O doripenem é um antibiótico carbapenêmico de amplo espectro e aprovado pelo Food and Drug administration (FDA) em 2007. Devido a sua recente comercialização, não está presente em códigos oficiais. Desta forma, esta dissertação teve como objetivo validar um método analítico para quantificação do Doripenem utilizando a eletroforese capilar (EC) como ferramenta analítica alternativa à Cromatografia Liquida de Alta Eficiência (CLAE), além de desenvolver métodos físico-químicos para caracterizar a matéria prima e estudar a cinética de degradação do fármaco frente à temperatura e radiação por luz UVC. Diante dos resultados obtidos, verificou-se que métodos de caracterização como a cromatografia em camada delgada, espectrofotometria de infravermelho e ultravioleta e espectroscopia de Ressonância Magnética Nuclear demonstraram ser satisfatórios para caracterização do fármaco, já os métodos como DSC e faixa de fusão não foram adequados. Para fins de comparação com a EC, realizou -se a covalidação do método de CLAE reportado na literatura, tendo sido obtido um fator de correlação de 0,9950, teor médio de I 00,09 % e recuperação de I OI , 19 %. Para o desenvolvimento do método por EC foi utilizado capilar de sílica fundida de 40 em efetivo com 50 11m de diâmetro interno, eletrólito tampão barato de sódio I 00 mM em pH 8,0, tensão aplicada de 15 kV a 25 ºC, comprimento de onda de 298 nm e, procainamida como padrão interno. O comprimento de onda 214 nm foi monitorado a presença de produtos de degradação. O método demonstrou ser específico, linear entre 25-250 11g/ml (r=0,9995) , preciso (I OI ,33 %), exato (I OI ,86 %) e robusto. Conforme os resultados obtidos, os métodos por CLAE e EC demonstraram ser intercambiáveis, contudo, a EC apresenta vantagens como menor tempo de análise e pequena quantidade de resíduo gerado. Para o estudo da cinética de degradação por EC e ensaio microbiológico (EM) , as condições verificadas foram temperatura (45 ºC, por 24 horas) e luz UVC (por 12 horas). O teor final de doripenem obtido pela EC foi de 70,74 e 64,18 % para temperatura e UVC, respectivamente. Já a potência verificada pelo ensaio microbiológico foi de 42,77 e 21 ,95 % para temperatura e UVC, respectivamente. / Doripenem is a carbapenemic antibiotic with a broad spectrum of action launched in 2005. Due to its recent commercialization, doripenem is not in official codes. So this dissertation aims to validate an analytical method to doripenem quantification using capillary electrophoresis (CE) as an alternative method to High Performance Liquid Chromatography (HPLC), besides to develop physic-chemical methods to characterize the material and to study the degradation kinetics of doripenem in UVC light and temperature (45 ºC). The characterization methods as thin layer chromatography, infrared and ultraviolet spectroscopy and spectroscopy Nuclear Magnetic Resonance proved to be satisfactory. Melting point range and DSC were not adequate to identify doripenem. To compare HPLC and EC, HPLC method was covalidate according literature. The method demonstrated a correlation factor 0.9950, average content 100.09 % and recovery 101.19 %. For the development of CE method was employed 40 em fused silica capillary in 50 11m inner, electrolyte 100 mM buffer sodium borate at pH 8.0, applied voltage 15 kV at 25 ºC, wavelength 298 nm, and procainamide as internai standard. The method demonstrated to be linear between 25-250 IJQ/ml (r=0.9995), precise (1 01.33 %), accurate (1 01.86 %) and robust. Based on these results, the HPLC and CE methods are interchangeable. However, EC presents advantages such as reduced analysis time and small residue generated. To kinetic degradation study by CE and microbiological assay (MS) conditions as temperature (45 ºC for 24 hours) and UVC light (12 hours) were tested. The final residual content for doripenem by EC was 70.74 % and 64.18 to UVC and temperature, respectively. The antimicrobial power checked by MS was 42.77 and 21 .95% for temperature and UVC, respectively.

A duloxetina é um potente inibidor duplo da recaptação de serotonina e norepinefrina, disponível como enantiômero puro, sob a forma S-duloxetina e comercializado como pellets em cápsulas. O R enantiômero da duloxetina é também um inibidor da recaptação, no entanto, este é menos potente que seu isômero, sendo considerado como impureza enantiomérica. Este trabalho teve como objetivos o desenvolvimento e a validação de métodos analíticos para o controle de qualidade da duloxetina e de sua respectiva impureza enantiomérica por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), e por eletroforese capilar (EC). A resolução dos enantiômeros da duloxetina foi realizada a partir da utilização de fase estacionária quiral, baseada celulose, por CLAE. A separação por EC foi desenvolvida a partir da utilização de hidroxipropil-β-ciclodextrina (HPβCD) como seletor quiral. A validação dos métodos foi efetuada de acordo com os guias de validação disponíveis na literatura e os métodos propostos foram considerados específicos, lineares, precisos, exatos e robustos. A análise comparativa entre os métodos desenvolvidos demonstrou não haver diferença estatisticamente significativa na quantificação do enantiômero S-duloxetina. / Duloxetine is a double potent inhibitor of serotonin and norepinephrine reuptake, available as a pure enantiomer, in the S-duloxetine form and marketed as pellets into capsules. The R enantiomer of duloxetine is also an inhibitor of reuptake, however, less potent and being considered enantiomeric impurity. This work aimed the development and validation of analytical methods for quality control of duloxetine and its respective enantiomeric impurity by high performance liquid chromatography (HPLC) and capillary electrophoresis (CE). The resolution of the enantiomers of duloxetine was performed with the use of chiral stationary phase, based on cellulose, by HPLC. The separation by CE was developed with the use of hydroxypropyl-β-cyclodextrin (HPβCD) as chiral selector. The method validation was performed according to the guides available in the literature and the proposed methods were considered specific, linear, precise, accurate and robust. The comparative analysis between the methods developed showed no statistically significant difference in the quantification of S-duloxetine enantiomer.

A nitazoxanida é um novo antiparasitário de amplo espectro e pertence à classe dos nitrotiazóis. No Brasil, encontra-se disponível na forma de comprimidos revestidos e pó para suspensão oral, sob nome cormercial de Annita . A análise de fármacos é necessária em todas as fases do desenvolvimento farmacêutico e na manutenção da segurança e eficácia terapêutica dos produtos comercializados. Assim, o presente trabalho objetivou o desenvolvimento e validação de métodos para análise qualitativa e quantitativa da nitazoxanida nas formas farmacêuticas comerciais e a avaliação da estabilidade do fármaco em condições de degradação forçada, contemplando a determinação da cinética de fotodegradação e o isolamento, identificação e estudo da citotoxicidade do produto de degradação majoritário. As análises por espectrometria de massas (MS/MS), infravermelho (IV), ressonância magnética nuclear (RMN 1H e 13C) e calorimetria exploratória diferencial permitiram identificar a nitazoxanida utilizada como substância química de referência. Os métodos por cromatografia em camada delgada, espectrofotometria no ultravioleta (UV), cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e eletroforese capilar (EC) foram utilizados para identificação do fármaco nas formas farmacêuticas. Os métodos quantitativos validados foram: UV, CLAE e EC. Todos cumpriram com os parâmetros descritos pelas guias de validação e não apresentaram diferença estatística significativa na determinação do fármaco. O estudo preliminar de estabilidade frente à degradação oxidativa, ácida, básica, térmica e fotolítica demonstrou que o fármaco é instável em todas as condições testadas, sendo que os meios oxidativo, alcalino e fotolítico foram os fatores de maior importância. A cinética de fotodegradação da nitazoxanida apresentou cinética de ordem zero para ambas as formas farmacêuticas. Em todas as condições de degradação testadas ocorreu a formação de um produto de degradação majoritário, chamado de PD1, o qual precipitou nas condições analíticas e foi isolado por filtração. O mesmo foi identificado por RMN 1H e 13C, EM/EM e IV como o derivado desacetilado da nitazoxanida, a tizoxanida. A avaliação preliminar da citotoxicidade indicou que o produto isolado apresenta maior toxicidade celular in vitro após 48 horas de incubação frente à células mononucleares, quando comparado à nitazoxanida. Os resultados obtidos neste trabalho demonstram a importância do aprofundamento dos estudos nesta área para garantir a segurança e eficácia terapêutica dos produtos farmacêuticos comercializados. / Nitazoxanide is a new broad-spectrum antiparasitic drug and it belongs to the class of nitrothiazol. In Brazil, it is available as tablets and powder for oral suspension, under the cormercial name of Annita . Drug analysis is needed in all phases of pharmaceutical development and maintenance of marketed products safety and efficacy. Thus, the present study aimed the methods development and validation for qualitative and quantitative analysis of nitazoxanide in commercial pharmaceutical forms and evaluation of drug stability in forced degradation conditions, comprising the photodegradation kinetics determination and the isolation, identification and the cytotoxicity study of the major degradation product. The analysis by mass spectrometry (MS/MS), infrared (IR), nuclear magnetic resonance (1H and 13C NMR) and differential scanning calorimetry allows to identify the nitazoxanide chemical reference structure. The methods by thin layer chromatography, spectrophotometry (UV), high performance liquid chromatography (HPLC) and capillary electrophoresis (CE) were used to identify the drug in pharmaceutical formulations. Quantitative methods have been validated: UV, HPLC and CE. All methods met the criteria described by the validation guidelines and showed no significant statistically difference in the drug determination. The preliminary stability study of nitazoxanide under oxidative, acidic, basic, thermal and photolytic conditions showed that the drug is unstable in all tested conditions, and oxidative, alkaline and photolytic conditions are the factors of major importance. The photodegradation kinetics of nitazoxanide showed zero-order kinetics for both dosage forms. In all tested degradation conditions it was formed a majority degradation product, named PD1, which precipitated in the analytical conditions and it was isolated by filtration. The same product was identified by 1H and 13C NMR, MS/MS and IR as deacetylated derivative of nitazoxanide, the Tizoxanide. The preliminary citotoxicity evaluation indicated that the isolated product has a higher cellular toxicity in vitro after 48 hours of incubation, when compared to nitazoxanide. The results demonstrate the importance of this type of study to ensure the safety and efficacy of marketed pharmaceutical products.

A talidomida foi amplamente prescrita entre 1950 e 1960, em quase 50 países, como hipnosedativo não-barbitúrico e antiemético para indisposição matinal durante a gravidez, sendo em seguida fortemente controlada em função da ocorrência de sérios problemas de teratogenicidade. Nos últimos anos, vários esforços foram realizados no sentido de buscar identificar e elucidar as propriedades antiinflamatórias, imunomodulatórias e antiangiogênicas da talidomida. Na mesma direção, investigações clínicas foram conduzidas em pacientes com diversas doenças, como mieloma múltiplo, carcinoma renal, câncer de próstata, Síndrome da rejeição paciente-enxerto, entre outras. A talidomida possui um centro quiral e dois anéis amida em sua estrutura e é sintetizada como racemato, constituída por dois enantiômeros ativos: (+)-(R)- e (+)-(S)-talidomida. A talidomida racêmica apresenta duas formas polimórficas, alfa ( ) e beta ( ). Assim, a variabilidade observada em relação ao polimorfismo representa um ponto crítico se considerarmos o potencial de alteração de propriedades biofarmacêuticas em decorrência da predominância de um ou outro polimorfo. No Brasil o medicamento talidomida é fabricado exclusivamente pela FUNED – Fundação Ezequiel Dias, laboratório público do Estado de Minas Gerais que integra o Sistema Oficial de produção de Medicamentos do País. Neste contexto, este trabalho tem como principal objetivo a avaliação de características físicas, físico-químicas e tecnológicas dos polimorfos da talidomida, com ênfase nos ensaios de cristalização, dissolução, degradação e compressão. Os resultados deste trabalho contribuíram para um melhor entendimento da relação entre características cristalográficas e propriedades farmacêuticas, agregando uma base científica capaz de avaliar as diferenças existentes destes polimorfos e garantir o controle de qualidade adequado do produto final produzido em um Laboratório Oficial. Estes estudos contribuíram para o cumprimento de exigências regulatórias. / Thalidomide was widely prescribed between 1950 and 1960, in nearly 50 countries, as sedative and antiemetic for morning sickness during pregnancy. After the occurrence of serious problems of teratogenicity it was heavily controlled. Growing interest has been observed in recent years to identify and elucidate the anti-inflammatory, immunomodulatory and anti-angiogenic properties of thalidomide. In the same direction, clinical investigations have been conducted in patients with various diseases such as myeloma, renal carcinoma, and prostate cancer, among others. Thalidomide possesses a chiral center and two amide rings in its structure and is synthesized as racemate, consisting of two active enantiomers: (+)-(R)- and (+)-(S)-thalidomide. It is known that the racemic thalidomide has two polymorphic forms, alpha ( ) and beta ( ). Thus, the observed variability in relation to the polymorphism represents a critical point considering the potential of changes in biopharmaceutical properties due to the predominance of one of them. In Brazil thalidomide tablets are manufactured exclusively by FUNED – Fundação Ezequiel Dias, the public laboratory of the State of Minas Gerais, which integrates the Country's Official System of drug production. In this context, the objectives of this work are the assessment of physical characteristics, physicalchemical and technological properties of polymorphic forms of thalidomide, with emphasis on crystallization, dissolution, degradation and compression. The results of this work contributed to a better understanding of the relationship between characteristic crystallographic properties and pharmaceutical properties, aggregating a scientific basis to assess the differences of these polymorphs and ensure the appropriate quality control of the final product produced in an official laboratory. These studies contributed to compliance with regulatory requirements.

O cloridrato de mianserina é um fármaco utilizado no tratamento da depressão e depressão associada a ansiedade. Seu efeito antidepressivo é atribuído, principalmente, ao bloqueio dos receptores 2-adrenérgicos pré-sinápticos e à atividade antagonista nos receptores de serotonina. A mianserina é classificada como um antidepressivo atípico, tendo como base o seu mecanismo de ação nãodefinido. A análise de fármacos é fundamental nas diversas fases do desenvolvimento farmacêutico e a literatura pesquisada apresenta poucos relatos de determinação quantitativa e estudos de estabilidade deste fármaco na forma farmacêutica comprimido revestido. Assim, objetivou-se o desenvolvimento e validação de métodos analíticos para determinação qualitativa e quantitativa por espectrofotometria na região do ultravioleta (UV), cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e eletroforese capilar (EC). Inicialmente foi realizada a caracterização da substância química de referência (SQR) de cloridrato de mianserina por espectroscopia de absorção na região do infravermelho (IV), análise térmica por calorimetria exploratória de varredura (DSC), determinação da faixa de fusão, espectrometria de massas e ressonância magnética nuclear. Além disso, o trabalho apresenta o ensaio de dissolução e o estudo da estabilidade do fármaco nos comprimidos revestidos com isolamento e identificação do produto de degradação majoritário obtido em condições oxidativas. A identificação do produto de degradação majoritário foi realizada por cromatografia líquida de ultraperformance (UPLC) acoplado à espectrometria de massas (EM). / Mianserin hydrochloride is a drug for the treatment of depressive illness and depression associated with anxiety. Its antidepressant effect is mainly attributed to presynaptic alfa-2-adrenoreceptor blocking activity and serotonin receptors antagonism. Mianserin is classified as an atypical antidepressant, based on its mechanism of action not defined. The drug analysis is necessary in all steps of the pharmaceutical development and the literature has few reports of quantitative determination and stability studies of this drug in pharmaceutical formulation. Thus, the objective was the development and validation of analytical methods for qualitative and quantitative determination by UV spectrophotometry, liquid chromatography (LC) and capillary electrophoresis (CE). Initially was performed the characterization of mianserin reference standard by infrared spectroscopy (IV), thermal analysis by differential scanning calorimetry (DSC), determination of melting range, by mass spectrometry (MS) and by nuclear magnetic resonance techniques. Besides, it presents a dissolution test and stability study of the drug in coated tablets by the isolation and identification of the major degradation product from oxidative conditions. The identification of the major degradation product was performed by ultra high performance liquid chromatography (UPLC) coupled to tandem mass spectrometry (MS).

O clopidogrel é um fármaco antiplaquetário, pertencente à classe das tienopiridinas. A literatura relata poucos trabalhos para a determinação deste fármaco em preparações farmacêuticas. Este trabalho teve como objetivos desenvolver métodos para a análise quali e quantitativa do bissulfato de clopidogrel, bem como, avaliar de forma preliminar a estabilidade da substância. A caracterização da substância química de referência (SQR) foi realizada por Calorimetria Exploratória Diferencial (DSC), Espectrofotometria Infravermelho, e Espectroscopia de RMN 13C e 1H. Os métodos desenvolvidos para a identificação do clopidogrel nos comprimidos revestidos foram a Cromatografia em Camada Delgada (CCD), Espectrofotometria Ultravioleta (UV), CLAE e Eletroforese Capilar (EC). Para a quantificação do clopidogrel nos comprimidos revestidos foram validados os métodos de UV, CLAE e EC de acordo com os parâmetros preconizados pelas Guias Oficiais. Todos os métodos atenderam aos requisitos de validação avaliados, sendo, portanto, adequados para a determinação do clopidogrel em comprimidos revestidos. Os estudos de degradação forçada demonstraram que a substância sofre degradação em condições alcalinas e quando exposta à luz ultravioleta a 254 nm. Na determinação da cinética de degradação foi possível verificar que o clopidogrel, em solução ácida, quando exposto à luz ultravioleta, apresenta T90% de 12,25 min, e possui cinética de reação de segunda ordem. / Clopidogrel is an antiplatelet drug that belongs to the class of thienopyridines. There are few reports in the literature about the determination of this drug in formulations. The aim of this work was to develop methods for qualitative and quantitative analysis of clopidogrel hydrogensulphate, and a preliminary evaluation of the stability of the substance. The characterization of the reference standard was made by Infrared Spectroscopy, Differential Scanning Calorimetry and 13C and 1H Nuclear Magnetic Resonance. The developed methods for the identification of clopidogrel in coated tablets were Thin-layer Chromatography, Ultraviolet Spectrophotometry, HPLC and Capillary Electrophoresis. For the quantification of clopidogrel UV Spectrophotometry, HPLC and Capillary Electrophoresis methods were validated according to the parameters of the Official Guidelines. All the methods attended to the validation specifications, and so they are adequate to the determination of clopidogrel in coated tablets. Accelerated degradation studies demonstrated that the drug suffers degradation in alkaline conditions and when exposed at UV light at 254 nm. In the study of degradation kinetics it was possible to verify that clopidogrel, in acid solution, exposed to UV radiation, presents T90% of 12.25 minutes and has a second order degradation kinetics.

A lamotrigina é um fármaco relativamente novo que tem se mostrado útil no tratamento de diferentes crises epilépticas. Este fármaco encontra-se no mercado na forma de comprimidos e, apesar de seu amplo uso na terapêutica, não há descrição de métodos analíticos em códigos oficiais para o controle de qualidade da lamotrigina em sua forma farmacêutica. Estudos de estabilidade não foram encontrados na literatura científica, apenas dados fornecidos pela indústria. No FDA (2006) estão descritas as condições para o teste de dissolução dos comprimidos de lamotrigina, mas não há relatos sobre a forma de quantificação dos mesmos. Desta forma, o presente trabalho teve como objetivos o desenvolvimento e validação de métodos analíticos qualitativos e quantitativos, realização de estudo preliminar de estabilidade e o desenvolvimento e validação de método de dissolução para o controle de qualidade da lamotrigina em comprimidos.A caracterização da substância química de referência foi realizada através de calorimetria diferencial exploratória (DSC) e espectrofotometria na região do infravermelho (IV). A cromatografia em camada delgada (CCD), espectrofotometria de absorção no ultravioleta (UV) e cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) foram utilizadas para identificação da lamotrigina em comprimidos. Para a quantificação dos comprimidos, foram utilizadas a espectrofotometria de absorção no ultravioleta (UV) e cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). O estudo preliminar de estabilidade térmica foi realizado submetendo-se as amostras ao calor seco de 80ºC. A fotoestabilidade foi avaliada em soluções de lamotrigina armazenadas em câmara de luz a 254 nm por um período de até quinze dias, demonstrando que o fármaco é sensível à luz. As amostras também foram submetidas à hidrólise ácida por um período de 54 horas, observando-se decaimento no teor do fármaco. Foi desenvolvido e validado um método de dissolução simples e rápido para o controle de qualidade dos comprimidos de lamotrigina. / Lamotrigine is a relative new antiepileptic drug that seems useful in the treatment of different seizures. Lamotrigine can be found in the market in tablets. Despite being used in therapeutics, methods for quality control of lamotrigine in tablets are not available in the official codes. Stability studies were just informed by the producer. FDA (2006) described the conditions of dissolution test to lamotrigine in tablets, but there is nothing about the quantification method. In this way, the aim of this work was the development and validation of analytical methods, preliminary study of stability and the development and validation of a dissolution method to quality control of lamotrigine in tablets. The characterization of the reference standard was carried out by differential scanning calorimetry (DSC) and infrared spectroscopy (IR). Thin-layer chromatography (CCD), ultraviolet spectroscopy (UV) and high performance liquid chromatography (HPLC) was performed to lamotrigine qualitative analysis. UV and HPLC were performed to lamotrigine quantitative analysis. The sample solutions were submitted under UV-light at 254 nm during 15 days, showing degradation and decrease in the labeled amount. Thermal degradation was carried by dry heat at 80°C in solid powder. The solution samples was also submitted to acid condition with HCL 1 M during 54 hours. Rapid and simple dissolution method to routine quality control of lamotrigine was developed and validated.

O carbonato de lodenafila é um inibidor da fosfodiesterase tipo 5, desenvolvido no Brasil, o qual é um dímero formado por duas moléculas de lodenafila ligadas por uma ponte carbonato. Encontra-se disponível sob a forma de comprimidos. Não existe monografia disponível para este fármaco em nenhum código oficial. Assim, o objetivo do presente estudo foi desenvolver métodos analíticos para análise qualitativa e quantitativa do carbonato de lodenafila em comprimidos, avaliação da estabilidade frente à degradação forçada, contemplando a cinética de fotodegradação, identificação e estudo de citotoxicidade in vitro dos produtos de degradação majoritários e desenvolvimento do teste de dissolução baseado em dados in vivo. A caracterização da substância química de referência foi realizada através da faixa de fusão por calorimetria exploratória diferencial, métodos espectrofotométricos na região do infravermelho (IV) e do ultravioleta (UV), assim como espectroscopia de ressonância magnética nuclear de 1H e 13C. Os métodos por cromatografia em camada delgada (CCD), espectrofotometria no UV, cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e eletroforese capilar (EC) foram utilizados para identificar o fármaco na forma farmacêutica. Os seguintes métodos de análise quantitativa do fármaco em comprimidos foram desenvolvidos e validados: método indicativo da estabilidade por CLAE, espectrofotometria na região do UV e EC. Todos cumpriram com os parâmetros descritos pelas guias de validação e não apresentaram diferença significativa na determinação do fármaco. A cinética de fotodegradação do carbonato de lodenafila apresentou cinética de primeira ordem. Dois produtos majoritários encontrados na fotodegradação foram identificados por cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada à espectrometria de massas (CLUE-MS/MS) como ácido 4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6,7-diidro- 1H-pirazol [4,3-d] pirimidina-5-il) benzenossulfônico e ácido 4-etoxi-3-(1-metil-7-oxo- 3-propil-6,7-diidro-1H-pirazol [4,3-d] pirimidina-5-il) benzenossulfínico. A avaliação da citotoxicidade in vitro indicou que a amostra de carbonato de lodenafila degradada não apresentou toxicidade. O teste de dissolução foi desenvolvido e validado utilizando como meio de dissolução 900 mL de HCl 0,1 M + lauril sulfato de sódio 1,5% (p/v), a 37 ± 0,5°C, pás a 25 rpm e quantificação por espectrofotometria no UV. O perfil de dissolução apresentou cinética de primeira ordem. De acordo com os resultados obtidos, todos os métodos propostos podem ser utilizados no controle de qualidade do carbonato de lodenafila. / Lodenafil carbonate is a PDE5 inhibitor developed in Brazil, which is a dimer formed by two lodenafil molecules linked by a carbonate bridge. It is currently available in tablets. There is no monograph available for this drug in any official code. Thus, the purpose of the present study was the development of analytical methods for qualitative and quantitative analysis of LC in tablets, evaluation of drug stability in forced degradation, comprising the determination of photodegradation kinetic, identification and in vitro cytotoxicity study of two major degradation products and develop a dissolution test based on in vivo data. The characterization of the reference chemical substance was performed by: melting range by differencial scanning calorimetry, infrared (IR) and ultraviolet (UV) spectrophotometry methods, as well as the 1H and 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy. The methods by thin-layer chromatography (TLC), UV spectrophotometry, high-performance liquid chromatography (LC) and capillary electrophoresis (CE) were used to identify the drug in pharmaceutical formulations. The following methods, applied to the assay of the drug in tablets were developed and validated: a stability-indicating HPLC method, UV spectrophotometry and CE. All of them met the criteria described by the validation guidelines and showed no significant statistically difference in the drug determination. The photodegradation kinetics of lodenafil carbonate showed firstorder kinetics. Two degradation products found by photodegradation were identified by ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UPLCMS/ MS) as 4-ethoxy-3-(1-methyl-7-oxo-3-propyl-6,7-dihydro-1H-pyrazolo [4,3- d]pyrimidin-5-yl)-benzenesulfonic acid and 4-ethoxy-3-(1-methyl-7-oxo-3-propyl-6,7- dihydro-1H-pyrazolo [4,3-d]pyrimidin-5-yl) benzenesulfinic acid. The in vitro cytotoxicity evaluation indicated that the lodenafil carbonate degraded sample did not show toxicity. A dissolution test was developed and validated using 900 mL of 0.1 M HCl + 1.5% sodium lauryl sulfate (w/v), at 37 ± 0.5 °C as dissolution medium, paddle at 25 rpm and quantitation by UV spectrophotometry. The dissolution profile showed first order kinetics. According to the obtained results, all proposed methods can be used in the quality control of lodenafil carbonate.

A combinação entre o delapril (DEL), um inibidor da enzima conversora de angiotensina e o manidipino (MAN), um antagonista dos canais de cálcio, produz um efeito anti-hipertensivo sinérgico, podendo ser considerado um ótimo tratamento para pacientes com hipertensão essencial leve e moderada. No presente trabalho foram desenvolvidos e validados métodos cromatográfico e eletroforético para avaliação simultânea de DEL e MAN em produto farmacêutico. As análises por cromatografia líquida em fase reversa (CL-FR) foram executadas utilizando coluna C8 (250 mm x 4,6 mm), mantida a 35 oC. A fase móvel foi constituída por acetonitrila e solução de trietilamina 0,3%, pH 3,0 (55:45; v/v), eluída na vazão de 1,2 mL/min com detecção a 220 nm. Paralelamente, desenvolveu-se método por eletroforese capilar, utilizando modo de separação por cromatografia eletrocinética micelar (MEKC) e ácido salicílico como padrão interno. Foi utilizado capilar de sílica fundida (comprimento efetivo de 72 cm) mantido a 35 °C, com solução eletrolítica composta de tampão borato 50 mM e dodecil sulfato de sódio (SDS) 5 mM, pH 9,0. Voltagem de 25 kV foi aplicada e a injeção foi de 50 mbar durante 5 s, com detecção a 208 nm. A especificidade e a capacidade dos métodos serem indicativos de estabilidade foram demonstradas através de estudos de degradação forçada dos fármacos e pela não interferência dos excipientes nas análises. Além disso, o desenho experimental Plackett-Burman foi utilizado para a avaliação da robustez, observando-se resultados adequados para ambos métodos. Os procedimentos foram validados de acordo com guias aceitos internacionalmente, observando-se resultados em uma faixa aceitável. Os métodos propostos foram aplicados com sucesso na determinação quantitativa simultânea de DEL e MAN em comprimidos, não havendo diferença significativa dos resultados (P>0,05), contribuindo, portanto, para aprimorar o controle da qualidade, assegurando a eficácia terapêutica. / The combination of delapril (DEL), an angiotensin converting enzyme inhibitor and manidipine (MAN), an antagonist of calcium channels, produces a synergic antihypertensive effect and may be regarded as an optimal antihypertensive drug treatment in mild to moderate essential hypertensive patients. The chromatographic and eletrophoretic methods for the simultaneous evaluation of DEL and MAN in pharmaceutical product were developed and validated in the present work. The reversed-phase liquid chromatography (RP-LC) method was carried out on a C8 column (250 mm x 4.6 mm i.d., 5 μm), maintained at 35 ºC. The mobile-phase consisted of acetonitrile and a solution of triethylamine 0.3% pH 3.0 (55:45; v/v), running at a flow rate of 1.2 mL/min, with detection at 220 nm. The capillary electrophoresis method was developed using the micellar electrokinetic chromatography (MEKC) as the separation mode, and salicylic acid as internal standard. The analysis were performed on a fused-silica capillary (effective length of 72 cm) maintained at 35 °C, with 50 mM of borate buffer and 5 mM of sodium dodecyl sulfate (SDS) at pH 9.0 as background electrolyte. The separation was achieved at 25 kV applied voltage and the injection was performed at 50 mbar for 5 s, with detection at 208 nm. The specificity and stability-indicating capability of the methods were demonstrated through forced degradation studies, which also show that there is no interference of the excipients in the analysis. Moreover, the Plackett- Burman experimental design was used for robustness evaluation, giving acceptable results for both methods. The procedures were validated according to Internationals guidelines, giving results within the acceptable range. Therefore, the proposed methods were successfully applied for the simultaneous quantitative analysis of DEL and MAN in the tablet dosage form, showing non-significant difference (P>0.05), contributing to improve the quality control and to assure the therapeutic efficacy.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / In this study different methods for speciation of Sb(III) and Sb(V) in meglumine antimoniate (NMG) were evaluated. Liquid chromatography (LC) combined or not with hydride generation (HG) was investigated for separation of Sb(III) and Sb(V). Inductively coupled plasma mass spectrometry (ICP-MS) was used as detector. A flow injection system together with hydride generation (FI-HG) coupled with atomic absorption spectrometry (AAS) was also employed for the selective determination of Sb(III) in presence of Sb(V). Two anion-exchange columns (Dionex, IonPacAS14 and Hamilton, PRP-X100) were evaluated for Sb(III) and Sb(V) separation by LC. Parameters related to the mobile phase, such as type (EDTA, potassium phthalate, and potassium phthalate + EDTA), concentration (0.5 to 10 mmol L-1), pH (3.5 to 7.0), flow rate (0.25 to 1.75 mL min-1) and elution mode (isocratic and gradient) were studied. The volume of sample injected into the chromatograph was set at 200 μL. For the chromatographic separation, the mobile phase which led to improved separations of Sb(III) and Sb(V) was the EDTA in concentrations of 0.5 mmol L-1 and 1.0 mmol L-1 for the IonPac and PRP-X100 columns, respectively. The most appropriate parameters related to the FI-HG system were also evaluated and set, such as reductant of Sb(III) (NaBH4 0.1%, m/v), complexant of Sb(V) (10% m/v citric acid,), water as the sample carrier, analytical path (300 cm), volume of sample (100 μL), total flow rate of solutions (8.5 mL min-1) and flow rate of carrier gas (0.4 mL min-1). In order to identify and/or quantify the species of Sb present in the NMG, the samples were diluted in water only. Through the use of LC-ICP-MS it was only possible to quantify the Sb(V), whereas the presence of Sb(III) was not detected. The determination of Sb(III) was only possible through FI-HG AAS, FI-HG-ICP-MS and LC-HG-ICP-MS (by combination of conditions set for LC and FI-HG individually). Similar results for Sb(III) were obtained through the techniques FI-HG AAS and HGICP- MS. Thus, it was possible to quantify free Sb(III) and Sb(V), while probable compounds of Sb(III) and/or Sb(V) bound to NMG were observed but could not be identified and quantified, mainly because of lack of reference solutions and difficulty in separating the observed Sb species. The precision of methods for determination of Sb(III) and Sb(V) (expressed as relative standard deviation for 5 consecutive measurements) was about 9% and 3% respectively. As there were no certified reference materials to evaluate the accuracy of the developed methods, recovery tests of Sb(III) and Sb(V) were made, where they were in the range 96 to 101% for Sb(V) and 85 to 104% for Sb(III). Moreover, the results were compared with those obtained by official methods to quantify Sb(III), Sb(V) and Sb total in meglumine antimoniate. / Neste trabalho foram avaliados diferentes métodos para a análise de especiação de Sb(III) e Sb(V) em antimoniato de meglumina (NMG). Cromatografia a líquido (LC) combinada, ou não, com a técnica de geração de hidretos (HG) foi investigada para a separação de espécies de Sb. A espectrometria de massa com plasma indutivamente acoplado (ICP-MS) foi empregada como detector. Um sistema de injeção em fluxo (FI) em conjunto com HG (FI-HG) e acoplado à espectrometria de absorção atômica (AAS) foi também empregado para a determinação seletiva de Sb(III) na presença de Sb(V). Duas colunas de troca aniônica (Dionex, IonPacAS14 e Hamilton, PRP-X100) foram avaliadas para separar as espécies de Sb por LC. Parâmetros relacionados com a fase móvel, tais como tipo (EDTA, ftalato de potássio e EDTA + ftalato de potássio), concentração (0,5 a 10 mmol L-1), pH (3,5 a 7,0), vazão (0,25 a 1,75 mL min-1) e o modo de eluição (isocrático e gradiente) foram estudados. O volume de amostra injetada no cromatógrafo foi fixado em 200 μL. Para a separação cromatográfica, a fase móvel que levou a melhores separações de Sb(III) e Sb(V) foi o EDTA nas concentrações de 0,5 mmol L-1 e 1,0 mmol L-1, para as colunas IonPac e PRP-X100, respectivamente. Os parâmetros relacionados com o sistema FI-HG mais adequados foram também avaliados e escolhidos, tais como o redutor do Sb(III) (NaBH4 0,1%, m/v), complexante do Sb(V) (ácido cítrico 10%, m/v), a água como carregador da amostra, o percurso analítico (300 cm), volume de amostra (100 μL), a vazão total das soluções (8,5 mL min-1) e a vazão do gás de arraste (0,4 mL min-1). Para a identificação e/ou quantificação das espécies de Sb presentes no NMG, as amostras foram somente diluídas em água. Com o emprego de LC-ICP-MS foi possível quantificar somente o Sb(V), não sendo detectada a presença da espécie Sb(III). A determinação de Sb(III) foi somente possível mediante as técnicas FI-HG AAS, FI-HG-ICP-MS e LC-HG-ICP-MS (esta mediante combinação das condições ajustadas para LC e FI-HG individualmente). Resultados concordantes para Sb(III) foram obtidos mediante as técnicas FI-HG AAS e FI-HGICP- MS. Desta forma, foi possível quantificar Sb(III) e Sb(V) livres, enquanto que possíveis compostos de Sb(III) e/ou Sb(V) ligados ao NMG foram observados mas não puderam ser identificados e quantificados, principalmente por causa da falta de soluções de referência e dificuldade de separação das possíveis espécies de Sb observadas. A precisão dos métodos de determinação de Sb(III) e Sb(V) (expressa como desvio padrão relativo para 5 medições consecutivas) foi cerca de 9% e 3%, respectivamente. Como não havia materiais de referência certificados para avaliar a exatidão dos métodos desenvolvidos, foram feitos testes de recuperação de Sb(III) e Sb(V), sendo que as mesmas ficaram na faixa de 96 a 101% para o Sb(V) e de 85 a 104% para o Sb(III). Além disso, os resultados obtidos foram comparados com aqueles obtidos por métodos oficiais para a quantificação Sb(III), Sb(V) e Sb total no antimoniato de meglumina.