Reproduction de : Thèse d'exercice : Médecine : Nancy 1 : 2003. / Thèse : 03NAN11029. Titre provenant de l'écran-titre.

Reproduction de : Thèse d'exercice : Médecine : Nancy 1 : 2007. / Titre provenant de l'écran-titre.

Thèse d'exercice : Médecine : Nancy 1 : 2009. / Titre provenant de l'écran-titre.

La structure coiffe est une structure protectrice retrouvée à l'extrémité 5' des ARN messagers (ARNm). Elle est requise pour la stabilité, le transport, l'épissage et la traduction des ARNm.La coiffe est synthétisée par trois activités enzymatiques successives : les activités ARN 5'-triphosphatase, ARN guanylyltransférase et ARN (guanine-7) méthyltransférase. Cette structure doit de plus être dégradée par des enzymes spécifiques pour permettre le recyclage des ARNm. Plusieurs protéines virales ont été découvertes possédant l'une ou l'autre de ces diverses activités de synthèse et de dégradation de la structure coiffe. Ces enzymes viraux représentent donc des modèles très intéressants pour étudier ces activités catalytiques, permettant soit de mieux comprendre les mécanismes similaires chez les métazoaires, ou de cibler ces activités chez les virus à l'aide de molécules inhibitrices. Cette thèse présente l'étude des plus petites ARN 5'-triphosphatases et ARN guanylyltransférase connues à ce jour, les protéines A449R et A103R du virus Paramecium bursaria chlorella de type 1, ainsi que du premier enzyme viral de dégradation de la structure coiffe découvert : la protéine D10 du virus de la vaccine. L'étude de l'ARN 5'-triphosphatase A449R a permis de déterminer l'implication des acides aminés Glu24, Glu26 et Glu165 dans l'interaction avec des ions divalents au centre catalytique de l'enzyme, ainsi que leur nature essentielle pour l'activité ARN 5'-triphosphatase. De plus, les résultats obtenus démontrent que l'interaction de l'enzyme avec les ions ne stabilise pas l'interaction de l'enzyme avec son substrat d'ARN, tel que précédemment observé avec l'ARN triphosphatase de la levure Saccharomyces cerevisiae. Chez A449R, la liaison des ions semble plutôt positionner les acides aminés du centre catalytique pour la catalyse. Ces données démontrent que des enzymes reliés au niveau phylogénique possèdent des mécanismes distincts pour une même activité essentielle de synthèse de la structure coiffe. Ces particularités pourraient être ciblées pour le développement d'antiviraux ou d'antifongiques spécifiques. Parallèlement, une caractérisation cinétique complète de toutes les étapes du mécanisme d'ARN guanylyltransférase de la protéine A103R a été entreprise.La production d'un schéma de l'énergie libre impliquée dans le déroulement de la réaction a permis de préciser l'étape limitante du mécanisme, ainsi que la nature spontanée de la réaction in vitro . Les ARN guanylyltransférases étant très conservées entre les métazoaires, levures et virus, cette caractérisation a permis d'acquérir quantité d'information sur ce mécanisme catalytique peu connu. Cette étude nous mène au questionnement des implications pour la cellule de la synthèse exclusive d'une coiffe guanosine par les ARN guanylyltransférases. Finalement, la caractérisation du mécanisme d'action de la protéine D10 ainsi que la modélisation du site actif de l'enzyme ont permis de générer le premier modèle mécanistique pour un enzyme viral de dégradation de la structure coiffe. Ce mécanisme est régi par la présence de deux ions divalents et d'une molécule d'eau coordonnée par les acides aminés Glu141, Glu145 et Glu132 respectivement. Étant donné le peu de conservation de la séquence primaire entre cet enzyme viral et les enzymes de dégradation de la coiffe des métazoaires, il est possible que le mécanisme utilisé par ces enzymes diffère du mécanisme découvert pour la protéine D10. Cet enzyme deviendrait donc une cible virale potentielle supplémentaire.La caractérisation de ces trois protéines virales a permis d'accroître significativement notre connaissance mécanistique fondamentale des activités catalysées par ces enzymes retrouvés tant chez les virus que chez l'humain et les levures. L'étude de l'ARN 5'-triphosphatase A449R a démontré que des enzymes très proches au niveau phylogénique peuvent posséder des mécanismes divergents. De plus, des études futures pourront démontrer dans quelles mesures les mécanismes découverts pour l'ARN guanylyltransférase A103R et l'enzyme de dégradation de la coiffe D10 seront applicables à d'autres enzymes de même famille présents chez d'autres organismes. Il serait intéressant de poursuivre ces études en incorporant une utilisation accrue de la bioinformatique pour la modélisation des structures tertiaires des enzymes viraux, ainsi que l'utilisation de collections d'analogues de nucléotides pour caractériser les sites actifs des enzymes et ouvrir la voie au développement d'inhibiteurs.

The RNA cap structure is a fundamental feature of most known eukaryotic mRNAs and some viral RNAs, It is important for the stability, transport and translation of mRNAs. It is co-transcriptionally synthesized via the action of 3 consecutive enzymatic reactions: (1) A RNA triphosphatase which cleaves off the 5' terminal phosphate of nascent RNAs; (2) A RNA guanylyltransferase which transfers a GMP moiety onto the acceptor RNA; (3) A RNA (guanine-N7) methyltransferase which methylates the cap guanine at the N7 position. Through the end of the 1990's until now, the crystal structures of several capping enzymes have been solved. However, these structures, although very insightful in themselves, failed to provide any instructive information on several key issues regarding enzyme-substrate interactions. For instance, one of the first breakthrough crystallographic studies in RNA capping chemistry led to the elucidation of the yeast RNA triphosphatase structure (the Cet1 protein). However, in the crystal structure, the Cet1 protein was bound to a sulphate molecule, which was hypothesised to be mimicking the product of the RNA triphosphatase reaction- a phosphate molecule.The inability to capture the RNA triphosphatase in complex with its ligands is probably on account of the inherent thermodynamic instability of this protein when bound to RNA or a nucleotide. A structural definition of the active site of the yeast RNA triphosphatase in complex with an appropriate substrate is still lacking. In addition, the elucidation of the structure of the RNA guanylyltransferase of the Paramecium bursaria chlorella virus -1 (PBCV-1) in several different conformations has been a landmark study which greatly contributed towards the understanding of the catalytic pathway of this model enzyme. On the other hand, despite the presence of the natural substrate-GTP, within the active site of the enzyme, the rationale behind the GTP specificity of RNA guanylyltransferase remains poorly understood. Moreover, a molecular mechanism for the RNA guanylyltransferase reaction is still missing. Finally, the importance of the RNA cap for the process of eukaryotic translation is undisputable. However, the relationship between the RNA cap and translation has been mostly studied indirectly through proteins which bind to the cap structure. Most studies pertaining directly to the impact of the binding of the RNA cap structure have been restricted to investigating the inhibitory potential of various cap analogues on the translation process. Studies on the effects of modified RNA caps at the 5' ends of RNAs have only started in the last few years, and more importantly, the necessity of the N7-methyl group on RNA cap analogues had not been addressed. This thesis therefore aims to provide a structural insight into the structural dynamics of enzyme-ligand(s) interactions of the model S. cerevisiae's RNA triphosphatase and the PBCV-1 RNA guanylyltransferase. In addition, we show that purine analogues can be a useful tool for the study of several cellular processes, such as RNA translation. In the process we have uncovered a novel class of RNA capping enzyme in the flavivirus genus of the Flaviviridae family of RNA viruses, thus providing a more succinct insight into the flaviviral replication complex.

INTRODUCTION: La tendinopathie de la coiffe des rotateurs (TCR) entraine au quotidien des douleurs et faiblesses musculaires et une diminution du contrôle moteur à l'épaule. OBJECTIFS: Les objectifs de cette étude étaient i) d'effectuer une revue de littérature pour identifier les méthodes de quantification de la proprioception de l'épaule utilisées en laboratoire et en clinique et d’en présenter les qualités métrologiques, ii) d'évaluer l'efficacité d’un programme d’entrainement neuro-musculaire en comparant son efficacité à réduire la douleur à l’épaule et en améliorer la fonction à celle obtenue par des soins usuels de physiothérapie. MÉTHODES: i) Une revue de 5 bases de données a été conduite d’octobre 2015 à juillet 2016 pour documenter les propriétés métrologiques de protocoles d’évaluation de la proprioception à l'épaule. Les études incluses ont été évaluées à l'aide de l’outil de contrôle QualSyst et de l'échelle COSMIN à 4 points. ii) Trente-trois soldats en service actif au sein des Forces armées canadiennes ont été assignés au hasard à 1) programme standardisé supervisé d’entrainement neuromusculaire et contrôle moteur (Exp) ou à 2) soins usuels de physiothérapie (Ctl). Les variables principales étaient les symptômes, la capacité fonctionnelle et les limitations physiques évalués avec le questionnaire Disabilities of the Arm, Shoulder and Hand (DASH) et la variable secondaire était l'indice Western Ontario Rotator Cuff (WORC). Toutes les variables ont été mesurées au départ (T0) et à 6 (T6) et 12 (T12) semaines après l'intervention. La comparaison des effets des interventions a été évaluée à l'aide d’une analyse per protocole (APP), analyse intention-traitement (AIT) et avec une analyse de variance à mesures répétées à 2 voies. RÉSULTATS: i) Vingt et une études (n = 407 participants, 553 épaules) ont été retenues. Les études analysées confirment d'excellents scores méthodologiques avec l’outil QualSyst (88,1 ± 9,9%) et de bons scores avec le COSMIN pour la fidélité (71,1%) et un score de qualité modérée à faible (50%) pour la validité de critère. Les coefficients de corrélation intraclasse (CCI) pondérés pour la fidélité intraévaluateur étaient les plus élevés pour le sens du positionnement articulaire passif et la kinesthésie soit 0,92 ± 0,07 (n = 214) et 0,92 ± 0,04 (n = 74), respectivement. Le mouvement et l'outil les plus fidèles sont la rotation interne à 90 ° d'abduction (CCI = 0,88 ± 0,01 (n = 53)) et le dynamomètre (CCI = 0,92 ± 0,88 (n = 225)). Aucune étude n’a rapporté d’indices de sensibilité au changement. ii) Aucune interaction significative (p ≥ 0,101) de groupe × temps (p ≥ 0,101) n'a été démontrée. Par contre, nous avons observé un effet de temps significatif (p <0,001) pour le questionnaire DASH et l'indice WORC. CONCLUSION: Ces données préliminaires suggèrent que les deux approches proposées conduisent à des améliorations comparables. L'utilisation d'une intervention de groupe axée sur l'exercice a le potentiel d'être aussi efficace qu'une approche un à un plus exigeante en terme de temps de traitement. Ces résultats permettront de fournir aux cliniciens des lignes directrices pour la mesure de la proprioception à l'épaule et l’utilisation d’une approche novatrice de traitement en groupe pour la TCR. Mots clés : Épaule, tendinopathie, contrôle moteur, proprioception, programme d'exercices, soins en physiothérapie / INTRODUCTION: The shoulder is the most mobile joint of the body which means that it heavily relies of an important level of neuromuscular control at all times. A rotator cuff (RC) complex provides stability to the shoulder and often times falls victim to injury, which can produce functional limitations during activities of daily living and work tasks. Individuals affected by an RC tendinopathy often have neuromuscular and proprioceptive deficits. OBJECTIVES: The objectives of this study are to (i) conduct a systematic review to identify methods of quantifying shoulder proprioception in a laboratory and clinical setting and to present the associated psychometric properties. (ii) To evaluate the effectiveness of a novel neuromuscular training program for the upper extremities versus one-on-one physiotherapy care (manual therapy, range of motion exercises, strengthening) for the reduction of shoulder pain and improvement in function with soldiers affected by an RC tendinopathy. METHODS: (i) A review of five databases was conducted from conception to July 2016 to identify studies that reported at least one psychometric property of a shoulder proprioception protocol. The included studies were evaluated using the QualSyst checklist and the 4-point COSMIN scale. (ii) Thirty-three military personnel with the Canadian Armed Forces were randomly assigned to one of the following interventions: 1) Upper Extremity Neuromuscular Training Program; (2) usual physiotherapy care. The main outcomes included symptoms and functional capacity assessed using the Disability of the Arm, Shoulder, and Hand (DASH) questionnaire. A secondary outcome included the Western Ontario Rotator Cuff (WORC) Index. Outcome measures were evaluated at baseline (T0) and 6 (T6) and 12 (T12) weeks post-intervention. The effects of the interventions were evaluated using repeated 2-way variance measures (ANOVAs) for a per-protocol analysis and intention-to-treat. RESULTS: i) Twenty-one studies were included, resulting in 407 participants and 553 evaluated shoulders (n). The weighed intraclass correlation coefficients (ICC) for intra-rater reliability were highest for passive joint position sense and kinesthesia, ICC = 0.92 ± 0.07 (n = 214) and ICC = 0.92 ± 0.04 (n = 74), respectively. The most reliable direction of movement and equipment used were internal rotation at 90° abduction, ICC = 0.88 ± 0.01 (n = 53), and the dynamometer, ICC = 0.92 ± 0.88 (N = 225). ii) No significant group (p ≥ 0.1) or group × time interactions (p ≥ 0.1) were found; though a statistically significant time effect (p < 0.001) was established for the DASH questionnaire and WORC Index. Our preliminary data suggests a marginally better improvement with the control group with all outcomes over 12 weeks. CONCLUSION: The evaluation of shoulder proprioception is most reliable when using a passive protocol with an isokinetic dynamometer for internal rotation at 90° shoulder abduction. The preliminary results of our pilot RCT suggest that both groups statistically improved with a time effect, but that the usual care group further demonstrated clinically significant gains. The results of this study will provide clinicians with potential guidelines for measuring shoulder proprioception in a clinical setting, as well as an innovative approach to group therapy that is potentially less costly and equally as effective as conventional one-on-one physiotherapy. Key words (4-6) : Shoulder, tendinopathy, motor control, proprioception, exercise program, physiotherapy care

Les tendinopathies sont la première cause de maladie professionnelle en France. Elles sont devenues une préoccupation majeure de santé publique. Cependant, leurs mécanismes physiopathologiques restent encore mal définis. Au cours de cette thèse, nous nous sommes intéressés aux phases précoces de la tendinopathie engendrées par une sur-utilisation du tendon supra-épineux (tSE) de la coiffe de rotateurs de l’épaule chez le rat. Nous avons tenté de comprendre les mécanismes à l’origine de cette pathologie afin de pouvoir agir et la traiter en amont de l’apparition des symptômes.Nous montrons que le profil d’évolution moléculaire des collagènes, des protéoglycanes et des glycosaminoglycanes (GAGs) associé aux phases précoces de la sur-utilisation, témoigne d’un profond remaniement matriciel et d’une différenciation chondroïde des fibroblastes tendineux. Nous avons identifié les métalloprotéinases (MMPs) majeures et leurs inhibiteurs (TIMPs) susceptibles d’être impliqués dans ce remaniement. Nos résultats suggèrent que le mécanisme lésionnel initial et les changements matriciels observés sont dus à un processus induit par des médiateurs locaux libérés par les ténocytes et non à une réaction inflammatoire. Enfin, nous avons cherché à établir une corrélation entre les changements moléculaires observés et le degré de sévérité d’une tendinopathie diagnostiquée chez l’Homme. Nous avons montré, sur des échantillons de tendon patellaire humain une relation entre la quantité des GAGs et le score (VISA score) reflétant le degré pathologique du tendon.Cette étude nous a donc permis d’améliorer nos connaissances des phases précoces du processus d’altération du tSE. Cependant, d’importants efforts restent néanmoins à accomplir dans la caractérisation de la pathogenèse précoce notamment pour préciser le contexte biomécanique qui la génère. / Tendinopathies are the first cause of professional diseases in France. They are a major public health concern. However, their physiopathological mechanisms remain poorly understood. This project aimed at investigating the early stages of supraspinatus tendinopathy caused by overuse. Using a rat animal model, we attempted to understand the mechanisms behind this disease in order to act and treat the symptoms upstream of their onset.We have shown that the molecular changes of collagens, proteoglycans and glycosaminoglycans (GAGs) associated with the early events of overuse attest a major matrix remodeling and chondrogenic differentiation of tendon cells. We identified the main metalloproteinases (MMPs) and their inhibitors (TIMPs) that may be involved in this remodeling. Our results further suggest that the initial mechanisms linked to the observed matrix changes are due to local mediators release by tenocytes rather than an inflammatory process. Finally, we attempted to correlate molecular changes observed during overuse with the severity of the tendinopathy diagnosed in humans. We have shown a relationship between the amount of GAGs and the pathological score (VISA score) on human patellar tendons.This study improved our knowledge of the early pathological events of the supraspinatus tendon. However, more remains to be done for characterizing the early stages of tendinopathy especially to clarify the biomechanical context up-stream.

Mon travail de thèse s’est focalisé sur l’étude fonctionnelle de deux méthyltransférases (MTases) de la structure coiffe des ARNs, les protéines nsp14 et nsp16, chez le coronavirus responsable du syndrome respiratoire du Moyen-Orient (MERS-CoV). Notre étude a démonté un processus de méthylation séquentiel. La coiffe est d’abord méthylée en position N7 par nsp14 formant la coiffe-0 (7mGpppN). La coiffe-0 est ensuite méthylée en position 2’OH du premier nucléotide de l’ARN par nsp16 stimulée par nsp10 formant une coiffe 1 (7mGpppN2’Om). De plus, nos résultats suggèrent un mécanisme de régulation allostérique de l’activité de nsp16 par nsp10. Nos résultats indiquent que l’interaction nsp10/nsp16 est régulée par la variation de concentration du SAM et/ou de SAH. Le SAM présent à une concentration physiologique, environ 100 µM dans les cellules, favorise l’assemblage du complexe nsp10/nsp16. La faible concentration intracellulaire du SAH produit accélère la dissociation du complexe nsp10/nsp16 permettant le « turnover » de la réaction enzymatique. Par ailleurs, nous avons cartographié les résidus essentiels au recrutement de l’ARN par nsp16. Les méthylations étudiées jouent un rôle important dans la réplication virale. Nous avons donc criblé des inhibiteurs des deux MTases nsp14 et nsp10/nsp16 respectivement à partir des chimiothèques « Prestwick » et « 2P2I3D ». En résumé, mon travail de thèse a décortiqué les bases moléculaires de méthylation de la coiffe chez le MERS-CoV et a permis d’identifier des inhibiteurs de MTases représentant un point de départ crucial pour le développement d’antiviraux contre les CoV. / My PhD work focused on the functional study of two cap RNA methyltransferases (MTases), nsp14 and nsp16, of the Middle-East respiratory syndrome coronavirus (MERS-CoV). Our study demonstrates a sequential methylation process. The cap is first methylated at the N7 position by nsp14 forming a cap-0 (7mGpppN). It is next methylated at the 2’OH position of the first transcribed nucleotide by nsp16 stimulated by nsp10 forming a cap-1 (7mGpppN2’Om). Furthermore, our results suggest an allosteric regulation mechanism of the nsp16 activity by nsp10. Moreover, our results indicate that the nsp10/nsp16 interaction is regulated by the variation of SAM and/or SAH concentration. SAM present at physiologic concentration, around 100µM in cells, enhances the assembly of nsp10/nsp16. The weak intracellular concentration of SAH by-product speeds up the dissociation of nsp10/nsp16 allowing the enzymatic reaction turnover. In addition, we have mapped the essential residues for the recruitment of the RNA by nsp16. The methylations studied in this work play an important role for viral replication. We have therefore screened inhibitors of nsp14 and nsp10/nsp16 MTases respectively from chemical libraries « Prestwick » and « 2P2I3D ». In summary, my PhD work deciphers the molecular bases of cap RNA methylation of MERS-CoV and identifies MTase inhibitors that represent a crucial starting point for the development of antivirals against CoV.

Afin de pallier l'apparition de souches pathogènes résistantes, de nouveaux traitements aux mécanismes d'action inédits doivent être découverts. Une de ces cibles d'intérêt grandissant est la synthèse de la structure coiffe chez les ARN messagers (ARNm) eucaryotes. Cette structure est l'une des modifications co-transcriptionnelles essentielles pour augmenter la demi-vie des ARNm, promouvoir leur export du noyau vers le cytoplasme et augmenter l'efficacité de leur traduction en protéines. La synthèse de la structure coiffe (m [indice supérieur 7] GpppARN) résulte de trois activités enzymatiques séquentielles qui ajoutent la structure m[indice supérieur 7] Gppp. Initialement, une ARN triphosphatase (RTase) hydrolyse le phosphate gamma de l'ARN. Une ARN guanylyltransférase (GTase) transfert ensuite sur cet ARN un groupement GMP à partir d'un GTP. Finalement, une ARN guanine-N7 méthyltransférase (N7-MTase) vient méthyler cette guanine en position N7. L'activité enzymatique de la GTase est déterminante pour la synthèse de la structure coiffe, ce qui en fait une cible potentiellement puissante afin d'inhiber la synthèse de la structure coiffe. Certaines études ont identifié des analogues de substrat et de produit, la ribavirine et le foscarnet respectivement, comme inhibiteur de GTase. Ces produits agissent sur les différentes GTases puisqu'elles possèdent un site actif très conservés au niveau de la coordination du substrat. Pour augmenter la spécificité des inhibiteurs, il serait avantageux d'identifier des composés ciblant les régions non conservées. Dans la présente étude, la technique du criblage virtuel a permis d'analyser le potentiel d'interaction des molécules à 80 % similaires au substrat naturel avec plusieurs structures de GTases. Parmi les interactions prédites identifiées par le criblage virtuel, une de ces molécules suscitait un intérêt particulier, puisqu'il s'agissait d'un composé utilisé chez l'humain en tant qu'antiviral et immunosuppresseur, l'acide mycophénolique (MPA). L'hypothèse initiale était que ce composé pouvait potentiellement interférer dans l'activité enzymatique des GTases. Pour valider cette prédiction, des essais biochimiques ciblant la réaction complète et les étapes intermédiaires de la GTase de la levure Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae ) ont été utilisées pour définir l'effet du MPA sur la cinétique de cette GTase. En effet, la réaction de GTase se déroule en deux temps : premièrement, une molécule de GTP est hydrolysée par l'enzyme pour former du GMP, lequel est lié de façon covalente à l'enzyme, et deuxièmement, cette molécule de GMP est transférée sur un ARN diphosphorylé. Ces essais ont confirmé l'interaction prédite par le criblage virtuel. En utilisant cette approche, nous démontrons que le MPA peut inhiber la réaction de GTase en prévenant le transfert catalytique du nucléotide GMP sur l'ARNm accepteur. En ce sens, le MPA représente un nouveau type d'inhibiteur d'ARN guanylyltransférase qui inhibe la deuxième étape de l'activité catalytique. Puisque les résultats laissaient présager une inhibition non compétitive, il fallait confirmer que le MPA n'était pas reconnu par l'enzyme comme substrat. Pour ce faire, la technique de l'électrophorèse par capillarité a montré que l'inhibiteur ne formait pas de lien covalent avec l'enzyme. De plus, nous démontrons qu'une culture de Saccharomyces cerevisiae qui croit en présence de MPA dénote une quantité moindre d'ARNm possédant une coiffe. Finalement, des essais biochimiques démontrent que le composé peut également inhiber des enzymes de la même famille que les GTases utilisant des substrats différents : les ligases à ADN. Le MPA inhibe la deuxième étape de la réaction enzymatique d'une ligase, soit le transfert du nucléotide sur l'oligonucléotide. Ce mémoire vise donc à présenter un aperçu du mécanisme d'inhibition de l'ARN guanylyltransférase par un composé allostérique. Nous montrons qu'il est possible de réduire la synthèse de la structure coiffe en affectant les changements conformationnels de cette enzyme.

Lors d’un crible d’une chimiothèque de ChemBridge (28 500 composés), nous avons identifié deux molécules (T10 et T13), chimiquement très proches, capables d’inhiber la réplication du phlebovirus Toscana (TOSV) (Phenuiviridae) dans des cellules de singe Vero E6. Une recherche d’analogues disponibles commercialement a permis d’identifier le (T101) capable d’inhiber divers virus appartenant à l’ordre des Bunyavirales, mais aussi des flavivirus et des alphavirus. Le large spectre d’activité du T101 suggérait une cible cellulaire que nous avons pu identifier avec son mécanisme d’action potentiel (confidentiel avant dépôt de brevet). En collaboration avec un groupe de chimistes de l’Institut de Virologie de Hambourg (Allemagne), nous avons synthétisé et testé environ 300 analogues structuraux (2D et 3D) de ces molécules en vue d’optimiser l’activité antivirale par une étude SAR (relation structure-activité). Les meilleures molécules (index de sélectivité CC50/IC50> 400) suivant les virus et l’origine de l’espèce cellulaire (humaine, singe et souris), ont été sélectionnées pour des études de leurs propriétés de solubilité, d’absorption, et de stabilité métabolique (ADME-TOX). La molécule la plus active sur cellules murines sera testée lors d’infections expérimentales de souris.En parallèle, j’ai écrit une revue sur la RdRp des Bunyavirales en décrivant sa structure, ses motifs et les différents mécanismes de synthèse des ARN viraux. J’ai également fait une étude sur le mécanisme de vol de coiffe du TOSV. J’ai essayé de construire un système de génétique inverse pour TOSV. Enfin j’ai aussi participé à l’étude de l’évolution du CHIKV dans les cellules d’insectes et de mammifères / We have screened a subset of the ChemBridge chemical library (28,500 compounds) for compounds inhibiting the replication of Toscana phlebovirus (TOSV) (Phenuiviridae family) in Vero E6 primate cell cultures. Tow molecules chemically very close (T10, T13) have been validated as good inhibitors of TOSV replication. The search for commercially available analogs allowed the identification of (T101). This compound is found active against viruses from highly divergent families such as Bunyavirales order, Flavivirus and Alphavirus. We have determined that the target of this compound family is a cellular enzyme (the cellular target and the mechanism of action are confidential). The inhibitors family was further explored through the synthesis, by a group of chemists (Hambourg University, Germany), of about 300 structural analogs in order to optimize the antiviral activity using SAR studies (structure-activity relationship). The most active molecules (selectivity index CC50 / IC50> 400) depending on virus species and origin of cell species (human, monkey and mouse) were selected for studies of solubility, absorption, metabolic stability (ADME-TOX) and pharmacodynamics. The most promising compound that is active in murine cells will be tested in experimentally infected mice.I wrote a review on the RdRp of bunyaviruses describing its structure, motifs and the various mechanisms of viral RNA synthesis. I also made a study on the cap-snatching mechanism and the initiation of transcription of TOSV and tried to develop a reverse genetics system for TOSV. In parallel I also participated in the study of the evolution of Chikungunya virus (CHIKV) in insect and mammalian cells.