INTRODUÇÃO: A avaliação do colágeno na parede abdominal é cada vez mais estudada, em virtude da relevância do colágeno no processo cicatricial após laparotomias. O aumento da população obesa mórbida requer conhecimento da parede abdominal a fim de evitar complicações pós-operatórias relacionadas à obesidade. OBJETIVO: Avaliar a quantidade de colágeno na linha alba de pacientes submetidos a cirurgia bariátrica aberta no Hospital de Clínicas de Porto Alegre e comparar com a de cadáveres não-obesos. MATERIAL E MÉTODO: Estudo observacional que avaliou dois grupos, com total de 88 amostras da aponeurose da linha alba abdominal, divididas em 44 amostras de pacientes obesos com indicação de cirurgia bariátrica e 44 amostras de cadáveres não-obesos. As amostras foram retiradas da linha alba abdominal no período de 2013 a 2014 e inicialmente foram separadas conforme faixas etárias (18-30, 31-45 e 46-60), gênero, medidas de IMC, circunferência abdominal e cervical e espessura do subcutâneo do indivíduo. Foi coletado material para biópsia da linha alba supraumbilical para análise de imuno-histoquímica, diferenciando o colágeno tipo I e III e sua relação de tipo I/III. Utilizou-se o programa de contagem de pixels ImageProPlus®, que mensurou a quantidade do colágeno. Foi realizada análise estatística com SPSS®, com nível de significância estatística de p<0,05. RESULTADOS: Todas as biópsias foram utilizadas no estudo. Em um total de 88 amostras, a avaliação da característica do grupo Obesidade teve idade média ± desvio-padrão 44,11 ± 9,90 anos, faixa etária de 18-30 anos com 3 (6,8%) obesos, 31-45 com 22 (50%) obesos e 46-60 anos com 19 (43,1%) obesos. O gênero feminino apresentou predomínio, com 36 (81,8%) pacientes; IMC (Kg/m²) 48,81 ± 6,5, circunferência abdominal (cm) 136,761 ± 13,55, espessura do subcutâneo (cm) 4,873 ± 0,916. A quantidade de colágeno tipo I foi 134683,3 ± 206657,4. A de colágeno tipo III foi 413137,2 ± 283656,1. A razão do colágeno tipo I/III foi 0,419 ± 0,636. Considerando-se faixas de idade, gênero e IMC, foram constatadas diferenças estatísticas em todas as análises quando comparadas com as dos cadáveres. CONCLUSÃO: A amostra composta de pacientes obesos mórbidos teve uma quantidade de colágeno na linha alba da região supraumbilical menor que a do grupo controle quando comparada com a de cadáveres não-obesos na mesma faixa etária. / INTRODUCTION: The evaluation of collagen in the abdominal wall has been increasingly studied because of the relevance on collagen in the healing process after laparotomy. The increase in morbidly obese population requires knowledge of abdominal wall to prevent post-operative complications related to obesity. PURPOSE: To evaluate the amount of collagen in the linea alba of patients undergoing open bariatric surgery at Hospital de Clinicas de Porto Alegre and compare it with non-obese cadavers’. METHODS: Observational study evaluating 88 samples of aponeurosis from abdominal linea alba of 44 obese patients and 44 non-obese cadavers. The samples were collected in 2013 and 2104, and were sorted according to age (18-30, 31-45 and 46-60), gender, BMI, waist and cervical circumference, and subcutaneous tissue thickness. Material for biopsy was collected from the supraumbilical region of the linea alba for immunohistochemical analysis differentiating collagen type 1 and type 3 and the 1/3 ratio. ImagePro Plus pixel counting software was used to measure the amount of collagen. SPSS® statistical analysis was performed with statistical significance level of p<0.05 was performed. RESULTS: All biopsies were used in the study. In a total of 88 samples, the evaluation of the Obesity group evidenced mean age ± standard deviation 44.11 ± 9.90 years, 18-30 age group with 3 (6.8%) obese individuals, 31-45 with 22 (50%) and 46-60 with 19 (43.1%). Females had a prevalence of 36 (81.8%) patients; BMI (kg / m²) 48.81 ± 6.5, waist circumference (cm) 136.761 ± 13.55, subcutaneous tissue thickness (cm) 4.873 ± 0.916. Considering age groups, gender and BMI, there were statistical differences in all tests when compared with the cadavers. CONCLUSION: The amount of collagen in the linea alba above the umbilical region in the morbidly obese patients was smaller than in the non-obese cadavers in the same age group.

No presente trabalho foram colhidas amostras da aponeurose da linha alba abdominal de 26 pacientes com idades entre 26 e 75 anos, portadores de hérnias da parede abdominal anterior, para avaliação qualitativa e quantitativa do colágeno total, tipo I e III. Oito desses pacientes foram operados no Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA), quatro no Hospital Pompéia de Caxias do Sul (HP) e 14 na Clínica Particular do autor (CPA) em Caxias do Sul. Todos os pacientes eram portadores de hérnias da parede abdominal anterior, sendo seis casos de hérnias incisionais, 11 casos de hérnias umbilicais e sete casos de hérnias epigástricas, um caso com duas hérnias: incisional e epigástrica e um outro caso também com duas hérnias, sendo uma epigástrica e outra umbilical. As amostras foram retiradas na linha média da linha alba, três centímetros acima da cicatriz umbilical e outra a dois centímetros abaixo dessa cicatriz. Uma vez no laboratório, as amostras foram subdivididas em duas. Em uma delas realizou-se a avaliação quantitativa do colágeno total e na outra a avaliação qualitativa dos colágenos tipo I e III. A avaliação quantitativa foi realizada por meio da coloração com picrosirius e contagem das fibras colágenas em microscópio de luz polarizada e análise digital por birrefringência, tendo sido utilizado o aplicativo Image Pro Plus (Media Cybernetics, Silver Spring, USA). A avaliação qualitativa foi feita por meio da imuno-histoquímica, com a utilização de anticorpos monoclonais anticolágeno tipo I e III. Os achados obtidos nesses pacientes foram comparados com os achados obtidos em um grupo-controle de cadáveres não formolizados do Instituto Médico Legal de Caxias do Sul. No grupo-controle de cadáveres sem hérnias, foram realizados os mesmos estudos dos pacientes cirúrgicos portadores de hérnias, para avaliar as diferenças das quantidades de colágeno total, tipo I e III entre os dois grupos. Os resultados mostraram que as quantidades de colágeno total eram 18,05% menores nos pacientes com hérnias da parede anterior do abdome, quando comparados com o grupo-controle de cadáveres sem hérnias (p  0,05). Já as quantidades do colágeno tipo I foram 20,50% menores nos pacientes (p  0,05). O mesmo ocorreu com o colágeno tipo III que apresentou uma percentagem 7,3% menor nesses mesmos pacientes (p = 0,383).

BENEVIDES, B. S. Avaliação da alteração do perfil de colágeno de dentes extraídos de pacientes submetidos a radioterapia de cabeça e pescoço. 2016. 71 f. Dissertação (Mestrado em Odontologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-06-30T12:38:21Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_bsbenevides.pdf: 2914070 bytes, checksum: 512dde631ba2f8e91175ab0dbc320949 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-06-30T12:38:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_bsbenevides.pdf: 2914070 bytes, checksum: 512dde631ba2f8e91175ab0dbc320949 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-30T12:38:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_bsbenevides.pdf: 2914070 bytes, checksum: 512dde631ba2f8e91175ab0dbc320949 (MD5) Previous issue date: 2016-05-11 / Compromised dental health by incidence of radiation is taken as a result of the reduction in salivary flow as well as possible direct radiogenic damage to tooth structure. The exact nature of the latter remains to be elucidated. The aim of this paper is to investigate the anatomical predominance of collagen type I and type III in the dentin and periodontal ligament and the amount of these collagens in the periodontal ligament of extracted teeth within the radiation fields of patients who have underwent radiotherapy (RT) for treatment of malignant head and neck tumors. The sample consisted of 20 teeth, 8 carious teeth of patients who underwent total dose of less radiation than 60 Gy (experimental group I - EG I), 6 carious teeth of patients who underwent total radiation dose equal to or greater than 60 Gy (experimental group II - EG II) and 6 healthy erupted teeth not subjected to radiation (control group - CG). A histomorphometrical study was conducted using the staining technique Picrosirius Red with polarized light. Qualitative analysis of dentin noticed the predominance of type III collagen in the surrounding regions to carious lesions in EG I, general predominance of type III collagen throughout the dentin of EG II and general predominance of type I collagen in the dentin of the CG. Qualitative analysis of the periodontal ligament noticed that the CG and EG I there was a predominance of type I collagen in the cervical third and type III in the apical third. In the EG II, the fibers were more disorganized and there was no more the previous dominance pattern. Quantitative analysis of the periodontal ligament noticed that the total of collagen type I showed significantly reduced in EG I (48.8 ± 6.1%) or EG II (49.1 ± 5.0%) in relation to the periodontal ligament of the CG (69.7 ± 6.3%) (p = 0.047). Total collagen type III showed significantly higher in EG I (51.2 ± 6.1%) or in EG II (50.9 ± 5.0%) in relation to the periodontal ligament of the CG (24.8 ± 5.1%) (p = 0.006). Conclusion: ionizing radiation promotes collagen changes in the dentin and periodontal ligament of teeth within the radiation fields of patients who have underwent head and neck RT. / O comprometimento da saúde dental pela incidência de radiação é tido como resultado da redução do fluxo salivar bem como de possíveis danos radiogênicos diretos à estrutura dental. A natureza exata destes últimos ainda está por ser elucidada. A partir deste contexto, o presente estudo objetiva analisar a predominância anatômica de colágeno tipo I e colágeno tipo III da dentina e do ligamento periodontal assim como a quantidade de colágenos tipos I e III do ligamento periodontal de dentes contidos nos campos de radiação extraídos de pacientes submetidos a radioterapia (RT) para tratamento de neoplasias malignas de cabeça e pescoço. A amostra foi constituída de 20 dentes, sendo oito dentes cariados submetidos à dose total de radiação menor que 60 Gy (grupo experimental I - GE I), seis dentes cariados submetidos à dose total de radiação igual ou maior que 60 Gy (grupo experimental II - GE II) e seis dentes hígidos erupcionados não submetidos a radiação (grupo controle - GC). Foi realizado estudo histomorfométrico através da técnica de coloração Picrosirius Red com luz polarizada. Análise qualitativa: em relação à dentina, percebeu-se predominância de colágeno tipo III nas regiões circunjacentes às lesões cariosas no GE I, predominância geral de colágeno tipo III em toda a dentina no GE II e predominância geral de colágeno tipo I na dentina do GC. Em relação ao ligamento periodontal, percebeu-se que, no grupo controle, houve predominância de colágeno tipo I no terço cervical e tipo III no terço apical. Esse comportamento foi similar no GE I, mas no GE II as fibras se mostraram mais desorganizadas e não havia mais o padrão de predominância anterior. Análise quantitativa: o total de colágeno tipo I se mostrou significantemente reduzido no GE I (48.8±6.1%) ou 60 Gy ou GE II (49.1±5.0%) em relação ao ligamento periodontal do GC (69.7±6.3%) (p=0.047). O total de colágeno tipo III se mostrou significantemente maior nos grupos experimentais I (51.2±6.1%) ou II (50.9±5.0%) em relação ao ligamento periodontal do GC (24.8±5.1%) (p=0.006). A partir desses achados, conclui-se que a radiação ionizante promove alterações do colágeno da dentina e do ligamento periodontal em dentes de pacientes que foram submetidos a RT de cabeça e pescoço.

INTRODUÇÃO: A avaliação do colágeno na parede abdominal é cada vez mais estudada, em virtude da relevância do colágeno no processo cicatricial após laparotomias. O aumento da população obesa mórbida requer conhecimento da parede abdominal a fim de evitar complicações pós-operatórias relacionadas à obesidade. OBJETIVO: Avaliar a quantidade de colágeno na linha alba de pacientes submetidos a cirurgia bariátrica aberta no Hospital de Clínicas de Porto Alegre e comparar com a de cadáveres não-obesos. MATERIAL E MÉTODO: Estudo observacional que avaliou dois grupos, com total de 88 amostras da aponeurose da linha alba abdominal, divididas em 44 amostras de pacientes obesos com indicação de cirurgia bariátrica e 44 amostras de cadáveres não-obesos. As amostras foram retiradas da linha alba abdominal no período de 2013 a 2014 e inicialmente foram separadas conforme faixas etárias (18-30, 31-45 e 46-60), gênero, medidas de IMC, circunferência abdominal e cervical e espessura do subcutâneo do indivíduo. Foi coletado material para biópsia da linha alba supraumbilical para análise de imuno-histoquímica, diferenciando o colágeno tipo I e III e sua relação de tipo I/III. Utilizou-se o programa de contagem de pixels ImageProPlus®, que mensurou a quantidade do colágeno. Foi realizada análise estatística com SPSS®, com nível de significância estatística de p<0,05. RESULTADOS: Todas as biópsias foram utilizadas no estudo. Em um total de 88 amostras, a avaliação da característica do grupo Obesidade teve idade média ± desvio-padrão 44,11 ± 9,90 anos, faixa etária de 18-30 anos com 3 (6,8%) obesos, 31-45 com 22 (50%) obesos e 46-60 anos com 19 (43,1%) obesos. O gênero feminino apresentou predomínio, com 36 (81,8%) pacientes; IMC (Kg/m²) 48,81 ± 6,5, circunferência abdominal (cm) 136,761 ± 13,55, espessura do subcutâneo (cm) 4,873 ± 0,916. A quantidade de colágeno tipo I foi 134683,3 ± 206657,4. A de colágeno tipo III foi 413137,2 ± 283656,1. A razão do colágeno tipo I/III foi 0,419 ± 0,636. Considerando-se faixas de idade, gênero e IMC, foram constatadas diferenças estatísticas em todas as análises quando comparadas com as dos cadáveres. CONCLUSÃO: A amostra composta de pacientes obesos mórbidos teve uma quantidade de colágeno na linha alba da região supraumbilical menor que a do grupo controle quando comparada com a de cadáveres não-obesos na mesma faixa etária. / INTRODUCTION: The evaluation of collagen in the abdominal wall has been increasingly studied because of the relevance on collagen in the healing process after laparotomy. The increase in morbidly obese population requires knowledge of abdominal wall to prevent post-operative complications related to obesity. PURPOSE: To evaluate the amount of collagen in the linea alba of patients undergoing open bariatric surgery at Hospital de Clinicas de Porto Alegre and compare it with non-obese cadavers’. METHODS: Observational study evaluating 88 samples of aponeurosis from abdominal linea alba of 44 obese patients and 44 non-obese cadavers. The samples were collected in 2013 and 2104, and were sorted according to age (18-30, 31-45 and 46-60), gender, BMI, waist and cervical circumference, and subcutaneous tissue thickness. Material for biopsy was collected from the supraumbilical region of the linea alba for immunohistochemical analysis differentiating collagen type 1 and type 3 and the 1/3 ratio. ImagePro Plus pixel counting software was used to measure the amount of collagen. SPSS® statistical analysis was performed with statistical significance level of p<0.05 was performed. RESULTS: All biopsies were used in the study. In a total of 88 samples, the evaluation of the Obesity group evidenced mean age ± standard deviation 44.11 ± 9.90 years, 18-30 age group with 3 (6.8%) obese individuals, 31-45 with 22 (50%) and 46-60 with 19 (43.1%). Females had a prevalence of 36 (81.8%) patients; BMI (kg / m²) 48.81 ± 6.5, waist circumference (cm) 136.761 ± 13.55, subcutaneous tissue thickness (cm) 4.873 ± 0.916. Considering age groups, gender and BMI, there were statistical differences in all tests when compared with the cadavers. CONCLUSION: The amount of collagen in the linea alba above the umbilical region in the morbidly obese patients was smaller than in the non-obese cadavers in the same age group.

No presente trabalho foram colhidas amostras da aponeurose da linha alba abdominal de 26 pacientes com idades entre 26 e 75 anos, portadores de hérnias da parede abdominal anterior, para avaliação qualitativa e quantitativa do colágeno total, tipo I e III. Oito desses pacientes foram operados no Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA), quatro no Hospital Pompéia de Caxias do Sul (HP) e 14 na Clínica Particular do autor (CPA) em Caxias do Sul. Todos os pacientes eram portadores de hérnias da parede abdominal anterior, sendo seis casos de hérnias incisionais, 11 casos de hérnias umbilicais e sete casos de hérnias epigástricas, um caso com duas hérnias: incisional e epigástrica e um outro caso também com duas hérnias, sendo uma epigástrica e outra umbilical. As amostras foram retiradas na linha média da linha alba, três centímetros acima da cicatriz umbilical e outra a dois centímetros abaixo dessa cicatriz. Uma vez no laboratório, as amostras foram subdivididas em duas. Em uma delas realizou-se a avaliação quantitativa do colágeno total e na outra a avaliação qualitativa dos colágenos tipo I e III. A avaliação quantitativa foi realizada por meio da coloração com picrosirius e contagem das fibras colágenas em microscópio de luz polarizada e análise digital por birrefringência, tendo sido utilizado o aplicativo Image Pro Plus (Media Cybernetics, Silver Spring, USA). A avaliação qualitativa foi feita por meio da imuno-histoquímica, com a utilização de anticorpos monoclonais anticolágeno tipo I e III. Os achados obtidos nesses pacientes foram comparados com os achados obtidos em um grupo-controle de cadáveres não formolizados do Instituto Médico Legal de Caxias do Sul. No grupo-controle de cadáveres sem hérnias, foram realizados os mesmos estudos dos pacientes cirúrgicos portadores de hérnias, para avaliar as diferenças das quantidades de colágeno total, tipo I e III entre os dois grupos. Os resultados mostraram que as quantidades de colágeno total eram 18,05% menores nos pacientes com hérnias da parede anterior do abdome, quando comparados com o grupo-controle de cadáveres sem hérnias (p  0,05). Já as quantidades do colágeno tipo I foram 20,50% menores nos pacientes (p  0,05). O mesmo ocorreu com o colágeno tipo III que apresentou uma percentagem 7,3% menor nesses mesmos pacientes (p = 0,383).

INTRODUÇÃO: A avaliação do colágeno na parede abdominal é cada vez mais estudada, em virtude da relevância do colágeno no processo cicatricial após laparotomias. O aumento da população obesa mórbida requer conhecimento da parede abdominal a fim de evitar complicações pós-operatórias relacionadas à obesidade. OBJETIVO: Avaliar a quantidade de colágeno na linha alba de pacientes submetidos a cirurgia bariátrica aberta no Hospital de Clínicas de Porto Alegre e comparar com a de cadáveres não-obesos. MATERIAL E MÉTODO: Estudo observacional que avaliou dois grupos, com total de 88 amostras da aponeurose da linha alba abdominal, divididas em 44 amostras de pacientes obesos com indicação de cirurgia bariátrica e 44 amostras de cadáveres não-obesos. As amostras foram retiradas da linha alba abdominal no período de 2013 a 2014 e inicialmente foram separadas conforme faixas etárias (18-30, 31-45 e 46-60), gênero, medidas de IMC, circunferência abdominal e cervical e espessura do subcutâneo do indivíduo. Foi coletado material para biópsia da linha alba supraumbilical para análise de imuno-histoquímica, diferenciando o colágeno tipo I e III e sua relação de tipo I/III. Utilizou-se o programa de contagem de pixels ImageProPlus®, que mensurou a quantidade do colágeno. Foi realizada análise estatística com SPSS®, com nível de significância estatística de p<0,05. RESULTADOS: Todas as biópsias foram utilizadas no estudo. Em um total de 88 amostras, a avaliação da característica do grupo Obesidade teve idade média ± desvio-padrão 44,11 ± 9,90 anos, faixa etária de 18-30 anos com 3 (6,8%) obesos, 31-45 com 22 (50%) obesos e 46-60 anos com 19 (43,1%) obesos. O gênero feminino apresentou predomínio, com 36 (81,8%) pacientes; IMC (Kg/m²) 48,81 ± 6,5, circunferência abdominal (cm) 136,761 ± 13,55, espessura do subcutâneo (cm) 4,873 ± 0,916. A quantidade de colágeno tipo I foi 134683,3 ± 206657,4. A de colágeno tipo III foi 413137,2 ± 283656,1. A razão do colágeno tipo I/III foi 0,419 ± 0,636. Considerando-se faixas de idade, gênero e IMC, foram constatadas diferenças estatísticas em todas as análises quando comparadas com as dos cadáveres. CONCLUSÃO: A amostra composta de pacientes obesos mórbidos teve uma quantidade de colágeno na linha alba da região supraumbilical menor que a do grupo controle quando comparada com a de cadáveres não-obesos na mesma faixa etária. / INTRODUCTION: The evaluation of collagen in the abdominal wall has been increasingly studied because of the relevance on collagen in the healing process after laparotomy. The increase in morbidly obese population requires knowledge of abdominal wall to prevent post-operative complications related to obesity. PURPOSE: To evaluate the amount of collagen in the linea alba of patients undergoing open bariatric surgery at Hospital de Clinicas de Porto Alegre and compare it with non-obese cadavers’. METHODS: Observational study evaluating 88 samples of aponeurosis from abdominal linea alba of 44 obese patients and 44 non-obese cadavers. The samples were collected in 2013 and 2104, and were sorted according to age (18-30, 31-45 and 46-60), gender, BMI, waist and cervical circumference, and subcutaneous tissue thickness. Material for biopsy was collected from the supraumbilical region of the linea alba for immunohistochemical analysis differentiating collagen type 1 and type 3 and the 1/3 ratio. ImagePro Plus pixel counting software was used to measure the amount of collagen. SPSS® statistical analysis was performed with statistical significance level of p<0.05 was performed. RESULTS: All biopsies were used in the study. In a total of 88 samples, the evaluation of the Obesity group evidenced mean age ± standard deviation 44.11 ± 9.90 years, 18-30 age group with 3 (6.8%) obese individuals, 31-45 with 22 (50%) and 46-60 with 19 (43.1%). Females had a prevalence of 36 (81.8%) patients; BMI (kg / m²) 48.81 ± 6.5, waist circumference (cm) 136.761 ± 13.55, subcutaneous tissue thickness (cm) 4.873 ± 0.916. Considering age groups, gender and BMI, there were statistical differences in all tests when compared with the cadavers. CONCLUSION: The amount of collagen in the linea alba above the umbilical region in the morbidly obese patients was smaller than in the non-obese cadavers in the same age group.

No presente trabalho foram colhidas amostras da aponeurose da linha alba abdominal de 26 pacientes com idades entre 26 e 75 anos, portadores de hérnias da parede abdominal anterior, para avaliação qualitativa e quantitativa do colágeno total, tipo I e III. Oito desses pacientes foram operados no Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA), quatro no Hospital Pompéia de Caxias do Sul (HP) e 14 na Clínica Particular do autor (CPA) em Caxias do Sul. Todos os pacientes eram portadores de hérnias da parede abdominal anterior, sendo seis casos de hérnias incisionais, 11 casos de hérnias umbilicais e sete casos de hérnias epigástricas, um caso com duas hérnias: incisional e epigástrica e um outro caso também com duas hérnias, sendo uma epigástrica e outra umbilical. As amostras foram retiradas na linha média da linha alba, três centímetros acima da cicatriz umbilical e outra a dois centímetros abaixo dessa cicatriz. Uma vez no laboratório, as amostras foram subdivididas em duas. Em uma delas realizou-se a avaliação quantitativa do colágeno total e na outra a avaliação qualitativa dos colágenos tipo I e III. A avaliação quantitativa foi realizada por meio da coloração com picrosirius e contagem das fibras colágenas em microscópio de luz polarizada e análise digital por birrefringência, tendo sido utilizado o aplicativo Image Pro Plus (Media Cybernetics, Silver Spring, USA). A avaliação qualitativa foi feita por meio da imuno-histoquímica, com a utilização de anticorpos monoclonais anticolágeno tipo I e III. Os achados obtidos nesses pacientes foram comparados com os achados obtidos em um grupo-controle de cadáveres não formolizados do Instituto Médico Legal de Caxias do Sul. No grupo-controle de cadáveres sem hérnias, foram realizados os mesmos estudos dos pacientes cirúrgicos portadores de hérnias, para avaliar as diferenças das quantidades de colágeno total, tipo I e III entre os dois grupos. Os resultados mostraram que as quantidades de colágeno total eram 18,05% menores nos pacientes com hérnias da parede anterior do abdome, quando comparados com o grupo-controle de cadáveres sem hérnias (p  0,05). Já as quantidades do colágeno tipo I foram 20,50% menores nos pacientes (p  0,05). O mesmo ocorreu com o colágeno tipo III que apresentou uma percentagem 7,3% menor nesses mesmos pacientes (p = 0,383).

Orientador : Nelson Jose Beraquet / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-03T23:17:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DellaTorre_JussaraCarvalhodeMoura_D.pdf: 1543443 bytes, checksum: df3f767140c2fe58fd7545426b8ab5a9 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Salsichas, lingüiças e hambúrgueres são produtos cárneos cominuídos susceptíveis à fraude pelo uso de extensores protéicos dos tipos colágeno e soja, utilizados pelos benefícios tecnológicos e de redução de custos de processo, sendo, contudo considerados limitantes pelos teores em aminoácidos essenciais e efeitos adversos que produzem nas características sensoriais. O efetivo controle dos teores adicionados não se realiza na rotina dos órgãos de vigilância do Brasil, pela falta de metodologia analítica validada para a quantificação das proteínas de soja e por não haver limites legislativos máximos de colágeno, junto aos parâmetros físico-químicos regulatórios. Visando apresentar subsídios para o estabelecimento de teores máximos e o efetivo controle da presença de proteínas de soja e colágeno, o presente projeto objetivou: a) validar intralaboratorialmente as metodologias oficiais da AOAC na quantificação de hidroxiprolina (colágeno) e proteínas de soja em produtos cárneos; b) avaliar a composição e influência tecnológica destes extensores em salsichão Lionês; e c) apresentar resultados sensoriais e físico-químicos de produtos comerciais tipo salsicha, lingüiça e carne bovina moída, obtidos na rotina de análise do Instituto Adolfo Lutz. Os processamentos da massa tipo emulsão, salsichão Lionês e conserva enlatada seguiram formulações e processos comerciais. Os teores de carne bovina, toucinho e gelo foram balanceados na formulação de modo a manter a relação umidade: proteína em 4,7 e teor de gordura em 20%, em substituição às proteínas de soja texturizada (PTS, Maxten E- 100), concentrada texturizada (PCS, Proteimax TR-120) e isolada (PIS, Supro 500E), adicionadas na concentração de 0% a 6%, ou do tecido conjuntivo de couro suíno cozido ou do tecido conjuntivo cru, que recobrem os cortes cárneos de bovino, obtidos através do equipamento esfolador Skyner, na concentração de 0% a 15%. Os parâmetros de cor L* (luminosidade), a* (vermelho) e b* (amarelo) foram avaliados em espectrofotômetro (Minolta) e a firmeza por compressão em texturômetro (TAXT2i/25). Os procedimentos das Normas Analíticas do Instituto Adolfo Lutz foram seguidos nas determinações de composição centesimal e pH. A estabilidade da emulsão foi avaliada pela porcentagem de gelatina e gordura separadas em conservas cárneas esterilizadas. Nove julgadores treinados avaliaram os atributos sensoriais utilizando escala linear não-estruturada de 10 cm, segundo delineamento experimental de blocos completos casualizados, com repetição. Procedeu-se teste de aceitação em laboratório utilizando escala hedônica. Os resultados foram tratados pela ANOVA e teste de médias de Tukey (p=0,05). A validação intralaboratorial do método de análise do aminoácido hidroxiprolina, em conservas cárneas de controle interlaboratorial FAPAS/MAFF/UK, revelou sensibilidade (limite de quantificação 0,0075g/100g), precisão (CV inferiores a 4%), exatidão (recuperação 90% ¿ 95%) e simplicidade na operação. O imunoensaio ELISA oficial AOAC na quantificação de proteínas de soja em massa tipo emulsão crua, salsichão Lionês pasteurizado, e conserva esterilizada, adicionados de PTS, PCS e PIS, totalizando 39 tratamentos, revelou especificidade, precisão intra-ensaio (CV inferiores a 6%), linearidade da curva de calibração (r=0,980), sensibilidade (limite de quantificação de proteína de soja 0,14g/100g na amostra), contudo baixa exatidão, sendo necessária a padronização do método, uma vez que os ensaios comparativos utilizando o kit ensaio ELISA-TEK permitiram uma extração aquosa rápida das amostras cárneas e resultados com maior exatidão. O uso de 0% a 6% de produtos de soja, em salsichão Lionês, demonstrou a influência da PTS na intensificação da cor vermelha, sem alteração da firmeza e sabor, com redução dos teores de umidade e proteína, ligeiro acréscimo do teor de cinzas e pH, estabilizando a emulsão. O uso de PCS reduziu a umidade e a intensidade da cor vermelha, não alterou a firmeza e sabor, aumentou o pH e estabilizou a emulsão. A presença de PIS resultou em salsichão com tonalidade vermelha, firmeza e sabor característico reduzidos, com menor porcentagem de umidade e maior pH, sem, contudo, proporcionar melhora na estabilidade da emulsão. A utilização de 0% a 15% de couro suíno ou tecido conjuntivo bovino em salsichão Lionês revelou aumento da firmeza e quantidade de tecido residual na boca, acréscimos ineares dos teores de colágeno (r=0,99 e 0,97, respectivamente) e menor estabilidade da emulsão. Os atributos de sabor e cor característicos foram reduzidos pela adição de couro suíno, resultando em menor aceitabilidade. As salsichas comerciais revelaram valores de colágeno 1,7% e as lingüiças 1,8%, correspondentes às medianas, de um total de 103 amostras avaliadas. A análise de rotina de carne bovina moída comercial revelou alterações na aparência pela elevada proporção de tecido conjuntivo, apresentando valores de colágeno correspondentes às medianas 123% maiores quando comparado à carne moída comercializada no varejo. A adição de fibras de tecido conjuntivo de bovino em carne moída fresca apontou aumento linear de colágeno (r=0,986) e gordura, e redução dos valores de umidade, cinzas, pH e cor vermelha, conferindo ao produto menor aceitação. O hambúrguer formulado apresentou-se mais firme, necessitando maior número de mastigações e sabor característico menos intenso / Abstract: Comminuted meat products, such as frankfurters, fresh ground sausages and hamburgers are exposed to fraud by the abusive use of protein extensors of the types collagen and soy proteins, used in meat products because of their technological benefits, with reduced processing costs, although they are considered limiting, with regard to essential amino-acids, and producing adverse effects in sensory characteristics. The effective control of addition levels is not properly controlled by the Sanitary Surveillance bodies in Brazil, due to the lack of a validated quantitative analytical methodology for soy proteins and because there are no legal limits to collagen inclusion in meat products. As a contribution to the establishment of maximum contents and effective control of soy proteins and collagen, this project sought: a) to validate intra-laboratorially the official AOAC methodologies in the quantification of hydroxyproline (collagen) and soy proteins in meat products; b) to evaluate proximate composition and technological influence of extensors addiction to Lyoner sausage, and c) to present both sensorial and physicochemical Adolfo Lutz Institute analytical routine results of commercial products like frankfurters, fresh ground sausages and minced beef meat. The formulation and processes were those commercially used for meat emulsion batter, Lyoner sausage and canned emulsion. Beef meat, pork backfat and ice quantities were balanced in order to keep constant the 4.7 humidity : protein ratio as well as the 20% lipid level, replaced with either texturized soy proteins (TSP, Maxten E-100), texturized concentrated (CSP, Proteimax TR-120) and isolated (ISP, Supro 500E) in concentration of 0 to 6% or connective tissue from cooked pork rind or fresh beef connective tissue recovered from cuts obtained by use of Skyner machine, in the range 0 to 15%. The color parameters L* (luminosity), a* (red) and b* (yellow) were measured using a spectrophotometer (Minolta) and compression hardness was measured using a Texture Analyser (TAXT2i/25). The proximate composition and pH were carried out according to Adolfo Lutz Institute¿s Analytical Norms. Emulsion stability was reported as percent fat and gelatin released from sterilized canned emulsion. A trained 9-member panel evaluated the sensory attributes using an unstructured 10 cm line scale, following the randomized complete block design, with replicate judgments. Laboratorial consumer acceptance test was carried out using hedonic scale. The results were analyzed by ANOVA and Tukey test (p=0.05). The intra-laboratorially validation of aminoacid hydroxyproline analysis methodology, using FAPAS/MAFF/UK inter-laboratorial control canned meat conserve revealed sensibility (quantification limit 0.0075g/100g), precision (CV below 4%), accuracy (recovery rates 90-95%) and operation simplicity. The ELISA immunoassay for soy protein quantification using raw batter emulsion, pasteurized Lyoner sausage and sterilized canned meat added with TSP, CSP and ISP, totalizing 39 treatments, revealed specificity, intra assay precision (CV bellow 6%), calibration curve linearity (r=0.980), sensibility (quantification limit of 0.14g/100g for soy protein in sample), however low accuracy, making necessary the standardization of the method, since the comparatives assays using kit ELISA-TEK allowed rapid aqueous extraction of meat samples into a liquid form suitable for the assay, with higher accuracy results. The utilization of 0 to 6% soy proteins in Lyoner sausage revealed the influence of TSP on red color improvement, with no influence on final product firmness and flavor. Moisture and protein decreased, with slight increase on ash and pH, improving emulsion stability. The use of CSP reduced moisture and red color intensity, without changes in firmness and flavor, increased pH and stabilized emulsion. The presence of ISP resulted product¿s decreased red color intensity, firmness and characteristic flavor, with lower moisture level and higher pH, without improvement in the emulsion stability. The utilization of 0 to 15% pork rind and beef connective tissue to Lyoner sausage resulted an increase on toughness and residual connective tissue remaining at the end of mastication, as well as linear increases on collagen levels (r=0.97 and 0.99, respectively) and decrease on emulsion stability. The characteristic flavor and color attributes were decreased by the pork rind replacement, resulting in lower consumer¿s acceptability. The commercial frankfurter-type sausages revealed collagen median value of 1.7% and commercial fresh ground sausages 1.8%, from total 103 samples analyzed. The routine analysis of beef minced meat revealed appearance alterations due to connective tissue at high amounts, presenting collagen median values 123% higher compared with beef minced meat bought in meat stores. Beef connective tissue fibers addition in fresh minced beef meat revealed linear increase in collagen (r=0.986) and fat, and decrease in moisture, ash, pH and red color values, causing lower product acceptance. The formulated hamburger revealed itself firmer, demanding a greater number of mastications and presenting a less intense characteristic flavor / Doutorado / Doutor em Tecnologia de Alimentos

Introdução: Recentemente muitas são as funções atribuídas ao colágeno V em condições fisiológicas normais e em algumas doenças, como na esclerodermia. Esta proteína apresenta características estruturais singulares de regulação do diâmetro das fibrilas heterotípicas, e imunogenicidade, sendo capaz de desencadear uma resposta imune independente. Em descobertas recentes, desenvolvidas por nosso grupo, ficou evidenciado que o colágeno V apresenta histoarquitetura anômala, aumentando a sua imunoexpressão na pele e pulmão em estágios iniciais da doença, assim como, aumento do RNAm de suas cadeias, principalmente alfa2(V). Por esta razão e com o intuito de entender sobre os processos moleculares e ultraestruturais que correlacionam o COL V à fibrose na ES, a proposta do presente estudo foi realizar análise morfológica e ultraestrutural das cadeias, alfa1(V) e alfa2(V), da pele de pacientes com ES, assim como avaliar a influência do gene COL5A2 na fibrilogênese. Pacientes e Métodos: As análises foram desenvolvidas utilizando fragmento de pele obtidas de biópsia, tanto de pacientes como controles, sob aprovação do comitê de ética (CAPPesq 0331/10) e de acordo com Declaração de Helsinque. Participaram do estudo 7 pacientes (homens=3, mulheres=4) diagnosticados com ES há dois anos ou menos, e indivíduos voluntários saudáveis (n=7) utilizados como grupo controle. A biópsia das peles foi dividida para dois grupos de análises: estudos histológicos e cultura de fibroblastos; sob solução de formol a 10%, foram realizadas análises histomorfométricas [coloração de Hematoxilina e Eosina (H e E), Tricrômico de Masson, imunofluorescência (IM) para cadeias alfa1(V) e alfa2(V), e reconstrução tridimensional (Zeiss LSM 510 META/UV)], e em solução de glutaraldeído 2% para análise ultraestrutural (microscopia eletrônica de transmissão com imunomarcação com ouro coloidal). A quantificação das cadeias foi realizada por histomorfometria, através de análise de imagem utilizando o software Image Pro-Plus 6.0. Já a cultura de fibroblastos foi desenvolvida para avaliar: distribuição e perfil das cadeias alfa1(V) e alfa2(V) [reconstrução 3D (Zeiss LSM 510 META/UV)],expressão gênica COL5A1, COL5A2 e ITGA2 [qRT-PCR (Applied Biosystems)], e inibição temporária do gene COL5A2. Resultados: Na análise morfológica (H&E e Masson) observou-se modificação da histoarquitetura da pele dos pacientes, com espessamento e retificação da epiderme devido ao aumento na densidade das fibras colágenas, com projeções das papilas dérmicas em direção à derme papilar. Esse resultado foi confirmado na quantificação das cadeias (IM), evidenciado por perda acentuada da cadeia alfa1(V) na derme papilar [12,77 ± 1,344 vs 66,84± 3,36 (p < 0,0001)] e aumento significante da expressão da cadeias alfa1(V) e alfa2(V) na derme reticular alfa1(V) [7,657 ± 0,2133 vs 13,75 ± 0,958 ( p < 0,0001)] e alfa2(V) [5,072 ± 0,4117 vs 21,07 ± 0,790 (p=0,001)] dos pacientes quando comparados ao controle. Assim como visto na imunomarcação com ouro coloidal das cadeias do COLV, houve ausência de expressão linear da cadeia alfa1(V) na derme papilar, contrastando com a expressão da mesma na pele de controles, se contrapondo a forte imunoexpressão das cadeias alfa1(V) e alfa2(V) com uma maior evidência da cadeia alfa2(V) na região espessada pela junção lâmina basal e derme reticular. A reconstrução 3D em cultura de fibroblastos dérmicos demonstrou grande atividade das células de pacientes com ES, confirmado na expressão gênica dos COL5A1, COL5A2 e ITGA2, que se mostraram aumentados significantemente nos pacientes em relação ao controle. Por fim, após inibição do COL5A2 houve uma tendência ao aumento na expressão do COL5A1, e superexpressão da ITGA2. Conclusão: A alteração dérmica observada em pacientes com ES esta correlacionada com a modificação na distribuição das cadeias alfas do COLV, principalmente por perda acentuada da alfa1(V)3 homotrímera na derme papilar e superexpressão da alfa2(V) em capilares e vasos, interferindo na formação de matriz extracelular normal, sugerindo uma alteração pós traducional desta proteína, e que maiores estudos sobre a inibição da cadeia alfa2(V) são importantes para uma futura terapia gênica para atenuar os sintomas desencadeados nesta patologia / Introduction: Recently many functions are attributed to type V collagen in normal physiological conditions and in some diseases, such as scleroderma. This protein presents unique structural features for regulating the diameter of fibrils heterotypic and immunogenicity being capable of eliciting an immune response independent. In recent discoveries, developed by our group, it was evident that collagen V presents anomalous histoarchitecture, increasing the immunoexpression in the skin and lung in the early stages of the disease, as well as increased mRNA of his chains, mainly alpha2(V). For this reason and in order to understand the molecular and ultrastructural processes that correlate COL V fibrosis in SSc, the purpose of this study was to perform morphological and ultrastructural analysis of the chains alpha1(V) and alpha2(V) of the patient´s skin with ES, as well as to assess the influence of the COL5A2 gene in fibrillogenesis. Patients and Methods: The analyses were developed using skin fragment obtained from biopsy, both of patients and controls, under the approval of the ethics committee (CAPPesq 0331/10) and in accordance with the Declaration of Helsinki. The study included 7 patients (male = 3, female = 4) diagnosed with ES for two years or less, and healthy volunteers (n = 7) used as a control group. The biopsy of the skin was divided in two groups of analyzes: histological studies and cultured fibroblasts; Under formaldehyde solution 10%, histomorphometric analysis [staining with hematoxylin and eosin (H e E), Masson\'s trichrome, immunofluorescence (IM) to alpha1(V) and alpha2(V) chains, and three-dimensional reconstruction (Zeiss LSM 510 META were performed/UV), and in a solution of 2% glutaraldehyde for ultrastructural analysis (transmission electron microscopy with immunostaining with colloidal gold). Quantitation was performed by the chain histomorphometry by image analysis using Image Pro-Plus 6.0 software. Already a fibroblast culture was developed to assess: distribution and profile of the alpha1(V) and alpha2(V) chains, 3D reconstruction (Zeiss LSM 510 META / UV), gene expression of COL5A1, COL5A2 and ITGA2 [RT-qPCR (Applied Biosystems)], and temporary inhibition of the COL5A2 gene. Results: In the morphological analysis (H&E and Masson) was observed modification of histoarchitecture patient\'s skin, with thickening and rectification of the epidermis due to increased density of collagen fibers, with projections of dermal papillae toward the papillary dermis. This result was confirmed by quantification of the chains (IM), evidenced by marked loss of the alpha1(V) chain in the papillary dermis [12.77 ± 1.344 vs 66.84 ± 3.36 (p < 0.0001)] and significant increase in the expression of alpha1(V) and alpha2(V) chains, in the reticular dermis alpha1(V) chain [0.2133 ± 7.657 vs 0.958 ± 13.75 (p < 0.0001)] alfa2(V) chain [5.072 ± 0.4117 vs 21.07 ± 0.790 (p = 0.001)] of patients when compared to control. As seen in the immunostaining with colloidal gold chains of COLV, there was no linear expression of the alpha1(V) chain in the papillary dermis, contrasting with the same expression on the skin of controls, in contrast to strong immunoexpression of alpha1(V) and alpha2(V) chains, with a higher evidence of alpha2(V) chain in the junction region by a thickened basement membrane and reticular dermis. The 3D reconstruction of dermal fibroblasts in culture demonstrated large cell activity of patients with SSc, confirmed the gene expression of COL5A1, COL5A2 and ITGA2, which showed significantly increased in patients compared to control. Finally, after inhibition of COL5A2 there was a trend to increase in the expression of the COL5A1, and overexpression of ITGA2. Conclusion: The dermal alteration observed in SSc patients is correlated with the change in the distribution of the collagen alpha (V) chains, mainly by marked loss of alpha1(V)3 homotrimer the papillary dermis and overexpression of the alpha2(V) in capillaries and vessels, interfering with the normal extracellular matrix formation, suggesting a post-translational modification of this protein, and further studies on the inhibition of chain alpha2(V) are important for future gene therapy to attenuate the symptoms of this pathology triggered

Introdução: Recentemente muitas são as funções atribuídas ao colágeno V em condições fisiológicas normais e em algumas doenças, como na esclerodermia. Esta proteína apresenta características estruturais singulares de regulação do diâmetro das fibrilas heterotípicas, e imunogenicidade, sendo capaz de desencadear uma resposta imune independente. Em descobertas recentes, desenvolvidas por nosso grupo, ficou evidenciado que o colágeno V apresenta histoarquitetura anômala, aumentando a sua imunoexpressão na pele e pulmão em estágios iniciais da doença, assim como, aumento do RNAm de suas cadeias, principalmente alfa2(V). Por esta razão e com o intuito de entender sobre os processos moleculares e ultraestruturais que correlacionam o COL V à fibrose na ES, a proposta do presente estudo foi realizar análise morfológica e ultraestrutural das cadeias, alfa1(V) e alfa2(V), da pele de pacientes com ES, assim como avaliar a influência do gene COL5A2 na fibrilogênese. Pacientes e Métodos: As análises foram desenvolvidas utilizando fragmento de pele obtidas de biópsia, tanto de pacientes como controles, sob aprovação do comitê de ética (CAPPesq 0331/10) e de acordo com Declaração de Helsinque. Participaram do estudo 7 pacientes (homens=3, mulheres=4) diagnosticados com ES há dois anos ou menos, e indivíduos voluntários saudáveis (n=7) utilizados como grupo controle. A biópsia das peles foi dividida para dois grupos de análises: estudos histológicos e cultura de fibroblastos; sob solução de formol a 10%, foram realizadas análises histomorfométricas [coloração de Hematoxilina e Eosina (H e E), Tricrômico de Masson, imunofluorescência (IM) para cadeias alfa1(V) e alfa2(V), e reconstrução tridimensional (Zeiss LSM 510 META/UV)], e em solução de glutaraldeído 2% para análise ultraestrutural (microscopia eletrônica de transmissão com imunomarcação com ouro coloidal). A quantificação das cadeias foi realizada por histomorfometria, através de análise de imagem utilizando o software Image Pro-Plus 6.0. Já a cultura de fibroblastos foi desenvolvida para avaliar: distribuição e perfil das cadeias alfa1(V) e alfa2(V) [reconstrução 3D (Zeiss LSM 510 META/UV)],expressão gênica COL5A1, COL5A2 e ITGA2 [qRT-PCR (Applied Biosystems)], e inibição temporária do gene COL5A2. Resultados: Na análise morfológica (H&E e Masson) observou-se modificação da histoarquitetura da pele dos pacientes, com espessamento e retificação da epiderme devido ao aumento na densidade das fibras colágenas, com projeções das papilas dérmicas em direção à derme papilar. Esse resultado foi confirmado na quantificação das cadeias (IM), evidenciado por perda acentuada da cadeia alfa1(V) na derme papilar [12,77 ± 1,344 vs 66,84± 3,36 (p < 0,0001)] e aumento significante da expressão da cadeias alfa1(V) e alfa2(V) na derme reticular alfa1(V) [7,657 ± 0,2133 vs 13,75 ± 0,958 ( p < 0,0001)] e alfa2(V) [5,072 ± 0,4117 vs 21,07 ± 0,790 (p=0,001)] dos pacientes quando comparados ao controle. Assim como visto na imunomarcação com ouro coloidal das cadeias do COLV, houve ausência de expressão linear da cadeia alfa1(V) na derme papilar, contrastando com a expressão da mesma na pele de controles, se contrapondo a forte imunoexpressão das cadeias alfa1(V) e alfa2(V) com uma maior evidência da cadeia alfa2(V) na região espessada pela junção lâmina basal e derme reticular. A reconstrução 3D em cultura de fibroblastos dérmicos demonstrou grande atividade das células de pacientes com ES, confirmado na expressão gênica dos COL5A1, COL5A2 e ITGA2, que se mostraram aumentados significantemente nos pacientes em relação ao controle. Por fim, após inibição do COL5A2 houve uma tendência ao aumento na expressão do COL5A1, e superexpressão da ITGA2. Conclusão: A alteração dérmica observada em pacientes com ES esta correlacionada com a modificação na distribuição das cadeias alfas do COLV, principalmente por perda acentuada da alfa1(V)3 homotrímera na derme papilar e superexpressão da alfa2(V) em capilares e vasos, interferindo na formação de matriz extracelular normal, sugerindo uma alteração pós traducional desta proteína, e que maiores estudos sobre a inibição da cadeia alfa2(V) são importantes para uma futura terapia gênica para atenuar os sintomas desencadeados nesta patologia / Introduction: Recently many functions are attributed to type V collagen in normal physiological conditions and in some diseases, such as scleroderma. This protein presents unique structural features for regulating the diameter of fibrils heterotypic and immunogenicity being capable of eliciting an immune response independent. In recent discoveries, developed by our group, it was evident that collagen V presents anomalous histoarchitecture, increasing the immunoexpression in the skin and lung in the early stages of the disease, as well as increased mRNA of his chains, mainly alpha2(V). For this reason and in order to understand the molecular and ultrastructural processes that correlate COL V fibrosis in SSc, the purpose of this study was to perform morphological and ultrastructural analysis of the chains alpha1(V) and alpha2(V) of the patient´s skin with ES, as well as to assess the influence of the COL5A2 gene in fibrillogenesis. Patients and Methods: The analyses were developed using skin fragment obtained from biopsy, both of patients and controls, under the approval of the ethics committee (CAPPesq 0331/10) and in accordance with the Declaration of Helsinki. The study included 7 patients (male = 3, female = 4) diagnosed with ES for two years or less, and healthy volunteers (n = 7) used as a control group. The biopsy of the skin was divided in two groups of analyzes: histological studies and cultured fibroblasts; Under formaldehyde solution 10%, histomorphometric analysis [staining with hematoxylin and eosin (H e E), Masson\'s trichrome, immunofluorescence (IM) to alpha1(V) and alpha2(V) chains, and three-dimensional reconstruction (Zeiss LSM 510 META were performed/UV), and in a solution of 2% glutaraldehyde for ultrastructural analysis (transmission electron microscopy with immunostaining with colloidal gold). Quantitation was performed by the chain histomorphometry by image analysis using Image Pro-Plus 6.0 software. Already a fibroblast culture was developed to assess: distribution and profile of the alpha1(V) and alpha2(V) chains, 3D reconstruction (Zeiss LSM 510 META / UV), gene expression of COL5A1, COL5A2 and ITGA2 [RT-qPCR (Applied Biosystems)], and temporary inhibition of the COL5A2 gene. Results: In the morphological analysis (H&E and Masson) was observed modification of histoarchitecture patient\'s skin, with thickening and rectification of the epidermis due to increased density of collagen fibers, with projections of dermal papillae toward the papillary dermis. This result was confirmed by quantification of the chains (IM), evidenced by marked loss of the alpha1(V) chain in the papillary dermis [12.77 ± 1.344 vs 66.84 ± 3.36 (p < 0.0001)] and significant increase in the expression of alpha1(V) and alpha2(V) chains, in the reticular dermis alpha1(V) chain [0.2133 ± 7.657 vs 0.958 ± 13.75 (p < 0.0001)] alfa2(V) chain [5.072 ± 0.4117 vs 21.07 ± 0.790 (p = 0.001)] of patients when compared to control. As seen in the immunostaining with colloidal gold chains of COLV, there was no linear expression of the alpha1(V) chain in the papillary dermis, contrasting with the same expression on the skin of controls, in contrast to strong immunoexpression of alpha1(V) and alpha2(V) chains, with a higher evidence of alpha2(V) chain in the junction region by a thickened basement membrane and reticular dermis. The 3D reconstruction of dermal fibroblasts in culture demonstrated large cell activity of patients with SSc, confirmed the gene expression of COL5A1, COL5A2 and ITGA2, which showed significantly increased in patients compared to control. Finally, after inhibition of COL5A2 there was a trend to increase in the expression of the COL5A1, and overexpression of ITGA2. Conclusion: The dermal alteration observed in SSc patients is correlated with the change in the distribution of the collagen alpha (V) chains, mainly by marked loss of alpha1(V)3 homotrimer the papillary dermis and overexpression of the alpha2(V) in capillaries and vessels, interfering with the normal extracellular matrix formation, suggesting a post-translational modification of this protein, and further studies on the inhibition of chain alpha2(V) are important for future gene therapy to attenuate the symptoms of this pathology triggered