHC also induc, noted by turgid tume-faction, microvamuete degeneration and cuclear alternatives . Depise the good ant-ucerogenic ou results suggest that the long term use of DHC my induce damage / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Ciências Biológicas