Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-03-25 / Objetivo: Avaliar histologicamente e através da imuno-histoquímica as alterações celulares decorrentes do tratamento com Luz Intensa Pulsada (LIP) na região cervical de portadores de poiquilodermia de Civatte (PC). Métodos: Foram estudados 14 pacientes com poiquilodermia de Civatte na região cervical. Os pacientes foram submetidos a três sessões mensais de Luz Intensa Pulsada (LIP). Foi feita uma biópsia prévia e outra após o término do tratamento. Para cada paciente foram confeccionadas cinco lâminas, perfazendo um total de 70 lâminas para exame histopatológico e imuno-histoquímica. Foram estudadas com as seguintes colorações: Hematoxilina-Eosina (HE), Tricrômio de Masson (para o colágeno), Verhoeff-van-Gieson (para as fibras elásticas), Fontana-Masson (para a melanina) e a imuno-histoquímica com o CD 34. Resultados: Observamos melhoria tanto da pigmentação quanto da textura da pele de todos os pacientes. Verificamos na coloração pelo Tricrômio de Masson a proliferação e compactação (neocolagenese), bem evidente de fibras colágenas na derme papilar fato também confirmado pela análise de imagem digital. Pela coloração Fontana-Masson observou-se regularização na distribuição do pigmento melânico; o padrão mosqueado melhorou. Verificamos pela coloração Verhoeffvan Gieson que as fibras elásticas aumentaram em número, sobretudo nos casos onde a densidade do colágeno aumentou. Na imuno-histoquímica também observamos que não houve alterações significativas nos vasos, após tratamento com a Luz Intensa Pulsada (LIP). Conclusões: Evidenciamos aumento significativo na densidade e intensidade das fibras de colágeno, aumento do número de fibras elásticas e redistribuição do pigmento melânico, quando comparamos os grupos antes e depois do tratamento com a Luz Intensa Pulsada (LIP). Em relação aos vasos, houve diminuição do diâmetro vascular em cinco pacientes (35,7%). / Objective: To assess through histological and immunohistochemical analyses the cell changes after Intense Pulsed Light therapy in the cervical region of patients with poikiloderma of Civatte. Methods: Fourteen patients with poikiloderma of Civatte in the cervical region were studied. They were submitted to three monthly sessions of Intense Pulsed Light. Biopsies were performed before and after treatment. Five slides were prepared for each patient summing up 70 slides for histological and immunohistochemical analyses. The slides were stained with hematoxilyn-eosin (HE), Masson trichrome (for colagen), Verhoeffvan- Gieson (for elastic fibers), Fontana-Masson (for melanin) and CD 34 immunohistochemistry. Results: Improvement in both skin pigmentation and texture was observed in all patients in Masson Trichrome staining, showed evident proliferation and compaction (neocollagenesis) of collagen fibers in the papillary dermis, which was confirmed by digital imaging analysis. By Fontana- Masson staining even distribution of melanin pigment was found; the mottled pattern improved. In slides stained by Verhoeff-van-Gieson, the elastic fibers increase in number, mainly in the cases with higher collagen density. In Immunohistochemistry, there were no significant alterations in vessels after Intense Pulsed Light therapy. Conclusions: A significant increase in density and intensity of collagen fibers, increase in number of elastic was observed in papillary dermis and redistribution of melanin when comparing the groups before and after treatment with Intense Pulsed Light. The vessel diameter was smaller in five patients (35,7%). / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-29 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Objetivo: avaliar a resposta inflamatória sérica, tecidual tardia e realizar uma análise morfométrica do colágeno depositado nos reparos cirúrgicos com telas de alta densidade de polipropileno e de baixa densidade de polipropileno + poliglactina e popipropileno + titânio. Métodos: trinta ratos Wistar, albinos, nascidos no mesmo dia, nos quais se retirou fragmento de musculatura anterior do abdômen, foram alocados em grupos de 10. No grupo A, foi posicionada tela de polipropileno de alta densidade. Nos grupos B e C foram usadas implantes de baixa densidade, em associação com poliglactina e titânio, respectivamente. No pré-operatório imediato e nos dias 1 e 3 de pós-operatório (DPO) foram dosados através do método Luminex as seguintes citocinas pró-inflamatórias séricas: VEGF (fator de crescimento endotelial vascular), IL1β (interleucina 1 beta), IL6 (interleucina 6) e TNFα (fator de necrose tumoral alfa). No 40º dia realizou-se eutanásia e biópsia de fragmento central no sítio de inserção da tela. Usaram-se as colorações hematoxilina-eosina (HE) e tricromo de Masson na análise histológica das reações inflamatórias. Para avaliação objetiva dos resultados, empregou-se uma escala com pontuações atribuídas aos seguintes itens: camadas de células na periferia dos granulomas, reação inflamatória no tecido do hospedeiro, resposta inflamatória na superfície da tela, maturação tecidual, presença de células gigantes e invasão inflamatória na musculatura do animal adjacente à tela. No estudo morfométrico do colágeno usou-se o pricrosirius sob luz polarizada com leitura de dados pelo programa de computador Image Tool. O teste não paramétrico de Kruskal Wallis foi a ferramenta estatística para avaliação da reação inflamatória (HE e Masson). ANOVA foi usada na estatística dos dados resultantes da análise do colágeno e das citocinas. Resultados: Não houve diferenças estatisticamente significantes nas dosagens de citocinas no período de estudo (P>0,05). Com relação à Histologia, no grupo A houve menor número de granulomas e de camadas de células na periferia dos mesmos, menos células gigantes, com maior fibrose, maturação tecidual e síntese de colágeno (P<0,01). No grupo B, foram encontrados maior número de granulomas e de camadas de células nos mesmos, mais células gigantes, com intensa reação inflamatória do tipo corpo estranho. Houve menor fibrose, maturação tecidual e deposição de colágeno (P<0,01). O grupo C apresentou valores intermediários entre os grupos B e A, exceto pelo menor processo inflamatório na superfície da tela. Conclusões: Não houve diferenças significativas nos níveis de citocinas entre os grupos estudados. Nos animais onde foi implantada a tela de polipropileno + poliglactina, houve processo inflamatório mais intenso tardio, com menor maturação tecidual e deposição de colágeno no 40°DPO. A tela de polipropileno apresentou menor processo inflamatório tardio, com maior maturação tecidual e deposição de colágeno. A tela de polipropileno+titânio apresentou valores intermediários entre as anteriores. / Purpose: Incisional hernia occurs in approximately 11% of all laparotomies. Changes in collagen have been closely implicated in its pathogenesis. The high recurrence rate (45 to 54%) after primary suture has stimulated the development of meshes. Currently, meshes are the biomaterials implant group most used in medicine. This study aims to compare the serum and tissue inflammatory responses and collagen deposition caused by meshes made of polypropylene, polypropylene + polyglactin and polypropylene + titanium. Methods: Thirty Wistar rats were divided into three groups. In group A, a high-density polypropylene mesh was positioned on the abdominal wall. In groups B and C, lowdensity meshes were used in associations with polyglactin and titanium, respectively. Immediately before the operation and on the first, third and fortieth postoperative days, pro-inflammatory cytokines were assayed. On the 40th postoperative day, the region of the inserted prosthesis was biopsied. Hematoxylin-eosin and Masson’s trichrome colorations were used to value the tissue inflammatory reaction with a scale for objective scoring. The scale had six itens: cellular layers in granulomas periphery, inflammatory response in host tissue, inflammatory response in the mesh surface, tissue ingrowth, granulomas and muscular invasion by the inflammatory reaction. For collagen, picrosirius was used with data reading using the Image Tool computer software. Statistics tools: Kruskal Wallis and Dunn tests (HE e Masson) and ANOVA with Bonferroni test (collagen and cytokines). Results: Cytokines: there were no statistically significant differences between the groups. Histology: on the 40th postoperative day in group A, there were fewer inflammatory tissue response and greater collagen deposition (P<0.01). In group B, there were greater inflammatory tissue response and less collagen deposition (P<0.01). Group C presented intermediate values between groups A and B. Conclusions: There were no significant differences in cytokine levels between the groups in the present study. In the animals with the polypropylene + polyglactin mesh implant there was the most intense inflammatory process with lower tissue maturation and collagen deposition on the 40th postoperative day. The polypropylene mesh presented a less severe late inflammatory process, with greater tissue maturation and collagen deposition. The polypropylene + titanium mesh presented intermediate values between the others. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-09-30 / Introducao: A busca por uma fonte alternativa de celulas para a Engenharia Tecidual ossea, se deve a morbidade da area doadora e maior dificuldade de expansao in vitro quando da utilizacao de celulas de linhagem osteoblastica, como as celulas da medula ossea. Portanto, a busca de outras fontes celulares para contribuir para esta terapia, se torna fundamental. Objetivo: Avaliar a influencia do fator de crescimento transformante beta1(TGF-ƒÀ1) na diferenciacao celular de fibroblastos dermicos humanos cultivados em esponja de colageno. Metodos: As esponjas de colageno foram cortadas em pecas de 16mm de diametro e 2 mm de espessura sendo distribuidas em quatro grupos denominados de acordo com o meio de cultura: CONTROLE (Padrao); TGF-ƒÀ1 (Padrao acrescido de 10ng/mL de TGF-ƒÀ1); OSTEOG. Padrao acrescido de 0,5ƒÊg/mL de acido ascorbico, 10 mMol/L de ƒÀ-glicerofosfato e 10nMol/L de dexametasona) e OSTEOG.TGF- ƒÀ1(meio osteogenico acrescido de 10ng/mL de TGF-ƒÀ1). As avaliacoes da atividade da fosfatase alcalina (FAL) e quantidade de osteocalcina (OC) foram realizadas no sobrenadante. A interacao das celulas com a esponja de colageno foi avaliada pela exame histologico e a presenca de depositos de calcio fosfato realizada pelo teste de Von Kossa, todas as avaliacoes foram realizadas no segundo, setimo, 14 ‹, 21 ‹, 28 ‹ e 56 ‹dias. Resultados: Atividade da FAL e Quantidade de OC: nao houve diferenca entre os grupos CONTROLE e TGF- ƒÀ1 em nenhuma das avaliacoes e em nenhum dos pontos de avaliacao, no entanto na comparacao com os outros dois grupos, os valores foram significativamente menores, o grupo OSTEOG.TGF- ƒÀ1 obteve valores significativamente. Interacao Celula/Esponja: em todos os grupos as celulas inicialmente estavam na superficie com posterior penetracao para o interior da esponja. Depositos Mineralizados: nao existiu a presenca nos grupos CONTROLE e TGF- ƒÀ1 e nos grupos OSTEOG. e OSTEOG. TGF- ƒÀ1 existiu a presenca de depositos a partir do 14 ‹ dia ate o 56 ‹ dia. Conclusao: O TGF-ƒÀ1 no meio osteogenico, na cultura de fibroblastos dermicos humanos em esponja de colageno, aumentou a atividade da FAL e a quantidade de OC, nao alterando a interacao celula/esponja e a presenca de depositos mineralizados de calcio fosfato na estrutura da esponja de colageno / Introduction: The research of new sources of cells for Tissue Engineering of the human bone, it is necessary because the use of the primary choice for this therapy (bone marrow cell), can result in a morbidity of the donor area and poor expansion in vitro. Therefore, it is important to seek other cellular sources to contribute to this therapy. Objective: To evaluate the influence of transforming growth factor-beta 1 (TGF-â1) in the osteogenic differentiation of human dermal fibroblasts cultured in a collagen sponge. Methods: The collagen sponges were cut in 16x2-mm sections and distributed into four groups according to the culture medium: CONTROL (DMEM culture medium); TGF-â1 (DMEM culture medium with 10 ng/ml of TGF-â1); OSTEOG (DMEM culture medium with 0.5 ìg/ml of ascorbic acid, 10 mmol/l of â-glycerophosphate and 10 nmol/L of dexamethasone); and OSTEOG.TGF-â1 (osteogenic medium with 10 ng/ml of TGF-â1). Measurements of the alkaline phosphatase (ALP) activity and the amount of osteocalcin (OC) in the supernatant, as well as measurement of the penetration of cells in the sponge by histology and measurement of calcium phosphate deposits by the Von Kossa test, were performed on days 2, 7, 14, 21, 28, and 56 . Results: ALP activity and OC level: There were no differences between the CONTROL and TGF-â1 groups in any of the measurements between any of the measurement points. However, the measured values were significantly lower than the OSTEOG and OSTEOG.TGF-â1 groups. The OSTEOG.TGF-â1 group achieved significantly higher. Interaction Cell/Sponge: in all groups the cells were at the top of sponge in the beginning and there were a penetration into the sponge up to the end of the experiments. Deposits of Calcium Phosphate: There were no presence of deposits in the CONTROL and TGF-â1 groups. There were evidence of the deposits in the OSTEOG. and OSTEG. TGF-â1 groups from the 14° day up to 56° day. Conclusion: TGF-â1 in osteogenic medium increased the ALP activity and the OC levels but did not influence the interaction cell/sponge and the presence of mineralized deposits of calcium phosphate into the collagen sponge. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

APOLONIO, Fabianni Magalhães. Análise da atividade proteolítica das MMPS -2 e -9 em dentina humana sadia e sua interação na interface adesiva. 2014. 96 f. Tese (Doutorado em Odontologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem. Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-05-07T15:56:05Z No. of bitstreams: 1 2014_tese_fmapolonio.pdf: 6464281 bytes, checksum: b84b5ea93ad2ca5c2f283ea9350428b5 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-05-07T16:06:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_tese_fmapolonio.pdf: 6464281 bytes, checksum: b84b5ea93ad2ca5c2f283ea9350428b5 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-07T16:06:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_tese_fmapolonio.pdf: 6464281 bytes, checksum: b84b5ea93ad2ca5c2f283ea9350428b5 (MD5) Previous issue date: 2014 / MMPs are enzymes that can degrade exposed collagen in dentin/resin interface causing serious damage to maintaining the integrity of the adhesive interface. The present study is divided in three chapters, whose aims: 1) To evaluate the effect of demineralization by different acid solutions in MMP-2 activation on human dentin (Chapter 1); 2) To evaluate the effect of a one-step adhesive system on dentinal MMP-2 and -9 activation using in situ zymography and an enzymatic activity assay (Chapter 2); and 3) To evaluate the ability of MMPs inhibition by 1-ethyl-3-(3- dimethylaminopropryl) carbodiimide (EDC) EDC cross-linker on dentin (Chapter 3). As for the methodology approaches, 3 in vitro studies were performed to evaluate enzymatic expression of human dentin. Dentin protein was extracted after demineralization by 1% phosphoric acid, 10% phosphoric acid and 10% citric acid for 1, 5 and 10 minutes, and subjected to gelatin zymographic and activity assay (Chapter 1). Dentin powder/slabs were treated with one-step adhesive Adper Easy Bond (3M ESPE) and MMP-2 and -9 activities were evaluated using in situ zymography and quantified by means of an specific enzymatic assay (Chapter 2). Dentin powder/slabs were treated with one of those adhesive systems: Optibond FL or Scotchbond 1XT with or without pre-treatment using EDC. The enzymatic activity was analyzed using gelatin zymography and in situ zymography (Chapter 3). MMP-2 activity was present in all tested groups and increased after demineralization by 10% phosphoric acid and 10% citric acid (Chapter 1). After treated with one-step adhesive, enzymatic activity increased. In situ evaluation showed that MMPs action is associated with the exposed and unprotected collagen promoted by adhesive monomers (Chapter 2). Zymograms revealed increased expression of dentin endogenous MMP-2 and -9 after adhesives systems application, while the use of 0.3M EDC as a primer, inactivated dentin gelatinizes (Chapter 3). It can be concluded that both acid solutions (Chapter 1) and self-etch adhesives (Chapter 2) are able to activate dentin MMPs and that solutions like EDC cross-linker can inhibit the activation of those enzymes (Chapter 3). / As metaloproteinases são enzimas capazes de degradar o colágeno exposto na interface dentina/resina provocando sérios danos à manutenção da integridade da interface adesiva. Este estudo está dividido em três capítulos, cujos objetivos foram: 1) Avaliar o efeito da desmineralização através de diferentes ácidos na ativação de MMP-2 em dentina humana (Capítulo 1); 2) Avaliar o efeito de um sistema adesivo de passo único na ativação de MMP-2 e -9 dentinária usando zimografia in situ e teste de atividade enzimática; 3) Avaliar a capacidade do agente de ligação cruzada 1-etil-3-(3-dimetilaminopropril) carbodiamida (EDC) na inibição da atividade das MMPs em dentina (Capítulo 3). Como abordagens metodológicas foram realizados 3 estudos in vitro com avaliação enzimática em dentina humana. Proteína dentinária foi extraída após desmineralização com os ácidos fosfórico a 1% e a 10% e cítrico a 10% por 1, 5 e 10 min, e submetida a zimografia gelatinosa e teste de análise enzimática especifica, para a avaliação da atividade de MMP-2 (Capítulo 1). Dentina em pó/blocos foi tratada com o adesivo de passo único Adper Easy Bond (3M ESPE) e a atividade de MMP-2 e -9 foi avaliada através de zimografia in situ e quantificada através do ELISA (Capítulo 2). Dentina em pó/blocos foi tratada com os sistemas adesivos Optibond FL ou Scotchbond 1XT com ou sem tratamento prévio com EDC. A atividade enzimática foi analisada através de zimografia gelatinosa e in situ (Capítulo 3). A atividade de MMP-2 esteve presente em todos os grupos testados e aumentou após desmineralização com ácido fosfórico 10% e ácido cítrico 10% (Capítulo 1). Após tratamento com o adesivo de passo único, houve aumento da atividade enzimática dentinária. A análise in situ mostrou que a ação das MMPs está associada ao colágeno exposto e não protegido pelos monômeros adesivos (Capítulo 2). Zimograma revelou um aumento na expressão de MMP-2 e -9 após a exposição aos sistemas adesivos, enquanto o uso de EDC 0.3M como prétratamento, inativou as gelatinases dentinárias (Capítulo 3). Pode-se concluir que tanto soluções ácidas (Capítulo 1), quanto os adesivos autocondicionantes são capazes de ativar as MMPs dentinárias (Capítulo 2) e que algumas substâncias, como o agente de ligação cruzada EDC, são capazes de inibir a ativação destas enzimas (Capítulo 3).

RODRIGUES, N. S. Efeito da desproteinização no grau de conversão e na resistência de união de cimentos resinosos autoadesivos à dentina. 2016. 45 f. Dissertação (Mestrado em Odontologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-04-28T15:38:48Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_nsrodrigues.pdf: 874692 bytes, checksum: 1462e679ca15a85bf0bad23b068a84a7 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-04-28T15:38:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_nsrodrigues.pdf: 874692 bytes, checksum: 1462e679ca15a85bf0bad23b068a84a7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-28T15:38:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_nsrodrigues.pdf: 874692 bytes, checksum: 1462e679ca15a85bf0bad23b068a84a7 (MD5) Previous issue date: 2016-02-16 / The adhesive resin cements not completely dissolve the smear layer and the resulting surface interaction that occurs between cement and dentin can be harmful. Sodium hypochlorite (NaOCl) may cause the removal of collagen, with an option to eliminate this mechanical barrier, which may enhance the chemical interaction between cement and dentine. This study evaluated the effect of two deproteinization strategies in bond strength to dentin (UK), degree of in situ conversion (GC) and nanoleakage (NI) two self-adhesive resin cements after 24 h and after 200,000 mechanical cycles. One hundred and fourteen human third molars were divided into six groups according to cement used and deproteinization strategy: RelyX U200 (UK) following the manufacturer's instructions (control), RU after the deproteinization in the mineralized dentin using sodium hypochlorite (RU - NaOCl), RU after etching (15 sec) and deproteinized dentin (RU - Etching + NaOCl) Maxcem Elite (ME) following the manufacturer's instructions (control), ME after deproteinization dentin (ME - NaOCl) ME after etching (15 sec) and deproteinized dentin (ME - Etching + NaOCl). The specimens were randomly divided into two subgroups for the microtensile test: tested in the immediate period and after 200,000 mechanical cycles. For NI, two slices of each group were infiltrated with ammoniacal silver nitrate solution prepared and analyzed by SEM. GC-situ three specimens of each group was immediately measured in micro-Raman spectroscopy. Data were statistically analyzed by ANOVA two criteria and multiple comparisons Tukey test (p <0.05). The deproteinization of dentine without acid etching increased the RU values ​​of the two cements in immediate groups. The dentine deproteinization decreased the GC for both cements. After the mechanical cycling, this technique was effective for ME, but did not affect the UK bond strength. The experimental group showed less NI after aging. The long-term benefits of deproteinization presented in this work are encouraging and may justify this additional clinical step. / Os cimentos resinosos autoadesivos não dissolvem completamente a lama dentinária e a consequente interação superficial que ocorre entre o cimento e a dentina pode ser prejudicial. O hipoclorito de sódio (NaOCl) pode causar a remoção de colágeno, sendo uma opção para eliminar essa barreira mecânica, podendo fortalecer a interação química entre cimento e dentina. O presente estudo avaliou o efeito de duas estratégias de desproteinização na resistência de união à dentina (RU), grau de conversão in situ (GC) e nanoinfiltração (NI) de dois cimentos resinosos autoadesivos após 24 h e após 200.000 ciclos mecânicos. Cento e catorze terceiros molares humanos foram distribuídos em seis grupos de acordo com o cimento utilizado e a estratégia de desproteinização: RelyX U200 (RU) seguindo as instruções do fabricante (controle), RU após a desproteinização na dentina mineralizada utilizando hipoclorito de sódio (RU - NaOCl), RU após condicionamento ácido (15 s) e desproteinização na dentina (RU - Etching + NaOCl), MaxCem Elite (ME) seguindo as instruções do fabricante (controle), ME após a desproteinização na dentina (ME - NaOCl), ME após condicionamento ácido (15 s) e desproteinização na dentina (ME - Etching + NaOCl). Os espécimes foram aleatoriamente subdivididos em dois subgrupos para o teste de microtração: testados no período imediato e após 200.000 ciclos mecânicos. Para a NI, duas fatias de cada subgrupo foram infiltradas com solução de nitrato de prata amoniacal, preparadas e analisadas em MEV. O GC in situ de três espécimes de cada grupo imediato foi mensurado em espectroscopia micro-Raman. Os dados foram estatisticamente analisados por Análise de Variância a dois critérios e teste de comparações múltiplas de Tukey (p<0.05). A desproteinização da dentina sem condicionamento ácido prévio aumentou os valores de RU dos dois cimentos nos grupos imediatos. A desproteinização dentinária diminuiu o GC para os dois cimentos. Após a ciclagem mecânica, essa técnica foi efetiva para o ME, mas não afetou a resistência de união do RU. Os grupos experimentais apresentaram menor NI após o envelhecimento. Os benefícios em longo prazo da desproteinização apresentados nesse trabalho são encorajadores e podem justificar esse passo clínico adicional.

Resumo: A correção cirúrgica das hérnias da parede abdominal persiste como uma operação frequente. O emprego de telas cirúrgicas na correção desses defeitos tem aumentado. As complicações relacionadas com o uso da telas de polipropileno, tais como formação de aderências, infecções, fístulas, perda de força tênsil e consequente recidivas, justificam a pesquisa por novos materiais. O presente estudo objetivou a análise de desempenho de duas telas cirúrgicas de composições diferentes, durante o processo de cicatrização de defeito de parede abdominal de ratos, através de parâmetros macroscópicos, microscópicos e tensiométricos. Trinta e três ratos Wistar, machos adultos foram anestesiados e submetidos à retirada de parede abdominal anterior, exceto pele, com área de 1,5cmx2cm. Dezessete animais tiveram o defeito corrigido pela sutura borda a borda de tela cirúrgica, composta de polipropileno + poliglecaprone (Grupo U - Ultrapro®). Dezesseis animais tiveram o defeito corrigido de maneira já descrita, mas utilizando tela cirúrgica composta de polipropileno + polidioxanone + celulose (Grupo P -Proceed®). Cada grupo foi dividido em dois subgrupos, de acordo com o momento da eutanásia (sete dias ou vinte oito dias após a operação). Foram analisados parâmetros macroscópicos (hematoma, deiscências, infecções, fístula, aderência e hérnia), microscópicos (células monomorfonucleares, tecido de granulação, fibrose, escore de inflamação subaguda e crônica, e quantificação do colágeno maduro e imaturo); e tensiométricos (tensão máxima e força máxima de ruptura). Houve maior infecção com a tela Proceed® aos 7 dias quando comparada à tela Ultrapro® no mesmo período e também quando comparada a mesma tela aos 28 dias. Houve maior número de monomorfonucleares, maior tecido de granulação e maior escore de inflamação subaguda na análise da tela Ultrapro®, nos 28 dias quando comparado com a mesma tela aos 7 dias. Houve um aumento do colágeno tipo I no grupo Proceed ® do período de 7 dias para o de 28 dias, com p=0,047. E houve aumento na tensão de ruptura, quando comparados os dois períodos, nas duas telas analisadas. Houve menor tensão de ruptura e deformidade dos tecidos com a tela Proceed® em 7 dias, igualando-se aos 28 dias. As telas conservam semelhanças no resultado final. Mais estudos, com número maior de animais devem ser realizados para melhor avaliação.

Orientador: Prof. Dr. Jorge Eduardo Fouto Matias / Co-orientadora: Profª. Drª. Maria de Lourdes Pessole Biondo-Simões / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Clínica Cirúrgica. Defesa: Curitiba, 16/12/2016 / Inclui referências : f.52-59 / Resumo: Avaliar os efeitos benéficos da administração tópica do metronidazol no depósito de colágeno, na diferenciação de fibroblastos e na contração da ferida durante a cicatrização experimental por segunda intenção em 108 ratos machos Wistar, com peso de 300 a 350g, que foram submetidos a uma ferida circular, com dois centímetros de diâmetro, da espessura total de pele do dorso. Os animais foram divididos em cinco grupos (18 animais por grupo) de acordo com a concentração da solução do metronidazol utilizada (4%, 6%, 8%,10% e 12%) durante o curativo realizado diariamente durante todo o período de experimento subdividido em três tempos de análise (após 3, 7 e 14 dias de observação). A contração da ferida foi avaliada por planimetria digital, a coloração Sirius Red foi utilizada para quantificar os tipos de colágeno I e III, os miofibroblastos e protomiofibroblastos foram identificados usando técnicas de imunoistoquímica CD34 e ?-SMA. A análise estatística, incluindo comparações de intergrupos e intragrupos, foi calculada por teste não paramétrico de Kruskal-wallis usando o software SSPS e valor de p de 0,05, significância estatística de 95%. A contração da ferida não apresentou diferença entre os grupos e o controle. Os grupos de metronidazol apresentaram melhores depósitos de colágeno tipo I e III após 3 (p=0,013 e p=0,003) e 7 dias (p=0,008 e p=0,001) independentemente da concentração da solução. Os protomiofibroblastos foram significativamente mais numerosos aos 7 dias (p=0,022) nos grupos metronidazol de 4%, 6% e 8%. Após 14 dias, nos mesmos grupos, os miofibroblastos predominaram significativamente (p=0,01). A administração tópica de solução de metronidazol em feridas de pele com cicatrização por segunda intenção foi capaz de melhorar deposição local de colágeno e a diferenciação de fibroblastos. Apesar destes efeitos benéficos, a fase de contração da cicatrização de feridas permaneceu inalterada, sem redução significativa da contração avaliada pela planimetria digital. Essas descobertas podem ser potencialmente utilizadas em favor do processo de cicatrização de feridas. Descritores: Cicatrização. Metronidazol. Administração Tópica. Absorção Cutânea. Colágeno. Fibroblastos. Miofibroblastos. Ratos. / Abstract: In order to address beneficial effects of metronidazole topical administration on collagen deposit, fibroblasts differentiation and wound contraction during experimental second-intention healing, 108 Wistar male rats, weighing 300-350g were submmited to a circular, 2 cm diameter, total deep back skin wound. Animals were divided into five groups (18 each group) according to the metronidazole solution concentration used (4%, 6%, 8%, 10% and 12%) during the dressing performed daily all over the period of experiment which was subdivided into three times of analysis (after 3, 7 and 14 days of observation). Wound contraction was assessed by digital planimetry, Sirius Red staining was used to quantified collagen types I and III, and myofibroblasts/protomyofibroblasts were identified using CD34 and ?-SMA immunohistochemistry techniques. Statistical analysis, including intergroups and intragroups comparisons was calculated by non-parametric Kruskal-Wallis test using SSPS software and p value of 0,05, statistical significance of 95%. Wound contraction wasn't different between groups and control. Metronidazole groups showed better types I and III collagen deposits after 3 (p=0,013 and p=0,003) and 7 days (p=0,008 and p=0,001) regardless the solution concentration. Protomyofibroblasts were significantly more numerous at 7 days (p=0,022) in metronidazole groups of 4% 6% and 8%. After 14 days, at the same groups, myofibroblasts predominated significantly (p=0,01). Topical administration of metronidazole solution in experimental secondintention skin wounds was able to improve local collagen deposit and fibroblasts differentiation. Despite these beneficial effects, contraction phase of wound healing remained unchanged, without significant reduction of contraction phase as assessed by digital planimetry. These findings can be potentially used in favor of the wound healing process. Keywords: Wound Healing. Metronidazole. Administration, Topical. Skin Absorption. Collagen. Fibroblasts. Myofibroblasts. Rats.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-06-29T14:39:45Z No. of bitstreams: 1 2015_LaizaMagalhaesdeAraujo_Parcial.pdf: 735941 bytes, checksum: 70cc601619614dafbe99de3ab5a29b65 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-06-29T15:30:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_LaizaMagalhaesdeAraujo_Parcial.pdf: 735941 bytes, checksum: 70cc601619614dafbe99de3ab5a29b65 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-06-29T15:30:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_LaizaMagalhaesdeAraujo_Parcial.pdf: 735941 bytes, checksum: 70cc601619614dafbe99de3ab5a29b65 (MD5) / O processo de envelhecimento da pele é bastante complexo e pode ser classificado como envelhecimento intrínseco, determinado primordialmente por fatores genéticos, e envelhecimento extrínseco, induzido por fatores como exposição crônica à radiação ultravioleta, consumo excessivo de álcool, tabagismo e fatores nutricionais. A pele envelhecida é caracterizada por alterações morfológicas e funcionais que podem provocar o enrugamento, descamação, ressecamento, anormalidade de pigmentação e câncer de pele. Algumas das desordens que acometem a pele envelhecida se devem principalmente ao estresse oxidativo promovido por espécies reativas de oxigênio, que são capazes de alterar o equilíbrio entre síntese e degradação de componentes da matriz extracelular dérmica, favorecendo o segundo em detrimento do primeiro. Produtos naturais protegem a pele de danos induzidos pelo estresse oxidativo e podem atuar em vias importantes no processo de envelhecimento cutâneo. Dentre as possíveis fontes para obtenção de produtos naturais pode-se destacar os fungos endofíticos que são capazes de produzir uma grande diversidade de compostos. O objetivo deste estudo foi avaliar a influência do tratamento com metabólitos de dois fungos endofíticos isolados de folhas de Bauhinia variegata na expressão gênica do colágeno do tipo I, metaloproteinase do tipo 1 e inibidor de metaloproteinase do tipo 1 em fibroblastos dérmicos humanos expostos ao estresse oxidativo. Os resultados obtidos mostraram que ambos os fungos foram capazes de produzir compostos polifenólicos e, mais especificamente, flavonóides. O tratamento dos fibroblastos com o extrato produzido por um dos fungos endofíticos induziu o aumento da expressão gênica do colágeno do tipo I, diminuiu a expressão gênica da metaloproteinase do tipo 1 e inibiu a atividade da metaloproteinase do tipo 2, sugerindo que os metabólitos produzidos por este fungo podem ser benéficos na prevenção do envelhecimento cutâneo. / Skin aging process is very complex and can be classified as intrinsic aging, primarily determined by genetic factors, and extrinsic aging, induced by nutritional and behavioral factors, such as chronic exposure to ultraviolet radiation, excessive alcohol consumption, smoking and nutritional disorders. Skin aging is characterized by morphological and functional changes, which can cause wrinkling, scaling, dryness, pigmentation abnormalities and skin cancer. Some of the disorders that affect the skin aging are mainly due to oxidative stress promoted by reactive oxygen species that are able to change the balance between synthesis and degradation of the dermal extracellular matrix components, favoring degradation rather than the synthesis process. Natural products protect skin from damage induced by oxidative stress and may act in important pathways in the skin aging. Among the possible sources for obtaining natural products it is possible to highlight the endophytic fungi, which are able to produce a great diversity of natural compounds. The objective of this study was to evaluate the influence of treatment with metabolites produced by two endophytic fungi isolated from Bauhinia variegate leaves on genic expression of collagen type I, metalloproteinase type 1 and tissue inhibitor of metalloproteinase type 1 in human dermal fibroblasts exposed to oxidative stress. The results show that both fungi were able to produce polyphenolic compounds and, more specifically, flavonoids. Treatment of fibroblasts with the extract produced by one of the endophytic fungi increased the expression of collagen type I gene, reduced the expression of metalloproteinase type 1 gene and inhibited metalloproteinase type 2 activity, suggesting that metabolites produced by this fungus can be benefic in prevent skin aging.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Curso de Ciências Farmacêuticas, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, 2016. / Texto liberado parcialmente pelo autor. Conteúdo restrito: Metodologia, Resultados e Discussão. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-12-20T10:42:29Z No. of bitstreams: 1 2016_ÁdriadoPradoBarros_PARCIAL.pdf: 1775734 bytes, checksum: 6269358cc5ee36c2fc9cad58fedeb789 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-01-26T17:29:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_ÁdriadoPradoBarros_PARCIAL.pdf: 1775734 bytes, checksum: 6269358cc5ee36c2fc9cad58fedeb789 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-26T17:29:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_ÁdriadoPradoBarros_PARCIAL.pdf: 1775734 bytes, checksum: 6269358cc5ee36c2fc9cad58fedeb789 (MD5) / O envelhecimento da pele em humanos é um processo complexo e pode ser induzido por fatores intrínsecos e extrínsecos. Uma das alterações observadas é a redução no número de fibroblastos que além de produzirem componentes da matriz extracelular, como diferentes tipos de colágeno, fibronectina e proteoglicanos, produzem também as metaloproteinases (MMP). No envelhecimento cronológico, o que se observa é um aumento dos níveis de MMP com a idade, uma menor taxa da síntese de colágeno e redução dos inibidores teciduais das MMP (TIMP), o que explica o aspecto flácido da pele envelhecida. Nesse estudo, a influência de diferentes concentrações de L-arginina na síntese de colágeno em cultura de fibroblastos dérmicos humanos e, consequentemente, na elasticidade da pele foi avaliada. A L-arginina é o substrato da síntese de óxido nítrico, o qual pode estar envolvido na angiogenese, proliferação celular e na síntese de colágeno, uma vez que aumenta a expressão de COL1A1. Ao mesmo tempo, ela também pode ser precursora indireta da síntese de colágeno, atuando como fonte de prolina, componente da fibra de pró-colágeno. Para avaliar a influência da L-arginina na síntese de colágeno e, consequentemente, na elasticidade da pele, foram estudados a citotoxicidade desse ativo, a expressão gênica de COL1A1, MMP-1 e TIMP-1 por RT-PCRq, a síntese de colágeno, os níveis de glutationa reduzida e oxidada, a atividade da catalase e da superóxido dismutase, os níveis de metabólitos oxidativos gerados após os tratamentos e o efeito estimulante da L-arginina na síntese de colágeno via óxido nítrico sintase. Os resultados encontrados mostraram que a Larginina não é citotóxica e que, nas concentrações de 1000 µM, 2500 µM e 6000 µM, tende a induzir um aumento na expressão gênica e na síntese de colágeno. No entanto, na concentração de 6000 µM foi observado um aumento da expressão de MMP-1 e uma diminuição na expressão de TIMP-1. Por ser um doador de NO, o tratamento com a L-arginina aumentou os metabólitos oxidativos, mas em contrapartida as células aumentaram a atividade da superóxido dismutase (SOD) e da catalase (CAT), mantendo o estado redox das células, que foi observado através da relação entre glutationa reduzida e glutationa oxidada. Diante desses resultados e da possibilidade de utilizar a L-arginina como um ativo cosmético, foi iniciado o estudo de pré-formulação com a avaliação da hidroxipropil-β-ciclodextrina (HP β C) e β -ciclodextrinas (β C). No entanto, esses dois sistemas de inclusão aumentaram a atividade de MMP-2 e a HP β C diminuiu a expressão de COL1A1. Portanto, a Larginina se mostrou um excelente candidato a ativo cosmético, capaz de aumentar a síntese de colágeno em fibroblastos dérmicos humanos. / Skin aging in humans is a complex process and can be induced by intrinsic and extrinsic factors. One of the observed changes is a reduction in the number of fibroblasts that not only produce extracellular matrix components, such as different types of collagen, fibronectin and proteoglycans, but also produce metalloproteinases (MMPs). In chronological aging, it is observed an increase in MMP levels with age, a lower rate of collagen synthesis and reduction of tissue inhibitors of MMPs (TIMPs), which explains the flaccid appearance of aged skin. In this study, it was evaluated the influence of different L-arginine concentrations in collagen synthesis, in cultured human dermal fibroblasts, and, consequently, in skin elasticity. L-arginine is the substrate for nitric oxide synthesis, which may be involved in angiogenesis, cell proliferation and collagen synthesis, since it increases the expression of COL1A1. Also, it can be an indirect precursor of collagen synthesis, acting as a source of proline, pro-collagen fiber component. To evaluate the effect of L-arginine on collagen synthesis and, consequently, on skin elasticity, cytotoxicity, COL1A1, MMP- 1 and TIMP-1 gene expression by RT-qPCR, collagen synthesis, levels of reduced and oxidized glutathione, catalase activity and superoxide dismutase activity, levels of oxidative metabolites generated after treatment and the stimulating effect of Larginine in collagen synthesis via nitric oxide synthase were studied. The results showed that L-arginine is not cytotoxic and at concentrations of 1000 μM, 2500 μM and 6000 μM tends to lead to an increase in gene expression and synthesis of collagen. However, at concentration of 6000 μM L-arginine induced an increase in MMP-1 expression and a decrease in TIMP-1 expression. Since it is a NO donor, treatment with L-arginine increased oxidative metabolites but, by the other hand, the cells increased the activity of superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT), maintaining the redox state of cells, what was observed through the rate of reduced and oxidized glutathione. Considering these results, and the possibility of using Larginine as an active cosmetic, the pre-formulation study was started by evaluation of hydroxypropyl--cyclodextrin (HPC) and -cyclodextrins (C. However both the excipients increased MMP-2 activity and HPC promoted a decrease in COL1A1 expression. In conclusion, L-arginine shown to be an excellent candidate to cosmetic active, once it was able to increase collagen synthesis in human dermal fibroblasts.

Orientador: Prof. Dr. Jorge Eduardo Fouto Matias / Co-orientadora: Profª. Drª. Maria de Lourdes Pessole Biondo-Simões / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Clínica Cirúrgica. Defesa: Curitiba, 16/12/2016 / Inclui referências : f.49-50 / Resumo: A fim de abordar os efeitos da administração tópica do metronidazol na absorção local e neovascularização durante cicatrização experimental por segunda intenção, 108 ratos machos, Wistar, pesando entre 300-350g foram submetidos a uma ferida de pele de espessura total, circular, com 2cm de diâmetro. Os animais foram divididos em 5 grupos (18 cada grupo) de acordo com a concentração usada da solução de metronidazol (4%, 6%, 8%, 10% e 12%) durante todo o período do experimento os curativos foram realizados diariamente, cada subdividido em três tempos de análise ( após 3, 7 e 14 dias de observação). Amostras de sangue venoso para avaliação da concentração de metronidazol foram obtidas por punção cardíaca e manipuladas por cromatografia líquida de alta performance; neovasos formados foram demonstrados usando CD34 e vimentina por técnicas de imunoistoquímica. Análise estatística, incluindo comparações intergrupos e intragrupos foram calculados por testes não paramétricos de Kruskal-Wallis usando SSPS software e valor de "p" 0,05, significância estatística de 95%. O metronidazol esteve presente na corrente sanguínea em todos os grupos de metronidazol e momentos estudados mas não houve diferença estatística de acordo com a concentração de metronidazol usada ou o tempo de exposição da ferida à droga. Foi significante o número de neovasos formados (p=0,005) nas feridas tratadas com administração de solução de metronidazol tópico 6% e 8%. Concentrações séricas de metronidazol não foram afetadas pelo uso tópico das concentrações da solução de metronidazol topicamente ou pela duração do tempo de administração. O uso tópico de metronidazol em soluções de 6% e 8% em feridas com cicatrização experimental por segunda intenção melhorou significativamente a neovascularização local conforme avaliado pelas técnicas imunoistoquímicas CD34 e vimentina. Estes achados podem ser potencialmente usados em favor do processo de cicatrização de feridas. Descritores: Cicatrização. Metronidazol. Absorção cutânea. Neovascularização. Administração tópica. Fisiológica. Ratos. / Abstract: In order to address beneficial effects of metronidazole topical administration on local absorption and neovascularization during experimental second-intention healing, 108 Wistar male rats, weighing 300-350g were submmited to a circular, 2 cm diameter, total deep back skin wound. Animals were divided into five groups (18 each group) according to the metronidazole solution concentration used (4%, 6%, 8%, 10% and 12%) during the dressing performed daily all over the period of experiment which was subdivided into three times of analysis (after 3, 7 and 14 days of observation). Blood samples for metronidazole venous concentration were obtained from cardiac puncture and manipulated by High-Performance Liquid Chromatography; newly formed vessels were demonstrated using CD34 and vimentin immunohistochemistry techniques. Statistical analysis, including intergroups and intragroups comparisons was calculated by non-parametric Kruskal-Wallis test using SSPS software and p value of 0,05, statistical significance of 95%. Metronidazole was present at bloodstream in all metronidazole groups and moments studied but there was no statistical differences according to metronidazole solution concentration used or time of wound exposure to the drug. There was significantly more newly formed vessels (p=0,005) at the wounds treated by topical administration of 6% and 8% metronidazole solutions. Metronidazole serum concentrations are not affected by metronidazole solution concentration used topically or by the duration time of administration. Topical administration of metronidazole solutions at 6% and 8% in experimental second-intention skin wounds was able to improve significantly local neovascularization as assessed by CD34 and vimentin immunohistochemistry techniques. These findings can be potentially used in favor of the wound healing process. Keywords: Wound Healing. Metronidazole. Administration, Topical. Skin Absorption. Neovascularization, Physiologic. Rats.