O uso da gonadotrofina coriônica equina (eCG) tem sido considerado uma potencial ferramenta nos protocolos de estimulação e superovulação para melhorarem o desempenho reprodutivo dos rebanhos. Este fato levou a hipótese de que o tratamento com eCG altera as vias de sinalização intracelular no corpo lúteo (CL) formado. Para testá-la, 18 vacas mestiças de Nelore (Bos indicus) foram divididas em três grupos: controle, estimulado e superovulado. O protocolo de sincronização da ovulação com o uso do dispositivo de P4 foi descrito anteriormente (FÁTIMA et al., 2013). O grupo estimulado recebeu 400 UI de eCG no dia da remoção do dispositivo de P4 e o superovulado recebeu 2000 UI de eCG 4 dias antes. Os animais dos grupos controle e estimulado receberam GnRH no dia 10, enquanto os animais superovulados receberam no dia 8. No sétimo dia após após a administração do GnRH, todos os animais foram abatidos e os CL foram coletados. Foi realizada análise de microarranjo, a partir da qual foram eleitos genes envolvidos na sinalização da esteroidogênese (ADM, MMP9, NOS2), da ativação das metaloproteinases da matriz e do receptor ativado de protease que regula a homeostase e inflamação (PRSS2, PLAU) e da angiogênese (ANG e ANGPT1) e validados por qPCR, western blotting e imuno-histoquímica. A expressão gênica e proteica do PRSS2 e MMP9 foi menor e as células luteínicas grandes e pequenas positivas apresentaram marcação menos intensa nos grupos estimulado e superovulado (P <0,05). A expressão proteica da ANG foi maior no estimulado (P=0,01) e superovulado (P=0,03) e da proteína ANGPT1 foi maior no estimulado (P=0,008). O número de células luteínicas grandes e pequenas positivas para ANG e ANGPT1 foram maiores nos grupos tratados (P <0,05). No estimulado, houve correlação negativa entre os níveis de progesterona e o MMP9 (r = -0,66 e P = 0,03) e com a proteína do PRSS2 (r = -0,63 e P = 0,04). No entanto, houve correlação positiva com a proteína ANG (r = 0,69 e P = 0,03). No superovulado, houve correlação positiva entre a ANG e ANGPT1 (r = 0,96 e P = 0,001). Não houve diferença na expressão de ADM, NOS2 e PLAU nos grupos tratados em relação ao controle. Em resumo, os resultados obtidos são indicativos de que a eCG altera a expressão relativa de genes e proteínas envolvidas nas vias de sinalização de inflamação e a modelação da membrana celular com uma diminuição na expressão do MMP9 e da PRSS2 e na via da angiogênese com maior expressão de ANG em ambos os tratamentos e ANGPT1 em vacas estimuladas. / The use of equine chorionic gonadotropin (eCG) have been considered a potential tool in stimulation and superovulation protocols to improve the reproductive performance of the herd. This fact led to the hypothesis that eCG treatment alters the intracellular signaling pathways in the formed CL. To test that, 18 crossbred Nellore (Bos indicus) cows were divided into three groups: control, stimulated and superovulated. The synchronization protocol with the use of P4 device was previously described (FÁTIMA et al., 2013). The stimulated group received 400 IU eCG at the P4 device removal and superovulated received 2000 IU eCG 4 days before it. Both control and stimulated animals received GnRH on day 10, while superovulated ones received it on day 8. On the seventh day after GnRH administration, CL were collected by slaughter. Microarray analysis was preformed, from which were selected genes involved in the signaling of steroidogenesis (ADM, MMP9, NOS2), activation of matrix metalloproteinases and protease activated receptor that regulates homeostasis and inflammation (PRSS2, PLAU), and angiogenesis (ANG and ANGPT1). They were evaluated by qPCR, western blot and immunohistochemistry. The gene and protein expression of MMP9 and PRSS2 decreased and large and small luteal cells showed weaker staining in stimulated and superovulated groups related to the control group (P <0.05). ANG protein expression was higher on superovulated (P=0.01) and stimulated (P=0.03) and ANGPT1 protein was higher only in stimulated (P=0.008). The number of positive large and small luteal cells for ANG and ANGPT1 were higher in treated groups (P<0.05). In stimulated, there were a negative correlation between progesterone levels and MMP9 (r = 0.03 and P = -0.66) and the PRSS2 protein expression (r = 0.04 and P = -0.63). However, there were a positive correlation with ANG protein expression (r = 0.69 and P = 0.03). In superovulated, there were a positive correlation between ANG and ANGPT1 (r = 0.96 and P = 0.001) and PRSS2 protein expression was negatively correlated with the ANG protein (r = 0.04 and P = -0.96). There was no difference in ADM, NOS2 and PLAU expression in treated groups compared to control. In summary, these findings indicate that eCG alters the relative expression of genes and proteins involved in inflammation and cell modeling signaling pathways by decreasing MMP9 and PRSS2 expression, and on angiogenesis pathway, increasing ANG expression in both stimulated and superovulated animals and ANGPT1 in stimulated cows.

In beef cows, long-acting injectable progesterone (iP4) supplementation in the early diestrus has paradoxical effects, as it both increases fertility in the field as well as induces anticipation of luteolysis in part of the treated animals. Considering that estradiol (E2) from the ovarian follicles during the luteal phase plays a central role in the induction of uterine PGF2&#945; release and luteal regression, here we tested the central hypothesis that the absence of post-deviation follicles (i.e., a low E2 tone) delays the early onset of luteolysis and extends the estrous cycle in Bos indicus cows supplemented with iP4. This dissertation consists of two studies. A first study was carried out to validate the use of cytologic brushes (cytobrush) as a tool to collect sequential samples of endometrium to characterize temporal changes in the transcriptome along the estrous cycle. It was concluded that the cytobrush technique was confirmed as a reliable, repeatable, and safe method for studying bovine uterine biology in vivo. In the second study, cyclic Nelore cows were synchronized and distributed in a 2 x 2 factorial arrangement to receive treatment with placebo or 300 mg iP4 three days after ovulation (D0), and to be subjected or not to follicular aspiration (FA) during the luteal phase. Endometrial samples were collected on D15, D17 and D19 using the cytobrush technique, and abundance of transcripts was measured by qPCR. The iP4 decreased the size of the largest follicle on D6 and the area of the CL between D8 and 10 compared to the placebo groups. Cows submitted to FA had a longer cycle but timing of luteolysis was similar to non-FA cows. Treatment with iP4 and submitted to FA tended to advance the timing of structural luteal regression ( &le;D16). Furthermore, in the moments preceding luteolysis (D11 to D16), cows from this group that underwent luteolysis before or at D16 presented a smaller CL compared with cows of the same group that underwent luteolysis after D16. In addition, cows treated with iP4 that presented early luteolysis had a smaller CL across the luteal phase. There were no significant differences in the abundance of endometrial transcripts related to programming (PGR, ESR1) or execution (OXTR, PTGS2) of PGF2&#945; release. In summary, supplementation of P4 at early diestrus affected CL growth but did not modulate endometrial transcripts associated with luteolysis, suggesting that the uterine component might not be involved in this process. It is concluded that CLs impaired by exposure to iP4 during luteogenesis are most likely to undergo early luteal regression, and this may be exacerbated by low E2 concentrations resulting from FA. In conclusion, we rejected the hypothesis that reduced follicular E2 could prevent iP4-induced early onset of luteolysis in Bos indicus cows. / Em vacas de corte, a suplementação com progesterona injetável de longa ação (iP4) no diestro inicial tem efeitos paradoxais, uma vez que tanto aumenta a fertilidade a campo quanto induz a antecipação da luteólise em uma parte dos animais tratados. Considerando que o estradiol (E2) proveniente dos folículos ovarianos durante a fase luteal desempenha um papel central na indução da liberação de PGF2&#945; uterina e regressão luteal, testou-se a hipótese central de que a ausência de folículos pós-desvio previne a antecipação do momento da luteólise e prolonga o ciclo estral em vacas Bos indicus suplementadas com iP4. Esta dissertação consiste em dois estudos. Um primeiro estudo foi realizado para validar a utilização de escovas citológicas (cytobrush) como uma ferramenta para coletar amostras sequenciais do endométrio para caracterizar as mudanças temporais no transcriptoma ao longo do ciclo estral. Concluiuse que a técnica de cytobrush foi confirmada como um método confiável, repetível, e seguro para o estudo da biologia uterina bovina in vivo. No segundo estudo, vacas Nelore cíclicas foram sincronizadas e distribuídas em um arranjo fatorial 2 x 2 para receber tratamento com placebo ou 300 mg de iP4 três dias após a ovulação (D0), e serem submetidos ou não à aspiração folicular (AF) durante a fase lútea. Amostras endometriais foram coletadas no D15, D17 e D19 usando a técnica de cytobrush, e a abundância de transcritos foi medida por qPCR. A iP4 diminuiu o tamanho do maior folículo no D6 e a área do CL entre D8 e D10 comparado aos grupos placebo. Vacas submetidas à AF tiveram um ciclo mais longo, porém o momento da luteólise foi semelhante ao das vacas não aspiradas. O tratamento com iP4 e AF tendeu a adiantar o momento da regressão lútea estrutural (&le; D16). Além disso, nos momentos precedentes à luteólise (D11 ao D16), vacas desse grupo detectadas em luteólise antes ou no D16 apresentaram um CL menor em comparação com vacas do mesmo grupo em luteólise após o D16. Adicionalmente, vacas tratadas com iP4 com luteólise precoce apresentaram um menor CL ao longo da fase lútea. Não houve diferenças significativas na abundância de transcritos endometriais relacionados com a programação (PGR, ESR1) ou execução (OXTR, PTGS2) da liberação de PGF2&#945;. Em resumo, a suplementação com iP4 no início do diestro afetou o crescimento do CL mas não modulou os transcritos endometriais associados com a luteólise, sugerindo que o componente uterino pode não estar envolvido neste processo. Conclui-se que CLs comprometidos pela exposição à iP4 durante a luteogênese são mais susceptíveis à regredir antecipadamente, e isto pode ser exacerbado por baixas concentrações de E2 resultantes da AF. Em conclusão, rejeitamos a hipótese de que a redução do E2 folicular previne a antecipação da luteólise induzida pela iP4 em vacas Bos indicus.

O 17&beta;-estradiol (E2) desempenha um papel importante na função reprodutora e na fertilidade feminina, porém, sua ação é estendida para a maioria dos tecidos. Sabendo que o E2 tem funções pleiotrópicas em diferentes tecidos e órgãos, e que pode estar envolvido tanto na proliferação como na morte celular, nossa hipótese é que o E2 seja um dos iniciadores de regressão luteínica em cadelas não prenhes. Para testar nossa hipótese, foram usados corpos lúteos (CL) provenientes de 28 cadelas nos dias 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70 e >70 após a ovulação (n = 4/grupo) para os experimentos ex vivo. Nesta etapa foram analisadas as proteínas pró-apoptóticas (CASPASES, 3, 8, 9 e BAX) por imuno-histoquímica e western blotting, além da expressão dos genes CASP3, 8, 9, BAX, FAS, MKI67, ESR1, ESR2m por PCR em tempo real. Na segunda etapa deste trabalho, utilizamos CL de 12 cadelas nos dias 20, 40 e 60 após a ovulação (n=4 por grupo), cujas células foram cultivadas e divididas em seis tratamentos: Controle, E2 (tratado com E2), bloqueador de ER&alpha; (tratado com MPP), bloqueador de ER&beta; (tratado com PHTPP), E2 + bloqueador de ER&alpha; (tratado com E2 + MPP) e E2 + bloqueador de ER&beta; (tratado com E2 + PHTPP). Foram avaliados os mesmos genes do experimento ex vivo, bem como os genes CYP19A1, CYP11A1, HSD3B1 e SLC2A4. De modo geral a expressão dos fatores pró-apoptóticos foi mais alta a partir do dia 40 e atingiu valores máximos nos dias 60 e 70 após a ovulação, assim como a expressão de ERS2. Essa correlação foi observada também nas células do grupo E2 + bloqueador de ER&alpha;, que também apresentaram regulação negativa de HSD3B1. Quando do bloqueio do ER&beta;, as células luteínicas responderam com aumento dos genes relacionados à esteroidogênese e à proliferação celular, principalmente quando oriundas dos dias 20 e 40 p.o. Dessa forma, conclui-se que o bloqueio do ER&alpha; levou ao aumento dos genes pró-apoptóticos, e o bloqueio do ER&beta; possibilitou aumento dos genes luteotróficos. Estes achados confirmam o papel pleiotrópico do estradiol no CL canino e incluem este hormônio, assim como o balanço entre seus receptores, dentre os atores principais da regulação da meia vida do CL canino. / The 17&beta;-estradiol (E2) plays an important role in the reproductive function and female fertility, however, its action is extended to most tissues. Knowing that E2 has pleiotropic roles in different organs and tissues, and that might be involved in both cell death and proliferation, our hypothesis is that E2 is one of the triggers of luteal regression in non-pregnant bitches. To test our hypothesis, corpora lutea (CL) from 28 dogs on days 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70 and >70 after ovulation (n = 4/group) were used for ex vivo experiments. Pro-apoptotic proteins expression (CASPASES, 3, 8, 9 e BAX) were analyzed by immunohistochemistry and western blotting, and the gene expression of CASP3, 8, 9, BAX, FAS, MKI67, ESR1 and ESR2 were analyzed by real-time PCR. In the second step of this study, CL from 12 bitches on days 20, 40 and 60 (n = 4 per group) were used. Luteal cells were isolated and divided into six treatments: Control, E2 (treated with E2), ER&alpha; Blocker (treated with MPP), ER&beta; Blocker (treated with PHTPP), ER&alpha; + E2 Blocker (treated with E2 + MPP) and E2 + ER&beta; Blocker (treated with E2 + PHTPP). The expression of the same genes from the in vivo experiment was evaluated, as well as that of CYP19A1, CYP11A1, HSD3B1 and SLC2A4. In general, the expression of pro-apoptotic factors was higher from day 40 and reached highest expression on days 60 and 70 after ovulation, coinciding with increasing in expression of ERS2. This correlation was also observed in the cells from the group E2 + ER&alpha; blockade, which also showed HSD3B1down-regulation. When ER&beta; was blocked, cells of days 20 and 40 post ovulation responded increasing the expression of steroidogenesis and proliferation related genes. Thus, we deduce that the ER&alpha; blockade promotes the increase of pro-apoptotic and that o ER&beta; of luteotrophic genes expression. Our findings confirm the pleiotropic role of estradiol in canine CL and include this hormone, as well as the balance between its two receptors, among the factors controlling canine CL lifespan.

O corpo lúteo (CL) canino é responsável pela síntese de E2 durante o diestro. O E2 atua de forma autócrina e/ou parácrina sobre essa glândula. O mecanismo de atuação do E2 depende da razão entre receptor alfa (ER&#945;) e receptor beta (ER&#946;). A ligação ao ER&#945; tem efeito proliferativo e ao ER&#946; antiproliferativo. O objetivo deste trabalho foi entender a sinalização mediada pelo ER&#945; e ER&#946; no processo de formação e regressão do CL. CLs foram obtidos de cadelas não prenhes (n=30) nos dias 10, 20, 30, 40, 50 e 60 (n=5/grupo) após a ovulação (po). No dia da ovariossalpingohisterectomia foi colhido sangue para mensuração das concentrações de P4 e E2. Dezoito CLs (n=3/grupo) foram submetidos ao sequenciamento de RNA (RNAseq). Os genes diferencialmente expressos (DE) identificados pelo RNAseq foram submetidos ao software oPOSSUM3 para identificação das regiões de ligação mais representadas nos fatores de transcrição relacionados aos genes do ER&#945; (ESR1) e ER&#946; (ESR2). A análise de expressão temporal revelou a presença de 5.116 diferencialmente expressos (DE) em pelo menos uma comparação e 1.106 não foram anotados ainda no genoma canino, destes genes DE 295 apresentavam regiões de ligação de fatores de transcrição em comum com ESR1 e ESR2. Dez genes DE foram selecionados para validação dos resultados de RNAseq através do qPCR; usando o GAPDH como gene de referência. Desses genes, quatro apresentaram regioes em comum com ESR2 (LEF-1; PAPPA; NDGR2 ATP1A1) e um com ESR1 (CAV1) e os demais controlam proliferação celular (CTNNB1; CCND1; IGFBP 3, 4 e 5). A expressão proteíca de PAPPA e IGFBP 3, 4 e 5 (componentes do sistema IGF) foi avaliada também por imunohistoquímica. Durante a primeira metade do diestro, nossos resultados indicam que a sinalização mediada pelo E2 ocorre via interação do ER&#945; com CAV-1 (sinalização não genômica), ativando as vias de sinalização IGF e WNT/&#946;catenina, regulando o processo de proliferação celular. Enquanto na segunda metade, o ER&#946; regularia a expressão gênica de NDGR2 e ATP1A1, contribuindo para a regressão do CL. Assim nos resultados sugerem que o E2 atue tanto como um fator luteotrófico e quanto regulador da regressão do CL canino. / The canine corpus luteum (CL) is responsible for E2 synthesis during diestrus, which acts in an autocrine and / or paracrine manner in this gland. The E2 mechanism of action depends on the ratio between alpha (ER&#945;) and beta (ER&#946;) receptor The binding to ER&#945; has a proliferative effect whereas to ER&#946; an antiproliferative. The objective of this study was to understand the signaling mediated by ER&#945; and ER&#946; in the formation and regression of the CL. CLs were obtained from non-pregnant bitches (n = 30) on days 10, 20, 30, 40, 50 and 60 (n = 5 / group) post-ovulation (po). On the day of ovariohysterectomy blood was collected for measurement of P4 and E2 concentrations. Eighteen CLs (n = 3 / group) were subjected to RNA sequencing (RNA-Seq). Genes differentially expressed (DE) identified by RNA-Seq were submitted to oPOSSUM3 software for detection of over-represented transcription factors binding sites (TFBS) related to the ER&#945; (ESR1) and ER&#946; (ESR2) genes. The temporal expression analysis revealed the presence of 5116 differentially expressed (DE) genes in at least one comparison, and 1106 genes, which have not been recorded to the canine genome yet From these, 295 genes showed TFBS in common with ESR1 and ESR2. Ten DE genes were selected to validate the results of RNA-Seq by qPCR; using GAPDH as reference gene. Of these genes, four had TFBS in common with ESR2 (LEF-1; PAPPA; NDGR2; ATP1A1) and one with ESR1 (CAV1) and others genes were chosen because they control cell proliferation (CTNNB1; CCND1, IGFBP 3, 4 and 5). Protein expression of the IGF related genes (PAPPA and IGFBP 3, 4 and 5) was also evaluated by immunohistochemistry. During the first half of diestrus, it appears that E2 mediated signaling occurs via interaction of ER&#945; with CAV-1 (non-genomic signaling), activating signaling pathways of IGF and WNT / &#946;catenin, then regulating the cell proliferation process. Whereas in the second half, ER&#946; appears to regulate NDGR2 and ATP1A1 gene expression, contributing to the regression of the CL. Thus our results suggest that E2 may act as a luteotrophic and also a luteolytic factor in the canine CL.

O uso de biotecnologias pode ser um método eficaz para melhorar a eficiência da reprodução e aumentar a produção de animais geneticamente superiores. O tratamento superovulatório é uma técnica comum utilizada com o objetivo de difundir o material genético desejado, embora seu uso em búfalos ainda apresente limitações, principalmente relacionada à baixa taxa de recuperação de embriões. O corpo lúteo (CL) é uma glândula reprodutiva transitória que produz progesterona, requerida para o estabelecimento e manutenção da prenhez e regulação do ciclo reprodutivo. O desenvolvimento e as funções do corpo lúteo são afetados pela hiperestimulação ovariana. As células luteínicas de animais superovulados apresentam características compatíveis com alta síntese de proteína. O fator de crescimento vascular endotelial (VEGF) e o fator de crescimento fibroblástico básico (bFGF) são reguladores importantes do desenvolvimento e função do CL, e também são afetados pelo tratamento superovulatorio. Vários estudos sugerem que o LH (hormônio luteinizante) e hCG (gonadotrofina coriônica humana) modulam a expressão dos fatores de crescimento. Este trabalho teve como objetivo avaliar a expressão gênica e protéica dos sistemas VEGF e bFGF em corpo lúteo cíclico de búfalas não tratadas e superovuladas. Foram utilizados vinte corporea lutea (CLL) divididos em 5 grupos de acordo com o estágio do ciclo estral (2, 6, 12, 17 e 26 dias após ovulação p.o.) e o grupo 6 era composto de CLL de animais superovulados no dia 6 p.o. Os CLL foram coletados em abatedouro, dissecados e congelados imediatamente em nitrogênio líquido para posterior extração de proteína e de mRNA. A análise protéica do VEGF, KDR, bFGF, FGFR-2 e FGFR-3 foi determinada por western blotting, enquanto a análise da expressão gênica de VEGF, KDR, Flt-1, bFGF, FGFR-1 a 4, por RT-PCR em tempo real. No CL de búfalas superovuladas observou-se maior expressão protéica dos sistemas VEGF e bFGF, em relação aos animais não tratados (p<0,05). Por outro lado, a expressão do mRNA de todos os genes estudados decresceu (sistema VEGF-A p<0.001, bFGF, FGFR-1 e FGFR-3, p<0.05) ou apresentou tendência a decrescer (FGFR-2 e FGFR-4, p<0.1) nos animais superovulados. Durante o ciclo estral, a expressão protéica do VEGF não variou, apesar da expressão de todas as outras proteínas e mRNA estudados apresetarem variações de acordo com a fase do ciclo estral. Os resultados obtidos sugerem que o tratamento superovulatório aumenta a taxa de tradução dos fatores angiogênicos no CL de búfalas, e que a expressão dos sistemas VEGF e bFGF ao longo do ciclo estral é tempo-dependente, indicando um papel importante destes fatores na regulação das funções do CL. / Biotechniques can be an effective way of improving reproduction efficiency and enhancing the production of genetically superior animals. The superovulatory treatment is a common technique aiming to spread desired genetical material, although its use in buffalos still presents limitations, mainly the low embryo recovery rate. The corpus luteum (CL) is a temporary endocrine gland that produces progesterone (P), which is required to the establishment and maintenance of pregnancy and regulation of reproductive cycle. CL development and function are affected by ovarian hyperestimulation. The luteal cells of superovulated animals are described to show characteristics compatible with higher protein synthesis. The vascular endothelial growth factor (VEGF) and basic fibroblast growth factor (bFGF) are important regulators of CL and are also affected by superovulatory treatment. Several studies suggest that LH (luteinizing hormone) and hCG (human chorionic gonadotropin) modulate expression of growth factors. The aim of this work was to access gene and protein expression of VEGF and bFGF systems in cyclic CL of nontreated and superovulated water buffalos. Twenty water buffaloes corpora lutea (CLL) were divided in five groups according to estrous cycle stage (days 2, 6, 12, 17 and 26 after ovulation - p.o.) and the sixth group was composed by superovulated CLL from day 6 p.o. The CLL were collected at the slaughterhouse, dissected and frozen immediately in liquid nitrogen for posterior protein and mRNA extraction. Protein expression of VEGF and its receptors KDR and Flt-1 as well as bFGF and its receptors FGFR-2 and FGFR-3 was measured by western blotting (WB). For the relative gene expression of VEGF, KDR, Flt-1, bFGF, FGFR-1 to 4, we used real time RT-PCR. VEGF and bFGF systems protein expression showed an increase (p <0.05) in superovulated CLL compared to non-treated CLL on day 6 after p.o. On the other hand, mRNA expression from all studied genes was decreased (VEGF-A system p<0.001, bFGF, FGFR-1 and FGFR-3, p<0.05) or tended to decrease (FGFR-2 and FGFR-4, p<0.1) in superovulated CLL. In estrous cycle CLL VEGF protein did not show a time dependent expression although all other proteins and mRNAs expression were dependent on estrous cycle stage. These results indicate that the superovulatory treatment increased transduction rate of angiogenic factors in CL and that VEGF and bFGF systems are expressed in a time-dependent manner during the estrous cycle, indicating that these growth factors are important regulators of CL function.

O presente estudo visou avaliar o efeito das características morfológicas e da dinâmica vascular do folículo e corpo lúteo sobre a fertilidade de vacas de corte submetidas à protocolo de sincronização de estro e ovulação. Para isso o estudo foi dividido em três experimentos sendo: No primeiro experimento foi avaliado, no momento da transferência de embriões (TE), a vascularização do corpo lúteo e sua relação com as taxas de prenhez em vacas multíparas Nelore utilizadas como receptoras de embriões. No segundo experimento analisou-se a área e vascularização do folículo no momento da inseminação artificial em vacas, novilhas e primíparas Nelore e vacas Tabapuã multíparas submetidas a protocolo de sincronização de estro e ovulação. No dia 11 após as inseminações foram avaliados a área, diâmetro e vascularização do corpo lúteo e no dia 30 realizou-se o diagnóstico gestacional dos animais. No terceiro experimento foram utilizadas vacas multíparas Nelore e cruzadas submetidas ao mesmo protocolo de sincronização de estro e ovulação do experimento 2. Neste experimento foi analisada a área dos folículos no momento da inseminação artificial e aplicados 400 UI de eCG 14 dias após, quando então avaliou-se o tamanho do corpo lúteo e dos folículos existentes. No dia 30 após a IA foi realizado o diagnóstico gestacional e análise da vascularização do corpo lúteo permitindo avaliar a relação da aplicação do eCG com o aumento da vascularização e taxas de prenhez. No presente estudo foi encontrada uma provável correlação positiva em relação à vascularização e tamanho do folículo pré-ovulatório com o tamanho e vascularização do corpo lúteo, porém apenas nos experimentos 1 e 3 houve um aumento nas taxas de prenhez conforme o aumento na vascularização. / The present study evaluated the effect of the morphological characteristics and the vascular dynamics of the follicle and corpus luteum in the fertility of beef cows submitted to a protocol of estrus synchronization and ovulation. Three experiments were done. In the first experiment, the corpus luteum vascular perfusion and its relationship with the pregnancy rates of Nelore recipient cows after embryo transfer (ET) were evaluated. In the second experiment, the area and vascular perfusion of the follicle at the time of artificial insemination (AI), the area, diameter and vascular perfusion of the corpus luteum on Day 11 after ovulation of Nelore cows submitted to a protocol of estrus synchronization and ovulation were evaluated. In the third experiment, Nelore cows were submitted to the same protocol of estrus synchronization and ovulation used in experiment 2 and the area of the follicle was measured at the time of the AI. After 14 days of the AI, 400 UI de eCG was given to the cows and the size of the corpus Luteum and the largest follicle were evaluated. On Day 30 after AI the size and vascular perfusion of the corpus luteum was evaluated. The pregnancy diagnosis was done on Day 30 after ovulation for all the three experiments. In the present study, it was found a positive correlation between the vascular perfusion and the size of the pre-ovulatory follicle, and the size and vascular perfusion of the corpus luteum. However, only in the experiments 1 and 3 the pregnancy rates increased with the increase in the corpus luteum vascular perfusion.

Biotécnicas aplicadas à reprodução animal são empregadas com o intuito de melhorar qualitativa e quantitativamente os rebanhos. A superovulação assim como a estimulação do folículo dominante utilizando-se doses suprafisiológicas de eCG (gonadotrofina coriônica eqüina) são empregadas em bovinos e bubalinos, mas nem sempre alcançam os resultados esperados. Entretanto, foram relatadas alterações morfofuncionais em corpos lúteos (CL) de animais submetidos a estes tratamentos, o que implica, necessariamente, em levantamento de hipóteses relativas ao(s) mecanismo(s) pelo(s) qual(is) as gonadotrofinas exógenas alteram as funções celulares nos folículos e corpos lúteos resultantes. Com o intuito de melhor compreensão do papel exercido pelo eCG sobre a célula luteínica bovina, 16 vacas foram sincronizadas e submetidas (grupos tratados) ou não (grupo controle) ao tratamento com eCG. O tratamento foi realizado previamente (superovulação) ou posteriormente (estimulação do folículo dominante) ao desvio folicular. No dia 6 após a ovulação, estes animais foram abatidos e os CL coletados para realização de análises histológicas e ultra-estruturais, assim como o sangue coletado para dosagem de progesterona. Para comparação dos dados obtidos entre os diferentes grupos utilizou-se o programa GraphPrism e as médias foram consideradas diferentes quando p < 0.05. Em relação à densidade de mitocôndrias e densidade numérica das mitocôndrias elipsóides não houve diferença significativa entre os grupos estudados. Quando se calculou o volume total das mitocôndrias no CL bovino, houve diferença significativa do grupo superovulado em relação aos outros grupos. Já para as mitocôndrias esferóides observou-se diferença significativa do grupo estimulado comparado aos grupos controle e superovulado. À imunofluorescência os animais do grupo superovulado apresentaram visualmente uma marcação mais fluorescente intensa para mitocôndrias quando comparados aos grupos controle e estimulado; e o grupo estimulado apresentou uma marcação mais intensa em relação ao grupo controle. Houve diferença significativa entre os três grupos em relação à quantidade das células luteínicas grandes. Quando se corrigiu o número de células luteínicas grandes pelo volume do CL, os mesmos resultados foram encontrados. Quanto às medidas do maior diâmetro das células luteínicas grandes houve uma diferença significativa quando comparado o grupo estimulado com os demais. Aspectos qualitativos da microvascularização do CL em animais controle e superovulados revelam vascularização mais abundante no grupo tratado. Estes dados apontam para modificações morfológicas da célula luteínica e do CL bovino direcionadas à maior produção hormonal após tratamento com eCG e indicam que doses diferentes aplicadas em momentos diferentes do ciclo estral levam à respostas diversas da célula luteínica e do próprio CL. / Biotechnologies applied to animal reproduction are employed in order to improve livestock quality and quantity. Superovulation and the stimulation of the dominant follicle using supraphysiological doses of eCG (equine chorionic gonadotropin) are used in cattle and buffaloes, but not always achieve the expected results. However, morphofunctional changes in corpora lutea (CL) derived from animals submitted to these treatments were reported, which necessarily implies a survey of hypotheses regarding the mechanism(s) by which exogenous gonadotrophins result in altered cellular functions in the follicles and corpora lutea. In order to better understand the role played by eCG on bovine luteal cells, 16 cows were synchronized and submitted (treated groups) or not (control group) to treatment with eCG. The treatment was performed previously (superovulation) or after (stimulation of the dominant follicle) follicular deviation. At 6 days after ovulation, animals were slaughtered and the CL collected for histological and ultrastructural analysis, as well as blood for determining plasmaprogesterone.For statistical analysis the program Graph Prism was used and mean considered significant different when p < 0.05. In relation to mitochondria number and volume density there were no differences among the studied groups. Values of mitochondria total volume in CL were different if stimulated was compared to the other groups. Imunofluoresce for mitochondria showed a more intensive signal for animals from the superovulated group, followed by animals belonging to the stimulated group. The number of large luteal cells was different among all groups. Even though this number was corrected by CL volume, the same results were found. The biggest diameter of large luteal cells was compared among the groups and stimulated group showed higher values. Qualitative aspects of CL microvascularization in control and superovulated animals reveal more abundant vascularization in treated group. These data point towards morphological modification of bovine CL and luteal cell directed to increased hormonal production after eCG treatment. Moreover, results indicate that different eCG dosis applied in different time points of estrous cycle lead to different responses from CL and luteal cells.

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Francielle Alves Caldato.pdf: 206297 bytes, checksum: 76f7cbc3c353feae2e5df0057c4ca517 (MD5) Previous issue date: 2013-10-31 / The present study aimed to evaluate the effects of supplementation with resveratrol on the reproductive organs (uterus and ovaries) of female rats With diet-induced obesity palatable diet (DPH). We studied 64 Wistar rats were divided into 4 groups: control group (G-CM n = 16): animals fed with commercial feed supplementation Labina ® over placebo (0.5 mL of deionized water, by gavage); Control Group Res + (G-MR n = 16) animals fed commercial feed supplemented with more Labina ® 30 mg resveratrol / kg / day diluted in 0.5 ml deionized water by gavage; group O(G-CO n = 16): animals fed palatable diet (DPH) over placebo supplementation; group O + Res (G- RO n = 16): animals fed with DPH or supplemented with resveratrol 30mg / kg / day. The animals received the diets and supplements for 12 weeks (84 days) and after the experimental period, the rats were euthanized and organs (uterus and ovaries) were removed, weighed and processed for histology. From the results obtained we conclude that supplementation with resveratrol increases ovarian activity evidenced by increase of LCs, as well as in ovarian follicles. In the uterus, the animals that receiving resveratrol was demonstrated by the proliferative capacity characteristic of NORs smaller and in greater quantity. / O presente estudo objetivou avaliar os efeitos da suplementação com resveratrol sobre os órgãos reprodutivos (útero e ovários) de ratas Wistar com obesidade induzida por dieta palatável hiperlipídica (DPH). Foram estudadas 64 ratas Wistar, divididas em 4 grupos: Grupo Controle (G-CM n=16): animais alimentados com ração comercial LABINA® mais suplementação de placebo (0,5 mL de água deionizada, por meio de gavagem); Grupo Controle+Res (G-RM n=16): animais alimentados com ração comercial LABINA® mais suplementação com 30mg de resveratrol/Kg/dia diluídos em 0,5 mL de água deionizada, por meio de gavagem; Grupo Obeso (G-CO n=16): animais alimentados com dieta palatável hiperlipídica (DPH) mais suplementação de placebo; Grupo Obeso+Res (G-RO n=16): animais alimentados com DPH mais suplementação com 30mg de resveratrol/Kg/dia. Os animais receberam as dietas e suplementos durante 12 semanas (84 dias) e após o período experimental as ratas foram eutanasiadas e os órgãos (útero e ovários) retirados, pesados e processados para histologia. Pelos resultados obtidos concluímos que a suplementação com resveratrol aumenta a atividade ovariana evidenciada pelo aumento de CLs, bem como nos folículos ovarianos. No útero dos animais que receberam o resveratrol houve maior capacidade proliferativa demonstrada pela característica das NORs (regiões organizadoras de nucléolos) pequenas e em maior quantidade.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Francielle Alves Caldato.pdf: 206297 bytes, checksum: 76f7cbc3c353feae2e5df0057c4ca517 (MD5) Previous issue date: 2013-10-31 / The present study aimed to evaluate the effects of supplementation with resveratrol on the reproductive organs (uterus and ovaries) of female rats With diet-induced obesity palatable diet (DPH). We studied 64 Wistar rats were divided into 4 groups: control group (G-CM n = 16): animals fed with commercial feed supplementation Labina ® over placebo (0.5 mL of deionized water, by gavage); Control Group Res + (G-MR n = 16) animals fed commercial feed supplemented with more Labina ® 30 mg resveratrol / kg / day diluted in 0.5 ml deionized water by gavage; group O(G-CO n = 16): animals fed palatable diet (DPH) over placebo supplementation; group O + Res (G- RO n = 16): animals fed with DPH or supplemented with resveratrol 30mg / kg / day. The animals received the diets and supplements for 12 weeks (84 days) and after the experimental period, the rats were euthanized and organs (uterus and ovaries) were removed, weighed and processed for histology. From the results obtained we conclude that supplementation with resveratrol increases ovarian activity evidenced by increase of LCs, as well as in ovarian follicles. In the uterus, the animals that receiving resveratrol was demonstrated by the proliferative capacity characteristic of NORs smaller and in greater quantity. / O presente estudo objetivou avaliar os efeitos da suplementação com resveratrol sobre os órgãos reprodutivos (útero e ovários) de ratas Wistar com obesidade induzida por dieta palatável hiperlipídica (DPH). Foram estudadas 64 ratas Wistar, divididas em 4 grupos: Grupo Controle (G-CM n=16): animais alimentados com ração comercial LABINA® mais suplementação de placebo (0,5 mL de água deionizada, por meio de gavagem); Grupo Controle+Res (G-RM n=16): animais alimentados com ração comercial LABINA® mais suplementação com 30mg de resveratrol/Kg/dia diluídos em 0,5 mL de água deionizada, por meio de gavagem; Grupo Obeso (G-CO n=16): animais alimentados com dieta palatável hiperlipídica (DPH) mais suplementação de placebo; Grupo Obeso+Res (G-RO n=16): animais alimentados com DPH mais suplementação com 30mg de resveratrol/Kg/dia. Os animais receberam as dietas e suplementos durante 12 semanas (84 dias) e após o período experimental as ratas foram eutanasiadas e os órgãos (útero e ovários) retirados, pesados e processados para histologia. Pelos resultados obtidos concluímos que a suplementação com resveratrol aumenta a atividade ovariana evidenciada pelo aumento de CLs, bem como nos folículos ovarianos. No útero dos animais que receberam o resveratrol houve maior capacidade proliferativa demonstrada pela característica das NORs (regiões organizadoras de nucléolos) pequenas e em maior quantidade.

Submitted by Adriana Martinez (amartinez@unoeste.br) on 2016-08-15T17:53:17Z No. of bitstreams: 1 Gabriel Molinari de Mattos.pdf: 259716 bytes, checksum: 4ece0001439fe6d5a4573f9a3129ac49 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-15T17:53:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gabriel Molinari de Mattos.pdf: 259716 bytes, checksum: 4ece0001439fe6d5a4573f9a3129ac49 (MD5) Previous issue date: 2016-03-25 / This study aimed to evaluate the luteal development and the plasma concentration of progesterone in pregnant Nelore heifers and non-pregnant supplemented with sunflower seed. 30 animals were aged 2 to 3 years, with body condition score 2.5 to 3.5 (1 to 5), kept in Brachiaria decumbens, water and mineral salt ad libitum. Before starting the sonographic evaluations of the reproductive system, heifers were divided into two groups where they received: 1.7 kg / day of dietary supplement with 40% soybean meal and 60% sunflower seed (Group Treaty GT: n = 11) or 1.7 kg / day of dietary supplement containing 53% of soybean meal, 47% corn (control group, CG, n = 15) for 60 days. Immediately after this period heifers were synchronized ovulation with hormonal protocol TAI (artificial insemination in fixed time) lasting eight days. On AI held ultrasound examination (US) of the ovaries and blood collection to monitor the development of the corpus luteum (CL) and plasma progesterone (P4), every 48 hours for 26 days. CL diameter was observed on days 22, 24 and 26 after IA in pregnant females, where the diameter was significantly greater (P <0.05) than in non-pregnant, regardless of diet. There was no treatment effect on plasma progesterone concentrations, but the reproductive status influenced (P <0.05). There was a higher concentration of P4 in pregnant animals from day 16 after AI. It is concluded that the diet with sunflower seed did not influence the concentration of progesterone and diameter of the corpus luteum. It was observed that the reproductive status influenced the diameter P4 and CL. / Objetivou-se avaliar o desenvolvimento luteal e a concentração plasmática de progesterona em novilhas da raça Nelore prenhes e não prenhes suplementadas com semente de girassol. Foram utilizados 30 animais com idade de 2 a 3 anos, com escore de condição corporal de 2,5 a 3,5 (1 a 5), mantidas em pastagem de Brachiaria decumbens, com água e sal mineral ad libitum. Antes de iniciar as avaliações ultrassonográficas do aparelho reprodutor, as novilhas foram divididas em dois grupos, onde receberam: 1,7 Kg/dia de suplemento alimentar com 40% de farelo de soja e 60% de semente de girassol (Grupo Tratado, G-T: n=11) ou 1,7Kg/dia de suplemento alimentar contendo 53% de farelo de soja e 47% de milho (Grupo Controle, G-C: n=15) durante 60 dias. Imediatamente após este período as novilhas tiveram a ovulação sincronizada com protocolo hormonal de IATF (inseminação artificial em tempo fixo) com duração de 8 dias. No dia da IA realizou-se exame de ultrassom (US) dos ovários e coleta de sangue para acompanhar o desenvolvimento do corpo lúteo (CL) e concentração plasmática de progesterona (P4), a cada 48 horas, durante 26 dias. Foi observado diâmetro do CL nos dias 22, 24 e 26 após IA, nas fêmeas prenhes, onde o diâmetro foi significativamente maior (P<0,05) que nas não prenhes, independente da dieta. Não houve efeito do tratamento nas concentrações plasmáticas de progesterona, mas o status reprodutivo influenciou (P<0,05). Foi observada maior concentração de P4 nos animais gestantes a partir do dia 16 após IA. Conclui-se que a dieta com semente de girassol não influenciou a concentração de progesterona e diâmetro do corpo lúteo. Observou-se que o status reprodutivo influenciou a concentração de P4 e diâmetro do CL.