Orientador: Thais Borges César / Coorientador:Paulo Inácio da Costa / Banca: Neuza Mariko Aymoto Hassimotto / Banca: Alceu Afonso Jordão Jr. / Banca: Amanda Martins Baviera / Banca: Célia Maria de Sylos / Resumo: As polimetoxiflavonas (PMF) são uma subclasse do grupo dos flavonoides cítricos, as quais são conhecidas devido à ação antioxidante, anti-inflamatória, hipolipidêmica e anticâncer; além de elevada biodisponibilidade. Estudos recentes demonstram que os metabólitos gerados a partir das PMF são biologicamente ativos, e possuem efeitos benéficos superiores aos compostos originais. Objetivo: Este trabalho teve por objetivo, isolar e identificar metabólitos das PMF a partir da urina de ratos, e avaliar sua atividade biológica sobre a proteína transferidora de triglicerídeo microssomal (MTP) em células Huh7.5. Métodos: Trinta ratos Wistar adultos foram separados em 3 grupos (n = 10) e administrados com 200 mg/kg/dia de tangeretina (TAN), nobiletina (NOB) ou heptametoxiflavona (HMF), durante 15 dias. Os metabólitos foram extraídos da urina, isolados por cromatografia líquida preparativa, e identificados por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC-ESI-MS) acoplada ao detector de UV (PDA). A ação dos metabólitos sobre a atividade da MTP foi avaliada por método fluorométrico. Resultados: Foram isolados metabólitos glucuronídeos com m/z [M+H]+ 565 amu (unidade de massa atômica), 551 amu, 535 amu, 521 amu, 505 amu; além de metabólitos hidroxilados com m/z [M+H]+ 419 amu, 405 amu, 389 amu, 375 amu, 359 amu, 329 amu, 315 amu. Os metabólitos TAN-4'-glucuronídeo (TAN-G1), TAN-dihidroxi-glucuronídeo (TAN-G2), TAN-4'-monohidroxilada (TAN-OH1), TAN-monohidroxilada (TAN-OH2), NOB-glucuroní... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The polymethoxylated flavones (PMF) are a subclass of flavonoids citrus, which are known because of their antioxidant, anti-inflammatory, hypolipidemic and anticancer properties; besides the high bioavailability that they present. Recent studies show that the metabolites generated from the PMF are biologically active and have beneficial effects greater than the original compounds. Objective: This study aimed to isolate and identify metabolites of PMF from the urine of rats, and evaluate its biological activity upon microsomal triglyceride transfer protein (MTP) in Huh7.5 cells. Methods: Thirty adult male Wistar rats were separated into 3 groups (n = 10) and fed with 200 mg / kg / day with tangeretin (TAN), nobiletina (NOB) or heptametoxiflavona (HMF) for 15 days. The metabolites were extracted from urine, isolated by preparative liquid chromatography and identified by high-performance liquid chromatography (HPLC-ESI-MS) coupled with UV detector (PDA). The action of the metabolites on the MTP activity was evaluated by fluorometric method. Results: We isolated glucuronide metabolites with m / z [M + H] + 565 amu (atomic mass unit), 551 amu, 535 amu, 521 amu, 505 amu; addition to the hydroxilated metabolites with m / z [M + H] + 419 amu, 405 amu, 389 amu, 375 amu, 359 amu, 329 amu, 315 amu. The TAN-4'-glucuronide metabolites (TAN-G1), TAN-dihydroxyglucuronide (TAN-G2), TAN-4'-monohidroxilada (TAN-OH1), TAN-monohydroxylada (TAN-OH2), NOB-glucuronide (NOB-G) NOB-monohydroxylada (NOB-OH), HMFmonohydroxylada (HMF-OH) have been identified and evaluated in in vitro assay. TAN-OH1 and NOB-OH reduced the MTP activity, and HMF-OH showed higher effect compared to its parent compound. PMF obtained from dry extract of orange peel, administered in rats, showed no effect on the MTP. Conclusion: These data show viable methods for isolation of the... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Dulce Helena Siqueira Silva / Banca: Isabele Rodrigues Nascimento / Banca: Nivaldo Boralle / Banca: Ana Helena Januário / Banca: Luce Maria Brandão Torres / Resumo: O estudo de produtos naturais como fonte de novos agentes anticâncer torna-se de grande importância, pois mesmo devido à grande quantidade de drogas já existente para o tratamento de neoplasias, ainda não se chegou a um composto ideal que tenha maior seletividade, menos efeitos colaterais, maior potência terapêutica e menor índice de resistência. Das famílias vegetais com reconhecido potencial terapêutico destaca-se a família Fabaceae, cuja quimiossistemática atesta para uma riqueza de compostos flavonoídicos com amplo espectro de atividade biológica, inclusive antitumoral. Desta forma, o objetivo principal deste estudo foi isolar e caracterizar substâncias fenólicas a partir de frações oriundas de espécies do gênero Inga (I. laurina, I. edulis e I. marginata) selecionadas através do bioensaio com linhagens de celulas antitumorais e identificar metabólitos em mistura através de CLAE-DAD, HPLC-MS, LC-SPE-TT e Espectroscopia de RMN. A composição química destas espécies indicou uma grande variedade de ácidos aromáticos, flavonóides, taninos e triterpenos. Este trabalho permitiu a caracterização das substâncias: lupeol, éster graxo da -amirina, éster do olean-18-eno, fridelina, ácido vanílico, ácido 3,4,5-trimetoxi-benzóico, ácido gálico, galato de metila, ácido pcumárico, ácido benzóico, p-hidroxi-benzóico, ácido protocateuico, ácido tânico, ácido cafeico, ácido p-metoxicinâmico, ácido p-hidroxibenzóico, derivado metilado do ácido 4-hidroxibenzóico, ácido ferúlico, miricetina,miricetina-3-O-ramnosídeo, miricetina-3-O-(2"-Ogaloil)- -ramnopiranosídeo, apigenina, quercetrina, proantocianidina A-2, procianidina B, galato de 2-ramnopiranosil-4,6-diidroxifenila, galato de 2-ramnopiranosil-3,5-diidroxifenila e do glicosídeo do 4-vinil-fenol. Através das analises por CLAE-DAD detectamos a presença de uma antocianina altamente polar na fração aquosa... / Abstract: The study of natural products as a source of new anticancer agents is very important, because even due to the large amount of existing drugs for the treatment of cancer, has not yet reached an optimal compound that has greater selectivity, fewer side effects, higher potency therapeutic and index of least resistance.One of thefamilies with recognized therapeutic potential is the Fabaceae family, whose chemosystematics show an abundance of flavonoid with broad spectrum of biological activities, including antitumor. Thus, the aim of this study was to isolate and characterize phenolic compounds from fractions obtained of the genus Inga (I. laurina, I. edulis and I. marginata) selected by bioassay cytotoxic and identify metabolites in mixture by HPLC-PDA, HPLC-MS, LC-SPE-TT and NMR Spectroscopy. The chemical composition of these species indicated a wide variety of aromatic acids, flavonoids, tannins and triterpenes. This work describe the characterization of the compounds: lupeol, fatty ester of -amyrin, the olean-18-ene ester and friedelin, vanillic acid, 3,4,5-trimethoxy benzoic acid, gallic acid, gallate methyl, p-coumaric acid, benzoic acid, p-hydroxybenzoic, protocateuico acid, tannic acid, caffeic acid, p-methoxycinnamic acid, p-hydroxybenzoic acid derivative methylated of 4-hydroxybenzoic acid, ferulic acid, myricetin, myricetin-3-Orhamnoside, myricetin-3-O- (2 "-O-galoil) - -rhamnopyranoside, apigenin, quercetrin, proanthocyanidin A-2 and procyanidin B, 2-rhamnopyranosyl-3,5-dihydroxyphenyl gallate, 2-rhamnopyranosyl-4,6-dihydroxyphenyl gallateand 4-vinyl-phenol. Through the analysis by HPLC-PDA detected the presence of one anthocyanin from aqueous fraction in five other anthocyanins in the methanolic fraction from seeds of I. edulis. Through the bioassay-guided fractionation was possible to obtain a fraction with high antitumor potential (ED50 = 4.0 mg/mL) that was characterized such a mixture... / Doutor

Orientador: Hérida Regina Nunes Salgado / Banca: Marcela Longhi / Banca: Ruy Carlos Ruver Beck / Resumo: O norfloxacino é uma fluoroquinolona de segunda geração derivada do ácido nalidíxico. Como as demais fluoroquinolonas, o norfloxacino atua por inibição da DNA-girase bacteriana, complexo enzimático que participa do processo de replicação do DNA bacteriano e também inibe a topoisomerase tipo IV do DNA bacteriano. Esta fluoroquinolona é utilizada para o tratamento de infecções do trato urinário causadas por bactérias Gram-negativas, incluindo Enterobacteriaceae e espécies Pseudomonas-resistentes e também alguns micro-organismos Gram-positivos. A literatura apresenta alguns métodos de análise para norfloxacino em fluidos biológicos, águas subterrâneas, alimentos e formas farmacêuticas. Com base nestas considerações, este trabalho objetiva desenvolver ensaios para análise qualitativa de norfloxacino utilizando espectrofotometria na região do visível, análise térmica, cromatografia em camada delgada, cromatografia líquida de alta eficiência, eletroforese capilar e outros métodos gerais para caracterização da SQR e comprimidos de norfloxacino. Métodos analíticos foram desenvolvidos e validados para a quantificação deste fármaco como: (1) espectrofotometria na região do visível, comprimento de onda de detecção 520 nm, com faixa linear de 95,0 a 120,0 μg/mL utilizando ácido cloranílico 0,1% como reagente, com exatidão de 102,48%; (2) cromatografia líquida de alta eficiência, com comprimento de onda de detecção de 277 nm, fase móvel composta por solução aquosa de ácido acético 5% e metanol (80:20 v/v), obtendo-se tempo de retenção médio de 5,7 minutos e capacidade de separação de produtos de degradação. A faixa linear avaliada foi de 10,0 a 30,0 μg/mL, com exatidão de 103,96%; (3) Eletroforese Capilar, validado utilizando-se como eletrólito, tampão de tetraborato de sódio 30 mM a pH 9,0 e capilar... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Norfloxacin is a second-generation fluoroquinolone derivate of nalidixic acid. Like other fluoroquinolones, norfloxacin acts by inhibiting DNA gyrase, the enzyme complex that participates in the process of bacterial DNA replication and also inhibit topoisomerase IV type of bacterial DNA. This fluoroquinolone is used in treatment of urinary tract infections caused by Gram-negative bacteria, including Enterobacteriaceae, and Pseudomonas-resistant species and also by Gram-negative microorganisms. The literature describes some methods to analyses norfloxacin in biologic fluids, groundwater, foods and pharmaceutical forms. Based on these considerations, this work aims to develop assays for qualitative analysis of norfloxacin using visible spectrophotometry, thermal analysis, thin-layer chromatography, high performance liquid chromatography, capillary electrophoresis and other general methods for the characterization of API and tablets of norfloxacin. Analytical methods were developed and validated for the quantification of this drug as: (1) visible spectrophotometry, detection wavelength 520 nm with a linear range from 95.0 to 120.0 μg/mL using chloranilic acid 0.1% as a reagent, with an accuracy of 102.48%; (2) high performance liquid chromatography with detection wavelength of 277 nm, mobile phase composed of aqueous 5% acetic acid and methanol (80:20 v/v) obtaining an average retention time of 5.7 minutes and separation capability degradation products. The linear range was measured from 10.0 to 30.0 μg/mL, with accuracy (103.96%); (3) Capillary electrophoresis was validated using a solution of 30 mM sodium tetraborate buffer pH 9.0 as the electrolyte and a fused silica capillary of 48.5 cm, with 40.0 cm effective, and 75 μm of diameter. The linear range was evaluated from... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Angela Regina Araujo / Banca: Isabele Rodrigues Nascimento / Banca: Ana Helena Januário / Resumo: Micro-organismos endofíticos, geralmente fungos e b actérias, vivem sistematicamente no interior das plantas sem causar, aparentemente, dan os a seus hospedeiros. Fungos endofíticos representam um importante grupo de fungos com poten cial fármaco e biotecnológico e podem ser isolados de diversas plantas medicinais. A espé cie vegetal Eugenia jambolana Lam . tem sido intensamente explorada química e biologicament e devido a seus usos populares e por apresentar diversas atividades biológicas. Logo, o estudo de fungos endofíticos, associados a esse espécie vegetal, apresenta-se como uma estraté gia promissora na obtenção e identificação de substâncias potencialmente bioativ as. Dentro deste contexto, este trabalho teve como objetivo principal a avaliação química do fungo endofítico Saccharicola sp. isolado de Eugenia jambolana Lam. Este endófito foi cultivado em pequena escala nos meio de cultura liquido (MDB) e sólido (Milho) e em esca la ampliada no meio Czapek. O caldo foi separado dos micélios após 28 dias (meios líquidos) e 21 dias (meio sólido) por filtração e o filtrado foi submetido à partição líquido/líquido c om AcOEt fornecendo, após a evaporação do solvente, os respectivos extratos brutos. Os ext ratos foram avaliados frente a produção metabólica por CCDC, CLAE-DAD e RMN de 1 H e também avaliados frente aos ensaios biológicos. Portanto para os extratos MDB, Milho Fr .CH 3 CN, Milho Fr. aquosa e Milho Fr.Hexânica, foram realizados ensaios antifúngico, antioxidante e anticolinesterásico, onde estes extratos demonstraram ser promissores. O extr ato obtido em escala ampliada (Czapek) foi fracionado em cartucho SPE (extração em fase só lida), resultando em seis frações ( S s.C.Fr1- S s.C.Fr6). Do estudo da fração S s.C.Fr1 foi possível o isolamento de uma substância o Ácido fusárico ( 1 ) e a fração S s.C.Fr3 resultou no isolamento de 6,7 dihidroxi... / Abstract: Endophytic microorganisms, often bacteria and fungi systematically live within the plant without apparent harm their hosts. Endophytic fungi represent an important group of fungi with biotechnological potential and may be isolated from various medicinal plants. The plant species Eugenia jambolana Lam. has been intensively explored chemically and biologically due to its popular uses and it has several biologic al activities. Thus, the study of endophytic fungi associated with this plant species, presents itself as a promising strategy in obtaining or identifying potentially bioactive substances. Withi n this context, this study aimed to evaluate the chemical endophytic fungus Saccharicola sp. isolated from Eugenia jambolana Lam., encoded as Ej-c04. This endophyte was cultivated on a small scale to a liquid culture medium PDB solid Corn and enlarged scale for the Czapek me dium. The broth was separated from the mycelium after 28 days (liquid media) and 21 days ( solid medium) by filtration and the filtrate was subjected to liquid / liquid partition with ethyl acetate providing after evaporation of the solvent, their crude extracts. The extracts were evaluated against metabolic production by TLC, CLAE-DAD and 1 H NMR also evaluated and compared to the bioassay. So for MDB extracts, Fr.CH 3 CN Corn, aqueous Fr. Corn and Corn Fr.Hexânica, tes ts were performed antifungal, antioxidant and anticholinest erase where these extracts have shown promise.The extract obtained in enlarged scale (Cza pek) was fractionated on SPE cartridge (solid phase extraction), resulting in six fraction s ( S s.C.Fr1- S s.C.Fr6). From S s.C.Fr1 fraction was possible to isolate a substance fusaric acid (1 ) and S s.C.Fr3 fraction resulted in the isolation of (2E, 4E) - 6,7 dihydroxy-4,6-dimethyl octanoate (2) novel substance. The extract obtained in small scale (Corn Fr.CH 3 CN) was subjected to fractionation column of silica ge... / Mestre

Orientador: Vanderlan da Silva Bolzani / Co-orientador: Alberto José Cavalheiro / Banca: Humberto Márcio Santos Milagre / Banca: Alessandra Regina Pepe Ambrozin / Resumo: Os ciclotídeos são produtos natura is de estrutura polipeptídica, contendo de 2 8 a 37 resíduos de aminoácidos, sendo seis deles resíduos de cisteína, altamente conservados e formados por ligações dissulfeto as quais exib em ciclização tipo "cabeça - cauda". Ess e arranjo estrutura l característico co nfere aos ciclotí deos uma estabilidade excepcional e resistência à proteólise . Devido a estas peculiaridades moleculares os ciclotídeos são substâncias com importante s funç ões biológica s, entre elas, de stacam - se as de defesa e adaptação dos organismos que as acumulam . São de gran de interesse para agricultura, agindo como inseticida s e, no uso medicinal p or apresentarem atividades anti - HIV, anti - helmíntic a, antimicrobian a e efeitos uterotônicos . A presente dis sertação trata d o estudo de ciclotídeos isolados d a planta Noisettia orchidiflora (Rudge) Gingins, pertencente à família Violaceae, um táxon de ocorrência frequente n a Mata Atlântica . Já existem dados na literatura sobre o estudo de ciclotídeos das raíze s e o presente estudo é importante na medida que registra a ocorrência desta classe de substâncias e a sua caracterização nas folhas e galhos desta espécie, levando a informações mais completas sobre a ocorrência de ciclotídeos em Violaceae . A extração de c iclotídeos do material vegetal ( galhos e folhas secos e moído s ) foi feita mediante maceração hidrometanólica até esgotamento do material vegetal, seguid a de partição líquido - líquido com diclorometano. A fase polar foi concentrada e submetida à crom atografia em coluna, empregando octadecilsilano (C 18 ) como fase estacioná ria, obtendo - se frações ricas em peptídeos. O processo de purificação foi realizado p or HPLC preparativ o e/ou analític o com eluição gradiente, empregando - se acetonitrila e ág ua como fase móv e l, o que permitiu a obt... / Abstract: C yclotides are pol ypeptide str uctures, c omprise 2 8 - 37 amino acid residues, six of the m, are cysteine residues, highly conserved and formed by disulfide bonds, which exhibit "head - tail" cyclization type. This structural feature gives to cyclotides remarkable stability and resistance to proteolysis. Due to these singularities, such compound s have disclosed important biological functions . A mong the m ; the literature has highlighted important ecological properties as defense and adaptation of the organisms, which accumulate these natural products. Accordingly, they are of great interest to agri culture, acting as insecticide, and to medicine, since some compounds have displayed anti - HIV activity, anthelmintic, antimicrobial and uterotonic properties. This research deals with the study of cyclotides isolated Noisettia orchidiflora (Rudge) Gingins, belonging to the taxon Violaceae, which frequently occurs in the Atlantic Forest. There are several studies in the literature on the occurr ence of this class of compounds and their characterization in the leaves and branches of Violaceae plant species, le ading to more complete information on the occurrence of cyclotides, and their biological significance for these plants. The cyclotides extraction of plant material (dried and ground branches and leaves) was carried out by maceration with methanol/water, fo llowed by a liquid - liquid partition with dichloromethane. The polar phase was concentrated and subjected to chromatographic column using octadecylsilane (C 18 ) as stationary phase, achieving several fractions rich in peptides. The purification process was p erformed by analytical and/or preparative HPLC, in gradient of acetonitrile and water as mobile phase, which led to the isolation of the cyclotides. The amino acid sequence (primary structure) of the isolated compounds was established by MALDI - TOF /TOF by r eduction and alkylation re... / Mestre

Orientador: Mary Rosa Rodrigues de Marchi / Banca: Raquel Fernandes Pupo Nogueira / Banca: Paulo Clairmont Feitosa de Lima Gomes / Banca: Álvaro José dos Santos Neto / Banca: Eduardo Bessa Azevedo / Resumo: Micotoxinas estrogênicas (EM) são estrógenos produz idos como metabólitos secundários de fungos. Entre as EM estão a zearalen ona (ZEN) e seus metabólitos produzidos principalmente pelo fungo do gênero Fusarium que cresce em várias culturas agrícolas. A influência da exposição às EM na saúde de mamíferos /humanos, por meio dos alimentos, tem sido extensiv amente estudada. Em contraste, estudos que focam nas EM em águas superf iciais e seus possíveis impactos no ambiente aquático são negligenciados. O presente trabalho apresenta os desenvolvimentos mais recentes no que concerne à s micotoxinas estrogênicas, em relação às metodologias analíticas utilizadas na sua determinação e avaliação do comportamento em águas superficiais. As atividad es desenvolvidas foram divididas em duas etapas: (1) Estudo analítico - de senvolvimento de um método analítico verde para a determinação das micotoxinas estrogênicas empregando a microextração líquido-líquido dispersiva (DLLME) ut ilizando bromosolventes e líquido iônico (IL) por cromatografia líquida de alta efici ência (HPLC) com detecção por fluorescência (FLD) ou espectrometria de massas (MS ); (2) Estudo ambiental - avaliação da presença dos analitos na microbacia hi drográfica do Córrego Rico com avaliação espaço-temporal e a persistência da micot oxina zearalenona em ambientes aquáticos sob irradiação solar simulada. Vários parâmetros importantes que influenciam a eficiência de extração para DLLME foram otimizados. Em condições ótimas, a recuperação de extração para ZE N e seus metabólitos para DLLME e IL-DLLME variaram de 81 a 118 % e 76 a 81 %, respectivamente; Os desvios padrão relativos (RSD) para a precisão intr a-dia e inter-dia foram menores do que 13%, em DLLME, e inferior a 5,7 % (intra-dia ) para IL-DLLME. Os limites de detecção do método (LOD) e quantificação (LOQ) fora m de... / Abstract: Estrogenic mycotoxins (EM) are estrogens produced a s secondary metabolites of fungi. The well known EM are zearalenone (ZEN) and its metabolites primarily produced by the mold Fusarium growing on a variety of crops. The influence of exposure to EM on human/mammalian health via food h as been extensively studied. In contrast, studies focus on EM in surface waters and their possible impacts in aquatic environment are negligible. The current wor k presents the most recent developments concerning estrogenic mycotoxins, in r egard to the analytic methodologies utilized in their determination and t he behavior assessment in surface waters. The study was developed in two steps: (1) a nalytical study - Green analytical method development for determination of estrogenic mycotoxin employing microextraction liquid-liquid dispersive (DLLME) us ing bromosolvent and ionic liquid (IL) followed by high-performance liquid chromatogr aphy (HPLC) with fluorescence detection (FLD) or mass spectrometry (MS); (2) Envi ronmental study - evaluation of the presence of analytes in Rico stream watershed w ith spatial-temporal distribution and the persistence of zearalenone mycotoxin in aqu atic environments by simulated sunlight. Several important parameters influencing the extraction efficiency of DLLME were optimized. Under optimal conditions, extractio n recovery for ZEN and its metabolites by DLLME and IL-DLLME were within the r ange of 81-118 % e 76-81 % respectively; the relative standard deviations (RSD s) for intra-day and inter-day precision were lower than 13% by DLLME, and lower t han 5.7 % (intra-day) by IL- DLLME. The method limits of detection (LOD) and qua ntification (LOQ) were from 4- 20 ng L −1 and 8-40 ng L −1, for DLLME and from 0.2 ng L −1 and 0.5 ng L −1 for IL- DLLME, respectively. Determination of estrogenic my cotoxins in water samples from Rico Stream watershed reached levels of up to... / Doutor

Orientador: Angela Regina Araujo / Co-orientador: Daniela Alonso Bocchini Martins / Banca: Lourdes Campaner dos Santos / Banca: Dulce Helena Siqueira Silva / Banca: Niege Araçari Jscometti Cardoso Furtado / Banca: Taícia Pacheco Fill / Resumo: A capacidade biossintética dos fungos endofíticos, aliado a os estudos químico e biológicos relatados para Eugenia brasiliensis, motivou a idealização d o projeto, a prospecção química, biológica e enzimática em fungos endofíticos associados a folhas, caules e frutos saudáveis de Eugenia brasiliensis e a avaliação do co - cultivo e epigenética em Xylaria cubensis, Diaporthe sp. e Colletotrichum sp., na obtenção de novas substâncias . O isolamento dos fungos endof íticos, resultou em dezessete linhagens de fu n gos endofíticos, sendo estes cultivados em escala reduzida em meio líquido de batata e dextrose (PDB) e Czapek, a 25 o C, sob modo estático para obtenção dos respec tivos extratos brutos em AcOEt. A avaliação met abólica destes extratos foi realizada por CCDC, HPLC - DAD e RMN de 1 H, como também a potencialidade enzimática e biológica pela avaliação das atividades antifúngica, anticolinesterásica e citotóxica, sendo que estes extratos demonstraram ser promissores . A prospecção inicial conduziu a seleção de três fungos endofíticos identificados como Xylaria cubensis (Eb_caH_5), Diaporthe sp. (Eb_caS_4), e Colletotrichum sp. (Eb_ frmH _1), os quais foram cultivados (escala ampliada) em PDB para isolamento e determinação/e lucidação estrutural dos metabólitos secundários . O estudo de Xylaria cubensis, resultou no isolamento de 8 substâncias, sendo da classe dos nucleosídeos, dicetopirazinas, isocumarinas e citocalasina s . De Diaporthe sp. foi isolado e identificado 8 substânc ias : duas dicetopiperazinas, ácido nitropropiônico, uracila, tirosol, z ygosporina D, pirrolidona (inédita) e alternariol. Colletotrichum sp. resultou no isolamento de 6 substâncias, sendo três dicetopiperazinas, além das substâncias N - (2 - fenilet il)acetamid a, N - acetiltriptamina e metanoato de 2 - hidroxibutila 3 - indol (inédita). Todas as classes de... / Abstract: The biosynthetic capacity of endophytic fungi, allied chemical and biological studies reported to Eugenia brasiliensis motivated the idealization of the project, prospection chemi cal, biological and enzymatic in endophyt ic fungi associated with healthy leaves, stems and fruits from Eugenia brasiliensis and evaluation co - cul tur e and epigenetic in Xylaria cubensis, Diaporthe sp. and Colletotrichum sp., in obtaining new substances. Th e isolation of endophytic fungi resulted in seventeen endophytics fungi, these being cultivated in small scale on potato dextrose broth (PDB) and Czapek at 25 ° C under static mode to obtain the corresponding crude extracts in AcOEt. The metabolic evalua tio n of these extracts was performed by CCDC, HPLC - DAD and 1 H NMR, also e nzymatic and biological po tential were performed by antifungal, cytotoxic, and anticholinesterase activities, and these extracts have shown promise . The preliminary prospection led to th e selection of three endophytic fungi identified as Xylaria cubensis (Eb_caH_5), Diaporthe sp. (Eb_caS_4) and Colletotrichum sp. (Eb_frmad_1) which were culti vated ( large r scale) in PDB fo r isolation and determination or structural elucidation of secondary metabolites. The study of Xylaria cubensis resulted in the isolation of eight substances, as follows: nucleoside, diketopiperazine s, isocoumarins and c ytochalasins class . From Diaporthe sp. was isolated and identifi ed eight substances, as follows: two dik etopiperazine s, nitropropionic acid, uracil, tyrosol, z ygosporin D, pyrrolidone (unpublished) and alternariol. Colletotrichum sp. resulted in the isolation of six substances, three diketopiperazine s, besides the substances N - (2 - phenylethyl) acetamide, N β - acetyltry ptamin e and 3 - hydroxybutan - 2 - yl - 1H - indol - 3 - ylacetate (unpublished ). All classes of substances produced by these endophytic fungi present severa... / Doutor

Orientador: Lucia Maria Xavier Lopes / Co-orientador: Isabele Rodrigues Nascimento / Banca: Lourdes Campaner dos Santos / Banca: Antonio Laverde Junior / Resumo: Este trabalho descreve o estudo fitoquímico do extrato etanólico de Paspalum atratum Swalen (Poaceae). O gênero Paspalum é o mais importante das gramíneas no Brasil e possui características compatíveis com a utilização no pastejo. Fenilpropanoides foram isolados por métodos cromatográficos (CC, CLAE) pela primeira vez neste gênero. Estes fenilpropanoides foram identificados como: (R)-ácido rosmarínico, (AR, 1), ácido 3-O-cafeoilquínico (2), fenilalanina (3), ácidos cis- e trans-coumaroilquínico (4 e 5), ácido 5-O-cafeoilquínico (6), ácido 4-O-cafeoilquínico (7) e ácido cafeico (8) pela análise de seus dados de EM, RMN de 1H e de 13C, incluindo COSY, HMBC, HSQC, TOCSY-1D e DOSY, e pela comparação destes dados com aqueles descritos na literatura para estas substâncias. A substância majoritária no extrato etanólico foi o AR (4,4%). Esta foi usada como padrão em análises qualitativas e quantitativas do extrato. Um método eficiente em CLAE-DAD para determinação de AR no extrato foi estabelecido (r2 = 0,9979). O limite de detecção (LD) e limite de quantificação (LQ) foram 4,00 e 12,13 μg/mL respectivamente, e a faixa de linearidade foi 12,1-100,0 μg/mL. As precisões intradia e interdia do método foram avaliadas pela análise das soluções de padrão AR. O desvio padrão da área do pico do analito foi utilizado como parâmetro de avaliação da precisão intradia, compreendendo o intervalo de 1,57-2,06%. A precisão interdia (7 dias) do método compreendeu o intervalo de 0,54-1,69%. A recuperação, avaliada pela adição do padrão AR, foi satisfatória (75-78%. / Abstract: This work describes the phytochemical study on ethanol extract from aerial parts of Paspalum atratum Swalen (Poaceae). The Paspalum genus is one of the most important grasses in Brazil and has characteristics compatible with its utilization in pastures for cattle. Phenylpropanoids were isolated by chromatographic methods (CC and HPLC) for the first time in this genus. These phenylpropanoids were identified as (R)-rosmarinic acid (RA, 1), 3-O-caffeoylquinic acid (2), phenylalanine (3), cis- and trans-3-O-coumaroylquinic acids (4 and 5), 5-O-caffeoylquinic acid (6, chlorogenic acid), 4-O-caffeoylquinic acid (7), and caffeic acid (8) by analyses of their MS, 1H and 13C NMR data, including COSY, HMBC, HSQC and DOSY, and comparison of these data with those reported in the literature for these type of compounds. The major compound isolated from the ethanol extract was RA (4.4%). It was used as standard for qualitative and quantitative analyses of extract. An efficient HPLC-DAD method for determination of RA in extract was established (r2 = 0.9979). The limit of detection (LOD) and limit of quantification (LOQ) were 4.00 and 12.13 μg/mL, respectively, and the validated range was 12.1-100.0 μg/mL. The intra-day and inter-day precisions of the method were evaluated by analyzing the blank solution spiked by RA. The standard deviation (SD) as evaluation parameter for the intra-day precision of peak area of target analyte was in the range of 1.57-2.06%. The inter-day precision (7 days) of the method was in the range of 0.54-1.69%. Satisfactory recovery (75-78%), evaluated by standard additions method, was achieved. / Mestre

Orientador: Nelson Ramos Stradiotto / Banca: Hideko Yamanaka / Banca: Rodrigo Alejandro Abarza Muñoz / Resumo: O etanol é um importante componente da matriz energética brasileira, sendo produz ido a partir da cana - de - açúcar. Nesse processo de produção, é produzida vinhaça como subproduto, a qual pa ra cada 1 L de etanol gera - se de 12 L a 18 L . A vinhaça é constituída principalmente de sais de potássio, cálcio e magnésio e compostos orgânicos . Dentre estes, os ácidos carboxílicos tornam - se importantes por estarem presentes em concentrações significativas na vinhaça de cana - de - açúcar e por apresentarem expressiva importância industrial. Sendo assim, n esse trabalho foi dese nvolvi do um detector eletroquímico baseado em eletrodo s de diamante dopado com boro quimicamente modificado s com nanopartículas de níquel ( NiNPs - BDD ) e de cobre ( CuNPs - BDD ) para determinação dos ácidos lático, málico e tartárico em vinhaça de cana - de - açúca r utilizando a técnica de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) de troca iônica. Imagens de microscopia eletrônica de varredura e espectros de raios X por dispersão em energia, em conjunto com os experimentos eletroquímicos, mostraram que o s elet rodo s de BDD fo ram efetivamente modificado s com nanopartículas de óxido - hidróxido de níquel e óxido de cobre com diâmetro s médio s de 89 nm e 91 nm, respectivamente . Os estudos voltamétricos mostraram que as oxidações dos ácidos lático, málico e tartárico, em meio básico, se dão em potenciais em torno de 0,50 V ( vs. Ag/AgCl) e 0,73 V ( vs. Ag/AgCl), nos eletrodos NiNPs - BDD e CuNPs - BDD, respectivamente, e são mediadas pelas espécies Ni 3+ e Cu 3 + . O eletrodo de NiNPs - BDD foi utilizado em CL AE com detecção amperométric a pulsada. A coluna de troca aniônica CarboPac PA 1 foi utilizada para separação dos ácidos carboxílicos em vinhaça . E mpreg ou - se como fase móvel água deionizada e 0,10 mol L - 1 de NaOH em 0,25 mol L - 1... / Abstract: Ethanol is an important component of the Brazilian energy ma trix, being produced from sugar cane. In this producing procedure, vinasse is produced as by - product, which for every 1 L of ethanol is generated from 12 L to 18 L . The vinasse is basically composed by salts of p otassium, calcium and magnesium and organic compounds . Among these, carboxylic acids are important because they are present in significant concentrations in the sugar cane vinasse and show sig nificant industrial importance. Thus, in this work it was developed an electrochemical detector based on boron - doped diamond electrodes chemically modified with nickel nanoparticles (NiNPs - BDD) and copper nanoparticles (CuNPs - BDD) for the determination of lactic ac id, malic acid and tartaric acid in vinasse from sugarcane using high - performance liquid chromatography (HPLC) by ion exchange. Image s of scanning electron microscopy and spectra of e nergy - dispersive X - ray in conjuction with electrochemical experiments showed the electrodes of BDD were effectively modified with nickel oxide - hydroxide nanoparticles and copper oxide nanoparticles with diameter s of 89 nm and 91 nm, respectively . The voltammetric studies showed the oxidation s of lactic acid, malic acid and tartaric acid, in basic medium, tooke place at potential s around 0.50 V ( vs. Ag/AgCl) and 0.73 V ( vs. Ag / AgCl) at NiNPs - BDD and CuNPs - BDD electrodes, respectively, and they are mediated by Ni 3 + and Cu 3 + species. NiNPs - BDD electrode was used in HPLC with pulsed amperometr ic detection. The anion exchange column Carbo Pac PA1 was used for separation of carboxylic acids in vinasse. It w as employed as mobile phase deion ized water and 0.10 mol L - 1 NaOH in 0.25 mol L - 1 CH3COONa und er flow of 1.0 m L min - 1 . The detect ion potential was 0.48 V vs . Pd. The NiNPs - BDD electrode showed good stability under chromatographic conditions... / Mestre

Orientador: Jose Luiz Donato / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-10T07:16:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pioto_LigiaRodrigues_D.pdf: 680751 bytes, checksum: 6d472989ce55c9ad510ce3f7fffb6630 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Foi desenvolvido um métdo rápido, sensível e específico para determinação de metotrexato em plasma sanguíneo humano por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas em série usando folinato de cálcio como padrão interno. O metotrexato foi extraído do plasma humano, utilizando-se precipitação de proteínas plasmáticas com acetonitrila como eluente.O método tem uma corrida cromatográfica de 3,5 minutos usando uma coluna analítica C18 (4,6 mm x 75 mm d.i, 3.5 µm tamanho das partículas) e a curva de calibração foi linear de 10 a 300 ng.mL-1.A recuperação do método de extração foi, em média, de 76,5% e o limite de quantificação para o metotrexato foi de 10 ng.mL-1 / Abstract: A rapid, sensitive and specific method was developed for the determination and quantitation of methotrexate, in human blood plasma by liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry using calcium folinate as internal standard. Methotrexate was extracted from 0,2 mL human plasma by protein precipitation procedure using acetonitrile as eluent. The method included a chromatographic run of 3,5 minutes using a C18 analytical column (4,6 mm x 75 mm i.d., 3.5 µm particle size) and the linear calibration curve over the range from 10 to 300 ng mL-1. Recoveries were greater than 76.5% and the limit of uantitation of methotrexate was 10 ng mL-1 / Doutorado / Mestre em Farmacologia