El uso de antimicrobianos como tratamiento terapéutico o profiláctico en animales de consumo masivo, como aves de corral (pollos), actualmente es de vital importancia para la industria avícola ya que permite promover el crecimiento y crianza intensiva de dichos animales así como garantizar productos sanos y de “ calidad ”, pero cuando se utilizan de forma abusiva sin atender a los principios de la buena practica veterinaria, la presencia de residuos en los alimentos representa un grave riesgo para la salud pública ya que podrían generar en los consumidores resistencia bacteriana y alergias provocando problemas médicos y veterinarios. El presente estudio, siguiendo la recomendación de las medidas de control del Consejo de las Comunidades Europeas, realizó un muestreo de carne de pollo en cuatro zonas comerciales: Mercado Central, Supermercado Metro, Mercado Eco, Mercado La Aurora en Lima cercado, donde se tomaron cinco muestras de cada mercado, teniendo un total de veinte muestras. La metodología empleada para detectar la presencia o ausencia de residuos de antibióticos tuvo como referencia el método microbiológico de difusión de las cuatro placas, para luego cuantificarlos por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). Los resultados obtenidos por ensayo microbiológico fueron positivos ya que se obtuvo halos de inhibición en al menos una de las placas ensayadas de cada muestra de 2mm de ancho. Por el método cuantitativo por HPLC se obtuvieron resultados que sobrepasan el Límite Máximo de Residuos (LMR) para sulfametoxazol en 75% de las muestras (mayor a 100ug/Kg de músculo), para norfloxacino en 100% de las muestras (mayor a 100 ug/Kg de músculo) y para ciprofloxacino en 50% de las muestras (mayor a 100 ug/Kg de músculo). -- Palabras Claves: Antimicrobianos, método microbiológico, HPLC, músculo de pollo, residuos. / -- The use of antimicrobials as therapeutic or prophylactic treatment in animals of mass consumption, such as poultry (chicken), it is now vital to the poultry industry because it can promote growth and intensive farming of these animals and ensure healthy and "quality", but when used improperly without regard to principles of good veterinary practice, the presence of residues in food poses a serious risk to public health because consumers could develope bacterial resistance and cause allergies medical and veterinary problems. This study, following the recommendation of the control measures of the Council of the European Communities, it is carried out a sampling of chicken meat in four commercial areas: Central Market, Supermarket Metro, Eco Market, Aurora Market in Lima Cercado, where five samples were taken of each market, taking a total of twenty samples. The methodology used to detect the presence or absence of residues of antibiotics had the reference microbiological method of diffusion of the four plates, then quantified by liquid chromatography (HPLC). The results of microbiological tests were positive as halos of inhibition were obtained in at least one plate of each sample tested 2mm wide. For quantitative HPLC method, it was obtained results that exceeded the maximum residue limit (MRL) for sulfamethoxazole in 75% of samples (greater than 100ug/Kg of muscle), norfloxacin of 100% of the samples (greater than 100 ug / kg of muscle) and ciprofloxacin of 50% of the samples (greater than 100 ug / kg of muscle). -- Key Words: Antimicrobials, microbiological technique, HPLC, chicken’s muscle, residues.

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / El presente trabajo ha sido orientado al estudio y formulación de un protocolo para la determinación de los niveles plasmáticos de ácido micofenólico en pacientes pediátricos trasplantados renales. La cuantificación del ácido micofenólico fue hecha en el Servicio del Laboratorio Clínico del Hospital Luis Calvo Mackenna, a través de la técnica de EMIT (Enzime Multiplied Immunoassay Technique), utilizando como referencia la determinación por HPLC (High Performance Liquid Chromatography) realizada en el Laboratorio de Farmacocinética de la Facultad de Medicina de la Universidad de Chile. El criterio adoptado en relación a las condiciones de toma de muestra para el fármaco se basó en la revisión bibliográfica de las características farmacocinéticas y formas de administración del fármaco y se estableció en consenso con todo el equipo de salud, que comprende al cuerpo Médico, Químico Farmacéutico y Enfermeras. Este estudio constituye una herramienta para crear un Servicio de Farmacocinética Clínica, que proporcione ayuda e información a la comunidad del hospital, con el fin de obtener un uso racional de los niveles plasmáticos y mejorar la relación costo/beneficio de las mediciones de las concentraciones plasmáticas de medicamentos. Para que la determinación de niveles de ácido micofenólico en el laboratorio de Bioquímica Central del Hospital tuviera validez, se revisaron las fichas clínicas de los pacientes y se diseñaron fichas adecuadas para un servicio de Farmacocinética clínica que recogerán datos sobre el paciente, cumplimiento y adherencia de la terapia, hora de última toma de dosis, hora de toma de muestra, entre otros

Unidad de Práctica Prolongada para optar al título de Químico Farmacéutico / En el siguiente informe se detalla el proceso de validación prospectivo de una metodología de análisis no farmacopeica de identificación y valoración por medio de la técnica de cromatografía liquida de alta eficiencia (HPLC) de un principio activo en una forma farmacéutica oral, sólida y de liberación inmediata fabricada por Laboratorio Synthon Chile ltda. Con el fin del cumplimiento de las normas GMP y exigencias de las diferentes instituciones sanitarias nacionales e internacionales (ISP, FDA, EMA, OMS), para el proceso de validación se generó un protocolo en el cual se detallaron los diferentes parámetros de desempeño a ser estudiados de acuerdo al propósito de la metodología y siguiendo las recomendaciones y los criterios de aceptación establecidos en diferentes guías (FDA, OMS, ICH). Los resultados obtenidos fueron presentados en un reporte de validación en acuerdo con las exigencias GMP. Estos resultados demostraron el cumplimiento con los criterios de aceptación y por lo tanto demostraron que la metodología empleada cumplió con el propósito para el cual está destinada y por consecuencia se encuentra formalmente validada.

El ácido ursólico es un triterpeno pentacíclico que pertenece al grupo de los terpenoides y debido a sus diversas actividades farmacológicas, relacionadas con sus efectos hepatoprotectores, anti-oxidante, anti-inflamatorio y antitumoral, es objeto de un gran interés científico. Esta investigación tuvo como finalidad obtener ácido ursólico de alta pureza de una manera fácil, rápida y económica a partir de la especie clinopodium revolutum conocida comercialmente como flor de arena. El proceso comenzó con la obtención del extracto de las hojas secas, a partir de ello se aisló ácido ursólico y se usó la técnica de recristalización para la separación y purificación. Finalmente se realizó análisis espectroscópicos de IR y RMN mono y bidimensional para caracterizar la molécula. Mediante la técnica de UPLC se determinó el contenido total y el porcentaje de pureza. Entre los resultados más importantes del estudio se determinó que dicha especie es la que presenta mayor cantidad (4,864 %) de ácido ursólico entre las especies de la familia Lamiaceae. Entre las conclusiones se destaca que dicha planta medicinal Clinopodium revolutum conocida y comercializada con el nombre de flor de arena o té indio endémica del Perú, cultivada principalmente en las regiones de Huánuco y Cajamarca, resultó ser una importante biofuente de ácido ursólico, no solo por su alto contenido sino también por los métodos fáciles, económicos y reproducibles con las que se logró obtener cristales de ácido ursólico puro mediante la técnica de recristalización. / Ursolic acid is a pentacyclic triterpene that belongs to the group of terpenoids and for its variety of pharmacological activities, related to their hepatoprotective effects, anti-oxidant, anti-inflammatory and anti-metastasis, is a subject of great scientific interest. This research aimed to obtain high purity ursolic acid in an easy, fast and economical way from the Clinopodium revolutum species known commercially as flor de arena. The process began with obtaining the extract of the dried leaves, from which ursolic acid was isolated using and the recrystallization technique was used for separation and purification. Finally we performed spectroscopic analyzes of IR and mono and twodimensional NMR to characterize the molecule. The total content and percentage of purity were determined by the UPLC technique. Among the most important results of the study, it was determined that this species is the one with the highest amount (4.864%) of ursolic acid among species of the Lamiaceae family. Among the conclusions, it is noted that this medicinal plant known as Clinopodium revolutum and marketed under the name of flor de arena or té indio endemic of Peru, grown mainly in the regions of Huánuco and Cajamarca, proved to be an important biofuente of ursolic acid, not only for its high content but also by the easy, economical and reproducible methods with which crystals of pure ursolic acid were obtained by the recrystallization technique. / Tesis

La incidencia de infecciones fúngicas ha aumentado en los últimos años debido al incremento de situaciones clínicas que comportan alteraciones en los mecanismos de defensa del organismo tales como neoplasias, pacientes portadores de un trasplante y tratados con fármacos inmunosupresores o síndrome de la inmunodeficiencia adquirida (SIDA), entre otros. La anfotericina B (AnB), comercializada en 1956, continúa siendo el fármaco de elección para el tratamiento de las micosis sistémicas, aunque su utilización no está exenta de toxicidad. Las nuevas formulaciones lipídicas de AnB comercializadas a partir de 1995, han supuesto en la práctica clínica una mejora en la optimización de la terapia ya que su administración ha demostrado estar asociada a una menor incidencia de reacciones adversas. Antes de la comercilaización de éstas, ha sido frecuente la utilización de AnB vehiculada en un excipiente de características lipófilas como es el Intralipid 20%, preparada como formulación magistral en el momento de la infusión endovenosa por no disponer de estudios de estabilidad. La aspergilosis pulmonar invasiva es una infección fúngica que puede aparecer como complicación en la clínica de pacientes inmunodeprimidos cuya profilaxis con la formulación de AnB en solución acuosa para inhalación, ha demostrado una buena eficacia clínica exenta de los efectos adversos y toxicidad asociados a la administración endovenosa. En esta memoria se presentan los resultados de tres trabajos en formato de publicaciones en los cuales se estandariza y valida un método para la determinación de AnB en muestras biológicas (suero, secreciones respiratorias) y muestras lipídicas con aplicación a estudios farmacocinéticos y de estabilidad química de AnB cuando ésta se administra en diferentes formas farmacéuticas. / The incidence of fungal infection has increased in recent years due to the increment of clinical situations wich alter the defence mechanisms of the body such as neoplasia, transplantation patients treated with immunosupressive drugs or acquired immunodeficiency (AIDS), among others. Amphotericin B (AmB), licenced in 1956, continues to be the drug of choice for the treatment of systemic mycosis, although its use is not exempt from toxicity. The new AmB lipid formulations licenced from 1995 onwards, have represented in clinical practice an improvement in therapy since its administration has been associated with a declining incidence of adverse reactions. Prior to AmB commercialization, it was normal to inclued AmN in an excipient of lipofilas-like-characteristics such as Intralipid 20%, prepared as a magistral formulation at the moment of intravenous infusion, for lack of stability studies. Invasive pulmonary aspergillosis is a fungal infection which may appear as a complication in immunodepressed patients whose prophylaxis with AmN formulation in aqueous solution for inhalation, has shown good clinical efficacy free from adverse effects and toxicity associated with intravenous administration. In this thesis the results of three studies are presented, in whcih a standardized and validated method for the determination of AmB in biologic samples (serum, respiratory secretions) and liquid samples with application to pharmacokinetic studies and chemical stability of AmB when administered using pharmaceutical procedures.

El uso de antimicrobianos como tratamiento terapéutico o profiláctico en animales de consumo masivo, como aves de corral (pollos), actualmente es de vital importancia para la industria avícola ya que permite promover el crecimiento y crianza intensiva de dichos animales así como garantizar productos sanos y de “ calidad ”, pero cuando se utilizan de forma abusiva sin atender a los principios de la buena practica veterinaria, la presencia de residuos en los alimentos representa un grave riesgo para la salud pública ya que podrían generar en los consumidores resistencia bacteriana y alergias provocando problemas médicos y veterinarios. El presente estudio, siguiendo la recomendación de las medidas de control del Consejo de las Comunidades Europeas, realizó un muestreo de carne de pollo en cuatro zonas comerciales: Mercado Central, Supermercado Metro, Mercado Eco, Mercado La Aurora en Lima cercado, donde se tomaron cinco muestras de cada mercado, teniendo un total de veinte muestras. La metodología empleada para detectar la presencia o ausencia de residuos de antibióticos tuvo como referencia el método microbiológico de difusión de las cuatro placas, para luego cuantificarlos por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). Los resultados obtenidos por ensayo microbiológico fueron positivos ya que se obtuvo halos de inhibición en al menos una de las placas ensayadas de cada muestra de 2mm de ancho. Por el método cuantitativo por HPLC se obtuvieron resultados que sobrepasan el Límite Máximo de Residuos (LMR) para sulfametoxazol en 75% de las muestras (mayor a 100ug/Kg de músculo), para norfloxacino en 100% de las muestras (mayor a 100 ug/Kg de músculo) y para ciprofloxacino en 50% de las muestras (mayor a 100 ug/Kg de músculo). Palabras Claves: Antimicrobianos, método microbiológico, HPLC, músculo de pollo, residuos. / The use of antimicrobials as therapeutic or prophylactic treatment in animals of mass consumption, such as poultry (chicken), it is now vital to the poultry industry because it can promote growth and intensive farming of these animals and ensure healthy and "quality", but when used improperly without regard to principles of good veterinary practice, the presence of residues in food poses a serious risk to public health because consumers could develope bacterial resistance and cause allergies medical and veterinary problems. This study, following the recommendation of the control measures of the Council of the European Communities, it is carried out a sampling of chicken meat in four commercial areas: Central Market, Supermarket Metro, Eco Market, Aurora Market in Lima Cercado, where five samples were taken of each market, taking a total of twenty samples. The methodology used to detect the presence or absence of residues of antibiotics had the reference microbiological method of diffusion of the four plates, then quantified by liquid chromatography (HPLC). The results of microbiological tests were positive as halos of inhibition were obtained in at least one plate of each sample tested 2mm wide. For quantitative HPLC method, it was obtained results that exceeded the maximum residue limit (MRL) for sulfamethoxazole in 75% of samples (greater than 100ug/Kg of muscle), norfloxacin of 100% of the samples (greater than 100 ug / kg of muscle) and ciprofloxacin of 50% of the samples (greater than 100 ug / kg of muscle). Key Words: Antimicrobials, microbiological technique, HPLC, chicken’s muscle, residues.

Se presentan los resultados obtenidos en la validación de un método analítico por cromatografía líquida de alta resolución, para la determinación de vitamina B1, en leche UHT Enriquecida y Endulzada, el cual se diseñó para separar la tiamina, con la utilización de una columna RP-18 de 150 x 4.6 mm y un detector UV-Visible. Dicho método se empleó para el control de la calidad de este producto. El método fue validado siguiendo una metodología de trabajo elaborado previamente en un protocolo de validación, donde se analizaron diferentes parámetros como son: selectividad, linealidad, presición, exactitud. Se procede a recopilar toda la información bibliográfica necesaria para luego realizar los primeros análisis exploratorios definiendo las condiciones cromatográficas finales. Definida las condiciones se inicia los análisis para la evaluación de los parámetros de validación y se demuestra mediante el diseño experimental y los procedimientos estadísticos empleados que la técnica analítica propuesta es lineal por que se obtiene un coeficiente de determinación de r2= 0.9998; es exacta por que se obtiene un porcentaje de recuperación de 100.07%; es precisa ya que para la repetibilidad se obtiene un RSD de 0.446% y para la precisión intermedia se demuestra que no existe diferencias entre las varianzas de los analistas; finalmente es selectiva por que no se evidencian picos interferentes cumpliendo así con los parámetros de validación establecidas en las obras oficiales, por lo cual, el método validado es confiable y puede ser empleado en el análisis de rutina. / The results obtained in the validation of an analytic method by chromatography liquid of high resolution are presented, for the decision of vitamin B1, in milk UHT enriched and sweetened, which was designed to separate the thiamine, with the utilization of a column RP-18 of 150 x 4.6 mm and a detector UV- Visible. Said method was employed for the control of the quality of this product. The validation of an analytic method includes the evaluation of a series of parameters. They are: selectivity, linearity, precision, accuracy. We compilated all the bibliographic information we need to do the first exploratory analyses which define the final chromatographic conditions. Then, when the conditions were defined, we started the analyses for the evaluation of validation’s parameters. It was shown by the experimental design and the statistic procedures, that the proposed analytical technique is linear because the correlation coefficient obtained was r2= 0.9998; it is accurate, it was obtained a recuperation percentage of 100.07%; is precise since for the repeatability obtained was RSD of 0.446% and for the intermediate precision it is shown that do not exist differences among the variances of the analysts, finally is selective because there is no evidence of interferential chromatographic peaks. The proposed technique accomplished all established validation’s parameters established in the official papers. Thus, the validate method is reliable and it can be used in the routine analyses.

El presente estudio desarrolla una técnica analítica para determinar gamma hidroxibutirato (GHB) en líquidos biológicos. Esto es debido a que esta sustancia viene siendo utilizada como una droga de abuso, así como para cometer actos delincuenciales en nuestro país. De esta manera se logra un aporte significativo al análisis químico-toxicológico en el Perú, ya que no existen estudios previos en nuestro medio. Esta técnica permitirá determinar la presencia del GHB por CCF y HPLC; lo cual facilitará a los laboratorios de instituciones como la Policía y el Ministerio Público a mejorar su labor al tener la certeza de su identificación en líquidos biológicos y vísceras. Se buscó la determinación de GHB por CCF por ser esta una técnica analítica común, sencilla y de fácil aplicación en cualquier laboratorio de toxicología; se evaluaron los mejores solventes de separación, reactivos reveladores generales y también los específicos. Además, se determinó el GHB por HPLC empleándose la columna XTerra MS C18 y un MS ESI-UV como sistema de detección. Finalmente, se aplicó la metodología analítica en orinas de personas que fueron llevadas a la DIRCRI para un examen toxicológico. PALABRAS CLAVES : Gamma hidroxibutirato (GHB), Cromatografía en Capa Fina (CCF), Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC). / This study reports the development of an analytical technique for the determination of gamma hydroxibutyrate (GHB) in biological fluids. This fact as a result of this substance is being used like a drug abuse, beside is involve in delinquent acts in our country. According to this way is reached a significant contribution to the chemical – toxicological analysis to Peru; because of, there is not previous studies. This technique will allow the determination of the presence of this new drug by using TLC and HPLC, thus improving the labor of institutions such as National Police and Ministry of People by having the certainly of the presence of GHB in biological fluids or goats. We used TLC because of the simplicity of this common analytical technique, beside it is easy to implement in toxicology laboratories, the best separation solvents and general and specific reveal reactives were evaluated. We also utilized HPLC technique using an Xterra MS C18 column and MS ESI-UV detection system. Finally, we applied this analytical methodology in the urine of people who were taken to DIRCRI for a toxicological test. KEYWORDS : Gamma hydroxybutyrate (GHB), Thin Layer Chromatography (TLC), High Performance Liquid Chromatography (HPLC).

En el ámbito del control de doping es importante poder detectar y cuantificar con un nivel de confianza adecuado los compuestos incluidos en la lista de sustancias prohibidas de la Agencia Mundial Antidopaje (WADA) que tienen definida una concentración de corte. Para la efedrina se ha establecido que una concentración superior a 10 µg/ml en orina se considera con resultado analítico adverso, por lo que es necesario tener una metodología analítica validada para su detección y cuantificación. La efedrina es una amina simpaticomimética, con acción estimulante sobre el sistema nervioso central, el sistema cardiovascular y el sistema respiratorio. Se excreta principalmente en forma inalterada en la orina dentro de las 24 horas siguientes a su administración. Las plantas de la especie Ephedra son la principal fuente natural de efedrina, de éstas la más conocida es el Ma Huang (Ephedra Sinica). A partir de extractos de Ephedra se elaboran suplementos alimenticios que son comercializados principalmente como supresores del apetito y como estimulantes para mejorar el desempeño de los deportistas. En este trabajo se presentan los resultados de la validación de una metodología para la detección y cuantificación de efedrina en la matriz biológica orina por cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC). La metodología analítica desarrollada comprende la utilización de un detector de longitud de onda variable, una columna de fase reversa y como fase móvil una mezcla de tampón fosfato y metanol. Previo al análisis, las muestras son sometidas a una extracción líquido-líquido con solvente orgánico, para obtener un extracto lo suficientemente limpio que pueda ser analizado sin interferencias de la matriz orina. Para la validación de la metodología se realizaron pruebas de especificidad, linealidad, precisión, recuperación de la extracción, límite de detección, límite de cuantificación, estabilidad y la determinación de la incertidumbre de la medición.

La presente tesis contempla el estudio electroquímico y cromatográfico de la interacción de estrona con β-ciclodextrina (β-CD) y sulfobutileter-βciclodextrina (SBE-β-CD) en solución. El estudio se efectuó en un medio mixto haciendo uso de técnicas electroquímicas como voltametría de pulso diferencial (VPD) y voltametría cíclica y técnicas cromatográficas como cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC). La estrona presentó una respuesta anódica correspondiente a su oxidación electroquímica en medio mixto (EtOH:Buffer fosfato 0,1M / 25:75) con la transferencia de 2 electrones. La intensidad de corriente disminuyó a medida que aumentó la concentración de las ciclodextrinas (CDs) lo que evidenció la formación de un complejo de inclusión. La variación de la corriente asociada a la concentración de las CDs permitió obtener las constantes de formación del complejo de inclusión y obtener los parámetros termodinámicos que dan cuenta de las interacciones entre estrona y las dos ciclodextrinas utilizadas en este estudio. La formación del complejo de inclusión también se evidenció en los resultados obtenidos mediante HPLC, los que mostraron una disminución del tiempo de retención de la estrona a medida que aumentó la concentración de βCD en la fase móvil. Esto es debido a la formación de un complejo de inclusión entre la ciclodextrina y el analito que está siendo cromatografiado. Las variaciones observadas en el tiempo de retención fueron utilizadas para calcular la constante de formación del complejo de inclusión y obtener parámetros termodinámicos de formación. La estrona mostró una menor afinidad por la β-CD, lo que se refleja en los valores inferiores de constante de formación en comparación con la SBE-βCD. Para el complejo de inclusión de estrona con β –CD, los parámetros indicaron que la contribución principal a la formación del complejo se debe a las interacciones de tipo van der Waals. En el caso de estrona con SBE-β-CD, es probable que exista una mayor contribución de interacciones de tipo hidrofóbicas. Sin embargo, el análisis es más complejo debido a que no se observa un efecto claro de la temperatura en la constante de formación de este complejo de inclusión.